用苔藓抑素诱导肿瘤相关抗原的方法与流程

用苔藓抑素诱导肿瘤相关抗原的方法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术根据35 u.s.c.
§
119(e)要求2019年10月10日提交的美国序列号62/913,605的优先权，该专利的全部内容通过引用整体并入本文。
技术领域
3.本发明大体涉及癌症，并且更具体地涉及诱导肿瘤相关抗原以改善对受试者中异常细胞的免疫监视。


背景技术：

4.癌症是一种细胞逃脱正常调节过程、转化并快速生长的疾病。这些快速生长的细胞可能出现在血液中(血液系统恶性肿瘤)，或作为实体瘤出现在各种器官中。异常的、快速生长的细胞通过表达独特的抗原来区分，该抗原被宿主免疫系统识别并由各种免疫机制控制。当转化的细胞逃脱了正常的免疫调节机制时，快速生长的细胞就会成为在血液中或作为实体瘤的恶性肿瘤。
5.此类肿瘤表达各种抗原，称为肿瘤相关抗原(taa)，是由肿瘤细胞组成性表达的细胞蛋白。这些抗原为宿主免疫效应功能提供刺激，此外还作为免疫疗法的靶标，尤其是单克隆抗体、抗体-药物偶联物、嵌合抗原受体(car)-t细胞和car-自然杀伤(nk)细胞，它们是用于各种恶性肿瘤的此类免疫肿瘤学方法的实例。
6.这些免疫介导疗法的一个重要方面是肿瘤抗原的充分表达，使免疫疗法能够识别异常细胞进行破坏。在b细胞恶性肿瘤中，taa可能对肿瘤类型具有特异性，或者由于其主要起源于b细胞，因此可能在肿瘤之间共享。cd19和cd20以及其他taa与非霍奇金淋巴瘤有关，并且是几种已批准的肿瘤药剂的靶标。类似地，例如，其他taa与急性成淋巴细胞性白血病(cd22)、急性髓系白血病(cd33和cd123)和多发性骨髓瘤(cd38和b细胞成熟抗原，或bcma)相关。几项针对这些血液系统恶性肿瘤的研究表明，taa的定量表达或密度是免疫疗法功效的一个重要因素。虽然不太常见，但t细胞恶性肿瘤如t细胞急性成淋巴细胞性白血病也表达多种肿瘤相关抗原。
7.苔藓抑素-1及其类似物是蛋白激酶c(pkc)的调节剂，在低浓度时刺激pkc活性并在高浓度时导致pkc下调。pkc的刺激诱导某些基因的表达，包括肿瘤相关抗原的表达，以及与各种细胞内信号传导机制的相互作用。例如，苔藓抑素-1已被证明增加cd22——一种b细胞肿瘤如急性和慢性成淋巴细胞性和淋巴细胞性白血病中的肿瘤相关抗原，的细胞表面表达。


技术实现要素：

8.本发明基于以下发现：苔藓抑素-1及其类似物可以诱导肿瘤相关抗原(taa)的表达，从而提高对表达这些抗原的异常(例如癌)细胞的识别，并提高免疫疗法靶向和杀死这些异常细胞的能力。
9.在一个实施例中，本发明提供了一种通过向有此需要的受试者施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂来治疗所述受试者的癌症的方法。在一方面，癌症是血液系统癌症，如b细胞淋巴瘤、t细胞恶性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、套细胞淋巴瘤(mcl)、多发性骨髓瘤(mm)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性骨髓性白血病(cml)、骨髓增生异常综合征、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)和毛细胞白血病(hcl)。在某些方面，免疫治疗剂是单克隆抗体(mab)、双特异性抗体、抗体-药物偶联物(adc)、嵌合抗原受体(car)-t细胞、嵌合抗原受体自然杀伤(car-nk)细胞、抗肿瘤疫苗或其组合。在一方面，免疫治疗剂是抗cd22抗体，例如inotuzumab。在某些方面，免疫治疗剂是car-t细胞或靶向cd22的car-nk。在一方面，adc是奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin}。在各个方面，向受试者另外施用药剂，如针对taa的抗体、化学治疗剂、adc、疫苗、免疫调节药物、免疫代谢调节药物、靶向疗法、放射、抗血管生成剂、car-t疗法、car-nk疗法、降低免疫抑制的药剂或其组合。在一方面，免疫治疗剂在施用苔藓抑素-1或其功能类似物之前、同时或之后施用。
10.在一方面，免疫治疗剂结合或靶向选自cd19、cd20、cd22、cd33、cd37、cd38、cd123和bcma的蛋白。在另一方面，在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后，cd5、cd19、cd20、cd22、cd33、cd38、cd123和/或bcma表达增加。在某些方面，受试者患有cll并且在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后cd19和/或cd22表达增加。在各个方面，受试者患有多发性骨髓瘤，并且在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后cd 38和/或bcma表达增加。
