一种舒缓修复组合物及其应用的制作方法

1.本发明属于化妆品的技术领域，涉及一种舒缓修复组合物及其应用。


背景技术：

2.敏感属于一种皮肤状态，除了生理上面部表现出的皮肤不适症，敏感肌用户亦会在心理上不自觉认为自身皮肤处于敏感状态。敏感肌肤表现特征跨度广泛，从皮肤瘙痒的轻微症状到丘疹发炎等严重症状均属于敏感肌范畴，敏感肌用户中处于轻度敏感(瘙痒，刺痛，泛红)的人数占比最多，有43.0％，通过日常保养护肤就可以对敏感肌进行改善，另一方面有近三成的敏感肌女性肌肤问题较为严重，已出现红肿/发炎等敏感表现。26-30岁是敏感肌用户最为集中的年龄段，其中熬夜、压力大、化妆品使用不当是造成肌肤问题的主要因素。拥有抗炎成分，抗敏功效舒缓并深层保湿，突出抗敏功效的产品，是当前敏感肌消费者最破迫切的需求。现有抗敏舒缓化妆品主要以抑制炎症的机理实现抗炎舒缓，满足消费者日常护理及急救舒缓，而难以从肌肤本身的屏障功能出发，修护肌肤屏障，从根本上解决敏感肌，深层修复，重构屏障。


技术实现要素：

3.鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种舒缓修复组合物及其应用，通过三种屏障(物理屏障、生物屏障、免疫屏障)层层递进，实现补水保湿、抗炎舒缓、祛红止痒、屏障修复等的功效。
4.为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种舒缓修复组合物，包括有胶原蛋白、生物多糖、鼠李糖舒缓剂及神经酰胺。
5.优选地，所述舒缓修复组合物，按重量份计，包括如下组分：胶原蛋白0.001～1.0份；生物多糖0.01～0.30份；鼠李糖舒缓剂0.1～5.0份；神经酰胺0.01～3.0份。
6.更优选地，所述舒缓修复组合物，按重量份计，包括如下组分：胶原蛋白0.01～0.5份；生物多糖0.05～0.25份；鼠李糖舒缓剂0.5～2.0份；神经酰胺0.05～1.0份。
7.优选地，所述胶原蛋白为重组iii型人源化胶原蛋白。
8.优选地，所述生物多糖为天然阳离子生物多糖。
9.更优选地，所述生物多糖为羧甲基脱乙酰壳多糖。
10.本发明第二方面提供一种舒缓修复组合物的制备方法，按配比取本发明第一方面所述的舒缓修复组合物中的各成分混合，以提供所述的舒缓修复组合物。
11.本发明第三方面提供一种皮肤外用剂，包括本发明第一方面提供所述的舒缓修复组合物。
12.优选地，所述皮肤外用剂中，所述胶原蛋白加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.001～1.0％；所述生物多糖加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.01～0.30％；所述鼠李糖舒缓剂加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.1～5.0％；所述神经酰胺加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.01～3.0％。
13.更优选地，所述皮肤外用剂中，所述胶原蛋白加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.01～0.5％；所述生物多糖加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.05～0.25％；所述鼠李糖舒缓剂加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.5～2.0％；所述神经酰胺加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.05～1.0％。
14.本发明第四方面提供本发明第一方面提供的所述舒缓修复组合物、或本发明第三方面提供的所述皮肤外用剂在以下任一项或几项中的用途：
15.(1)皮肤护理；
16.(2)皮肤的抗炎舒缓；
17.(3)皮肤的祛红止痒；
18.(4)皮肤的屏障修复。
19.优选地，本发明还提供本发明第一方面提供的所述舒缓修复组合物、或本发明第三方面提供的所述皮肤外用剂在治疗皮肤护理、皮肤的抗炎舒缓、皮肤的祛红止痒、皮肤的屏障修复中任一项或几项的药妆中的用途。
20.如上所述，本发明提供的一种舒缓修复组合物及其应用，通过优选的组分及其含量范围，获得一种独创的屏障修复组合物，通过三种屏障(物理屏障、生物屏障、免疫屏障)层层递进，实现抗炎舒缓、屏障修复。该种舒缓修复组合物新颖独创、水溶性好，易添加应用，可广泛应用于护肤及彩妆产品中，方便添加于精华水、精华液、化妆水、乳液、膏霜、面膜等产品中均具有良好功效，具有补水保湿、抗炎舒缓、祛红止痒、屏障修复的功效。
附图说明
21.图1显示为本发明中针对阴性对照(nc)的小鼠肥大细胞(p815)细胞脱颗粒形态学镜检结果图。
22.图2显示为本发明中针对模型对照(m)的小鼠肥大细胞(p815)细胞脱颗粒形态学镜检结果图。
23.图3显示为本发明中针对阳性对照(pc)的小鼠肥大细胞(p815)细胞脱颗粒形态学镜检结果图。
24.图4显示为本发明中针对样品组(ta)的小鼠肥大细胞(p815)细胞脱颗粒形态学镜检结果图4a、4b、4c，其中，图4a为0.60％样品组(ta)的小鼠肥大细胞(p815)细胞脱颗粒形态学镜检结果图；4b为0.20％样品组(ta)的小鼠肥大细胞(p815)细胞脱颗粒形态学镜检结果图；4c为0.06％样品组(ta)的小鼠肥大细胞(p815)细胞脱颗粒形态学镜检结果图。
25.图5显示为本发明中不同组别划痕相对面积比较图。
26.图6显示为本发明中不同组别细胞显微镜100x的图像6a、6b、6c、6d、6e、6f、6g、6h、6i、6j、6k、6l、6m、6n、6o，其中，
