组合物、抗氧化剂、抗糖化剂、神经突伸长促进剂及认知功能改善剂的制作方法

1.本发明涉及组合物、抗氧化剂、抗糖化剂、神经突伸长促进剂及认知功能改善剂。


背景技术：

2.近年，痴呆症患者逐渐增加，已成为社会问题。另外，也有很多人尽管不是痴呆症患者、仍因健忘或认知功能下降而烦恼。已知痴呆症有阿尔茨海默病型痴呆症、血管性痴呆症、路易小体型痴呆症、额颞叶变性(ftld)等类型。痴呆症患者中的多数为阿尔茨海默病型痴呆症。痴呆症与脑内β-淀粉样蛋白的蓄积有关。例如，专利文献1中公开了含有特定的肽作为有效成分的、用于改善由β-淀粉样蛋白引起的脑功能障碍的经口组合物。
3.现有技术文献
4.专利文献
5.专利文献1：日本特开2018-154640号公报


技术实现要素：

6.发明所要解决的课题
7.虽然到目前为止对许多痴呆症的治疗方法进行了研究，但是它们都只是暂时延缓发展的治疗药，没有确立可以期待根本性的治疗效果的方法。特别地，作为除去β-淀粉样蛋白的方法，也没有确立根本性的治疗方法。对于认知功能下降而言，在症状为轻度、处于可逆状态的阶段的预防很重要。
8.本发明的目的是提供对认知功能改善有效的新型制剂。
9.用于解决课题的手段
10.本发明的一方面涉及抗氧化剂或抗糖化剂，其含有蜂胶及银杏叶提取物作为有效成分。
11.本发明还涉及神经突伸长促进剂，其含有蜂胶及银杏叶提取物作为有效成分。
12.本发明还涉及认知功能改善剂，其含有蜂胶及银杏叶提取物作为有效成分。
13.上述制剂优选不含dha和epa中的至少一者。
14.本发明的另一方面涉及抗氧化剂，其含有蜂胶、和选自由磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物及积雪草提取物组成的组中的至少一种。
15.本发明还涉及抗糖化剂，其含有蜂胶、和选自由磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物及姜黄素组成的组中的至少一种。
16.本发明还涉及认知功能改善剂，其含有蜂胶、和选自由磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、积雪草提取物及姜黄素组成的组中的至少一种。
17.本发明还涉及抗炎剂，其含有蜂胶及姜黄素。
18.本发明的其他另一方面涉及组合物，其含有：蜂胶；和磷脂酰丝氨酸及咖啡果提取物中的至少一者。
19.本发明还涉及食品或医药品，其含有蜂胶和积雪草提取物。
20.本发明其他另一方面涉及组合物，其含有蜂胶、银杏叶提取物、咖啡果提取物、积雪草提取物、姜黄素及磷脂酰丝氨酸。
21.发明效果
22.本发明提供对认知功能改善有效的新型制剂。
附图说明
23.[图1]为示出试验例1中的神经突形成率的图表。
[0024]
[图2]为试验例1中的pc12细胞的相差显微镜照片。
[0025]
[图3]为示出试验例2中的氧化应激水平的图表。
具体实施方式
[0026]
以下，针对本发明的优选实施方式进行详细说明。但是，本发明不仅限于以下的实施方式。
[0027]
本实施方式的一方面涉及组合物，其含有蜂胶、和选自由银杏叶提取物、磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、积雪草提取物及姜黄素组成的组中的至少一种。该组合物也可以为食品、准医药品(quasi drug)或医药品。
[0028]
含有蜂胶、和选自由银杏叶提取物、磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、积雪草提取物及姜黄素组成的组中的至少一种的组合物可以作为抗氧化剂、抗糖化剂、神经突伸长促进剂及认知功能改善剂使用。通过将银杏叶提取物、磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、积雪草提取物及姜黄素与蜂胶组合摄取，与分别单独使用这些成分相比，在选自由抗氧化、抗糖化及神经突伸长促进组成的组中的至少一个作用中，可以发挥更高的效果，具有基于上述作用的更高的认知功能改善作用。
[0029]
通过组合摄取蜂胶和姜黄素，与分别单独使用这些成分相比，可以在nrf2通路激活作用中发挥协同效果。已知通过nrf2通路激活，可以带来抗炎、抗氧化及认知功能改善作用，因此，含有蜂胶和姜黄素的组合物除作为抗氧化剂或认知功能改善剂外，也可以作为抗炎剂使用。进一步，含有蜂胶和姜黄素的组合物在抗炎作用的基础上，也有肝功能改善、睡眠质量改善及认知功能改善作用。因此，含有蜂胶及姜黄素的组合物也可以作为肝功能改善剂或睡眠质量改善剂使用。
[0030]
本实施方式的另一方面为含有蜂胶、银杏叶提取物、磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、积雪草提取物及姜黄素的组合物。该组合物含有上述全部成分，从而具有高水平的抗氧化作用、抗糖化作用、抗炎作用及神经突伸长促进作用，在这些作用的基础上，具有高水平的睡眠质量改善作用、肝功能改善作用及认知功能改善作用。以下，针对各成分进行说明。
[0031]
(蜂胶)
[0032]
蜂胶例如可以按照常规方法作为养蜂产品获得。蜂胶本身有抗氧化、抗炎、抑制认知功能下降等作用。蜂胶也可以是阿莱格林树(alecrim)来源、桉树来源、杨树来源、书带木属(clusia)植物来源等任意的植物来源。从生理活性高的观点来看，优选为来源于阿莱格林树的蜂胶。阿莱格林树是菊科、酒神菊属的酒神菊树(baccharis dracunculifolia)。
[0033]
蜂胶可以是例如日本产、巴西产、中国产、欧洲各国产、大洋洲产、美国产等。巴西
产蜂胶主要来源于阿莱格林树。巴西产蜂胶具有肉桂酸衍生物含量高的特征。本实施方式涉及的抗氧化剂、抗糖化剂、神经突伸长促进剂、认知功能改善剂、抗炎剂、肝功能改善剂及睡眠质量改善剂(以下总称为“本实施方式涉及的制剂”)优选含有巴西产蜂胶作为有效成分。
[0034]
