一种具有抗氧化和抗炎功效的精华水的制作方法

0.5％、苯氧乙醇0.1-0.3％、生育酚乙酸酯0.4-0.8％、peg-60氢化蓖麻油0.2-0.4％、氨丁三醇0.2-0.5％、甘油葡糖苷0.5-1％、乙酰化透明质酸钠1-2％、pca钠0.1-0.3％、丝氨酸0.5-1％、吡咯烷酮羧酸0.3-0.5％、磷酸氢二钠0.2-0.5％、泛醇0.3-0.5％和香精0.1-0.2％，余量为水。
10.作为优选，所述精华水的配方由以下含量的组分组成：8％杨枸花发酵提取物、甘油2％、烟酰胺0.3％、1，3-丙二醇0.2％、丁二醇0.2％、甘油聚醚-260.2％、氢化卵磷脂0.8％、甜菜碱0.6％、生育酚1％、琥珀酸二乙氧基乙酯0.3％、苯氧乙醇0.1％、生育酚乙酸酯0.5％、peg-60氢化蓖麻油0.2％、氨丁三醇0.3％、甘油葡糖苷1％、乙酰化透明质酸钠1.5％、pca钠0.1％、丝氨酸0.6％、吡咯烷酮羧酸0.3％、磷酸氢二钠0.3％、泛醇0.5％和香精0.1％，余量为水。
11.作为优选，所述杨枸花发酵提取物是以杨枸花为原料进行微生物发酵所产生的滤液。
12.作为优选，所述微生物为酵母菌、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌中的一种或多种。
13.作为优选，所述微生物为酵母菌和植物乳杆菌。
14.作为优选，所述酵母菌和植物乳杆菌的菌种配比为2：3。
15.进一步，本发明提供了所述的微生物对杨枸花进行发酵得到的杨枸花发酵提取物在保湿抗炎护肤品生产中的应用。优选，所述微生物为酵母菌和植物乳杆菌。
16.采用本技术方案的有益效果是：本技术人通过进一步从植物中获得有利于皮肤吸收的生物活性物质，同时开发新的绿色天然化妆品，从而有效提升产品的功效性和丰富产品种类。本发明具体以杨枸花为植物原料，通过大量实验，采用不同种类微生物对其进行发酵，检测所得发酵液的相关生物活性指标，从中筛选出了发酵液抗氧化和抗炎效果较好的发酵微生物的组合及配比。并且本技术人在进行产品相关性能的试验检测数据中发现，通过本发明得到的精华水提高了皮肤保湿能力，且对皮肤的刺激性大大减少，是一种功效性强，但温和无刺激的化妆品，具有十分广阔的应用前景。
具体实施方式
17.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清查、完整的描述，进而进一步解释发明。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例。给予本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
18.主要实验试剂和材料：
19.杨枸花购自辽宁产地，酵母菌、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
20.甘油、烟酰胺、1，3-丙二醇、丁二醇、甘油聚醚-26、氢化卵磷脂、甜菜碱、生育酚、琥珀酸二乙氧基乙酯、苯氧乙醇、生育酚乙酸酯、peg-60氢化蓖麻油、氨丁三醇、甘油葡糖苷、乙酰化透明质酸钠、pca钠、丝氨酸、吡咯烷酮羧酸、磷酸氢二钠、泛醇和香精均购自市售产品。
21.实施例1杨枸花发酵提取物和精华水的制备
[0022][0023]
杨枸花发酵提取物制备方法：将杨枸花洗净后通风阴干，再放入65℃烘箱烘干至恒重，粉碎过20目筛，称取定量粉末与蒸馏水按照料液比(1：100)混合于锥形瓶中，封口并进行灭菌，冷却至室温，接种微生物菌液，28℃，180r/min的恒温摇床培养48h，离心后取上清液过滤即得杨枸花发酵提取物。
[0024]
