用于眼表组织染色的染色剂滴眼液的制作方法

1.本发明涉及医药领域。具体地，本发明涉及用于眼表组织染色的染色剂滴眼液。


背景技术：

2.临床上经常使用眼表的染色来帮助诊断各种眼部疾病，用于此目的的染料包括荧光素钠、丽丝胺绿和虎红等相关染料。目前，主要是将这些染料制作成试纸，帮助检查者诊断角膜磨损、感染、眼睛受伤或创伤、眼睛中的异物、异常泪液产生和干眼，包括严重的干眼如干燥性角膜结膜炎。
3.因染色剂试纸条是染色剂以粉末的形式附着于试纸条上面，所以在使用过程中需滴加一或两滴生理盐水在试纸条上以重新溶解染色剂。然而，这种溶解是在定量体积下瞬时溶解染色剂，因为时间的限制，染色剂还未完全溶于生理盐水中或生理盐水中含有一定剂量的固体染料，就已经滴入患者的眼睛了，对于患者而言，染料滴通常是通过试纸条与眼表之间直接接触的，因此，除了试纸条的刺激之外，还要承受一定剂量的固体染料在眼表里面的不适感。进一步的，对于检查者而言，由于染色剂短时间内不能完全溶解，导致染色剂液体含量的不稳定，不能在使用前获得恒定且可测量的染料浓度导致这种操作方式无法定量，会造成的浓度不准确，从而导致测量结果不准确。更进一步的，试纸在运输储存使用过程中容易受到操作者的影响，进而产生产品的卫生风险。
4.目前国内临床上所用的染色剂试纸条以荧光素钠染色剂试纸条为主，因荧光素钠染色剂是偏碱性染料，在水溶液中以碱性的形式。正常人眼泪液的ph在6.5-7.5之间，泪液的ph太高或太低都会患者的不适；而荧光素钠试纸条在使用过程中是用生理盐水或注射用水来溶解，生理盐水或注射用水只是起到了溶解的作用，并未起到调节ph的作用，因此荧光素钠试纸条的染色剂滴眼液滴以碱性形式滴入到人眼组织中去，患者在此过程中承受一定的不舒适感。
5.国外在临床上除使用荧光素钠试纸外，还使用荧光素钠溶液用于检测眼表组织的损伤情况，专利us6218428b1公开了一种眼科组合物，该组合物是局部麻醉剂、散瞳剂和染料的混合物。该组合物可用于：1)麻醉角膜以减轻疼痛、测量眼压；2)给角膜和结膜染色以检测病变；3)扩大瞳孔以检查视神经、黄斑、视网膜、视网膜血管和周围眼底。专利us20171581418公开了荧光素钠和盐酸丁氧普鲁卡因的配比，以及该滴眼剂的应用范围和保质期。在染色剂溶液中加入一定量的麻醉成分，虽然能够减轻患者的痛苦，但也同时带来诸多不良因素，不同患者对麻醉成分的副作用不同，而不同患者用完麻醉后引起的不良反应或不舒适感也不同，而且在荧光素钠溶液中加入一定量的麻醉成分，在眼表检查过程中，麻醉药物会抑制泪液分泌，尤其是在判断是否干眼的检查过程中，因使用含有麻醉成分的荧光素钠溶液进行染色后，就无法获知正常泪液的分泌情况，给眼表检测结果带来误差。
6.因此，针对现有的用于眼表染色的染色技术改进实为必要。


技术实现要素：

7.本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了染色剂滴眼液及其制备方法和眼表组织染色的方法，该染色剂滴眼液对眼表组织染色清晰，可直接滴加于眼表组织，避免了试纸条与眼表接触引起不适感，染色剂含量稳定，使用者耐受性良好，保质期长。
8.在本发明的一个方面，本发明提出了一种染色剂滴眼液。根据本发明的实施例，基于所述染色剂滴眼液的总质量，所述染色剂滴眼液包括：0.03～1.5质量％的染色剂；0.1～1质量％的润滑剂；0.01～5质量％的保湿剂；0.05～2质量％的ph值调节剂；和水。
9.发明人考虑到现有用于眼表染色的染色技术的种种弊端，为了改善用户体验，提高检测精度，在业界首次提出用染色液滴剂替代现有用于眼表染色的染色技术的想法。尽管在本发明之前，具备缓解眼部疲劳，减轻眼部疼痛等功能的滴眼液已广泛存在于市面，但是，此滴眼液与本发明的染色剂滴眼液相比，具有以下显著的区别：现有的染色剂滴眼液在组合物上有两种形式，一种是染色剂滴眼液中加入了局部麻醉剂或表面麻醉剂，以在眼部检查过程中减轻患者的疼痛，这种染色剂滴眼液虽然在眼部各项检查过程中使患者免受痛苦，但是不能避免在眼部检查完成后，麻醉剂自身的药物不良反应给患者带来的各种不舒适感；另一种滴眼剂是不加入含有表面麻醉或局部麻醉的成分，组合物成分简单，产品在储存过程宜被细菌污染，不易长期存放，也不能解决患者在眼表染色过程中带来的不舒适感；有的染色滴眼剂一次性使用不能满足检查者的要求，需要多次使用才能满足检查者的要求。正是因为两者之间的显著技术差异，本领域的技术人员始终未能实现现有用于眼表染色的染色技术到染色液滴剂的替代。
