转化植物及其制造和使用方法与流程

技术特征：
1.一种转化植物的方法，其包括提供核酸材料，所述核酸材料包含第一靶向序列和第二靶向序列，启动子序列，和外源核酸序列；和用所述核酸材料转化植物细胞中的叶绿体。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸材料进一步包含选择序列。3.根据权利要求1或2所述的方法，其进一步包括表达所述外源核酸序列，其中所述表达至少部分地发生在叶绿体中。4.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一靶向序列和第二靶向序列中的至少一者涉及位于染色体坐标之间的序列，所述染色体坐标选自trni-trna、trnm-trng、rrn16-rps12/7、tsca-psac、trnv-trna、rbcl-accd、rp132-trnl、3'rps12/7-trnv、peta-psbj、trn16/v-16srrna、trnfm-trng、atpb-rbcl、trn-trnr、ycf3-trns、rps7-ndhb、trny-gua-trnd-guc、trng-ucc-trnm-cau、trnt-trnl及其任何组合。5.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中启动子序列选自ppsba、prrn、prna、psaa、prbcl、camv35s、rbcs及其任何组合。6.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述核酸材料进一步包含至少一个增强子序列。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述至少一个增强子序列选自编码以下的序列：ggagg、rrn 5'utr、t7gene10 5'utr、lrbcl 5'utr、latpb 5'utr、烟草花叶病毒ω'5'utr(genbank:km507060.1)、lcry9aa2 5'utr、atpi 5'utr、psba 5'utr、cry2a、rrnb、rps16、petd、psba、paba及其任何组合。8.根据权利要求2到7中任一项所述的方法，其中核酸材料包含两个或更多个选择序列。9.根据权利要求2到8中任一项所述的方法，其中选择序列是或包含至少一个抗生素选择序列。10.根据权利要求8或9所述的方法，其中至少一个抗生素选择序列选自编码以下的核酸序列：壮观霉素耐药基因、链霉素耐药基因、卡那霉素耐药基因、庆大霉素耐药基因、新霉素耐药基因、β内酰胺耐药基因及其任何组合。11.根据权利要求2到10中任一项所述的方法，其中选择序列是或包含编码以下的核酸序列：his标签、gus uida lacz、绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、青色荧光蛋白及其任何组合。12.根据权利要求2到11中任一项所述的方法，其中选择序列是或包含黄色荧光蛋白(yfp，genbank:gq221700.1)、红色荧光蛋白(dsred，genbank:ky426960.1)或青色荧光蛋白(cfp，genbank:hq993060.1)。13.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述外源核酸材料是或包含rna寡核苷酸、dna寡核苷酸、质粒及其任何组合。14.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述核酸材料包含两个或更多个外源核酸序列。
gua-trnd-guc、trng-ucc-trnm-cau、trnt-trnl及其任何组合。34.根据权利要求31到33中任一项所述的植物，其中启动子序列选自ppsba、prrn、prna、psaa、prbcl、camv35s、rbcs及其任何组合。35.根据权利要求31到34中任一项所述的植物，其中所述核酸材料进一步包含至少一个增强子序列。36.根据权利要求35所述的植物，其中所述至少一个增强子序列选自编码以下的序列：ggagg、rrn 5'utr、t7gene10 5'utr、lrbcl 5'utr、latpb 5'utr、烟草花叶病毒ω'5'utr(genbank:km507060.1)、lcry9aa2 5'utr、atpi 5'utr、psba 5'utr、cry2a、rrnb、rps16、petd、psba、paba及其任何组合。37.根据权利要求32到36中任一项所述的植物，其中核酸材料包含两个或更多个选择序列。38.根据权利要求31到37中任一项所述的植物，其中选择序列是或包含至少一个抗生素选择序列。39.根据权利要求38所述的植物，其中至少一个抗生素选择序列选自编码以下的核酸序列：壮观霉素耐药基因、链霉素耐药基因、卡那霉素耐药基因、新霉素耐药基因、β内酰胺耐药基因及其任何组合。40.