一种培西达替尼结构类似物的制备方法及其抗肿瘤中的应用

9.分子量：418.8082
10.该化合物是在保留培西达替尼药效基团5-氯-7-氮杂吲哚的基础上，利用生物电子等排体原理进行结构修饰，从而得到了这种新的培西达替尼类似物，通过细胞实验证明，该类似物具有潜在的抗肿瘤活性和应用开发价值。
11.本发明的第二个目的在于提供了所述化合物5-氯-3-{[2-({[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]甲基}-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶在制备抗癌药物中的应用。
[0012]
本发明对其进行了初步的体外活性评价。通过细胞毒性实验，以培西达替尼标准品作为对照，结果证明该化合物能显著抑制肿瘤细胞hos、mcf-7、a549的生长；此外，通过细胞凋亡实验，进一步验证了其能诱导hos与a549细胞的凋亡。
[0013]
所述化合物(ⅰ)，可以采用以下的工艺路线制备：
[0014]
步骤一、以2-氨基嘧啶-5-羧酸甲酯和6-三氟甲基烟醛为原料，与还原剂作用，发生还原胺化反应得到中间体(ⅱ)，具体的反应路线如下：
[0015][0016]
其中，中间体(ⅱ)的结构式为：
[0017][0018]
中间体(ⅱ)的化学名称为：2-({[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}氨基)嘧啶-5-甲酸甲酯。
[0019]
步骤二、以中间体(ⅱ)作为原料，与还原剂作用，发生还原反应得到中间体(ⅲ)，具体的反应路线如下：
[0020][0021]
其中，中间体(ⅲ)的结构式为：
[0022][0023]
中间体(ⅲ)的化学名称为：[2-({[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]甲醇。
[0024]
步骤三、以中间体(ⅲ)作为原料，与氧化剂作用，发生氧化反应得到中间体(ⅳ)，具体的反应路线如下：
[0025][0026]
其中，中间体(ⅳ)的结构式为：
[0027][0028]
中间体(ⅳ)的化学名称为：2-({[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}氨基)嘧啶-5-甲醛。
[0029]
步骤四、以中间体(ⅳ)作为原料，与一种氨基的保护基作用，发生取代反应得到中间体(
ⅴ
)，具体的反应路线如下：
[0030][0031]
其中，中间体(
ⅴ
)的结构式为：
[0032][0033]
中间体(
ⅴ
)的化学通用名为：[2-({[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基})-(g-取代氨基)]嘧啶-5-甲醛。
[0034]
步骤五、以中间体(
ⅴ
)和5-氯-7-氮杂吲哚作为原料，在碱性条件下，发生加成反应得到中间体(ⅵ)，具体的反应路线如下：
[0035][0036]
其中，中间体(ⅵ)的结构式为：
[0037][0038]
中间体(ⅵ)的化学通用名为：{5-[(5-氯-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)羟甲基]嘧啶-2-基}-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-g-取代胺。
[0039]
步骤六、以中间体(ⅵ)作为原料，在酸性条件下，发生取代反应，脱除氨基保护基，同时与三乙基硅烷作用，脱除羟基，从而得到所述化合物(ⅰ)，具体的反应路线如下：
[0040][0041]
在以上技术方案中，式中-g为一种氨基的保护基团，优选为叔丁氧羰基、芴甲氧羰基、对甲氧基苄基等。
[0042]
在以上技术方案基础上，优选的，步骤一中，所述的还原剂为硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、钯碳/h2、雷尼镍/h2、2-甲基吡啶-n-甲硼烷、三乙基硅烷、铑/co中的一种。更加优选的，步骤一中，所述的还原剂为氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、三乙基硅烷、铑/co中的一种。
[0043]
在以上技术方案基础上，优选的，步骤一中，2-氨基嘧啶-5-羧酸甲酯：6-三氟甲基烟醛：还原剂的摩尔比为1：1～4：2～10。更加优选的，步骤一中，2-氨基嘧啶-5-羧酸甲酯：6-三氟甲基烟醛：还原剂的摩尔比为1：1.2～3：2～9。
[0044]
在以上技术方案基础上，优选的，步骤二中，所述的还原剂为氢化铝锂、三仲丁基硼氢化锂、硼氢化钠、硼氢化钾、二异丁基氢化铝、硼氢化钠/氯化镁、硼氢化钠/氯化铝、硼氢化钠/氯化锌中的一种。更加优选的，步骤二中，所述的还原剂为氢化铝锂、硼氢化钠/氯化镁、硼氢化钠/氯化铝、硼氢化钠/氯化锌中的一种。
[0045]
