一种光热响应载药纳米粒子及其制备与应用

1.本发明属于医药领域，具体涉及一种光热响应载药纳米粒子及其制备与其在制备靶向抑制tmem16a治疗tmem16a高表达的癌症的药物中的应用。


背景技术：

2.肺癌是发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤，也是世界范围内发病率和致死率最高的恶性肿瘤类型之一。目前肺癌的主要治疗手段是手术、x线检查、支气管镜检查和细胞学检查化疗等，但是治疗效果极差，对病人造成射线损伤或具有较大痛苦，五年生存率低于百分之二十。
3.tmem16a是一种钙激活氯离子通道，多项研究表明，肺腺癌的进化与tmem16a有关，而我们先前的工作证明tmem16a在肺腺癌细胞系la795中高表达。tmem16a与细胞增殖和迁移，肿瘤发生和癌症进展有关。人们已经发现，tmem16a可能成为肺癌诊断和治疗的潜在生物标志物和靶标。tmem16a抑制剂成为发展肺腺癌治疗的重要途径之一，但是，tmem16a在各种细胞类型和组织中广泛表达，在生理过程中起关键作用，并在不同部位发挥不同的功能，这些原因导致了现有的通道抑制剂对正常组织的生物毒性和抗癌效率。
4.小分子药物特别是亲水性药物具有体内循环周期短、稳定性较差、难以富集到肿瘤部位、容易损伤正常细胞、在体内作用位点广泛、对不同的细胞发挥不同的功能、以及在有效作用位点富集效果较差等缺点，常常在未达到治疗部位，就已经失去药物活性。因而广大科研人员设计了多种纳米药物输送系统，将小分子药物包裹或者吸附于纳米颗粒的内部或者表面，从而实现精准、长周期的药物靶向以及可控释放。然而，常规的药物递送载体多数是通过细胞内或者细胞外物理化学环境的变化进行药物的释放，而这些过程总是难以对空间和时间进行精确控制，可重复性差，因而降低了药物治疗的效率，增加了副作用的风险，限制了其在体外、体内实验中的效果。
5.光控治疗方式由于其较好的空间、时间可控性，在开发新型药物载体和治疗方式中引起了广泛的兴趣。其中，近红外光由于具有较强的组织穿透能力，并且对组织的损伤作用小，能够准确的到达目标深处组织同时不引起副反应，因而基于近红外光的光控治疗方式成为了光控治疗方式的研究热点。
6.目前基于近红外光响应的纳米药物研发主要集中于使用纳米粒子的光热效应对目标细胞或者组织进行热损伤，从而达到杀伤病变细胞的目标。但是，这类纳米药物仅限于针对癌细胞或者病变严重的细胞进行不可逆的损伤，不能对细胞的功能进行调控。同时，较强的光热效应也会对周围的正常细胞造成一定程度的损害，从而会有一定的副作用。而在使用光热效应对亲疏水药物释放来调控细胞功能方面，基于近红外光响应的纳米药物载体报道有限。
7.共轭聚合物是具有连续共轭的结构单元和π电子离域结构的特殊高分子，由于其化学结构的可控性，可以通过优化调整其共轭单元调控分子的光化学性质。相比于无机光敏试剂而言，有机共轭聚合物具有能级可调，光稳定性强以及光热转换效率高等特点。


技术实现要素：

8.鉴于放化疗法等治疗肺腺癌方法对正常组织伤害较大，有显著的副作用，而已报道的tmem16a通道抑制剂，大多数为选择性差，毒副作用未知的化学合成药物，本发明筛选出一种能够抑制tmem16a离子通道的天然小分子抑制剂—原花青素(pc)。
9.本发明的目的之一是提供原花青素(pc)的一种药物新用途。
10.本发明所提供的原花青素(pc)的药物新用途：为原花青素(pc)在制备如下产品中的应用：
11.1)tmem16a离子通道抑制剂；
12.2)预防和/或治疗tmem16a高表达的癌症或肿瘤的产品；
13.3)调控tmem16a高表达的肿瘤细胞的增殖、迁移的产品。
14.所述通道抑制剂原花青素是通过荧光淬灭实验和全细胞膜片钳实验从天然小分子化合物中筛选出来的。
15.所述通道抑制剂原花青素通过分子动力学模拟、丙氨酸突变实验和全细胞膜片器实验验证了原花青素对tmem16a离子通道抑制的特异性。
16.所述2)中，所tmem16a高表达的癌症或肿瘤具体可为肺癌，更具体可为肺腺癌；
17.所述3)中，所述tmem16a高表达的肿瘤细胞具体可为肺癌细胞，更具体可为肺腺癌细胞la795。
18.鉴于水溶性良好的天然小分子化合物在血液中均匀分散，但是其携带的活性集团导致了药物在血液中的稳定性差，通常在未到达目标作用位点时，其结构和活性已经发生变化，发挥不了药性。tmem16a除了在癌细胞中高表达以外，在多处正常组织中也有丰富的表达，导致了水溶好的tmem16a通道抑制剂，很难在肿瘤组织中富集并达到起效浓度，几乎做不到只对肿瘤组织中高表达的tmem16a发挥作用。