蜂胶可以是棕、红、黄、绿、超绿(super green)、极绿(ultra green)等任意等级，其中优选为绿、超绿或极绿等级的蜂胶。这些等级由蜂胶中的阿特匹林c(artepillin c)含量来确定。将阿特匹林c为3质量％以上的蜂胶称为绿蜂胶。蜂胶中的阿特匹林c含量优选为5质量％以上，更优选为8质量％以上。
[0035]
蜂胶优选来源于属于蜜蜂科蜜蜂属的蜂，在蜜蜂属之中，优选来源于西方蜜蜂。认为西方蜜蜂中有24～28个亚种，可以使用来源于任意亚种的蜂胶。特别优选使用来源于作为西方蜜蜂的亚种之一的非洲蜜蜂(a.mellifera scutellata)与其他西方蜜蜂的欧洲产亚种的杂交种、即非洲蜂化蜜蜂的蜂胶。
[0036]
蜂胶例如可以是蜂胶原块，也可以是对蜂胶原块实施了某种处理后的蜂胶处理物。蜂胶处理物例如可以是对蜂胶原块实施了粉碎、提取、提取物的浓缩或粉末化、粉末的造粒等处理的产物，也可以是提取后残留的提取残余物。即，蜂胶处理物例如可以是蜂胶的粉碎物、提取物、浓缩提取物、提取物粉末、提取物颗粒、提取残余物等。提取可以是例如水提取、亲水性有机溶剂提取、超临界提取等。作为亲水性有机溶剂，例如可举出乙醇、丙三醇、1,3-丁二醇等。蜂胶提取物可以是从蜂胶原块提取而得到的，也可以是从提取后的残余物进一步提取而得到的。处理方法可以是一种，也可以是两种以上的组合。蜂胶处理物中，就蜂胶亲水性有机溶剂提取物而言，蜂胶的有效成分可以在短时间内高效且均衡性良好地被提取出来，因此优选。蜂胶处理物优选为蜂胶乙醇提取物。
[0037]
作为蜂胶，也可以使用市售品。含有蜂胶的市售品例如可举出株式会社山田养蜂场的蜂胶300、蜂胶液30(巴西产)、蜂胶粒、蜂胶颗粒apc、propolis mild、蜂胶饮品、森川健康堂公司的neo propolis粒、蜂胶粒、蜂胶液、propolis mild液、桉树蜂胶、l’abeille co.,ltd.的l’abeille蜂胶(液体型)、l’abeille蜂胶(胶囊型)、l’abeille蜂胶蜂蜜等。
[0038]
对于上述制剂或组合物而言，以蜂胶的固态成分量计，例如可以按体重60kg的成人每一天1mg～1000mg的用量来使用，优选按10～500mg的用量来使用，更优选按20～200mg的用量来使用。
[0039]
另外，上述制剂或组合物中蜂胶的含量以固态成分量计，相对于制剂或组合物的总量而言，例如可以为1质量％以上、3质量％以上、4质量％以上或5质量％以上，可以为30质量％以下、20质量％以下、10质量％以下或8质量％以下。
[0040]
(银杏叶提取物)
[0041]
银杏叶提取物是从银杏(ginkgo bilobal.)的叶子中得到的提取物。银杏叶提取物本身具有脑血流改善、抗炎等作用。提取溶剂例如可以是乙醇等醇、丙酮等有机溶剂、水、或它们的混合液。提取溶剂优选为水。作为提取原料的银杏叶可以是新鲜的，可以是干燥的，也可以是粉末。银杏叶提取物也可是由银杏叶得到的提取物进一步实施精制、浓缩、干燥等处理而得的提取物。银杏叶提取物也可以是通过树脂柱精制等除去银杏酸(ginkgolic acid)而得的提取物。
[0042]
本实施方式涉及的制剂或组合物中，对于蜂胶与银杏叶提取物的配合比而言，以
固态成分计，例如可以是1:0.2～5、1:0.3～2、1:0.5～2、1:1～2或1:1.3～1.9。
[0043]
对于上述制剂或组合物而言，以银杏叶提取物的固态成分量计，例如可以按体重60kg的成人每一天1mg～1000mg的用量来使用，优选按10～500mg的用量来使用，更优选按20～200mg的用量来使用。
[0044]
另外，上述制剂或组合物中银杏叶提取物的含量以固态成分量计，相对于制剂或组合物总量而言，例如可以是1质量％以上、3质量％以上、5质量％以上或7质量％以上，可以是30质量％以下、20质量％以下、15质量％以下或12质量％以下。
[0045]
(磷脂酰丝氨酸)
[0046]
磷脂酰丝氨酸可以是合成品，也可以来源于植物或动物。磷脂酰丝氨酸例如可以用大豆卵磷脂等植物来源的卵磷脂作为原料，通过酶反应得到。磷脂酰丝氨酸本身具有记忆力改善、认知功能改善等作用。
[0047]
本实施方式涉及的制剂或组合物中，蜂胶与磷脂酰丝氨酸之比可以为例如1:1～5，优选为1:1～3，更优选为1:1.5～2.5。
[0048]
对于上述制剂或组合物而言，以磷脂酰丝氨酸的固态成分量计，例如可以按体重60kg的成人每一天1mg～1000mg的用量来使用，优选按10～500mg的用量来使用，更优选按50～300mg的用量来使用。
[0049]
上述制剂中磷脂酰丝氨酸的含量以固态成分量计，相对于制剂或组合物总量而言，例如可以是1质量％以上、5质量％以上、7质量％以上或10质量％以上，可以是30质量％以下、20质量％以下、17质量％以下或15质量％以下。
[0050]
(咖啡果提取物)
[0051]
咖啡果提取物是从咖啡果中提取得到的提取物。咖啡果是咖啡树的果实，可以包含外果皮、果肉、粘质物(mucilage)、壳、茎及种子。咖啡优选使用阿拉比卡咖啡。提取溶剂例如可以是乙醇、甲醇等醇、丙酮等有机溶剂、水，可以是它们的混合液。作为咖啡果提取物，也可以是对从咖啡果得到的提取物进一步实施精制、浓缩、干燥等处理而得的提取物。
[0052]
咖啡果提取物本身具有神经保护等作用。通过摄取咖啡果提取物，使得名为bdnf的蛋白质的血液浓度升高。bdnf是促进神经细胞的生成、成长及再生的必要成分，也称为脑的营养。
[0053]
本实施方式涉及的制剂或组合物中，蜂胶与咖啡果提取物之比可以为例如1:0.5～3，优选为1:0.8～2，更优选为1:1～1.7。
[0054]
对于上述制剂或组合物而言，以咖啡果提取物的固态成分量计，例如可以按体重60kg的成人每一天1mg～1000mg的用量来使用，优选按10～500mg的用量来使用，更优选按20～200mg的用量来使用。
[0055]
上述制剂或组合物中的咖啡果提取物的含量以固态成分量计，相对于制剂的总量而言，例如可以为1质量％以上、3质量％以上、5质量％以上或7质量％以上，可以为30质量％以下、20质量％以下、15质量％以下、12质量％以下或10质量％以下。