精华水配方原料：8％杨枸花发酵提取物、甘油2％、烟酰胺0.3％、1，3-丙二醇0.2％、丁二醇0.2％、甘油聚醚-26 0.2％、氢化卵磷脂0.8％、甜菜碱0.6％、生育酚1％、琥珀酸二乙氧基乙酯0.3％、苯氧乙醇0.1％、生育酚乙酸酯0.5％、peg-60氢化蓖麻油0.2％、氨丁三醇0.3％、甘油葡糖苷1％、乙酰化透明质酸钠1.5％、pca钠0.1％、丝氨酸0.6％、吡咯烷酮羧酸0.3％、磷酸氢二钠0.3％、泛醇0.5％和香精0.1％，余量为水。
[0025]
精华水制备方法：将甘油聚醚-26、氢化卵磷脂、琥珀酸二乙氧基乙酯、生育酚乙酸酯、peg-60氢化蓖麻油置于65～70℃的水浴锅中慢速搅拌1h，直到全部溶解得混合物a；然后将水、甘油、烟酰胺、1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、生育酚、苯氧乙醇、氨丁三醇、甘油葡糖苷、乙酰化透明质酸钠、pca钠、丝氨酸、吡咯烷酮羧酸、磷酸氢二钠和泛醇置于65～70℃的水浴锅中匀速搅拌30min，直至全部溶解得混合物b；将混合物b缓慢加入混合物a进行混合，加入杨枸花发酵提取物、剩余的水和香精，持续搅拌均匀后降温至20～25℃时停止搅拌，出料，制备得到精华水样品。
[0026]
实施例2杨枸花发酵提取物的抗氧化性能、抗炎和抗菌效果测试
[0027]
dpph有机自由基清除能力的测定：取不同杨枸花发酵提取物2.0ml加入4.0ml的2x10-4
mol/l的dpph乙醇溶液混匀放置30min，以溶剂为对照样，在波长517nm处测吸光度记为a1；a2即为2.0ml样品和4.0ml的乙醇水溶液的混匀在波长517nm处的吸光光度值；再取
4.0ml的dpph乙醇溶液于4.0ml的乙醇溶液混匀于波长为517nm处测吸光度记为a3，k有机自由基的清除率％的计算：实验结果如表1所示。
[0028]
表1不同杨枸花提取物的自由基清除率
[0029][0030]
从表1的实验数据可以发现，杨枸花经过微生物发酵所得的提取液，自由基清除率高于常规水提法和醇提法所得到的杨枸花提取物，其中，当采用的微生物为酵母菌和植物乳杆菌(活菌数比为2：3)时，自由基清除率较高，达到了86.8％，说明由该微生物发酵制得的杨枸花提取物具有优异的抗氧化活性。
[0031]
抗炎实验：取小鼠60只随机均分为12组。空白对照组用生理盐水，阳性对照组用氢化可的松0.02g
·
kg-1
，其余组用实施例1配方表中杨枸花发酵提取物、水提物和醇提物处理。各组每天上午灌胃给药1次，连续给药7d，阳性对照组采取腹腔注射。末次给药后30min，用棉球在小鼠右耳廓两面均匀涂抹二甲苯0.2ml致炎，左耳不涂以作对照。1h后将小鼠断头处死，剪下双耳。用直径7mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片重量差值作为肿胀度，计算肿胀抑制百分率。实验结果如表2所示，表明杨枸花发酵提取物相比水提物和醇提物的抗炎效果好，对炎症有较强的抗炎作用。
[0032]
表2不同杨枸花提取物的抗炎能力
[0033][0034]
抗菌能力测试方法：在琼脂平板上涂布一层稀释的实验菌，倒置于37℃恒温培养箱中，待表面干燥后用无菌镊子将牛津杯竖放在琼脂平板表面，轻压后加入待测样品，设空白细菌生长对照和阳性生长对照。于37℃恒温培养箱中培养24h，取出平板测量各牛津杯周
围抑菌圈直径。其中，实验菌包含大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉等各类常见菌株，本实施例数据以大肠杆菌为例。