27.图6a为阴性对照(nc)在0h的细胞显微镜图；图6b为阴性对照(nc)在12h的细胞显微镜图；图6c为阴性对照(nc)在24h的细胞显微镜图；
28.图6d为阳性对照(pc)在0h的细胞显微镜图；图6e为阳性对照(pc)在12h的细胞显微镜图；图6f为阳性对照(pc)在24h的细胞显微镜图；
29.图6g为1.0％的样品组(ta)在0h的细胞显微镜图；图6h为1.0％的样品组(ta)在12h的细胞显微镜图；图6i为1.0％的样品组(ta)在24h的细胞显微镜图；
30.图6j为0.5％的样品组(ta)在0h的细胞显微镜图；图6k为0.5％的样品组(ta)在12h的细胞显微镜图；图6l为0.5％的样品组(ta)在24h的细胞显微镜图；
31.图6m为0.25％的样品组(ta)在0h的细胞显微镜图；图6n为0.25％的样品组(ta)在12h的细胞显微镜图；图6o为0.25％的样品组(ta)在24h的细胞显微镜图。
具体实施方式
32.本发明第一方面提供一种舒缓修复组合物(yohealix-4r)，包括有胶原蛋白、生物多糖、鼠李糖舒缓剂及神经酰胺。
33.在一优选实施方式中，所述舒缓修复组合物，按重量份计，包括如下组分：胶原蛋白0.001～1.0份；生物多糖0.01～0.30份；鼠李糖舒缓剂0.1～5.0份；神经酰胺0.01～3.0份。
34.在进一步优选实施方式中，所述舒缓修复组合物，按重量份计，包括如下组分：
35.胶原蛋白0.01～0.5份；具体如0.01～0.1份、0.1～0.2份、0.2～0.3份、0.3～0.4份、0.4～0.5份；
36.生物多糖0.05～0.25份；具体如0.05～0.1份、0.1～0.15份、0.15～0.20份、0.20～0.25份；
37.鼠李糖舒缓剂0.5～2.0份；具体如0.5～1.0份、1.0～1.5份、1.5～2.0份；
38.神经酰胺0.05～1.0份；具体如0.05～0.1份、0.1～0.3份、0.3～0.5份、0.5～0.7份、0.7～1.0份。
39.在一优选实施方式中，所述胶原蛋白为重组iii型人源化胶原蛋白。
40.本发明中，上述胶原蛋白是构成细胞外基质(ecm)的一种结构蛋白，为细胞提供生长空间并具有支撑作用；此外，还具有信号传导，生长因子和细胞因子传输功能。胶原蛋白在皮肤中如弹簧般支撑着皮肤。随着年龄的增长，肌肤胶原蛋白合成减少。而受外界环境刺激(uv等)，会促使胶原蛋白分解，胶原纤维就会发生断裂，皮肤便会失去柔软、弹性和光泽，同时真皮的纤维断裂、脂肪萎缩、汗腺及皮脂腺分泌减少，皮肤会出现色斑、皱纹、屏障功能受损等一系列老化现象。
41.本发明中，所述重组iii型人源化胶原蛋白为常规使用的重组iii型人源化胶原蛋白，是由dna重组技术制备的人胶原蛋白特定型别基因编码的全长或部分氨基酸序列片段，或是含人胶原蛋白功能片段的组合。所述重组iii型人源化胶原蛋白具有胶原蛋白的特征性结构：g
–
x
–
y重复结构，g代表甘氨酸(glycine)，x以脯氨酸(proline)为主，y以羟脯氨酸(hyp)为主。具体例如所述重组iii型人源化胶原蛋白为江苏创健医疗科技有限公司公司生产重组iii型胶原蛋白粉。
42.在一优选实施方式中，所述生物多糖为天然阳离子生物多糖。
43.在进一步优选实施方式中，所述生物多糖为羧甲基脱乙酰壳多糖(cas号为83512-85-0)。
44.本发明中，所述羧甲基脱乙酰壳多糖来源于海洋生物，是自然界中唯一的天然阳离子生物多糖。它是由o-羧甲基脱乙酰壳多糖羧导入羧甲基破坏了壳聚糖分子内氢键而形成。它的水溶性好，可以溶解于ph中性水溶液中；含有羟基、氨基、羧基等极性亲水基团，使吸水性较强，并随羧甲基取代度的增大而增强；保留部分乙酰氨基，有利于其涂展性及肤
感；确保氨基基团不被羧甲基取代，保证其阳离子性和生物活性。
45.由于目前人体敏感肌的三大痛点症状：敏感、炎症反应、皮肤瘙痒。通过羧甲基脱乙酰壳多糖，能显著降低细胞白介素-6及tnf-α水平，从而达到缓解皮肤炎症效果；同时羧甲基脱乙酰壳多糖与h1组胺受体高亲和力竞争性结合，阻止组胺对引发痒感的h1受体的激活，快速缓解由组胺引起皮肤瘙痒；促进成纤维细胞生长，加速伤口愈合，快速修复角质层屏障功能。
46.在一优选实施方式中，所述鼠李糖舒缓剂为常规使用的鼠李糖舒缓剂。具体来说，所述鼠李糖舒缓剂为法国仙婷公司生产的rhamnosoft hp 1.5p型悦糖舒缓剂，产品编码为300-rhamno2。所述鼠李糖舒缓剂是以生物糖胶-2为主要成分的舒缓剂。
47.本发明中，所述鼠李糖舒缓剂是通过细菌发酵获得的聚多糖水溶液，这种聚合物具有分支结构，能够完全表述糖类在细胞免疫中作用的糖序列，它的糖类结构中富含鼠李糖，使其能够抑制皮肤细胞在受到侵扰后的信息传递，从而达到减少炎症反应的目的。鼠李糖舒缓剂还可通过促进肌肤愉悦因子如内啡肽的合成，实现保护和愉悦相结合。
48.在一优选实施方式中，所述神经酰胺为常规使用的神经酰胺(cas号为100403-19-8)。具体来说，所述神经酰胺可为赢创特种化学(上海)有限公司生产的sk-influx v mb型神经酰胺和植物鞘氨醇的水溶液制剂中的神经酰胺。
49.本发明中，所述神经酰胺属于神经鞘脂类，是脂肪酸和鞘氨脂碱基组成的一类化合物，具有以下功效：(1)维持和增强皮肤屏障功能及其抗敏功效；含有ω-oh的神经酰胺能共价结合于角化细胞的角化包膜的内披蛋白上，由此将脂质基质和角化细胞连接起来，增强皮肤的屏障功能，减少有害物质通过毛孔、汗腺进入皮肤，从而具有抗敏功效。(2)保湿补水功效；神经酰胺可明显促进丝聚合蛋白mrna和蛋白的表达水平。其中，丝聚合蛋白原从颗粒层进入角质层时，经过一系列酶水解转化为多羧酸类物质，具有保湿功效。丝聚合蛋白不仅是重要的结构蛋白，而且是保湿因子的主要来源。(3)抗氧化及抗衰老功效；神经酰胺中的鞘氨醇碳链具有双键，且有端位羟基，说明其易氧化使双键断裂，因此具有抗氧化的作用。低浓度的神经酰胺可刺激成纤维细胞增殖，并抑制基质金属蛋白酶的表达，因此神经酰胺有一定的抗衰老功效。
