用于细胞因子定量联合检测的试剂盒的制作方法

1.本发明涉及蛋白检测领域，更具体地，本发明涉及一种用于细胞因子定量联合检测的试剂盒。


背景技术：

2.细胞因子(cytokine，ck)是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长以及损伤组织修复等多种功能，自20世纪60年代发现细胞因子的活性作用以来，到目前为止，已经发现了数百种细胞因子。
3.随着现代生物技术的迅速发展，也建立了多种细胞因子的检测方法，主要包括酶联免疫斑点法(elispot)、放射免疫法(radioimmuneassay，ria)，线性免疫印迹法(line immunoassay，lia)、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，elisa)等。随着近些年来商业化试剂的普及，放射免疫法、线性免疫印迹法和酶联免疫吸附法成为目前我国细胞因子检测最常用的方法学。近些年来，一些医院也开始采用化学发光法(chemiluminiscence assay，clia)新技术进行细胞因子的检测。
4.磁性微球因其易于快速捕捉、清洗、表面积较大，且与生物分子易于分离和结合的优点，现被广泛应用于各种检测方法中。近年来，高灵敏、快速、操作简单、成本低廉的检测方法是各领域研究者寻求的热点。将磁性微球与流动注射相结合，实现免疫分析的自动化，磁性微球和免疫诊断试剂可以自由地悬浮分散在溶液中，通过外加磁场捕获与释放磁性微球，同时利用流动注射仪自动进样，从而实现快速、简便的检测。
5.细胞因子的检测指标较多，目前市场上的检测方法存在结果不够准、检测成本高、实验时间长以及需要多个样本等问题。因此，本领域亟需一种新的细胞因子检测试剂盒，可以配合全自动仪器，通过单次检测获得稳定性好、准确性高的定量检测结果，并根据检测结果辅助诊断。


技术实现要素：

6.如上所述，现有的细胞因子检测方法，在同时检测多个细胞因子时仍存在不足。因此，本领域亟需一种新的细胞因子检测试剂盒，可通过单个样本同时定量检测多个细胞因子，并且所述检测结果可用于临床的辅助诊断。
7.因此，在第一方面，本发明提供了一种用于细胞因子定量联合检测的试剂盒，所述试剂盒包括：
8.分别包被有细胞因子的捕获抗体的磁性荧光编码微球；
9.生物素化的所述细胞因子的检测抗体；
10.报告分子标记的链霉素亲和素；以及
11.说明书；
12.任选地，所述试剂盒还包括所述细胞因子重组蛋白冻干粉；
13.其中，所述细胞因子包括tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17；
14.所述试剂盒通过检测来自于患者的样本中所述细胞因子的浓度以辅助诊断该患者的感染类型，以及/或者对该患者进行免疫评估。
15.在第二方面，本发明提供了用于检测tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17的试剂在制备用于辅助诊断患者的感染类型以及\或者用于对患者进行免疫评估的试剂盒中的用途。
16.本发明的有益效果包括以下一个或多个：
17.1)通过一个检测样本可以同时检测出tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17这10个指标的定量检测结果；
18.2)可配合全自动仪器使用，无需手工操作，更为高效；
19.3)检测结果可用于在临床上辅助诊断患者的感染类型和/或癌症类型。
附图说明
20.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的实施方案。
21.图1是通过磁性荧光编码微球定量检测细胞因子的原理示意图。
22.图2是包被有tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17抗体的微球分布图。
具体实施方式
23.下面将结合本发明的实施方案和附图，对本发明进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施方案仅仅是本发明的一部分实施方案，而不是全部的实施方案。基于本发明中的实施方案，本领域普通技术人员可以获得的所有其他实施方案，都属于本发明保护的范围。
