治疗或预防病毒性感冒的组合物及其用途的制作方法

1.本发明属于生物医药领域，具体地，涉及治疗或预防流感病毒引起的感冒或其他并发症的药物组合物及其用途，更具体地，涉及桉柠蒎制剂和药物联合。


背景技术：

2.病毒性感冒的病毒是引发感冒的元凶，如副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒和单纯疱疹病毒等，都是引发感冒的常见病毒。病毒性感冒开始发病时多为声音沙哑或鼻塞，然后流鼻涕、打喷嚏、咳嗽等上呼吸道症状变得越来越重，全身症状比较轻微，也可发烧，但体温不会太高。
3.流感病毒是正黏病毒的代表种，是引起流行性感冒的病原体，又称流行性感冒病毒。流感病毒分为甲、乙、丙三型，其中以甲型流感对人类威胁最大。目前危害严重的高致病性禽流感病毒多为h5、h7和h9亚型，即h5n1、h7n7、h9n2等，其中以h5n1亚型病死率高。而人流感病毒主要是h1、h2和h3亚型，且人对其中的h1和h3亚型易感。流感病毒在人类中已流行传播了300多年，每隔数年即有一次暴发流行，全球性的流感大流行则数十年暴发一次。流感流行每年可导致25万～50万例死亡，300万～500万重病例，全球约共有5～15％的人被感染。对于全球性流感大流行而言，“在流行期间中疫苗和抗病毒药物是降低发病率和死亡率最重要的应对措施”。但是目前全球每年可生产3亿人份三价流感疫苗，这仅够西方国家的流感预防之用，而不能满足全球性流感大流行的需求，而且流感病毒的抗原变异能力强，在新病毒株出现之前不可能研制疫苗。通常一个疫苗的大规模研发和制造至少需要六个月时间，即使到那时，由于全球生产能力有限及生产设施集中在发达国家，许多没有生产设施的国家在第1波流行期间将使用不到疫苗。所以当前疫苗能提供的保护率并不高。抗流感病毒药物不仅问世较晚，而且临床上速效、显效的治疗药物也较少，属于抗感染类药物中的小品种。目前，经美国食品和药物管理局(fda)批准正式上市的抗流感病毒药物有两类：(1)以金刚烷胺和金刚乙胺为代表的m2离子通道阻断剂。此类药只对甲型流感病毒有预防和治疗作用，研究表明药物具有神经毒性等毒副作用，而且由于广泛使用使得耐药株普遍存在，所以cdc建议此类药物不再用于预防流感病毒感染。(2)神经氨酸酶抑制剂，此类药的代表是奥斯他韦和扎拉米韦。此类药物对所有已知的人流感病毒及高致病性禽流感病毒均有效，但是近年来关于奥斯他韦的耐药株也不断有报道。
4.由此，开发一种能够有效预防、治疗并且安全无副作用的甲型流感的药物很有必要。


技术实现要素：

5.本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。
6.在本发明的第一方面，本发明提出了一种药物组合物在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物用于治疗或预防甲型h3流感病毒引起的流感病毒感冒或其并发症，所述药物组合物包括桉油精、柠檬烯和α-蒎烯。根据本发明实施例的药物组合物可以有
效缓解流感病毒症状，抑制流感病毒扩增，配方简单，三种物质均来源于天然，原料易得，价格低廉，毒性小，安全性高。
7.根据本发明的实施例，所述流感病毒感冒的病原体属于正黏液病毒中甲型流感病毒h3n2亚型；
8.根据本发明的实施例，所述流感病毒感冒的病原体属于正黏液病毒中甲型流感病毒h3n2的一种亚型a/汉防/359/95。
9.根据本发明的实施例，所述药物可以抑制所述病原体扩增。发明人惊奇地发现，桉油精、柠檬烯和α-蒎烯三种组分复配可以有效抑制流感病毒扩增，仅少量药物即可对流感病毒达到较强的抑制效果，且药物的半数有毒浓度与半数有效浓度差距较大，药物选择指数高，安全性高，利于用药或联合用药。
10.根据本发明的实施例，所述药物具有止咳、祛痰和/或抗炎作用。根据本发明实施例的用途，所述药物可以有效缓解咳嗽、咳痰以及红、肿、热、痛、机能损伤的炎症反应，减轻流感症状。
11.根据本发明的实施例，所述药物具有下列作用至少之一：改善气管粘膜纤毛运动，促进呼吸道内腺体分泌和增加呼吸道内粘液移动速度。发明人发现，所述药物可以通过改善呼吸道纤毛的运动增强呼吸道粘膜的异物清除能力，增强呼吸道粘附异物的能力，进而有效清除呼吸道内异物，缓解流感症状。