50.本发明中，上述舒缓修复组合物中羧甲基脱乙酰壳多糖能快速止痒、抑制炎症、屏障修护；复合神经酰胺能强化皮肤保湿，恢复脂质屏障；重组iii型人源化胶原蛋白具有保湿滋养，深层修复，促进iii型胶原蛋白生成；鼠李糖舒缓剂通过肌肤释放愉悦因子如内啡肽，提升肌肤自愈力。上述优选的各成分协同作用，通过三种屏障(物理屏障、生物屏障、免疫屏障)层层递进，实现补水保湿、抗炎舒缓、祛红止痒、屏障修复的功效。
51.本发明第二方面提供一种舒缓修复组合物的制备方法，按配比取本发明第一方面所述的舒缓修复组合物中的各成分混合，以提供所述的舒缓修复组合物。
52.在一优选实施例中，所述混合的温度为常温。所述常温为20～30℃。
53.在一优选实施例中，所述混合为搅拌分散。对所述搅拌的条件如转速、时间不作限制，只要使成分分散完全即可。
54.本发明第三方面提供一种皮肤外用剂，包括本发明第一方面提供所述的舒缓修复组合物。
55.在一优选实施例中，所述皮肤外用剂中，所述胶原蛋白加入量占皮肤外用剂的重
量百分比为0.001～1.0％；所述生物多糖加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.01～0.30％；所述鼠李糖舒缓剂加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.1～5.0％；所述神经酰胺加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.01～3.0％。
56.在进一步优选实施方式中，所述皮肤外用剂中，所述胶原蛋白加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.01～0.5％；所述生物多糖加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.05～0.25％；所述鼠李糖舒缓剂加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.5～2.0％；所述神经酰胺加入量占皮肤外用剂的重量百分比为0.05～1.0％。
57.在一优选实施例中，所述皮肤外用剂可以配制成各种产品形式，包括且不限于基础化妆品、面部妆容化妆品、身体用化妆品、头部用护理品等。所述皮肤外用剂是通常用于皮肤外部的护肤及彩妆产品的统称概念。
58.在进一步优选实施方式中，所述皮肤外用剂包括且不限于精华水、化妆水、精华液、面膜、啫喱、乳液、霜等。本文的皮肤外用剂可使用制备此类组合物的常规方法来制备。
59.在更进一步优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为精华水时，按重量百分比计，包括如下组分：1,3-丁二醇4-6％；pe 9010 0.3-0.5％；胶原蛋白0.001～1.0％；生物多糖0.01～0.30％；鼠李糖舒缓剂0.1～5.0％；神经酰胺0.01～3.0％；余量为水。
60.在最优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为精华水时，按重量百分比计，包括如下组分：1,3-丁二醇5％；pe 9010 0.4％；胶原蛋白0.01～0.5％；生物多糖0.05～0.25％；鼠李糖舒缓剂0.5～2.0％；神经酰胺0.05～1.0％；余量为水。
61.在更进一步优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为化妆水时，按重量百分比计，包括如下组分：甘油4-6％；双丙甘醇2-4％；1,3-丁二醇1-3％；甘草酸二钾0.05-0.15％；海藻糖0.05-0.15％；泛醇0.3-0.5％；透明质酸钠0.01-0.10％；尿囊素0.05-0.15％；烟酰胺1-3％；对羟基苯乙酮0.3-0.5％；苯氧乙醇0.3-0.5％；peg-60氢化蓖麻油0.10-0.20％；香精0.01-0.10％；胶原蛋白0.001～1.0％；生物多糖0.01～0.30％；鼠李糖舒缓剂0.1～5.0％；神经酰胺0.01～3.0％；余量为水。
62.在最优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为化妆水时，按重量百分比计，包括如下组分：甘油5％；双丙甘醇3％；1,3-丁二醇2％；甘草酸二钾0.1％；海藻糖0.1％；泛醇0.4％；透明质酸钠0.05％；尿囊素0.1％；烟酰胺2％；对羟基苯乙酮0.4％；苯氧乙醇0.4％；peg-60氢化蓖麻油0.15％；香精0.05％；胶原蛋白0.01～0.5％；生物多糖0.05～0.25％；鼠李糖舒缓剂0.5～2.0％；神经酰胺0.05～1.0％；余量为水。
63.在更进一步优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为精华液时，按重量百分比计，包括如下组分：甘油4-6％；双丙甘醇2-4％；1,3-丁二醇1-3％；甘草酸二钾0.05-0.15％；海藻糖0.05-0.15％；泛醇0.3-0.5％；透明质酸钠0.01-0.10％；尿囊素0.05-0.15％；烟酰胺1-3％；黄原胶0.05-0.15％；卡波姆0.05-0.15％；氨丁三醇0.01-0.10％；双-peg-18甲基醚二甲基硅烷1-3％；对羟基苯乙酮0.3-0.5％；苯氧乙醇0.3-0.5％；生育酚乙酸酯0.05-0.15％；peg-60氢化蓖麻油0.10-0.20％；香精0.01-0.10％；胶原蛋白0.001～1.0％；生物多糖0.01～0.30％；鼠李糖舒缓剂0.1～5.0％；神经酰胺0.01～3.0％；余量为水。
