一种口蹄疫病毒O型、A型的抗体联检试剂盒及其制备方法与应用与流程

技术特征：
1.一种口蹄疫病毒o型、a型的抗体联检试剂盒，其中，所述抗体联检试剂盒包括一个或多个口蹄疫病毒o型、a型抗体检测芯片、酶标试剂，所述口蹄疫病毒o型、a型抗体检测芯片上的点样点，分别包被有口蹄疫病毒o型抗原、口蹄疫病毒a型抗原、质控品、空白对照；所述o型口蹄疫病毒抗原为o型口蹄疫病毒样颗粒，所述a型口蹄疫病毒抗原为a型口蹄疫病毒样颗粒，所述质控品为羊抗鼠多克隆抗体，所述空白对照为点样液，所述酶标试剂为含有酶标记o型口蹄疫病毒单克隆抗体和酶标记a型口蹄疫病毒单克隆抗体的溶液，所述酶标记o型口蹄疫病毒单克隆抗体为酶标记o型口蹄疫病毒单克隆抗体7d2或酶标记o型口蹄疫病毒单克隆抗体6g6、所述酶标记a型口蹄疫病毒单克隆抗体为酶标记a型口蹄疫病毒单克隆抗体3b4或酶标记a型口蹄疫病毒单克隆抗体2e11。2.根据权利要求1所述的抗体联检试剂盒，其中，所述o型口蹄疫病毒抗原的包被量为1～128ng/点；优选地，所述o型口蹄疫病毒抗原包被量为8～32ng/点；更优选地，所述o型口蹄疫病毒抗原包被量为16ng/点；所述a型口蹄疫病毒抗原的包被量为1～128ng/点；所述a型口蹄疫病毒抗原的包被量为16～64ng/点；所述a型口蹄疫病毒抗原包被量为32ng/点；所述o型口蹄疫病毒单克隆抗体7d2的重链可变区如seq.id no.7或其简并序列编码，轻链可变区如seq.id no.8或其简并序列编码；所述o型口蹄疫病毒单克隆抗体6g6的重链可变区如seq.id no.5或其简并序列编码，轻链可变区如seq.id no.6或其简并序列编码；所述a型口蹄疫病毒单克隆抗体3b4的重链可变区如seq.id no.3或其简并序列编码，轻链可变区如seq.id no.4或其简并序列编码；所述a型口蹄疫病毒单克隆抗体2e11的重链可变区如seq.id no.1或其简并序列编码，轻链可变区如seq.id no.2或其简并序列编码；优选地，所述酶标试剂为含有酶标记o型口蹄疫病毒单克隆抗体7d2、酶标记a型口蹄疫病毒单克隆抗体3b4的溶液；所述酶标试剂所用缓冲液为含有体积比20％胎牛血清的pbs溶液，其中所述酶标记o型口蹄疫病毒单克隆抗体7d2、酶标记a型口蹄疫病毒单克隆抗体3b4的终浓度分别为100ng/ml、75ng/ml；所述酶标试剂所标记的酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或β-d-半乳糖苷酶；所述质控品点样于质控品点1～3，所述质控品点1的包被量为大于等于1ng/点而小于4ng/点；所述质控品点2的包被量为4ng/点；所述质控品点3的包被量为大于4ng/点而小于等于6ng/点；优选地，所述质控品点1～3的羊抗鼠多克隆抗体包被量分别为2ng/点、4ng/点和6ng/点；所述点样液为5％甘油溶液、5％山梨醇溶液、0.05％曲拉通溶液、dmso溶液、pbs(ph6.8)溶液按照10∶15∶0.1∶50∶100的体积比混合均匀而成；进一步优选地，所述口蹄疫病毒o型、a型的抗体联检试剂盒中所述口蹄疫病毒o型抗原的包被量为16ng/点，所述口蹄疫病毒a型抗原的包被量为32ng/点。3.根据权利要求1所述的抗体联检试剂盒，其中，所述试剂盒还包含样品稀释液、底物液、洗涤液；所述样品稀释液为含10％v/v胎牛血清、0.05％～0.2％v/v triton-100、0.1％v/v proclin300的pbs溶液；优选地，所述样品稀释液含0.1％v/v triton-100；
所述底物液为tmb(3,3',5,5'-四甲联苯胺)溶液；所述洗涤液为含1％v/v吐温20的pbs溶液。4.根据权利要求1～3所述的抗体联检试剂盒，其中，所述检测芯片中质控品点(1)、质控品点(2)、质控品点(3)的所述羊抗鼠多克隆抗体包被量分别是2ng/点、4ng/点、以及6ng/点、空白对照点样点(4)为背景检测点样点，所述口蹄疫病毒a型抗原点样于点样点(5)，所述口蹄疫病毒o型抗原点样于点样点(6)；所述质控品点(1)、所述质控品点(2)、所述质控品点(3)、所述空白对照点样点(4)点样点分别位于检测芯片的左上角、左下角、右下角、右上角，所述点(5)、(6)可以分别位于所述检测芯片其他位置，所述点样点(1)至(6)中点与点边缘之间的距离为≥700μm；所述质控品点(1)、所述质控品点(2)、所述质控品点(3)、所述空白对照点样点(4)到检测芯片亚单元上边缘、下边缘的距离≥8mm，到检测芯片亚单元左边缘、右边缘的距离≥5mm；所述抗体联检试剂盒包括一个或多个所述口蹄疫病毒o型、a型抗体检测芯片的亚单元，由底端、上格栅、设置于其间由所述底端、上格栅夹紧的检测芯片组成独立的检测孔，所述一个检测孔对应于一个所述检测芯片亚单元，当所述抗体联检试剂盒包括多个所述口蹄疫病毒o型、a型抗体检测芯片亚单元时，各个所述独立的检测芯片亚单元集成为微阵列芯片。5.一种制备权利要求1～4所述口蹄疫病毒o型、a型的抗体联检试剂盒的方法，其中，所述方法包括：步骤(1)分别制备口蹄疫病毒o型抗原、口蹄疫病毒a型抗原，连同羊抗鼠多克隆抗体分别用点样液稀释，点样于膜上，以制备口蹄疫病毒o型、a型的抗体检测芯片；步骤(2)以底端、上格栅、以及设置于其间的所述步骤(1)的抗体检测芯片组成独立的检测孔，所述抗体检测芯片设置于底端、上格栅之间，由所述底端、上格栅夹紧，所述一个检测孔对应于一个所述检测芯片亚单元，当所述抗体联检试剂盒包括多个口蹄疫病毒o型、a型的抗体检测芯片亚单元时，各个所述独立的检测芯片亚单元集成为微阵列芯片；步骤(3)用酶分别标记o型口蹄疫病毒单克隆抗体7d2、a型口蹄疫病毒单克隆抗体3b4，按终浓度分别为100ng/ml、75ng/ml用酶标稀释液稀释后混匀，作为酶标试剂，所述酶标稀释液为含终体积20％v/v胎牛血清的pbs溶液；步骤(4)配制样品稀释液、洗涤液、底物液；以及步骤(5)将所述步骤(2)制备的口蹄疫病毒o型、a型的抗体检测芯片亚单元或其亚单元微阵列芯片、步骤(3)制备的所述酶标试剂及步骤(4)制备的所述样品稀释液、所述洗涤液、所述底物液组装成所述抗体联检试剂盒。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述步骤(1)中所述点样液为5％甘油溶液、5％山梨醇溶液、0.05％曲拉通溶液、dmso溶液、pbs(ph6.8)溶液按照10∶15∶0.1∶50∶100的体积比混合均匀而成；用所述点样液将所述羊抗鼠多克隆抗体分别稀释至100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml，作为质控点点样液，分别点样于点(1)、(2)、(3)；用所述点样液作为空白对照点样于点(4)，所述口蹄疫病毒a型抗原点样于点样点(5)，所述口蹄疫病毒o型抗原点样于点样点(6)；所述质控品点(1)、所述质控品点(2)、所述质控品点(3)、所述空白对照点样点(4)分别位于检测芯片的左上角、左下角、右下角、右上角，所述点(5)、(6)可以分别点样于所述检测
芯片其他位置，所述点样点(1)至(6)中点与点边缘之间的距离≥700μm；所述质控品点(1)、所述质控品点(2)、所述质控品点(3)、所述空白对照点(4)到检测芯片亚单元上边缘、下边缘的距离≥8mm，到检测芯片亚单元左边缘、右边缘的距离≥5mm；所述步骤(3)的所述酶标稀释液为含20％v/v胎牛血清的pbs溶液；所述步骤(4)的所述样品稀释液为含10％v/v胎牛血清、0.05％～0.2％v/v triton-100、0.1％v/v proclin300的pbs溶液；优选地，所述样品稀释液含0.1％v/v triton-100；所述洗涤液为含1％v/v吐温20的pbs溶液，所述底物液为tmb(3,3',5,5'-四甲联苯胺)溶液。7.根据权利要求1～4所述抗体联检试剂盒在制备非免疫诊断中的应用；优选地，所述非免疫诊断中的应用包括流行病学分析、对离体血清进行定性口蹄疫病毒o型、a型抗体检测、国际生猪、牛、羊贸易、进出口检验检疫、口蹄疫病毒o型、a型疫苗质量控制。