在以上技术方案基础上，优选的，步骤二中，中间体(ⅱ)：还原剂的摩尔比为1：1～5。更加优选的，步骤二中，中间体(ⅱ)：还原剂的摩尔比为1：1.2～4。
[0046]
在以上技术方案基础上，优选的，步骤三中，所述的氧化剂为二氧化锰、pdc氧化剂、pcc氧化剂、dmso、戴斯-马丁氧化剂、collins试剂、2-碘酰基苯甲酸、四丙基过钌酸铵、
2-基}-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁基酯的质谱图；
[0062]
图6为化合物(ⅰ)5-氯-3-{[2-({[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]甲基}-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶的核磁共振氢谱图；
[0063]
图7为hos细胞毒性实验结果统计图(“*”表示数据间存在显著性差异且p小于0.05，“**”表示数据间存在显著性差异且p小于0.01)；
[0064]
图8为mcf-7细胞毒性实验结果统计图(“***”表示数据间存在显著性差异且p小于0.001)；
[0065]
图9为a549细胞毒性实验结果统计图(“*”表示数据间存在显著性差异且p小于0.05)；
[0066]
图10为hos细胞凋亡实验结果图(a、b为流式细胞图，c为柱状统计分析图)(“*”表示数据间存在显著性差异且p小于0.05，“**”表示数据间存在显著性差异且p小于0.01)；
[0067]
图11为a549细胞凋亡实验结果图(a、b为流式细胞图，c为柱状统计分析图)(“*”表示数据间存在显著性差异且p小于0.05)。
具体实施方式
[0068]
为了更方便本领域普通技术人员理解本发明，下面申请人结合具体的实施方式更好地说明本发明。应该指出的是，以下实施方式只是本专利申请保护范围内的一部分实施方式，并非全部的实施方式。在没有做出创造性改变的前提下，也应该视为本发明的保护范围之内。
[0069]
以下各实施例中所用的试剂，全部为普通试剂，纯度为分析纯，所用的溶剂均未进一步处理，浓盐酸的浓度为37wt％，氢溴酸的浓度为48wt％。
[0070]
实施例1、中间体(ⅱ)的合成
[0071]
1.1向单口烧瓶中，加入200mg 2-氨基嘧啶-5-羧酸甲酯，274.4mg 6-三氟甲基烟醛，将其溶解在20ml甲苯中，加入382.3mg氰基硼氢化钠、1ml浓盐酸。反应温度为100℃、反应32h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入100ml10％m/v(m/v＝g/ml，下同，不赘述)碳酸钾水溶液，用100ml二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得385mg中间体(ⅱ)，收率为94.41％。
[0072]
1.1所得中间体(ⅱ)的质谱表征结果如下：esi-ms(m/z)：313.09[m h]

，见附图1。
[0073]
1.2向单口烧瓶中，加入300mg 2-氨基嘧啶-5-羧酸甲酯，480.3mg 6-三氟甲基烟醛，将其溶解在30ml乙腈中，加入1.24g三乙酰氧基硼氢化钠、1.5ml浓盐酸。反应温度为85℃、反应36h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入150ml 10％m/v碳酸钾水溶液，用200ml二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得526mg中间体(ⅱ)，收率为85.99％。
[0074]
1.3向单口烧瓶中，加入200mg 2-氨基嘧啶-5-羧酸甲酯，343mg 6-三氟甲基烟醛，将其溶解在20ml甲苯中，加入5.2ml三乙基硅烷、313.7mg冰醋酸。反应温度为100℃、反应30h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入100ml 10％m/v碳酸钾水溶液，用100ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得373mg中间体(ⅱ)，收率为91.47％。
[0075]
实施例2、中间体(ⅲ)的合成
[0076]
2.1向三口烧瓶中，加入150mg实施例1中1.1所制备的中间体(ⅱ)，将其溶解在20ml四氢呋喃中，整个反应通入氮气保护。加入27.3mg硼氢化钠，131mg氯化锌。反应温度为60℃、反应42h。反应结束后，加入50ml 10％m/vnh4cl水溶液，继续搅拌1h，将反应液直接过滤，旋蒸浓缩，在70℃下，干燥24h后得89mg中间体(ⅲ)，收率为65.18％。
[0077]
