用于修复和预防阴道粘膜衰老的药物组合物及其制剂的制作方法

1.本发明属于医药领域，具体涉及一种阴道用药物组合物及其制剂和用途。特别地，本发明药物组合物用于恢复阴道内环境、修复阴道粘膜、治疗细菌、真菌或病毒导致的阴道炎以及预防阴道炎的发生和复发。


背景技术：

2.阴道炎是妇科门诊的常见疾病，影响着女性身心健康，其发病多与患者阴道微生态不平衡有关，且治疗效果较差，复发率高。其主要病理改变是阴道内的菌群失调，即正常寄生在阴道内的微生态菌群失调，阴道内乳酸杆菌等有益菌减少而使其他致病菌大量繁殖，厌氧菌的繁殖同时产生胺类物质，碱化阴道，使阴道分泌物增多并产生异味。由此导致出现的外阴瘙痒、灼热、肿痛、阴道充血、白带量多、下腹坠痛等常见症状给正常的生活、工作带来极大的不便。因此，预防和治疗阴道炎的关键是调节患者体内的阴道菌群趋于平衡。
3.临床上常见的阴道炎主要包括包括单纯细菌性阴道炎、单纯假丝酵母菌感染、滴虫感染、混合感染以及萎缩性/老年性阴道炎等。阴道炎的传统治疗方法包括口服或阴道给予甲硝唑、克林霉素等抗生素治疗，近年来还出现了具有抑菌功效的壳聚糖类医疗器械类产品，尽管以上抗菌、抑菌的方法能有效治疗阴道炎。但由于治疗过后将阴道内致病菌及有益菌同时杀灭，导致了阴道内并非处于健康、正常状态，使得各类菌均易趁虚而入，如果恰巧致病菌再次占据优势，则阴道炎复发。有研究显示，调节阴道内菌群比例使乳酸杆菌成为优势菌群、降低阴道ph值，能有效提高阴道炎治愈率、降低复发，且无明显副作用。同时，较低的ph值不但利于阴道优势菌群的生长及内环境的恢复，阴道内酸性环境的维持能够提高抗生素的治疗效果。所以对阴道内环境的恢复与维持，是治疗和防止复发的更佳途径。并且对于妊娠期女性，应用抗生素治疗存在禁忌，即使阴道途径给药也需谨慎，故阴道内环境调节制剂在妊娠期女性应用的安全性存在明显优势。
4.以上研究表明，单一的抑制或者杀灭阴道致病菌虽然近期效果较明显，但是由于没有使阴道内环境恢复至正常状态，使得阴道炎易复发；而单纯补充益生菌或益生元，虽然能促进益生菌夺回优势地位，但需要较长时间，症状缓解较为缓慢。并且目前所应用的一线治疗药物主要为抗生素，对于孕产妇这类阴道炎高发人群存在应用安全风险。因此需要一种能够同时满足这些需求的安全、有效的阴道用药物组合物。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种阴道用药物组合物及其制剂和用途。所述药物组合物包含对阴道粘膜起保护作用的胶原蛋白，阴道致病微生物抑制剂天然黄酮类化合物，促进阴道益生菌生长的益生元以及用于提高机体免疫力和维持阴道局部抗感染能力的裂裥菌素，可用于恢复阴道内环境、治疗细菌、真菌或病毒导致的阴道炎以及预防阴道炎的发生和复发。
6.具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：
在第一个方面中，本发明提供了一种阴道用药物组合物，所述药物组合物包含对阴道粘膜起保护作用的胶原蛋白，阴道致病微生物抑制剂天然黄酮类化合物，促进阴道益生菌生长的益生元以及用于提高机体免疫力和维持阴道局部抗感染能力的裂裥菌素。
7.作为可选的方式，在上述阴道用药物组合物中，所述药物组合物含有以重量百分比计0.5%-30%的胶原蛋白、1.5%-15%天然黄酮类化合物、10%-60%益生元和1.5%-15%裂裥菌素。
8.作为可选的方式，在上述阴道用药物组合物中，所述药物组合物含有以重量百分比计10%-30%的胶原蛋白、10%-15%天然黄酮类化合物、30%-60%益生元和10%-15%裂裥菌素。