10.对于本发明的发明人而言，在实现现有用于眼表染色的染色技术到染色液滴剂的替代过程中，也面临过如下不成功的尝试：为了改进现有滴眼剂技术的缺陷，避免给患者带来不必要的痛苦，发明人放弃了在染色滴眼剂中加入表麻活性成分；发明人仿制人眼泪液的功效制备染色剂滴眼液，使患者在使用过程中有很好的耐受性。发明人通过添加ph值调节剂，使染色剂滴眼液渗透压与人眼泪液等渗，溶液ph与泪液的ph相近；向溶液中加入适量的润滑剂，使润滑剂弥散于眼球与眼睑之间，在眼表检查过程中使眼球与眼睑之间湿润而易于运动，以增加患者眼部的舒适度；向溶液中加入了保湿剂，在眼表检查过程中保护患者的角膜细胞，以防止在检查过程中出现“眼干”现象。尽管如此，发明人曾尝试在荧光素钠的水溶液中加入叶黄素，以作为角膜细胞的保湿剂，因叶黄素能够很好的保护角膜细胞，提高视力，而且在荧光素钠水溶液中加入叶黄素，能够增强眼表组织的染色性能；为使染色剂滴眼液能够达到人眼泪液的功效，使用者有很好的舒适感。但是，溶液不易长期储存，受细菌感染。发明人曾进行多次染色剂滴眼液的配制与调整，但未达到预期的效果。以上事实充分说明，本领域的技术人员并不能轻易的直接实现将现有用于眼表染色的染色技术到染色液滴剂的完全替代。
11.在此基础上，发明人进一步优化了染色剂滴眼液中染色剂中润滑剂、保湿剂、ph值调节剂和水的比例关系，得到上述较优配方，由此，可以起到润湿眼表组织的作用，提高使用者的耐受性，避免产生不适感，保护角膜细胞，避免出现“眼干”现象。若染色剂含量过高，尤其是丽丝胺绿的含量过高，易对眼表产生刺激，进而造成眼表组织损伤；若染色剂含量过低，眼表组织染色不明显，不利于观察。若润滑剂的含量过高，染色剂滴眼液的渗透压不易
与人眼泪液的渗透压等渗，染色剂溶液的渗透压过高或过低，都会引起使用者的不舒适感；若染色剂含量过低，不利于起到较好的润滑效果。若保湿剂含量过高，染色剂滴眼液流动性差，与人眼泪液的相容性不好，染色剂很难通过泪膜进一步染色眼表组织；若保湿剂含量过低，不利于起到较好的保湿效果。
12.根据本发明的实施例，上述染色剂滴眼液还可以具有下列附加技术特征：
13.根据本发明的实施例，所述染色剂选自荧光素钠、丽丝胺绿或虎红。现有的试纸大多采用荧光素钠作为染色剂，主要是其他染色剂(例如丽丝胺绿或虎红)对眼睛刺激性大。本发明提出了多种类型的染色剂滴眼液，可以因不同的染色剂对眼表组织不同的部位染色效果不同。使用荧光素钠染色剂滴眼液，主要用于检查角膜上皮细胞损伤，如角膜溃疡、角膜擦伤及角膜炎等。使用丽丝胺绿染色剂滴眼液或虎红染色剂滴眼液，用于结膜染色，主要染色眼表上皮细胞已死亡或衰变的细胞，当泪膜粘液层遭到破坏时也可染色，染色组织的颜色易分辨；市面现有的荧光素钠试纸和荧光素钠滴眼液，对角膜上皮细胞有较好的染色效果，对结膜或球结膜不染色或染色效果差，这是由于荧光素钠自身的结构性质所决定。而本发明增加了用于结膜或球结膜染色的丽丝胺绿染色剂滴眼液和虎红染色剂滴眼液，增加了使用者在用于眼表染色的适用范围，因此使用本发明的技术，实现了对整个眼表组织进行染色。在眼表染色方面，检测手段更专业，检测结果更加精准，细化。
14.根据本发明的实施例，所述润滑剂选自山梨醇酯、吐温、烷基糖苷和高分子聚乙醇类化合物的至少之一。由此，可以起到润滑角膜的作用，且不损伤眼部组织。在一些优选实施例中，润滑剂选自选自聚乙二醇2000和聚乙二醇8000的至少之一，其效果更佳。
