一种荧光免疫层析试纸条及其制备方法与流程

1.本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种荧光免疫层析试纸条及其制备方法。


背景技术：

2.中和抗体是由病毒最外层的包膜或衣壳抗原刺激机体产生的一类能与病毒结合并使之丧失感染力的抗体。病毒侵入人体后，体内浆细胞会产生病毒特异性抗体，其中只有一部分是中和抗体。
3.中和抗体作用机制一般包括改变病毒表面构型；与吸附有关的病毒表位结合，阻止病毒吸附，使病毒不能侵入细胞进行增值；与病毒形成免疫复合物，易被巨噬细胞吞噬清除；有包膜病毒的表面抗原与中和抗体结合后，激活补体，可导致病毒的溶解。
4.中和抗体检测的实验室金标准是感染抑制实验，主要包括利用活病毒进行的蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,prnt)和通过检测细胞病变(cytopathic effect,cpe)量来进行分析的微量细胞中和试验。这两种方法均使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合后，接种预先准备好的单层细胞，通过不同的指标评价细胞的病变程度评价中和抗体效价。
5.传统的中和抗体检测因耗时长、检测条件要求较高、生物安全风险较高等因素，难以有效满足快速、大范围检测的需求。因此，迫切需要一种简单快速的替代方法，用于大规模人群保护性抗体的评估。


技术实现要素：

6.为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种量子点荧光免疫层析法试纸条及其应用，通过特定的量子点微球复溶液，可以有效提高抗原-量子点和结合物垫的结合程度，提高检测稳定性。
7.第一方面，本发明提供一种荧光免疫层析试纸条的制备方法，包括：
8.制备抗原-荧光微球复合物；
9.所述制备抗原-荧光微球复合物包括：
10.采用hepes溶液稀释荧光微球，经过活化处理、离心后采用复溶液复溶沉淀；
11.加入新冠病毒rbd抗原后经过封闭、离心后采用所述复溶液复溶沉淀；
12.所述新冠病毒rbd抗原的氨基酸序列如seq id no.1所示。
13.本发明对新冠病毒rbd蛋白进行改造，提升其与抗体结合能力，进而提升试剂灵敏度。
14.进一步地，所述复溶液为在10～50mm硼酸盐缓冲液中以重量份计，包括：蔗糖1～5份、bsa 0.5～5份、pc300 0.1～1份、pvp 0.1～0.5份、酪蛋白0.1～0.5份和triton 0.1～0.5份；所述复溶液的ph为7～9。
15.本发明提供的量子点微球复溶液在溶解抗原-量子点偶联物以及抗体-量子点偶
联物后喷涂于结合物垫后，可以有效提高两种量子点偶联物在结合物垫上的结合水平。
16.进一步地，所述制备抗原-微球复合物包括：
17.采用10～200mm的hepes溶液以(5～15)：1的体积比溶解荧光微球得到荧光微球溶液；加入0.1～10倍于所述荧光微球溶液体积的活化液处理10～30分钟，离心后采用1～20倍于所述荧光微球溶液体积的所述复溶液复溶沉淀；
18.加入新冠病毒rbd抗原，混匀后加入5％～20％的bsa溶液混匀30～720分钟，离心后用5～100倍于所述荧光微球溶液体积的所述复溶液复溶沉淀。
19.进一步地，所述新冠病毒rbd抗原和所述荧光微球溶液的含量比为(0.1～5)mg:ml；
20.进一步地，所述活化液包括质量比为0.1～10的edc和nhs，所述活化液的用量为0.1～10％。
