以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品及制备方法与应用

1.本发明属于食品生物技术领域，特别涉及一种以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品及制备方法与应用。


背景技术：

2.钙是人体中一种重要的矿物质元素，主要以沉积物的形式存在于骨骼和牙齿中，游离钙可参与各种生理活动的调节，钙流失将严重影响人们的日常生活。我国2013年制定的中国居民膳食矿物质推荐摄入量中，成人每日摄入钙量为800～1000mg，儿童、老人、孕妇的摄入量则需要更多。然而，据全国第三次营养调查结果表明我国不同年龄、不同职业的人群，钙摄入量普遍偏低，平均每人每天摄入钙只有400mg。无法满足需求的钙摄入直接导致了骨质疏松症较高的发病率，骨质疏松多发为原发性骨质疏松，可分为绝经后骨质疏松症(ⅰ型)、老年性骨质疏松症(ⅱ型)两种。绝经后骨质疏松症是指妇女绝经后雌激素迅速减少，骨吸收大于形成，骨量丢失加快；老年性骨质疏松症是指随着年龄增加，人体单位体积骨量低于正常，骨小梁间隙增大、骨基质减少、骨强度降低。
3.现在最常规的补钙手段是口服钙制剂，如碳酸钙、乳酸钙等制剂。常见的钙制剂可分为无机钙盐和有机钙盐，无机钙盐制剂含钙量高，但溶解性差，对肠胃有刺激；有机钙盐溶解性好，对肠胃刺激小，但含钙量低，还伴有疲劳感的副作用。虽然两种钙制剂都具有一定的补钙效果，但仍无法满足人体对钙的需求，存在吸收率低，生物利用率低，因此，开发一款补钙效果理想的、具有良好防治骨质疏松功效的产品十分必要。
4.近年来的研究显示，肠道菌群与骨骼代谢有着密不可分的关系，本专利基于通过改善肠道菌群平衡调节骨骼代谢和促进钙吸收的理论，使用肠道益生菌发酵黄芪多糖获得后生元产品(含益生菌、多糖、短链脂肪酸以及有机酸钙等多种成分)。研究发现，益生菌、多糖和短链脂肪酸等成分均有助于肠道菌群的平衡，而黄芪又是我国传统医学中防治骨质疏松的一种药食两用原料，通过发酵技术将多种有益于改善骨质疏松的组分融合形成产品，从而实现更好的补钙与防治骨质疏松的功效。


技术实现要素：

5.本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品的制备方法。
6.本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品。
7.本发明的再一目的在于提供上述以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品的应用。
8.本发明的目的通过下述技术方案实现：一种以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品的制备方法，包括如下步骤：
9.(1)制备发酵培养基：将黄芪多糖水溶液、超微碳酸钙、蔗糖和水混合均匀，调节ph值至5～7，灭菌，得到发酵培养基；
10.(2)制备菌种种子液：将活化后的益生菌接种到液体培养基中进行扩大培养，得到菌种种子液；
11.(3)液体发酵：将菌种种子液接种到发酵培养基中进行发酵，得到以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品。
12.步骤(1)中所述的黄芪多糖为用水对黄芪进行水提醇沉后得到的提取物；优选通过如下步骤得到：
13.1)将黄芪粉和水混合后，煮沸提取，过滤，得到滤液和滤渣；
14.2)滤渣加入水煮沸提取，过滤，得到滤液和滤渣；重复该步骤0次以上；
15.3)将步骤1)和步骤2)得到的滤液合并，浓缩，在得到的浓缩液中加入无水乙醇进行醇沉，过滤，得到的沉淀即为黄芪多糖。
16.步骤1)中所述的黄芪粉优选为能过100～300目筛的黄芪粉；更优选为能过200目筛的黄芪粉。