11.在另一个实施例中，本发明提供了一种通过向有此需要的受试者施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂来引发、增强或延长所述受试者中的抗肿瘤反应的方法。在一方面，受试者患有血液系统癌症，所述血液系统癌症选自b细胞淋巴瘤、t细胞恶性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、套细胞淋巴瘤(mcl)、多发性骨髓瘤(mm)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性骨髓性白血病(cml)、骨髓增生异常综合征、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)和毛细胞白血病(hcl)。在进一步的方面，免疫治疗剂是单克隆抗体(mab)、双特异性抗体、抗体-药物偶联物(adc)、嵌合抗原受体t(car-t)细胞、嵌合抗原自然杀伤(car-nk)细胞、抗肿瘤疫苗或其组合。在一方面，免疫治疗剂在施用苔藓抑素-1或其功能类似物之前、同时或之后施用。在某些方面，引发、增强或延长抗肿瘤反应是在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后cd5、cd19、cd20、cd22、cd33、cd38、cd123和/或bcma表达增加。
12.在进一步的实施例中，本发明提供了一种通过向受试者施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂来治疗所述受试者中对免疫治疗剂具有抗性的癌症的方法。在一方面，癌症是血液系统癌症，如b细胞淋巴瘤、t细胞恶性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、套细胞淋巴瘤(mcl)、多发性骨髓瘤(mm)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性骨髓性白血病(cml)、骨髓增生异常综合征、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)和毛细胞白血病(hcl)。在其他方面，免疫治疗剂是单克隆抗体、双特异性抗体、抗体-药物偶联物、嵌合抗原受体(car)-t细胞、嵌合抗原受体自然杀伤(car-nk)细胞、抗肿瘤疫苗或其组合。在某些方面，免疫治疗剂结合或靶向选自cd19、cd20、cd22、cd33、cd37、cd38、cd123和bcma的蛋白。在各个方面，在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后，cd5、cd19、cd20、cd22、cd33、cd38、cd123和/或bcma表达增加。
附图说明
13.图1a-1c显示了代表性浓度响应曲线，表明苔藓抑素-1上调reh(all)、aml193(aml)和nci-h929(mm)细胞中的细胞表面抗原。图1a：cd22，图1b：cd123，图1c：cd269(bcma)。
14.图2显示了在mm患者中暴露24小时后，cd5表达响应于苔藓抑素-1增加，但在健康供体或cll患者中没有增加。
15.图3显示了在72小时暴露后响应于苔藓抑素-1的cd19表达，示出了在健康供体和cll患者中表达增加，但在mm患者中没有增加。
16.图4显示了在使用源自复发、低表达taa患者的肿瘤细胞的pdx模型中对cd22导向的car-t和苔藓抑素-1的反应。
具体实施方式
17.本发明基于以下发现：苔藓抑素-1及其功能类似物可以诱导taa的表达，从而提高对表达这些抗原的异常(例如，癌)细胞的识别，并提高免疫疗法靶向和杀死这些异常细胞的能力。
18.在描述本组合物和方法之前，应当理解，本发明不限于所描述的特定组合物、方法和实验条件，因为此类组合物、方法和条件可以变化。还应当理解，本文所使用的术语仅出于描述特定实施例的目的，而不旨在是限制性的，因为本发明的范围将仅受所附权利要求的限制。
19.除非上下文另外明确指示，否则如在本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个(a/an)”以及“所述(the)”均包含复数指代物。因此，例如，对“方法”的引用包含一种或多种方法和/或本文所述类型的步骤，在阅读本公开等后这对于本领域技术人员而言将变得显而易见。
20.本说明书中所提及的所有公开、专利以及专利申请通过引用并入本文中，其程度如同每个单独的公开、专利或专利申请被专门地且单独地指示通过引用并入。
21.本文中使用的全部技术术语和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同，除非另有定义。尽管与本文所述的那些相似或等效的任何方法和材料可以用于本发明的实践或测试，但应当理解，修改和变化包括在本公开的精神和范围内。现在描述优选方法和材料。
22.苔藓抑素-1诱导b细胞肿瘤(血液系统恶性肿瘤)中肿瘤相关抗原(taa)的表达，使这些肿瘤能够被免疫疗法识别，并增加对各种免疫疗法的临床反应。苔藓抑素-1的类似物刺激血液系统恶性肿瘤中taa的表达，使这些肿瘤能够被免疫系统和免疫疗法识别，并增加对各种免疫疗法的临床反应。苔藓抑素-1和类似物诱导taa在白血病、淋巴瘤和骨髓瘤中的表达，具体是在骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤中，使这些肿瘤能够被免疫疗法识别，并增加对各种免疫疗法的临床反应。
23.癌症免疫疗法功效的一个主要障碍与taa的稀缺性有关，taa可以发挥参与宿主免疫功能的作用，并作为免疫治疗剂(包含单克隆抗体、抗体-药物偶联物、car-t和car-nk药物)的细胞靶标。taa的细胞膜表达，也称为taa密度，已被描述为对免疫治疗剂反应的预测因子。事实上，急性成淋巴细胞性白血病中cd19 car-t后发生的临床失败或复发与靶cd19
分子的丢失和细胞内化有关。