21.和/或，所述bsa溶液的用量为所述荧光微球溶液的1～10倍。
22.进一步地，还包括：
23.制备鸡igy抗体-荧光微球复合物，样品和结合物一体垫的预处理，制备样品和结合物一体垫和包被检测区和质控区。
24.进一步地，所述样品和结合物一体垫的预处理包括：
25.采用处理液处理所述样品和结合物一体垫；所述处理液以重量份计包括硼酸0.001～50份、四硼酸钠0.001～50份、红细胞膜单抗0.001～0.2份、bsa 0.001～50份、蔗糖50～500份、吐温5～10份和proclin3000.001～50份。样品和结合物一体垫经过预处理，可以减小试剂批内差和批间差。
26.进一步地，所述制备样品和结合物一体垫包括：
27.以1～10μl/cm将抗原-荧光微球复合物以及鸡igy抗体-荧光微球复合物置于样品和结合物一体垫上，后在30～50℃，相对湿度≤30％条件下，干燥0.5～12小时。
28.样品和结合物一体垫的使用，可以减小试剂批内差和批间差。与滤血膜共同使用，可以实现对全血样本(静脉全血或指尖血)的检测。
29.进一步地，所述包被检测区和质控区包括:
30.将检测区溶液和质控区溶液分别以0.5～2.0μl/cm置于硝酸纤维素膜的检测区和质控区，后在30～50℃，相对湿度≤30％条件下，干燥0.5～4小时；
31.以重量份计，所述检测区溶液包括：
32.鼠抗人igg抗体0.005～0.025份、磷酸氢二钠1～50份、0.001～10份、1～50份海藻糖；
33.所述质控区溶液包括：羊抗鸡igy抗体和三羟甲基氨基甲烷；
34.所述羊抗鸡igy抗体的浓度为0.5～2.5mg/ml，所述三羟甲基氨基甲烷的质量体积百分含量为0.1％～5％。
35.进一步地，所述荧光微球包括量子点荧光微球、时间分辨荧光微球或磁性荧光微球中的一种或多种。
36.进一步地，所述荧光微球包括量子点荧光微球、绿色荧光微球、红色荧光微球、蓝色荧光微球、时间分辨荧光微球或磁性荧光微球中的一种或多种。
37.作为一种优选的具体实施方式，本发明提供一种荧光免疫层析试纸条的制备方
法，包括；
38.1、制备抗原-荧光微球复合物
39.采用10～200mm的hepes溶液按照(8～10)：1的比例溶解荧光微球，加入0.1～10倍于所述荧光微球溶液体积的活化液处理10～30分钟，离心后采用1～20倍于所述荧光微球溶液体积的所述复溶液复溶沉淀；
40.加入新冠病毒rbd抗原，混匀后加入5％～20％的bsa溶液混匀30～720分钟，离心后用5～100倍于所述荧光微球溶液体积的所述复溶液复溶沉淀；
41.所述新冠病毒rbd抗原和所述荧光微球的含量比为(0.1～5)mg:ml；所述bsa溶液的用量为所述荧光微球的1～10倍；
42.所述复溶液是在10mm-50mm硼酸盐缓冲液中加入1％-5％蔗糖、0.5％-5％bsa、0.1％pc300、0.1％-0.5％pvpk30、0.1％-0.5％酪蛋白、0.1％-5％tritonx-100，ph为7.0-8.5。
43.2、制备鸡igy抗体-荧光微球复合物
44.采用10～200mm的hepes溶液按照(8～10)：1的比例溶解荧光微球，加入0.1～10倍于所述荧光微球溶液体积的活化液处理10～30分钟，离心后采用1～20倍于所述荧光微球溶液体积的所述复溶液复溶沉淀；
45.加入鸡igy抗体，混匀后加入5％～20％的bsa溶液混匀30～720分钟，离心后用5～100倍于所述荧光微球溶液体积的所述复溶液复溶沉淀；