17.步骤1)中所述的提取的时间为100～150min；更优选为120min。
18.步骤2)中所述的水的用量优选按黄芪粉：水＝1g：15～25ml的配比计算；更优选按黄芪粉：水＝1g：20ml的配比计算。
19.步骤2)中所述的提取的时间为100～150min；更优选为120min。
20.步骤2)中所述的重复的次数优选为1～3次；更优选为2次。
21.步骤3)中所述的无水乙醇的用量优选按浓缩液：无水乙醇＝体积比1：3～5配比计算；更优选按浓缩液：无水乙醇＝体积比1：4配比计算。
22.步骤(1)中所述的黄芪多糖水溶液是用水溶解黄芪多糖得到，其浓度优选为40～60mg/ml；更优选为50mg/ml。
23.步骤(1)中所述的发酵培养基中各成分的浓度优选为：黄芪多糖10～15mg/ml、超微碳酸钙3mg/ml、蔗糖150～250mg/ml；优选为：黄芪多糖12.5mg/ml、超微碳酸钙3mg/ml、蔗糖200mg/ml。
24.步骤(1)中所述的调节ph值所用的调节剂优选为乳酸、柠檬酸和苹果酸中的至少一种。
25.步骤(1)中所述的ph值优选为6。
26.步骤(1)中所述的灭菌的条件优选为121℃灭菌15～30min。
27.步骤(2)中所述的益生菌优选为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和长双歧杆菌中的至少一种；更优选为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和长双歧杆菌按1：1：1配比得到。
28.步骤(2)中所述的活化是本领域技术人员的常规操作，优选为将益生菌接种于斜面培养基中进行培养。
29.所述的斜面培养基为mrs液体培养基中加入2％(w/w)琼脂，灭菌后得到。
30.所述的培养的条件优选为于32～42℃培养20～36h；更优选为于37℃培养24h。
31.步骤(2)中所述的液体培养基优选为mrs液体培养基。
32.步骤(2)中所述的扩大培养的条件优选为于32～42℃静置培养20～36h；更优选为于37℃静置培养24h。
33.步骤(3)中所述的菌种种子液的浓度优选为105～107个/ml；更优选为106个/ml。
34.所述的菌种种子液为混合菌种种子液时，是将益生菌分别活化、扩大培养后，调整浓度再混合。
35.步骤(3)中所述的菌种种子液的接种量优选为体积百分比4～8％；更优选为体积百分比6％。
36.步骤(3)中所述的发酵的条件优选为于32～42℃振荡发酵20～36h；更优选为于37℃振荡发酵24h。
37.一种以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品，通过上述制备方法得到。
38.上述以黄芪多糖为原料的复合有机酸高钙益生菌饮品在制备补钙产品中的应用。
39.本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
40.本发明使用黄芪提取液为发酵原料，在为优化的益生菌提供发酵基质的同时，益生菌的发酵也使得黄芪提取液中的活性成分以及超微碳酸钙溶解到发酵液中。黄芪中的主要活性成分黄芪多糖，能够改善肠道菌群平衡，并通过影响成骨细胞和破骨细胞，预防雌激素缺乏导致的骨量丢失。饮品中的益生菌和高浓度钙的存在，进一步有利于缓解骨质疏松作用。
附图说明
41.图1是实施例1～9的饮品的钙含量检测结果图。
42.图2是实施例1～9的饮品作用大鼠后得到的大鼠左侧股骨骨密度检测结果图。
具体实施方式
43.下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。除非特别说明，本发明所用试剂和原材料均可通过市售获得。本发明中涉及的化学试剂均为分析纯。