19.因此，本发明的另一目的是设计和制备一种纳米抑制剂。
20.所述纳米抑制剂由两亲性分子和光热响应共轭聚合物以及tmem16a通道抑制剂制成；
21.其中，所述tmem16a通道抑制剂具体可为原花青素(pc)；
22.所述两亲性分子由温度响应性两亲性分子和非温度响应性两亲性分子共同组成；
23.所述温度响应性两亲性分子为在不同温度下亲疏水性变化明显的分子，一般可以在30-50摄氏度发生相变，导致其亲疏水性质发生变化；
24.具体地，所述温度响应性两亲性分子可为二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)；
25.所述非温度响应性两亲性分子为在不同温度下亲疏水性变化不明显的分子；
26.具体地，所述非温度响应性两亲性分子可为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dspe-peg-nh2)，其dspe为脂肪链为疏水性端，peg为亲水端；
27.温度响应性两亲性分子与非温度响应性两亲性分子的重量比可为7：3
28.所述光热响应共轭聚合物为共轭单元桥联的给受体型聚合物，具有芳香性的共轭主链以及脂肪族的侧链，共轭主链由吸电子能力比较强、最低未占分子轨道能级较低的受体共轭单元和给电子能力比较强、最高已占轨道能级比较高的给体共轭单元组成；聚合物分子的最高已占轨道能级和最低未占分子轨道能级带隙较窄，在2.0ev以下在近红外光有较强的吸收，其最高吸收峰在600nm-1200nm之间；聚合物分子具有将吸收的近红外光转化
为热量的能力，且能量转换效率不低于30％，即具有较强的光热效应和光热转换效率；
29.所述光热响应共轭聚合物包括但不仅限于以下结构：
[0030][0031]
光热响应共轭聚合物与温度响应性两亲性分子、非温度响应性两亲性分子、tmem16a通道抑制剂的质量比可为：0.5：7：3：0.02。
[0032]
所述纳米抑制剂通过纳米沉淀法组装而成。
[0033]
所述纳米抑制剂在808nm近红外光照射下快速升温，远程控制tmem16a通道抑制剂(原花青素)的释放，用于调控tmem16a离子通道的开放程度和表达水平，以及与tmem16a相关的离子通道疾病，例如调控tmem16a高表达的肿瘤细胞的增殖、迁移；
[0034]
所述纳米抑制剂为球形形貌，粒径为5～400nm；
[0035]
所述纳米抑制剂通过共轭聚合物在近红外光的光热效应将光能转化为热能从而引发温度响应性两亲性分子的相变导致内部的tmem16a通道抑制剂被释放；
[0036]
所述纳米抑制剂中，所述tmem16a通道抑制剂占整体质量的0.19％～0.2％，同时不含有其他载体。
[0037]
另一方面，本发明提供上述纳米抑制剂的制备方法。
[0038]
本发明所提供的纳米抑制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0039]
1)将光热响应共轭聚合物和非温度响应性两亲性分子溶于第一溶剂中得到第一溶液；
[0040]
2)将温度响应性两亲性分子溶于第二溶剂中得到第二溶液；
[0041]
3)将第一溶液与第二溶液混合，超声分散，得到混合溶液；
[0042]
4)将所述混合溶液加入到水中，
[0043]
5)将所得液体避光搅拌，并且边搅拌边通惰性气体至有机溶剂除尽后，超声分散；
[0044]
6)将所得液体加热到55-70摄氏度，加入tmem16a通道抑制剂，并且搅拌，将温度降低到室温，得到载药纳米粒子，即纳米抑制剂。
[0045]
上述方法步骤1)中，所述第一溶剂具体可为四氢呋喃、dmso、乙醇中的一种或几种的混合物；
[0046]
上述方法步骤2)中，所述第二溶剂具体可为二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃中的一种或几种的混合物；
[0047]
光热响应共轭聚合物与非温度响应性两亲性分子、温度响应性两亲性分子的质量比可为0.5:3:7
[0048]
上述方法步骤4)中，所述混合溶液与水的体积比可为1:9；
[0049]
上述方法在步骤6)后还可进一步包括将得到的载药纳米粒子用50k的超滤管在7500g的离心力下离心20min，得到浓度较高的载药纳米粒子，备用。
[0050]
上述载药纳米粒子即纳米抑制剂在制备如下产品中的应用也属于本发明的保护范围：1)预防和/或治疗tmem16a高表达的癌症或肿瘤的产品；