24.如上所述，本发明旨在提供一种可通过单个样本同时定量检测多个细胞因子的检测试剂盒，并且根据检测结果进行临床辅助诊断。
25.因此，在第一方面，本发明提供了一种用于细胞因子定量联合检测的试剂盒，所述试剂盒包括：
26.分别包被有细胞因子的捕获抗体的磁性荧光编码微球；
27.生物素化的所述细胞因子的检测抗体；
28.报告分子标记的链霉素亲和素；以及
29.说明书；
30.任选地，所述试剂盒还包括所述细胞因子重组蛋白冻干粉；
31.其中，所述细胞因子包括tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17；
32.所述试剂盒通过检测来自于患者的样本中所述细胞因子的浓度以辅助诊断该患
者的感染类型，以及/或者对该患者进行免疫评估。
33.本发明采用了表面积较大的磁性荧光编码微球作为捕获抗体的载体微球，以包被较多的捕获抗体，保证载体微球能够最大程度地与样本中的细胞因子相结合，从而提高了检测灵敏度。此外，现有技术中所用的微球通常为聚丙乙烯微球，在清洗微球的过程中，需要通过离心将荧光编码微球与液体分离。通过离心将荧光编码微球沉淀在容器底部，由于荧光编码微球没有被固定，通过移液枪吸走上清液的过程中，容易同时将荧光编码微球吸走，从而造成微球粒子的丢失，进而影响最终对样本的检测结果。而本发明中的磁性荧光编码微球在清洗微球的过程中，可以通过磁力架将荧光编码微球与液体分离，即利用磁力架对磁性荧光微球的吸附作用将磁性荧光编码微球吸附、固定在容器底部，从而方便上清液的去除。因此，本发明所用的磁性荧光编码微球，不仅可以方便上清液的去除，而且能够提高样本检测结果的准确性。在一个实施方案中，所述磁性荧光编码微球可以包括聚苯乙烯微球、二氧化硅微球、聚丙烯酸微球、羧基化荧光编码微球、氨基化荧光编码微球。在一个优选实施方案中，所述磁性荧光编码微球可以为apc标记或apc-cy7标记的羧基化荧光编码微球。
34.在一个实施方案中，所述细胞因子的捕获抗体与磁性荧光编码微球的包被比例为5μg至50μg抗体包被1
×
107个磁性荧光编码微球。发明人经试验分析发现当将细胞因子的捕获抗体分别与磁性荧光编码微球以上述包被比例进行包被时，相同抗原相对浓度下检测获得的荧光信号强度基本一致。当细胞因子的捕获抗体与磁性荧光编码微球的包被比例小于或大于上述范围时，相同抗原相对浓度下检测获得的荧光信号强度均小于两者包被比例在上述范围内时的荧光信号强度。由此可知，将细胞因子的捕获抗体分别与磁性荧光编码微球在上述比例范围内进行包被时，能够获得较为稳定的荧光信号强度，从而最终获得样本中较准确的细胞因子相对浓度。
35.在一个实施方案中，所述生物素化的细胞因子检测抗体的使用浓度均为2μg/ml至100μg/ml。在试验中发明人发现将生物素化的细胞因子的检测抗体的使用浓度控制在上述范围内时，相同抗体相对浓度下检测获得的荧光信号强度的变化梯度基本一致。当生物素化的检测抗体浓度小于2μg/ml例如为1μg/ml时，抗体相对浓度在高点值时检测获得的荧光信号强度较低，而当生物素化的检测抗体浓度大于100μg/ml例如为110μg/ml时，抗体相对浓度在0点值时检测获得的荧光信号强度过高。由此可知，将生物素化的细胞因子检测抗体的使用浓度控制在上述范围内时，能够获得较为稳定的荧光信号强度，从而最终获得样本中较准确的细胞因子相对浓度。在一个具体实施方案中，所述检测抗体可以是鼠抗人抗体、羊抗人抗体或兔抗人抗体。
36.所述试剂盒中还包括报告分子标记的链霉素亲和素。在一个实施方案中，所述报告分子可以为藻红蛋白(pe)、别藻蓝蛋白、异硫氧酸荧光素(fitc)、多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物(percp)、罗丹明、四甲基罗丹明、香豆素、氟硼二吡咯、吲哚菁绿、cy3、cy3.5、cy5、cy5.5、cy7、cy7.5、alexa fluor 594、alexa fluor 488、alexa fluor532、pe-cy5、pe-cy5.5或pe-cy7。