46.所述鸡igy抗体和所述荧光微球的含量比为(0.1～5)mg:ml；所述bsa溶液的用量为所述荧光微球溶液体积的1～10倍；
47.3、样品和结合物一体垫的预处理
48.处理液以重量份计包括0.01
‰
～0.5％硼酸，0.01
‰
～0.5％四硼酸钠，10～200μg/ml红细胞膜单抗，0.1
‰
～0.5％bsa，0.5％～5％蔗糖，0.05
‰
～0.1％tween-20，0.1
‰
～0.5％proclin300，余量为水。
49.将所述处理液以10ml～30ml/张均匀分布于样品和结合物一体垫上；
50.4、制备样品和结合物一体垫
51.以1～10μl/cm将抗原-荧光微球复合物以及鸡igy抗体-荧光微球复合物置于样品和结合物一体垫上，后在30～50℃，相对湿度≤30％条件下，干燥0.5～12小时；
52.5、包被检测区和质控区
53.将检测区溶液和质控区溶液分别以0.5～2.0μl/cm置于硝酸纤维素膜的检测区和质控区，后在30～50℃，相对湿度≤30％条件下，干燥0.5～4小时；
54.所述检测区溶液包括：
55.0.5～2.5mg/ml鼠抗人igg抗体，0.1％～5％磷酸氢二钠，0.1
‰
～1％磷酸二氢钠，0.1％～5％海藻糖；
56.所述质控区溶液包括
57.0.5～2.5mg/ml羊抗鸡igy抗体和0.1％～5％三羟甲基氨基甲烷。
58.进一步地，还包括：
59.6、组装
60.将包被后的硝酸纤维素膜贴上制备的样品和结合物一体垫、滤血膜、吸收垫并压
实，并在吸收水垫上用不同颜色做标记，切条宽度3～6mm，将切好的检测条装入塑料板卡，使用压壳机将塑料板卡压实；将压实后的检测卡装入铝箔袋，并加装干燥剂1g/袋；使用封口机在180～200℃、4～6m/min条件下封口。
61.进一步地，所述抗原-荧光微球复合物和所述鸡igy抗体-荧光微球复合物可以采用喷涂、敷涂、擀涂或浸泡的方式涂覆在玻璃纤维素膜上。
62.进一步地，所述样品和结合物一体垫的预处理可以采用喷涂、敷涂、擀涂或浸泡的方式将处理液涂覆在样品和结合物一体垫上。
63.进一步地，所述样品和结合物一体垫可以使用玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜。
64.进一步地，所述硝酸纤维素膜在包被有检测区和质控区后可以进行封闭处理，以减少非特异性反应。
65.本发明进一步提供所述制备方法制备得到的荧光免疫层析试纸条。
66.第二方面，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括所述荧光免疫层析试纸条。
67.进一步地，还包括样本稀释液；以重量份计，所述样本稀释液包括：
68.磷酸二氢钠0.001～5份、磷酸氢二钠0.5～10份、氯化钠0.5～10份、酪蛋白0.001～1份、阻断剂0.005～5份和proclin300 0.0001～0.0005份。
69.进一步地，所述样本稀释液包括：
[0070]1‰
～5％磷酸二氢钠，0.5％～10％磷酸氢二钠，0.5％～10％氯化钠，0.1
‰
～1％酪蛋白，0.5
‰
～5％阻断剂，0.1
‰
～0.5％proclin300，余量为水。
[0071]
本发明具备如下有益效果：
[0072]
本发明对新冠病毒rbd蛋白进行改造，提升其与抗体结合能力，有效提供了试纸条的灵敏度。并且改进涂覆方式，进一步提升检测稳定性。
[0073]
本发明提供的试剂盒操作简便：传统的中和抗体检测方法需要经过培训的专业人员，在专业的实验室内才能完成，而此方法只需对检测人员进行简单的培训或自行参照试剂盒说明书即可完成检测。