15.根据本发明的实施例，所述保湿剂选自硫酸软骨素、透明质酸钠、卡波姆、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、氨基酸的至少之一。由此，可以起到角膜保湿的作用，且不损伤眼部组织。在一些优选实施例中，保湿剂选自硫酸软骨素，其效果更佳。
16.根据本发明的实施例，基于所述染色剂滴眼液的总质量，保湿剂的含量为0.2～0.8质量％。由此，可以更好地保护患者的角膜细胞，以防止在检查过程中出现“眼干”现象
17.根据本发明的实施例，所述ph值调节剂选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸氢钠、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、酒石酸、酒石酸钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、三乙醇胺、盐酸和磷酸中的至少一种。在一些优选实施例中，ph值调节剂选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠的至少之一，其效果更佳。
18.根据本发明的实施例，基于所述染色剂滴眼液的总质量，ph值调节剂的含量为0.3～2质量％。由此，染色剂滴眼液的ph值与泪液的ph值接近，从而避免眼部产生不适感。
19.根据本发明的实施例，所述防腐剂选自苯扎氯铵、苯扎溴铵、三氯叔丁醇和山梨醇的至少之一。由此，可以延长染色剂滴眼液的保质期。
20.根据本发明的实施例，所述染色剂滴眼液进一步包括：0.01～0.5质量％的防腐剂。由此，可以延长保质期。在一些优选实施例中，防腐剂的含量为0.01～0.05质量％。
21.根据本发明的实施例，所述染色剂选自荧光素钠，所述荧光素钠的含量为0.03～1.2质量％，所述保湿剂的含量为0.2～1质量％，所述润滑剂的含量为0.6～1质量％，所述ph值调节剂的含量为1～2质量％，所述防腐剂的含量为0.02～0.04质量％，补水至100质量％。针对荧光素钠染色剂，发明人经过大量实验得到上述较优的染色剂滴眼液组成，由
此，该染色剂滴眼液对眼表组织染色清晰，具有较好的润滑保湿效果，使用者耐受性良好，保质期长。
22.根据本发明的实施例，所述染色剂选自丽丝胺绿，所述丽丝胺绿的含量为0.05～1.3质量％，所述保湿剂的含量为0.2～0.8质量％，所述润滑剂的含量为0.6～0.8质量％，所述ph值调节剂的含量为0.4～0.8质量％，所述防腐剂的含量为0.02～0.06质量％，补水至100质量％。针对丽丝胺绿染色剂，发明人经过大量实验得到上述较优的染色剂滴眼液组成，由此，该染色剂滴眼液对眼表组织染色清晰，具有较好的润滑保湿效果，使用者耐受性良好，保质期长。
23.根据本发明的实施例，所述染色剂选自虎红，所述虎红的含量为0.07～1.1质量％，所述保湿剂的含量为0.2～0.6质量％，所述润滑剂的含量为0.3～0.6质量％，所述ph值调节剂的含量为0.4～0.8质量％，所述防腐剂的含量为0.02～0.05质量％，补水至100质量％、针对虎红染色剂，发明人经过大量实验得到上述较优的染色剂滴眼液组成，由此，该染色剂滴眼液对眼表组织染色清晰，具有较好的润滑保湿效果，使用者耐受性良好，保质期长。
24.根据本发明的实施例，所述染色剂滴眼液的ph值为6.5～7.5。该染色剂滴眼液与泪液的ph值接近，从而避免眼部产生不适感。
25.根据本发明的实施例，所述染色剂滴眼液封装于注射器中，所述注射器的针头尖端上连接有弯头，所述弯头与所述针头呈100～140
°
。传统注射器的针头均为直的，不利于滴加染色剂滴眼液，且容易增加使用者的恐惧感。为此，在针头尖端连接弯头，该弯头为径直的，与针头尖部呈100～140
°
。由此，便于滴加，且减少使用者的恐惧感。