[0056]
(姜黄素)
[0057]
姜黄素是姜黄(curcuma longa)等植物含有的色素成分。姜黄素本身具有抗氧化、抗炎、β-淀粉样蛋白抑制、肠道屏障等作用。姜黄素例如可以使用已知的方法从姜黄根茎提取。作为姜黄提取物，例如可以使用水、热水、乙醇等有机溶剂或它们的混合液作为提取溶
剂，从姜黄根茎提取得到。对于本实施方式涉及的制剂或组合物而言，作为姜黄素源，也可以含有例如姜黄的根或其提取物。上述制剂或组合物也可以含有姜黄素以外的姜黄来源的成分。姜黄素也可以通过微粒子化等已知的方法而提高吸收性。
[0058]
本实施方式涉及的制剂或组合物中，蜂胶与姜黄素之比可以为例如1:2～5，优选为1:2.5～4，更优选为1:2.7～3.7。
[0059]
对于上述制剂或组合物而言，以姜黄素的固态成分量计，例如可以按体重60kg的成人每一天1mg～1000mg的用量来使用，优选按10～500mg的用量来使用，更优选按100～350mg的用量使用。
[0060]
对于上述制剂或组合物中姜黄素的含量而言，以固态成分量计，相对于制剂或组合物总量而言，例如可以是5质量％以上、10质量％以上、15质量％以上或17质量％以上，可以是40质量％以下、30质量％以下、25质量％以下或23质量％以下。
[0061]
(积雪草提取物)
[0062]
积雪草提取物可以从积雪草(centella asiatica umbelliferae)提取得到。积雪草提取物本身具有认知功能改善、神经障碍改善等作用。积雪草又称为雷公根(tsubokusa)。积雪草的提取部位可以是花、花穗、果皮、果实、茎、叶、枝、枝叶、秆、树皮、根茎、根皮、根、种子或全草。积雪草的提取部位优选为叶、茎或全草。提取溶剂例如可以为水、乙醇等醇。作为积雪草提取物，也可以是对从植物体得到的提取物进一步实施精制、干燥等处理而得的提取物。
[0063]
本实施方式涉及的制剂或组合物中，蜂胶与积雪草提取物之比可以为例如1:1～6，优选为1:2～5，更优选为1:2.5～4。
[0064]
对于上述制剂或组合物而言，以积雪草提取物的固态成分量计，例如可以按体重60kg的成人每一天1mg～1000mg的用量来使用，优选按10～500mg的用量来使用，更优选按100～350mg的用量来使用。
[0065]
上述制剂或组合物中积雪草提取物的含量以固态成分量计，相对于制剂或组合物总量而言，例如可以是1质量％以上、5质量％以上、10质量％以上、15质量％以上或18质量％以上，可以是40质量％以下、30质量％以下、25质量％以下或23质量％以下。
[0066]
上述制剂或组合物特别优选至少含有蜂胶和银杏叶提取物的组合。
[0067]
上述制剂或组合物可以不含dha及epa中的至少一者，也可以不含dha及epa这两者。特别是上述制剂含有蜂胶和银杏叶提取物的情况下，由于含有这些成分作为有效成分，因此即使不含dha和epa也能得到足够高的效果。另外，上述制剂或组合物可以含有gaba，也可以不含gaba。
[0068]
上述制剂或组合物可以作为医药品、准医药品或食品本身使用，也可以作为医药品、准医药品或食品中的成分而使用。
[0069]
考虑阿尔茨海默病型痴呆症的原因是β-淀粉样蛋白的蓄积。但是，近年来，逐渐阐明了β-淀粉样蛋白是作为脑内针对炎症、营养不足、毒素的存在等多种威胁的防御反应而产生的物质。因此，可以认为，为了改善认知功能，较之除去β-淀粉样蛋白自身而言，解决其产生的原因是更有效的。
[0070]
脑内的炎症被认为是由于例如过量摄取反式脂肪酸、麸质或酪蛋白、及过量摄取糖质等而发生的，肥胖、口腔内环境的恶化或病原体的侵入也被视作原因。作为脑营养不足
的原因，考虑有脑神经细胞所需的激素、维生素、矿物质等营养素的不足及运动不足等。脑神经的营养不足会造成脑萎缩。毒素起因于有毒金属、霉菌来源的毒素等。此外，阿尔茨海默病等痴呆症作为炎症性和萎缩性的混合型，高血糖引起的糖毒性也被视作原因。另外，也存在起因于动脉硬化等的脑内出血导致受到损伤从而引起痴呆症的情况。即，阿尔茨海默病等痴呆症具有炎症性、糖毒性、萎缩性、毒物性及血管性这5种类型。
[0071]
对于本实施方式涉及的制剂或组合物而言，不仅含有单独起到抗炎、抗氧化、抗糖化、血糖值改善、胰岛素抵抗性改善、脑神经保护、脑神经再生促进、肝脏保护、针对内毒素的脑细胞保护、脑血流改善等各种效果的物质作为成分，而且，通过与蜂胶组合含有所述成分，至少抗氧化、抗糖化、抗炎、神经突伸长促进作用等效果以与所含各成分的单独情况下的效果的总和(相加效果)相比更高的水平发挥。因此，本实施方式涉及的制剂或组合物整体上对认知功能改善起到更高的效果。另外，本实施方式涉及的制剂或组合物在抗炎作用的基础上，还具有肝功能改善及睡眠质量改善的作用。另外，如上所述，本实施方式涉及的制剂或组合物与β-淀粉样蛋白的产生及蓄积的防止相关，因此也可以作为认知功能下降预防剂使用。
[0072]
从本实施方式涉及的制剂对于上述的炎症性、糖毒性、萎缩性、毒物性及血管性这5种类型全部带来较高的效果的观点来看，特别优选含有蜂胶、银杏叶提取物、磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、积雪草提取物及姜黄素中的全部。本实施方式涉及的制剂或组合物所含有的上述成分均可以作为食品使用，因此具有日常容易摄取的优点。
[0073]
本实施方式涉及的制剂可以作为阿尔茨海默病型痴呆症等痴呆症的改善或预防剂、轻度认知障碍的改善或预防剂使用。
[0074]
本实施方式涉及的抗氧化剂、抗糖化剂、神经突伸长促进剂及认知功能改善剂的施予对象可以是健康人，也可以是阿尔茨海默病型痴呆症患者等痴呆症患者、痴呆症的前期即具有轻度认知障碍者、有认知功能下降风险者、自觉健忘者、被他人指出健忘者、睡眠障碍者、需改善肝功能者。对象例如可以是45岁以上，另外，例如也可以是60岁以上、65岁以上、70岁以上或75岁以上的老龄者。
[0075]