[0051]
2)调控tmem16a高表达的肿瘤细胞的增殖、迁移的产品。
[0052]
所述1)中，所述癌症具体可为肺癌，更具体可为肺腺癌。
[0053]
所述2)中，所述tmem16a高表达的肿瘤细胞具体可为肺癌细胞，更具体可为肺腺癌细胞la795。
[0054]
同时，本发明提供使用该纳米抑制剂在可控释放药物治疗相关疾病的方法，包括以下步骤：
[0055]
将所述纳米粒子通过注射、口服方式导入生物体内如治疗部位或血液循环系统，与传统直接给药方式相比，相同的药物剂量(pc 40μm)，载药纳米粒子(pdpp 25μm，pc 40μm)能达到更好的疗效。待纳米粒子被细胞胞吞后，(细胞实验中纳米粒子与细胞孵育4h，动物实验中尾静脉注射24h后)使用近红外激光对治疗部位进行照射(1wcm-2
,5min)，使纳米粒子发生光热转换效应，释放负载药物，抑制tmem16a离子通道；
[0056]
三天进行一次给药治疗，给药24h进行光照，并记录小鼠体重和肿瘤大小。
[0057]
本发明利用共轭聚合物较高的光热转换能力，设计和制备一种靶向抑制肺腺癌肿瘤tmem16a离子通道，并能远程智能控制通道抑制剂释放的纳米抑制剂来治疗肺腺癌。本发明采用简单的自组装方法得到了高度分散、粒径可控、稳定性好、安全性有保证的新型纳米药物。发明工艺简单无污染并且成本低廉效率高、毒副作用低、大大提高了原花青素的生物利用度，容易实现工业化生产，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0058]
图1为实施例1中tmem16a抑制剂——原花青素的筛选。其中附图1a为与原花青素和tmem16ainh-a01孵育的转染yfp质粒的la795细胞的相对yfp荧光强度曲线图，附图1b为典型的被600nm ca
2
激活的tmem16a全细胞电流，并被不同浓度的pc和t16ainh-a01抑制，附图1c为不同浓度原花青素对tmem16a的i-v曲线，附图1d为 80mv下tmem16a电流与不同浓度原花青素孵育的剂量-反应曲线。原花青素对tmem16a通道的ic
50
为10.6
±
0.6μm，附图1e为
tmem16a、bestrophin-1和cftr通道分别被相应的特定抑制剂抑制和100.0μm pc所抑制，并记录在最高电压下的平均电流值的直方图。
[0059]
图2表明原花青素抑制tmem16a的分子机制。其中附图2a为原花青素与tmem16a之间的结合模式在最低结合能的构象，附图2b为原花青素表面电势分布，附图2c为600nm ca
2
诱导和不同浓度pc抑制突变体tmem16a野生型tmem16a(e624a-r535a-d383a)的特征tmem16a电流，附图2d为野生型与突变型e624a、r535a、d383a tmem16a通道ic
50
值的统计分析。
[0060]
图3为本发明实施例2中纳米粒子的制备流程图。
[0061]
图4为实施例2制得的空载纳米粒子、载药纳米粒子和原花青素的紫外可见吸收光谱。
[0062]
图5为实施例2制得的纳米粒子的粒径表征以及透射电镜图。
[0063]
图6为实施例2制得的纳米粒子在治疗小鼠肺腺癌肿瘤中的实验结果。其中附图6a分别在30天后用pc、cpns-pc、cpns和顺铂治疗肿瘤实体的剥离图像。附图6b各组小鼠相对肿瘤体积曲线。
[0064]
图7表明实施例2制得的纳米粒子对小鼠体重的影响与阳性药顺铂相比甚微。
[0065]
图8为实施例2制得的纳米粒子与阳性对照顺铂的生存曲线。
[0066]
图9为实施例2制得的纳米粒子尾静脉注射后向肿瘤部位富集效果图。
具体实施方式
[0067]
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
[0068]
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0069]
本发明中的实施例以共轭聚合物p1(pdpp)为例，说明纳米粒子的制备方法及其在治疗小鼠肺腺癌的应用，来介绍本发明专利。共轭聚合物pdpp在700-900nm处有吸收峰，且有较高的消光系数，其在808nm出的光热转换效率高达43.7％左右，在1w cm-2
的近红外光照射下其浓度为25μm的水溶液可以升温达到70摄氏度左右。
[0070]
实施例1、tmem16a抑制剂——原花青素的筛选
[0071]