12.根据本发明的实施例，所述流行性感冒感冒的患者具有下列症状至少之一：咳嗽、咳痰、呼吸道粘膜清除能力降低和呼吸道粘附异物的能力降低。根据本发明实施例的用途，针对上述患者，药物组合物可以缓解具有上述症状患者的流感症状，减轻患者痛苦，同时特异性抑制病原体增殖，进而治疗或者预防甲型h3流感病毒引起的流行感冒和/或器并发症。
13.根据本发明的实施例，所述药物的选择指数不小于4.6，所述选择指数其所述药物对细胞的半数有毒浓度与所述药物对病毒的半数抑制浓度的商。根据本发明的实施例，所述药物的选择指数为4.6、4.7、7.4、6.4、6.1。
14.根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：所述药物组合物包括：20～40质量份桉油精、10～40质量份柠檬烯和10～40质量份α-蒎烯。发明人经过大量实验得到上述较优配比，由此可以得到较好的抑制病毒、缓解症状的作用，其他配比则不及本配比效果优异。
15.根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：25质量份桉油精、25质量份柠檬烯和25质量份α-蒎烯。
16.根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：37质量份桉油精、25质量份柠檬烯和13质量份α-蒎烯。
17.根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：25质量份桉油精、13质量份柠檬烯和37质量份α-蒎烯。
18.根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：25质量份桉油精、37质量份柠檬烯和13质量份α-蒎烯。
19.根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：37质量份桉油精、13质量份柠檬烯和25质量份α-蒎烯。
20.根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括至少一种药物载体。根据本发明的实施例，药物载体可以使药物组合物获得更好的吸收特性，更好地适应性，更好的稳定
性，更小的副作用及不良反应。
21.根据本发明的实施例，所述药物载体为大豆油，其中，所述药物组合物与所述大豆油的质量比为(3～5)：1，优选为3:1。
22.在本发明的第二方面，本发明提出了一种桉柠蒎制剂，所述制剂用于治疗或预防甲型流感病毒性感冒或其并发症。根据本发明的实施例，所述制剂的活性成分为桉油精、柠檬烯和α-蒎烯，其中，桉油精20～40质量份、柠檬烯10～40质量份和α-蒎烯10～40质量份。发明人经过大量的理论研究和实验验证，改变上述制剂中的一到两个组分，其治疗流感病症或抑制病毒的效果均不及上述配方，此外，发明人经过对tc
50
(药物对细胞的半数有毒浓度)，ic
50
(药物对病毒的半数抑制浓度)和si(选择指数)数据分析，发现配方中单一组分药物的细胞毒性强于本发明的制剂，而抗病毒作用效果不及本发明的制剂好。长远看，制剂更易成药。
23.发明人对本发明的制剂对副黏液病毒的抑制效果进行评价，如副流感病毒hpiv，发现，本发明的制剂对上述病毒没有抑制效果，说明本发明的制剂对引起流行性感冒的正粘液流感病毒的特异性强，可以特异性抑制甲型流感病毒的增殖，缓解流感病毒引起的临床症状。
24.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
25.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
26.术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
27.制药用途
28.在本发明的第一方面，本发明提出了一种药物组合物在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物用于治疗或预防病毒性感冒，所述药物组合物包括桉油精、柠檬烯和α-蒎烯。