可以认为，本实施方式涉及的抗氧化剂、抗糖化剂、神经突伸长促进剂及认知功能改善剂对血浆中bdnf(脑源性神经营养因子)浓度及/或脑内bdnf浓度较低者特别有效。认为血浆中bdnf浓度与脑内bdnf浓度相关。本实施方式涉及的抗氧化剂、抗糖化剂、神经突伸长促进剂及认知功能改善剂的施予对象可以是血浆中bdnf浓度为例如120ng/ml以下、110ng/ml以下、100ng/ml以下、90ng/ml以下、85ng/ml以下、79ng/ml以下或78ng/ml以下的人。施予对象的血浆中bdnf浓度也可以是10ng/ml以上、30ng/ml以上或50ng/ml以上。另外，施予对象也可以是血浆bdnf浓度为多名对象的血浆bdnf浓度的中值以下、平均值以下或小于第一四分位数的人。
[0076]
本实施方式涉及的制剂或组合物也可以进一步含有其他成分。作为其他成分，例如可举出药学上允许的成分(例如，赋形剂、粘合材料、润滑剂、崩解剂、乳化剂、表面活性剂、基剂、助溶剂、悬浮剂)、作为食品允许的成分(例如，矿物质类、维生素类、类黄酮类、醌类、多酚类、氨基酸、核酸、必需脂肪酸、清凉剂、粘合剂、甜味剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、香料、稳定剂、防腐剂、缓释调节剂、表面活性剂、溶解剂、湿润剂)。
[0077]
本实施方式涉及的制剂或组合物也可以是固体、液体、糊剂等任意的形状，也可以
是片剂(包括无包衣片、糖衣片、泡腾片、薄膜衣片、咀嚼片、含片剂等)、胶囊剂、丸剂、粉末剂(散剂)、细粒剂、颗粒剂、液剂、悬浊液、乳浊液、糖浆、糊剂、注射剂(包括在使用时配合至蒸馏水或者氨基酸输液或电解质输液等输液而制成液剂形式的情况)等剂型。上述各种制剂可以例如通过将基于上述方法得到的制剂或组合物根据需要与其他成分混合、成型为上述剂型来制备。
[0078]
作为食品组合物或作为食品组合物的成分之一使用的情况下，该食品组合物优选为突出了食品的第三功能、即身体状况调节功能的食品组合物。作为突出了食品的第三功能的制品，例如可举出健康食品、功能性标示食品、营养功能食品、营养辅助食品、补充剂及特定保健用食品。
[0079]
本实施方式涉及的制剂或组合物优选为体内摄取。施予方式可以是经口施予，也可以是非经口施予。本实施方式涉及的制剂或组合物可以一天施予一次，也可以按一天二次、一天三次等分多次进行施予。
[0080]
[实施例]
[0081]
以下，基于实施例对本发明更具体地进行说明。但是，本发明不限于以下实施例。
[0082]
[试验例1：神经突伸长活性评价]
[0083]
有报告称通过向胆碱能神经元靶向输送神经生长因子(ngf，nerve growth factor)可以防止细胞死亡，ngf通过刺激突触的胆碱能受体促进认知改善。未成熟的细胞多呈近似于球状的形态，倾向于在分化并具有功能性的过程中拥有各自的特征性结构。神经细胞的情况下，在最终分化时形成无数的突起，成为神经元。本试验中，预先使ngf以低浓度(10ng/ml)发挥作用从而使pc12准备向神经分化，向其中加入试样，由此针对试样对神经分化诱导能力造成的影响进行分析。
[0084]
使用以下材料作为进行评价的试样。
[0085]
蜂胶(蜂胶乙醇提取物、api蜂胶、eep-b55a)：以10mg/ml的浓度溶解在分子生物学用乙醇中，通过0.2μm的过滤器后，在-80℃中保存。
[0086]
银杏叶提取物(水提取物，常磐植物化学)：以100mg/ml溶解在二甲基亚砜(dmso)中，通过0.2μm的过滤器后，在-80℃中保存。
[0087]
神经生长因子-β(大鼠来源)
[0088]
使用以下细胞及培养基。
[0089]
细胞：pc12(jcrb0733，06082017)
[0090]
培养基：ccm(完全培养基，completely culture medium)
[0091]
rpmi 1640
[0092]
10％马血清
[0093]
5％胎牛血清
[0094]
1％青霉素-链霉素(nacalai tesque)
[0095]
dm(分化培养基，differentiation medium)：
[0096]
rpmi 1640
[0097]
2％马血清
[0098]
1％胎牛血清
[0099]
1％青霉素-链霉素
[0100]
10ng/ml ngf-β
[0101]
培养条件：37℃、5％co2[0102]
pc12细胞的传代培养基使用ccm。传代细胞密度达到70％汇合(confluency)时进行传代。在用于试验前，进行3次以上的细胞传代，设置细胞稳定的时间。诱导神经分化时，向6孔板中各接种用2mlccm稀释的0.8
×
104个细胞，进行过夜培养。培养基更换为dm，随后进行48小时培养。更换为dm的48小时后，各孔更换为改变附加条件的dm培养基，使用荧光显微镜(keyence公司，bz-x800)进行经时观察。作为附加条件，分别实施了单独添加蜂胶(25μg/ml)、单独添加银杏叶提取物(10μg/ml)及共同添加蜂胶(25μg/ml)和银杏叶提取物(10μg/ml)。
[0103]
17小时的培养期间，对每孔每15分钟拍摄1次照片，每次拍摄3张。对视野内的细胞总数及神经突比细胞胞体更长的细胞的数量进行计数。不考虑每个细胞的突起数量，细胞只要含有一根比细胞胞体更长的突起，即定义为突起伸长细胞。将各孔的细胞数相加后，进行各条件的数值的比较及分析。将在17小时后观察得到的、相对于细胞总数而言的突起伸长细胞的数量作为神经突形成率(％)进行评价。结果在图1及图2示出。
[0104]
图1为培养17小时后的pc12细胞的相差显微镜照片，左起依次为示出：对照(dmso)、单独添加蜂胶、单独添加银杏叶提取物、共同添加蜂胶及银杏叶提取物的细胞。图2为示出各条件下的神经突形成率的图表。误差线表示平均值
±
sd(n＝3)。与对照、单独添加蜂胶及单独添加银杏叶提取物相比，蜂胶及银杏叶提取物的联用处理中，显示出神经细胞突起的伸长得到促进。
[0105]
[试验例2：抗氧化评价]
[0106]
使用甲萘醌(menadione)作为氧化应激诱导剂进行抗氧化评价试验。有报道称，甲萘醌对培养细胞的处理可使细胞内产生活性氧(ros)，诱导由于氧化应激导致的细胞死亡。因此，甲萘醌被用于对细胞有氧化应激保护作用的材料的评价。
