一类苯甲酰胺衍生物及制备方法、应用

1.本发明涉及医药化学技术领域，特别涉及一类n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物及制备方法、应用。


背景技术：

2.慢性粒细胞白血病(cml)是一种克隆性造血干细胞紊乱、骨髓增生性疾病，绝大部分病患呈现费城染色体(ph)为阳性。根据cml的疾病进展，可分为慢性期、加速期和急变期。目前约85％～90％的cml患者在慢性期被诊断确诊，若未及时采取合理的治疗方案，患者会经历加速期在3-4年后迅速恶化至急变期，最终导致患者死亡。
3.回顾近20年的临床治疗方案，以伊马替尼(商品名：格列卫；化学名：4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-n-[4-甲基-3-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]苯甲酰胺)为代表的bcr-abl抑制剂使大多数慢性期cml患者改善长期预后，仅需通过口服药物就能长期缓解病情并使患者接近正常的预期寿命。因此，伊马替尼作为经典的小分子靶向药物，目前作为一种高性价比的治疗方案已分别用于：治疗费城染色体阳性的慢性髓性白血病(ph

cml)的慢性期、加速期或急变期成人患者，联合化疗治疗新诊断的费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病(ph

all)的儿童患者，治疗复发的或难治的费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病(ph

all)的成人患者，治疗嗜酸粒细胞增多综合征(hes)和/或慢性嗜酸粒细胞白血病(cel)伴有fip1l1-pdgfrα融合基因的成年患者，治疗骨髓增生异常综合征/骨髓增殖性疾病(mds/mpd)伴有血小板衍生生长因子受体(pdgfr)基因重排的成年患者，治疗不能切除和/或发生转移的胃肠间质瘤成人患者，用于对不能切除和/或转移性kit突变的恶性黑色素瘤患者。
[0004]
但随着长期用药反馈时发现，仍有少数患者在服用药物的过程中失去了对伊马替尼的有效反应或出现疾病进展快速，并且随着在cml疾病进展后期对伊马替尼的耐药性逐步增加，表现为治疗效果较差或治疗失败，因而继续深入研究具有高活性和安全性的伊马替尼结构衍生物及相关疾病的治疗有着重要意义。