[0035]
表3不同杨枸花提取物的抗菌能力
[0036][0037]
从表3可以看出，通过微生物发酵和常规水提法、醇提法所得杨枸花提取物相比，杨枸花发酵提取物的抑菌圈直径略有小幅下降，但基本保持在较高范围，对实验菌的抑制作用几乎没有影响，其中杨枸花发酵提取物7和杨枸花醇提物数据较为接近，说明通过该配方所得的杨枸花提取物具有较强的抑菌作用，抗菌效果较好。
[0038]
实施例3含杨枸花发酵提取物精华水的保湿能力测试
[0039]
实验条件：测试环境温度为20℃，相对湿度为45-55％，保持相同的室内灯光条件，进行实时动态监测。
[0040]
测试前准备：选取四组志愿者，年龄在20-45周岁，测试皮肤无创伤。在测试2-3天前，受试部位不能使用任何化妆品或外用药品。试验前，受试者需要清洁受试部位，清洁后，可同时标记多个区域，每个测试区域之间间隔至少1cm，在恒温恒湿环境中静坐30min后测基础数据，期间不能喝水和饮料，呈测试状态放置，保持放松状态。
[0041]
方法及步骤：
[0042]
参照qb/t 4256-2011化妆品保湿功效评价指南的评价方法。
[0043]
①
测试样品按一定用量进行单次涂布，使用乳胶指套将试样均匀涂布于试验区内，并记录实际的涂样量。
[0044]
②
皮肤分析测试仪对受试部位进行测量，每个区域平行测定至少3次。先测量各测试区域的初始值(样品使用前)，然后再设定时间后测试受试区域的皮肤水分含量。
[0045]
③
分别测量涂抹后1h、2h和4h后受试区域的皮肤含水量。同一个受试者的测试必须使用同一仪器由同一个测量人员完成，两次测量之间应清洁测量探头。
[0046]
实验结果如表4所示：
[0047]
表4含不同杨枸花发酵提取物的精华水对皮肤含水量的影响
[0048]
[0049]
注：精华水1-9对应添加杨枸花发酵物1-9，精华水10为含杨枸花醇提物的精华水。
[0050]
从表4实验数据中可以发现，含有杨枸花发酵提取物的精华水在使用1h后的保湿效果显著，直到4h后仍可达到明显的保湿效果，维持时间较长，与不含杨枸花发酵提取物的精华水样品相比，保湿率明显提高。
[0051]
实施例4含杨枸花发酵提取物精华水的皮肤刺激性测试
[0052]
按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)规定选取20名合格的志愿者，0.2ml样品添加于滤纸片上，空白对照为去离子水，将滤纸片放在斑试器内，将斑试器固定于受试者前臂曲侧，用手掌轻微按压斑试器，使它均匀地贴敷于皮肤上，期间不可进行剧烈运动或洗澡等。取下斑试器24h、48h后分别观察皮肤所呈现的状态，按表5标准记录皮肤反应。
[0053]
表5皮肤不良反应分级标准
[0054][0055]
表6含杨枸花发酵提取物精华水的皮肤斑贴实验结果
[0056][0057][0058]
表7可以看出，去除斑贴24h和48h后，精华水7对受试志愿者的皮肤反应等级均为阴性反应，而精华水10样品使用24h后出现2例1级可疑反应，1例2级反应，48h后原1例2级反应转变为1级反应，其余志愿者的红斑消除转为阴性反应，说明含有本发明杨枸花发酵提取物的精华水对皮肤没有刺激性，相比杨枸花醇提物的精华水对皮肤的致敏性大大降低。
[0059]
以上为对本发明实施例的描述，通过对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的。本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施列，而是要符合与本文所公开的原理和新颖点相一致的最宽的范围。