37.藻红蛋白是从红藻中分离纯化的一种荧光蛋白，是一种新型荧光标记染料，因为其具有强烈的荧光，很好的吸光性能和很高的量子产量，在可见光谱区有很宽的激发及发射范围，故在免疫荧光、免疫组化、流式细胞仪检测等抗体的荧光标记和活体成像中有着广
4、il-6和il-10的浓度相对于正常值的变化趋势对真菌感染患者进行免疫评估；可以根据样本中il-2、tnf-α和il-17的浓度相对于正常值的变化趋势对hiv感染患者进行免疫评估；可以根据样本中il-2和il-10的浓度相对于正常值的变化趋势对hpv感染患者进行免疫评估；可以根据样本中il-1β、il-4、il-6、il-8、il-10和il-17的浓度相对于正常值的变化趋势对肺癌患者进行免疫评估；可以根据样本中il-1β、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17的浓度相对于正常值的变化趋势对胃癌患者进行免疫评估；根据样本中il-6、il-10、il-12p70和il-17的浓度相对于正常值的变化趋势对肝癌进行免疫评估。
44.以细菌感染为例，在对患者进行治疗的过程中，如果发现患者体内tnf-α、ifn-γ、il-2、il-4、il-6和il-10的浓度越来越接近正常值，则表明对该患者的当前治疗是有效的，患者体内的细菌在逐渐减少，患者免疫力逐渐恢复中，预后良好，可以对该患者继续进行相同的治疗，反之则表明当前治疗不适合患者，需要考虑对该患者采用其他的治疗。对于真菌感染、病毒感染、肺癌、胃癌以及肝癌，类似地，如果对应细胞因子的组合越来越接近正常值，则表明患者免疫力逐渐恢复中，预后良好，可以对该患者继续进行相同的治疗，反之则表明当前治疗不适合患者，需要考虑采用其他的疗法。可以理解，采用这些因子来进行免疫评估是有益的，特别是在对癌症患者进行免疫评估的情况下，因为这只需要简单采取血液样本并对该血液样本进行检测即可，无需其他更为复杂的操作。
45.在第二方面，本发明提供了用于检测tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17的试剂在制备用于辅助诊断患者的感染类型以及\或者用于对患者进行免疫评估的试剂盒中的用途。
46.本发明这一方面的感染类型和\或癌症类型与本发明第一方面所述的相同。例如，在一些实施方案中，所述感染类型包括细菌感染、真菌感染和病毒感染，例如hiv和hpv感染。在一些实施方案中，所述癌症类型包括胃癌、肺癌和肝癌。
47.在第三方面，本发明提供了一种本发明第一方面的试剂盒的使用方法，所述方法包括：使样本(任选地，经稀释后)与包被有细胞因子的捕获抗体的磁性荧光编码微球溶液进行反应，固液分离并弃去液体，获得抗原-抗体复合物；随后向所述抗原-抗体复合物中加入生物素化的检测抗体溶液进行孵育，固液分离并弃去液体，获得抗体-抗原-抗体复合物；然后向所述抗体-抗原-抗体复合物中加入报告分子标记的链霉素亲和素溶液进行孵育，固液分离并弃去液体，获得带有报告分子的抗体-抗原-抗体复合物。
48.最后，利用缓冲液例如pbs将获得的带有报告分子的抗体-抗原-抗体复合物定容、混匀，获得检测液，利用流式细胞仪对其进行检测，再根据利用检测校准品获得的细胞因子相对浓度与荧光信号强度关系的标准曲线，以检测获得的样本中的细胞因子各自对应的荧光信号强度为基础，找到与之对应的相对浓度，从而获得样本中的待测细胞因子各自对应的浓度，完成对样本中细胞因子的相对浓度检测。
49.在试验过程中，发明人发现样本与包被有细胞因子的捕获抗体的磁性荧光编码微球溶液的反应时间控制在30分钟至90分钟时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度呈现持续增长的趋势；当反应时间小于上述范围时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度小于反应时间处于上述范围内时检测获得的荧光信号强度；当反应时间大于上述范围时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度增长趋势已减缓，且基本不变。因此，为了能够获得更加准确的样本中细胞因子的浓度，样本与包被有细胞因子的捕获抗体的磁性荧光编码微球溶液的
反应时间优选控制在30分钟至90分钟。
