一种酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物及其制备方法、应用

1.本发明属于新化合物制备技术领域，具体涉及一种酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物及其制备方法、应用。


背景技术：

2.高尿酸血症是一种由于体内嘌呤类物质代谢紊乱而引发的代谢类疾病。近年来，高尿酸血症患者人数不断上升，已成为第二大代谢类疾病。长期高尿酸血症会导致许多并发症，尤其会造成肾脏炎症，严重时会引发肾纤维化，严重损害肾脏功能。黄嘌呤氧化酶（xod）在体内尿酸代谢中有重要作用，是调控尿酸生成的关键酶。因此，当前的降尿酸药物多数以xod作为靶点，如：别嘌醇、非布索坦等。然而，这些xod抑制剂大多都有明显的毒副作用，会造成肾损伤。因此，新型xod抑制剂除了要具有较高的xod抑制活性外，也应该考虑减少肾脏损伤。
[0003] 近年来，在医药领域中天然产物被越来越多的应用，发现有些天然产物具有降尿酸活性。栀子是茜草科植物栀子（gardenia jasminoides elli）干燥成熟的果实，属于药食两用资源，其中京尼平苷是栀子中的主要活性成分。京尼平苷具有抗炎、降尿酸、降血糖、降血压等活性，但由于其本身的活性较低，无法直接应用于临床。如何进一步提高京尼平苷的活性是目前研究中的重要课题。


技术实现要素：

[0004]
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种具有高活性的酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物。
[0005]
本发明还提供了一种上述酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物的制备方法。
[0006]
本发明另一目的是提供了上述酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物在制备降尿酸药物中的应用。
[0007]
本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：本发明提供了一种酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物，分子结构式为：
所述r为、、、、、、、、、、、、、。
[0008]
本发明还提供了一种酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物的制备方法，包括以下步骤：（1）将京尼平苷衍生物2a加入dmf，搅拌溶液，加入edci，加入hobt和dipea，室温搅拌2 h；（2）搅拌结束后，加入 rnh
2 (30.0 mg，0.37 mmol)和dmap (63.0 mg，0.51 mmol)，室温连续搅拌8-10h；（3）反应结束后，添加到冰水，用二氯甲烷提取；合并后的有机溶剂用1 m水稀释盐酸和饱和食盐水洗涤；有机相在无水无水na2so4干燥过夜，减压蒸馏，并通过柱层析法纯化（洗脱剂v/v：石油醚/乙酸乙酯=10/1-1/1），得到淡黄色粉末产物。
[0009]
进一步的，步骤（1）中，所述京尼平苷衍生物2a在dmf中的浓度为0.11-0.12mmol/ml；所述京尼平苷衍生物2a和edci的摩尔比为0.34：0.41；所述hobt和edci的摩尔比为1：1；所述dipea和hobt的摩尔比为1.02：0.41。
[0010]
进一步的，步骤（2）中，所述rnh2和京尼平苷衍生物2a的摩尔比为0.37：0.34；所述dmap和氨基化合物的摩尔比为0.51：0.37。
[0011]
上述rnh2具体为1-氨基吡咯、1-氨基吲唑、1-氨基恶唑、1-氨基联苯、1-氨基吲哚、1-氨基丙腈、1-氨基4-溴萘、对氨基苯甲酸、3-氟苯胺、4-氨基苯甲腈、4-氨甲基吡啶、5-氨基四氮唑、4-氨基异喹啉、4-氨基马尿酸。
[0012]
进一步的，所述京尼平苷衍生物2a的结构式为：
上述京尼平苷衍生物2a具体的制备方法为：（1）将京尼平苷0.257 mmol、4 %的naoh溶液10 ml依次加入到圆底烧瓶中，在65 ℃下回流搅拌反应，tlc追踪反应至原料点消失，反应结束后，使用1m的盐酸中和至ph=7，精制，将得到的反应液减压浓缩至干，过柱，得到白色粉末京尼平苷酸1a；（2）将京尼平苷衍生物1a0.026 mmol、三乙胺5 ml依次加入到圆底烧瓶中，冰水浴冷却，搅拌下缓慢滴加乙酸酐5 ml，滴加完毕后撤去冰水浴，室温下反应，tlc追踪至原料点消失，反应结束后，将反应液用饱和nahco3溶液20 ml 中和溶液至ph=7.0、去离子水洗涤，合并有机相，无水na2so4干燥过夜，抽滤除去na2so4后减压蒸馏，过柱，得到淡黄色粉末五乙酰京尼平苷酸2a。
[0013]
本发明所使用的原料京尼平苷酸1a的结构式为：进一步的，步骤（3）中，所述柱层析法纯化所用的洗脱剂是由石油醚/乙酸乙酯=10/1-1/1组成。
[0014]
本发明还提供了一种利用上述制备方法制备得到的酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物在制备降尿酸药物中的应用，作为一种新的xod抑制剂。
[0015]
酰胺类五乙酰京尼平苷衍生物是首先将京尼平苷中环烯醚萜c-4位的脂基进行水解得到京尼平苷酸，然后将糖上的2’、3’、4’、6’和11位的5个羟基进行乙酰化得到五乙酰京尼平苷酸（2a），最后与rnh2进行反应得到五乙酰京尼平苷衍生物，具体合成路线如下：(i) 4% naoh, 60℃; (ii) acetic anhydride, et3n, 0℃ to r.t.(iii) bop reagent, et3n, dmf-ch2cl2, hobt, dmap, dipea, edci, 0℃ to r.t.本发明的有益效果为：（1）本发明制备的京尼平苷衍生物具有显著的xod抑制活性和改善肾脏损害活性，能够有效降低肾脏中尿酸的积累。
[0016]
（2）本发明制备的京尼平苷衍生物通过调节tlr4/iκbα/nf-κb信号通路的表达来降低炎症反应，从而降低炎症因子的水平；还可以通过抑制炎症因子tgf-β的表达来减少高尿酸血症小鼠的肾纤维化。
附图说明
[0017]
图1为各组小鼠肾组织病理切片图。
[0018]
图2为各组小鼠肾组织马松染色图。
[0019]
图3为cck-8测定细胞活力。
[0020]
图4为京尼平苷衍生物6c对炎性因子水平的影响图。
[0021]
图5为偏振光下小鼠肾脏尿酸盐沉积情况对比图。
[0022]
图6为化合物1a 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0023]
图7为化合物2a 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0024]
图8为化合物6a 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0025]
图9为化合物6b 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0026]
图10为化合物6c 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0027]
图11为化合物6d 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0028]
图12为化合物6e1h nmr和
13
c nmr谱图。
[0029]
图13为化合物6f 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0030]
图14为化合物6g 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0031]
图15为化合物6h 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0032]
图16为化合物6i 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0033]
图17为化合物6j 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0034]
图18为化合物6k 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0035]
图19为化合物6l 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0036]
图20为化合物6m 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
[0037]
图21为化合物6n 1
h nmr和
13
c nmr谱图。
具体实施方式
[0038]
下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的解释和说明。
[0039]
实施例1 京尼平苷先导化合物-京尼平苷酸的合成（1）京尼平苷酸（1a）的合成将京尼平苷（100.0 mg，0.257 mmol）、4 %的naoh溶液10 ml依次加入到圆底烧瓶中，在65 ℃下回流搅拌反应，tlc追踪反应至原料点消失（展开剂v/v：二氯甲烷/甲醇=5/1）。反应结束后，使用1m的盐酸中和至ph=7，精制，将得到的反应液减压浓缩至干，过柱（洗脱剂v/v：二氯甲烷/甲醇=8/1-1/1），得到白色粉末61.5 mg，mp.250.9-251.6℃，收率91.3 %，经过nmr、hr-ms等分析确定为京尼平苷酸（1a）。谱图如图6所示。
[0040]1h nmr (400 mhz, cd3od) δ 7.19 (d, j = 11.5 hz, 1h), 5.01 (dd, j = 9.1, 5.4 hz, 1h), 4.64 (dd, j = 12.4, 8.4 hz, 1h), 4.31
ꢀ–ꢀ
4.08 (m, 1h), 3.83
ꢀ–ꢀ
3.78 (m, 1h), 3.71
ꢀ–ꢀ
3.65 (m, 1h), 3.58 (d, j = 3.7 hz, 1h), 3.33 (t, j = 6.4 hz, 2h), 3.26 (dt, j = 3.0, 1.5 hz, 1h), 2.78 (dd, j = 16.2, 7.8 hz, 1h), 2.70
ꢀ–ꢀ
2.64 (m, 1h), 1.99 (dd, j = 17.1, 8.8 hz, 5h). 13
c nmr (100 mhz, cd3od) δ 174.98, 147.47, 143.98, 127.14, 117.50, 99.75, 96.70, 78.10, 77.48, 74.20, 71.54, 61.94, 60.11, 46.03, 38.75, 36.29. hr-ms (esi): calcd for c
16h22o10
m/z: 374.1213, found: 397.1045 [m na]

