白头翁皂苷B4在制备预防、缓解或治疗肌少症的药物或保健食品中的应用的制作方法

白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗肌少症的药物或保健食品中的应用
技术领域
1.本发明涉及白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗肌少症的药物或保健食品中的应用，属于食品医药技术领域。


背景技术：

2.肌少症，又称肌肉衰减综合征，是一种随着年龄增加，引起的骨骼肌质量下降、力量和功能减退的老年综合征，又称为肌少症。其病变的特点是广泛性的全身骨骼肌质量及功能的减退，合并为体能下降、行动障碍，进而影响生活质量，增加跌倒、入院、死亡等风险，严重危害老年人健康。伴随着全球老龄化的日益加剧，肌少症已极大的影响着老年人的生活质量，为社会造成严重的经济负担，已经成为日益严重的社会问题。目前，临床除运动和营养补充外，尚无有效的治疗方法。因此，迫切需要活性更强同时更加安全的防治肌少症及衰老相关并发症的药物或保健食品，以提高老年人的生活质量和预期寿命。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供一种白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐的新应用，用于制备预防、缓解或治疗肌少症的药物或保健食品。
4.本发明的第二个目的在于提供一种白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗骨骼肌功能下降的药物或保健食品中的应用。
5.本发明的第三个目的在于提供一种白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗肌肉疾病的药物或保健食品中的应用。
6.本发明的第四个目的在于提供一种白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐在制备提高肌肉力量、提高肌肉耐力、提高肌肉质量或增大肌肉纤维体积的药物或保健食品中的应用。
7.为了实现上述目的，本发明的白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗肌少症的药物或保健食品中的应用所采用的技术方案为：白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗肌少症的药物或保健食品中的应用。
8.白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐具有预防、缓解或治疗肌少症的作用，可以用于制备预防、缓解或治疗肌少症的药物或保健食品。
9.白头翁皂苷b4为从毛茛科多年生草本植物白头翁pulsatilla chinensis (bge.) regel的干燥根中分离得到的五环三萜类皂苷，分子式为c
59h96o26
，分子量为1221.39，属于羽扇豆烷型的五环三萜皂苷。白头翁皂苷b4属于中医药，将白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐用于制备预防、缓解或治疗肌少症的药物或保健食品，具有作用温和持久，副作用小的优点。
10.本发明的白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗骨骼肌功能下降的药物或保健食品中的应用所采用的技术方案为：
白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗骨骼肌功能下降的药物或保健食品中的应用。