50.发明人还发现抗原-抗体复合物与生物素化的检测抗体溶液的反应时间控制在15分钟至60分钟时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度呈现持续增长的趋势；当反应时间小于上述范围时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度小于反应时间处于上述范围内时检测获得的细胞因子的荧光信号强度；当反应时间大于上述范围时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度增长趋势已减缓，且基本不变。因此，为了能够获得更加准确的样本中细胞因子的信息，抗原-抗体复合物与生物素化的检测抗体溶液的反应时间优选控制在15分钟至60分钟。
51.经过试验分析，抗体-抗原-抗体复合物与报告分子标记的链霉素亲和素溶液的反应时间控制在15分钟至60分钟时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度呈现持续增长的趋势；当反应时间小于上述范围时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度小于反应时间处于上述范围内时检测获得的荧光信号强度；当反应时间大于上述范围时，检测获得的荧光信号强度增长趋势已减缓，且基本不变。因此，为了能够获得更加准确的样本中细胞因子的信息，优选将抗原-抗体复合物与报告分子标记的链霉素亲和素溶液的反应时间选择控制在15分钟至60分钟。
52.在一个实施方案中，孵育温度为室温(18-25℃)。经过试验分析，孵育温度为37℃时，检测获得的细胞因子的荧光信号强度不优于孵育温度为室温时检测获得的荧光信号强度，且阴性样本背景增强。因此，为了实验操作的方便，孵育温度选择控制在18-25℃的室温范围内。
53.在一个实施方案中，用于本发明细胞因子定量联合检测的试剂盒的样本可以为全血样本、血清或血浆样本。在一个优选实施方案中，所述样本为血清或血浆样本。
54.在一个实施方案中，所述样本与包被有细胞因子捕获抗体的磁性荧光编码微球的添加比例为：每1μl样本对应加入50-500个抗体包被的磁性荧光编码微球。发明人经过试验发现，将样本与包被有细胞因子捕获抗体的磁性荧光编码微球溶液的添加比例控制在上述范围内，能够保证最终检测获得较为准确的荧光信号强度，从而获得较为准确的细胞因子相对浓度。当添加比例小于或大于在上述范围内，最终检测获得的荧光信号强度均小于当混合比例在上述范围内时的荧光信号强度，从而会导致最终获得的细胞因子相对浓度不准确，影响最终的检测结果。
55.实施例
56.下面结合实施例对本发明进行更为具体和详细的描述。下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规化试剂商店购买所得。应注意，上文的发明内容部分以及下文的详细描述仅为具体阐释本发明之目的，无意于以任何方式对本发明进行限制。
57.实验材料
58.1)样本：患者血清
59.2)分别包被有tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17的对应捕获抗体的混合的羧基化荧光编码微球；
60.3)生物素化的抗人tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17检测抗体(购自thermo fisher)；
61.4)藻红蛋白偶联的链霉亲和素(sav-pe)(购自thermo fisher)
62.5)人tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17重组蛋白冻干粉
63.6)样本稀释液(1
×
pbs，0.1％bsa)
64.7)微球清洗液(1
×
pbs，0.05％吐温20)
65.实施例1.细胞因子定量联合检测的试剂盒的制备
66.磁性荧光编码微球的包被
67.1.工作液的配制：
68.1.1配制0.1m磷酸二氢钠(sodium phosphate monobasic)(ph 7.2)
69.1.1.1称取11.998g nah2po4，并加入0.9l去离子水(di h2o)。
70.1.1.2将ph调至7.2，并将溶液定容至1l。
