月季花制剂的制备方法及其特征图谱与流程

1.本发明涉及药品技术领域，具体涉及一种月季花制剂的制备方法、特征图谱及其测定方法。


背景技术：

2.月季属于蔷薇科植物，学名rosa chinensis jacq.。月季花性味甘，温，归肝经。月季花可活血调经、疏肝解郁，可用于气滞血瘀、月经不调、痛经，闭经、胸胁胀痛等症状。月季花是一种具有较高经济价值和药用价值的植物。现代化学研究表明月季花含挥发油，为萜醇类化合物，例如香茅醇、橙花醇、牻牛儿醇、丁香油酚。除此之外，月季花还含有黄酮类、酚酸类化合物和鞣质类等物质，具有抗肿瘤、抗真菌、抗病毒、增强机体免疫功能等作用。目前提取月季花的方法很多，但是还没有高效提取月季花，且有效保留其活性成分，来制备月季花制剂的方法。


技术实现要素：

3.为了解决现有技术中存在的上述技术问题之一，本发明提供了一种月季花制剂的制备方法，以及月季花制剂的特征图谱的测定方法。
4.根据一个方面，提供了一种月季花制剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：向月季花药材中添加水，进行浸泡；经煎煮后，过滤，得到过滤液；对所述过滤液进行浓缩，得到浸膏液。
5.根据一些实施方式，所述浸泡进行10～40分钟。根据一些实施方式，所述浸泡进行20～40分钟。根据一些实施方式，所述浸泡进行30分钟。
6.根据一些实施方式，所述制备方法包括两次或更多次煎煮。根据一些实施方式，所述煎煮包括煮沸后保持微沸一段时间。
7.根据一些实施方式，所述制备方法包括两次煎煮。根据一些实施方式，第一次煎煮添加10～14倍量的水。根据一些实施方式，第一次煎煮添加12～14倍量的水。根据一些实施方式，第二次煎煮添加8～12倍量的水。根据一些实施方式，第二次煎煮添加10～12倍量的水。根据一些实施方式，第一次煎煮20～40分钟。根据一些实施方式，第一次煎煮30～40分钟。根据一些实施方式，第二次煎煮15～30分钟。根据一些实施方式，第二次煎煮20～30分钟。
8.根据一些实施方式，所述制备方法中，采用200～400目筛网进行过滤。根据一些实施方式，所述制备方法中，采用300～400目筛网进行过滤。
9.根据一些实施方式，所述制备方法中，所述浓缩在50～70℃进行。根据一些实施方式，所述浓缩在60℃进行。根据一些实施方式，所述浓缩为减压浓缩，例如在-0.098mpa的真空度下进行。根据一些实施方式，所述浓缩过程中使用50转/分。根据一些实施方式中，所述浓缩进行至相对密度为1.02～1.04。
10.根据一些实施方式，所述月季花药材可以为月季花饮片。
11.根据一些实施方式，所述月季花制剂的制备方法包括：向月季花药材，添加10～14倍量的水，浸泡20～40分钟；然后，进行第一次煎煮，煮沸保持微沸30～40分钟，得到第一煎煮液；再向月季花药材中，添加10～12倍量的水，浸泡20～40分钟；然后，进行第二次煎煮，煮沸保持微沸20～30分钟，得到第二煎煮液；将所述第一煎煮液和所述第二煎煮液合并，采用300～400目筛网进行过滤，得到过滤液；对所述过滤液进行浓缩，得到月季花浓缩液。
12.根据一些实施方式，所述月季花制剂的制备方法包括：向月季花药材，添加12倍量的水，浸泡30分钟；然后，进行第一次煎煮，煮沸保持微沸30分钟，得到第一煎煮液；再向月季花药材中，添加10倍量的水，浸泡30分钟；然后，进行第二次煎煮，煮沸保持微沸20分钟，得到第二煎煮液；所述第一煎煮液和所述第二煎煮液，分别采用300目筛网进行过滤得到第一过滤液和第二过滤液；对所述第一过滤液和所述第二过滤液合并，浓缩，得到月季花浓缩液。
13.根据一些实施方式，所述月季花制剂的制备方法进一步包括对所述浸膏液进行干燥，得到月季花浸膏粉。根据一些实施方式，所述干燥选自冷冻干燥、喷雾干燥、带式干燥和真空干燥的一种或几种。
14.根据一些实施方式，所述干燥为冷冻干燥，包括预冷冻和冷冻干燥的步骤。根据一些实施方式，所述预冷冻包括在-40℃下保持24小时。根据一些实施方式，所述冷冻干燥进行48小时。根据一些实施方式，所述喷雾干燥过程中，进风温度为170～180℃。
15.根据一些实施方式，所述月季花制剂可以为汤剂。