技术实现要素：

[0005]
鉴以此，本发明提出一类n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物及制备方法、应用。
[0006]
本发明的技术方案是这样实现的：
[0007]
一类n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物，其n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺片段通过共价连接t，或n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺片段通过共价连接q与t，其化学结构通式如下：
[0008][0009]
其中，q为连接基团，为1-10个ch2或ch组成的直链或支链的亚烷基链，所述直链或支链的亚烷基链由-nh-与t共价连接；
[0010]
t为如下片段中的任意一种：
[0011][0012]
进一步说明，该n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物的化学结构式为：
[0013][0014]
上述n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物的制备方法的反应步骤，如下化学反应式：
[0015][0016]
其中，上述反应式的反应条件与试剂为：a.1,2,4-苯三酸酐，乙酸钠，冰乙酸，加热回流，反应5小时；b.n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐，1-羟基苯并三唑，n,n-二甲基甲酰胺，室温，反应2小时。
[0017]
进一步说明，一类n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物，其化学结构式为：
[0018][0019]
上述一类n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物的制备方法的反应步骤，如下化学反应式：
[0020][0021]
其中，上述反应式的反应条件与试剂为：a.3-氟邻苯二甲酸酐，乙酸钠，冰乙酸，加热回流，反应5小时；b.相应的氨基酸，n,n-二异丙基乙胺，n,n-二甲基甲酰胺，加热回流，12～36小时；c.n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐，1-羟基苯并三唑，n,n-二甲基甲酰胺，室温，反应12～48小时。
[0022]
进一步说明，该n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物，其化学结构式为：
[0023][0024]
上述n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物的制备方法的反应步骤，如下化学反应式：
[0025]025][0026]
其中，上述反应式的反应条件与试剂：a.1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐，1-羟基苯并三唑，n,n-二甲基甲酰胺，室温，反应12～24小时；b.三氟乙酸，二氯甲烷，室温，反应0.5小时；c.2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异二氢吲哚-1,3-二酮，n,n-二异丙基乙胺，n-甲基吡咯烷酮，90℃，反应12小时。
3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)辛酰胺(i-5)
[0039]
11-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)十一酰胺(i-6)
[0040]
4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)苯甲酰胺(i-7)
[0041]
4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)环己烷-1-甲酰胺(i-8)
[0042]
4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2h)-基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)苯甲酰胺(i-9)。
[0043]
4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)苯甲酰胺(i-10)
[0044]
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明制备获得的一类n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物，其能够有效抑制人慢性粒细胞白血病细胞和人胃肠道间质瘤肿瘤细胞的活性，具有显著的抑制作用，可应用于制备治疗和/或预防过度增殖性疾病的药物，特别用于慢性粒细胞白血病和胃肠道间质细胞瘤的治疗。
[0045]
其中，本发明制得的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲酰胺对人慢性粒细胞白血病细胞的活性抑制率可达到50％以上。
具体实施方式
[0046]
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
[0047]
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0048]
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0049]
实施例
[0050]
本发明根据如下制备方法，制备一类n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物：
[0051]
方法一：
[0052][0053]
其中，上述反应式的反应条件与试剂为：a.1,2,4-苯三酸酐，乙酸钠，冰乙酸，加热回流，反应5小时；b.n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐，1-羟基苯并三唑，n,n-二甲基甲酰胺，室温，反应2小时。
[0054]
方法二：
[0055][0056]
其中，上述反应式的反应条件与试剂为：a.3-氟邻苯二甲酸酐，乙酸钠，冰乙酸，加热回流，反应5小时；b.相应的氨基酸，n,n-二异丙基乙胺，n,n-二甲基甲酰胺，加热回流，12～36小时；c.n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐，1-羟基苯并三唑，n,n-二甲基甲酰胺，室温，反应12～48小时。
[0057]
方法三：
[0058]058][0059]
其中，上述反应式的反应条件与试剂：a.1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐，1-羟基苯并三唑，n,n-二甲基甲酰胺，室温，反应12～24小时；b.三氟乙酸，二氯甲烷，室温，反应0.5小时；c.2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异二氢吲哚-1,3-二酮，n,n-二异丙基乙胺，n-甲基吡咯烷酮，90℃，反应12小时。
[0060]
方法四：
[0061][0062]
其中，上述反应式的反应条件与试剂：a.丙烯酸，甲苯，100℃，12小时；b.尿素，冰乙酸，120℃，8小时；c.n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐，1-羟基苯并三唑，n,n-二甲基甲酰胺，室温，20小时。
[0063]
实施例1
[0064]
制备2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲酰胺(i-1)
[0065]
(1)制备2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羧酸：
[0066]
将1,2,4-苯三酸酐(1.0g，5.2mmol)，3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(940mg，5.7mmol)，乙酸钠(640mg，7.8mmol)和3ml冰醋酸加入至反应瓶加热至90℃反应5小时，然后缓慢倾入至200ml水中搅拌10分钟，抽滤溶液得到灰白色固体1.5g，收率96％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.15(s,1h),8.39(dd,j＝7.8,1.4hz,1h),8.26(dd,j＝1.5,0.7hz,1h),8.03(dd,j＝7.7,0.7hz,1h),5.18(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),2.88(ddd,j＝16.7,13.7,5.2hz,1h),2.69
–
2.50(m,2h),2.06(m,1h).esi-ms m/z:303[m h]

.
[0067]
(2)将n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(277mg，1.0mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羧酸(332mg，1.1mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐(249mg，1.3mmol)，1-羟基苯并三唑(176mg，1.3mmol)和n,n-二甲基甲酰胺溶剂2ml加入至反应瓶室温反应2小时，然后缓慢倾入至30ml水中搅拌5分钟，抽滤溶液得到粗品，再通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)纯化得到淡黄色粉末0.38g，收率68％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.16(s,1h),10.56(s,1h),9.31
–
9.25(m,1h),8.99(s,1h),8.67(dd,j＝4.8,1.7hz,1h),8.51(d,j＝5.1hz,1h),8.47(dt,j＝8.5,1.9hz,2h),8.41(dd,j＝7.8,1.5hz,1h),8.12(d,j＝2.2hz,1h),8.10
–
8.05(m,1h),7.54
–
7.48(m,2h),7.43(d,j＝5.2hz,1h),7.23(d,j＝8.4hz,1h),5.20(dd,j＝13.0,5.3hz,1h),2.89(ddd,j＝17.5,14.0,5.5hz,1h),2.66
–
2.52(m,2h),2.23(s,3h),2.09(m,1h).
13
c-nmr(101mhz,dmso-d6)δ173.36,170.35,167.25,167.15,163.96,162.19,161.70,160.09,151.98,148.76,141.21,138.48,137.25,135.10,135.03,133.90,132.76,132.00,130.76,128.68,124.40,124.25,122.84,117.76,117.33,108.19,49.76,31.49,22.50,18.26.esi-ms m/z:562[m h]