.实施例2 京尼平苷酸衍生物五乙酰京尼平苷酸（2a）的合成（1）五乙酰京尼平苷酸（2a）的合成将京尼平苷衍生物1a（100.0 mg，0.026 mmol）、三乙胺5 ml依次加入到圆底烧瓶中，冰水浴冷却，搅拌下缓慢滴加乙酸酐5 ml，滴加完毕后撤去冰水浴，室温下反应，tlc追踪至原料点消失（展开剂v/v：石油醚/乙酸乙酯=1/1，甲酸1滴）。反应结束后，将反应液用饱和nahco3溶液(20 ml )中和溶液至ph=7.0、去离子水(20 ml
ꢀ×ꢀ
3)洗涤，合并有机相，无水na2so4干燥过夜，抽滤除去na2so4后减压蒸馏，过柱（洗脱剂v/v：石油醚/乙酸乙酯=8/1-1/1），得到淡黄色粉末88.2 mg，mp.125.7-126.5℃，收率为71.2 %，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷酸（2a）。谱图如图7所示。
[0041]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.32 (s, 1h), 5.85 (s, 2h), 5.25 (t, j = 9.5 hz, 2h), 5.11 (d, j = 2.3 hz, 1h), 5.01 (d, j = 1.4 hz, 1h), 4.91 (s, 1h), 4.70 (dd, j = 13.9 hz, 1h), 4.32 (s, 1h), 4.18 (dd, j = 2.4 hz, 1h), 2.88 (dd, 1h), 2.69 (d, j = 6.2 hz, 2h),2.54 (d, 1h), 2.09 (d, j = 14.0 hz 1h), 2.02 (m, 15h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3)δ 170.90, 170.79, 170.29, 170.15, 169.50, 169.33, 167.80, 163.36, 136.84, 132.20, 131.26, 130.98, 128.80, 96.82, 96.13, 72.45, 71.97, 70.67, 68.20, 65.60, 61.94, 61.59, 46.29, 39.97, 38.43, 36.91, 33.68, 31.77, 30.49, 29.64, 20.84, 20.64, 20.55, 20.42, 19.13. hr-ms (esi): calcd for c
26h32o15
m/z: 584.1741, found: 607.1642 [m na]