[0107]
在预先添加了500μl的角化细胞增殖培养基的24孔板中，以成为3
×
104个细胞/cm2的方式接种正常人角化细胞。培养24小时后，将培养基更换为以成为0或100μm的方式添加作为氧化应激诱导剂的甲萘醌而得的培养基。另外，添加有甲萘醌100μm的培养基中，同时添加了10或50μg/ml蜂胶、17或86μg/ml银杏叶提取物、或者以浓度比成为1:1.7的方式分别按10或50μg/ml、及17或86μg/ml添加的银杏叶提取物和蜂胶的组合。
[0108]
使用作为氧化应激检测试剂的cellrox green，对施予被检物质起1小时后的细胞的氧化应激水平进行评价。另外，通过基于hoechest33342染色的细胞核数对细胞数进行评价。氧化应激水平是用cellroxgreen的荧光强度除以核数，得到每个细胞的荧光强度，将甲萘醌单独的氧化应激水平作为100％算出的。结果在图3示出。
[0109]
图3为示出单独添加蜂胶、单独添加银杏叶提取物、及共同添加银杏叶提取物和蜂胶的情况下的各浓度的氧化应激水平的图表。误差线表示平均值
±
sd。单独添加蜂胶及单独添加银杏叶提取物的情况下，分别浓度依赖性地使氧化应激水平下降。共同添加蜂胶和银杏叶提取物的情况下，显示较之单独而言更高的抗氧化活性。以上结果显示，通过将蜂胶和银杏叶提取物进行组合，氧化应激保护效果增加。
[0110]
[试验例3：orac试验]
[0111]
使用orac(氧自由基吸收能力)试验验证蜂胶与各试样的组合的抗氧化能力。使用
以下物质作为试样。
[0112]
蜂胶：乙醇提取物粉末(巴西产绿蜂胶，含有精氨酸作为赋形剂。)
[0113]
磷脂酰丝氨酸：合成品
[0114]
咖啡果提取物：水/乙醇提取物粉末
[0115]
积雪草提取物：水提取物粉末(含有小于10％的麦芽糊精作为赋形剂。)
[0116]
将各试样溶解于50％乙醇水溶液。如下所述，使未溶解于乙醇水溶液的样品悬浊，实施100rpm、10分钟的振荡提取及10分钟的超声波提取、或仅实施10分钟的超声波提取，然后进行3000rpm、10分钟的离心分离，取得上清液。
[0117]
磷脂酰丝氨酸：振荡提取及超声波提取后，离心分离
[0118]
蜂胶 磷脂酰丝氨酸：仅超声波提取(无离心分离)
[0119]
积雪草提取物、蜂胶 积雪草提取物：超声波提取后，离心分离上述以外的样品：仅溶解(无提取步骤和离心分离)
[0120]
将得到的试验液使用75mm磷酸缓冲液稀释后加入96孔板中，添加荧光素溶液。将96孔板在于37℃加热的状态下，添加aaph(2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐)，使用酶标仪对荧光强度的衰减时间按每5分钟进行1.5小时的测定。使用水溶性维生素e(trolox)作为标准试剂制作标准曲线，以水溶性维生素e当量(μmolte/g)的形式算出各试样的抗氧化能力。结果在表1示出。
[0121]
[表1]
[0122][0123]
表1中，期待值是各组合中的各成分单独使用时的orac值的合计。增加率是实测值除以期待值后乘以100的值。磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物及积雪草提取物通过与蜂胶组合而显示出抗氧化能力的协同性增加。
[0124]
[试验例4：ages测定]
[0125]
使用ages(晚期糖基化终末产物，advanced glycation end products)测定试验验证蜂胶和各试样的组合带来的抗糖化能力。作为试样，使用蜂胶、磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、姜黄素及银杏叶提取物。针对蜂胶、磷脂酰丝氨酸及咖啡果提取物，使用了与试验例3相同的物质。作为银杏叶提取物，使用银杏叶乙醇
·
水提取物粉末。作为姜黄素源，使用姜黄提取物(乙酸乙酯提取物粉末，姜黄素含量为95质量％)。
[0126]
将各试样溶解于100％二甲基亚砜。将得到的溶液或超纯水12μl、20mg/ml人血清白蛋白溶液40μl、及0.4mol/l葡萄糖溶液或超纯水50μl混合而加入1.5ml管。使用涡旋振荡器将管内的液体充分混合后，于60℃孵育40小时。将反应后的溶液分注于384孔板，并照射
370nm的激发光，以440nm的荧光测定，计算出ages产生量。根据以下数式计算出ages产生阻断率。结果在表2示出。
[0127]
ages产生阻断率(％)＝{1-(a-b)/(c-d)}
×
100
[0128]
a：试样溶液
·
白蛋白溶液
·
葡萄糖溶液的混合液中的产生量
[0129]
b：试样溶液
·
白蛋白溶液的混合液中的产生量
[0130]
c：白蛋白溶液
·
葡萄糖溶液的混合液中的产生量
[0131]
d：白蛋白溶液中的产生量
[0132]
[表2]
[0133][0134]
表2中，各组合的ages产生阻断率的期待值是被组合使用的各成分单独示出的产生阻断率的合计值。增加量是从实测值减去期待值所得的值。将磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、姜黄素或银杏叶提取物与蜂胶组合的情况下，与各自单独使用的情况相比，ages产生阻断率大幅度上升。确认到通过将蜂胶与磷脂酰丝氨酸、咖啡果提取物、姜黄素或银杏叶提取物进行组合，能够得到较之成分单独而言更高的抗糖化效果。
[0135]
[试验例5：nrf2通路激活评价]
[0136]
nrf2是通过氧化应激被激活的转录因子，其下游存在与抗氧化、解毒代谢相关的基因。已报道了于动物水平，nrf2通路影响痴呆症，期待nrf2激活引起认知功能改善。本试验中，使用将作为nrf2下游的转录应答序列的are组入报告载体而得的pc12/are报告细胞(reporter cell)进行试验，调查了nrf2通路激活的协同作用。
[0137]
《细胞培养》
[0138]