.
[0068]
实施例2
[0069]
制备2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰胺(i-2)
[0070]
将n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(55mg，0.20mmol)，(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酸(73mg，0.22mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐(50mg，0.26mmol)，1-羟基苯并三唑(35mg，0.26mmol)和n,n-二甲基甲酰胺溶剂1ml加入至反应瓶室温反应过夜，然后缓慢倾入至10ml水中搅拌，乙酸乙酯30ml分3次萃取，合并乙酸乙酯层，无水硫酸钠干燥2小时后过滤，滤液减压旋干得到粗品，再依次通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)和c18柱层析(甲醇/水)进一步纯化得到淡黄色粉末25mg，收率22％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.09(s,1h),9.79(s,1h),9.24(s,1h),8.92(s,1h),8.68(d,j＝4.2hz,1h),8.49(d,j＝5.2hz,1h),8.49
–
8.45(m,1h),7.89(d,j＝2.2hz,1h),7.58
–
7.50(m,2h),7.41(d,j＝5.2hz,1h),7.25(dd,j＝8.2,2.2hz,1h),7.11(d,j＝8.3hz,1h),7.07(d,j＝8.6hz,1h)6.99(d,j＝7.0hz,1h),6.53(t,j＝5.9hz,1h),5.03(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.85(s,2h),2.93
–
2.85(m,1h),2.67
–
2.58(m,2h),2.21(s,3h),2.13
–
2.07(m,1h).esi-ms m/z:591[m h]

.
[0071]
实施例3
[0072]
制备4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁酰胺(i-3)
[0073]
将n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(55mg，0.20mmol)，4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸(79mg，0.22mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐(50mg，0.26mmol)，1-羟基苯并三唑(35mg，0.26mmol)和n,n-二甲基甲酰胺溶剂1ml加入至反应瓶室温反应过夜，然后缓慢倾入至10ml水中搅拌，乙酸乙酯30ml分3次萃取，合并乙酸乙酯层，无水硫酸钠干燥2小时后过滤，滤液减压旋干得到粗品，再依次通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)和c18柱层析(甲醇/水)进一步纯化得到淡黄色固体13mg，收率11％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.10(s,1h),9.80(s,1h),9.25(s,1h),8.92(s,1h),8.69(d,j＝4.2hz,1h),8.50(d,j＝5.2hz,1h),8.49
–
8.45(m,1h),7.89(d,j＝2.1hz,1h),7.60
–
7.50(m,2h),7.41(d,j＝5.2hz,1h),7.25(dd,j＝8.2,2.2hz,1h),7.11(d,j＝8.3hz,1h),7.07(d,j＝8.6hz,1h)7.00(d,j＝7.0hz,1h),6.54(t,j＝5.8hz,1h),5.04(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.35
–
3.31(m,2h),2.41
–
2.28(m,3h),2.17(s,3h),2.18
–
2.05(m,3h),2.05
–
1.95(m,2h).esi-ms m/z:619[m h]