26.在本发明的另一方面，本发明提出了一种制备前面所述染色剂滴眼液的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将所述染色剂、润滑剂、保湿剂、ph值调节剂、防腐剂和水进行混合，得到所述染色剂滴眼液。由此，根据本发明实施例的方法所得染色剂滴眼液对眼表组织染色清晰，可直接滴加于眼表组织，与眼表组织不接触，避免了试纸条与眼表接触引起不适感，染色剂含量稳定，使用者耐受性良好，保质期长。并且，该制备方法操作简便，用时短，成本低，适于规模化生产。
27.根据本发明的实施例，所述方法包括：将所述润滑剂和水加热至溶解，再加入所述保湿剂，冷却，得到第一混合物；向所述第一混合物中加入所述防腐剂，待完全溶解后，再加入所述染色剂和ph值调节剂，将溶液调制成ph值为6.5～7.5，得到第二混合物；将所述第二混合物进行除菌过滤，并将所得滤液进行高温灭菌及灌装，得到所述染色剂滴眼液。由此，以便于使各组分充分溶解并混匀，形成均一混合液。
28.根据本发明的实施例，所述除菌过滤是将所述第二混合物在小于0.3mpa压力下通过0.22～0.45μm滤膜过滤。由此，可以有效地除菌。
29.根据本发明的实施例，所述高温灭菌是在110～130℃下进行20～40分钟。由此，可以高效除菌，且避免对组分造成损失。
30.在本发明的又一方面，本发明提出了一种眼表组织染色方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将前面所述染色剂滴眼液滴加在眼表组织上。该方法以非诊断或治疗为目的，可以清晰地对眼表组织染色，可直接滴加于眼表组织，与眼表组织不接触，避免了试纸条与眼表接触引起不适感，使用者耐受性良好。
31.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
32.本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
33.图1显示了根据本发明一个实施例的注射器结构示意图；
34.图2显示了根据本发明一个实施例的实施例3和对比例2的染色剂滴眼液静置5s后的实物图；
35.图3显示了根据本发明一个实施例的实施例3和对比例2的染色剂滴眼液静置10s后的实物图；
36.图4显示了根据本发明一个实施例的实施例3和对比例2的染色剂滴眼液静置25s后的实物图。
具体实施方式
37.下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
38.实施例1
39.在该实施例中，制备荧光素钠染色剂滴眼液1(ph＝7.0)。
40.1、配方
41.表1荧光素钠染色剂滴眼液1配方
42.溶液1w/w(％)荧光素钠1.1％硫酸软骨素0.6吐温-200.8苯扎氯铵0.020.4％盐酸1％注射用水余量
43.2、制备方法：
44.①
按上述配方称量物料。
45.②
将注射用水倒入配制容器内，将该容器置于40℃水浴中，加入上述所述克数的硫酸软骨素，搅拌5分钟，后加入上述克重的吐温-20、苯扎氯铵，搅拌3分钟，成为均一溶液，加入上述克重的荧光素钠，搅拌10分钟，加入上述克重的0.4％的盐酸，成为ph值为7.0的溶液。
46.③
将溶液用水循环式真空泵、一次性过滤器进行除杂除菌过滤，真空压力为0.2mpa，滤膜孔径为0.22μm，成为纯净染色剂滴眼液。
47.④
将上述纯净染色剂滴眼液置于真空压力灭菌器中，在121℃时灭菌30分钟后冷
却至室温。得到无菌的用于眼表染色的染色剂滴眼液。
48.⑤
灌装：灌装前内包材臭氧消毒时间为30分钟，灌装室的紫外空间杀菌及灌装设备组件消毒灭菌时间为30分钟，操作员经过无菌操作培训后上岗操作。灌装时采用自动灌装机进行灌装，灌装机自动将液体装在0.1ml的预灌封注射器内，每支预灌封注射器配有一个一次性无菌使用滴加装置针。
49.一次性无菌使用滴加装置针结构参见图1，预灌封注射器由底座1、连接部2、针头3、弯头4和护套组成5组成。针头3的长度为18cm～24cm，外径为0.6～0.8mm。弯头4与针头3连接处的角度为120，弯头4长度为3～5mm。
50.⑥