29.如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，是指所有可以减缓、中断、阻止、控制或停止疾病或病症的进展，但不一定表示所有疾病或病症的症状全部消失，其也包括对所述症状的预防性治疗，尤其是在容易患有这样疾病或障碍的患者中。在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)，如咳嗽，咳痰等临床症状。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数，如患者体内的病毒含量等。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。
30.如本发明所使用的术语“组合物”是指包含规定量的规定成分的产物，以及规定量
的规定成分的组合所直接或间接地产生的任何产物。与药物组合物相关的这种术语的含义包括包含活性成分(单个或者多个)和组成载体的惰性成分(单个或者多个)的产物，以及由任何两种或多种成分混合、复合或聚集，或者由一种或多种成分分解，或者由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用而直接或间接产生的任何产物。因此，本发明药物组合物包括通过将本发明化合物与可药用载体混合而制备的任何组合物。
31.桉柠蒎制剂
32.本发明提出了一种桉柠蒎制剂，所述制剂用于治疗或预防流感病毒引起的流行性感冒或其并发症。根据本发明的实施例，所述制剂的活性成分为桉油精、柠檬烯和α-蒎烯，其中，桉油精20～40质量份、柠檬烯10～40质量份和α-蒎烯10～40质量份。
33.根据本发明的实施例，所述制剂进一步包括药学上可接受的赋形剂，合适的药学上可接受的赋形剂会依所选具体剂型而不同。此外，可根据它们在组合物中的特定功能来选择药学上可接受的赋形剂。例如，可选择能有助于生产均一剂型的某些药学上可接受的赋形剂。可选择能有助于生产稳定剂型的某些药学上可接受的赋形剂。可选择对患者给药时有助于携带或运输本发明公开组合物从身体的一个器官或部分到身体的另一个器官或部分的某些药学上可接受的赋形剂。可选择增强患者依从性的某些药学上可接受的赋形剂。
34.合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、塑化剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。技术人员可认识到，某些药学上可接受的赋形剂可提供不止一种功能，并提供可供选择的功能，这取决于制剂中存在多少该赋形剂和制剂中存在那些其他赋形剂。
35.本发明公开的制剂通常被配制成适合于通过所需途径对患者给药的剂型。例如，剂型包括那些适合于以下给药途径的剂型：(1)口服给药，例如片剂、胶囊剂、囊片剂、丸剂、含片剂、粉剂、糖浆剂、酏剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、香包剂和扁囊剂；(2)胃肠外给药，例如无菌溶液剂、混悬剂和复溶粉末；(3)吸入，例如气雾剂、溶液剂和干粉剂。
36.下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
37.实施例1制剂制备
38.1.桉油精、柠檬烯和α-蒎烯等单一组分的制备：
39.桉叶油(粗品油)经过精馏即得桉油精，含量在80％以上；将从芸香科橘属植物的柠檬皮压榨后用蒸气蒸馏制得的柠檬油(粗品油)经过精馏即得柠檬烯，含量在93％以上；将松科植物松油马尾松渗出的油树脂用蒸气蒸馏精制后即得α-蒎烯，含量在90％以上。以上三种单一组分均由北京远大九和药业有限公司提供。
40.2.桉柠蒎混合物的制备：
41.桉柠蒎混合物由桉油精、柠檬烯和α-蒎烯组成，总重量为3kg。在各组分占比相同的基础上，尝试改变桉柠蒎混合物中各组分的配比，制备出抑制流感病毒改善的桉柠蒎混合物，各组分的重量百分比16％～50％。桉柠蒎混合物与大豆油组成，重量比为3:1。
42.桉柠蒎混合油制备方法：
[0043][0044][0045]
制备方法：
[0046]
按药物组合物组成及配比称取桉油精、柠檬烯和α-蒎烯，大豆油1.0kg，置不锈钢桶中，室温下搅拌至完全混匀，滤过制得桉柠蒎混合油；