.实施例3五乙酰京尼平苷-1
’’‑
吡咯酰胺（6a）的合成五乙酰京尼平苷-1
’’‑
吡咯酰胺（6a）结构式：
合成方法如下：（1）搅拌溶液中的京尼平苷衍生物2a（200.0 mg，0.34 mmol）dmf（3 ml），edci（78.0 mg，0.41 mmol），加入hobt（55.0 mg，0.41 mmol)和dipea (0.2 ml，1.02 mmol)，室温搅拌2 h；（2）搅拌结束后再加入1-氨基吡咯(30.0 mg，0.37 mmol)和dmap (63.0 mg，0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜；（3）在反应结束后,所采用的解决方案是添加到冰水(30 ml),用二氯甲烷提取(20 ml
ꢀ×ꢀ
3)。合并后的有机溶剂用1 m水稀释盐酸(20 ml
ꢀ×ꢀ
3)和饱和食盐水(20 ml
ꢀ×ꢀ
3)洗涤。有机相在无水无水na2so4干燥过夜，减压蒸馏，并通过柱层析法纯化（洗脱剂v/v：石油醚/乙酸乙酯=10/1-1/1），得到淡黄色粉末59.9 mg，mp.127.6-128.3℃，收率26.8 %，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-1
’’‑
吡咯酰胺（6a）。谱图如图8所示。
[0042]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.64 (dt, j = 7.1, 3.6 hz, 1h), 7.48
ꢀ–ꢀ
7.44 (m, 1h), 6.55 (d, j = 2.2 hz, 2h), 6.09
ꢀ–ꢀ
6.07 (m, 2h), 5.77 (s, 1h), 5.20
ꢀ–ꢀ
5.14 (m, 1h), 5.07 (d, j = 5.7 hz, 1h), 5.04 (d, j = 9.6 hz, 1h), 4.94 (dd, j = 9.6, 8.1 hz, 1h), 4.83
ꢀ–ꢀ
4.80 (m, 1h), 4.63 (d, j = 6.3 hz, 2h), 4.23 (t, j = 6.7 hz, 2h), 2.95 (d, j = 7.3 hz, 2h), 2.12 (d, j = 7.7 hz, 1h), 2.03
ꢀ–ꢀ
1.95 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 170.90, 170.79, 170.29, 170.15, 169.50, 168.42, 166.77, 147.27, 120.74, 120.61, 120.44, 111.74, 106.64, 95.77, 94.55, 76.25, 76.04, 75.83, 64.58, 60.69, 44.34, 29.50, 28.67, 20.60, 20.53, 20.50, 19.85. hr-ms (esi): calcd for c
30h36
n2o
14
s m/z: 648.2167, found: 671.2042 [m na]

.实施例4五乙酰京尼平苷-1
’’‑
吲唑酰胺（6b）的合成五乙酰京尼平苷-1
’’‑
吲唑酰胺（6b）的结构式如下：
合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入1-氨基吲唑(49.0 mg，0.37 mmol)和dmap (63.0 mg，0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜。
[0043]
步骤（3）得到淡黄色粉末50.27 mg，mp.129.6-131.3℃，收率21.0%，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-1
’’‑
吲唑酰胺（6b）。谱图如图9所示。
[0044]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 9.70 (s, 1h), 8.00 (dd, j = 32.5, 9.5 hz, 1h), 7.65 (s, 1h), 7.46 (d, j = 3.3 hz, 2h), 7.19 (s, 2h), 6.37 (d, j = 88.1 hz, 1h), 5.28 (d, j = 3.7 hz, 2h), 5.25 (d, j = 7.2 hz, 2h), 5.21 (s, 1h), 4.89 (dd, j = 38.4, 14.0 hz, 1h), 4.64 (d, j = 29.3 hz, 1h), 4.25 (s, 1h), 4.05 (dd, j = 14.3, 7.1 hz, 1h), 2.73
ꢀ–ꢀ
2.68 (m, 1h), 2.28 (t, j = 7.4 hz, 2h), 2.17
ꢀ–ꢀ
2.14 (m, 1h), 1.98 (s, 1h), 1.71
ꢀ–ꢀ
1.61 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 170.90, 170.79, 170.29, 170.15, 169.50, 167.75, 132.25, 130.94, 129.91, 128.83, 96.91, 77.23, 76.80, 72.37, 68.10, 61.45, 35.92, 34.17, 22.69, 20.89, 20.60, 20.53, 20.50. hr-ms (esi): calcd for c
33h37
n3o
14
s m/z: 699.2276, found: 722.5331 [m na]