16.根据一些实施方式，所述月季花制剂的制备方法进一步包括，对所述月季花浸膏粉进行制粒，得到月季花颗粒剂。根据一些实施方式，所述制粒为干法制粒，其包括向浸膏粉中添加糊精，混匀，然后进行制粒。
17.根据一些实施方式，所述月季花制剂的制备方法包括：向月季花药材，添加12倍量的水，浸泡30分钟；然后，进行第一次煎煮，煮沸保持微沸30分钟，得到第一煎煮液；再向月季花药材中，添加10倍量的水，浸泡30分钟；然后，进行第二次煎煮，煮沸保持微沸20分钟，得到第二煎煮液；所述第一煎煮液和所述第二煎煮液，分别采用300目筛网进行过滤得到第一过滤液和第二过滤液；对所述第一过滤液和所述第二过滤液合并，浓缩，得到月季花浓缩液；对所述月季花浓缩液进行喷雾干燥，得到浸膏粉；对浸膏粉进行干法制粒。
18.根据另一方面，提供了本发明的月季花制剂的特征图谱，其包括6个特征峰，其中峰5为参照峰(s峰)。所述6个特征峰与s峰的相对保留时间在以下规定值的10％之内：峰1，0.62；峰2，0.92；峰3，0.94；峰4，0.96；峰5，1.00；峰6，1.18。根据一些实施方式，所述s峰对应于异斛皮苷。
19.根据又一方面，提供了月季花制剂的特征图谱的测定方法，其包括：使用异斛皮苷作为参照物，制备参照物溶液；向月季花制剂中加入溶剂，得到供试品溶液；将所述参照物溶液和所述供试品溶液分别进行高效液相色谱分析，得到所述月季花制剂的特征图谱。
20.根据一些实施方式，所述制备月季花制剂的供试品溶液包括，向所述月季花制剂中加入50％乙醇、70％乙醇、无水乙醇、50％甲醇、70％甲醇或甲醇进行提取。根据一些实施方式，所述制备月季花制剂的供试品溶液包括，向所述月季花制剂中加入70％甲醇进行提取。
21.根据一些实施方式，向月季花制剂中加入溶剂后，进行10～30分钟超声处理，得到
供试品溶液。根据一些实施方式，向月季花制剂中加入溶剂后，进行20分钟超声处理，得到供试品溶液。
22.根据一些实施方式，所述高效液相色谱的检测波长约为254nm。
23.根据一些实施方式，所述高效液相色谱的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.1％甲酸溶液为流动相b；柱温约为35℃；检测波长约为254nm。根据一些实施方式，色谱柱的柱长约为250mm，内径约为4.6mm，粒径约为5.0μm。
24.金丝桃苷和异槲皮苷为月季花指标性成分，也是药理活性成分，具有多种药理活性。通过本发明的方法制备得到的月季花制剂，以月季花药材或者月季花饮片为原料，最大限度的保留住了药材中原有的这些化学成分。
附图说明
25.图1示出了根据本公开的实施方式的制备月季花汤剂的工艺流程图。
26.图2示出了使用不同溶媒时获得的色谱图。a：50％乙醇；b：70％乙醇；c：无水乙醇；d：50％甲醇；e：70％甲醇；f：甲醇。
27.图3示出了使用不同超声时间时获得的色谱图。a：超声10分钟；b：超声20分钟；c：超声30分钟。
28.图4示出了在不同波长下检测到的色谱图。
29.图5示出了同一批月季花汤剂的平行试品的特征色谱图。
30.图6示出了15批月季花标准汤剂的特征色谱图。
31.图7示出了根据本公开实施方式的制备月季花颗粒剂的工艺流程图。
32.图8示出了月季花饮片以及根据本公开实施方式制备的汤剂、膏粉和颗粒剂的特征色谱图。
具体实施方式
33.为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步的详细说明。此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于构成对本发明的任何限制。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本公开的概念。这样的结构和技术在许多出版物中也进行了描述。
34.除非另有定义，否则本发明使用的所有技术术语和科技术语都具有如在本发明所属领域中通常使用的相同含义。出于解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且在适当时，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。
35.除非上下文另有明确说明，否则本文所用的表述“一种”和“一个”包括复数指代。例如，提及“一个细胞”包括多个这样的细胞及本领域技术人员可知晓的等同物等等。