24.在一个实施例中，本发明提供了一种通过向有此需要的受试者施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂来治疗所述受试者的癌症的方法。在一方面，癌症是血液系统癌症，如b细胞淋巴瘤、t细胞恶性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、套细胞淋巴瘤(mcl)、多发性骨髓瘤(mm)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性骨髓性白血病(cml)、骨髓增生异常综合征、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)和毛细胞白血病(hcl)。在某些方面，免疫治疗剂是单克隆抗体、双特异性抗体、抗体-药物偶联物(adc)、嵌合抗原受体(car)-t细胞、嵌合抗原受体自然杀伤(car-nk)细胞、抗肿瘤疫苗或其组合。在一方面，免疫治疗剂是抗cd22抗体。在某些方面，免疫治疗剂是靶向cd22的car-t细胞或car-nk细胞。在一方面，adc是奥英妥珠单抗。在各个方面，向受试者另外施用药剂，如针对(taa)的抗体、化学治疗剂、adc、疫苗、免疫调节药物、免疫代谢调节药物、靶向疗法、放射、抗血管生成剂、car-t疗法、car-nk疗法、降低免疫抑制的药剂或其组合。在一方面，免疫治疗剂在施用苔藓抑素-1或其功能类似物之前、同时或之后施用。
25.在一方面，免疫治疗剂结合或靶向选自cd19、cd20、cd22、cd33、cd37、cd38、cd123和bcma的蛋白。在另一方面，在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后，cd5、cd19、cd20、cd22、cd33、cd38、cd123和/或bcma表达增加。在某些方面，受试者患有cll并且在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后cd19和cd22表达增加。在各个方面，受试者患有多发性骨髓瘤并且在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后cd38和/或bcma表达增加。
26.苔藓抑素-1或其功能类似物(也被一些人称为“bryologs”)是指一组已知为蛋白激酶c(pkc)有效调节剂的大环内酯类内酯。苔藓抑素-1源自海洋苔藓虫多室草苔虫(bugula neritina)，并且是蛋白激酶c(pkc)酶体系的有效调节剂，pkc酶体系是参与细胞信号传导、细胞增殖和细胞死亡的蛋白质家族。因此苔藓抑素-1在多种治疗适应症中具有用途。迄今为止，已分离出20种不同的苔藓抑素。苔藓抑素-1是特征最明显的，并且是唯一已在人体临床试验中评价的苔藓抑素家族成员。在低浓度时，它是一种有效的pkc激活剂，并导致细胞活化、信号传导和转录诱导，以及肿瘤和/或人类免疫缺陷病毒(hiv)抗原的细胞膜表达。因此，苔藓抑素-1使这些细胞对宿主免疫系统以及靶向这些抗原的外源施用免疫治疗剂更可见。苔藓抑素-1和苔藓抑素类似物的实例在本领域中是已知的并且可以在例如美国专利号8,816,122中找到，该专利通过引用并入本文。
27.如本文所用，术语“功能类似物”是指具有相似物理、化学、生物化学或药理学性质的化合物。功能类似物不一定是具有相似化学结构的结构类似物。
28.术语“癌症”是指一组疾病，其特征是从一个部位(原发部位)开始的异常和不受控制的细胞增殖，并有侵入并扩散到其他部位(继发部位，转移)的潜力，所述潜力使癌症(恶性肿瘤)不同于良性肿瘤。几乎所有器官都会受到影响，导致产生可影响人类的超过100种癌症类型。癌症可能由多种原因引起，包括遗传易感性、病毒感染、暴露于电离辐射、暴露于环境污染物、吸烟和/或饮酒、肥胖、不良饮食、缺乏体育活动或其任何组合。如本文所用，“瘤”或“肿瘤”包括其语法变体是指组织的新的和异常的生长，其可以是良性的或癌性的。在相关方面，瘤指示肿瘤疾病或病症，包含但不限于各种癌症。例如，此类癌症可包括前列腺癌、胰腺癌、胆管癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、肾癌、肺癌、睾丸癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、
脑癌和头颈癌、黑色素瘤、肉瘤、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤等。
29.起源于造血组织如骨髓或免疫系统细胞的癌症被称为血液系统癌症或血癌。血液系统癌症影响血细胞的产生和功能，并且主要分为三种类型：白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
30.如本文所用，“白血病”是指由异常白细胞的快速产生引起的血癌。白血病的实例包括急性成淋巴细胞性白血病(all)、急性髓系白血病(aml)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)和毛细胞白血病。
31.如本文所用，“淋巴瘤”是指影响淋巴系统的血癌类型。淋巴瘤的实例包括aids相关淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、蕈样肉芽肿、非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、塞泽里综合征、皮肤t细胞淋巴瘤和华氏巨球蛋白血症。