泡罩包装：包装前将包装材料pvc硬片和特卫强纸用环氧乙烷灭菌柜进行灭菌。环氧乙烷灭菌时间为7-8h，灭菌温度为40-50℃，湿度为45-65％rh，排残3-6次，排残间隔为20-60分钟。采用自动泡罩机进行封包包装，得到用于眼表染色的染色剂滴眼液。
51.实施例2
52.在该实施例中，制备荧光素钠染色剂滴眼液2(ph＝6.5)。
53.1、配方
54.表2荧光素钠染色剂滴眼液2配方
55.溶液2w/w(％)荧光素钠0.8羟丙基甲基纤维素0.25聚乙二醇-40000.65苯扎溴铵0.02520％磷酸1.5％注射用水余量
56.2、制备方法：
57.①
按上述配方称量物料。
58.②
将注射用水的3/4倒入一容器内，置于0-5℃冷藏至12h，后将其余1/4注射用水倒入配制容器内，将该容器置于80℃水浴中，加入上述所述克数的羟丙基甲基纤维素，搅拌8分钟，使羟丙基甲基纤维素充分溶胀，再加入预冷的3/4注射用水，搅拌6分钟，后加入上述克重的聚乙二醇4000、苯扎溴铵，搅拌4分钟，成为均一溶液，加入上述克重的荧光素钠，搅拌5分钟，加入上述克重的20％的磷酸，成为ph值为6.5的溶液。
59.③
将溶液用水循环式真空泵、一次性过滤器进行除杂除菌过滤，真空压力为0.2mpa，滤膜孔径为0.22μm，成为纯净染色剂滴眼液。
60.④
将上述纯净染色剂滴眼液置于真空压力灭菌器中，在121℃时灭菌30分钟后冷却至室温。得到无菌的用于眼表染色的染色剂滴眼液。
61.⑤
灌装：灌装前内包材臭氧消毒时间为30分钟，灌装室的紫外空间杀菌及灌装设备组件消毒灭菌时间为30分钟，操作员经过无菌操作培训后上岗操作。灌装时采用自动灌装机进行灌装，灌装机自动将液体装在0.1ml的预灌封注射器内，每支预灌封注射器配有一个一次性无菌使用滴加装置针。
62.⑥
泡罩包装：包装前将包装材料pvc硬片和特卫强纸用环氧乙烷灭菌柜进行灭菌。环氧乙烷灭菌时间为7-8h，灭菌温度为40-50℃，湿度为45-65％rh，排残3-6次，排残间隔
20-60分钟。采用自动泡罩机进行封包包装，得到用于眼表染色的染色剂滴眼液。
63.实施例3
64.在该实施例中，制备丽丝胺绿染色剂滴眼液3(ph＝7.0)。
65.1、配方
66.表3丽丝胺绿染色剂滴眼液3配方
[0067][0068]
2、制备方法：
[0069]
①
按上述配方称量物料。
[0070]
②
将注射用水的3/4倒入一容器内，置于0-5℃冷藏至12h，后将其余1/4注射用水倒入配制容器内，将该容器置于80℃水浴中，加入上述所述克数的羟丙基甲基纤维素，搅拌10分钟，使羟丙基甲基纤维素充分溶胀，再加入预冷的3/4注射用水，搅拌8分钟，后加入上述克重的聚乙二醇8000、苯扎溴铵，搅拌4分钟，成为均一溶液，加入上述克重的丽丝胺绿，搅拌6分钟，加入上述克重的预先配制好的磷酸缓冲液，成为ph值为7.0的溶液。
[0071]
③
将溶液用水循环式真空泵、一次性过滤器进行除杂除菌过滤，真空压力0.15mpa，滤膜孔径为0.45μm，成为纯净染色剂滴眼液。
[0072]
④
将上述纯净染色剂滴眼液置于真空压力灭菌器中，在121℃时灭菌30分钟后冷却至室温。得到无菌的用于眼表染色的染色剂滴眼液。
[0073]
⑤
灌装：灌装前内包材臭氧消毒时间为30分钟，灌装室的紫外空间杀菌及灌装设备组件消毒灭菌时间为30分钟，操作员经过无菌操作培训后上岗操作。灌装时采用自动灌装机进行灌装，灌装机自动将液体装在0.1ml的预灌封注射器内，每支预灌封注射器配有一个一次性无菌使用滴加装置针。
[0074]
⑥
泡罩包装：包装前将包装材料pvc硬片和特卫强纸用环氧乙烷灭菌柜进行灭菌。环氧乙烷灭菌时间为7-8h，灭菌温度为40-50℃，湿度为45-65％rh，排残3-6次，排残间隔20-60分钟。采用自动泡罩机进行封包包装，得到用于眼表染色的染色剂滴眼液。
[0075]
实施例4
[0076]
在该实施例中，制备丽丝胺绿染色剂滴眼液4(ph＝6.5)。
[0077]
1、配方
[0078]
表4丽丝胺绿染色剂滴眼液4配方
[0079][0080]
2、制备方法：
[0081]
①