36.本文所用的术语“约”表示其后的数值的
±
20％的范围。在一些实施方式中，术语“约”表示其后的数值的
±
10％的范围。在一些实施方式中，术语“约”表示其后的数值的
±
5％的范围。
37.本文所用的术语“饮片”指，中药根据需要，经过净制、切制或炮炙处理而形成的供配方用的中药。本文所用的术语“月季花饮片”指，月季花的干燥花蕾，微开时采摘，阴干或低温干燥，水分不超过12.0％，总灰分不超过5.0％。
38.本文所用的术语“浸膏”通常指，药材使用适宜的溶剂提取，蒸去或者通过其他方式去掉部分或者全部溶剂得到的产物。浸膏可以调整至所需的浓度。
39.本文所用的术语“减压浓缩”，是使用抽真空的方式降低水或溶剂的沸腾温度，使水或溶剂蒸发干燥。
40.下面提供实施例和附图以帮助理解本发明。但应理解，这些实施例和附图仅用于说明本发明，但不构成任何限制。本发明的实际保护范围在权利要求书中进行阐述。应理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以进行任何修改和改变。
41.出膏率测量方法：参照水溶性浸出物测定法(中国药典2015年版通则2201)项下的方法测定。具体方法为精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重且重量为m1的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105℃下干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量m2。饮片投料量为m，提取液体积为v，按照以下公式计算出膏率，每组平行测定两份。
[0042][0043]
金丝桃苷、异槲皮苷转移率测定：取定容至2000ml的煎液，过0.45μm微孔滤膜(mce)，取续滤液，作为金丝桃苷和异槲皮苷含量测定用供试品溶液。
[0044]
高效液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5.0μm)；以乙腈为流动相a，以0.1％甲酸溶液为流动相b，按下表1中的规定进行梯度洗脱；柱温为35℃；检测波长为254nm。理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于6000。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。
[0045]
表1.流动相梯度
[0046][0047]
金丝桃苷和异槲皮苷的含量测定分析条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％甲酸溶液(15：85)为流动相；检测波长为254nm；进样量10μl。理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备：精密称取金丝桃苷和异槲皮苷对照品适量，置同一量瓶中，加50％甲醇制成每lml各含20μg的混合对照品溶液，即得。
[0048]
使用的仪器与设备：
[0049]
养生药膳壶(合肥荣事达小家电有限公司)
[0050]
电子分析天平：tb-215d、bsa224s-cw(北京赛多利斯)
[0051]
jy10001型电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)
[0052]
kq-250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率250w，频率40khz)
[0053]
re-3000型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)
[0054]
fd-1c-50型冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司)
[0055]
dhg-9123a型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)
[0056]
岛津高效液相色谱仪(lc-15c泵，spd-15c型紫外检测器，sil-10af自动进样器，cto-15c柱温箱，岛津lc色谱工作站)