64.在最优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为精华液时，按重量百分比计，包括如下组分：甘油5％；双丙甘醇3％；1,3-丁二醇2％；甘草酸二钾0.1％；海藻糖0.1％；泛醇0.4％；透明质酸钠0.05％；尿囊素0.1％；烟酰胺2％；黄原胶0.1％；卡波姆0.1％；氨丁三醇
0.06％；双-peg-18甲基醚二甲基硅烷2％；对羟基苯乙酮0.4％；苯氧乙醇0.4％；生育酚乙酸酯0.1％；peg-60氢化蓖麻油0.15％；香精0.05％；胶原蛋白0.01～0.5％；生物多糖0.05～0.25％；鼠李糖舒缓剂0.5～2.0％；神经酰胺0.05～1.0％；余量为水。
65.在更进一步优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为乳液时，按重量百分比计，包括如下组分：甘油4-6％；双丙甘醇2-4％；1,3-丁二醇1-3％；甘草酸二钾0.05-0.15％；海藻糖0.05-0.15％；泛醇0.5-1.5％；透明质酸钠0.01-0.10％；尿囊素0.05-0.15％；烟酰胺1-3％；黄原胶0.05-0.15％；辛酸/癸酸甘油三酯2-4％；碳酸二辛酯3-5％；角鲨烷1-3％；霍霍巴籽油0.5-1.5％；鲸蜡硬脂醇0.5-1.5％；arlacel 165 1-3％；聚二甲基硅氧烷1-3％；丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.10-0.20％；氨丁三醇0.05-0.15％；对羟基苯乙酮0.3-0.5％；苯氧乙醇0.3-0.5％；生育酚乙酸酯0.05-0.15％；香精0.01-0.10％；胶原蛋白0.001～1.0％；生物多糖0.01～0.30％；鼠李糖舒缓剂0.1～5.0％；神经酰胺0.01～3.0％；余量为水。
66.在最优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为乳液时，按重量百分比计，包括如下组分：甘油5％；双丙甘醇3％；1,3-丁二醇2％；甘草酸二钾0.1％；海藻糖0.1％；泛醇1.0％；透明质酸钠0.05％；尿囊素0.1％；烟酰胺2％；黄原胶0.1％；辛酸/癸酸甘油三酯3％；碳酸二辛酯4％；角鲨烷2％；霍霍巴籽油1.0％；鲸蜡硬脂醇1.0％；arlacel 165 2.0％；聚二甲基硅氧烷2.0％；丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.15％；氨丁三醇0.1％；对羟基苯乙酮0.4％；苯氧乙醇0.4％；生育酚乙酸酯0.1％；香精0.05％；胶原蛋白0.01～0.5％；生物多糖0.05～0.25％；鼠李糖舒缓剂0.5～2.0％；神经酰胺0.05～1.0％；余量为水。
67.在更进一步优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为霜时，按重量百分比计，包括如下组分：甘油4-6％；双丙甘醇2-4％；1,3-丁二醇1-3％；甘草酸二钾0.05-0.15％；海藻糖0.05-0.15％；泛醇0.5-1.5％；透明质酸钠0.01-0.10％；尿囊素0.05-0.15％；烟酰胺1-3％；黄原胶0.05-0.15％；辛酸/癸酸甘油三酯2-4％；鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯3-5％；角鲨烷2-4％；霍霍巴籽油0.5-1.5％；鲸蜡硬脂醇1-3％；乳木果油1-3％；arlacel 165 1-3％；聚二甲基硅氧烷2-4％；丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.1-0.3％；氨丁三醇0.05-0.15％；对羟基苯乙酮0.3-0.5％；苯氧乙醇0.3-0.5％；生育酚乙酸酯0.05-0.15％；香精0.01-0.10％；胶原蛋白0.01～0.5％；生物多糖0.05～0.25％；鼠李糖舒缓剂0.5～2.0％；神经酰胺0.05～1.0％；余量为水。
68.在最优选实施方式中，当所述皮肤外用剂为霜时，按重量百分比计，包括如下组分：甘油5％；双丙甘醇3％；1,3-丁二醇2％；甘草酸二钾0.1％；海藻糖0.1％；泛醇1.0％；透明质酸钠0.05％；尿囊素0.1％；烟酰胺2％；黄原胶0.1％；辛酸/癸酸甘油三酯3％；鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯4％；角鲨烷3％；霍霍巴籽油1.0％；鲸蜡硬脂醇2.0％；乳木果油2.0％；arlacel 165 2.0％；聚二甲基硅氧烷3.0％；丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.2％；氨丁三醇0.1％；对羟基苯乙酮0.4％；苯氧乙醇0.4％；生育酚乙酸酯0.1％；香精0.05％；胶原蛋白0.01～0.5％；生物多糖0.05～0.25％；鼠李糖舒缓剂0.5～2.0％；神经酰胺0.05～1.0％；余量为水。
69.上述皮肤外用剂中成分情况如下：
70.上述pe 9010是苯氧乙醇和乙基己基甘油复配的化妆品用液体防腐剂。具体来说，
所述pe 9010是德国舒美公司生产的苯氧乙醇和乙基己基甘油复配的化妆品用液体防腐剂。