.实施例5 五乙酰京尼平苷-1
’’‑
恶唑酰胺（6c）的合成五乙酰京尼平苷-1
’’‑
恶唑酰胺（6c）的结构式如下：合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入1-氨基恶唑(31.0 mg，0.37 mmol)和dmap (63.0 mg，0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜。
[0045]
（3）得到淡黄色粉末46.7 mg，mp.136.3-137.3℃，收率21.3%，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-1
’’‑
恶唑酰胺（6c）。谱图如图10所示。
[0046]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.04 (s, 1h), 7.73
ꢀ–ꢀ
7.72 (m, 1h), 7.54 (d, j = 2.4 hz, 1h), 7.27 (s, 1h), 5.88 (s, 1h), 5.84 (s, 1h), 5.46
ꢀ–ꢀ
5.42 (m, 1h), 5.35 (t, j = 4.8 hz, 1h), 5.03
ꢀ–ꢀ
5.01 (m, 1h), 4.86 (d, j = 8.1 hz, 1h), 4.70
ꢀ–ꢀ
4.68 (m, 1h), 4.32 (s, 1h), 4.09 (s, 1h), 2.93
ꢀ–ꢀ
2.88 (m, 1h), 2.81 (d, j = 7.8 hz, 1h), 2.36
ꢀ–ꢀ
2.32 (m, 1h), 2.14 (d, j = 4.5 hz, 1h), 2.10
ꢀ–ꢀ
2.03 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 170.90, 170.79, 170.29, 170.15,170.67, 167.75, 132.25, 130.94, 129.91, 128.83, 96.91, 77.23, 76.80, 72.37, 68.10, 61.45, 35.92, 34.17, 22.69, 20.89, 20.60, 20.53, 20.50. hr-ms (esi): calcd for c
29h34
n2o
14
m/z: 650.1959, found: 673.3450 [m na]

.实施例6 五乙酰京尼平苷-1
’’‑
联苯酰胺（6d）的合成五乙酰京尼平苷-1
’’‑
联苯酰胺（6d）的结构式如下：合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入1-氨基联苯(62.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜。
[0047]
（3）得到淡黄色粉末70.5 mg，mp.147.6-148.3℃，收率28.2%，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-1
’’‑
联苯酰胺（6d）。谱图如图11所示。
[0048]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.34 (d, j = 8.2 hz, 1h), 8.03 (d, j = 7.1 hz, 1h), 7.43 (dd, j = 18.6, 11.0 hz, 3h), 7.36 (d, j = 7.4 hz, 1h), 7.33
ꢀ–ꢀ
7.30 (m, 2h), 7.23 (s, 1h), 7.18
ꢀ–ꢀ
7.15 (m, 1h), 7.11 (dd, j = 10.6, 4.2 hz, 1h), 5.59 (s, 1h), 5.26 (d, j = 18.5 hz, 1h), 5.15 (t, j = 9.5 hz, 1h), 5.00 (d, j = 5.2 hz, 1h), 4.92 (dd, j = 9.6, 8.1 hz, 1h), 4.77 (d, j = 8.1 hz, 1h), 4.62 (d, j = 3.2 hz, 1h), 4.18 (dd, j = 12.4, 4.4 hz, 1h), 4.08 (dd, j = 12.3, 2.5 hz, 1h), 2.75 (dd, j = 13.5, 8.1 hz, 1h), 2.36
ꢀ–ꢀ
2.30 (m, 1h), 2.27 (d, j = 7.6 hz, 1h), 2.16 (dd, j = 13.7, 6.3 hz, 1h), 2.03
ꢀ–ꢀ
1.93 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 169.61, 169.56, 169.15, 168.38, 168.20, 163.23, 147.05, 137.08, 135.97, 133.92, 131.11, 129.09, 128.80, 128.33, 128.28, 127.57, 127.21, 122.95, 119.78, 113.71, 95.65, 94.06, 71.39, 71.06, 69.58, 67.19, 60.55, 45.73, 36.70, 32.28, 21.67, 19.81, 19.67, 19.57, 19.48. hr-ms (esi): calcd for c
33h41
no
14
m/z: 735.2527, found: 758.3514 [m na]

.实施例7五乙酰京尼平苷-1
’‑
吲哚酰胺（6e）的合成
五乙酰京尼平苷-1
’‑
吲哚酰胺（6e）的结构式如下：合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入1-氨基吲哚(49.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜；（3）得到淡黄色粉末68.2 mg，mp.157.6-158.3℃，收率28.1%，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-1
’’‑
吲哚酰胺（6e）。谱图如图12所示。
[0049]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.31 (s, 1h), 7.68 (dd, j = 6.9, 1.4 hz, 1h), 7.39 (s, 1h), 7.30 (s, 1h), 7.19 (s, 1h), 7.15
ꢀ–ꢀ
7.09 (m, 2h), 6.44 (s, 1h), 5.79 (s, 1h), 5.29
ꢀ–ꢀ
5.26 (m, 1h), 5.23 (s, 1h), 5.19 (d, j = 4.3 hz, 1h), 5.05 (t, j = 9.7 hz, 1h), 4.96 (dd, j = 9.6, 8.1 hz, 1h), 4.66 (d, j = 5.6 hz, 2h), 4.24
ꢀ–ꢀ
4.19 (m, 1h), 4.11 (dd, j = 12.4, 2.3 hz, 1h), 3.00 (d, j = 15.4 hz, 1h), 2.85 (dd, j = 16.3, 7.6 hz, 1h), 2.32 (d, j = 16.3 hz, 1h), 2.16 (d, j = 7.5 hz, 1h), 2.08
ꢀ–ꢀ
1.92 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 170.90, 170.79, 170.29, 170.15,170.67,167.80, 132.30, 130.95, 130.19, 130.13, 130.04, 129.74, 128.85, 115.08, 110.22, 107.28, 107.10, 77.23, 65.62, 33.70, 31.94, 30.57, 29.71. hr-ms (esi): calcd for c
34h38
n2o
14
m/z: 698.2323, found: 711.3537 [m na]

