一种微囊藻毒素的液质联用测定方法与流程

1.本发明涉及藻毒素检测技术领域，尤其涉及一种微囊藻毒素的液质联用测定方法。


背景技术：

2.蓝藻是地球上的最古老生物之一，水体的富营养化有利于蓝藻的繁殖和生长，蓝藻能释放生物毒素——微囊藻毒素(mc)，这些类次级代谢产物严重危害人类和其他生物的安全。
3.由于蓝藻样品成份复杂，其中的微囊藻毒素含量低(质量百分比在万分之一左右)，如果在前处理过程中杂质残留多，在后续定量分析中，能严重影响结果的准确性。我们通过酶联免疫检测，能得到准确的结果。
4.但酶联免疫检测具有分析时间长、灵敏度不高的缺点。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种微囊藻毒素的液质联用测定方法，旨在解决微囊藻毒素酶联免疫检测，分析时间长、灵敏度不高的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供了一种微囊藻毒素的液质联用测定方法，包括：
7.通过溶剂制备系统粉碎蓝藻样品，并导入溶液混合，制得微囊藻毒素溶剂；
8.对所述微囊藻毒素溶剂进行固相萃取富集和免疫亲和柱净化，得到最终微囊藻毒素溶剂；
9.将所述最终微囊藻毒素溶剂放入液质联用仪进行定量测定。
10.其中，通过溶剂制备系统粉碎蓝藻样品，并与溶液混合的制取微囊藻毒素溶剂的具体方式为：
11.获取蓝藻样品，将所述样品导入溶剂制备系统内进行粉碎；
12.往所述溶剂制备系统导入溶液，并与所述样品粉末混合，制取所述微囊藻毒素溶剂；
13.其中，所述溶液为联氨对照品溶液、乙腈、甲酸铵、甲酸和超纯水。
14.其中，对所述微囊藻毒素溶剂进行固相萃取提纯和免疫亲和柱净化，得到最终溶剂的具体方式为：
15.将所述微囊藻毒素溶剂进行固相萃取提纯，得到高纯度微囊藻毒素溶剂；
16.对所述高纯度微囊藻毒素溶剂过免疫亲和柱净化处理，得到所述最终微囊藻毒素溶剂。
17.其中，将所述最终微囊藻毒素溶剂放入液质联用仪进行定量测定的具体方式为：
18.将所述最终微囊藻毒素溶剂放入液质联用仪中；
19.所述液质联用仪的液相色谱分离所述最终微囊藻毒素溶剂，并将所述最终微囊藻毒素溶剂离子化；
20.离子化的所述最终微囊藻毒素溶剂通过所述液质联用仪的质量分析器将离子碎片按质量数分开，并经检测器得到质谱图。
21.所述溶剂制备系统，包括粉碎罐和提纯罐，所述提纯罐设置于所述粉碎罐一侧；
22.所述粉碎罐包括罐体、粉碎器、可视镜、过滤槽和支架，所述罐体设置于所述提纯罐一侧，所述支架与所述罐体固定连接，且位于靠近所述提纯罐一侧，所述粉碎器设置于所述罐体一侧，所述过滤槽设置于所述罐体靠近所述支架一侧，所述可视镜与所述罐体固定连接，且位于所述罐体一侧。
23.其中，所述提纯罐包括提纯罐本体和振动器，所述提纯罐本体设置于所述过滤槽远离所述罐体一侧，所述振动器与所述提纯罐本体固定连接，且位于所述提纯罐本体一侧。
24.本发明的一种微囊藻毒素的液质联用测定方法，溶剂制备系统粉碎蓝藻样品，并与溶剂混合的制取微囊藻毒素溶剂；所述微囊藻毒素溶剂进行固相萃取富集和免疫亲和柱净化，得到最终微囊藻毒素溶剂；所述最终微囊藻毒素溶剂放入液质联用仪进行定量测定，制取的所述微囊藻毒素溶剂预处理后，通过所述液质联用仪测定，所述液质联用仪对复杂样品的高分离能力，与ms具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，测定快速便捷，测定结果准确，解决微囊藻毒素酶联免疫检测，分析时间长、灵敏度不高的问题。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
26.图1是本发明提供的一种微囊藻毒素的液质联用测定方法流程图。
27.图2是通过所述溶剂制备系统粉碎蓝藻样品，并与溶液混合，制得微囊藻毒素溶剂的方法流程图。
28.图3是对所述微囊藻毒素溶剂进行固相萃取提纯和免疫亲和柱净化，得到最终溶剂的方法流程图。
29.图4是将所述最终微囊藻毒素溶剂放入液质联用仪进行定量测定方法的流程图。
30.图5是本发明还提供的一种溶剂制备系统的结构示意图。
31.图6是本发明还提供的一种溶剂制备系统的纵向剖视图。
32.图中：1-粉碎罐、2-提纯罐、3-罐体、4-粉碎器、5-可视镜、6-过滤槽、7-支架、8-提纯罐本体、9-振动器、10-驱动电机、11-粉碎杆、12-粉碎刀片、13-槽体、14-过滤网、15-气泵、16-吸管、17-收集箱。
具体实施方式
33.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
34.在本发明的描述中，需要理解的是，术语“长度”、“宽度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