[0057]
tb-215d、bsa224s-cw型电子分析天平(北京赛多利斯)
[0058]
kq-250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率250w，频率40khz)
[0059]
甲醇：fisher，色谱纯
[0060]
甲酸：天津市永大化学试剂开发中心，色谱纯
[0061]
乙腈：merck，色谱纯
[0062]
水：超纯水
[0063]
金丝桃苷：购自中国食品药品检定研究院；批号：111521-201809；纯度：94.9％
[0064]
异槲皮苷：购自中国食品药品检定研究院；批号：111809-201804；纯度：97.2％
[0065]
实施例1：月季花汤剂的制备
[0066]
采用如图1所示的工艺流程，通过浸泡，加水煎煮，过滤，浓缩和冷冻干燥来制备月季花汤剂。本实施例中，测试了各步骤对于所制备的月季花汤剂的质量的影响。
[0067]
1.1浸泡
[0068]
称取月季花饮片(饮片批号：sdyp200417-1)100g，加入12倍水，浸泡，每隔10分钟计算吸水率，试验结果见表2。
[0069]
表2.吸水率随浸泡时间的变化。
[0070][0071]
从表2可以看出，0分钟～30分钟，水吸收速率较快；30分钟后，水的吸收速率趋于平缓，基本不再吸收水分。
[0072]
1.2加水量
[0073]
称取3份月季花饮片(饮片批号：sdyp200417-1)，每份100g。煎煮二次，一煎分别加10倍量、12倍量、14倍量水，浸泡30分钟，测量浸过药面高度，煮沸后煎煮30分钟，300目筛网趁热滤过，滤液置冰浴中冷却；二煎分别加8倍量、10倍量、12倍量水，测量浸过药面高度，煮沸后煎煮20分钟，300目筛网趁热滤过，滤液置冰浴中冷却，滤液合并，浓缩，干燥，称重，计算出膏率。实验结果见表3。
[0074]
表3.加水量的影响。
[0075][0076]
由表3的结果可知，实验组2与实验组3的出膏率相差不大，但明显高于实验组1。
[0077]
1.3煎煮时间
[0078]
取月季花饮片3份(饮片批号：sdyp200417-1)，每份100.0g，一煎加水12倍，煮沸，分别保持微沸20、30、40分钟；二煎加水10倍，煮沸，分别保持微沸15、20、30分钟。分别用300目筛网固液分离，迅速冷却，以月季花标准汤剂中出膏率、浸出物作评价指标，筛选最佳煎
煮时间。实验结果见表4。
[0079]
表4.煎煮时间的影响。
[0080][0081]
由表4的结果可知，一煎煎煮时间为20分钟时出膏率和浸出物均较低，而一煎煎煮时间为30或40分钟时出膏率和浸出物均明显较高。
[0082]
1.4固液分离
[0083]
称取3份月季花饮片(饮片批号：sdyp200417-1)，每份100g，一煎加入饮片量12倍水，浸泡30分钟，煮沸后保持微沸30分钟，二煎加入饮片量10倍水，煮沸后保持微沸20分钟，趁热分别用200目、300目、400目筛网进行固液分离，观察滤液澄清度，结果见表5。
[0084]
表5.
[0085][0086]
由表5的结果可知，使用200目筛网进行过滤时，滤液中存在杂质；而使用300目、400目筛网过滤时滤液均澄清。
[0087]
1.5冷却
[0088]
采用冰浴方式进行迅速冷却，每煎煎液冷却时间为20分钟左右。
[0089]
1.6浓缩
[0090]
采用减压浓缩方法进行低温浓缩，水浴温度：60℃；真空度：-0.098mpa；转速：50转/分。将混匀的煎液，全部倒入圆底烧瓶中，减压浓缩至相对密度为1.02～1.04，旋蒸时间为110分钟。
[0091]
1.7干燥
[0092]
采用冷冻干燥，冷冻干燥过程及参数如下：
[0093]
(1)预冷冻：浓缩液冷却后，-40℃下预冷冻24小时。
[0094]
(2)冷冻干燥：冷冻干燥48小时，得到冻干粉。
[0095]
1.8工艺重复性验证
[0096]
称取3份月季花饮片，每份100g，一煎加入饮片量12倍水，浸泡30分钟，煮沸后保持微沸30分钟，二煎加入饮片量10倍水，煮沸后保持微沸20分钟，趁热分别用300目筛网进行固液分离。检测所得汤剂的出膏率、水分和干燥效果。结果如下表6所示。
[0097]
表6.