32.如本文所用，“骨髓瘤”是浆细胞的癌症。骨髓瘤的实例包括慢性骨髓增生性瘤、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、骨髓增生异常综合征和骨髓增生异常/骨髓增生性瘤。
33.如本文所用，术语“免疫治疗剂”是指引发免疫反应的治疗剂。免疫治疗剂的实例包含单克隆抗体(mab)、双特异性抗体、抗体-药物偶联物(adc)、嵌合抗原受体t细胞(car-t)、嵌合抗原受体自然杀伤(car-nk)细胞、抗肿瘤疫苗或其组合。
34.如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。“天然抗体”和“完整免疫球蛋白”等通常是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(l)链和两条相同的重(h)链构成。根据其恒定结构域的氨基酸序列，任何脊椎动物物种的轻链都可以归为两种明显不同的类型之一，称为kappa(κ)和lambda(λ)。根据其重链恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可归为不同的类别。存在五种主要的免疫球蛋白类别：iga、igd、ige、igg和igm，并且这些中的几种可进一步分为亚类(同种型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga和iga2。对应于不同免疫球蛋白类别的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
35.实验上，抗体可以用蛋白水解酶木瓜蛋白酶切割，这会导致每条重链断裂，产生三个单独的抗体片段。由轻链和与轻链质量大约相等的重链片段组成的两个单元称为fab片段(即“抗原结合”片段)。由两个相等的重链片段组成的第三单元称为fc片段。fc片段通常不参与抗原-抗体结合，但在涉及清除体内抗原的后续过程中是重要的。“fv”是含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。这一区域由紧密、非共价结合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。正是在这种配置中，每个可变结构域的三个cdr相互作用以在vh-vl二聚体表面上定义抗原结合位点。六个cdr共同赋予抗体抗原结合特异性。然而，甚至单个可变结构域(或仅包含对抗原特异的三个cdr的fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于整个结合位点。“单链fv”或“sfv”抗体片段包括抗体的vh和vl结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。优选地，fv多肽进一步包括vh和vl结构域之间的多肽接头，其使得sfv能够形成用于抗原结合的所需结构。sfv的综述参见pluckthun，《单克隆抗体药理学(the pharmacology of monoclonal antibodies)》,卷113,rosenburg和moore编辑,springer-verlag,new york,pp.269-315(1994)。
36.双特异性单克隆抗体(bsmab，bsab)是可以同时结合两种不同类型抗原的人工蛋
白。igg样双特异性抗体具有两个fab臂和一个fc区的传统单克隆抗体(mab)结构，除了两个fab位点结合不同的抗原之外。最常见的类型称为三功能抗体，因为它们具有在抗体上的三个独特的结合位点：两个fab区和fc区。每个重链和轻链对都来自独特的mab。由两条重链构成的fc区形成第三个结合位点。存在其他完全缺乏fc区的bsmab。这些包含仅由fab区组成的化学连接的fab，以及各种类型的二价和三价单链可变片段(scfv)。还存在一些模拟两种抗体的可变结构域的融合蛋白。
37.存在许多可以与苔藓抑素-1组合使用来治疗患者癌症的免疫肿瘤药物和疗法。可通过与苔藓抑素-1及其类似物组合来提高功效的用于治疗癌症的抗体和adc的实例包括但不限于blycyto(博纳吐单抗)、bexxar(托西莫单抗)、rituxan/mabthera(利妥昔单抗)、zevalin(替伊莫单抗)、arzerra(奥法木单抗)、gazyva(阿托珠单抗)、besponsa(奥英妥珠单抗)、lumoxiti(moxetumomab pasudotox-tdfk)、adcetris(本妥昔单抗)、mylotarg(吉妥珠单抗)、darzalex(达雷木单抗)、raptiva(依法珠单抗)、yervoy(伊匹单抗)、opdivo(纳武单抗)、keytruda(派姆单抗)、kymriah(tisagenlecleucel)、yescarta(axicabtagene ciloleucel)、imfinzi(德瓦鲁单抗)、tecentriq(阿特珠单抗)、bavencio(阿维鲁单抗)和libtayo(西米普利单抗)。此外，苔藓抑素-1及其类似物可提高以下抗体和药物的功效：avastin(贝伐单抗)、cimzia(塞妥珠单抗，cdp 870)、prolia/xgeva(地诺单抗)、erbitux(西妥昔单抗)、herceptin(曲妥珠单抗)、humira(阿达木单抗)、portazza(耐昔妥珠单抗，imc-iif 8)、leukoscan(硫索单抗)、mabcampath(阿仑单抗)、tysabri(那他珠单抗)、vectibix(帕尼单抗)、remicade(英夫利西单抗)、reopro(阿昔单抗)、simulect(巴利昔单抗)、synagis(帕利珠单抗)、actembra(托珠单抗)、gilotrif(阿法替尼)、lynparza(奥拉帕尼)、perjeta(帕妥珠单抗)、bosulif(博舒替尼)、cabometyx(卡博替尼)、trastuzumab-dkst(ogivri)、sutent(苹果酸舒尼替尼)、alecensa(艾乐替尼)、calquence(阿卡替尼)、imbruvica(依鲁替尼)、verzenio(阿贝西利)、aliqopa(库潘尼西)、nerlynx(来那替尼)、tarceva(埃罗替尼)。