44.本发明中涉及的混合菌种中：嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)gdmcc 1.321，干酪乳杆菌为干酪乳杆菌(lactobacillus casei)gdmcc 1.410，长双歧杆菌为长双歧杆菌(bifidobacterium longum)gdmcc1.520，均购自广东省微生物菌种保藏中心。
45.本发明中用到的干燥黄芪片可以通过常规市售途径购买得到，实施例中涉及的干燥黄芪片购自淘宝店铺阿里健康大药房官方旗舰店。
46.超微碳酸钙购自广州东巨实验仪器公司。
47.实施例1
48.(1)制备发酵培养基：准确称取10g黄芪粉碎、过200目筛，得到黄芪粉，然后按1g黄芪粉：20ml水的比例加水煮沸提取120min，过滤重复提取2次后，将滤液浓缩至20ml(即每ml浓缩液相当于0.5g黄芪)，按浓缩液与无水乙醇＝体积比1：4的配比加入无水乙醇醇沉过滤得沉淀，沉淀加水重新溶解得到50mg/ml的黄芪多糖提取液，最后按提取液与水＝体积比1：3的配比加入水，以及加入超微碳酸钙(终浓度为3mg/ml)和蔗糖(终浓度为200mg/ml)，混合
均匀，用乳酸调节ph至6.0，121℃灭菌15min后得到发酵培养基；
49.(2)制备菌种种子液：将嗜酸乳杆菌通过斜面培养基(mrs培养基中加入2％(w/w)琼脂得到)37℃活化24h培养后，接种到mrs液体培养基中进行37℃静置扩大培养24h，调整菌液浓度为106个/ml，得到对应的菌种种子液；
50.(3)液体发酵：将步骤(2)得到的菌种种子液接种到步骤(1)得到的发酵培养基中，菌种种子液的接种体积为6％(v/v)，进行37℃单菌种振荡发酵培养24h得到散装饮品；
51.(4)罐装：将步骤(3)中得到的散装饮品降温至10℃，然后进行灌装作业，并对灌装后的饮品4℃冷藏保存，即可得到饮品成品。
52.益生菌发酵选择菌种为单菌种嗜酸乳杆菌，发酵终点后碳酸钙大部分溶解，有少量沉淀，不能满足高钙液体食品标准(钙离子含量每100毫升液体食品≥120毫克)。所得饮品用于动物实验灌胃骨质疏松模型大鼠，经大鼠左侧股骨骨密度指标结果显示饮品成品有轻微缓解骨质疏松作用。
53.实施例2基本同实施例1，区别在于菌种替换为干酪乳杆菌
54.(1)制备发酵培养基：准确称取10g黄芪粉碎、过200目筛，得到黄芪粉，然后按1g黄芪粉：20ml水的比例加水煮沸提取120min，过滤重复提取2次后，将滤液浓缩至20ml，按浓缩液与无水乙醇＝体积比1：4的配比加入无水乙醇醇沉过滤得沉淀，沉淀加水重新溶解得到50mg/ml的黄芪多糖提取液，最后按提取液与水＝体积比1：3的配比加入水，以及加入超微碳酸钙(终浓度为3mg/ml)和蔗糖(终浓度为200mg/ml)，混合均匀，用乳酸调节ph至6.0，121℃灭菌15min后得到发酵培养基；
55.(2)制备菌种种子液：将干酪乳杆菌通过斜面培养基(mrs培养基中加入2％(w/w)琼脂得到)37℃活化24h培养后，接种到mrs液体培养基中进行37℃静置扩大培养24h，调整菌液浓度为106个/ml，得到对应的菌种种子液；
56.(3)液体发酵：将步骤(2)得到的菌种种子液接种到步骤(1)得到的发酵培养基中，菌种种子液的接种体积为6％(v/v)，进行37℃单菌种振荡发酵培养24h得到散装饮品；
57.(4)罐装：将步骤(3)中得到的散装饮品降温至10℃，然后进行灌装作业，并对灌装后的饮品4℃冷藏保存，即可得到饮品成品。
58.益生菌发酵选择菌种为单菌种干酪乳杆菌，发酵终点后碳酸钙部分溶解，有少量沉淀，不能满足高钙液体食品标准(钙离子含量每100毫升液体食品≥120毫克)。所得饮品用于动物实验灌胃骨质疏松模型大鼠，经大鼠左侧股骨骨密度指标结果显示饮品成品有轻微缓解骨质疏松作用。
59.实施例3基本同实施例1，区别在于菌种替换为长双歧杆菌