[0098][0099]
从表6的结果可以看出，三组月季花标准汤剂冻干粉质地疏松，水分均小于6.0％，干燥效果较好，出膏率差异较小，证明该工艺具有稳定的重复性。得到的汤剂可装入锡箔袋，避光保存。
[0100]
实施例2.月季花汤剂的质量的测定
[0101]
本实施例中使用的仪器和试药：
[0102]
岛津高效液相色谱仪(lc-15c泵，spd-15c型紫外检测器，sil-10af自动进样器，cto-15c柱温箱，岛津lc色谱工作站)。
[0103]
tb-215d、bsa224s-cw型电子分析天平(北京赛多利斯)。
[0104]
kq-250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率250w，频率40khz)。
[0105]
甲醇：fisher，色谱纯。
[0106]
甲酸：天津市永大化学试剂开发中心，色谱纯。
[0107]
乙腈：merck，色谱纯。
[0108]
水：超纯水。
[0109]
金丝桃苷：购自中国食品药品检定研究院；批号：111521-201809；纯度：94.9％。
[0110]
异槲皮苷：购自中国食品药品检定研究院；批号：111809-201804；纯度：97.2％。
[0111]
参照物溶液的制备：取金丝桃苷对照品、异槲皮苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml各含20μg的混合溶液，作为参照物溶液。
[0112]
供试品溶液的制备：取月季花饮片100g，煎煮两次，第一次加饮片量12倍的水，浸泡30分钟，煎煮30分钟，趁热滤过，滤液迅速冷却，备用；第二次加饮片量10倍的水，煎煮20分钟，趁热滤过，滤液迅速冷却，合并两次滤液，混匀；减压浓缩至相对密度为1.02～1.04(60℃)的浸膏，冷冻干燥，得到干燥粉末。取粉末约0.1g，置具塞锥形瓶中，加入溶媒25ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)20分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0113]
2.1原料
[0114]
收集15批来自山东省莱州市、山东省菏泽市定陶县、山东省威海市文登市产区的月季花药材，并检测含量均合格。取以上合格的月季花药材，按照《中国药典》2015年版四部炮制通则0213相关规定进行炮制。饮片中指标成分的含量检测结果见表7。
[0115]
表7.月季花饮片中金丝桃苷、异槲皮苷的检测结果
[0116][0117]
2.2制法
[0118]
取月季花饮片100g，煎煮两次，第一次加饮片量12倍的水，浸泡30分钟，煎煮30分钟，趁热滤过，滤液迅速冷却，备用；第二次加饮片量10倍的水，煎煮20分钟，趁热滤过，滤液迅速冷却，合并两次滤液，混匀；减压浓缩至相对密度为1.02～1.04(60℃)的浸膏，冷冻干燥，即得。
[0119]
2.3出膏率
[0120]
按照月季花标准汤剂制备方法进行标准汤剂的制备，所得月季花标准汤剂出膏率见表8。
[0121]
表8.出膏率的测定结果。
[0122][0123]
由表8可知，15批标准汤剂出膏率的范围为16.3％～23.0％，均值为19.4％，以均值加减3倍sd来规定出膏率的范围为12.9％～25.9％；以均值上下浮动30％来规定出膏率的范围为13.6％～25.2％。
[0124]
2.4水分测定
[0125]
精密称取15批月季花标准汤剂每批约2g，按照《中国药典》(2015年版)通则0832水分测定法测定。结果见表9。
[0126]
表9.水分的测定结果
[0127][0128]
由表9可知，15批月季花标准汤剂的水分均小于8.0％，符合要求。
[0129]
2.5浸出物测定
[0130]
照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2015版通则2201)项下热浸法测定，用乙醇做溶剂，对15批样品进行测定，结果见表10。
[0131]
表10.浸出物的测定结果。
[0132][0133]
由表10可知，浸出物范围为40.7～55.6％，平均浸出物为47.5％，以均值加减3倍sd来规定浸出物的范围为35.8％～59.2％；以均值上下浮动30％来规定浸出物的范围为33.3％～61.8％。
[0134]
实施例3.月季花汤剂的特征图谱测定
[0135]