[0074]
本发明提供的试剂盒检测时间短：传统的中和抗体检测方法需要数天时间，而此方法检测过程仅为15-20分钟。
[0075]
本发明提供的试剂盒生物安全风险低：传统的中和抗体检测方法需要在生物安全防护三级实验室进行，而此方法仅需在普通实验室中进行，大大降低了生物安全级别。
附图说明
[0076]
图1为本发明实施例1提供的量子点荧光免疫层析法试纸条示意图。
具体实施方式
[0077]
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0078]
实施例1
[0079]
1、制备抗原-量子点荧光微球复合物
[0080]
使用50mm，ph7.0的hepes溶液按照体积比9:1稀释量子点荧光微球得到量子点荧光微球溶液，加入1倍量子点荧光微球溶液体积的5％的edc和nhs溶液，活化15分钟。14000rpm，4℃离心15分钟，吸去上清，用10倍量子点荧光微球溶液的复溶液复溶。按照
1.8mg/ml量子点荧光微球溶液加入新型冠状病毒rbd抗原(氨基酸序列如seq id no.1所示)，混匀60分钟，加入0.5倍上述溶液总体积的10％浓度的bsa溶液，混匀120分钟，14000rpm，4℃离心15分钟，吸去上清，用10倍量子点荧光微球溶液体积的复溶液复溶。
[0081]
复溶液的组分如下：
[0082]
20mm硼酸盐缓冲液、2％蔗糖、1％bsa、0.1％pc300、0.3％pvpk30、0.15％酪蛋白1％tritonx-100,ph8.0
±
0.1。
[0083]
2、制备鸡igy抗体-量子点荧光微球复合物
[0084]
使用50mm，ph7.0的hepes溶液按照体积比9:1稀释量子点荧光微球得到量子点荧光微球溶液，加入1倍量子点荧光微球溶液体积的5％的edc和nhs溶液，活化15分钟。14000rpm，4℃离心15分钟，吸去上清，用10倍量子点荧光微球溶液体积的复溶液复溶。按照1.2g/ml量子点荧光微球溶液加入鸡igy抗体，混匀60分钟，加入0.5倍上述溶液总体积的10％浓度的bsa溶液，混匀120分钟，14000rpm，4℃离心15分钟，吸去上清，用10倍量子点荧光微球溶液体积的复溶液复溶。
[0085]
3、样品和结合物一体垫预处理：处理液含有0.87
‰
硼酸，0.57
‰
四硼酸钠，69.26μg/ml红细胞膜单抗，1.3
‰
bsa，2.39％蔗糖，0.13
‰
tween-20，1.3
‰
proclin300。将处理液以25ml/张均匀擀涂在样品和结合物一体垫上，后在42
±
1℃下干燥过夜。
[0086]
4、制备样品和结合物一体垫：以10μl/cm将新型冠状病毒rbd抗原-量子点复合物和鸡igy抗体-量子点复合物的混合物喷涂于样品和结合物一体垫上(喷涂压力1.2kg/cm2)，间隔23mm，每张喷涂8条。将制备的样品和结合物一体垫转移至干燥室，在42
±
1℃，相对湿度≤30％条件下，干燥3小时。
[0087]
5、包被检测区和质控区：检测区溶液包含0.5mg/ml鼠抗人igg抗体，0.725％磷酸氢二钠，0.74
‰
磷酸二氢钠，1％海藻糖。质控区溶液包含1.0mg/ml羊抗鸡igy抗体，0.3％三羟甲基氨基甲烷。将检测区溶液和质控区溶液分别以1.0μl/cm出液量分布于硝酸纤维素膜的检测区和质控区，将包被了检测区和质控区的硝酸纤维素膜(带背板)转移至干燥室，在37
±
1℃，相对湿度≤30％条件下，干燥1小时。
[0088]