按上述配方称量物料。
[0082]
②
将注射用水倒入配制容器内，将该容器置于50℃水浴中，加入上述所述克数的透明质酸钠，搅拌7分钟，加入上述克重的吐温-80、山梨醇，搅拌6分钟，成为均一溶液，加入上述克重的丽丝胺绿，搅拌9分钟，加入上述克重的预先配制好的磷酸缓冲液，成为ph值为6.5的溶液。
[0083]
③
将溶液用水循环式真空泵、一次性过滤器进行除杂除菌过滤，真空压力为0.15mpa，滤膜孔径为0.45μm，成为纯净染色剂滴眼液。
[0084]
④
将上述纯净染色剂滴眼液置于真空压力灭菌器中，在121℃时灭菌30分钟后冷却至室温。得到无菌的用于眼表染色的染色剂滴眼液。
[0085]
⑤
灌装：灌装前内包材臭氧消毒时间为30分钟，灌装室的紫外空间杀菌及灌装设备组件消毒灭菌时间为30分钟，操作员经过无菌操作培训后上岗操作。灌装时采用自动灌装机进行灌装，灌装机自动将液体装在0.1ml的预灌封注射器内，每支预灌封注射器配有一个一次性无菌使用滴加装置针。
[0086]
⑥
泡罩包装：包装前将包装材料pvc硬片和特卫强纸用环氧乙烷灭菌柜进行灭菌。环氧乙烷灭菌时间为7-8h，灭菌温度为40-50℃，湿度为45-65％rh，排残3-6次，排残间隔20-60分钟。采用自动泡罩机进行封包包装，得到用于眼表染色的染色剂滴眼液。
[0087]
实施例5
[0088]
在该实施例中，制备虎红染色剂滴眼液5(ph＝6.8)。
[0089]
1、配方
[0090]
表5虎红染色剂滴眼液5配方
[0091] w/w(％)虎红1卡波姆9800.35烷基糖苷080.55三氯叔丁醇0.025三乙醇胺0.45注射用水余量
[0092]
2、制备方法：
[0093]
①
按上述配方称量物料。
[0094]
②
将注射用水倒入配制容器内，将该容器置于50℃水浴中，加入上述所述克数的卡波姆980，搅拌30分钟，冷却至室温12h，后加入上述克重的烷基糖苷08、三氯叔丁醇，搅拌20分钟，成为均一溶液，加入上述克重的虎红，搅拌15分钟，加入上述克重的三乙醇胺，成为ph值为6.8的溶液。
[0095]
③
将溶液用水循环式真空泵、一次性过滤器进行除杂除菌过滤，真空压力为0.25mpa，滤膜孔径为0.45μm，成为纯净染色剂滴眼液。
[0096]
④
将上述纯净染色剂滴眼液置于真空压力灭菌器中，在121℃时灭菌30分钟后冷却至室温。得到无菌的用于眼表染色的染色剂滴眼液。
[0097]
⑤
灌装：灌装前内包材臭氧消毒时间为30分钟，灌装室的紫外空间杀菌及灌装设备组件消毒灭菌时间为30分钟，操作员经过无菌操作培训后上岗操作。灌装时采用自动灌装机进行灌装，灌装机自动将液体装在0.1ml的预灌封注射器内，每支预灌封注射器配有一个一次性无菌使用滴加装置针。
[0098]
⑥
泡罩包装：包装前将包装材料pvc硬片和特卫强纸用环氧乙烷灭菌柜进行灭菌。环氧乙烷灭菌时间为7-8h，灭菌温度为40-50℃，湿度为45-65％rh，排残3-6次，排残间隔20-60分钟。采用自动泡罩机进行封包包装，得到用于眼表染色的染色剂滴眼液。
[0099]
实施例6
[0100]
染色剂滴眼液稳定性加速试验：
[0101]
将上述实施例1-5制成的溶液储存在稳定试验箱内，试验箱内温度：55℃
±
2℃，湿度：25％
±
5％；加速老化截至时间为92天。
[0102][0103]
92天后检测实施例1-5的性状，含量、ph、不溶性微粒、无菌，其结果如下所示。
[0104]
表6稳定性分析
[0105]
[0106][0107]
由上表可知，实施例1-5的溶液经过92天的加速老化试验之后，溶液的各项指标在试验前后均无发生变化，含量变化的波动是由于正常的检验误差引起的，含量微小变化属于正常范围之内，实施例1-5的溶液含量在加速试验前后是保持不变的。
[0108]
实施例7
[0109]
为了验证上述产品用于患者的耐受性，选取10名志愿患者进行临床研究，现报告如下：
[0110]
1材料与方法
[0111]
1.1观察对象：10名需要眼表染色的志愿者