71.上述1,3-丁二醇(cas号为107-88-0)；甘油(cas号为56-81-5)；双丙甘醇(cas号为25265-71-8)；甘草酸二钾(cas号为68797-35-3)；海藻糖(cas号为99-20-7)；泛醇(cas号为81-13-0)；透明质酸钠(cas号为9067-32-7)；尿囊素(cas号为97-59-6)；烟酰胺(cas号为98-92-0)；对羟基苯乙酮(cas号为99-93-4)；苯氧乙醇(cas号为122-99-6)；peg-60氢化蓖麻油(cas号为61788-85-0)；黄原胶(cas号为11138-66-2)；卡波姆(cas号为9007-20-9)；氨丁三醇(cas号为77-86-1)；双-peg-18甲基醚二甲基硅烷(cas号为67846-47-3)；生育酚乙酸酯(cas号为7695-91-2)；辛酸/癸酸甘油三酯(cas号为73398-61-5)；碳酸二辛酯(cas号为1680-31-5)；角鲨烷(cas号为111-01-3)；霍霍巴籽油(cas号为61789-91-1)；鲸蜡硬脂醇(cas号为246159-33-1)；自乳化单硬脂酸甘油酯(arlacel 165)(cas号为84750-06-1)；聚二甲基硅氧烷(cas号为9006-65-9)；鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯(cas号为90411-68-0)；乳木果油(cas号为194043-92-0)。
72.上述丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物为常规使用的丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物。具体为美国路博润公司生产的pemulen
tm tr-1聚合物。
73.上述香精为常规使用的香精。具体为瑞士奇华顿公司生产的fragrance86396582型香精。
74.上述水为去离子水。
75.在一优选实施例中，所述皮肤外用剂的剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。所述皮肤外用剂的剂型包括且不限于水相、油相、凝胶、水包油型乳液或油包水型乳液等。
76.在一优选实施例中，所述皮肤外用剂中还包括一种或者多种常规的其它活性成分。
77.本发明中，所述其它活性成分的含量为本领域常规的含量。所述其它活性成分对皮肤外用剂起到补水保湿、美白抗氧化、控油祛痘或抗皱紧致中的一种或多种作用。
78.按照本领域常识，根据不同的剂型和目的，所述的皮肤外用剂中还可以含有本领域中常规使用的介质或基质赋形剂，只要所述赋形剂为化妆品领域中可接受的赋形剂。所述赋形剂的含量为本领域常规的含量。
79.本发明中，所述赋形剂的形式可以为水相、油相、凝胶、水包油型乳液或油包水型乳液的形式。所述水相可以为一种或多种水溶性或分散性组分的混合物，其在室温下可以为液体、半固体或固体。本领域技术人员可以基于本领域技术人员掌握的知识选择合适的赋形剂的形式，以及其中包含的组分。
80.本发明第四方面提供本发明第一方面提供的所述舒缓修复组合物、或本发明第三方面提供的所述皮肤外用剂在以下任一项或几项中的用途：
81.(1)皮肤护理；
82.(2)皮肤的抗炎舒缓；
83.(3)皮肤的祛红止痒；
84.(4)皮肤的屏障修复。
85.本发明中，本发明还提供本发明第一方面提供的所述舒缓修复组合物、或本发明第三方面提供的所述皮肤外用剂在治疗皮肤护理、皮肤的抗炎舒缓、皮肤的祛红止痒、皮肤的屏障修复中任一项或几项的药妆中的用途。
86.本发明中，“护肤”是指调节和/或改善皮肤状况。在一些非限制性示例中，包括通过提供更光滑、更均匀的外观和/或感觉来改善皮肤外观和/或感觉，减少病灶的厚度，改善皮肤的弹性或回弹性，改善皮肤的紧致度，减少皮肤无光泽的外观，改善皮肤的水合状态或保湿状态，改善细纹和/或皱纹的外观，改善肤色，减少发红或皮肤疹斑的外观，改善皮肤的亮度、光彩等。
87.本文的舒缓修复组合物及皮肤外用剂旨在局部施用至皮肤。本发明的组合物可用于治疗多种皮肤状况，诸如例如与炎症相关或由炎症引起的那些；妊娠纹；皮肤发红；日光损伤；皮肤灰黄或发黄；皮肤暗淡；老化(内在或外在)；色素沉着过度；uv暴露；粗糙纹理、皱纹、受损的皮肤屏障(例如，干燥的皮肤)；皮炎；湿疹等。
88.当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
89.除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组dna技术及相关领域的常规技术。
90.本发明所称的“个体”或“患者”指患有疾病的人、野生动物和家畜，优选选择哺乳动物，尤其是人。
91.下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。
92.以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
93.实施例1-4
94.根据下述表1的组成，按重量份计，取舒缓修复组合物中各成分混合，制备获得舒缓修复组合物样品1-4#。
95.表1
96.编号成分名实施例1实施例2实施例3实施例41重组iii型人源化胶原蛋白(重量份)0.010.050.10.52羧甲基脱乙酰壳多糖(重量份)0.050.10.250.253鼠李糖舒缓剂(重量份)0.50.5124神经酰胺(重量份)0.050.10.51
97.实施例5-8
98.取实施例1-4中舒缓修复组合物样品1-4#，配以常规舒缓修复组合物水溶液的其它活性成分，在室温条件下溶解搅拌分散完全，制备获得舒缓修复组合物水溶液样品1-4#，舒缓修复组合物水溶液样品1-4#中各成分的含量组成见下表2。
99.表2
[0100][0101][0102]