6、半成品组装：将包被后的硝酸纤维素膜(带背板)贴上制备的样品和结合物一体垫、滤血膜、吸收垫并压实，并在吸收水垫上用不同颜色做标记，切条宽度4mm，将切好的检测条装入塑料板卡，使用压壳机将塑料板卡压实；将压实后的检测卡装入铝箔袋，并加装干燥剂1g/袋；使用封口机在200℃、6m/min条件下封口。
[0089]
7、样本稀释液配制和分装：样本稀释液包含4.37
‰
磷酸二氢钠，2.58％磷酸氢二钠，3.51％氯化钠，1
‰
酪蛋白，1
‰
阻断剂，2
‰
proclin300。使用分液机分装样本稀释液，每瓶分装量3ml。
[0090]
8、成品组装：将成品包装盒打上批号和有效期；检测卡、样本稀释液、一次性采血针、吸管、酒精棉片和说明书装入包装盒中，封闭包装盒。
[0091]
实际检测时，将待测样本滴加于测试卡加样孔，当待测样本中含有新型冠状病毒中和抗体且浓度高于最低检出限时，中和抗体和量子点微球标记的新型冠状病毒rbd抗原发生免疫反应，形成免疫复合物。当免疫复合物层析至硝酸纤维素膜上的检测区时，免疫复合物就会与预先包被在硝酸纤维素膜上的鼠抗人igg单克隆抗体发生免疫反应，从而被固定在硝酸纤维素膜上，在检测线上出现荧光条带，通过荧光免疫分析仪读取荧光信号值。信
号值的高低与样本中中和抗体的含量成正比。无论样本是否含有新型冠状病毒中和抗体，量子点微球标记的鸡igy抗体层析至质控区时，都会和包被在c线上的羊抗鸡igy抗体结合，形成荧光条带，质控区是作为判断层析过程是否正常的标准。
[0092]
本发明进一步应用制备的新型冠状病毒中和抗体的量子点荧光层析试纸条对经过微量中和试验确认的阴性血清299例和阳性血清179例进行了检测，并与酶联免疫法试剂检测结果进行了对比，结果分别示于表1和表2
[0093]
表1量子点荧光层析试纸条与微量中和试验检测结果的比较
[0094][0095]
表2量子点荧光层析试纸条与酶联免疫法试剂检测结果的比较
[0096][0097]
由表1数据可计算得到量子点层析试纸条特异性＝91.64％，敏感性＝96.65％，总符合率＝93.51％，说明检测结果的总体符合率高。
[0098]
由表2数据可计算得到量子点层析试纸条特异性＝96.89％，敏感性＝99.47％，总符合率＝97.91％，这表明两种检测方法具有高度符合性，本发明所制备的量子点荧光层析试纸条具有很高的实用性。
[0099]
实验例1
[0100]
本发明实施例1中所用的新型冠状病毒rbd蛋白为根据已经报道的新冠病毒rbd蛋白改造而来(改造前的氨基酸序列如seq id no.2所示)，本实验例进一步对比改造后的新型冠状病毒rbd蛋白和市售新型冠状病毒rbd蛋白(购自江苏东抗生物医药科技有限公司，产品货号emsars-cov2 rbd01)作为抗原的灵敏度，具体分别用实施例1涉及的新型冠状病毒rbd蛋白(氨基酸序列如seq id no.1所示)以及市售新型冠状病毒rbd蛋白制备得到荧光免疫层析法试纸条(方法和实施例1完全相同)，结果如下：
[0101]
表3不同新型冠状病毒s蛋白rbd抗原的灵敏度对比结果
[0102]
弱阳性样本稀释比例改造后抗原制备试剂盒市售抗原制备试剂盒1:232iu/ml20iu/ml1:418iu/ml11iu/ml1:811iu/ml5iu/ml
1:166iu/ml3iu/ml1:324iu/ml0iu/ml1:640iu/ml0iu/ml
[0103]
实验例2
[0104]