从中药天然小分子化合物中筛选出一种tmem16a的通道抑制剂，并通过荧光淬灭试剂、膜片钳实验、分子对接和点突变实验来验证原花青素对tmem16a的抑制作用。
[0072]
荧光淬灭实验：
[0073]
yfp/f46l/h148q/i152l转染la795细胞后24h后进行荧光实验，加入atp(短划线)作为对照，yfp的荧光强度迅速下降约73.4％。细胞与100μm的pc工作液在37℃下孵育30min。d-pbs冲洗la795细胞3次，每24孔板留500μl。然后在每个24孔板上加入500μl d-pbs缓冲液(含150mm i-)，在clsm的物镜表上观察。稳定记录荧光强度后，在24孔板上加入终浓度为10μm的atp工作液。当la795细胞与20μm t16ainh-a01(实线)或100μm pc(点划线)孵育时，荧光强度保持稳定(附图1a)。yfp荧光猝灭实验结果表明，原花青素可以抑制atp诱导的
tmem16a的开放，从而阻止i-通过tmem16a阴离子通道流入细胞。
[0074]
膜片钳实验：
[0075]
采用全细胞膜片钳实验测量pc对tmem16a的浓度依赖性。移液管溶液中600nm ca
2
激活la795中的tmem16a电流，灌注系统中加入浓度梯度的pc浴液。在pc处理下，tmem16a电流在浓度为100μm时的抑制率达到96.2％，tmem16a电流向外偏流和缓慢激活的特性几乎没有改变。根据不同浓度pc在 80mv下的归一化电流值绘制剂量-反应曲线，并采用hill方程拟合。结果显示pc抑制tmem16a的ic
50
为10.6
±
0.6μm(附图1d所示)。因此，通过膜片钳实验证明pc可能是tmeme16a的抑制剂。接下来，我们选择bestrophin1和cftr检测pc对tmem16a的特异性，因为之前我们认为这两个离子通道都是ca
2
激活的氯离子通道(caccs)的分子基础，分别用全细胞膜片钳实验记录瞬时转染bestrophin-1和cftr的hek293细胞，观察pc孵育时电流的变化。cftr
inh-172(10.0μm)和单宁酸(100.0μm)分别是上述两种离子通道的特异性抑制剂。如图1e所示，cftr通道和bestrophin-1的所有电流都被相应的特定抑制剂完全抑制，而100μm pc对它们的影响则可以忽略不计。因此，pc被鉴定为tmem16a的特异性抑制剂。
[0076]
用p-97拉拔器(sutter instruments,novato,usa)拉取在浴液中吸液电阻为3-5mω的硼硅酸盐玻璃电极。epc10放大器由pulse软件控制，带有digi lih1600接口(heka,lambrecht,germany)进行记录。数据在2.9khz低通滤波，在10khz采样。刺激方案包括从0mv的保持电位开始，持续150ms的电压台阶，从-80mv到 80mv的20mv的电压步幅钳制膜电压(mv)，然后在室温(22-25℃)保持-80mv。全细胞膜片钳实验的移液管液含cscl(130mm)、egta(10mm)、mgatp(1mm)、mgcl2·
6h2o(1mm)、hepes(10mm)，用csoh调至ph 7.3。用naoh制备含nacl(150mm)、mgcl2·
6h2o(1mm)、hepes(10mm)、葡萄糖(10mm)、甘露醇(10mm)、ph 7.4的浴液。使用ca-egta计算器v1.2在https://somapp.ucdmc.ucdav is.edu/pharm acolo gy/bers/maxch elato r/caegt a-nist.htm中计算游离ca
2
浓度。将标准cacl2溶液加入配制好的含600nm游离ca
2
的浴液(1m,sigma aldrich,st.louis,mo,usa)中至最终浓度为8.69mm，用csoh调至ph 7.4。用om815渗透计测定渗透压。移液管溶液和浴液溶液的渗透压值分别为290～300mosm/l和300～310mosm/l
[0077]
分子动力学模拟
[0078]
明确其确切的结合位点对于进一步的药理研究和药物开发具有重要意义。为了研究pc抑制tmem16a的机制，采用分子对接技术确定tmem16a与pc的结合位点。首先，我们构建了tmem16a的全原子钙结合态结构，并依次通过全局对接和精确对接进行分子对接。为了揭示pc与tmem16a相互作用模式的物理性质，我们计算了pc的静电表面电位(esp)。如附图2b所示，pc的酚羟基和氢原子分别是pc分子esp的最小和最大位点。以上结果表明，pc的酚羟基可能是pc抑制tmem16a阴离子通道的关键位点，这些酚羟基可能通过静电作用与孔上方的相关残基结合(附图2a)。