38.抗体-药物偶联物或adc是一类生物药物，旨在作为治疗癌症的靶向疗法。adc是由与具有生物活性的细胞毒性(抗癌)有效载荷或药物连接的抗体组成的复杂分子。抗体-药物偶联物是生物偶联物和免疫偶联物的实例。adc将单克隆抗体的靶向能力与细胞毒性药物的癌症杀伤能力相结合。抗癌药物与特异性靶向某种肿瘤抗原的抗体偶联。抗体附着在癌细胞表面的抗原上。抗体与靶蛋白(抗原)之间的生化反应在肿瘤细胞中触发信号，然后肿瘤细胞将抗体与连接的细胞毒素一起吸收或内化。adc被内化后，细胞毒素会杀死癌细胞。这种靶向性限制了副作用并提供了比其他化学治疗剂更宽的治疗窗口。抗体-药物偶联物的实例包括吉妥珠单抗、本妥昔单抗、曲妥珠单抗-美坦新、奥英妥珠单抗、polatuzumab vedotin-piiq、维汀-恩弗妥单抗、trastuzumab deruxtecan、戈沙妥组单抗和贝兰他单抗莫福汀。
39.术语“car-转导的t细胞”和术语“car-t细胞”在本文中可互换使用，并且是指经过基因修饰以表达靶向具体抗原的嵌合抗原受体(car)的t细胞。根据特定方面，抗原存在于癌细胞表面。根据一些方面，癌细胞是血液系统癌细胞。根据一些方面，car-t细胞表达靶向选自但不限于cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd123、flt3和bcma的抗原的car。
40.car-t细胞从受试者中分离出来，并使用慢病毒或逆转录病毒载体或非病毒基因
转移系统进行离体基因操作，以表达对特定肿瘤靶标特异的工程化car。然后，将这些重新编程的car-t细胞扩增(必要时选择)，并在接受免疫抑制制备方案后输注入受试者。在一些方面，分离的t细胞的离体基因操作可以在线粒体富集过程之前或之后进行。
41.移植后，car-t细胞经历抗原结合并在外周血中扩增，它们从外周血到达肿瘤部位并识别和杀死表达相应抗原的肿瘤细胞。这可以触发car-t细胞的广泛增殖和肿瘤抗原的释放，激活受试者的免疫系统以募集非car-t免疫细胞，从而在称为由表位扩散交叉致敏的过程中引发进一步的抗肿瘤反应。
42.术语car-nk是指经过工程改造以表达靶向具体抗原的嵌合抗原受体(car)的自然杀伤(nk)细胞。nk细胞是先天免疫系统的一部分。与car-t细胞一样，car-nk细胞会破坏具有作为car靶标的抗原的细胞。
43.术语“疫苗”涉及药物制剂(药物组合物)或产品，其在施用后诱导免疫反应，特别是细胞免疫反应，所述免疫反应识别并攻击病原体或患病细胞，如癌细胞。疫苗可用于预防或治疗疾病。术语“个体化癌症疫苗”涉及特定癌症患者，并且意味着癌症疫苗适用于个体癌症患者的需要或特殊情况。
44.如本文所用，术语“接种疫苗”涉及施用疫苗、药物制剂(药物组合物)或产品，其在施用后诱导免疫反应，特别是细胞免疫反应，所述免疫反应可识别并攻击病原体或患病细胞，如癌细胞。疫苗可用于预防或治疗疾病。术语“免疫反应”是指对抗原的综合身体反应，并且优选是指细胞免疫反应或细胞以及体液免疫反应。免疫反应可以是保护性的/防止性的/预防性的和/或治疗性的。“诱导免疫反应”可能意味着在诱导之前没有针对特定抗原的免疫反应，但也可能意味着在诱导之前存在针对特定抗原的一定水平的免疫反应，并且在诱导之后，所述免疫反应得到增强。因此，“诱导免疫反应”还包含“增强免疫反应”。优选地，在受试者中诱导免疫反应后，保护所述受试者免于发展如癌症疾病的疾病，或通过诱导免疫反应来改善疾病状况。例如，可以在供体中诱导针对肿瘤表达抗原的免疫反应，这将帮助患有癌症疾病的受体受试者对抗癌症疾病。在这种情况下诱导免疫反应可能意味着受试者的疾病状况得到改善，受试者没有发展转移，或者处于发展癌症疾病风险中的受试者没有发展癌症疾病。
[0045]“抗原”或“肿瘤相关抗原”是指将引发免疫反应的任何物质，如任何肿瘤相关物质。特别地，“抗原”涉及与抗体或t淋巴细胞(t细胞)特异性反应的任何物质，优选肽或蛋白质。根据本发明，术语“抗原”包括任何包括至少一个表位的分子。优选地，本发明上下文中的抗原是任选地在加工后诱导免疫反应的分子。根据本发明，可以使用任何合适的抗原，其是免疫反应的候选物，其中免疫反应优选地是细胞免疫反应。在本发明的实施例的上下文中，抗原优选地由细胞呈递，优选地由抗原呈递细胞呈递，所述抗原呈递细胞在mhc分子的情况下包括患病细胞，特别是癌细胞，这导致针对抗原的免疫反应。抗原优选是对应于或衍生自天然存在的抗原的产物。此类天然存在的抗原包含肿瘤抗原。
[0046]
如本文所用，术语“肿瘤相关抗原”和“taa”是指表达在肿瘤细胞表面上的可以被免疫系统和免疫治疗剂识别的蛋白质。这些蛋白质触发免疫反应。肿瘤相关抗原的定量表达(也称为肿瘤抗原密度)是已知的临床反应相关物。这些抗原也可能在正常细胞中表达，反映了它们的组成性表达和正常的生物学功能。taa的实例包含cd5、cd19。cd20、cd33、cd37、cd38、cd123和b细胞成熟抗原(bcma)。