技术总结
本发明提供了口蹄疫病毒O型、A型的抗体联检试剂盒，该抗体联检试剂盒包括口蹄疫病毒O型、A型抗体检测芯片、酶标试剂，该口蹄疫病毒O型、A型抗体检测芯片上的点样点，分别包被有口蹄疫病毒O型抗原、口蹄疫病毒A型抗原、质控品、空白对照；该O型口蹄疫病毒抗原为O型口蹄疫病毒样颗粒，该A型口蹄疫病毒抗原为A型口蹄疫病毒样颗粒，该质控品为羊抗鼠多克隆抗体，该空白对照为点样液，该酶标试剂为含有酶标记O型口蹄疫病毒单克隆抗体7D2、酶标记A型口蹄疫病毒单克隆抗体3B4的溶液。本发明的抗体联检试剂盒不仅具有高灵敏度，且克服了现有技术中不同批次之间检测结果差异大的缺陷，能有效用于疫苗质量控制等多种非免疫诊断应用。疫苗质量控制等多种非免疫诊断应用。疫苗质量控制等多种非免疫诊断应用。


技术研发人员：田克恭 李玉芳 张许科
受保护的技术使用者：洛阳中科生物芯片技术有限公司
技术研发日：2020.11.30
技术公布日：2022/6/4