[0112]
1.2所用材料：如以上实施例3中所述制备组合物，混合型眼表染色检测试纸(市售产品，天津晶明新技术开发有限公司生产)
[0113]
1.3使用方法：
①
将以上实施例3中所述制备组合物以50μl施与患者眼表组织并进行检测，则为试验组。
②
混合型眼表染色检测试纸按产品说明书对患者眼表进行检测，则为对照组。
②
采用随机的方式5名患者施与染色剂滴眼液检测，5名患者施与混合型眼表染色检测试纸检测。
[0114]
1.4观察指标：每位患者在眼表染色后记录所用产品对眼表的不适应感。主要有异物感和刺痛感。
[0115]
1.5观察结果如下：
[0116]
表7耐受性分析
[0117]
[0118][0119]
从上表中可以看出，实施例3中的染色剂滴眼液对患者进行眼表检测后，并无出现任何不良症状，提示本发明的染色剂滴眼液对患者的耐受性良好。
[0120]
发明人重复进行了实施例1、2、4和5的对比实验，其效果与实施例3接近。
[0121]
对比例1
[0122]
按照实施例3的方法制备染色剂滴眼液，区别在于，将羟丙基甲基纤维素替换为丙二醇，其他配比组成不变。其对比溶液组成如下：
[0123]
表8对比例1的配方
[0124][0125]
制备方法同实施例3。
[0126]
溶液渗透压测定试验：由实施例3制成的溶液、对比例1制成的溶液分别按照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则物理常数测定法中的0632渗透压摩尔浓度测定法测定，其结果如下：
[0127]
表9渗透压测定
[0128][0129]
依据药典，眼用溶液与泪液等渗，正常人眼泪液的渗透液压值在290-315mosmol/kg，渗透压太高或太低都会引起人眼的不适。对比例1由于采用丙二醇作为保湿剂，会造成染色剂滴眼液的渗透压远远低于人眼正常的渗透压值，以此施于眼表中，可能引起患者的不适。
[0130]
对比例2
[0131]
按照实施例3的方法制备染色剂滴眼液，区别在于，将聚乙二醇-8000改为聚乙烯醇(pva0588)，其他配比组成不变。其对比溶液组成如下：
[0132]
表10对比例2的配方
[0133][0134]
制备方法同实施例3。
[0135]
相容润滑性评价试验：
[0136]
为了评价本发明的染色剂滴眼液所用组分对眼表的染色性能，现采用如下方法：模拟将染色剂滴入人眼中，观察与泪液及时相融的程度，试验方法如下：
[0137]
①
将实施例3制成的溶液、对比例2制成的溶液分别装在预灌封注射器中，每支预灌封注射器配有一个一次性无菌使用滴加装置针。
[0138]
②
准备两支相同的试管，每支试装装有与人眼泪液相近的人工泪液(ph＝7.0，渗透压为300mosmol/kg)。
[0139]
③
试验方法：一次性无菌使用滴加装置针分别装入含有实施例3和对比例2的预灌封注射器中，同一时刻，使用每支预灌封注射器及装置针滴加18μl液滴，分别到两支试管
中，观察其下沉速度、液滴形态及与人工泪液相容的变化。
[0140]
④
观察实施例3及对比例2在5s、10s、25s时的变化。
[0141]
结果如图2、图3、图4所示。对比例2在5s至25s的过程中，沉降由下沉至上升，回至初始页面；实施例3在5s至25s的过程中，则一直在下沉，直至试管底部。由此，说明对比例2中采用聚乙烯醇作为润滑剂，制得的染色剂滴眼液在滴入人眼后，不易与泪液相容，需要患者不断的眨眼，才能使染色剂进入眼表组织。实施例3中采用聚乙二醇-8000作为润滑剂，制得的染色剂滴眼液在滴入人眼后，经过泪液直接进入眼表组织，从而快速对眼表组织进行染色。
[0142]
对比例3
[0143]
按照实施例3的方法制备染色剂滴眼液，区别在于，将丽丝胺绿的添加量改为2％，其他配比组成不变。其对比溶液组成如下：
[0144]
表11对比例3的配方
[0145][0146]
制备方法同实施例3。
[0147]
动物实验
[0148]