[0047]
术语“治疗”在本文中与术语“治疗方法”可互换使用并且指以下两者：1)治愈、减缓、减轻和/或停止诊断的病理状况或病症的治疗性治疗或措施，和2)预防/防止性措施。需要治疗的那些可包含已经患有特定医学病症的个体以及最终可能患有该病症的那些个体(例如，需要防止性措施的那些个体)。
[0048]
术语“治疗有效量”、“有效剂量”、“治疗有效剂量”、“有效量”等是指将引起研究人员、兽医、医生或其他临床医生正在寻找的组织、系统、动物或人的生物学或医学反应的主题化合物的量。通常，反应是患者症状的改善或所需的生物学反应。可以如本文所述确定有效量。
[0049]
术语
“……
的施用”和或“施用”应理解为意指向需要治疗的受试者提供治疗有效量的药物组合物。施用途径可以是肠内的、局部的或肠胃外的。因此，施用途径包括但不限于皮内、皮下、静脉内、腹膜内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、经皮、经气管、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内、口服、舌下、口腔、直肠、阴道、鼻、眼部施用，以及输注、吸入和雾化。如本文所用，短语“肠胃外施用”和“肠胃外施用的”是指除肠内和局部施用之外的施用方式。取决于施用方法，药物组合物可以多种单位剂型施用。合适的单位剂型包含但不限于粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂、栓剂、贴剂、鼻喷雾剂、注射剂、可植入缓释制剂、脂质复合物等。
[0050]
在一些方面，施用可以与一种或多种另外的治疗剂组合。短语“组合疗法”、“与
……
组合”等是指同时使用多于一种的药物或治疗以增加反应。本发明的组合物可以例如与用于治疗癌症的其他药物或治疗组合使用。具体而言，将本发明的组合物施用于受试者可以与任何抗癌疗法组合。此类疗法可以在施用本发明的组合物之前、同时或之后施用。
[0051]
在某些方面，向受试者另外施用药剂，如针对taa的抗体、化学治疗剂、adc、疫苗、免疫调节药物、免疫代谢调节药剂、靶向疗法、放射、抗血管生成剂、car-t疗法、car-nk疗法、降低免疫抑制的药剂或其组合。
[0052]
如本文所用，术语“抗癌疗法”或“抗癌治疗”意指可用于治疗癌症的任何治疗，如手术、放射疗法、化学疗法、免疫疗法和检查点抑制剂疗法。
[0053]
化学疗法的实例包含用化学治疗剂、细胞毒性剂或抗肿瘤剂治疗，所述化学治疗剂、细胞毒性剂或抗肿瘤剂包含但不限于(i)抗微管剂，包括长春花生物碱类(长春碱、长春新碱、长春氟宁、长春地辛和长春瑞滨)、紫杉烷类(卡巴他赛、多西他赛、拉洛他赛、奥他赛、紫杉醇和替司他赛)、埃坡霉素类(伊沙匹隆)和鬼臼毒素(依托泊苷和替尼泊苷)；(ii)抗代谢剂，包括抗叶酸剂(氨基蝶呤、甲氨蝶呤、培美曲塞、普拉曲沙和雷替曲塞)和脱氧核苷类似物(阿扎胞苷、卡培他滨、卡莫氟、克拉屈滨、氯法拉滨、阿糖胞苷、地西他滨、多西氟尿苷、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、巯基嘌呤、奈拉滨、喷司他丁、替加氟和硫鸟嘌呤)；(iii)拓扑异构酶抑制剂，包括拓扑异构酶i抑制剂(贝洛替康、喜树碱、科西特康(cositecan)、吉马替康、依喜替康(exatecan)、伊立替康、勒托替康、silatecan、拓扑替康和鲁比替康)和拓扑异构酶ii抑制剂(阿柔比星、氨柔比星、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、依托泊苷、伊达比星、美巴隆(merbarone)、米托蒽醌、新生霉素、吡柔比星、替尼泊苷、伐柔比星和佐柔比星)；(iv)烷化剂，包括氮芥类(苯达莫司汀、白消安、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、磷酸雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、美法仑、泼尼莫司汀、曲洛磷胺和乌莫司汀)、亚硝基脲类(卡莫司汀(bcnu)、氟莫司汀、洛莫司汀(ccnu)、n-亚硝基-n-甲基脲(mnu)、尼莫司汀、雷莫
司汀、司莫司汀(meccnu)和链脲佐菌素)、铂类(顺铂、卡铂、双环铂、奈达铂、奥沙利铂和赛特铂)、氮丙啶类(卡波醌、噻替哌、丝裂霉素、地吖醌(azq)、三亚胺醌和三亚乙基蜜胺)、烷基磺酸盐类(白消安、甘露舒凡和曲奥舒凡)、非经典烷化剂(肼、甲基苄肼、三氮烯、六甲三聚氰胺、六甲蜜胺、二溴甘露醇和哌泊溴烷)、四嗪类(达卡巴嗪、米托唑胺和替莫唑胺)；(v)蒽环类药剂，包括多柔比星和柔红霉素。这些化合物的衍生物包含表柔比星和伊达比星；吡柔比星、阿柔比星和米托蒽醌、博来霉素、丝裂霉素c、米托蒽醌和放线菌素；(vi)酶抑制剂类药剂，包括fi抑制剂(替吡法尼)、cdk抑制剂(阿贝西利、alvocidib、帕博西尼、瑞博西尼和seliciclib)、pri抑制剂(硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米)、phi抑制剂(阿那格雷)、impdi抑制剂(噻唑呋林)、li抑制剂(马索罗酚)、parp抑制剂(尼拉帕尼、奥拉帕尼、卢卡帕尼)、hdac抑制剂(贝利司他、帕比司他、罗米地辛、伏立诺他)和piki抑制剂(艾代拉里斯(idelalisib))；(vii)受体拮抗剂类药剂，包括era受体拮抗剂(阿曲生坦)、类视黄醇x受体拮抗剂(蓓萨罗丁)、性类固醇受体拮抗剂(睾内酯)；(viii)未分组的药剂，包括安吖啶、曲贝替丁、维甲酸类(阿利维a酸维甲酸)、三氧化二砷、天冬酰胺耗竭剂(天冬酰胺酶/培门冬酶)、塞来昔布、地美高辛、伊利司莫、依沙芦星、依托格鲁、氯尼达明、甲硫恩酮、米托胍腙、米托坦、奥利默森、高三尖杉酯碱和艾日布林。