9.作为可选的方式，在上述阴道用药物组合物中，所述药物组合物含有以重量百分比计20%的胶原蛋白、15%天然黄酮类化合物、50%益生元和15%裂裥菌素。
10.作为可选的方式，在上述阴道用药物组合物中，所述胶原蛋白为重组人源iii型胶原蛋白；所述天然黄酮类化合物选自以下一种或多种：木犀草素、黄岑素、芹菜素、槲皮素、橙皮苷或柚皮苷；所述益生元选自以下一种或多种：乳糖、蔗糖、低聚果糖或低聚麦芽糖；所述裂裥菌素是白参菌发酵来源的裂裥菌素。
11.作为可选的方式，在上述阴道用药物组合物中，所述胶原蛋白为重组人源iii型胶原蛋白，所述天然黄酮类化合物为柚皮苷，所述益生元为低聚果糖和所述裂裥菌素是白参菌发酵来源的裂裥菌素。
12.作为可选的方式，在上述阴道用药物组合物中，所述药物组合物含有以重量百分比计的20%的重组人源iii型胶原蛋白、15%柚皮苷、50%低聚果糖和15%白参菌发酵来源的裂裥菌素。
13.在第二个方面中，本发明提供了一种阴道用药物制剂，所述药物制剂包含上述第一个方面所述的药物组合物和药学上可接受的赋形剂，所述药物制剂的ph小于等于4.5。
14.作为可选的方式，在上述阴道用药物制剂中，所述药物制剂是阴道凝胶、阴道软膏、阴道泡沫、阴道栓剂、阴道片剂、阴道硬胶囊或阴道软胶囊，所述药物制剂的ph为3-4.5。
15.作为可选的方式，在上述阴道用药物制剂中，所述药物制剂为凝胶剂，所述凝胶剂中含有凝胶基质、增稠剂、乳化剂、表面活性剂和溶剂，所述凝胶基质选自卡波姆、黄原胶、海藻酸盐、壳聚糖、透明质酸中的一种或多种，所述增稠剂选自甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、氰乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素中的一种或多种，所述乳化剂选自聚山梨酯、聚甘油酯、硬脂酰乳酸钠、硬脂酰乳酸钙、双乙酰酒石酸单甘油酯中的一种或多种，所述表面活性剂选自月桂基葡糖苷、月桂醇硫酸钠、二辛基琥珀酸磺酸钠十二烷基苯磺酸钠、甘胆酸钠中的一种或多种以及所述溶剂选自甘油、液体石蜡、水中的一种或多种，应用乳酸调节ph、对凝胶基质进行溶胀。
16.在第三个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的药物组合物或者上述第二个方面所述的药物制剂在制备用于恢复阴道内环境，修复阴道粘膜，治疗阴道炎以及预防阴道炎的发生和复发的药物中的用途。
17.作为可选的方式，在上述用途中，所述阴道炎是由细菌、真菌或病毒导致的阴道炎。
18.优选地，所述阴道炎由选自以下的阴道致病微生物引起：阴道加德纳菌、白色念珠菌、阴道阿托波氏菌、阴道毛滴虫、淋病奈瑟菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌或人乳头瘤病
毒，所述药物组合物或药物制剂能够抑制或杀灭所述阴道致病微生物。
19.应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一赘述。
20.本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：（1）本发明药物组合物包含多种具有不同功效的活性成分，其包含对阴道粘膜起保护作用的胶原蛋白，阴道致病微生物抑制剂天然黄酮类化合物，促进阴道益生菌生长的益生元以及用于提高机体免疫力和维持阴道局部抗感染能力的裂裥菌素。因此，本发明阴道用药物组合物除了对于细菌、真菌、病毒均有较高抑制作用以外，还有助于帮助阴道正常内环境的修复，以及具有保湿、保护和改善阴道粘膜、提高患者免疫力等功效。本发明阴道用药物组合物中的各种活性成分之间具有显著的协同增效作用，将这些活性成分组合符合女性生殖系统的生理学特点。