.
[0074]
实施例4
[0075]
制备6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)己酰胺(i-4)
[0076]
将n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(55mg，0.20mmol)，6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)己酸(85mg，0.22mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐(50mg，0.26mmol)，1-羟基苯并三唑(35mg，0.26mmol)和n,n-二甲基甲酰胺溶剂1ml加入至反应瓶室温反应过夜，然后缓慢倾入至10ml水中搅拌，乙酸乙酯30ml分3次萃取，合并乙酸乙酯层，无水硫酸钠干燥2小时后过滤，滤液减压旋干得到粗品，再依次通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)和c18柱层析(甲醇/水)进一步纯化得到淡黄色固体8mg，收率6％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.09(s,1h),9.80(s,1h),
9.25(s,1h),8.92(s,1h),8.68(d,j＝4.8hz,1h),8.49(d,j＝5.2hz,1h),8.48
–
8.45(m,1h),7.89(d,j＝2.2hz,1h),7.58
–
7.50(m,2h),7.41(d,j＝5.2hz,1h),7.26(dd,j＝8.2,2.2hz,1h),7.12(d,j＝8.4hz,1h),7.07(d,j＝8.6hz,1h)6.99(d,j＝7.0hz,1h),6.53(t,j＝5.9hz,1h),5.03(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.29(d,j＝6.2hz,2h),2.30(t,j＝7.2hz,3h),2.17(s,3h),2.16
–
2.11(m,1h),2.11
–
1.92(m,2h),1.67
–
1.58(m,4h),1.42
–
1.34(m,2h).esi-ms m/z:647[m h]

.
[0077]
实施例5
[0078]
制备8-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)辛酰胺(i-5)
[0079]
将n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(55mg，0.20mmol)，8-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)辛酸(91mg，0.22mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐(50mg，0.26mmol)，1-羟基苯并三唑(35mg，0.26mmol)和n,n-二甲基甲酰胺溶剂1ml加入至反应瓶室温反应过夜，然后缓慢倾入至10ml水中搅拌，乙酸乙酯30ml分3次萃取，合并乙酸乙酯层，无水硫酸钠干燥2小时后过滤，滤液减压旋干得到粗品，再依次通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)和c18柱层析(甲醇/水)进一步纯化得到淡黄色固体11mg，收率8％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.08(s,1h),9.80(s,1h),9.24(s,1h),8.92(s,1h),8.69(d,j＝4.6hz,1h),8.48(d,j＝5.1hz,1h),8.47
–
8.45(m,1h),7.89(d,j＝2.1hz,1h),7.61
–
7.51(m,2h),7.40(d,j＝5.2hz,1h),7.26(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),7.12(d,j＝8.4hz,1h),7.06(d,j＝8.6hz,1h),6.99(d,j＝7.0hz,1h),6.52(t,j＝5.9hz,1h),5.03(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.30
–
3.26(m,2h),2.36
–
2.27(m,3h),2.16(s,3h),2.16
–
2.10(m,1h),2.06
–
1.93(m,2h),1.62
–
1.54(m,4h),1.38-1.26(m,6h).esi-ms m/z:675[m h]

.
[0080]
实施例6
[0081]
制备11-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)十一酰胺(i-6)
[0082]
将n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(55mg，0.20mmol)，11-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)十一酸(101mg，0.22mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐(50mg，0.26mmol)，1-羟基苯并三唑(35mg，0.26mmol)和n,n-二甲基甲酰胺溶剂1ml加入至反应瓶室温反应过夜，然后缓慢倾入至10ml水中搅拌，乙酸乙酯30ml分3次萃取，合并乙酸乙酯层，无水硫酸钠干燥2小时后过滤，滤液减压旋干得到粗品，再依次通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)和c18柱层析(甲醇/水)进一步纯化得到淡黄色固体29mg，收率20％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.08(s,1h),9.78(s,1h),9.24(s,1h),8.91(s,1h),8.68(d,j＝4.1hz,1h),8.48(d,j＝5.1hz,1h),8.47
–
8.45(m,1h),7.89(d,j＝2.1hz,1h),7.60
–
7.47(m,2h),7.40(d,j＝5.2hz,1h),7.25(dd,j＝8.2,2.2hz,1h),7.11(d,j＝8.3hz,1h),7.06(d,j＝8.6hz,1h),6.99(d,j＝7.0hz,1h),6.50(t,j＝5.8hz,1h),5.03(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.25(d,j＝6.3hz,2h),2.26(t,j＝7.4hz,3h),2.16(s,3h),2.18
–
2.14(m,1h),2.05
–
1.93(m,2h),1.58
–
1.51(m,4h),1.28-1.22(m,12h).esi-ms m/z:717[m h]