[0054]
免疫疗法的实例包含用抗体和抗体-药物偶联物进行治疗，所述抗体和抗体-药物偶联物包含但不限于阿仑单抗、avastin(贝伐单抗)、bexxar(托西莫单抗)、cdp 870和cea-scan(阿西莫单抗)、地诺单抗、erbitux(西妥昔单抗)、herceptin(曲妥珠单抗)、humira(阿达木单抗)、imc-iif 8、leukoscan(硫索单抗)、mabcampath(阿仑单抗)、mabthera(利妥昔单抗)、马妥珠单抗、mylotarg(吉妥珠单抗)、那他珠单抗、neutrospec(锝(99mtc)fanolesomab)、帕尼单抗、panorex(依决洛单抗)、prostascint(铟-ill标记的卡罗单抗喷地肽)、raptiva(依法珠单抗)、remicade(英夫利西单抗)、reopro(阿昔单抗)、利妥昔单抗、simulect(巴利昔单抗)、synagis(帕利珠单抗)、theracim hr3、托珠单抗、tysabri(那他珠单抗)、verluma(诺非妥莫单抗)、xolair(奥马珠单抗)、zenapax(达昔单抗)、zevalin(与钇90偶联的替伊莫单抗(idec-y2b8))、gilotrif(阿法替尼)、lynparza(奥拉帕尼)、perjeta(帕妥珠单抗)、otdivo(纳武单抗)、bosulif(博舒替尼)、cabometyx(卡博替尼)、trastuzumab-dkst(ogivri)、sutent(苹果酸舒尼替尼)、adcetris(本妥昔单抗)、alecensa(艾乐替尼)、calquence(阿卡替尼(acalabrutinib))、yescarta(ciloleucel)、verzenio(阿贝西利)、keytruda(派姆单抗)、aliqopa(库潘尼西(copanlisib))、nerlynx(来那替尼)、imfinzi(德瓦鲁单抗)、darzalex(达雷木单抗)、tecentriq(阿特珠单抗)和tarceva(埃罗替尼)。
[0055]“检查点抑制剂疗法”是使用影响免疫系统作用方式的免疫检查点的癌症治疗形式。免疫检查点可以是刺激性的或抑制性的。肿瘤可以使用这些检查点来保护自己免受免疫系统攻击。检查点疗法可以阻断抑制性检查点，恢复免疫系统功能。检查点蛋白包含程序性细胞死亡1蛋白(pdcd1、pd-1；也称为cd279)及其配体、pd-1配体1(pd-l1、cd274)、细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(ctla-4)、a2ar(腺苷a2a受体)、b7-h3(或cd276)、b7-h4(或vtcn1)、btla(b和t淋巴细胞衰减因子或cd272)、ido(吲哚胺2,3-双加氧酶)、kir(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)、lag3(淋巴细胞激活基因3)、tim-3(t细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3)、tigit(t细胞免疫球蛋白和itim结构域受体)和vista(t细胞活化的v结构域ig抑制因
子)。
[0056]
免疫调节药物通过增加(免疫刺激剂)或减少(免疫抑制剂)血清抗体的产生来改变免疫系统的反应。开具免疫刺激剂以增强针对传染病、肿瘤、原发性或继发性免疫缺陷以及抗体转移改变等的免疫反应。免疫抑制药物用于降低对移植器官的免疫反应和治疗自身免疫性疾病，如天疱疮、狼疮或过敏。免疫刺激剂的类别包含细菌疫苗、菌落刺激因子、干扰素、白介素、治疗性疫苗、疫苗组合和病毒疫苗。其他免疫刺激剂包含格拉替雷、普乐沙福和elapegademase。免疫抑制剂药物包含皮质类固醇、janus激酶抑制剂、钙调神经磷酸酶抑制剂、mtor抑制剂、imdh抑制剂和生物药剂。免疫抑制剂药物的实例包含强的松龙、托法替尼、环孢素、他克莫司、西罗莫司、依维莫司、硫唑嘌呤、来氟米特、霉酚酸酯、阿巴西普、阿达木单抗、阿那白滞素、赛妥珠单抗、依那西普、戈利木单抗、英夫利昔单抗、伊西贝单抗(ixekizumab)、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、乌司奴单抗、维多珠单抗、巴利昔单抗和达克珠单抗。
[0057]
免疫代谢调节剂是改变免疫细胞代谢的药剂。
[0058]
靶向疗法是一种使用药物或其他物质来识别和攻击特定类型的癌细胞且对正常细胞伤害较小的治疗类型。一些靶向疗法会阻断某些酶、蛋白质或其他参与癌细胞生长和扩散的分子的作用。其他类型的靶向疗法帮助免疫系统杀死癌细胞或将有毒物质直接递送到癌细胞并杀死它们。与其他类型的癌症治疗相比，靶向疗法的副作用可能更少。大多数靶向疗法是小分子药物或单克隆抗体。靶向疗法包含血管生成抑制剂、单克隆抗体、蛋白酶体抑制剂和信号转导抑制剂。
[0059]
抗血管生成剂阻断喂养和滋养癌细胞的新血管的形成。抗血管生成剂的实例包括阿西替尼、贝伐单抗、卡博替尼、依维莫司、来那度胺、帕唑帕尼、雷莫芦单抗、瑞戈非尼、索拉非尼、舒尼替尼、沙利度胺、凡德他尼和阿柏西普。
[0060]