根据权利要求32到39中任一项所述的植物，其中选择序列是或包含编码以下的核酸序列：his标签、gus uida lacz、绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、青色荧光蛋白及其任何组合。41.根据权利要求40所述的植物，其中选择序列是或包含黄色荧光蛋白(yfp，genbank:gq221700.1)、红色荧光蛋白(dsred，genbank:ky426960.1)或青色荧光蛋白(cfp，genbank:hq993060.1)。42.根据权利要求31到41中任一项所述的植物，其中所述外源核酸材料是或包含rna寡核苷酸、dna寡核苷酸、质粒及其任何组合。43.根据权利要求31到42中任一项所述的植物，其中所述核酸材料包含两个或更多个外源核酸序列。44.根据权利要求31到43中任一项所述的植物，其中所述植物是粟或高粱。45.根据权利要求44所述的植物，其中所述植物是高粱。46.根据权利要求45所述的植物，其中所述第一靶向序列和第二靶向序列涉及位于trng-ucc-trnm-cau之间的序列。47.根据权利要求46所述的植物，其中所述第一和第二靶向序列具有分别与seq id no:1和seq id no:8或23具有至少80％同一性的序列。48.根据权利要求44所述的植物，其中所述植物是粟。49.根据权利要求48所述的植物，其中所述第一靶向序列和第二靶向序列涉及位于trny-gua-trnd-guc或trnt-trnl之间的序列。50.根据权利要求49所述的植物，其中所述第一和第二靶向序列具有分别与seq id no:15和seq id no:16具有至少80％同一性的序列。51.根据权利要求31到50中任一项所述的植物，其中所述外源核酸序列编码包含与根据genbank ref:dq672338的白细胞毒素a(ltka)蛋白具有至少80％同一性的序列或其片段
或变体的肽。52.根据权利要求51所述的植物，其中所述外源核酸序列包含编码选自由pl1、pl2、pl3、pl4、pl5组成的群组的ltka的至少一个区域的序列或其片段或变体。53.根据权利要求31到52中任一项所述的植物，其中所述外源核酸序列进一步包含终止序列。54.根据权利要求53所述的植物，其中所述终止序列包含编码rps16(genbank:mf580999.1)的序列或其一部分或片段。55.一种植物，其包含所述植物的所述叶绿体基因组中整合的外源核酸序列。56.根据权利要求55所述的植物，其中所述外源核酸序列稳定地整合在所述植物的所述叶绿体基因组中。57.根据权利要求55或56所述的植物，其中所述外源核酸序列至少部分地在叶绿体中表达。58.根据权利要求55到57中任一项所述的植物，其中所述第一靶向序列和第二靶向序列中的至少一者涉及位于染色体坐标之间的序列，所述染色体坐标选自trni-trna、trnm-trng、rrn16-rps12/7、tsca-psac、trnv-trna、rbcl-accd、rp132-trnl、3'rps12/7-trnv、peta-psbj、trn16/v-16srrna、trnfm-trng、atpb-rbcl、trn-trnr、ycf3-trns、rps7-ndhb、trny-gua-trnd-guc、trng-ucc-trnm-cau或trnt-trnl及其任何组合。59.根据权利要求55到58中任一项所述的植物，其中所述核酸材料包含两个或更多个外源核酸序列。60.根据权利要求55到59中任一项所述的植物，其中所述植物是粟或高粱。61.根据权利要求55到60中任一项所述的植物，其中所述外源核酸序列编码包含与根据genbank ref:dq672338的白细胞毒素a(ltka)蛋白具有至少80％同一性的序列或其片段或变体的肽。62.根据权利要求61所述的植物，其中所述外源核酸序列包含编码选自由pl1、pl2、pl3、pl4、pl5组成的群组的ltka的至少一个区域的序列或其片段或变体。63.一种植物，其包含外源核酸序列，其中至少一个外源核酸序列至少部分地在所述植物的所述叶绿体中表达。64.根据权利要求63所述的植物，其中所述外源核酸序列在所述植物的所述叶绿体中瞬时表达。65.根据权利要求63所述的植物，其中所述外源核酸序列整合在所述植物的所述叶绿体基因组中。66.根据权利要求65所述的植物，其中所述外源核酸序列稳定地整合在所述植物的所述叶绿体中。67.一种转化植物的方法，其包括提供核酸材料和载体，所述核酸材料包含第一靶向序列和第二靶向序列，启动子序列，和