.
[0083]
实施例7
[0084]
制备4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)环己烷-1-甲酰胺(i-8)
[0085]
(1)制备4-(氨基甲基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)环己烷-1-甲酰胺：
[0086]
将n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(100mg，0.36mmol)，反式-4-(叔丁氧羰氨甲基)环己甲酸(93mg，0.36mmol)，1h-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(225mg，0.43mmol)和三乙胺(132mg，1.30mmol)溶于2ml n,n-二甲基甲酰胺室温反应6小时，然后加入水用乙酸乙酯萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥2小时后减压移除溶剂，剩余残渣溶于2ml二氯甲烷溶液，搅拌条件下缓慢滴入0.5ml三氟乙酸，室温条件下搅拌0.5小时后再次减压移除溶剂，剩余残渣用硅胶柱层析分离得到白色固体110mg，收率72％；esi-ms m/z:417[m h]

.
[0087]
(2)将4-(氨基甲基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)环己烷-1-甲酰胺(100mg，0.24mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(60mg，0.22mmol)溶于2ml n-甲基吡咯烷酮溶液，缓慢滴入n,n-二异丙基乙胺(76μl，0.44mmol)，在耐压管中90℃反应12小时，待反应液冷却至室温后加入20ml水，用50ml乙酸乙酯萃取3次，合并有机相再用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥2小时后真空移除溶剂，剩余残渣用硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)进行分离，得淡黄色固体25mg，收率17％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.10(s,1h),9.76(s,1h),9.26(s,1h),8.91(s,1h),8.71(s,1h),8.49(t,j＝7.0hz,2h),7.93(d,j＝2.1hz,1h),7.58(t,j＝7.8hz,1h),7.53(dd,j＝7.9,4.6hz,1h),7.42(d,j＝5.1hz,1h),7.27(dd,j＝8.3,2.1hz,1h),7.13(dd,j＝8.5,6.6hz,2h),7.02(d,j＝7.0hz,1h),6.60(t,j＝6.2hz,1h),5.05(d,j＝13.0hz,1h),3.20(t,j＝6.5hz,2h),2.87(ddd,j＝17.9,14.0,5.4hz,1h),2.65
–
2.54(m,1h),2.29(td,j＝11.1,10.0,6.5hz,1h),2.17(s,3h),2.08
–
1.99(m,1h),1.91
–
1.78(m,4h),1.58(d,j＝23.3hz,1h),1.51
–
1.36(m,2h),1.23(s,1h),1.17(t,j＝7.1hz,1h),1.05(q,j＝12.5,11.7hz,2h).esi-ms m/z:673[m h]

.
[0088]
实施例8
[0089]
制备4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)苯甲酰胺(i-7)
[0090]
将4-(氨基甲基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)苯甲酰胺(90mg，0.22mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(55mg，0.20mmol)溶于2ml n-甲基吡咯烷酮溶液，缓慢滴入n,n-二异丙基乙胺(76μl，0.44mmol)，在耐压管中90℃反应12小时，待反应液冷却至室温后加入20ml水，用50ml乙酸乙酯萃取3次，合并有机相再用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥2小时后真空移除溶剂，剩余残渣用硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)进行分离，得淡黄色固体9mg，收率7％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)11.09(s,1h),9.76(s,1h),9.26(s,1h),8.91(s,1h),8.70(s,1h),8.49(t,j＝7.0hz,2h),8.09
–
7.95(m,3h),7.58(d,j＝7.8hz,2h),7.57
–
7.54(m,1h),7.48(d,j＝7.9hz,1h),7.42(d,j＝5.1hz,1h),7.27(dd,j＝8.3,2.1hz,1h),7.13(dd,j＝8.5,6.6hz,2h),7.02(d,j＝7.0hz,1h),6.60(t,j＝6.2hz,1h),5.05(d,j＝13.0hz,1h),4.13(s,2h),2.35
–
2.25(m,1h),2.17(s,3h),2.16
–
1.99(m,3h).esi-ms m/z:667[m h]

.
[0091]
实施例9
[0092]
制备4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2h)-基)-n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)苯甲酰胺(i-9)
[0093]
(1)制备3-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)丙酸：
[0094]
将4-氨基苯甲酸叔丁酯(500mg，2.6mmol)和丙烯酸(200mg，2.8mmol)溶于5ml甲苯在100℃反应12小时，待反应液冷却至室温后减压蒸发移除溶剂，将剩余残渣溶解于1ml乙酸乙酯，再搅拌条件下缓慢加入20ml石油醚，抽滤再干燥后得到3-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)丙酸粗品642mg，收率94％；esi-ms m/z:266[m h]