.实施例8五乙酰京尼平苷-1
’’‑
丙腈酰胺（6f）的合成五乙酰京尼平苷-1
’’‑
丙腈酰胺（6f）的结构式如下：合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入1-氨基丙腈(25.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，
室温连续搅拌过夜；（3）得到淡黄色粉末32.6 mg，mp.121.6-122.3℃，收率15.0%，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-1
’’‑
丙腈酰胺（6f）。谱图如图13所示。
[0050]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.06
ꢀ–ꢀ
8.02 (m, 1h), 7.45 (s, 1h), 5.28 (dd, j = 9.8, 5.0 hz, 1h), 4.92 (dd, j = 25.6, 9.4 hz, 1h), 4.81 (dd, j = 8.0, 6.1 hz, 1h), 4.62 (s, 1h), 4.38
ꢀ–ꢀ
4.34 (m, 1h), 4.02 (d, j = 6.7 hz, 1h), 3.59 (dd, j = 8.5, 3.8 hz, 1h), 3.10 (s, 1h), 2.64 (dd, j = 31.5, 5.9 hz, 1h), 2.59
ꢀ–ꢀ
2.56 (m, 1h), 2.47
ꢀ–ꢀ
2.44 (m, 1h), 2.14 (s, 1h), 2.07 (s, 1h), 2.05
ꢀ–ꢀ
1.92 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 170.90, 170.79, 170.29, 170.15,170.67,166.73, 131.23, 129.92, 128.99, 128.71, 127.81, 76.20, 75.99, 75.78, 64.56, 37.64, 34.87, 30.90, 30.88, 18.15. hr-ms (esi): calcd for c
29h36
n2o
14
m/z: 636.2167, found: 659.2057 [m na]

.实施例9 五乙酰京尼平苷-4
’’‑
溴萘酰胺（6g）的合成五乙酰京尼平苷-4
’’‑
溴萘酰胺（6g）的结构式如下：合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入1-氨基4-溴萘(80.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜；（3）得到淡黄色粉末51.3 mg，mp.145.6-146.3℃，收率18.8 %，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-4
’’‑
溴萘酰胺（6g）。谱图如图14所示。
[0051]1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ 8.11 (d, j = 13.2 hz, 1h), 8.01 (s, 1h), 7.72 (dd, j = 5.7, 3.3 hz, 1h), 7.53 (dd, j = 5.7, 3.3 hz, 2h), 7.43 (s, 1h), 7.29 (d, j = 1.9 hz, 1h), 6.66 (d, j = 8.0 hz, 1h), 5.36
ꢀ–ꢀ
5.34 (m, 4h), 4.69 (s, 1h), 4.31 (t, j = 6.7 hz, 3h), 4.21 (d, j = 8.2 hz, 1h), 3.39
ꢀ–ꢀ
3.36 (m, 1h), 3.31
ꢀ–ꢀ
3.27 (m, 1h), 2.22 (d, j = 3.4 hz, 1h), 2.04 (s, 1h), 1.55 (s, 15h). 13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ 170.90, 170.79, 170.29, 170.15,170.67,166.73,130.93, 128.85, 110.00, 65.58, 31.94, 30.58, 29.71, 29.37, 22.70, 19.20. hr-ms (esi): calcd for c
36h38
brno
14
m/z: 788.1476, found: 811.1402 [m na]

.实施例10 五乙酰京尼平苷-4
’’‑
苯甲酸酰胺（6h）的合成五乙酰京尼平苷-4
’’‑
苯甲酸酰胺（6h）的结构式如下：
合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入对氨基苯甲酸(51.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜；（3）得到淡黄色粉末60.1 mg，mp.157.6-158.3℃，收率25.0%，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-4
’’‑
苯甲酸酰胺（6h）。谱图如图15所示。
[0052]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.05 (d, j = 8.7 hz, 1h), 7.73
ꢀ–ꢀ
7.70 (m, 1h), 7.33 (s, 1h), 5.84 (s, 1h), 5.26 (d, j = 4.8 hz, 1h), 5.24
ꢀ–ꢀ
5.22 (m, 1h), 5.01 (d, j = 10.2 hz, 1h), 4.71 (d, j = 7.6 hz, 1h), 4.65 (d, j = 13.7 hz, 1h), 4.37 (s, 1h), 3.75 (d, j = 2.5 hz, 1h), 2.97 (s, 1h), 2.86 (d, j = 6.9 hz, 1h), 2.76 (t, j = 7.3 hz, 1h), 2.13 (s, 1h), 2.09 (dd, j = 7.2, 4.3 hz, 15 h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 172.03, 171.65, 171.36, 170.85, 170.80, 170.72, 170.68, 170.63, 170.21, 169.63, 169.53, 169.44, 167.77, 165.16, 153.06, 152.90, 147.66, 142.75, 142.62, 132.29, 131.49, 131.18, 130.94, 130.56, 128.85, 124.83, 119.19, 111.21, 96.60, 94.94, 70.85, 70.80, 68.65, 62.40, 46.98, 36.65, 34.40, 20.87, 20.59. hr-ms (esi): calcd for c
33h41
no
14
m/z: 703.2112, found: 726.2005 [m na]