实施例9-12
[0103]
取实施例1-4中舒缓修复组合物样品1-4#，配以常规化妆水的其它活性成分，按照本领域常规的化妆水的制备方法，制备获得化妆水样品1-4#，化妆水样品1-4#中各成分的含量组成见下表3。
[0104]
表3
[0105]
编号成分名实施例9实施例10实施例11实施例121去离子水to 100to 100to 100to 1002甘油55553双丙甘醇355541,3-丁二醇22225甘草酸二钾0.10.10.10.16海藻糖0.10.10.10.17泛醇0.40.40.40.48透明质酸钠0.050.050.050.059尿囊素0.10.10.10.110烟酰胺222211对羟基苯乙酮0.40.40.40.412苯氧乙醇0.40.40.40.413peg-60氢化蓖麻油0.150.150.150.1514香精0.050.050.050.0515重组iii型人源化胶原蛋白0.010.050.10.516羧甲基脱乙酰壳多糖0.050.10.250.2517鼠李糖舒缓剂0.50.51218神经酰胺0.050.10.51
[0106]
实施例13-16
[0107]
取实施例1-4中舒缓修复组合物样品1-4#，配以常规精华液的其它活性成分，按照本领域常规的精华液的制备方法，制备获得精华液样品1-4#，精华液样品1-4#中各成分的含量组成见下表4。
[0108]
表4
[0109][0110][0111]
实施例17-20
[0112]
取实施例1-4中舒缓修复组合物样品1-4#，配以常规乳液的其它活性成分，按照本领域常规的乳液的制备方法，制备获得乳液样品1-4#，乳液样品1-4#中各成分的含量组成见下表5。
[0113]
表5
[0114]
[0115][0116]
实施例21-24
[0117]
取实施例1-4中舒缓修复组合物样品1-4#，配以常规霜的其它活性成分，按照本领域常规的霜的制备方法，制备获得霜样品1-4#，霜样品1-4#中各成分的含量组成见下表6。
[0118]
表6
[0119][0120][0121]
实施例25
[0122]
炎症是临床中最常见的病症之一，是人体为了确保去除有害刺激并修复受损组织
的一种防御反应。当人体免疫细胞在受到致炎因子作用时，一些小分子量的、能在细胞间传递信息的、并且具有特异性免疫调节功能的可溶性蛋白质或多肽通过机体本身分泌出来，并能参与或引起炎症反应，这些物质被称为炎症因子，包括no、tnf-α、il-6、pge-2、il-1等。它们都是炎症反应中重要的细胞活性因子，对细胞炎症有直接或间接的作用，彼此之间也产生影响。
[0123]
il-6作为一种多功能细胞因子，具有抗炎和致炎的双向功能，其作用与组织中的含量有关，正常水平的il-6对机体有利，产生过多会引起一系列炎性损伤；pge-2是cox-2酶活性通路的主要前列腺素产物，是类风湿性关节炎和骨关节炎等疾病的主要炎症介质。
[0124]
因此，验证本发明中制备的例舒缓修复组合物对炎症因子il-6和pge-2的影响。、
[0125]
1、实验材料：
[0126]
细胞系：raw246.7细胞(p7)
[0127]
培养基：含10％fbs的dmem培养基(fbs购自购自gibco，lot：42q1095k)
[0128]
测试条件：37℃，5％co2，饱和湿度条件下培养
[0129]
溶液及对照：
[0130]
mtt溶液：5mg/ml
[0131]
lps：用超纯水稀释至1mg/ml，-20℃保存(购自sigma)。
[0132]
空白对照组(nt)：不含血清的dmem培养基。
[0133]
模型组(m)：不含血清的dmem培养基，加入lps使其终浓度为1μg/ml。
[0134]
待测物质(ta)：将实施例3中舒缓修复组合物样品3#用不含血清的dmem培养基稀释至所需测试浓度，加入lps使其终浓度为1μg/ml，作为样品。
[0135]
阳性对照(pc)：不含血清的dmem培养基，加入地塞米松和lps使其终浓度分别为0.5μg/ml和1μg/ml。
[0136]
试剂盒：pge2 elisa kit(batch：0618063)购自cayman，usa；
[0137]
il-6的elisa试剂盒(lot：m210719-004a)购自深圳欣博盛生物科技有限公司。
[0138]
2、试验步骤：
[0139]
细胞活性测试：
[0140]
2.1细胞常规培养。制备密度为0.8～1.0
×
105个/ml的细胞悬液，将细胞悬液接种于96孔细胞培养板，每孔100μl，培养18-24h。
[0141]
2.2弃去孔中原培养液，每孔加入100μl不同浓度的待测样品，返回培养箱孵育24
±
1h。
[0142]
2.3取出培养板，每孔加入20μl mtt溶液，培养箱孵育3-4h。去除孔中液体，每孔加入100μl dmso，置于振荡器振荡10-15min后，在酶标仪570nm波长处测定吸光度。
[0143]
2.4数据分析：细胞活性以空白对照组的细胞活性为100％，计算各组相对细胞活性(viability)。
[0144]
细胞抗炎测试：
[0145]
2.5常规培养细胞，将细胞以密度为2.0～3.0
×
105个/孔接种于12孔板，返回培养箱培养18-24h。
[0146]
2.6取出培养板，弃去孔中原培养液，样品组每孔加入1ml含不同浓度的测试样品和lps(1μg/ml)的培养液，模型组加入以lps(1μg/ml)作为刺激物的培养液，阳性对照加入
1ml地塞米松(0.5μg/ml)和lps(1μg/ml)的培养液，对照组加入培养液，培养24
±
1h。
[0147]
2.7收集上清液，-80℃保存，细胞因子采用elisa试剂盒进行测定。
[0148]
2.8数据分析：数据以均值
±