11.白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐具有预防、缓解或治疗骨骼肌功能下降的作用，可以用于制备预防、缓解或治疗骨骼肌功能下降的药物或保健食品。白头翁皂苷b4属于中医药，将白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐用于制备预防、缓解或治疗骨骼肌功能下降的药物或保健食品，具有作用温和持久，副作用小的优点。
12.优选地，所述骨骼肌功能下降由衰老引起。
13.本发明的白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗肌肉疾病的药物或保健食品中的应用所采用的技术方案为：白头翁皂苷b4在制备预防、缓解或治疗肌肉疾病的药物或保健食品中的应用，所述肌肉疾病为肌肉质量下降、肌肉力量下降、肌肉耐力下降、肌肉纤维体积减小中的一种或任意组合。
14.白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐具有预防、缓解或治疗肌肉质量下降、肌肉力量下降、肌肉耐力下降、肌肉纤维体积减小等肌肉疾病的作用，可以用于制备预防、缓解或治疗肌肉质量下降、肌肉力量下降、肌肉耐力下降、肌肉纤维体积减小等肌肉疾病的药物或保健食品。白头翁皂苷b4属于中医药，将白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐用于制备预防、缓解或治疗肌肉质量下降、肌肉力量下降、肌肉耐力下降、肌肉纤维体积减小等肌肉疾病的药物或保健食品，具有作用温和持久，副作用小的优点。
15.优选地，所述肌肉疾病由衰老引起。
16.优选地，所述肌肉为骨骼肌。优选地，所述骨骼肌为腓肠肌。
17.本发明的白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐在制备提高肌肉力量、提高肌肉耐力、提高肌肉质量或增大肌肉纤维体积的药物或保健食品中的应用所采用的技术方案为：白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐在制备提高肌肉力量、提高肌肉耐力、提高肌肉质量或增大肌肉纤维体积的药物或保健食品中的应用。
18.白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐具有提高肌肉力量、提高肌肉耐力、提高肌肉质量或增大肌肉纤维体积的作用，可以用于制备提高肌肉力量、提高肌肉耐力、提高肌肉质量或增大肌肉纤维体积的药物或保健食品。白头翁皂苷b4属于中医药，将白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐用于制备提高肌肉力量、提高肌肉耐力、提高肌肉质量或增大肌肉纤维体积的药物或保健食品，具有作用温和持久，副作用小的优点。
19.优选地，所述增大肌肉纤维体积通过增大肌肉纤维直径来实现。
20.优选地，白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐在制备提高肌肉力量、提高肌肉耐力、提高肌肉质量或增大肌肉纤维体积的药物或保健食品中的应用中，所述肌肉为骨骼肌。
21.优选地，白头翁皂苷b4或其药学上可接受的盐在制备提高肌肉力量、提高肌肉耐力、提高肌肉质量或增大肌肉纤维体积的药物或保健食品中的应用中，所述所述骨骼肌为腓肠肌。
附图说明
22.图1为实验实施例1中各组小鼠的体重变化示意图；图2为实验实施例2中各组小鼠抓力测定实验结果的示意图；
图3为实验实施例3中各组小鼠的力竭游泳时间的示意图；图4为实验实施例5中各组小鼠的腓肠肌肌肉纤维形态的示意图；图5为实验实施例5中各组小鼠的腓肠肌肌肉纤维直径的示意图。
具体实施方式
23.下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行进一步说明。
24.一、实验材料实验动物：c57bl/6n 小鼠，spf级，雄性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于中国中医科学院中药研究所动物房。动物房温度为22