.
[0095]
(2)制备4-(2,4-二氧甲基四氢嘧啶-1(2h)-基)苯甲酸
[0096]
将3-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)丙酸(642mg，2.4mmol)和尿素(360mg，6mmol)溶于5ml冰乙酸在120℃回流反应8小时，待反应液冷却至室温后减压蒸发移除溶剂，将剩余残渣溶解于10ml乙酸乙酯搅拌10分钟，抽滤再干燥后得到4-(2,4-二氧甲基四氢嘧啶-1(2h)-基)苯甲酸粗品171mg，收率30％；
[0097]
(3)将n-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(55mg，0.2mmol)，4-(2,4-二氧甲基四氢嘧啶-1(2h)-基)苯甲酸(47mg，0.2mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
·
盐酸盐(50mg，0.26mmol)，1-羟基苯并三唑(35mg，0.26mmol)和n,n-二甲基甲酰胺溶剂1ml加入至反应瓶室温反应过夜，然后缓慢倾入至10ml水中搅拌，乙酸乙酯30ml分3次萃取，合并乙酸乙酯层，无水硫酸钠干燥2小时后过滤，滤液减压旋干得到粗品，再依次通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷)和c18柱层析(甲醇/水)进一步纯化得到淡黄色固体9mg，收率9％；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.47(s,1h),10.21(s,1h),9.26(d,j＝2.3hz,1h),8.97(s,1h),8.67(dd,j＝4.8,1.7hz,1h),8.50(d,j＝5.2hz,1h),8.46(dt,j＝8.0,2.1hz,1h),8.08(d,j＝2.2hz,1h),7.96(d,j＝8.7hz,2h),7.53
–
7.45(m,4h),7.41(d,j＝5.1hz,1h),7.20(d,j＝8.4hz,1h),3.86(t,j＝6.6hz,2h),2.72(t,j＝6.6hz,2h),2.21(s,3h).esi-ms m/z:494[m h]

.
[0098]
实施例10
[0099]
将由实施例1-9中所制备得到的n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物化合物进行体外肿瘤细胞抗肿瘤增殖活性实验。
[0100]
用mtt法测定对人慢性粒细胞白血病细胞株k562和人胃肠道间质瘤细胞株gist-t1的抑制作用，体外测试抗肿瘤增殖活性的mtt法是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的nadp相关的脱氢酶(琥珀酸脱氢酶)能使外源性mtt还原为难溶性的蓝紫色结晶甲瓒(formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
[0101]
利用二甲基亚砜(dmso)或三联液(10％sds-5％异丁醇-0.01mol/l hcl)溶解细胞中的紫色结晶物甲瓒，以酶联免疫检测仪检测570nm波长处的光吸收值(od值)，可间接反映活细胞量。
[0102]
具体操作方法：将处于对数生长期的肿瘤细胞按一定的细胞量接种于96孔培养板内，培养24小时后加入受试化合物(悬浮细胞接板后可直接加)，细胞在37℃、5％co2条件下继续培养48小时后，加入mtt继续培养4小时，用dmso溶解结晶，利用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其od值，计算化合物的抑制率和ic
50
值。统计上述化合物的药理实验结果，其目标化合物20μm浓度下对上述肿瘤细胞株的体外抗肿瘤活性结果如下表1：
[0103]
(-表示细胞存活率》50％， 表示细胞存活率《50％， 表示细胞存活率≤80％，nd表示未测)。
[0104]
表1
[0105][0106]
由上表的体外肿瘤细胞抗增殖活性实验结果表明，本发明所提供的化合物均具有人慢性粒细胞白血病细胞株k562一定的抑制活性，且i-1的抑制活性可达到50％以上，其中，i-1、i-4和i-6对人胃肠道间质瘤肿瘤细胞株具有抑制活性，因此，本发明制备获得的一类n-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲酰胺衍生物化合物，具有抑制人慢性粒细胞白血病和人胃肠道间质瘤肿瘤细胞株的活性，可应用于制备治疗和/或预防过度增殖性疾病的药物，特别用于慢性粒细胞白血病和胃肠道间质细胞瘤的治疗。
[0107]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。