[0047]
实施例2抗病毒体外实验
[0048]
为验证桉柠蒎药物组合物对流感病毒有抑制活性，进行以下实验：
[0049]
测试项目：抗甲型h3n2流感病毒-a/汉防/359/95活性筛选
[0050]
测试原理：以mdck(狗肾)细胞为病毒宿主，测定样品抑制病毒引起细胞病变程度(cpe)。
[0051]
测试材料和方法：
[0052]
1)病毒株：流感病毒a/汉防/359/95(h3n2)，在鸡胚尿囊腔内培养传代(2018.3)，-80℃保存。
[0053]
2)样品处理：样品临用前用dmso配成母液,再用培养液作3倍稀释，各8个稀释度，每个样品三组平行试验。
[0054]
3)空白对照：大豆油(北京远大九和药业有限公司提供，购于广州白云山汉方现代药业有限公司)。
[0055]
4)测试方法：mdck细胞接种96孔培养板，置5％co2，37℃培养。24小时后感染流感病毒1/3 10-5
，吸附2小时，弃病毒液，加入含有不同稀释度样品及阳性对照药的维持液，同时设细胞对照孔和病毒对照孔，5％co2，37℃培养。待病毒对照组病变程度(cpe)达4 时观察各组细胞病变程度(cpe)，用reed-muench法分别计算样品对细胞的半数有毒浓度(tc
50
)和对病毒的半数抑制浓度(ic
50
)。
[0056]
测试结果如表1所示。
[0057]
表1：测试结果
[0058]
[0059][0060]
注：
[0061]
(1)表中
“–”
表示样品在最大无毒剂量无抗病毒活性；
[0062]
(2)tc
50
：药物半数有毒浓度；ic
50
：药物对病毒半数抑制浓度；si：选择指数，si＝tc
50
/ic
50
。
[0063]
结论：
[0064]
桉柠蒎混合油均对病毒有一定的抑制活性，其中混合油中桉油精配比为33％和50％的分组一、二、四、六和七组桉柠蒎混合油相较于其他组对病毒的抑制活性更强，四组的效果最好，各组分对抗病毒活性的贡献顺序为：桉油精强于α-蒎烯强于柠檬烯。
[0065]
对单一活性成分与桉柠蒎混合油的tc
50
、ic
50
和si数值分析可知：本次试验条件下，所检测的样品中，柠檬烯在所测浓度下无抗病毒活性；在三组分中一组分-柠檬烯无抗病毒活性的情况下，相比于单一活性成分桉油精和α-蒎烯，三组分之间的任意组合具有更小的细胞毒性和更强的抗病毒效果，说明三组分复配后有更优秀的药物选择属性。
[0066]
流感病毒侵袭的目标是呼吸道粘膜上皮细胞，导致宿主细胞变性、坏死乃至脱落，造成粘膜充血、水肿和分泌物增加，从而产生鼻塞、流涕、咽喉疼痛、干咳以及其它上呼吸道感染症状，当病毒蔓延至下呼吸道，则可能引起毛细支气管炎和间质性肺炎。
[0067]
基于病毒的动物体内侵染实验不易表现临床病症，发明人选用临床病症的实验动物模型进行实验，以探究本发明组合物对流感临床症状的缓解作用。
[0068]
实验例3桉柠蒎药物组合物对大鼠的化痰作用
[0069]
(大鼠毛细管排痰量法)
[0070]
1.材料：
[0071]
(1)：样品：受试药物—桉柠蒎药物组合物由北京远大九和药业有限公司自制，取1.5kg桉油精、0.5kg柠檬烯、1kgα-蒎烯，大豆油1.0kg，置不锈钢桶中，室温下搅拌至完全混匀，滤过制得桉柠蒎内容物。用少许吐温-80助溶后，用生理盐水配制成21.5mg/ml，13.5mg/
ml，105mg/ml乳悬液。
[0072]
(2)：已知药物氯化铵作为阳性对照药，用少许吐温-80助溶后，用生理盐水配制成10％溶液。
[0073]
(3)：工具药：乌拉坦，用生理盐水配制成11％溶液。
[0074]
(4)：动物：由军事医学科学院动物中心提供200～250g体重的健康大白鼠。
[0075]
(5)：毛细管(长4～5cm，内径0.6mm)、电子称、注射器、细塑料管、解剖剪、止血钳、眼科镊、手术剪、大鼠固定板、棉线强。
[0076]
2.方法：
[0077]
