甲基硒酸在抗吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的新用途

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及甲基硒酸在抗吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的新用途。


背景技术：

2.甲基硒酸（methylseleninic acid,msea）是一种单甲基的有机硒化合物，在许多动物和细胞模型中显示出有效的抗癌活性。甲基硒酸通过被谷胱甘肽还原为硒抗癌活性的关键代谢物——甲基硒醇，发挥抗癌作用，甲基硒醇掺入到蛋白质中，导致有毒蛋白质的积累，引起内质网应激反应，激活凋亡通路，导致癌细胞死亡。
3.吉非替尼是一种小分子表皮生长因子受体（egfr）酪氨酸激酶抑制剂，适用于治疗既往接受过化学治疗或不适于化疗的egfr突变阳性的局部晚期或转移性非小细胞肺癌(nsclc)。吉非替尼作为egfr突变的肺癌治疗的一线药物，平均 10 至 14 个月后会出现耐药现象。而阿法替尼、奥希替尼等第二、三代egfr突变阳性肺癌的靶向药也在产生吉非替尼耐药性后使用，同样出现不同时间的耐药现象，且价格昂贵。如何针对吉非替尼耐药机制发现新的治疗方法和药物、提高治疗效果、延长病人生存期成为急需解决的问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供甲基硒酸在吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的新用途。所述应用中，所述癌具体可为吉非替尼耐药的egfr阳性的非小细胞肺癌。
5.本发明第一个方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤的制剂中的应用；在一个具体的实施例中，所述的抑制是通过抑制肿瘤细胞糖酵解的水平从而抑制肿瘤增殖；在另外一个具体的实施例中，所述的抑制是通过抑制肿瘤细胞中met磷酸化实现对肿瘤的抑制；在另外一个具体的实施例中，所述的抑制是通过抑制肿瘤细胞中topk磷酸化实现对肿瘤细胞的抑制；在另外一个具体的实施例中，所述的抑制是通过抑制肿瘤细胞的akt磷酸化实现了对肿瘤细胞的抑制；上述的具体实施例中，进一步的，所述的肿瘤为肺癌，优选为非小细胞肺癌，更优选的为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。
6.本发明的第二个方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤细胞中met磷酸化的制剂中的应用；优选的，所述的肿瘤为肺癌，更优选为非小细胞肺癌，最优选的为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。
7.本发明的第三个方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤细胞中topk磷酸化的制剂中的应用；优选的，所述的肿瘤为肺癌，更优选为非小细胞肺癌，最优选的为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。
8.本发明的第四个方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤细胞中akt磷酸化的制剂中的应用；优选的，所述的肿瘤为肺癌，更优选为非小细胞肺癌，最优选的为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。
9.本发明的第五个方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤细胞中糖酵解水平的制剂
中的应用；优选的，所述的肿瘤为肺癌，更优选为非小细胞肺癌，最优选的为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。
10.本发明中所使用的甲基硒酸(cas:28274-57-9)结构式见式（ι）；（ι）本发明的有益效果是1）本发明首次揭示了甲基硒酸具有抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的生长作用，对导致吉非替尼耐药的主要扩增蛋白met的活性有较好的抑制作用，可降低吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的糖酵解水平；2）本发明为研制以甲基硒酸为基础的抗吉非替尼耐药的非小细胞肺癌药物提供了科学依据，具有重大的应用价值。
附图说明
11.图1甲基硒酸对小鼠体重的影响。
12.图2甲基硒酸对抑制肿瘤组织重量的影响。
13.图3甲基硒酸对抑制肿瘤组织体积的影响。
14.图4甲基硒酸（msea）、亚硒酸钠（selenite）、硒代蛋氨酸（selenomethionine，semet）、硒-甲基硒代半胱氨酸（se-methylselenocysteine，semc）对hcc827吉非替尼耐药细胞存活率的影响。
15.图5甲基硒酸对hcc827吉非替尼耐药细胞met、topk、akt蛋白的影响。
16.图6甲基硒酸对hcc827吉非替尼耐药细胞糖酵解的影响。
具体实施方式
17.以下结合附图和具体实施例，对本发明的具体实施方式和技术方案作进一步的详述，需明确：本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
18.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
19.吉非替尼耐药的人肺癌细胞hcc827gr来源pasi a. j
ä
nne博士（美国哈佛医学院）且已验证。
20.实施例1甲基硒酸抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌生长在小鼠中的作用。
21.试验方法：雄性nvsg高度免疫缺陷小鼠（北京唯尚立德生物科技有限公司），20只，6周龄，将5
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106个hcc827gr细胞与等体积的matrigel混合，注射到小鼠右侧皮下，用游标卡尺测量肿瘤体积。当肿瘤体积约为100-120mm3时，将小鼠随机分为对照组、甲基硒酸处理组。对照组给予相应的溶剂，甲基硒酸处理组以每天3mg se/kg的剂量灌胃给药，每隔一天
测量小鼠体重和肿瘤体积。实验结束后，取肿瘤，一部分放在10％福尔马林中储存，剩下的液氮急冻后保存在-80℃。
22.以肿瘤体积和肿瘤重量作为评价标准，由图2和图3可知甲基硒酸可显著抑制肿瘤组织的生长且对小鼠的体重没有显著的影响(见图1)。
23.结果表明，在hcc827吉非替尼耐药细胞皮下成瘤模型中，甲基硒酸处理对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌具有良好的治疗效果。
24.实施例2甲基硒酸抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的生长。
25.试验方法：在体外，用0、2、4、6、8μm的甲基硒酸、亚硒酸钠、硒代蛋氨酸、硒-甲基硒代半胱氨酸处理hcc827gr细胞24小时，用结晶紫染色法检测细胞存活率。
26.图4所示结果表明，甲基硒酸处理可明显降低hcc827gr细胞存活率，并呈现浓度依赖效应。结果表明，甲基硒酸可抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的生长。
27.实施例3甲基硒酸抑制hcc827gr细胞中met、topk和akt蛋白的磷酸化。
28.试验方法：用0、2、4、6、8 μm的甲基硒酸处理hcc827gr细胞24小时，取细胞，提取总蛋白，进行蛋白免疫印迹检测。蛋白免疫印迹检测中，用于检测p-topk的一抗为抗p-topk(cst, 4941)，用于检测p-met的一抗为抗p-met(cst, 3077)，用于检测p-akt的一抗为抗p-akt(cst, 4060)，用于检测β-actin的一抗为抗β-actin(cst, 4970)，二抗为兔二抗(mbl ,458)。最后使用ecl 发光试剂盒进行显影。
29.图5结果表明，甲基硒酸处理后，p-topk、p-met和p-akt的水平显著降低，且呈剂量依赖效应。结果表明，甲基硒酸可抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的met、topk和akt蛋白的磷酸化。
30.实施例4甲基硒酸降低hcc827gr细胞的糖酵解水平。
31.试验方法：用0、2、4、6、8 μm的甲基硒酸处理hcc827gr细胞24小时，使用安捷伦糖酵解速率测定试剂盒，根据其说明书方法测细胞糖酵解水平。
32.图6结果表明，甲基硒酸处理后，hcc827gr细胞糖酵解水平降低，且呈剂量依赖效应。结果表明，甲基硒酸可抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的糖酵解水平。
33.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。