21.（2）本发明阴道用药物组合物未使用抗生素，因而没有耐药性。且本发明药物组合物中各种活性成分安全无毒、在阴道部分给药无全身影响。
22.（3）本发明阴道用药物组合物中使用的各种活性成分均来源广泛、制备方法简单，且已经有成熟的工业化生产方法，用药成本低。
具体实施方式
23.本发明人在对可用于预防或治疗各种原因引起的阴道炎各种活性成分及其药理机制的深入研究中，通过大量筛选，首次发现通过将对阴道粘膜起保护作用的胶原蛋白，阴道致病微生物抑制剂天然黄酮类化合物，促进阴道益生菌生长的益生元以及用于提高机体免疫力和维持阴道局部抗感染能力的裂裥菌素联合使用，能够显著增强所述阴道用药物组合物预防或治疗阴道炎的作用。在此基础上完成了本发明。
24.在本发明药物组合物中，将天然的抑制阴道致病菌成分（例如，天然黄酮类化合物、裂裥菌素等）与保护及促进阴道益生菌的物质同时使用、双管齐下，即能够在短时间内迅速消除症状，并且同时促进阴道正常内环境的恢复、防止阴道炎复发。另外，炎症期间阴道粘膜受到致病菌刺激而充血、水肿，阴道粘膜保护剂可在粘膜表面形成保护膜，将刺激物与粘膜之间进行物理隔离，给予粘膜充分的修复时间。
25.如本文所用，本发明的“天然黄酮类化合物”可以采用生物提纯方法从含有该活性成分的植物中提取分离得到，也可以购自市售产品。所述天然黄酮类化合物可以选自以下一种或多种：木犀草素、黄岑素、芹菜素、槲皮素、橙皮苷或柚皮苷。所述裂裥菌素可以是白参菌发酵来源的裂裥菌素，以额可以购自市售产品。
26.包含本发明阴道用药物组合物的阴道用药物制剂可以是阴道凝胶、阴道软膏、阴道泡沫、阴道栓剂、阴道片剂、阴道硬胶囊或阴道软胶囊，所述药物制剂的ph为3-4.5。上述各种剂型可以根据药物制剂领域的常规工艺制备而成。
27.本发明的药物组合物或药物制剂适用于以下情况：各类阴道感染性疾病时(如细菌性阴道病、念珠菌性/霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎、老年性阴道炎等)与抗生素联合及序贯治疗；阴道感染性疾病抗生素正规治疗后的序贯治疗，在抗生素杀灭阴道致病菌之后帮助恢复阴道正常内环境，抑制致病菌重新成为优势菌群、扶植有益菌群取得占位效应，从而
防止阴道炎复发；可用于全身系统抗生素大量使用后导致的阴道内菌群紊乱、内环境失调时，恢复阴道正常内环境，预防阴道炎症发作；可用于围绝经期、绝经后或去势手术后由于激素水平下降导致的阴道内环境改变、阴道粘膜萎缩时，恢复阴道正常内环境、形成阴道内保护膜，预防阴道炎症发作；可用于月经期后及性生活后导致的ph值上升、阴道菌群变化导致的阴道内环境改变，帮助快速恢复阴道正常内环境、预防阴道炎症发作；各类阴道内操作后(如阴道指诊、阴道冲洗、经阴道超声、阴道顺产等)，帮助快速恢复阴道正常内环境。
28.在本发明阴道用药物组合物或阴道用药物制剂的医药用途中，对于本发明阴道用药物组合物或阴道用药物制剂的给药时间、给药次数和给药频率等等，需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠或大鼠的治疗方案应用于人体上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠或大鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员而言也是容易实现的。
29.下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