本实施例测试了由饮片批号：sdyp200417-1、sdyp200417-2、sdyp200417-3、sdyp200417-4、sdyp200417-5、sdyp200711-1、sdyp200711-2、sdyp200711-3、sdyp200711-4、sdyp200711-5、sdyp201010-1、sdyp201010-2、sdyp201010-3、sdyp201010-4、sdyp201010-5制备的月季花标准汤剂，经冷冻干燥得到干粉。
[0136]
参照物溶液的制备：取金丝桃苷对照品、异槲皮苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml各含20μg的混合溶液，作为参照物溶液。
[0137]
供试品溶液的制备：取汤剂粉末约0.1g，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)20分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0138]
3.1提取溶媒的考察
[0139]
取同一批样品各约0.1g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入50％乙醇、70％乙醇、无水乙醇、50％甲醇、70％甲醇、甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，放冷，用相应溶剂补足减失重量，混匀，滤过，即得。结果见图2。
[0140]
由图2可知，无水乙醇为溶媒时，色谱峰数量较少，其中70％甲醇提取所得色谱峰响应较高峰形最好。
[0141]
3.2超声时间的考察
[0142]
取同一批样品3份各约0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，分别超声处理(功率250w，频率40khz)10、20、30分钟后再称定重量，用70％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。结果见图3。
[0143]
由图3可知，超声时间分别为10、20、30分钟时，色谱图无明显差异。
[0144]
3.3方法学考察
[0145]
采用二极管阵列检测器，于200nm～400nm进行全波长检测，图4为不同波长下的色
谱图。结果表明，在254nm处，各化学成分响应值较高，色谱峰分布比较均匀且分离度较好。
[0146]
3.4重复性考察
[0147]
取同一批月季花标准汤剂，平行制备供试品溶液6份，按确定的色谱条件依次进样10μl进行检测。以异槲皮苷峰为参照峰，经计算共有峰的相对保留时间的rsd值为0.00％～0.36％，相对峰面积的rsd值为0.00％～2.87％，表明方法的重复性良好。结果分别见图5、表11及表12。
[0148]
表11月季花标准汤剂特征图谱方法学验证共有峰的相对保留时间比值-重复性
[0149][0150]
表12.月季花标准汤剂特征图谱方法学验证相对峰面积比值-重复性
[0151][0152]
3.6特征图谱的重复性测定
[0153]
取15批月季花标准汤剂，按供试品制备方法制备供试品溶液，按确定的色谱条件测定，建立15批月季花标准汤剂的特征图谱，见图6。月季花标准汤剂特征图谱中的6号特征峰为异槲皮苷，根据指标成分峰的选择原则(选择定量测定的成分和有中国食品药品检定研究院对照品的特征峰作为指标峰)，故选择6号峰异槲皮苷作为指标峰。以异槲皮苷峰为参照峰，分别计算15批月季花标准汤剂中7个特征峰的相对保留时间和相对峰面积，如表13、表14。
[0154]
表13. 15批月季花标准汤剂特征图谱特征峰的相对保留时间
[0155][0156]
表14. 15批月季花标准汤剂特征图谱特征峰的相对峰面积
[0157][0158]
从表中数据可以看出，15批月季花标准汤剂相对保留时间rsd在0.00％～0.29％之间，说明特征图谱各特征峰的相对保留时间值比较稳定；相对峰面积rsd在0.00％～54.19％，含量差异虽较明显，但7个特征峰仍为15批月季花标准汤剂所共有。
[0159]