±
1℃，湿度为40~70%，12小时昼夜周期，自由进食饮水。
25.实验试剂：peg400的生理盐水溶液、浓度为10mg/l的白头翁皂苷b4溶液和浓度为20mg/l的白头翁皂苷b4溶液。
26.peg400的生理盐水溶液由peg400和生理盐水混合而成，peg400的生理盐水溶液中peg400的质量分数为10%。
27.白头翁皂苷b4溶液的制备方法如下：将白头翁皂苷b4和peg400的生理盐水溶液混合分别配制成白头翁皂苷b4的浓度为10mg/l和20mg/l的溶液。
28.二、实验分组和实验方法选取雄性3月龄c57bl/6n小鼠6只作为年轻对照组（young），雄性15月龄小鼠18只，随机分为3组，分别为：老年对照组（old）6只，低剂量给药组（low）6只、高剂量给药组（high）6只。
29.年轻对照组（young）和老年对照组（old）通过腹腔注射给予0.3ml的peg400的生理盐水溶液，每天给药一次，连续给药21天。
30.低剂量给药组（low）通过腹腔注射给于0.3ml浓度为10mg/l的白头翁皂苷b4溶液，高剂量组通过腹腔注射给于0.3ml浓度为20mg/l的白头翁皂苷b4溶液，每天给药一次，连续给药21天。
31.实验实施例1：关于白头翁皂苷b4与体重的关系。
32.1、实验步骤体重是反应动物生长或衰老以及药物毒性情况的重要指标，于每日给药之前记录各组小鼠的体重变化。
33.2、实验结果实验得到的各组小鼠的体重变化如图1所示。由图1可知，年轻对照组、老年对照组、低剂量给药组和高剂量给药组的小鼠的体重无统计学差异，说明白头翁皂苷b4安全无毒，并不会引起体重变化。
34.实验实施例2：关于白头翁皂苷b4与肌肉力量的关系。
35.1、实验步骤于每隔一日给药30分钟后，采用动物抓力仪通过抓力测定实验检测各组小鼠的抓力。动物抓力仪由江苏赛昂斯生物科技有限公司提供，产品型号为sans，sa-417。抓力测定实验每天重复测量3次，连续记录20天。
36.2、实验结果
抓力测定实验的结果如图2所示。结果表明，年轻对照组与老年对照组的抓力测定实验结果有统计学差异，低剂量给药组、高剂量给药组和老年对照组的抓力测定实验结果有统计学差异；与年轻对照组相比，老年对照组的小鼠均出现肌肉无力、抓力明显下降现象。而低剂量给药组和高剂量给药组小鼠的抓力要高于老年对照组小鼠的抓力。
37.因此，白头翁皂苷b4具有提高肌肉功能和肌肉力量、预防、缓解或治疗衰老引起的肌肉功能下降和肌肉力量下降的作用，可以用于制备提高肌肉功能和肌肉力量、预防、缓解或治疗肌肉功能下降和/或肌肉力量下降的药物或保健食品。
38.实验实施例3：关于白头翁皂苷b4与肌肉耐力的关系。
39.1、实验步骤通过小鼠力竭游泳实验测定小鼠的肌肉耐力。实验方法如下：在各组小鼠最后一次给药（第21天）30分钟后，平行测定各组小鼠的力竭游泳时间，力竭游泳时间的开始时间是小鼠入水游泳后开始的时间，结束时间是小鼠力竭头部没入水下十秒对应的时间，结束时间和开始时间的差值即为力竭游泳时长。实验过程中水温保持在20~22℃。
40.2、实验结果力竭游泳实验的结果如图3所示。结果表明，年轻对照组与老年对照组的力竭游泳实验结果有统计学差异，低剂量给药组、高剂量给药组和老年对照组的力竭游泳实验结果有统计学差异；与年轻对照组相比，老年对照组小鼠的力竭游泳时长明显缩短，而低剂量给药组和高剂量给药组小鼠的力竭游泳时长要明显高于老年对照组小鼠的力竭游泳时长，并且高剂量给药组小鼠的力竭游泳时长要大于低剂量给药组小鼠的力竭游泳时长。
41.因此，白头翁皂苷b4具有增强肌肉耐力、预防、缓解或治疗衰老引起的肌肉耐力下降的功能，可以用于制备增强肌肉耐力、预防、缓解或治疗肌肉耐力下降的药物或保健食品。
42.实验实施例4：关于白头翁皂苷b4与肌肉质量与体重之比的关系。