使用从神户药科大学获得的pc12/are报告细胞(以下为pc12/are)。该细胞是以下述方式得到的：在pc12细胞中，将含有作为nrf2下游基因的、大鼠来源的nadph：醌氧化还原酶1(nqo1)基因的are序列的启动子区域组入荧光素酶基因的上游，使其稳定表达。
[0139]
基础培养基：向rpmi-1640培养基(nacali，code：30264-85)中添加各种因子，使其含有10％胎牛血清(fbs，biowest)、5％马血清(hs，gibco)、1
×
青霉素/链霉素(nacali，code：09367-34)、200μm l-谷氨酰胺(nacali，code：16948-04)。
[0140]
维持培养基：为了筛选报告细胞系，向上述基础培养基中以浓度成为300μg/ml的方式添加潮霉素b(wako，cat：085-06153)进行制备。
[0141]
pc12/are根据pc12/are培养方案进行维持及传代。培养基每2～3天更换1次。
[0142]
《报告基因分析(reporter assay)》
[0143]
将pc12/are以成为1
×
104个细胞/20μl/孔的方式接种于384孔板(white plate)。培养使用基础培养基。培养一晚后，添加5μl样品，进一步，在24小时后加入25μl one-glo(注册商标)luciferase assay reagent(promega，cat：e6120)，孵育3分钟后，通过envision(perkinelmer)测定报告活性(reporter activity)。
[0144]
《样品制备》
[0145]
将蜂胶、姜黄素及银杏叶提取物分别以成为50mg/ml的方式悬浊于dmso中，搅拌1小时后，离心分离得到上清液。作为蜂胶、姜黄素及银杏叶提取物，使用与试验例3或4中所使用的同样的物质。上清液使用0.22μm的过滤器过滤后，分装，于-30℃保存。将各样品在试验时溶解，使用dmso及基础培养基稀释。
[0146]
《are报告活性》
[0147]
以蜂胶4.5μg/ml、姜黄素13.8μg/ml、银杏叶提取物6.6μg/ml的浓度，分别单独、或以表3示出的组合添加至pc12/are细胞，测定24小时后的报告活性。结果，蜂胶及姜黄素的组合、以及蜂胶、姜黄素及银杏叶提取物的组合中，相对于单独添加各成分的情况，确认到协同效果。
[0148]
[表3]
[0149] are报告活性(rlu)蜂胶716姜黄素5748银杏叶1419蜂胶 姜黄素11665蜂胶 姜黄素 银杏叶24336
[0150]
[试验例6：人生物体试验]
[0151]
对人施予含有蜂胶提取物、银杏叶提取物、磷脂酰丝氨酸、姜黄素、咖啡果提取物及积雪草提取物的复合补充剂，验证效果。
[0152]
《对象》
[0153]
将满足以下全部选择标准、且不符合以下除外标准中的任何的90名人员作为试验对象。
[0154]
1)选择标准
[0155]
·
取得同意时的年龄在40岁以上、小于80岁的男女
[0156]
·
简易精神状况检查(mini-mental state examination)(mmse)在24分以上、29分以下的人
[0157]
·
有自觉健忘的人、或曾被他人指出健忘的人
[0158]
2)除外标准
[0159]
·
被医生判定为痴呆症的人、或患有可能影响认知功能的疾病的人
[0160]
·
正在服用或曾经服用过痴呆症治疗药的人
[0161]
·
定期服用可能影响认知的药物(第一代抗组胺药、苯二氮(benzodiazepine)、镇静药、阿片类药、安定药、抗抑郁药、胆碱激动剂、抗胆碱药、处方抗炎药)的人
[0162]
·
有精神障碍(包括抑郁症状)、或脑血管疾病的现病史、既往病史的人
[0163]
·
常用可能影响认知功能的补充剂、健康食品(包括功能性标示食品)的人
[0164]
·
受试者背景调查的结果为饮食、睡眠等生活习惯极度不规律的人
[0165]
·
老年抑郁量表(geriatric depression scale-short version-japanese：gds-s-j)为6分以上的人
[0166]
·
有酒精依赖的既往病史或现病史的人
[0167]
·
日常大量摄取酒精的人(每周饮用14瓶以上(啤酒为350ml、红酒为少于180ml)的人)
[0168]
·
有糖尿病、肝脏疾病、肾脏疾病、心脏疾病等重度疾病的现病史或既往病史的人
[0169]
·
有药物依赖或食物过敏的既往病史
·
现病史的人
[0170]
·
有色觉障碍的人、即使在近距离也难以听到人说话的人
[0171]
·
由于受伤、手术等导致双手的功能有问题的人
[0172]
《试验食品》
[0173]
复合补充剂的施予量为每1天3粒(硬胶囊)。复合补充剂在3粒中含有蜂胶(以阿特匹林c计为4.25mg)、姜黄素175mg、大豆来源磷脂酰丝氨酸100mg、银杏叶提取物(以银杏叶来源类黄酮糖苷计为28.8mg、以银杏叶来源萜类内酯(terpene lactone)计为7.2mg)、积雪草提取物(225mg)及咖啡果提取物(100mg)。各成分与试验例3或4所用的成分相同。复合补充剂进一步含有微粒二氧化硅等作为添加物。安慰剂用淀粉替换上述成分，使复合补充剂及安慰剂在外观上彼此相似，在食品之间无法识别。复合补充剂及安慰剂的成分组成(1天摄取量，每3粒)在表4示出。
[0174]
[表4]
[0175][0176]
《试验方法及计划表》
[0177]
本试验得到日本桥循环器官科诊所试验审查委员会的审议及承认，遵守赫尔辛基宣言(于2013年vma福塔雷萨总会修订)及以人为对象的医学研究的相关伦理原则。试验方案登录在大学医院医疗网络临床试验系统中。
[0178]
试验设计为安慰剂对照随机并行组间双盲比较人临床试验，在向试验对象充分说明本试验的目的及方法等的基础上，以书面形式征得基于自由意志的同意。受试者被分成两组，以使年龄、性别、体质指数(body-mass index)(bmi)及mmse均等。
[0179]