选取健康大鼠禁食16小时，用1.1g/kg乌拉坦麻醉后，仰位固定，平放，切开颈部皮肤分离气管，在甲状软骨下缘正中处两软骨之间用注射针头扎一小孔，然后插入玻璃毛细管一根，使毛细管插到刚好接触管内壁，当毛细管被分泌液充满时立即再换一根，以毛细管内液体重量(mg)作为评价本药物效果(术后休息一小时再插玻璃毛细管，若为灌胃给药，在大鼠刚刚麻醉时即刻从口腔经食道插入细塑料管以备灌胃使用)，给药前收集两小时气管分泌液，灌胃给药休息一小时后再收集两小时分泌液量，比较给药后平均每小时分泌液量是否较给药前增多，判断其祛痰作用的强弱以给药前每小时平均分泌量为正常值给药后平均每小时分泌量如为正常值的170％，或以给药前分泌量最高值为正常值，给药后分泌量是正常值的200％，认为有祛痰作用。(结果如表2所示)
[0078]
表2：检测结果
[0079][0080]
结论：桉柠蒎药物组合物有祛痰作用。
[0081]
实施例4桉柠蒎药物组合物对纤毛运动的影响
[0082]
试验目的：观察与比较桉柠蒎药物组合物和进口稀化粘素对呼吸道纤毛运动的影响。
[0083]
受试药物：本药物—由由北京远大九和药业有限公司自制，取1.5kg桉油精、0.5kg柠檬烯、1kgα-蒎烯，大豆油1.0kg，置不锈钢桶中，室温下搅拌至完全混匀，滤过制得桉柠蒎内容物。稀化粘素为市售。
[0084]
实验动物：小鸭雌雄皆有，体重120～160克，由中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所鸭场提供。
[0085]
试验方法选择：墨汁测定法。
[0086]
试验主要步骤：试验分五组本药物、稀化粘素各两个剂量组(0.4g/kg，0.2g/kg)，每组八只，实验前动物禁食，不禁水。称重，ip注射乌拉坦(1.8mg/kg)，戊巴比妥(27mg/kg)麻醉[7]，固定动物暴露气管(手术)稳定1小时后灌胃给药，对照组给等体积水，10分钟后从
气管壁上方注入5μl印度墨汁，观察墨汁向头端运动速度，用秒表及两脚规测出墨汁上沿0.5、1、2、5、10分钟运行距离(cm)。(结果如表3所示)
[0087]
表3：数据及统计学处理
[0088][0089]
与空白对照组相比：*p＜0.05；**p＜0.0.1；***p＜0.001
[0090]
结论：本实验证明本药物、稀化粘素均能改善气管粘膜纤毛活动，能促进呼吸道内腺体分泌作用，对粘液移动速度显著增加，两者相比无显著差别。
[0091]
实施例5化学刺激引咳实验
[0092]
1.材料：
[0093]
1)样品：实施例1四组药物制剂用少许吐温-80助溶，加生理盐水配制成43mg/ml、21.5mg/ml、10.5mg/ml的乳悬液。
[0094]
2)已知药物可待因配制成0.6％。
[0095]
3)工具药(浓氨水c.p)，北京化工厂，以nh3计：25～28％，nh4oh。
[0096]
4)动物由医科院动物中心提供，20～22g健康昆明种雄性小白鼠。器材：
[0097]
a、医用电动吸引器(带医用真空表)。
[0098]
b、402超声雾化器。
[0099]
c、动物容器(直径4厘米，长10厘米玻璃管)。
[0100]
d、废氨水容器。
[0101]
e、注射器、秒表。
[0102]
2.操作方法：
[0103]
实验前将浓氨水(25～28％)装入402超声雾化器中，取1只小鼠置于动物容器中，开动氨水雾化器以及电动吸引器(医用真空泵指向0.01mpa)使小鼠接受氨水刺激至预定时间，关闭吸引器，立即取出小鼠，观察1min内咳嗽次数。若1min内出现三次以上典型咳嗽动作(腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴，有时可有咳声)者，算作“有咳嗽”，否则算作“无咳嗽”。设阳性药(可待因)，以及阴性生理盐水对照组，本药物油430mg/kg、215mg/kg、105mg/kg五组，各组均灌胃给药1小时，开始接受浓氨气雾刺激，按照统计学上、下法求半数有效量的原理，改变每只小鼠接受喷雾的时间，观察咳嗽出现与否，并记录。
[0104]
如下表拟定12.6s、15.9s、20.0s、25.1s、31.6s、39.8s、50.1s、63.1s一系列按等比数安排的喷雾时间(相邻两个时间的对数之差为0.1)。实验时，开始以某一喷雾时间喷雾时间喷雾小鼠，出现咳嗽反应时，则下一只动物就用低一级的时间喷雾。相反若未出现咳嗽反应时，则下一只就用高一级的时间喷雾。将结果填入预先准备好的表格中，凡出现咳嗽的划“ ”；而
“-”