60.(1)制备发酵培养基：准确称取10g黄芪粉碎、过200目筛，得到黄芪粉，然后按1g黄芪粉：20ml水的比例加水煮沸提取120min，过滤重复提取2次后，将滤液浓缩至20ml，按浓缩液与无水乙醇＝体积比1：4的配比加入无水乙醇醇沉过滤得沉淀，沉淀加水重新溶解得到50mg/ml的黄芪多糖提取液，最后按提取液与水＝体积比1：3的配比加入水，以及加入超微碳酸钙(终浓度为3mg/ml)和蔗糖(终浓度为200mg/ml)，混合均匀，用乳酸调节ph至6.0，121℃灭菌15min后得到发酵培养基；
61.(2)制备菌种种子液：将长双歧杆菌通过斜面培养基(mrs培养基中加入2％(w/w)琼脂得到)37℃活化24h培养后，接种到mrs液体培养基中进行37℃静置扩大培养24h，调整
个/ml，再按体积比1:1混合，得到混合菌种种子液；
74.(3)液体发酵：将步骤(2)得到的混合菌种种子液接种到步骤(1)得到的发酵培养基中，混合菌种种子液的接种体积为6％(v/v)，进行37℃混合双菌种振荡发酵培养24h得到散装饮品；
75.(4)罐装：将步骤(3)中得到的散装饮品降温至10℃，然后进行灌装作业，并对灌装后的饮品4℃冷藏保存，即可得到饮品成品。
76.益生菌发酵选择菌种为混合双菌种嗜酸乳杆菌：长双歧杆菌＝体积比1：1，发酵终点后碳酸钙大部分溶解，有少量沉淀，不能满足高钙液体食品标准(钙离子含量每100毫升液体食品≥120毫克)。所得饮品用于动物实验灌胃骨质疏松模型大鼠，经大鼠左侧股骨骨密度指标结果显示饮品成品有较好缓解骨质疏松作用。
77.实施例6基本同实施例1，区别在于菌种替换为干酪乳杆菌和长双歧杆菌
78.(1)制备发酵培养基：准确称取10g黄芪粉碎、过200目筛，得到黄芪粉，然后按1g黄芪粉：20ml水的比例加水煮沸提取120min，过滤重复提取2次后，将滤液浓缩至20ml，按浓缩液与无水乙醇＝体积比1：4的配比加入无水乙醇醇沉过滤得沉淀，沉淀加水重新溶解得到50mg/ml的黄芪多糖提取液，最后按提取液与水＝体积比1：3的配比加入水，以及加入超微碳酸钙(终浓度为3mg/ml)和蔗糖(终浓度为200mg/ml)，混合均匀，用乳酸调节ph至6.0，121℃灭菌15min后得到发酵培养基；
79.(2)制备菌种种子液：将干酪乳杆菌和长双歧杆菌分别通过斜面培养基(mrs培养基中加入2％(w/w)琼脂得到)37℃活化24h培养后，接种到mrs液体培养基中进行37℃静置扩大培养24h；将得到的干酪乳杆菌种子液和长双歧杆菌种子液分别调整至菌液浓度为106个/ml，再按体积比1:1混合，得到混合菌种种子液；
80.(3)液体发酵：将步骤(2)得到的混合菌种种子液接种到步骤(1)得到的发酵培养基中，混合菌种种子液的接种体积为6％(v/v)，进行37℃混合双菌种振荡发酵培养24h得到散装饮品；
81.(4)罐装：将步骤(3)中得到的散装饮品降温至10℃，然后进行灌装作业，并对灌装后的饮品4℃冷藏保存，即可得到饮品成品。
82.益生菌发酵选择菌种为混合双菌种干酪乳杆菌：长双歧杆菌＝体积比1：1，发酵终点后碳酸钙部分溶解，有少量沉淀，不能满足高钙液体食品标准(钙离子含量每100毫升液体食品≥120毫克)。所得饮品用于动物实验灌胃骨质疏松模型大鼠，经大鼠左侧股骨骨密度指标结果显示饮品成品有较好缓解骨质疏松作用。
83.实施例7基本同实施例1，区别在于菌种替换为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和长双歧杆菌
84.(1)制备发酵培养基：准确称取10g黄芪粉碎、过200目筛，得到黄芪粉，然后按1g黄芪粉：20ml水的比例加水煮沸提取120min，过滤重复提取2次后，将滤液浓缩至20ml，按浓缩液与无水乙醇＝体积比1：4的配比加入无水乙醇醇沉过滤得沉淀，沉淀加水重新溶解得到50mg/ml的黄芪多糖提取液，最后按提取液与水＝体积比1：3的配比加入水，以及加入超微碳酸钙(终浓度为3mg/ml)和蔗糖(终浓度为200mg/ml)，混合均匀，用乳酸调节ph至6.0，121℃灭菌15min后得到发酵培养基；