摄取前检查(身高、体重、血压、脉搏、临床心理医生执行的mmse、gds-s-j、轻度认知障碍(mild cognitive impairment)(mci)筛查、认知测试(cognitrax)、血液检查、各种视觉模拟评分(visual analog scale)(vas)、mos 36项健康调查简表(mos 36-item short-form health survey)(sf-36))于2019年10～11月实施。自2019年11月中旬起至2020年2月下旬，经12周，与常温水一同摄取安慰剂或复合补充剂，每天3粒。另外，在摄取12
周后，实施身高、体重、血压、脉搏、mci筛查、cognitrax、血液检查、各种vas及sf-36。另外，试验期间内，每天在日志中记录有无摄取试验食品、有无身体状况变化、有无生活状况变化、运动状况、医药品及健康食品的摄取状况、与人交流状况，以及睡眠状况。
[0180]
《检查项目》
[0181]
(mci筛查)
[0182]
轻度认知障碍(mild cognitive impairment：mci)这一术语以痴呆症的前驱状态的含义使用。随着新的治疗方法的开发，痴呆症的早期诊断变得重要，因此mci的诊断受到了关注。mci筛查是由shankle等人开发的综合评价记忆力及注意力的认知功能检查。mci筛查之中，针对mpi分数及瞬时记忆问题得分进行测定。mpi分数主要是对瞬时记忆问题及延迟记忆问题的得分进行综合评价。
[0183]
(cognitrax)
[0184]
cognitrax是以cns vital sign为基础的一般认知测试。本试验中实施语言记忆测验(vbm，verbal memory)、视觉记忆测验(vim，visual memory)、手指敲击测验(ftt，finger tapping test)、sdc测验(sdc)、斯特鲁普实验(st，stroop test)、转移注意力测验(sat，shifting attention test)、连续操作测验(cpt，continuous performance test)、四部分连续操作测验(fpcpt，four part continuous performance test)，通过与同龄人比较得到的换算值即标准化分数(平均100)进行了评价。基于这些测验，针对st误反应进行了评价。
[0185]
(血液检查)
[0186]
采集受试者的血液，测定肿瘤坏死因子(tnf-α，血清)、bdnf(血浆)及作为肝功能指标的ast的量。已知tnf-α是与介导了炎症的生物体防御机制密切相关的细胞因子。ast在肝细胞受到损伤时被释放到血液中，考虑炎症是其原因之一。tnf-α及ast由株式会社lsimedience进行评价、bdnf由日研seil株式会社日本老化制御研究所进行评价。
[0187]
(自觉症状(vas))
[0188]
vas是用于检测自觉症状的试验。针对睡眠质量，通过“睡眠质量怎么样？”这样的问题来评价。在画面上显示一条直线，直线的左端(0)为“非常差”，直线的右端(100)为“非常好”，让受试者根据当时的状态在直线上标记。
[0189]
(sf-36)
[0190]
qol(生活质量，quality of life)的评价量表即sf-36中，针对社会生活功能(过去一个月内，由于身体或心理的原因而妨碍人际交往的程度)进行评价。得分是根据国民标准值进行评分(基于常模的评分(norm-based scoring)：nbs)、以标准分数(平均50)的形式算出的。
[0191]
《统计处理》
[0192]
测定值以平均值
±
标准差示出。使用配对t检验(paired t-test)进行相对于摄取前的服用12周后的组内比较，使用学生t检验(student’s t-test)进行相对于安慰剂组的复合补充剂组的组间比较。另外，针对以摄取前为基准的摄取12周后的变化量(δ)也同样地进行了组间比较。检验均为双侧检验。统计分析软件使用spss ver.25(ibm株式会社)。
[0193]
(分析对象)
[0194]
合计90名(各组45名)作为对象参加了试验。其中，关于被报道与认知功能相关的
肝功能指标ast、alt及γ-gtp从异常值(摄取前)减少至一半以下(摄取12周后)的2名(安慰剂组1名、复合补充剂组1名)、被报道与认知功能相关的血压的摄取前后变化为离群值(《平均-3sd)的1名(复合补充剂组)、在试验期间中停用了开始摄取试验食物时服用的血压治疗药的1名(安慰剂组)、被报道为与认知功能相关的炎症标志物之一的hscrp的摄取前后变化为离群值(》平均 3sd)的2名(安慰剂组1名、复合补充剂组1名)、摄取前后的体重变化为离群值(《平均-3sd)的1名、共计7名，由于判断其不能保持固定生活习惯的可能性较高，对认知功能的影响验证准确度可能有不利影响，因此将其从分析对象中排除。
[0195]
摄取后的mci筛查的检查时间与摄取前相比非常短，关于成为离群值(《平均-3sd)的1名，判断其极可能在摄取12周后的认知功能检查中未能进行正确评价，将其从分析对象中排除。因此，分析对象病例数为82名。另外，关于摄取后的cognitrax四部分连续操作测验的检查途中放弃的1名(复合补充剂组)，与摄取后的四部分连续操作测验的结果相关的项目为缺失值。分析对象背景在表5示出。在年龄、性别、bmi及mmse方面未确认到组间统计学差异。
[0196]
[表5]
[0197]
分析对象者背景
[0198][0199]
《结果》
[0200]
(认知功能检查)
[0201]
mci筛查的结果在表6示出。确认到在以摄取前为基准的摄取12周后的mpi分数及瞬时记忆问题得分的变化量(δ)方面，复合补充剂组与安慰剂组相比有显著改善(p值分别为p＝0.047、p＝0.010)。
[0202]
[表6]
[0203][0204]
平均值
±
标准差
[0205]
*p＜0.05(vs.安慰剂组)
[0206]
#p＜0.05，
##
p＜0.01(vs.摄取前)
[0207]
cognitrax的结果在表7示出。确认到在作为综合注意力及认知灵活性的构成要素的st误反应的变化量(δ)方面，复合补充剂组与安慰剂组相比有显著改善(p＝0.023)。
[0208]
[表7]