71.1.2配制50mm 2-吗啉乙磺酸(mes)(ph 5.0)
72.1.2.1称取9.762g mes，并加入0.9l di h2o。
73.1.2.2将ph调至5.0，并将溶液定容至1l。
74.1.3配制10mm pbs-tbp(ph 7.4)
75.1.3.1称取2.9g na2hpo4·
12h2o、0.2g kh2po4、8g nacl和0.2g kcl，并加入0.9l di h2o/去离子水。
76.1.3.2将ph调至7.4。
77.1.3.3加0.2ml吐温20(tween-20)、0.5ml牛莎pc-300抑菌剂(pc-300)和1g bsa，并将溶液定容至1l。
78.2.具体制备步骤：
79.2.1称取100μl去离子水，向其中加入5mg的n-羟基琥珀酰亚胺(sulfo-nhs)(4℃储存)，混匀，制成浓度为50mg/ml的sulfo-nhs溶液。
80.2.2称取100μl去离子水，向其中加入5mg的碳二亚胺(edc)(-20℃储存)，混匀，制成浓度为50mg/ml的edc溶液。
81.2.3测量管内微球具体数目：用pbs-tbp将微球稀释到合适比例，上机检测微球数目。
82.2.4量取1000μl(5
×
106个)微球至离心管中，用100μl去离子水清洗一次。
83.2.5向已经清洗过的微球中加入80μl 0.1m磷酸二氢钠(ph 7.2)混匀。
84.2.6取10μl 50mg/ml sulfo-nhs(10μl/5
×
106)加入离心管，混匀。
85.2.7取10μl 50mg/ml edc(10μl/5
×
106)加入离心管，混匀，于室温孵育20分钟，每隔10分钟混合一次。
86.2.8去除上清液，用250μl 50mm mes(ph 5.0)清洗，共清洗2次。
87.2.9取200μl 50mm mes(ph 5.0)(100μl/5*106)加入离心管，混匀。
88.2.10取50μl细胞因子tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12p70或il-17的抗体加入微球悬液(抗体添加比例10ug/5
×
106)，补加250μl 50mm mes(ph 5.0)(终体积为500μl)，混匀，于室温避光旋转2小时。
89.2.11去除上清液，使用500μl 5％bsa重悬微球，并于室温避光旋转60分钟去除液体。
90.2.12去除上清液，随后使用1ml pbs-tbp清洗，共清洗2次。
91.2.13向清洗后的微球中加入500μl pbs-tbp重悬微球。
92.2.14检测微球的标记情况。
93.3.实验步骤
94.1)检测标记后管内剩余微球个数；
95.2)用pbs-tbp将标记的微球稀释到1000个/检测/指标；
96.3)按照产品实验步骤进行实验。
97.实施例2.细胞因子联合检测试剂盒在诊断方面的应用
98.从6种疾病(炎症患者-细菌感染、真菌感染或病毒感染；肿瘤患者-肾癌、肝癌或胃癌)的患者中各选取10位患者的样本采用本发明的试剂盒进行检测。
99.样本要求
100.血清或血浆(建议在4-6小时内检测，如无法及时检测请于-20℃冻存，忌反复冻融)。
101.检验方法
102.1.洗涤缓冲液的准备
103.颠倒混合标有20
×
浓缩洗涤缓冲液的瓶子。在475ml蒸馏水中加入20
×
浓缩洗涤缓冲液25ml，并轻轻混合以免起泡沫。储存于2℃至8℃待用。
104.2.校准品的制备
105.2.1准备8个1.5ml ep管分别编号c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7、c8。
106.2.2使用前将1000μl样本稀释液加入校准品管中，充分混匀，于室温放置10分钟，此管将被用作校准品最高浓度c1号管。
107.2.3将c2至c4号ep管中分别加入500μl样本稀释液，c5至c7号ep管中分别加入750μl样本稀释液，准备梯度稀释校准品。
108.2.4从c1号管中转移500μl校准品到c2号管充分混匀，从c2号管转移500μl到c3号管充分混匀，从c3号管转移500μl到c4号管充分混匀，从c4号管转移250μl到c5号管充分混匀，从c5号管转移250μl到c6号管充分混匀，从c6号管转移250μl到c7号管充分混匀。