标准差表示，数据采用spss进行分析，如果p《0.05考虑差异具有统计学意义。
[0149]
3、试验结果：
[0150]
3.1细胞活性测试结果见下表7。
[0151]
表7各组细胞相对活性(mean
±
sd)
[0152][0153]
由表7可知，筛选6.00％、2.00％、0.60％作为后续功效实验测试浓度。
[0154]
3.2细胞抗炎测试，pge2含量测试结果见下表8，il-6含量测试结果见下表9。
[0155]
表8.不同组别pge2差异比较
[0156][0157]
#：p《0.05，与空白对照组(nt)相比，差异具有统计学意义。
[0158]
*：p《0.05，与模型组(m)相比，差异具有统计学意义。
[0159]
表9.不同组别il-6差异比较
[0160][0161]
#：p《0.05，与空白对照组(nt)相比，差异具有统计学意义。
[0162]
*：p《0.05，与模型组(m)相比，差异具有统计学意义
[0163]
4、试验结论：
[0164]
在3.1测试条件下，与空白对照组相比，模型组的pge2含量明显增加27.92％(p《0.05)，与模型组相比，阳性对照组的pge2含量明显降低80.22％(p《0.05)，提示造模成功；与模型组相比，舒缓修复组合物yohealix-4r在2.00％，0.60％浓度下的pge2含量分别显著降低81.29％、63.60％(p《0.05)。
[0165]
在3.2测试条件下，与空白对照组相比，模型组的il-6含量明显增加18.19％(p《0.05)，与模型组相比，阳性对照组的il-6含量明显降低14.55％(p《0.05)，提示造模成功；与模型组相比，舒缓修复组合物yohealix-4r在6.00％，2.00％，0.60％浓度下的il-6含量显著降低67.57％、59.96％、48.44％(p《0.05)。
[0166]
通过在待测物质(ta)的样品组中的舒缓修复组合物样品3#，舒缓修复组合物yohealix-4r在此次测试中表现出抗炎活性。可见，该组合物对皮肤具有较好的抗炎舒缓功效。
[0167]
实施例26
[0168]
肥大细胞胞质内充满分泌颗粒，内含肝素、组胺、嗜酸性粒细胞趋化因子等，当肥大细胞受到抗原刺激时会产生特异性ige，肥大细胞上的受体活化，结合特异性抗体，使肥大细胞脱颗粒。胞质内含的组胺等物质释放导致组织管壁通透性增加，导致组织水肿、皮肤瘙痒等，引起过敏反应。
[0169]
因此，验证本发明中制备的例舒缓修复组合物对小鼠肥大细胞(p815)细胞脱颗粒活性的影响。
[0170]
1、实验材料
[0171]
细胞：p815(p4)
[0172]
培养基：含10％fbs的dmem培养基，2-8℃保存2周
[0173]
测试条件：温度37
±
0.5℃，湿度》90％，5％co2浓度
[0174]
溶液及对照：c48/80：购自sigma公司，用超纯水稀释至1mg/ml，0.22μm滤膜过滤，-20℃保存。
[0175]
待测样本(ta)：将实施例2中舒缓修复组合物样品2#用含10％fbs的dmem培养基稀释至100mg/ml，再继续稀释至所需测试浓度，作为样品。
[0176]
富马酸酮替芬：用dmso稀释至100mm，0.22μm滤膜过滤，-20℃保存。
[0177]
中性红：用含10％fbs的dmem培养基稀释至25μg/ml，0.22μm滤膜过滤。
[0178]
测试实验分组见下表10。
[0179]
表10
[0180][0181]
2、试验步骤
[0182]
细胞毒性筛查：
[0183]
2.1将培养的细胞接种于96孔板中，0.8-1.0
×
104个/100μl/孔，然后，置于培养箱中培养18-24h。
[0184]
2.2去除原培养液，每孔加入100μl不同浓度样品稀释液培养箱中暴露24
±
0.5h。
[0185]
2.3各孔中加入20μl mtt溶液，在37℃下孵育3h
±
0.5h。然后去除mtt溶液，各孔中加入100μl dmso，避光振荡10-15min后在570nm波长下测定吸光度值。
[0186]
2.4数据分析：各组数据以均值
±
标准差表示，以对照组细胞活性为100％，计算各组相对细胞活性(viability％)。
[0187][0188]
小鼠肥大细胞(p815)组胺释放测试：
[0189]
2.5收集对数期的p815细胞，以2.0～3.0
×
105个/ml/孔接种于24孔板，培养箱培养18-24h；
[0190]
2.6弃去原培养液，用hbss清洗细胞两次，加入终浓度为25μg/ml中性红的培养液，返回培养箱孵育3h，预先加载中性红；
[0191]
2.7之后弃去原培养液，hbss清洗细胞两次，加入不同浓度的样品(待测样本分别加3个浓度样品，阳性对照组加入100μm富马酸酮替芬，阴性对照组和模型组加等量的完全培养基)每组3个复孔，孵育1h；
[0192]
2.8hbss清洗细胞两次，再加入含10μg/ml c48/80的培养液，激发p815释放组胺，孵育20min后冰浴30min终止反应。
[0193]
2.9弃去原培养基，以hbss少量覆盖细胞表面，镜检拍照。
[0194]
3、试验结果
[0195]
3.1细胞毒性实验结果见表11。
[0196]
表11
[0197][0198][0199]
由表11可知，筛选0.60％、0.20％、0.06％浓度作为后续实验测试浓度。
[0200]
3.2p815细胞脱颗粒形态学镜检结果见图1-4。其中，图1为阴性对照(nc)的小鼠肥大细胞(p815)；图2为模型对照(m)的小鼠肥大细胞(p815)；图3为阳性对照(pc)的小鼠肥大细胞(p815)；图4为样品组(ta)的小鼠肥大细胞(p815)，其中，图4a为0.60％样品组(ta)的小鼠肥大细胞(p815)；4b为0.20％样品组(ta)的小鼠肥大细胞(p815)；4c为0.06％样品组(ta)的小鼠肥大细胞(p815)。