2.1所得中间体(ⅲ)的核磁共振氢谱表征结果如下：1h nmr(400mhz,dmso)δ8.79-8.70(m,2h),8.23(s,1h),8.16(s,1h),7.95(dd,j＝8.1,1.4hz,1h),7.86-7.83(m,1h),6.49(s,1h),4.60(d,j＝6.3hz,2h),4.28(d,j＝4.9hz,2h)，见附图2。
[0078]
2.2向三口烧瓶中，加入200mg实施例1中1.1所制备的中间体(ⅱ)，将其溶解在20ml四氢呋喃中，整个反应通入氮气保护。加入29.1mg硼氢化钠，91.5mg氯化镁。反应温度为50℃、反应48h。反应结束后，加入50ml 10％m/vnh4cl水溶液，继续搅拌1h，将反应液直接过滤，旋蒸浓缩，在70℃下，干燥24h后得116mg中间体(ⅲ)，收率为63.72％。
[0079]
2.3向三口烧瓶中，加入300mg实施例1中1.1所制备的中间体(ⅱ)，将其溶解在30ml四氢呋喃中，整个反应通入氮气保护。滴加1.54ml 2.5mol/l氢化铝锂的四氢呋喃溶液，反应温度为40℃、反应38h。反应结束后，加入100ml饱和nh4cl水溶液，继续搅拌1h，将反应液直接过滤，旋蒸浓缩，在70℃下，干燥24h后得160mg中间体(ⅲ)，收率为58.59％。
[0080]
实施例3、中间体(ⅳ)的合成
[0081]
3.1向三口烧瓶中，加入200mg实施例2中2.1所制备的中间体(ⅲ)，将其溶解在20ml二氯甲烷中，整个反应通入氮气保护。加入332.9mg四丙基过钌酸铵，在室温条件下，反应8h，反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入100ml 10％m/v碳酸钾水溶液，用100ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得184mg中间体(ⅳ)，收率为92.66％。
[0082]
3.1所得中间体(ⅳ)的红外光谱表征如下：ir(kbr)v:2965,2212,1942,1661,1578,1408,1027cm-1
，见附图3。
[0083]
3.2向三口烧瓶中，加入150mg实施例2中2.1所制备的中间体(ⅲ)，将其溶解在20ml二氯甲烷中，整个反应通入氮气保护。加入218mg collins试剂，反应温度为30℃、反应6h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入100ml 10％m/v碳酸钾水溶液，用100ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得134mg中间体(ⅳ)，收率为89.97％。
[0084]
3.3向三口烧瓶中，加入250mg实施例2中2.1所制备的中间体(ⅲ)，将其溶解在30ml二氯甲烷中，整个反应通入氮气保护。加入218mg四甲基哌啶氧化物，反应温度为40℃、反应5h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入200ml 10％m/v碳酸钾水溶液，用200ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得209mg中间体(ⅳ)，收率为84.2％。
[0085]
实施例4、中间体(
ⅴ
)的合成
[0086]
4.1向单口烧瓶中，加入300mg实施例3中3.1所制备的中间体(ⅳ)，将其溶解在30ml二氯甲烷中。加入464mg二碳酸二叔丁酯，295μl三乙胺，19.5mg 4-二甲氨基吡啶。在室温条件下、反应45h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入200ml水，用300ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得225mg中间体(
ⅴ
)，收率为55.36％。
[0087]
4.1所得中间体(
ⅴ
)的核磁共振氢谱表征结果如下：1h nmr(400mhz,dmso)δ9.56(s,1h),8.69(s,2h),7.94(d,j＝8.4hz,1h),7.56(s,1h),6.68(s,1h),5.13(s,2h),1.43(dd,j＝10.0,3.1hz,9h)，见附图4。
[0088]
4.2向单口烧瓶中，加入150mg实施例3中3.1所制备的中间体(ⅳ)，将其溶解在20ml二氯甲烷中。加入181.3mg氯甲酸苄酯，111μl三乙胺，6.5mg4-二甲氨基吡啶。反应温度为40℃、反应48h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入100ml水，用200ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得150mg中间体(
ⅴ
)，收率为73.81％。
[0089]