109.2.5在c8号管加入500μl样本稀释液。
110.3.样本处理
111.样本稀释比例1∶2稀释倍数血清或血浆样本50μl样本 50μl样本稀释液2
112.4.试验操作步骤
113.*实验前将所有试剂取出平衡至室温。孵育过程中，96孔板应注意避光。
114.4.1从梯度稀释好的校准品c1至c8号管中分别取出50μl移入对应的校准品板孔中。
115.4.2其余样本孔每孔加入稀释好的50μl血清样本或血浆样本。
116.4.3涡旋混合微球管30秒，每孔加入50μl混合微球，现每孔体积应为100μl/孔。(加微球过程中应随时涡旋微球管，避免微球沉降)
117.4.4室温(20℃至25℃)水平摇床避光孵育1小时。
118.4.5孵育结束，将96孔板放在磁力板上，去除上清。
119.4.6每孔加入200μl洗涤缓冲液，使用磁力板，去上清；重复一次洗涤步骤。
120.4.7每孔加入100μl相应的检测抗体混合液。
121.4.8室温(20℃至25℃)避光水平摇床孵育30分钟。
122.4.9孵育结束，将96孔板放在磁力板上，去除上清。
123.4.10每孔加入200μl洗涤缓冲液，使用磁力板，去上清；重复一次洗涤步骤。
124.4.11每孔加入100μl sav-pe。
125.4.12室温(20℃至25℃)避光水平摇床孵育30分钟。
126.4.13孵育结束，将96孔板放在磁力板上，去除上清。
127.4.14每孔加入200μl洗涤缓冲液，使用磁力板，去上清；重复一次洗涤步骤。
128.4.15每孔加入100μl洗涤缓冲液重悬样本，流式细胞仪上样50μl。利用流式细胞仪(室温)检测并记录各自对应的荧光信号强度，检测结果如下表所示。
129.实验结果表明，在感染或肿瘤患者中，血清中的特定细胞因子的浓度显著高于正常水平，具体结果如下：
130.131.132.133.134.[0135][0136]
表7.各指标检测情况汇总
[0137]
测指标符合率最低值最高值
tnf-α93％15.03450.97ifn-γ95％20.16475.91il-1β95％11.44359.61il-295％5.8723.55il-497％5.2429.38il-6100％7.45550.67il-8100％30.33487.78il-1098％12.08495.85il-12p70100％74.94491.07il-1797％10.5497.66
[0138]
当所述样本来自于细菌感染的炎症患者时，样本中tnf-α、ifn-γ、il-2、il-4、il-6、il-10的浓度相对于正常值显著升高见表1，并且当样本中tnf-α的浓度高于400pg/ml时，患者伴有长时间高热不退的症状；当所述样本来自于真菌感染的炎症患者时，样本中的ifn-γ、il-4、il-6、il-10浓度相对于正常值显著升高(表2)；当所述样本来自于hiv感染(病毒)的炎症患者时，样本中il-2、tnf-α和il-17的浓度相对于正常值显著升高，(见表3中1至5号患者结果)；当所述样本来自于hpv感染(病毒)的炎症患者时，样本中il-2和il-10的浓度相对于正常值显著升高(见表3中6至10号患者结果)
[0139]
当所述样本来自于患有肺癌的肿瘤患者时，样本中il-1β、il-4、il-6、il-8、il-10和il-17的浓度相对于正常值显著升高(见表4)；当所述样本来自于患有肝癌的肿瘤患者时，样本中il-6、il-10、il-12p70和il-17的浓度相对于正常值显著升高(见表5)，当所述样本来自于患有胃癌的肿瘤患者时，样本中il-1β、il-6、il-8、il-10、il-12p70和il-17的浓度相对于正常值显著升高(见表6)。
[0140]
表7中的实验结果表明对炎症或者肿瘤患者血清中的特定细胞因子浓度的检测，检测结果与预测结果的符合率分别达到93％、95％、95％、95％、97％、100％、100％、98％、100％、97％。在感染患者中，不同感染源也呈现指标相关性。
[0141]
综上所述，细胞因子的检测有希望用于感染和肿瘤及其严重程度的辅助诊断、指导临床用药、对患者进行免疫评估、判断患者对药物的敏感性、耐药性监测以及疗效评估等。