30.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
31.下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
32.除非另外说明，否则本发明中涉及的百分比和份数均为重量百分比和重量份数。
33.实施例：制备实施例：实施例1：一种阴道用凝胶剂，所述阴道用凝胶剂由以重量百分比计的以下组分制成：2%的重组人源iii型胶原蛋白、1.5%柚皮苷、5%低聚果糖和1.5%白参菌发酵来源的裂裥菌素以及90%常规空白阴道用凝胶基质，所述凝胶剂的ph为3-4.5。
34.实施例2：一种阴道用凝胶剂，所述阴道用凝胶剂由以重量百分比计的以下组分制成：3%的重组人源iii型胶原蛋白、1.5%柚皮苷、4%低聚果糖和1.5%白参菌发酵来源的裂裥菌素以及90%常规空白阴道用凝胶基质，所述凝胶剂的ph为3-4.5。
35.实施例3：一种阴道用凝胶剂，所述阴道用凝胶剂由以重量百分比计的以下组分制成：2%的重组人源iii型胶原蛋白、1%柚皮苷、6%低聚果糖和1%白参菌发酵来源的裂裥菌素以及90%常规空白阴道用凝胶基质，所述凝胶剂的ph为3-4.5。
36.对比例1：一种阴道用凝胶剂，所述阴道用凝胶剂由以重量百分比计的以下组分制成：2%的重组人源iii型胶原蛋白、5%低聚果糖和93%常规空白阴道用凝胶基质，所述凝胶剂的ph为3-4.5。
37.对比例2：一种阴道用凝胶剂，所述阴道用凝胶剂由以重量百分比计的以下组分制成：1.5%
柚皮苷、1.5%白参菌发酵来源的裂裥菌素和97%常规空白阴道用凝胶基质，所述凝胶剂的ph为3-4.5。
38.对比例3：一种阴道用凝胶剂，所述阴道用凝胶剂由以重量百分比计的以下组分制成：2%的重组人源iii型胶原蛋白、1.5%槲皮素、5%低聚果糖和1.5%白参菌发酵来源的裂裥菌素以及90%常规空白阴道用凝胶基质，所述凝胶剂的ph为3-4.5。
39.对比例4：一种阴道用凝胶剂，所述阴道用凝胶剂由以重量百分比计的以下组分制成：100%常规空白阴道用凝胶基质，所述凝胶剂的ph为3-4.5。
40.效果实施例：第一部分：在家兔阴道炎动物模型上考察本发明药物组合物预防或治疗阴道炎的作用1.家兔阴道炎动物模型的制备实验动物购自辽宁长生生物技术股份有限公司。
41.细菌性阴道炎动物模型的制备制作动物模型前对家兔阴道ph值检测为7.2
±
0.1。把金黄色葡萄球菌、大肠杆菌经传代培养制作高浓度病菌悬浮液，用浓度为1
×
10
9 cfu／ml金黄色葡萄球菌、大肠杆菌混悬液0.2 ml，经导管注进家兔阴道内，每天1次，连续造模3天后，临床检查动物外阴及阴道红肿及出现分泌物情况，取阴道物经临床微生物检验是否含染病病源菌，以外阴及阴道发生明显水肿，阴道分泌物经临床微生物检验含有染病病源菌，判断阴道炎制作成功。
42.霉菌性阴道炎动物模型把白色念珠菌经传代培养制作高浓度病菌悬浮液，用浓度为1
×
109cfu／ml白色念珠菌混悬液0.2 ml用导管注进家兔阴道内，每天1次，连续造模3天后，临床检查动物外阴及阴道水肿红肿及出现分泌物情况。临床检查动物外阴及阴道红肿及出现分泌物情况，取阴道及宫颈分泌物经临床微生物检验是否含染病病源菌。以外阴及阴道发生明显水肿，阴道分泌物经临床微生物检验含有染病病源菌，判断阴道炎制作成功。