.实施例11 五乙酰京尼平苷-3
’’‑
f-苯酰胺（6i）的合成五乙酰京尼平苷-3
’’‑
f-苯酰胺（6i）的结构式如下：合成方法基本同实施例3，不同之处在于：
步骤（2）：加入3-氟苯胺(41.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜；（3）得到淡黄色粉末43.1 mg，mp.177.6-178.3℃，收率18.0%，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-3
’’‑
f-苯酰胺（6i）。谱图如图16所示。
[0053]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.21 (s, 1h), 7.53 (d, j = 2.4 hz, 1h), 7.37 (s, 2h), 7.22 (s, 1h), 6.78 (s, 1h), 5.46
ꢀ–ꢀ
5.43 (m, 2h), 5.35 (s, 2h), 4.88 (d, j = 7.9 hz, 1h), 4.69 (s, 2h), 4.32 (s, 1h), 4.31 (s, 1h), 4.29 (s, 1h), 3.09 (d, j = 7.3 hz, 1h), 2.64 (s, 1h), 2.38 (s, 1h), 2.09 (d, j = 3.1 hz, 1h), 2.06
ꢀ–ꢀ
1.97 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 169.64, 169.45, 169.13, 168.47, 168.41, 163.64, 146.17, 135.99, 135.51, 129.52, 128.72, 122.93, 121.74, 119.10, 114.52, 110.77, 106.86, 97.45, 95.56, 93.78, 86.32, 71.37, 71.10, 69.71, 67.25, 60.62, 60.56, 46.09, 37.12. hr-ms (esi): calcd for c
32h36
fno
14
m/z: 677.2120, found: 700.2042 [m na]

.实施例12 五乙酰京尼平苷-4
’’‑
甲腈酰胺（6j）的合成五乙酰京尼平苷-4
’’‑
甲腈酰胺（6j）的结构式如下：合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入4-氨基苯甲腈(41.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜；（3）得到淡黄色粉末32.8 mg，mp.157.6-158.3℃，收率14.0 %，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-4
’’‑
甲腈酰胺（6j）。谱图如图17所示。
[0054]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.04 (s, 1h), 7.67 (d, j = 8.1 hz, 2h), 7.44 (d, j = 7.8 hz, 2h), 7.34 (d, j = 8.5 hz, 1h), 5.77 (s, 1h), 5.74 (s, 1h), 5.28 (t, j = 4.6 hz, 1h), 5.19 (d, j = 2.5 hz, 1h), 4.97 (d, j = 2.2 hz, 1h), 4.80 (d, j = 2.2 hz, 1h), 4.64 (s, 2h), 4.20 (d, j = 4.2 hz, 1h), 4.11 (d, j = 2.9 hz, 1h), 3.12 (d, j = 6.7 hz, 1h), 2.52 (s, 1h), 2.32 (s, 1h), 2.16 (s, 1h), 2.04
ꢀ–ꢀ
2.02 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 169.59, 169.59, 169.22, 169.22, 169.22, 161.61, 150.82, 138.68, 138.68, 138.68, 131.25, 131.25, 128.86, 128.86, 128.86, 98.96, 98.96, 95.76, 95.64, 71.08, 71.08, 69.66, 69.66, 50.28, 30.89, 28.68, 19.93, 19.85, 19.75, 19.66, 19.58. hr-ms (esi): calcd for c
33h36
n2o
14
m/z: 684.2167, found: 708.1923 [m na]

.
实施例13 五乙酰京尼平苷-4
’’‑
甲基吡啶酰胺（6k）的合成五乙酰京尼平苷-4
’’‑
甲基吡啶酰胺（6k）的结构式如下：合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入4-氨甲基吡啶(66.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜；（3）得到淡黄色粉末46.3 mg，mp.157.6-159.3℃，收率13.8 %，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-4
’’‑
甲基吡啶酰胺（6k）。谱图如图18所示。
[0055]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.47 (s, 2h), 8.02 (d, j = 7.1 hz, 1h), 7.60 (d, j = 7.8 hz, 1h), 7.22 (d, j = 10.2 hz, 1h), 5.95 (d, j = 2.4 hz, 1h), 5.73 (s, 1h), 5.16 (t, j = 9.5 hz, 1h), 5.08
ꢀ–ꢀ
5.05 (m, 1h), 5.02 (d, j = 9.6 hz, 1h), 4.92 (dd, j = 9.6, 8.1 hz, 1h), 4.79 (d, j = 8.1 hz, 1h), 4.67
ꢀ–ꢀ
4.57 (m, 2h), 4.41 (dd, j = 15.1, 5.8 hz, 1h), 4.09 (dd, j = 12.3, 2.3 hz, 1h), 3.13 (dd, j = 13.3, 7.6 hz, 1h), 2.89 (t, j = 5.9 hz, 1h), 2.69 (dd, j = 16.5, 8.0 hz, 1h), 2.12 (d, j = 16.5 hz, 1h), 2.03
ꢀ–ꢀ
1.84 (m, 15h). 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 166.77, 166.67, 166.38, 166.22, 166.06, 165.98, 151.95, 150.57, 149.95, 140.64, 135.22, 133.78, 132.40, 128.56, 117.43, 110.42, 95.52, 92.61, 63.37, 62.08, 50.52, 50.32, 45.85, 43.91, 40.81, 37.82, 35.43, 33.84, 22.98, 22.12, 21.84, 21.67, 21.56. hr-ms (esi): calcd for c
32h38
no
14
m/z: 674.2323, found: 675.2461 [m h]