供试品特征图谱中呈现7个特征峰，与参照物溶液中异槲皮苷峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，15批标准汤剂的平均相对保留时间值为：0.09(峰1)、0.62(峰2)、0.92(峰3)、0.94(峰4)、0.96(峰5)、1.00[峰6(s)]、1.18(峰7)。其中，峰1与s峰的相对保留时间相比较，相差较大，如采用相对保留时间定位效果较差，可能超出
±
10％范围，故从中去除峰1，将剩余的峰2～7定为特征峰，与参照物中异槲皮苷峰相对应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，应在规定值的
±
10％之内，相对保留时间规定值为：0.62(峰1)、0.92(峰2)、0.94(峰3)、0.96(峰4)、1.00[峰5(s)]、1.18(峰6)。
[0160]
实施例4：月季花颗粒剂的制备
[0161]
采用如图7所示的工艺流程，通过浸泡，加水煎煮，过滤，减压浓缩，喷雾干燥和干
法制粒来制备月季花颗粒剂。本实施例中，测试了在制备工艺中各步骤对于所制备的月季花颗粒剂的质量的影响。
[0162]
4.1加水量
[0163]
称取3份月季花饮片(批号sdyp200711-2，山东省菏泽市定陶县)，每份100g，一煎加水10、12、14倍，煮沸，提取1小时；二煎加水8、10、12倍，煮沸，提取1小时。分别用300目筛网固液分离，迅速冷却。以月季花标准汤剂中出膏率、含量转移率作为评价指标，确定最佳加水量，结果如下表15所示。
[0164]
表15.不同加水倍数对出膏率和指标成分转移率
[0165][0166]
从表15的结果可以看出，一煎加水10倍量、二煎加水8倍量(实验组10)时出膏率较低；一煎加水12倍量、二煎加水10倍量(实验组11)，和一煎加水14倍量、二煎加水12倍量(实验组12)时出膏率以及转移率明显提高。
[0167]
4.2煎煮时间
[0168]
称取3份月季花饮片(批号：sdyp200711-2，产地：山东省菏泽市定陶县)，每份100.0g，一煎加水12倍，煮沸，分别保持微沸1、1、1.5小时；二煎加水10倍，煮沸，分别保持微沸0.5、1、1小时，如表16所示。
[0169]
表16.两次煎煮的时间。
[0170][0171]
分别用200目筛网固液分离，迅速冷却，以月季花标准汤剂中出膏率、含量转移率作评价指标，筛选最佳煎煮时间，结果示于表17中。
[0172]
表17.不同煎煮时间条件下的出膏率和指标成分转移率
[0173][0174]
从表17的结果可以看出，一煎1小时、二煎0.5小时(实验组13)出膏率较低；而一煎1小时、二煎1小时(实验组14)和一煎1.5小时、二煎1小时(实验组15)的出膏率以及转移率明显提高。
[0175]
4.3浓缩温度
[0176]
称取同一批号sdyp200711-2(产地：山东省菏泽市定陶县)月季花饮片4份，每份100.0g，一煎加入12倍量的水，煮沸，保持微沸1小时；二煎加10倍量的水，煮沸，保持微沸1小时，分别用300目筛网进行固液分离，合并两次煎液，迅速冷却，定容至2000ml，分别在50℃、60℃、70℃、80℃水浴条件下放置2h、4h、6h、10h，以月季花标准汤剂中含量转移率为评
价指标，确定月季花提取液浓缩温度。结果见表18。
[0177]
表18.不同温度、时间下提取液中金丝桃苷和异槲皮苷的转移率。
[0178][0179]
从表18结果可以看出，金丝桃苷和异槲皮苷转移率均在标准限度范围内，浓缩温度在50℃～80℃之间转移率没有明显差异。
[0180]
4.4喷雾工艺考察
[0181]
取浓缩后浸膏2份(饮片批号：sdyp200711-2)，每份2.0l，测定理论出膏率为21.5％，分别按照进风温度170℃、180℃，出风温度85℃条件下进行喷雾，收集喷雾粉，结果干燥过程中无粘壁现象，可收集到疏松喷雾粉，表明本品在喷雾干燥过程中无需添加辅料，喷雾干燥工艺可行。
[0182]
4.5制粒过程
[0183]
本实施例通过干法制粒进行制粒。
[0184]
配方颗粒供临床配方使用，考虑到患者的用药顺应性，因此辅料用量不宜过多，故对干法制粒辅料用量进行了考察。选用糊精作为辅料。取喷雾粉及糊精，按不同比例进行混合成100g，制粒，考察糊精用量对制粒的影响，结果见表19。
[0185]
表19.辅料用量对制粒的影响
[0186][0187]
由表19可知，糊精用量在0～150g(0％～50％)时，糊精用量对颗粒收率没有影响，颗粒溶化性也符合规定，因此糊精比例在50％以下时，不影响干法制粒的效果及颗粒的溶化性，故本品最小辅料添加量为0％。