85.(2)制备菌种种子液：将嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和长双歧杆菌分别通过斜面培养
基(mrs培养基中加入2％(w/w)琼脂得到)37℃活化24h培养后，接种到mrs液体培养基中进行37℃静置扩大培养24h；将得到的嗜酸乳杆菌种子液、干酪乳杆菌种子液和长双歧杆菌种子液分别调整至菌液浓度为106个/ml，再按体积比1:1:1混合，得到混合菌种种子液；
86.(3)液体发酵：将步骤(2)得到的混合菌种种子液接种到步骤(1)得到的发酵培养基中，混合菌种种子液的接种体积为6％(v/v)，进行37℃混合三菌种振荡发酵培养24h得到散装饮品；
87.(4)罐装：将步骤(3)中得到的散装饮品降温至10℃，然后进行灌装作业，并对灌装后的饮品4℃冷藏保存，即可得到饮品成品。
88.混合益生菌发酵选择菌种为嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：长双歧杆菌＝1:1:1，发酵终点后碳酸钙充分溶解，满足高钙液体食品标准(钙离子含量每100毫升液体食品≥120毫克)。所得饮品用于动物实验灌胃骨质疏松模型大鼠，经大鼠左侧股骨骨密度指标结果显示饮品成品与单菌种、混合双菌种相比有明显缓解骨质疏松作用。
89.实施例8
90.(1)制备发酵培养基：准确称取10g黄芪粉碎、过100目筛，得到黄芪粉，然后按1g黄芪粉：15ml水的比例加水煮沸提取100min，过滤提取1次后，将滤液浓缩至20ml，按浓缩液与无水乙醇＝体积比1：3的配比加入无水乙醇醇沉过滤得沉淀，沉淀加水重新溶解得到40mg/ml的黄芪多糖提取液，最后按提取液与水＝体积比1：3的配比加入水，以及加入超微碳酸钙(终浓度为3mg/ml)和蔗糖(终浓度为150mg/ml)，混合均匀，用柠檬酸调节ph至5.0，121℃灭菌15min后得到发酵培养基；
91.(2)制备菌种种子液：将嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和长双歧杆菌分别通过斜面培养基(mrs培养基中加入2％(w/w)琼脂得到)32℃活化20h培养后，接种到mrs液体培养基中进行32℃静置扩大培养20h；将得到的嗜酸乳杆菌种子液、干酪乳杆菌种子液和长双歧杆菌种子液分别调整至菌液浓度为105个/ml，再按体积比1:1:1混合，得到混合菌种种子液；
92.(3)液体发酵：将步骤(2)得到的混合菌种种子液接种到步骤(1)得到的发酵培养基中，混合菌种种子液的接种体积为4％(v/v)，进行32℃混合三菌种振荡发酵培养20h得到散装饮品；
93.(4)罐装：将步骤(3)中得到的散装饮品降温至10℃，然后进行灌装作业，并对灌装后的饮品4℃冷藏保存，即可得到饮品成品。
94.混合益生菌发酵选择菌种为嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：长双歧杆菌＝1:1:1，发酵终点后碳酸钙充分溶解，满足高钙液体食品标准(钙离子含量每100毫升液体食品≥120毫克)。所得饮品用于动物实验灌胃骨质疏松模型大鼠，经大鼠左侧股骨骨密度指标结果显示饮品成品与单菌种、混合双菌种相比有明显缓解骨质疏松作用。
95.实施例9
96.(1)制备发酵培养基：准确称取10g黄芪粉碎、过300目筛，得到黄芪粉，然后按1g黄芪粉：25ml水的比例加水煮沸提取150min，过滤重复提取3次后，将滤液浓缩至20ml，按浓缩液与无水乙醇＝体积比1：5的配比加入无水乙醇醇沉过滤得沉淀，沉淀加水重新溶解得到60mg/ml的黄芪多糖提取液，最后按提取液与水＝体积比1：3的配比加入水，以及加入超微碳酸钙(终浓度为3mg/ml)和蔗糖(终浓度为250mg/ml)，混合均匀，用苹果酸调节ph至7.0，121℃灭菌30min后得到发酵培养基；