表示该喷雾时间不出现咳嗽，按公式求出给药组以及对照组引起半数小鼠咳嗽
所需要的喷雾时间et
50
(edt
50
)，et
50
＝log-1c/n。式中n为动物数，c为rx值的总和，r为每个剂量组的动物数。x为剂量(喷雾时间)的对数。结果判断，一般采用r值来估价药物有无镇咳作用和作用强度，凡r值在130％以上者初步认为药物有止咳作用，在150以上者，可认为该药有明显的止咳作用。(结果如表4所示)
[0105]
表4
[0106][0107][0108]
结论：本药物从三个剂量组所示均有止咳作用，并随剂量增加止咳作用增强。
[0109]
实施例6桉柠蒎药物组合物的抗炎作用
[0110]
鼠耳肿胀法
[0111]
1.材料：
[0112]
1)样品：：实施例1四组药物制剂用少许吐温-80助溶，加生理盐水配制成79.4mg/ml、61.5mg/ml、49.2mg/ml、34.0mg/ml的乳悬液。
[0113]
2)已知药物：强地松，由总参药品分装厂销售，作为阳性对照药，配制方法同(1)，1.5mg/ml。
[0114]
3)工具药：巴豆油混合致炎剂，由0.2ml巴豆油 2ml无水乙醇 7.8ml乙醚配制而成的混合致炎液。
[0115]
4)动物：由医科院动物中心提供，25～28克雄性小白鼠。
[0116]
5)器材：8mm直径的角膜环钻、镊子、电子称以及注射器(1ml、0.25ml)。
[0117]
2.方法：将禁食16小时的小鼠称重，随机分为六组，本药物四个剂量组，794mg/kg、615mg/kg、492mg/kg、340mg/kg。
[0118]
已知药：强地松15mg/kg作为阳性对照组，上述均一次灌胃给药。空白对照组一次灌胃10ml/kg(ns)。灌胃给药1小时后，每只小鼠左耳前后两面涂0.05ml巴豆油混合致炎液，
致炎4小时后将动物脱颈椎处死，用角膜环钻取下小鼠左、右耳圆片，称重，左耳重量减去右耳重量，即为肿胀程度，给药组与空白对照组进行处理。(结果如表5所示)
[0119]
表5
[0120][0121]
结论：表5中所示：本药物对鼠耳肿胀有明显的抑制作用，本药物的抑制作用呈剂量依赖性。
[0122]
3.以同样的方法ip给药
[0123]
本药物油193mg/kg、103mg/kg、30.8mg/kg。
[0124]
阳性药一氢化可地松10mg/kg。
[0125]
空白对照组，10ml/kg生理盐水。
[0126]
上述五组均一次ip给药，相继半小时后，以每只小鼠左耳0.05ml巴豆油混合液致炎，以下步骤均同po给药。(结果如表6所示)
[0127]
表6
[0128][0129]
结论：从表6中所示：本药物ip给药有显著抗炎作用，本药物的抗炎作用，随剂量增加而增加。
[0130]
对比例1抗副流感病毒实验
[0131]
测试项目：抗副流感病毒(hpiv)活性筛选。
[0132]
测试原理：以h1hela(人宫颈癌细胞)细胞为病毒宿主，测定样品抑制测定样品抑制病毒引起细胞病变程度(cpe)。
[0133]
测试材料和方法：
[0134]
1.病毒株：副流感病毒3(hpiv-3)由atcc提供。
[0135]
2.待测样品：桉油精、柠檬烯、α-蒎烯和实施例2中的四组；
[0136]
3.样品的处理、空白对照以及测试方法与实施例2相同。
[0137]
结论：在试验条件与实施例2相同的情况下，所检测的实施例2中的四组制剂对副流感病毒(hpiv)没有抑制活性。
[0138]
由实施例及对比例1可知，本发明的制剂为柠檬烯、桉油精和α-蒎烯作为活性成分
的复配增效制剂，其针对正黏液病毒中的甲型流感病毒具有良好的抑制效果，并可以缓解甲型流行性病毒h3n2的亚型病原体所引起的临床症状，但其并非为柠檬烯、桉油精和α-蒎烯的简单组合，其针对引起普通性感冒的副黏液病毒，如副流感病毒株hpiv则没有显著的抑制活性，说明本制剂配方通过药物复配，特异性针对引起流行性感冒的甲型流感病毒的抑制效果显著增强，在制备甲型流感病毒药物中具有重要作用。
[0139]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0140]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。