为了论证染色剂丽丝胺绿添加量的大小是否对眼表组织存在刺激性，现进行动物眼刺激试验，试验中选取6只新西兰兔，平均分成2组(对比例组、实施例组)，每组3只；雌雄不限，体重2.5-3.0kg，采用自身对照，动物左眼为试验眼，右眼为对照眼，使用对比例3、实施例3按0.1ml/眼的剂量对各自组的兔眼睛进行染色，然后分别于1h、24h、48h观察眼刺激，其结果如下：
[0149]
表12染色分析
[0150][0151]
从表中可以看出，将实施例3施予新西兰兔的眼睛中，并无出现任何不良症状，将对比例3施予新西兰兔的眼睛中，出现了轻度的结膜充血，结膜水肿的现象；对比例3与实施例3的不同之处在于增加了染色剂丽丝胺绿的量，由此可以看出，使用本发明的配方组成对眼部刺激小，使用安全。
[0152]
对比例4
[0153]
在该对比例中，按照下列方法制备染色剂滴眼液：
[0154]
1、配方
[0155]
表13对比例4的配方
[0156]
对比溶液4w/w(％)荧光素钠1.1硫酸软骨素0.6吐温-200.8苯扎氯铵0.02注射用水余量
[0157]
2、制备方法同实施例1。
[0158]
溶液ph测定试验：由实施例1制成的溶液、对比例4制成的溶液分别按照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则物理常数测定法中的0631ph测定法测定，其结果如下：
[0159][0160]
正常人眼泪液的ph应在6.5-7.5之间，溶液的ph太高或太低都会引起人眼的不适。荧光酸钠是偏碱性染料，在水溶液中的ph为8-9，对比例4中没有加入ph调节剂，而对比例4
中的其他组分对其溶液的ph并没有调节作用，因此会造成染色剂滴眼液的ph远远高于人眼泪液正常的ph，以此施于眼表中，可能引起患者的不适。
[0161]
对比例5
[0162]
在该对比例中，按照下列方法制备染色剂滴眼液：
[0163]
1、配方
[0164]
表14对比例5的配方
[0165]
对比溶液5w/w(％)荧光素钠0.8叶黄素0.25聚乙二醇-40000.6520％磷酸1.5％注射用水余量
[0166]
2、制备方法同实施例2。
[0167]
对比例6
[0168]
在该对比例中，按照下列方法制备染色剂滴眼液：
[0169]
1、配方
[0170]
表15对比例6的配方
[0171][0172][0173]
2、制备方法同实施例2。
[0174]
对比例7
[0175]
在该对比例中，按照下列方法制备染色剂滴眼液：
[0176]
1、配方
[0177]
表16对比例7的配方
[0178]
对比溶液2w/w(％)荧光素钠0.8羟丙基甲基纤维素0.25聚乙二醇-40000.6520％磷酸1.5注射用水余量
[0179]
2、制备方法同实施例2。
[0180]
无菌检查试验：
[0181]
由实施例2的染色剂滴眼液、对比例5的染色剂滴眼液、对比例6的染色剂滴眼液分别制成样品，置于室温25℃(湿度60％)中，于第1天，第7天，第14天，第28天，按照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则生物检查法1101无菌检查法中的直接接种法对第1天、第7天、第14天、第28天的样品分别进行无菌检查，阳性对照菌为金黄色葡萄球菌﹝cmcc(b)26 003﹞，检查上述三种溶液的无菌性能，其结果如下：
[0182]
表17无菌检测试验分析
[0183][0184]
对比例5、对比例7与实施例2相比没有加入防腐剂成分，对比例6与实施例2相比防腐剂的加入量超出了本发明的范围，由上表中可以看出，没有加入防腐剂的溶液不易长时间存放。防腐剂的加入量限于本发明的范围内为适宜，过量的防腐剂的加入只能造成物料的浪费，并不能加强溶液的无菌性能。
[0185]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0186]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。