[0201]
4、测试结论
[0202]
在本次实验条件下，镜检可见模型对照组(m)的p815细胞周围有明显脱颗粒现象，阴性对照组(m)及阳性对照组(pc)的镜检结果可见中性红染色相较而言轮廓更为明晰，无明显脱颗粒现象出现，提示造模成功；样品组(ta)的舒缓修复组合物样品2#在0.60％、0.20％和0.06％浓度下，镜检结果皆显示p815细胞有一定的脱颗粒现象，但较模型对照组(m)而言现象发生较少，中性红染色轮廓更为明晰。
[0203]
通过在待测样本(ta)的样品组中的舒缓修复组合物样品2#，舒缓修复组合物yohealix-4r在此次测试中表现出抑制p815细胞脱颗粒活性。可见，该组合物对皮肤具有较好的抗过敏、祛红止痒等功效。
[0204]
实施例27
[0205]
舒缓修复组合物yohealix-4r对人角质细胞的修复作用。
[0206]
1、实验材料
[0207]
细胞系：人角质细胞(hacat)
[0208]
完全培养基：含10％胎牛血清(fbs)的dmem培养基(fbs购自gibco,lot:42q1095k)
[0209]
维持培养基：含1％fbs的dmem培养基(fbs购自gibco，lot：42q1095k)
[0210]
测试条件：温度37
±
0.5℃，湿度》90％，5％co2浓度
[0211]
溶液及对照：
[0212]
阴性对照组(nc)：维持培养基。
[0213]
阳性对照组(pc)：含1ng/ml egf的维持培养基。
[0214]
待测物质(ta)：将实施例4中舒缓修复组合物样品4#的原样作为储备液，使用维持
培养基依次稀释至待测浓度，作为样品。
[0215]
2、试验步骤：
[0216]
2.1细胞活性测试
[0217]
2.1.1细胞常规培养。制备密度为0.8～1.0
×
105个/ml的细胞悬液，将细胞悬液接种于96孔细胞培养板，每孔100μl，培养18-24h。
[0218]
2.1.2弃去孔中原培养液，每孔加入100μl不同浓度的测试样品，返回培养箱孵育48
±
1h。
[0219]
2.1.3取出培养板，每孔加入20μl mtt溶液，培养箱孵育3-4h。去除孔中液体，每孔加入100μl dmso，置于振荡器振荡10-15min后，在酶标仪570nm波长处测定吸光度。
[0220]
2.1.4数据分析：细胞活性以阴性对照组的细胞活性为100％，计算各组相对细胞活性(viability)。
[0221]
2.2细胞划痕测试
[0222]
2.2.1常规培养细胞，调整细胞密度为3.0～5.0
×
105个/ml，使用带有2孔插入物的24孔细胞培养板，每孔接种70μl，返回培养箱培养18-24h至细胞融合。
[0223]
2.2.2小心用镊子取出培养板中的培养插入物，培养插入物2孔之间形成一道平整的无细胞区域。用pbs清洗细胞层3次，去除脱落的细胞。
[0224]
2.2.3每孔加入1ml含不同浓度的测试样品的培养液，同时在镜下采集图像，记为0h，标记所采集的位置。
[0225]
2.2.4每隔12h，在所标记的相同位置，采集图片，记为12h和24h。
[0226]
2.2.5数据分析：采用ipp图像分析软件，分析每个图像划痕区域的面积，以0h为100％，计算相对面积。
[0227]
3、试验结果：
[0228]
3.1细胞活性测试结果见表12。
[0229]
表12各组细胞相对活性(mean
±
sd)
[0230][0231][0232]
由表12可知，筛选1.00％、0.50％、0.25％作为后续功效实验测试浓度。
[0233]
3.2细胞划痕测试结果见表13、表14、图5、图6。
[0234]
表13.不同组别划痕相对面积大小(％)
[0235][0236]
*：与对照组相比，差异具有统计学意义。
[0237]
表14
[0238]
组别0h12h24hnc图6a100.00
±
2.85图6b86.60
±
1.47图6c59.10
±
6.11pc图6d100.00
±
6.66图6e62.47
±
4.91图6f4.55
±
4.38ta(1.0％)图6g100.00
±
0.51图6h75.74
±
7.60图6i40.45
±
7.75ta(0.5％)图6j100.00
±
0.55图6k78.24
±
0.78图6l54.01
±
4.88ta(0.25％)图6m100.00
±
5.63图6n78.51
±
1.70图6o50.80
±
6.75
[0239]
在3.2测试条件下，由表13、表14、图5、图6可知，12h时，与阴性对照组相比，阳性对照组的划痕相对面积明显减少(p《0.05)，样品组(ta)的舒缓修复组合物样品4#在1.00％、0.50％、0.25％浓度下划痕相对面积均明显减少(p《0.05)。24h时，与阴性对照组相比，阳性对照组的划痕相对面积明显减少(p《0.05)，样品组(ta)的舒缓修复组合物样品4#在1.00％浓度下划痕相对面积有明显减少(p《0.05)。
[0240]
通过在待测样本(ta)的样品组中的舒缓修复组合物样品4#，提示舒缓修复组合物yohealix-4r在1.00％、0.50％、0.25％浓度下对人角质细胞有一定的促进修复作用。可见，该组合物对皮肤具有较好的屏障修复功效。
[0241]
由上述实施例25-27可知，本发明制备的舒缓修复组合物yohealix-4r对炎症因子il-6和pge-2具有良好的抑制作用，抑制p815细胞脱颗粒活性，对人角质细胞有一定的促进修复作用，具有良好的舒缓修复，抑制炎症、抗过敏、祛红止痒、屏障修复的功效。
[0242]
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。