外源核酸序列；和用所述核酸材料转化植物细胞中的叶绿体。68.根据权利要求67所述的方法，其中所述核酸材料缀合到所述载体。69.根据权利要求68所述的方法，其中所述载体是纳米颗粒。70.根据权利要求69所述的方法，其中所述纳米颗粒包含纳米管。71.根据权利要求70所述的方法，其中所述纳米管包含单壁纳米管。72.根据权利要求70或71所述的方法，其中所述纳米管是碳纳米管。73.根据权利要求69到72中任一项所述的方法，其中转化所述叶绿体包括使所述植物细胞与缀合到所述核酸材料的所述纳米颗粒接触。74.根据权利要求73所述的方法，其中所述转化外源核酸序列在所述植物细胞的所述叶绿体中瞬时表达。75.根据权利要求73所述的方法，其中所述转化外源核酸序列整合在所述植物细胞的所述叶绿体基因组中。76.根据权利要求75所述的方法，其中所述转化外源核酸序列稳定地整合在所述植物细胞的所述叶绿体基因组中。77.一种试剂盒，其包含：核酸材料，所述核酸材料包含第一靶向序列和第二靶向序列，启动子序列，选择序列；和至少一个外源核酸序列；和纳米颗粒载体。78.根据权利要求77所述的试剂盒，其中所述核酸材料缀合到所述纳米颗粒载体。79.根据权利要求78所述的试剂盒，其中所述纳米颗粒载体包含纳米管。80.根据权利要求79所述的试剂盒，其中所述纳米管包含单壁纳米管。81.根据权利要求79或80所述的试剂盒，其中所述纳米管是碳纳米管。82.一种向非人类动物施用包含抗原的改造植物的方法，所述方法包括向非人类动物施用根据权利要求31到66中任一项所述的免疫原性组合物。83.根据权利要求82所述的方法，其中施用是或包括饲喂。84.根据权利要求83所述的方法，其中所述非人类动物选自牛、山羊和鸡。85.根据权利要求83或84所述的方法，其中向所述非人类动物饲喂所述免疫原性组合物一长段时间。86.根据权利要求83到85中任一项所述的方法，其中向所述非人类动物饲喂所述免疫原性组合物超过1、2、3、4、5、6或7天的时间。87.根据权利要求83到85中任一项所述的方法，其中向所述非人类动物饲喂所述免疫原性组合物超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周的时间。88.根据权利要求82到84中任一项所述的方法，其中每天向所述非人类动物饲喂所述免疫原性组合物。89.根据权利要求82到84中任一项所述的方法，其中每周向所述非人类动物饲喂免疫
原性组合物。90.一种治疗非人类动物中的梭杆菌感染的一种或多种症状的方法，所述方法包括：施用免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含：包含外源核酸序列的植物，其中至少一个外源核酸序列至少部分地在所述植物的所述叶绿体中表达；并且其中所述外源核酸序列编码包含与根据genbank ref:dq672338的白细胞毒素a(ltka)蛋白具有至少80％同一性的序列或其片段或变体的肽。91.根据权利要求90所述的方法，其中梭杆菌感染的所述一种或多种症状包括腐蹄病和/或肝脓肿。92.根据权利要求90或91所述的方法，其中所述免疫原性组合物包含的与ltka蛋白具有至少80％同一性的肽的量为所述免疫原性组合物中的所述总可溶性蛋白的至少约0.5％。93.根据权利要求90到92中任一项所述的方法，其中在施用28天之后，与对照相比，所述非人类动物未表现出显著的疾病进展或表现出较慢的疾病进展。94.根据权利要求90到93中任一项所述的方法，其中与对照相比，所述非人类动物表现出梭杆菌感染的症状的延迟发作或症状的严重程度降低。95.根据权利要求94所述的方法，其中所述症状是腐蹄病，并且其中所述症状的特征在于所述受感染动物的趾间皮肤的疼痛性炎症、跛行、食欲不振、体重减轻和死亡中的一者或多者。96.根据权利要求90到95中任一项所述的方法，其中施用是或包括饲喂。97.根据权利要求90到96中任一项所述的方法，其中所述非人类动物选自牛、山羊和鸡。98.根据权利要求96或97所述的方法，其中向所述非人类动物饲喂所述免疫原性组合物一长段时间。99.根据权利要求96到98中任一项所述的方法，其中向所述非人类动物饲喂所述免疫原性组合物超过1、2、3、4、5、6、7天的时间(例如，连续多天)。100.根据权利要求96到98中任一项所述的方法，其中向所述非人类动物饲喂所述免疫原性组合物超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周的时间(例如，连续多周)。101.根据权利要求96到100中任一项所述的方法，其中每天向所述非人类动物饲喂所述免疫原性组合物。102.根据权利要求96到100中任一项所述的方法，其中每周向所述非人类动物饲喂免疫原性组合物。103.根据权利要求96到100中任一项所述的方法，其中连续地向所述非人类动物饲喂免疫原性组合物。104.根据权利要求90到103中任一项所述的方法，其中所述植物是粟或高粱。105.根据权利要求90到104中任一项所述的植物，其中所述外源核酸序列包含编码选自由pl1、pl2、pl3、pl4、pl5组成的群组的ltka的至少一个区域的序列或其片段或变体。

技术总结
本发明涉及一种转化的植物以及生产该植物或使用该植物或其组分的方法。物或使用该植物或其组分的方法。物或使用该植物或其组分的方法。


技术研发人员：F
受保护的技术使用者：雷利卡基因组公司
技术研发日：2020.08.27
技术公布日：2022/6/10