在另一个实施例中，本发明提供了一种通过向有此需要的受试者施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂来引发、增强或延长所述受试者中的抗肿瘤反应的方法。在一方面，受试者患有血液系统癌症，所述血液系统癌症选自b细胞淋巴瘤、t细胞恶性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、套细胞淋巴瘤(mcl)、多发性骨髓瘤(mm)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性骨髓性白血病(cml)、骨髓增生异常综合征、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)和毛细胞白血病(hcl)。在进一步的方面，免疫治疗剂是单克隆抗体、抗体-药物偶联物、嵌合抗原受体(car)-t细胞、嵌合抗原受体自然杀伤(car-nk)细胞、抗肿瘤疫苗或其组合。在一方面，免疫治疗剂在施用苔藓抑素-1或其功能类似物之前、同时或之后施用。在某些方面，引发、增强或延长抗肿瘤反应是在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后cd5、cd19、cd 20、cd22、cd33、cd38、cd123和/或bcma表达增加。
[0061]
引发抗肿瘤反应是指引发对癌细胞的免疫反应。增强抗肿瘤反应是指增加对癌细胞的免疫反应。延长抗肿瘤反应是指使免疫反应持续更长时间。
[0062]
在进一步的实施例中，本发明提供了一种通过向受试者施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂来治疗所述受试者中对免疫治疗剂具有抗性的癌症的方法。在一方面，癌症是血液系统癌症，如b细胞淋巴瘤、t细胞恶性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、套细胞淋巴瘤(mcl)、多发性骨髓瘤(mm)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性骨髓性白血病(cml)、骨髓增生异常综合征、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)和毛细胞
白血病(hcl)。在另一个方面，免疫治疗剂是单克隆抗体、双特异性抗体、抗体-药物偶联物、嵌合抗原受体(car)-t细胞、嵌合抗原受体自然杀伤(car-nk)细胞、抗肿瘤疫苗或其组合。在某些方面，免疫治疗剂结合或靶向选自cd19、cd20、cd22、cd33、cd37、cd38、cd123和bcma的蛋白。在各个方面，在施用苔藓抑素-1或其功能类似物和免疫治疗剂后，cd5、cd19、cd 20、cd22、cd33、cd38、cd123和/或bcma表达增加。
[0063]
提供以下实例以进一步说明本发明的实施例，但并非旨在限制本发明的范围。虽然它们是可以使用的那些的典型，但是可以替代地使用本领域技术人员已知的其他程序、方法或技术。
[0064]
实例
[0065]
实例1
[0066]
苔藓抑素对细胞表面蛋白表达的影响
[0067]
已经在代表各种血液系统肿瘤类型的众多肿瘤细胞系中检查了苔藓抑素-1。表面蛋白靶标表达通过流式细胞术用由不同浓度的苔藓抑素-1刺激的人细胞系检查。使用代表白血病/淋巴瘤(toledo、reh、db)、多发性骨髓瘤(nci-h929、u266b1、rpmi8226)和急性髓系白血病(kasumi-1、aml-193、thp1)的不同血液系统疾病适应症的人细胞系作为靶细胞系。每个细胞系用0.001、0.01、0.1或1nm的苔藓抑素-1处理24小时或72小时，一式两份，然后通过流式细胞术定量测量以下蛋白质抗原的表面分子表达：cd19、cd20、cd22、cd33、cd37、cd38、cd123、cd269(bcma)和同种型对照。苔藓抑素-1引起一些抗原而不是其他抗原的上调。如图1所示，cd22、cd123和bcma都响应苔藓抑素而上调。
[0068]
调查了多种浓度的苔藓抑素-1在两个时间点调节来自健康供体(2个供体)或患有多发性骨髓瘤(2名患者，mm)或慢性淋巴细胞性白血病(4名患者，cll)的患者的原代b细胞上的多种抗原(cd5、cd19、cd20、cd22、cd37、cd200/ox2和cd269/bcma)的表面表达的能力。反应实例如图2-3所示。可以看出，在mm患者中暴露24小时后，cd5表达响应于苔藓抑素-1增加，但在健康供体或cll患者中没有增加。相反，cd19和cd22在健康供体和cll患者中上调，但在mm患者中没有上调。
[0069]
实例2
[0070]
苔藓抑素与抗cd22抗体对reh细胞的影响
[0071]
检查了苔藓抑素-1增强抗cd22抗体依帕珠单抗的影响的能力，所述抗体在实验中被修饰以模拟抗体-药物偶联物。检查了依帕珠单抗在有和没有苔藓抑素-1的情况下杀死reh细胞的能力。在第0天接种细胞并使其生长；在第42天，施用cd22导向的car-t细胞，并且正如预期的那样，肿瘤没有反应。在第45天施用苔藓抑素-1诱导肿瘤反应，这可能通过刺激复发肿瘤细胞中cd22的表达来诱导。
[0072]
苔藓抑素-1降低了依帕珠单抗诱导的reh细胞杀伤的ec50，表明依帕珠单抗响应于苔藓抑素-1的效力增强。
[0073]
[0074]
表1：随着苔藓抑素-1浓度的增加，reh细胞对依帕珠单抗的反应的ec50。
[0075]
尽管本发明已参照上述实例进行了描述，但应理解修改和变化包含在本发明的精神和范围内。因此，本发明仅由以下权利要求限制。