4.3向单口烧瓶中，加入250mg实施例3中3.1所制备的中间体(ⅳ)，将其溶解在30ml二氯甲烷中。加入343.7mg芴甲氧羰酰氯，184.7μl三乙胺，6.5mg 4-二甲氨基吡啶。反应温度为50℃、反应36h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入200ml水，用300ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在60℃下，干燥24h后得261mg中间体(
ⅴ
)，收率为77.06％。
[0090]
实施例5、中间体(ⅵ)的合成
[0091]
5.1向单口烧瓶中，加入300mg实施例4中4.1所制备的中间体(
ⅴ
)，将其溶解在30ml甲醇中。加入143.7mg 5-氯-7-氮杂吲哚，7.2mg碳酸钾。反应温度为30℃、反应40h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入200ml水用250ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在70℃下，干燥24h后得298mg中间体(ⅵ)，收率为70.99％。
[0092]
5.1所得中间体(ⅵ)的质谱表征结果如下：esi-ms(m/z)：533.13[m-h]-，见附图5。
[0093]
5.2向单口烧瓶中，加入200mg实施例4中4.1所制备的中间体(
ⅴ
)，将其溶解在20ml甲醇中。加入119.7mg 5-氯-7-氮杂吲哚，4.7mg叔丁醇钾。反应温度为40℃、反应35h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入100ml水，用200ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在70℃下，干燥24h后得178mg中间体(ⅵ)，收率为63.61％。
[0094]
5.3向单口烧瓶中，加入150mg实施例4中4.1所制备的中间体(
ⅴ
)，将其溶解在20ml甲醇中。加入83.8mg 5-氯-7-氮杂吲哚，2.4mg氢氧化钠。反应温度为45℃、反应48h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入100ml水，用200ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩，在70℃下，干燥24h后得111mg中间体(ⅵ)，收率为52.89％。
[0095]
实施例6、化合物(ⅰ)的合成
[0096]
6.1向单口烧瓶中，加入250mg实施例5中5.1所制备的中间体(ⅵ)，将其溶解在30ml乙腈中。加入5.58ml三乙基硅烷，3.17ml氢溴酸。反应温度为85℃、反应28h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入150ml 5％m/v碳酸钾水溶液，用200ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩。将浓缩液先用乙醇：水＝1：4(v:v)的溶剂比例重结晶，再用乙醇：水＝1：6(v:v)的溶剂比例重结晶，加入1g活性炭进行脱色，自然冷却结晶，在70℃下，干燥24h后得126mg化合物(ⅰ)，收率为64.37％。
[0097]
6.1所得化合物(ⅰ)的核磁共振氢谱表征结果如下：1h nmr(400mhz,dmso)δ11.88(s,1h),10.15(s,1h),8.71(s,2h),8.19(d,j＝2.3hz,1h),7.97(d,j＝1.3hz,1h),7.92(s,1h),7.70(d,j＝8.0hz,1h),7.57
–
7.55(m,1h),6.45
–
6.44(m,1h),4.54(s,2h),3.94
–
3.70(m,2h)，见附图6。
[0098]
6.2向单口烧瓶中，加入200mg实施例5中5.1所制备的中间体(ⅵ)，将其溶解在
20ml乙腈中。加入4.17ml三乙基硅烷，1.93ml浓盐酸。反应温度为85℃、反应25h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入100ml 5％m/v碳酸钾水溶液，用150ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩。将浓缩液先用乙醇：水＝1：4(v:v)的溶剂比例重结晶，再用乙醇：水＝1：6(v:v)的溶剂比例重结晶，加入0.8g活性炭进行脱色，自然冷却结晶，在70℃下，干燥24h后得85mg化合物(ⅰ)，收率为54.28％。
[0099]
6.3向单口烧瓶中，加入300mg实施例5中5.1所制备的中间体(ⅵ)，将其溶解在30ml乙腈中。加入6.7ml三乙基硅烷，3ml三氟乙酸。反应温度为85℃、反应30h。反应结束后，将其倒入烧瓶中，加入200ml 5％m/v碳酸钾水溶液，用300ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸浓缩。将浓缩液先用乙醇：水＝1：4(v:v)的溶剂比例重结晶，再用乙醇：水＝1：6(v:v)的溶剂比例重结晶，加入1.5g活性炭进行脱色，自然冷却结晶，干燥后得139mg化合物(ⅰ)，收率为59.18％。