.实施例14 五乙酰京尼平苷-5
’’‑
四氮唑酰胺（6l）的合成五乙酰京尼平苷-5
’’‑
四氮唑酰胺（6l）的结构式如下：
95.78, 94.09, 71.35, 71.11, 69.76, 67.21, 60.61, 60.54, 46.07, 37.31, 32.56, 28.68, 19.85, 19.70, 19.58, 19.45. hr-ms (esi): calcd for c
35h38
n2o
14
m/z: 710.2323, found: 733.2360 [m na]

.实施例16 五乙酰京尼平苷-4
’’‑
马尿酸酰胺（6n）的合成合成方法基本同实施例3，不同之处在于：步骤（2）：加入4-氨基马尿酸(60.0 mg,0.37 mmol)和dmap (63.0 mg, 0.51 mmol)，室温连续搅拌过夜；（3）得到淡黄色粉末62.4 mg，mp.154.6-155.3℃，收率24%，经过nmr、hr-ms等分析确定为五乙酰京尼平苷-4
’’‑
马尿酸酰胺（6n）。谱图如图21所示。
[0058]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.04 (s, 2h), 7.76
ꢀ–ꢀ
7.70 (m, 2h), 7.57
ꢀ–ꢀ
7.52 (m, 2h), 7.45 (s, 1h), 5.78
ꢀ–ꢀ
5.77 (m, 1h), 5.59
ꢀ–ꢀ
5.55 (m, 1h), 5.45 (s, 1h), 5.32
ꢀ–ꢀ
5.31 (m, 1h), 5.01 (s, 1h), 4.84
ꢀ–ꢀ
4.80 (m, 1h), 4.62 (s, 1h), 4.35
ꢀ–ꢀ
4.32 (m, 1h), 4.13
ꢀ–ꢀ
4.11 (m, 1h), 3.00
ꢀ–ꢀ
2.97 (m, 1h), 2.58
ꢀ–ꢀ
2.54 (m, 1h), 2.44
ꢀ–ꢀ
2.41 (m, 1h), 2.17 (s, 1h), 2.13 (s, 1h), 2.04
ꢀ–ꢀ
1.93 (m, 15h). 13
c nmr (150 mhz, cdcl3) δ 175.33, 169.87, 169.59, 168.73, 168.51, 167.93, 165.49, 164.13, 150.39, 143.87, 132.94, 129.90, 128.56, 127.69, 127.49, 118.42, 109.16, 95.71, 94.35, 71.65, 70.84, 69.49, 67.24, 64.52, 61.50, 48.15, 35.78, 33.06, 21.85, 21.06. hr-ms (esi): calcd for c
35h40
no
17
m/z: 760.2327, found: 783.2289 [m na]