97.(2)制备菌种种子液：将嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和长双歧杆菌分别通过斜面培养基(mrs培养基中加入2％(w/w)琼脂得到)42℃活化36h培养后，接种到mrs液体培养基中进行42℃静置扩大培养36h；将得到的嗜酸乳杆菌种子液、干酪乳杆菌种子液和长双歧杆菌种子液分别调整至菌液浓度为107个/ml，再按体积比1:1:1混合，得到混合菌种种子液；
98.(3)液体发酵：将步骤(2)得到的混合菌种种子液接种到步骤(1)得到的发酵培养基中，混合菌种种子液的接种体积为8％(v/v)，进行42℃混合三菌种振荡发酵培养36h得到散装饮品；
99.(4)罐装：将步骤(3)中得到的散装饮品降温至10℃，然后进行灌装作业，并对灌装后的饮品4℃冷藏保存，即可得到饮品成品。
100.混合益生菌发酵选择菌种为嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：长双歧杆菌＝1:1:1，发酵终点后碳酸钙充分溶解，满足高钙液体食品标准(钙离子含量每100毫升液体食品≥120毫克)。所得饮品用于动物实验灌胃骨质疏松模型大鼠，经大鼠左侧股骨骨密度指标结果显示饮品成品与单菌种、混合双菌种相比有明显缓解骨质疏松作用。
101.效果实施例
102.(1)钙含量：以edta滴定法测定各实施例中钙离子浓度，从而评估各实施例产酸及发酵效果情况，结果如图1所示。
103.如图1所示，只有实施例7、8、9即使用混合益生菌发酵选择菌种为嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：长双歧杆菌＝1:1:1时，碳酸钙完全溶解，饮品中钙离子浓度达到高钙标准1.20mg/ml，所得以黄芪多糖为原料发酵复合有机酸高钙益生菌饮品发酵效果最好。
104.(2)饮品效果：将购自广东省医学实验动物中心的三月龄雌性sd大鼠分为空白组、对照组、实例饮品组。空白组每周2次肌内注射剂量为0.1mg/100g的生理盐水，同时每日1次灌胃16ml/kg的无菌水，持续8周；对照组每周2次肌内注射剂量为0.1mg/100g的地塞米松造模骨质疏松模型大鼠，同时每日1次灌胃剂量为16ml/kg的无菌水，持续8周；实例饮品组每周2次肌内注射剂量为0.1mg/100g的地塞米松造模骨质疏松模型大鼠，同时每日1次灌胃剂量为16ml/kg的饮品，持续8周。8周后戊巴比妥钠麻醉安乐死大鼠，收集大鼠左侧股骨测定骨密度评估饮品效果。
105.骨密度表示单位面积或者体积的矿物质质量，是骨强度及骨质疏松判定的黄金标准，通过测定骨质疏松模型大鼠骨密度验证各实施例效用。将股骨组织做好标记整齐排列在玻璃板上，置于美国ge lunar idxa双能x射线(dual-energy x-ray)骨密度仪下进行扫描，扫描条件为：电压100kv，电流0.188ma，剂量为10.0μgy。结果如图2所示。
106.如图2所示，实施例7、8、9与对照组骨质疏松模型大鼠骨密度有显著性差异(带有不同上标字母的值之间存在显著差异，p《0.05)，同时其骨密度水平恢复至最接近空白组，结果表明实施例7、8、9即使用混合益生菌发酵选择菌种为嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：长双歧杆菌＝1:1:1时，所得以黄芪多糖为原料发酵复合有机酸高钙益生菌饮品干预骨质疏松模型大鼠效果最好，具有良好的抗骨质疏松作用。
107.上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。