本实验例对比不同的涂覆方式对于荧光免疫层析法试纸条检测结果的影响，具体针对实施例1中的步骤4中将新型冠状病毒rbd抗原-量子点复合物和鸡igy抗体-量子点复合物的混合物涂覆于样品和结合物一体垫上的方式分别进行如下实验：
[0105]
1、擀涂：
[0106]
(1)清洗纱窗、篦子、滚轴、垫板，烘干备用。
[0107]
(2)配液：取合适的洁净容器和搅拌子，将9ml rbd抗原-量子点荧光微球复合物和3ml鸡igy抗体-量子点荧光微球复合物加入到上述容器中，加入78ml复溶液，中等速度搅拌混匀5分钟。
[0108]
(3)取玻纤1张，放置于垫板上，将5ml移液枪调量程到4.5ml，按9ml/张，每张加两次液，边搅拌边用加样器取混匀后的结合物2次，滴加在玻纤上，使用滚轴将结合物分别沿着玻纤的四个边的方向擀开，每个方向各擀15次，即为一圈，然后重复一圈，观察结合物垫颜色是否均匀，若均匀，放入鼓风干燥箱内42℃干燥3小时，若不均匀，再擀一圈，均匀后放入鼓风干燥箱内42℃干燥3小时。
[0109]
2、敷涂
[0110]
(1)清洗篦子烘干备用。
[0111]
(2)准备5ml加样器、枪头。
[0112]
(3)配液：取合适的洁净容器和搅拌子，将9ml rbd抗原-量子点荧光微球复合物和3ml鸡igy抗体-量子点荧光微球复合物加入到上述容器中，加入78ml复溶液，中等速度搅拌混匀5分钟。
[0113]
(4)取裁切成300*23mm的玻纤，摆到篦子上，10条/篦子，按需要量摆好。
[0114]
(5)用加样器取4ml结合物液，均匀涂在300*23mm的玻纤上，直至涂完所需要的量，涂完后放入干燥箱内42℃干燥3小时。
[0115]
3、喷涂
[0116]
(1)清洗篦子烘干备用。
[0117]
(2)配液：取合适的洁净容器和搅拌子，将9ml rbd抗原-量子点荧光微球复合物和3ml鸡igy抗体-量子点荧光微球复合物加入到上述容器中，加入78ml复溶液，中等速度搅拌混匀5分钟。
[0118]
(3)取玻纤1张，固定于喷金仪平台上，喷金仪压力1.2kg/cm2，以10μl/cm喷涂于玻纤上，间隔23mm，每张喷涂8条，直至喷涂完所需要的量，喷涂完后放入干燥箱内42℃干燥3小时。
[0119]
4、浸泡
[0120]
(1)清洗篦子、浸泡槽烘干备用。
[0121]
(2)配液：取合适的洁净容器和搅拌子，将9ml rbd抗原-量子点荧光微球复合物和3ml鸡igy抗体-量子点荧光微球复合物加入到上述容器中，加入78ml复溶液，中等速度搅拌混匀5分钟。
[0122]
(3)取玻纤1张，放置于浸泡槽内，用移液器加入25ml结合物溶液，浸泡20分钟，放入鼓风干燥箱内42℃干燥3小时。
[0123]
取不同涂覆方式制成的结合物垫制备试剂盒，并进行对比，选取合适的涂覆方式。
[0124]
试剂与材料：
[0125]
新型冠状病毒中和抗体量子点荧光免疫层析试纸条
[0126]
弱阳性质控品(70
±
30iu/ml)、中阳性质控品(200
±
100iu/ml)。
[0127]
表4不同涂覆方式得到的试纸条对于弱阳性质控样品的检测结果
[0128][0129][0130]
表5不同涂覆方式得到的试纸条对于弱阳性质控样品的检测结果
[0131][0132]
结果显示，比较四种结合物液涂覆方式，喷涂cv明显小于其他三种，效果更好，因此优选涂覆方式为喷涂。
[0133]
实验例3
[0134]
本实验例对比不同的涂覆方式对于荧光免疫层析法试纸条检测结果的影响，具体针对实施例1中的步骤3中样品和结合物一体垫预处理采用不同的涂覆方式，进行如下实验：
[0135]
1、擀涂：