[0100]
以下实施例7和实施例8所用化合物(ⅰ)均为实施例6中6.1所得化合物(ⅰ)。
[0101]
实施例7、细胞毒性实验
[0102]
人乳腺癌mcf-7细胞和人肺癌a549细胞，源于湖北工业大学胡康洪教授课题组赠送，人骨肉瘤hos细胞购置于武汉普诺赛生命科技有限公司，mtt试剂购置于武汉菲优特生物科技有限公司，dmem高糖培养基(500ml)、mem培养基(500ml)、胰酶消化液(0.25％m/v，100ml)购置于武汉菲优特生物科技有限公司。其中，mcf-7与a549细胞使用dmem高糖培养基进行培养，hos细胞使用mem培养基进行培养。此外，以已上市的培西达替尼标准品(购置于美国targetmol有限公司，纯度：99.66％)作为对照，从而验证化合物(ⅰ)的抗癌活性。选取生长状态良好的细胞进行实验，将t25瓶中的细胞用1ml胰酶消化液处理2min，将细胞转移至96孔板中，保证细胞数目为104个/孔，放入恒温培养箱(37℃、5％co2，下同，不再赘述)，培养24h。当细胞恢复活力后，吸弃孔内旧培养基，每孔加入100μl配置好的给药培养基(将培西达替尼标准品、化合物(ⅰ)预先使用dmso溶解，再用培养基稀释一定的倍数)，加入完毕后，放入恒温培养箱，培养24h。每孔加入20μl mtt溶液，避光孵育4h。先将各孔中的溶液尽可能吸弃，然后每孔加入150μl dmso，置于摇床(震荡频率为150次/min)，震荡10～15min左右，在酶标仪上检测各孔于490nm处的吸光度值(od值)。细胞存活率＝(实验组od-空白组od)/(对照组od-空白组od)
×
100％。实验组为孔内含有细胞，加入100μl给药培养基；对照组为孔内含有细胞，加入100μl培养基；空白组为孔内没有细胞，仅加入100μl培养基。
[0103]
细胞毒性实验重复三次，每组浓度实验包含5个实验孔。根据计算得出结果，在origin 8.0软件中做统计分析。对应的数据见表1-3，结果见附图7-9。
[0104]
表1化合物对hos细胞的毒性，以细胞存活率％计。
[0105][0106]
表2化合物对mcf-7细胞的毒性，以细胞存活率％计。
[0107][0108]
表3化合物对a549细胞的毒性，以细胞存活率％计。
[0109][0110]
从表1-3和附图7-9可看出随着给药浓度浓度的增加，相较于培西达替尼标准品，化合物(ⅰ)在纳摩尔浓度就能显著抑制hos细胞的生长。此外，化合物(ⅰ)在微摩尔浓度也能抑制mcf-7和a549细胞的生长。
[0111]
实施例8、细胞凋亡实验
[0112]
annexin v-fitc/pi细胞凋亡检测试剂盒购置于江苏凯基生物技术股份有限公司。同样，以培西达替尼标准品作为对照，从而验证化合物(ⅰ)诱导癌细胞凋亡的能力。选取生长状态良好的细胞进行实验，将t25瓶中的细胞用胰酶消化液处理(同实施例7)，用培养基对消化下来的细胞进行稀释，之后将细胞混悬液转移至6孔板中(每孔加入2ml，保证每孔的细胞数量为1～5
×
105个)，放入恒温培养箱，培养24h。当细胞恢复活力后，吸弃孔内旧培养基，每孔各加入2ml预先配置好的给药培养基(配制方法同实施例7)，放入恒温培养箱，培养48h。将6孔板中的溶液分别吸入至相应的6支离心管中，之后用胰酶消化液处理孔内剩余的贴壁细胞，将消化下来的细胞收集于对应的6支离心管中。将离心管进行离心，收集沉降细胞，之后向每支离心管各加入2ml pbs溶液(浓度为0.01mol/l，ph为7.4)进行洗涤，清洗2次。再次离心，收集沉降细胞，向各支离心管内加入100μl 1
×
binding buffer溶液，轻轻吹打混匀，再次向其中加入5μl annexin v-fitc和10μl pi溶液，轻轻吹散混匀。在避光条件下，静置孵育15min左右。向6支离心管中再次加入400μl 1
×
binding buffer溶液，轻轻吹打混匀。将细胞悬液过300目筛网收集于6支流式管中，之后将流式管外壁用锡箔纸包裹，放置于预先装有碎冰的泡沫箱中，冷冻避光保存。最后用流式细胞仪上机检测，保证样品在1h内全部检测完毕。每个6孔板属于一组浓度梯度实验，细胞凋亡实验重复三次。流式细胞结果图使用flowjo v10软件处理，流式数据使用origin 8.0软件做统计分析。对应的数据见表4-5，结果见附图10-11。
[0113]
表4化合物诱导hos细胞的凋亡，以凋亡细胞总数％计。
[0114][0115]
表5化合物诱导a549细胞的凋亡，以凋亡细胞总数％计。
[0116][0117]
从表4-5和附图10-11可看出，随着给药浓度的增加，相较于培西达替尼标准品，化合物(ⅰ)在纳摩尔浓度就能诱导hos细胞的凋亡，在微摩尔浓度诱导a549细胞的凋亡，且化合物(ⅰ)诱导两种细胞凋亡的能力强于培西达替尼标准品。