[0188]
实施例5.月季花颗粒剂的特征图谱的测定
[0189]
各取1g月季花饮片、汤剂(制备方法同实验组10～12)、膏粉(制备方法同实验组10～12)和颗粒剂(制备方法同实验组25)，加70％甲醇20ml，超声处理40分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取金丝桃苷对照品、异槲皮苷对照品，分别加甲醇制成每1ml各含0.4mg的混合溶液，作为对照品溶液。按照实施例3确定的色谱条件，测试254nm处的色谱图、特征图谱相对保留时间值和特征图谱相对峰面积值，结果见图8，表20，表21。
[0190]
表20.月季花饮片-标准汤剂-膏粉-配方颗粒特征图谱相对保留时间值
[0191]
批号t1/t6t2/t6t3/t6t4/t6t5/t6t6/t6t7/t6饮片sdyp2010260.08770.67030.92240.95120.96801.00001.1697饮片sdyp2011050.08770.66960.92190.95060.96791.00001.1699饮片sdyp2011070.08800.67130.92270.95170.96811.00001.1697
汤剂202012010.08790.67070.92250.95060.96791.00001.1696汤剂202012020.08780.67040.92240.95040.96791.00001.1696汤剂202012030.08800.67090.92260.95050.96791.00001.1695膏粉2012010.08790.67150.92300.95050.96801.00001.1694膏粉2012020.08800.67200.92320.95070.96801.00001.1692膏粉2012030.08810.67240.92320.95100.96811.00001.1691颗粒2012010.08760.63890.92180.94910.96771.00001.1700颗粒2012020.08720.63710.92170.94830.96751.00001.1708颗粒2012030.08760.63940.92220.94930.96771.00001.1702
[0192]
表21.月季花饮片-标准汤剂-膏粉-配方颗粒特征图谱相对峰面积值
[0193]
批号a1/a6a2/a6a3/a6a4/a6a5/a6a6/a6a7/a6饮片sdyp2010261.69351.72431.39683.83471.13811.00002.1707饮片sdyp2011051.70251.74831.38763.67381.16481.00002.1940饮片sdyp2011071.69591.74281.38523.89691.17961.00002.2308汤剂202012013.64281.75691.08124.61391.40711.00002.7671汤剂202012023.70291.73251.04704.89371.34381.00002.7380汤剂202012033.96001.77631.08214.87131.37131.00002.7385膏粉2012017.90861.79760.609510.51731.37121.00002.4676膏粉2012028.10951.79790.593910.56691.36991.00002.4436膏粉2012037.93731.79450.609510.45391.38351.00002.4584颗粒2012018.27651.87320.689710.96541.39311.00002.4802颗粒2012028.14461.86890.676810.68881.35001.00002.4453颗粒2012038.15401.86230.662710.77051.36131.00002.4500
[0194]
3批饮片、标准汤剂、膏粉、配方颗粒的特征图谱中相对保留时间较一致，说明7个特征峰从药材到配方颗粒的传递过程中得到保留。相对峰面积变化较大，说明物质基础从饮片
→
标汤
→
配方颗粒有转化，但7个特征峰从饮片
→
标汤
→
配方颗粒得到较好的保留。
[0195]
本发明的技术方案不限于上述具体实施例的限制，凡是根据本发明的技术方案做出的技术变形，均落入本发明的保护范围之内。