.效果实施例（一）京尼平苷衍生物体外酶抑制活性筛选首先采用pbs溶液溶解xod和黄嘌呤制备成xod溶液（100 u/l）和黄嘌呤溶液（0.5 mm）。准确称取京尼平苷衍生物6a-6n并且将母液浓度配制为1mm，进一步将待测试京尼平苷衍生物用pbs稀释至不同浓度（200、100、50、25、12.5、6.25、3.125
ꢀµ
m）。同时用pbs代替测试化合物设置空白对照，用别嘌醇设置阳性对照。96孔板进行反应，每个浓度设置3次重复。使用microsoft excel 2021分析数据，根据抑制率（％）计算空白组和试验化合物组的od值变化，并且使用graphpad prism 8.0计算ic
50
值，以评估测试化合物的xod抑制活性，实验结果见表1。
[0059]
表1（二）京尼平苷衍生物体内降尿酸及肾脏保护活性筛选准备实验昆明小鼠（60只，雄性，体重20
ꢀ±ꢀ
5 g，证书编号：scxk [豫] 2020
–ꢀ
0005）。在实验开始之前，首先使小鼠适应实验室环境1周，在此期间正常喂养小鼠并监测体重。随后，将所有小鼠随机分为两组，其中空白组10只，模型组50只。模型组通过腺嘌呤和氧嗪酸钾联合给药的方式来建立高尿酸血症小鼠模型，每天接受一次药物灌喂，药物灌喂一周后，将模型组小鼠随机分为8组（每组6只），从空白组随机选择5只小鼠作为空白对照。每组每天接受一次氧嗪酸钾 腺嘌呤灌喂以及相应的京尼平苷衍生物治疗，按照人鼠剂量换算公式严格计算给药剂量，持续两周：空白组：1％cmc-na（10 ml/kg）模型组：1％cmc-na（10 ml/kg） 腺嘌呤（200 mg/kg） 氧嗪酸钾（500 mg/kg）别嘌醇组（10 mg/kg 0.5 ％cmc-na，10 ml/kg）京尼平苷组（200 mg/kg 0.5 ％cmc-na，10 ml/kg）京尼平苷衍生物6a、6c、6g、6j 组（20 mg/kg 0.5 ％cmc-na，10 ml/kg）
两周后眼眶后静脉丛采血约0.4 ml（采血管中加入少量肝素钠），室温下静置30 min使其自然凝血，3000 rpm离心5分钟，分离血清，检测sua、cr以及bun的含量（具体操作按照试剂盒说明书进行）。取血完成后将实验小鼠用颈椎脱臼法处死，然后进行腹部解剖：将肝叶小心剪下，放入2 ml冻存管中置于-20℃冰箱保存；用手术镊子小心分离取出左右双肾，然后小心去掉肾脏上包膜，左肾摘下后，放入2 ml冻存管中置于-20 ℃冰箱保存。待肝脏组织 左肾组织收集完成后集中转移至-80 ℃冰箱中冻存，右肾固定在约肾脏组织10倍体积的4 %的多聚甲醛溶液中，存放于4 ℃冰箱，器官组织用于后续实验。
[0060]
采用酶动力比色法测定sua；采用肌氨酸氧化酶法检测cr；采用脲酶法测定bun，实验结果见表2。
[0061]
表2注：与正常对照组相比，##p《0.01，###p《0.001；与高尿酸血症组相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001通过与高尿酸组小鼠（sua = 318.16
ꢀµ
m，cr = 87.20
ꢀµ
m，bun = 9.87 mm）以及阳性对照别嘌醇组小鼠（sua = 233.62
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m，cr = 63.35
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m，bun = 6.30 mm）相比，4种京尼平苷衍生物均表现出了较高的降尿酸活性，其中京尼平苷衍生物6a、6c、6j均表现出与别嘌醇相近的降尿酸活性。除了京尼平苷衍生物6j外，均表现出一定的肾脏保护效果。4种京尼平苷衍生物相比较而言，京尼平苷衍生物6c抑制xod活性以及修复肾脏损伤活性表现最佳（sua = 236.03
ꢀµ
m，cr = 40.85
ꢀµ
m，bun = 4.14 mm），并且总的来说其活性与别嘌醇相当。
[0062]
（三）对（二）中小鼠进行组织学检测，具体结果如图1所示，从图1中可以看出，he染色结果表明高尿酸血症组小鼠大量肾小管扩张，肾小管上皮细胞出现空泡化，小鼠肾小管结构不清，伴有结缔组织增生，及中性粒细胞点状浸润，可见少量肾小管上皮细胞坏死，核碎裂，多见肾小管管刷状缘脱落，可见高尿酸血症组小鼠出现了严重的肾脏炎症反应，导致肾脏出现严重损伤；此外，别嘌醇组小鼠肾脏也出现明显空泡化等病变现象。如图2所示,masson染色结果表明，高尿酸小鼠肾脏处可见明显的肾小管扩张,有多处局灶性炎症细胞浸润,间质部分可见明显的肾脏纤维化；别嘌醇组小鼠肾脏间质纤维化明显，有大量组织空泡产生，肾脏多出发生炎症表现。而受治疗组小鼠肾脏组织染色均匀，肾小球形态结构正常，肾小管结构清晰，肾小管上皮细胞排列紧密，局部血管周围可见较多淋巴细胞灶性浸润，这说明京尼平苷衍生物6a、6c、6g、6j 对高尿酸血症引起的肾脏损伤均具有一定的保护效果，且这种保护效果以京尼平苷衍生物6c为最强。
[0063]
（三）京尼平苷衍生物对hk-2细胞的毒性试验为了验证了高浓度尿酸对肾小管上皮hk-2细胞具有有害刺激以及判断京尼平苷衍生物对hk-2细胞的毒害作用，通过cck-8法研究了各实验组细胞活性。如图3所示，随着尿酸浓度的升高，hk-2细胞的细胞活力逐渐降低，且在800
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m时细胞活力低于80%。而京尼平苷衍生物6c对于hk-2细胞细胞活力的影响是微乎其微的，直到京尼平苷衍生物6c浓度达到100
ꢀµ
m时，京尼平苷衍生物6c仍未明显表现出对hk-2细胞的细胞毒性。
[0064]
（四）京尼平苷衍生物6c抗炎活性结果与讨论选择使用600
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m的尿酸对hk-2细胞进行炎性诱导，采用12.5、25、50、100
ꢀµ
m的京尼平苷衍生物6c进行药物干预。
[0065]
将京尼平苷衍生物6c作用与经600 μm尿酸诱导的hk-2细胞，对其中il-1β、tnf-α、tgf-β 的含量进行测定。由图4可见，正常的细胞组经尿酸诱导后，il-1β、tnf-α、tgf-β 的含量明显增加，经不同浓度的京尼平苷衍生物作用后可以显著降低由尿酸诱导的il-1β、tnf-α、tgf-β 的含量，并且化合物浓度越高抑制效果越好。并且在相同的浓度下京尼平苷衍生物6c对尿酸诱导的生成的il-1β、tnf-α、tgf-β 抑制作用强于母核化合物和阳性对照。这说明，京尼平苷衍生物6c通过抑制炎性因子il-1β、tnf-α、tgf-β的表达，可以改善由高尿酸引发的炎症反应。
[0066]
（五）京尼平苷衍生物6c减轻肾脏尿酸盐沉积使用偏振光显微镜检测高尿酸血症肾病大鼠的尿酸沉积。如图5所示，与空白组相比，高尿酸血症小鼠的肾脏有明显的尿酸积累。10 mg/kg的别嘌呤醇可有效减少了小鼠肾脏中尿酸的积累。此外，与高尿酸血症组相比，不同剂量(5、10、20 mg/kg)有效降低了肾脏内的尿酸积累，表明京尼平苷衍生物6c处理后，尿酸积累水平明显降低，并表现出剂量依赖性作用。