[0136]
(1)清洗纱窗、篦子、滚轴、垫板，烘干备用。
[0137]
(2)配液：取合适的洁净容器和搅拌子，将0.027g硼酸，0.018g四硼酸钠，3.6mg红细胞膜单抗，0.03gbsa，0.6g蔗糖，0.003gtween-20，0.03g proclin300加入到上述容器中，加入25.8ml纯化水，中等速度搅拌混匀5分钟。
[0138]
(3)取玻纤1张，放置于垫板上，使用移液器将将25ml溶液滴加在玻纤上，使用滚轴将结合物分别沿着玻纤的四个边的方向擀开，每个方向各擀15次，即为一圈，然后重复一圈，观察结合物垫颜色是否均匀，若均匀，放入鼓风干燥箱内42℃干燥过夜，若不均匀，再擀一圈，均匀后放入鼓风干燥箱内42℃干燥过夜。
[0139]
2、敷涂
[0140]
(1)清洗篦子烘干备用。
[0141]
(2)准备5ml加样器、枪头。
[0142]
(3)配液：取合适的洁净容器和搅拌子，将0.027g硼酸，0.018g四硼酸钠，3.6mg红细胞膜单抗，0.03gbsa，0.6g蔗糖，0.003gtween-20，0.03g proclin300加入到上述容器中，
加入25.8ml纯化水，中等速度搅拌混匀5分钟。
[0143]
(4)取裁切成300*23mm的玻纤，摆到篦子上，按需要量摆好。
[0144]
(5)用加样器取2.9ml结合物液，均匀涂在300*23mm的玻纤上，直至涂完所需要的量，涂完后放入干燥箱内42℃干燥过夜。
[0145]
3、喷涂
[0146]
(1)清洗篦子烘干备用。
[0147]
(2)配液：取合适的洁净容器和搅拌子，将0.027g硼酸，0.018g四硼酸钠，3.6mg红细胞膜单抗，0.03gbsa，0.6g蔗糖，0.003gtween-20，0.03g proclin300加入到上述容器中，加入25.8ml纯化水，中等速度搅拌混匀5分钟。
[0148]
(3)取玻纤1张，固定于喷金仪平台上，喷金仪压力1.2kg/cm2，以20μl/cm喷涂于玻纤上，间隔23mm，每张喷涂8条，直至喷涂完所需要的量，喷涂完后放入干燥箱内42℃干燥过夜。
[0149]
4、浸泡
[0150]
(1)清洗纱窗、篦子、浸泡槽，烘干备用。
[0151]
(2)配液：取合适的洁净容器和搅拌子，将0.027g硼酸，0.018g四硼酸钠，3.6mg红细胞膜单抗，0.03gbsa，0.6g蔗糖，0.003gtween-20，0.03g proclin300加入到上述容器中，加入25.8ml纯化水，中等速度搅拌混匀5分钟。
[0152]
(3)取玻纤1张，置于浸泡槽内，用移液器加入30ml浸泡液溶液，浸泡20分钟，放入鼓风干燥箱内42℃干燥过夜。
[0153]
使用不同预处理涂覆方式得到的预处理垫制备试剂盒，进行对比，选取合适的涂覆方式进行实验。
[0154]
试剂与材料：
[0155]
1、新型冠状病毒中和抗体量子点荧光免疫层析试纸条
[0156]
2、弱阳性质控品(70
±
30iu/ml)、中阳性质控品(200
±
100iu/ml)。
[0157]
表6预处理过程中不同涂覆方式得到的试纸条对于弱阳性质控样品的检测结果
[0158][0159][0160]
表7预处理中不同涂覆方式得到的试纸条对于弱阳性质控样品的检测结果
[0161][0162]
结果显示：比较四种预处理涂覆方式，擀涂cv明显小于其他三种，效果更好，优选涂覆方式为擀涂。
[0163]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。