[0079]
tmem16a的钙结合结构(pdb:5oyb)被用作对接受体，首先，我们使用swiss-model来完成tmem16a.结构中缺失的短环使用autodock 4.2程序进行分子对接。使用autodock工具准备tmem16a与pc的对接文件。首先，极性氢被添加到tmem16a分子中，gasteiger电荷被分配。tmem16a保持刚性，而pc分子保持弹性。利用拉马克遗传算法确定配体的构象。全局搜索耗竭值设置为100。对接盒的大小显示在蓝色虚线框中。利用对接能量最低的结构分析pc
与tmem16a分子之间的相互作用模式。采用高斯03和multiwfn进行理论计算。静电表面电位数据由b3lyp/6-31g**级算法生成。通过vmd和开源pymol(https://pymol.org)对模型特征进行可视化和分析。在swissadme服务器上对pc机的分子特性进行了研究。
[0080]
定点突变：
[0081]
为了验证分子对接预测的结合位点，我们在结合口袋中选择了3个与pc有静电作用的位点进行定向丙氨酸突变，网站设计引物:http://www.genomics.agilent.com/primerdesignprogram。引物1(e624a):5'-ccggggcacacgcctccatccgg-3'，引物2:5'-ccggatggagcgtgtgccccgg-3'，引物3(d383a):5'-gtagctgcaggtcttggcacacagaggacacacat-3'，引物4:5'-atgtgcctctgtgccaagacctgcagctac'。引物5(r535a):5'-gccgtgactgtaaccgcgatgttggaccgcacc-3'，引物6:5'-gtgcggtccaacatcgcggttacagtcacggc-3'。引物的合成和纯化由sangon biotech co.，ltd(sangon,shanghai,china)完成。采用fast mutagenesis system kit(fm111-02,transgen，北京，中国)进行定点诱变实验。得到突变型tmem16a(d383a/r535a/e624a)，并将得到的突变型tmem16a质粒转染到hek293细胞上，并进行电生理实验，测试原花青素对三重突变体的抑制作用。原花青素对三重突变体的敏感性较野生型tmem16a显著降低，ic
50
＝280.93
±
16.18μm,约为野生型的28倍(附图2d)。这些结果表明，d383、r535和e624可能是pc与tmem16a结合的关键位点。pc与tmem16a的相互作用模式为pc的药物设计提供了分子结构上的指导方案。
[0082]
实施例2、纳米粒子的制备
[0083]
在此公开一种纳米粒子，所述纳米药物是两亲性分子与亲水性的药物(tmem16a抑制剂原花青素)以及共轭聚合物共同组装而成的；以提高亲水性药物在血液中的稳定性以及肿瘤部位的富集效果；
[0084]
本发明使用的共轭聚合物为通过化学结构调控使其在近红外光区域有较强吸收并且具有较高光热效率的共轭高分子。共轭聚合物由于其能级可调，光学稳定性强，光吸收效率高等优点，近年来在光学、电学等领域得到了广泛的关注。
[0085]
本实施例中所使用的温度响应性两亲性分子为二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)，其相变温度在41℃左右，非温度响应性两亲性分子为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dspe-peg-nh2)，其dspe为脂肪链为疏水性端，peg为亲水端；
[0086]
本实施例中所使用的药物为原花青素，该药物是tmem16a通道的抑制剂，释放该药物可以抑制tmem16a通道的开放和表达水平，从而可以治疗该离子通道相关的疾病。
[0087]
本实施例具体操作方法如下(图3所示的流程图)：
[0088]
将0.5mg pdpp，3mg dspe-peg，溶解于1ml四氢呋喃；另将7mg dppc，溶解于100ul的二氯甲烷中，超声30min；将二者混合在一起30min；
[0089]
将混合物添加到1ml超净水当中，超声10min；
[0090]