[0209][0210]
平均值
±
标准差
[0211]
*p＜0.05(vs.安慰剂组)
[0212]
#p＜0.05(vs.摄取前)
[0213]
血液检查的结果在表8示出。确认到在以摄取前为基准的摄取12周后的ast及tnf-α的变化量(δ)方面，复合补充剂组与安慰剂组相比有显著改善(p值分别为p＝0.014、p＝0.026)。
[0214]
[表8]
[0215][0216]
平均值
±
标准差
[0217]
*p＜0.05(vs.安慰剂组)
[0218]
#p＜0.05(vs.摄取前)
[0219]
自觉症状(vas)的结果在表9示出。确认到在以摄取前为基准的摄取12周后的睡眠质量的自觉症状的变化量(δ)方面，复合补充剂组与安慰剂组相比有显著改善(p＝0.016)。
[0220]
[表9]
[0221][0222]
平均值
±
标准差
[0223]
*p＜0.05(vs安慰剂组)
[0224]
##
p＜0.01(vs.摄取前)
[0225]
sf-36的结果在表10示出。确认到在以摄取前为基准的摄取12周后的社会生活功
能(过去一个月内，由于身体或心理的原因而妨碍人际交往的程度)的变化量(δ)方面，复合补充剂组与安慰剂组相比有显著改善(p＝0.030)。
[0226]
[表10]
[0227][0228]
平均值
±
标准差
[0229]
*p＜0.05(vs.安慰剂组)
[0230]
##
p＜0.01(vs.摄取前)
[0231]
本试验验证了复合补充剂摄取对认知功能的影响，结果，复合补充剂组与安慰剂组相比，在st误反应(cognitrax)、mpi分数(mci筛查)、瞬时记忆问题得分(mci筛查)、tnf-α、ast、睡眠质量的自觉症状及社会生活功能(sf-36)方面确认到显著改善。
[0232]
st测验是根据画面针对文字的意思和颜色的对应进行回答的测验，作为在语言信息和色觉信息这两种不同信息的干扰下，对关注目标信息的注意力及集中力、处理信息并正确判断的判断力等进行评价的检查而为人所知。另外，st误应答(st测验的回答错误)成为综合注意力及认知灵活性(应对指示的变化而进行的能力＝判断力)的构成项目，因此可认为st误反应的改善意味着集中力(保持集中的能力)、注意力(保持注意力并正确应对的能力)及判断力(处理信息并正确判断的能力)的改善。并且，mci筛查是由shankle等人开发的需要语言记忆力、注意力的认知功能检查，因此可认为其综合分数即mpi分数的改善意味着语言记忆力及注意力的改善，关于注意力的改善，与cognitrax的结果一致。作为注意力改善的日常生活的具体例，可举出“长时间安全驾驶汽车”、“不漏看红灯”等。
[0233]
《亚群分析》
[0234]
已知与健康人相比，痴呆症患者的脑内bdnf下降，并且血中bdnf浓度与脑内bdnf浓度相关。因此，将bdnf浓度小于第一四分位数的群分类为认知功能下降高风险群，并针对cognitrax检查结果进行了亚群分析。需要说明的是，在作为背景的年龄、性别、bmi及mmse方面未确认到组间统计学差异(表11)。
[0235]
分析结果在表12示出。复合补充剂组与安慰剂组相比，在以摄取前为基准的摄取12周后的变化量(δ)方面，就神经认知指数(p＝0.001)、认知灵活性(p＝0.022)、执行功能(p＝0.026)及作为认知灵活性的构成要素的sat正确回答(p＝0.012)确认到显著改善。
[0236]
[表11]
[0237]
[0238]
[表12]
[0239][0240]
平均值
±
标准差
[0241]
*p＜0.05，**p＜0.01(vs.安慰剂组)
[0242]
#p＜0.05(vs.摄取前)
[0243]
针对bdnf浓度小于第一四分位数的群进行cognitrax相关的亚群分析，结果，在神经认知指数、认知灵活性、执行功能(理解规则、概念并作出决策的能力)及作为认知灵活性的构成要素的sat正确回答中确认到显著改善。认知灵活性通过“sat正确反应-sat误答-st误反应”计算；执行功能通过“sat正确反应-sat误答”计算；sat测验是根据画面针对图形的形状和颜色的对应进行回答的测验，与st测验非常相似，因此，可认为认知灵活性及执行功能的改善都意味着注意力、集中力及判断力的改善。
[0244]
本试验中，不仅确认到认知功能的改善，还确认到tnf-α的改善。有报道患有急性或慢性的全身性炎症的人与未患有全身性炎症的人相比，认知功能下降率达2～4倍，因此复合补充剂有可能介由抗炎作用而有助于提高睡眠质量。另外，已报道了睡眠质量与炎症相关，并报道了抗tnf-α疗法有助于改善睡眠质量，因此可考虑复合补充剂介由抗炎作用而有助于提高睡眠质量。另外，整合分析(meta-analysis)报道了失眠可使痴呆症的发病风险达到1.51倍，因此，可考虑睡眠质量的自觉症状的改善也有助于改善认知功能。
[0245]
并且，本试验中确认到改善的ast在肝细胞受到损伤后会释放到血液中，考虑炎症是其原因之一。基于此可认为，肝功能标志物的改善机制之一可能是抗炎作用。另外，作为本试验中确认到改善的sf-36的构成项目之一的社会生活功能是表示由于身体或心理的原因而妨碍人际交往的程度的指标。如“想说的话不能马上表达出来”、“不记得说过的话”、“刚才的事想不起来”、“反复购买冰箱里已经放了很多的食品”等现象这样，考虑认知功能下降会影响人际交往等社会生活。因此，可以认为，本次得到确认的针对认知功能的有效性与社会生活功能的改善相关。
[0246]
如上所述，确认到利用蜂胶和姜黄素的组合，可以协同性地提高nrf2活性。另外，
如试验例1所示，确认到蜂胶和银杏叶的组合中，可以协同性地促进神经突伸长。nrf2是响应氧化应激而被激活的转录因子，已报道了通过nrf2的激活使认知功能改善，可以认为神经突伸长有助于大脑的发育。因此可以认为，包含蜂胶在内的各成分协同性地发挥抗氧化、抗炎及神经突伸长促进作用，从而对认知功能的维持和改善发挥了效果。确认了复合补充剂通过抗氧化、抗糖化、抗炎作用等，不仅改善语言记忆力、注意力、集中力、判断力等认知功能，也改善睡眠质量及肝功能的状态。