43.1、实验步骤在对各组小鼠连续给药21天后（力竭游泳实验后），称重并处死小鼠，然后精确分离小鼠各部位肌肉，使用预冷的生理盐水将各部位肌肉冲洗干净，再吸除残余水分，取腓肠肌，精确称重并记录，然后计算腓肠肌质量与体重之比。腓肠肌质量与体重之比的计算方法如下：腓肠肌质量与体重之比=小鼠腓肠肌重量g/小鼠体重g
×
100%。
44.2、实验结果各组小鼠的腓肠肌重量和腓肠肌质量与体重之比如表1所示。
45.表1 小鼠腓肠肌湿重及腓肠肌质量与体重之比组别腓肠肌质量(g)体重(g)腓肠肌指数%young0.283
±
0.02430.8
±
0.60.918
±
0.069old0.216
±
0.02636.1
±
0.8
##
0.600
±
0.083
##
low0.257
±
0.03036.3
±
4.20.708
±
0.102
*
high0.264
±
0.03434.5
±
0.70.764
±
0.068
&
注：
##
与young组差异显著，*和
&
与old模型组差异显著。
46.结果表明，与年轻对照组相比，老年对照组小鼠的肌肉湿重无显著性变化，但是老年对照组小鼠的腓肠肌质量与体重之比明显减小，这是由于衰老引起的肌肉质量流失。与
老年对照组小鼠相比，低剂量给药组和高剂量给药组小鼠的腓肠肌质量与体重之比较大，并且高剂量给药组小鼠的腓肠肌质量与体重之比要大于低剂量给药组小鼠的腓肠肌质量与体重之比。
47.因此，白头翁皂苷b4具有提高肌肉质量、预防、缓解或治疗衰老引起的肌肉质量下降的功能，可以用于制备提高肌肉质量、预防、缓解或治疗肌肉质量下降的药物或保健食品。
48.实验实施例5：关于白头翁皂苷b4与肌肉纤维形态及肌肉纤维直径的关系。
49.1、实验步骤在对各组小鼠连续给药21天后，称重并处死小鼠，然后精确分离小鼠各部位肌肉，使用预冷的生理盐水将各部位肌肉冲洗干净，再吸除残余水分，取腓肠肌。然后将腓肠肌放入质量分数为4%的多聚甲醛溶液（生产厂家为碧云天生物技术有限公司，产品型号为p0099）中固定，然后进行石蜡包埋，再进行he染色。最后通过显微镜 (olympus bx51，东京，日本)观察并随机选取5个视野采集图像，用cellsens (olympus，东京，日本)显微图像软件分别对腓肠肌肌细胞，肌肉纤维束进行观察及测量分析。
50.2、实验结果各组小鼠的腓肠肌肉纤维形态和腓肠肌肌肉纤维直径如图4和图5所示。结果表明，年轻对照组与老年对照组的腓肠肌肌肉纤维直径有统计学差异，低剂量给药组、高剂量给药组和老年对照组的腓肠肌肌肉纤维直径有统计学差异；与年轻对照组相比，老年对照组小鼠的腓肠肌肌肉纤维松散，说明与青年组相比，老年组小鼠存在一定的肌肉萎缩现象，造成肌肉纤维体积较小，进而表现为肌肉纤维松散，并且腓肠肌肌肉纤维直径减小，纤维束的截面积减少。与老年对照组小鼠相比，低剂量给药组和高剂量给药组小鼠的腓肠肌肌肉纤维形态饱满，说明给药后小鼠的腓肠肌肌肉纤维体积增大，并且腓肠肌肌肉纤维直径较大，而且高剂量给药组小鼠的腓肠肌肉纤维直径要大于低剂量给药组小鼠的腓肠肌肌肉纤维直径。
51.因此，白头翁皂苷b4具有提高腓肠肌肉纤维饱满度、增大肌肉纤维体积和增大腓肠肌肌肉纤维直径、预防、缓解或治疗衰老引起的肌肉纤维松散、肌肉纤维体积减小和肌肉纤维直径减小的功能，可以用于制备提高肌肉纤维饱满度和增大肌肉纤维直径、预防、缓解或治疗肌肉纤维松散、肌肉纤维直径减小的药物或保健食品。
52.药效学试验表明，相较于年轻组，衰老组小鼠的肌肉质量及功能显著下降，白头翁皂苷b4给药治疗后能改善衰老引起的小鼠肌肉质量流失，提高腓肠肌指数，并增强衰老小鼠的肌肉功能，显著提升小鼠的肌肉抓力及力竭游泳时间，改善衰老相关疾病肌少症。因此，白头翁皂苷b4具有改善衰老导致的肌肉质量及功能的下降的功能，且表现出一定的浓度依赖性。
53.综上所述，通过自然衰老的小鼠模型证明：白头翁皂苷b4在不影响小鼠体重的情况下，可以显著增加老年组小鼠腓肠肌指数、提高肌肉功能、显著改善衰老引起的肌少症，且无明显毒副作用，继而说明白头翁皂苷b4可以应用于防治肌少症及衰老引起的相关并发症的药物或者保健品，进一步扩大了白头翁皂苷b4的应用范围。