三种来源于透骨香木质素化合物及其制备方法和用途

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及透骨香中木质素化合物及其制备方法和用途。


背景技术：

2.il-6属于促炎症因子，通过激活免疫系统，募集单核细胞，刺激内皮细胞和平滑肌细胞表达，抑制调节性t(treg)细胞分化和t细胞调亡，起到促炎作用。环氧化酶-2(cox-2)为一种在正常组织中较少表达的诱导酶，而当细胞受到炎症刺激时大量表达.由于cox-2可以快速应答一系列促炎介质和细胞因子，因此长久以来一直被认为在炎症发生的病理过程中扮演重要角色。抑制这些炎症因子的产生，即可起到抗炎的作用。
3.植物为我们提供了结构与生物多样性的天然产物。为了寻找新的炎症因子抑制剂，我们建立了小鼠巨噬细胞rw264.7模型。此细胞在脂多糖lps的刺激下，，产生炎症因子il-6，cox-2。在加入lps刺激细胞前，加入药物孵育2小时，评价药物抑制il-6和cox-2活性。


技术实现要素：

4.本发明目的在于提供透骨香中三个木质素类化合物及其制备方法和应用。
5.本发明提供的化合物属于木质素类，结构如下
[0006][0007]
本发明还包括化合物1-3的制备方法，该方法包括如下步骤：
[0008]
(1)透骨香用95％的乙醇提取，回收提取液得粗提液
[0009]
(2)步骤(1)所得粗提物溶解于水中，采用与水不相混溶的有机溶剂萃取，减压回收溶剂得到萃取物；
6’)，119.09(c-6”)，132.61(c-1’)，135.62(c-1”)，146.26(c-4”)，146.35(c-4’)， 147.96(c-3’)，149.36(c-3”).1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：4.88(1h，d，j＝7.2hz，h-glu1)，3.76(9h，m， ome)，4.67(2h，d，j＝3.6hz，h-2，6)，3.04(2h，m，h-1，5)，6.71-7.05(6h，arom.h)
[0031]
化合物3的结构鉴定数据如下：13c-nmr(dmso-d6，100mhz)δ：54.04(c-1)，54.13(c-5)，56.44(ome)， 56.86(ome)，61.34(glu-6)，70.35(glu-4)，71.65(c-4，8)，74.60(glu-2)，76.95(glu-5)，77.68(glu-3)， 85.53(c-2)，85.79(c-6)，103.07(glu-1)，104.05(c-2’，c-6’)，104.59(c-2”，c-6”)，131.77(c-1’)， 134.07(c-4’)，135.25(c-4”)，137.60(c-1”)，148.33(c-3，c-5’)，153.07(c-3”，c-5”).3.76(ome)，4.88(1h， d，j＝7.2hz，h-glu1)，3.03(2h，m，h-1，5)，4.66(2h，dd，j＝9.2，4hz，h-2，6)，6.60-6.89(4h，arom.h)
[0032]
实施例2
[0033]
(1)透骨香用95％的乙醇提取，回收提取液得粗提液
[0034]
(2)步骤(1)所得粗提物溶解于水中，采用与水不相混溶的有机溶剂萃取，减压回收溶剂得到萃取物；
[0035]
(3)上述步骤(2)中所得流份过0ds反相柱分离，以甲醇/水为流动相梯度洗脱；
[0036]
(4)上述步骤(3)中所得流份经制备液相分离，以甲醇/水为流动相洗脱梯度洗脱，得到化合物]，2，3.
[0037]
化合物1-3的鉴定方法见实例1
[0038]
实例3
[0039]
化合物1-3的il-6和cox-2活性测试
[0040]
(1)实验原理
[0041]
il-6属于促炎症因子，通过激活免疫系统，募集单核细胞，刺激内皮细胞和平滑肌细胞表达，抑制调节性t(treg)细胞分化和t细胞调亡，起到促炎作用。环氧化酶-2(cox-2)为一种在正常组织中较少表达的诱导酶，而当细胞受到炎症刺激时大量表达.由于cox-2可以快速应答一系列促炎介质和细胞因子，因此长久以来一直被认为在炎症发生的病理过程中扮演重要角色。抑制这些炎症因子的产生，即可起到抗炎的作用。
[0042]
(2)实验方法
[0043]
小鼠巨噬细胞培养
[0044]
以dmem高糖培养基作为基础配制成内含10％胎牛血清及1％双抗(青霉素∶链霉素＝1∶1)细胞培养液，37c，5％c0，培养箱培养，2～3天换液一次，至细胞基本铺满培养瓶瓶底，传代或实验处理。
[0045]
化合物的配置方法
[0046]
待测化合物用dmso溶解，配成母液，存储于-20℃。临时用dmem培养液将其稀释，依次稀释为 100um，50um，10um。
[0047]
(3)待测化合物的细胞毒性
[0048]
将对数生长期的小鼠巨噬细胞，浓度调整为1
×
105个/ml，接种于96孔板中，置于37℃，5％co2培养箱中，培养24小时后，加50um待测药物，24小时后观察细胞存活情况，并用mtt法检测细胞的毒性，以确定化合物的测试浓度。
[0049]
化合物的il-6和cox-2抑制活性
[0050]
将对数生长期的小鼠巨噬细胞，浓度调整为1
×
105个/ml，接种于96孔板中，置于
37℃，5％co2 培养箱中，待细胞完全贴壁后，加入不同浓度的待处理药物，预处理2小时后，加入lps浓度为1ug/ml，继续培养24小时后，取细胞上清液，加入酶联免疫试剂盒中，在波长450nm下测得其吸光值，根据吸光度值和标准曲线计算各化合物对il-6和cox-2的抑制率。
[0051]
统计方法
[0052]
全部资料采用spss(13.0)统计软件包进行检验分析。结果用平均值士标准误表示，评价整体性差异，组间均数采用one-wayanova分析法进行方差齐性分析，并结合个0k5dunnett
′
s test 分析方法进行组间比较。多样本方差齐性检验采用levene检验，当p＞0.05，方差是齐的，采用dunnett
′
s 双侧t检验多组间均数的差异，当p＜0.05，方差不齐，采用dunnettt3检验多组间均数的差异。
[0053]
ic50计算方法
[0054]
将各剂量和抑制率等参数用非线性回归拟合计算化合物的抑制il-6和cox-2的ic50
[0055]
实验结果：化合物抑制il-6和cox-2的ic50见表1
[0056]
表1化合物1-3抑制il-6和cox-2的ic-50值表1：化合物对lps诱导小鼠巨噬细胞释放il-6和cox-2的影响
[0057]
结果表明1-3化合物具有抑制il-6和cox-2的生成。