将悬浮液避光，搅拌5h，同时通气除去四氢呋喃和二氯甲烷，之后通过0.22μm过滤器，得到空载纳米粒子cpns-pc；
[0091]
将滤液加热至60℃，加入0.02mg pc，并且搅拌10min，之后超声处理30min；通过0.22μm过滤器；
[0092]
将滤液超滤浓缩,得到纳米粒子cpns-pc。
[0093]
图4为制得的空载纳米粒子、载药纳米粒子和原花青素的紫外可见吸收光谱。
[0094]
图5为制得的纳米粒子的粒径表征以及透射电镜图。a为纳米粒子cpns的透射电镜图，b为纳米粒子cpns-pc和cpns的水合粒径图，c为纳米粒子cpns-pc的透射电镜图。
[0095]
实施例3、纳米粒子在治疗小鼠异植肺腺癌肿瘤中的应用
[0096]
本实施例是利用纳米粒子可控释放tmem16a通道抑制剂，进而抑制tmem16a通道的开放和tmem16a在肺腺癌细胞的表达水平，以此为机制来治疗离子通道表达过量或开放引起的相关疾病，例如：抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移。
[0097]
tmem16a多种肺癌细胞系中ano1的表达都有上调，在病人的肺腺癌标本中通过免疫组织化学实验发现ano1通道过表达占77.3％，通过实验发现通过抑制人肺癌细胞中tmem16a通道可以抑制肺癌的生长和侵袭。在tmem16a高表达的癌细胞中，患者体内一般会出现表达量或者过度开放的情况，而特异性抑制tmem16a通道的抑制剂会抑制通道的电流，且能够下调tmem6a通道的表达，是治疗癌症的一种有效方式。实施例所选取的小分子药物原花青素经过研究表明属于该通道的一种特异性抑制剂，因而对于激活该通道治疗相关疾病具有非常有效的作用。
[0098]
本实施例通过制造小鼠荷瘤模型，通过尾静脉注射的方式将载药纳米粒子递送到小鼠血液循环系统，递药24h后，808nm的近红外光照射肿瘤部位，使富集在肿瘤部位的载药纳米粒子释放tmem16a通道的抑制剂小分子-原花青素，在肿瘤部位达到一个较高的治疗浓度，实现了远程智能可控释放药物治疗。本实验设置了空白对照组、空载纳米粒子对照组、光照对照组以及阳性药顺铂对照组。
[0099]
本实施例具体操作方法如下：
[0100]
采用balb/c小鼠，通过在右前肢侧皮下注射6
×
106la795细胞，建立la795肿瘤异种移植模型小鼠；
[0101]
当肿瘤体积达到约150mm3时，通过尾静脉注射的方式将载药纳米粒子(200μl，14.37mg/kg，以pc标定)，原花青素水溶液(200μl，14.37mg/kg)，pbs等递送到小鼠血液循环系统中；cisplatin(200μl，6.5mg/kg)
[0102]
载药纳米粒子组小鼠于给药24小时后对肿瘤部位，使用808nm的近红外激光，以1w的功率光照五分钟使用游标卡尺每3天测量一次肿瘤体积的长度和宽度，并根据标准公式计算肿瘤体积；
[0103]
测量并统计不同荷瘤小鼠的肿瘤生长情况；
[0104]
如图6所示(其中的cpns(-)指未受近红外照射的空载纳米粒子、cpns( )指受近红外照射的空载纳米粒子、cpns-pc(-)指未受近红外照射的载药纳米粒子、cpns-pc( )指受近红外照射的载药纳米粒子、cisplatin阳性药物顺铂、pc指原花青素)，经过808nm激光照射后的载药纳米粒子组，肿瘤生长明显抑制，证明cpns-pc在808光照下释放了原花青素，于纳米粒子的尺寸优势，载药纳米粒子优先富集到肿瘤部位(附图9)，再光照释放后使得与原花青素在肿瘤部位选择性释放，达到更高的治疗有效浓度，获得更好的抑制效果。并且本专利提供的纳米抑制剂治疗方法抑制肺腺癌增殖迁移具有毒副作用小的特点，在治疗期间不影响小鼠的体重(附图7)，不引起小鼠死亡(附图8)，是一种安全有效的远程智能调控和治疗肺腺癌的方法。
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以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实
施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本技术欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本技术中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。