43.分组给药与观察阴道炎实验将造模成功的36只家兔，18只细菌性阴道病、18只霉菌性阴道炎，每种阴道炎随机分为实施例1组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组、模型组，每组3只动物。另外取2只未造模雌性家兔作为空白对照组，每组每只兔每天给相应药物一次，连续给药7天，给药剂量灌满阴道及涂抹阴门周围为准，模型组和空白对照组给予无菌生理盐水。每日对动物一般行为和外阴情况进行观察，末次给药6 h后临床检查动物外阴及阴道红肿及出现分泌物情况，取阴道及宫颈分泌物经临床微生物检验是否含染病病源菌。外阴及阴道红肿判为阳性( )，根据红肿程度分为轻中重度，分别以 、 、 表示，否则判为(一)，分泌物经临床微生物检验含阳性菌判为阳性( )，根据含阳性菌的量不同分为轻中重度，分别以 、 、 表示，否则判为(一)。各组的实验结果均以各实验动物的平均值表示。
44.实验结果对于细菌性阴道炎和霉菌性阴道炎家兔而言，模型组和对比例4（空白凝胶基质）组实验动物，在研究结束时阴道粘膜红肿情况均较为严重，且能够检出较大量的阳性菌。
45.在使用本发明实施例1药物组合物治疗后，实验动物阴道粘膜红肿已经消除，且阳性细菌和霉菌均转阴。该结果表明，本发明药物组合物中各活性成分之间具有显著的协同增效作用，本发明阴道用药物组合物除了对于细菌和霉菌均有较强抑制作用以外，还有助于帮助阴道正常内环境和阴道粘膜的修复。
46.然而，在使用对比例1药物组合物治疗后，实验动物阴道粘膜红肿情况得到一定程度的改善（ ），但是仍能够检出较大量的阳性细菌（ ）和真菌（ ）。该结果表明，单纯重组人源iii型胶原蛋白和低聚果糖的组合在治疗阴道炎（特别是抑制和杀死细菌和真菌方面的作用）可能是不足的。而与之相反的是，在使用对比例2药物组合物治疗后，实验动物阴道粘膜红肿情况几乎没有得到的改善（ ），但是实验动物阴道内的阳性菌含量却显著降低，其中细菌（ ）和真菌（ ）。该结果表明，柚皮素和裂裥菌素的组合尽管具有较强的杀菌作用，但是在帮助阴道正常内环境和阴道粘膜的修复方面的作用可能是不足的。
47.此外，有趣的是，将本发明药物组合物中的活性成分柚皮素替换成更常见的黄酮类化合物槲皮素后，可以发现所述药物组合物无论是在改善阴道红肿情况方面的效果，还是抑制或杀灭阳性菌方面的效果均是有所下降的，特别是抗霉菌方面的作用下降的更为显著。该结果表明，在本发明药物组合物中各活性成分的具体种类可能对本发明药物组合物预防或治疗阴道炎的作用产生一定的影响。
48.表1：本发明药物组合物预防或治疗家兔阴道炎的作用第二部分：初步临床试验结果选取60例患有阴道炎的患者，分成2组，按照表2中的药物，在每组患者的阴道处施用实施例1和对比例1，每天早晚各一次，连续施用1周后，对患者阴道样本进行菌落检查并统计人乳头瘤病毒（hpv）、金黄色葡萄球菌（sa）、大肠杆菌（ec）、绿脓杆菌（pa）、白色念珠菌（ca）、a簇b型溶血性链球菌（gsa）的样本量，并按照临床常规方法计算微生物抑制率，结果如表2所示。
49.表2：本发明药物组合物对阴道常见微生物的影响
表2中的数据表明，本发明药物组合物对于各种阴道常见微生物均具有显著的抑制或杀灭作用，其作用效果显著优于仅重组人源iii型胶原蛋白和低聚果糖的组合。
50.综上所述，本发明阴道用药物组合物除了对于细菌、真菌、病毒均有较高抑制作用以外，还有助于帮助阴道正常内环境的修复，以及具有保湿、保护和改善阴道粘膜、提高患者免疫力等功效。本发明阴道用药物组合物中的各种活性成分之间具有显著的协同增效作用，将这些活性成分组合符合女性生殖系统的生理学特点。因此，本发明阴道用药物组合物为临床上预防或治疗各种类型的阴道炎提供了更多选择，具有较高的经济价值和社会效益。
51.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。