35.请参阅图1至图4，本发明提供一种微囊藻毒素的液质联用测定方法，包括：
36.s11通过溶剂制备系统粉碎蓝藻样品，并与溶液混合，制得微囊藻毒素溶剂；
37.所述溶液为乙腈、甲酸铵、甲酸和超纯水。
38.具体方法为：
39.s111获取蓝藻样品，将所述样品导入溶剂制备系统内进行粉碎；
40.s112往所述溶剂制备系统导入溶液，并与所述样品粉末混合，制取所述微囊藻毒素溶剂。
41.乙腈、甲酸铵、甲酸和超纯水的一种或多种导入所述溶剂制备系统，并与粉碎后的蓝藻样品混合，所述溶剂制备系统将混合液过滤，得到所述微囊藻毒素溶剂。
42.s12对所述微囊藻毒素溶剂进行固相萃取富集和免疫亲和柱净化，得到最终微囊藻毒素溶剂；
43.具体方式为：
44.s121将所述微囊藻毒素溶剂进行固相萃取提纯，得到高纯度微囊藻毒素溶剂；
45.s122对所述高纯度微囊藻毒素溶剂过免疫亲和柱净化处理，得到所述最终微囊藻毒素溶剂。
46.s13将所述最终微囊藻毒素溶剂放入液质联用仪进行定量测定。
47.具体方式为：
48.s131所述液质联用仪的液相色谱分离所述最终微囊藻毒素溶剂，并将所述最终微囊藻毒素溶剂离子化；
49.所述最终微囊藻毒素溶剂在所述液质联用仪的质谱部分和流动相分离，使得所述最终微囊藻毒素溶剂离子化。
50.s132离子化的所述最终微囊藻毒素溶剂通过所述液质联用仪的质量分析器将离子碎片按质量数分开，并经检测器得到质谱图。
51.离子化的所述最终微囊藻毒素溶剂经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图，测定分析结果可靠，具备高灵敏，分析时间快，使用的液相色谱柱为窄径柱，缩短了分析时间，提高了分离效果，自动化程度高。
52.请参阅图5至图6，所述溶剂制备系统包括粉碎罐1和提纯罐2，所述提纯罐2设置于所述粉碎罐1一侧；
53.所述粉碎罐1包括罐体3、粉碎器4、可视镜5、过滤槽6和支架7，所述罐体3设置于所述提纯罐2一侧，所述支架7与所述罐体3固定连接，且位于靠近所述提纯罐2一侧，所述粉碎器4设置于所述罐体3一侧，所述过滤槽6设置于所述罐体3靠近所述支架7一侧，所述可视镜5与所述罐体3固定连接，且位于所述罐体3一侧。
54.在本实施方式中，所述支架7对所述罐体3和所述过滤槽6提供安装条件，蓝藻样品导入所述罐体3内，通过所述粉碎器4搅拌粉碎，蓝藻样品粉碎后，再往所述罐体3内导入溶液，所述粉碎器4混合蓝藻样品和溶液制取所述微囊藻毒素溶剂，所述可视镜5便于观察所
述罐体3内蓝藻样品和溶液的混合情况，所述微囊藻毒素溶剂排出所述罐体3，并导入所述过滤槽6内过滤，得到所述高纯度微囊藻毒素溶剂，最后通过所述提纯罐2提纯所述高纯度微囊藻毒素溶剂，制取所述最终微囊藻毒素溶剂。
55.进一步的，所述提纯罐2包括提纯罐本体8和振动器9，所述提纯罐本体8设置于所述过滤槽6远离所述罐体3一侧，所述振动器9与所述提纯罐本体8固定连接，且位于所述提纯罐本体8一侧。
56.在本实施方式中，所述过滤槽6过滤的所述高纯度微囊藻毒素溶剂流入所述提纯罐本体8内提纯，所述振动器9使得所述提纯罐本体8转动提高提纯效率。
57.进一步的，所述粉碎器4包括驱动电机10、粉碎杆11和若干粉碎刀片12，所述驱动电机10与所述罐体3固定连接，且位于所述罐体3顶部，所述粉碎杆11与所述驱动电机10输出端固定连接，并贯穿所述罐体3，若干所述粉碎刀片12分别与所述粉碎杆11固定连接，均位于所述粉碎杆11外侧。
58.在本实施方式中，所述驱动电机10通电带动所述粉碎杆11转动，从而带动所述粉碎刀片12转动，搅拌粉碎所述罐体3内的蓝藻样品。
59.进一步的，所述过滤槽6包括槽体13和过滤网14，所述槽体13与所述支架7固定连接，且位于所述罐体3底部，所述过滤网14与所述槽体13固定连接，且位于所述槽体13内。
60.在本实施方式中，所述槽体13对所述过滤网14提供安装条件，所述过滤网14用于过滤所述罐体3排出的所述微囊藻毒素溶剂。
61.进一步的，所述过滤槽6还包括气泵15、吸管16和收集箱17，所述气泵15与所述槽体13固定连接，且位于所述槽体13一侧，所述吸管16与所述气泵15连通，且位于所述气泵15一侧，所述收集箱17与所述槽体13固定连接，且位于所述槽体13一侧。
62.在本实施方式中，所述气泵15运作使得所述吸管16产生负压，从而使得所述吸管16产生吸附力，通过所述吸管16将所述槽体13内所述过滤网14上的蓝藻样品吸取，防止蓝藻样品堆积过多，从而影响所述过滤网14的过滤效果，所述收集箱17用于收集所述吸管16吸取的蓝藻样品残渣。
63.以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。