一种液基细胞制片机的制片方法与流程

1.本发明涉及细胞制片技术领域，具体为一种液基细胞制片机的制片方法。


背景技术：

2.基细胞学检查，是采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断。与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比，液基细胞学检查明显提高了样本的满意度及宫颈异常细胞检出率，液基细胞学检查是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术。
3.细胞制片方法是常用的一种制片方法，但是目前的细胞制片方法制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊，而且样本中常常残有很多的白细胞和红细胞，影响观察。为此提出一种保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整，也能清除多余细胞的制片方法来解决此问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供液基细胞制片机的制片方法，具备保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整，也能清除多余细胞的优点，解决了目前的细胞制片方法制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊，而且样本中常常残有很多的白细胞和红细胞，影响观察的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种液基细胞制片机的制片方法，包括以下步骤：
6.s1：预处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换pbs缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；
7.s2：细胞处理保存：将液基标本加入到细胞保存液中，充分震荡；
8.s3：沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；
9.s4：染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入镁盐缓冲液，置入苏木素染液，置入镁盐缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入巴氏染色液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；
10.s5：离心制片，将染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。
11.优选的，所述在s1中，预处理包括液基样本整理、摆放、编码。
12.优选的，所述在s1中，37℃孵育的时间为8-12min，反应体系切换为生理盐水体系。
13.优选的，所述在s1中，冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水，冲洗时间为3-5min。
14.优选的，所述在s2中，细胞保存液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、n-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份、脯氨酸3份。
15.优选的，所述在s2中，液基标本与细胞保存液加入的体积比为一比三。
16.优选的，所述在s3中，静置时间为3小时。
17.优选的，所述在s4中，置入无水乙醇或异丙醇10-12秒，置入镁盐缓冲液5-8秒，置入苏木素染液3-6分钟，置入镁盐缓冲液0.8-1.2分钟，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置入巴氏染色液2-4分钟，置入无水乙醇或异丙醇9-12秒，重复2遍，置于二甲苯8-12秒，重复2遍。
18.优选的，所述在s5中，离心机进行制片时，离心速度为800r/min，离心时间为6min。
19.优选的，所述在s5中，封片采用的封片试剂为紫外光固化胶。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过设置预处理、加入细胞保存液、沉淀、染色和离心制片的工艺流程，解决了目前的细胞制片方法制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊，而且样本中常常残有很多的白细胞和红细胞，影响观察的问题，该液基细胞制片机的制片方法，具备保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整，也能清除多余细胞的优点。
具体实施方式
21.下面将通过实施例的方式对本发明作更详细的描述，这些实施例仅是举例说明性的而没有任何对本发明范围的限制。
22.本发明提供一种技术方案：一种液基细胞制片机的制片方法，包括以下步骤：
23.s1：预处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换pbs缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；
24.s2：细胞处理保存：将液基标本加入到细胞保存液中，充分震荡；
25.s3：沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；
26.s4：染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入镁盐缓冲液，置入苏木素染液，置入镁盐缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入巴氏染色液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；
27.s5：离心制片，将染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。
28.实施例一：
29.预处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换pbs缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；细胞处理保存：将液基标本加入到细胞保存液中，充分震荡；沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入镁盐缓冲液，置入苏木素染液，置入镁盐缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入巴氏染色液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；离心制片，将染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。
30.实施例二：
31.在实施例一中，再加上下述工序：
32.在s1中，预处理包括液基样本整理、摆放、编码，37℃孵育的时间为8-12min，反应
体系切换为生理盐水体系，冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水，冲洗时间为3-5min，去除红细胞并为后续的操作做好准备。
33.预处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换pbs缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；细胞处理保存：将液基标本加入到细胞保存液中，充分震荡；沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入镁盐缓冲液，置入苏木素染液，置入镁盐缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入巴氏染色液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；离心制片，将染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。
34.实施例三：
35.在实施例二中，再加上下述工序：
36.在s2中，细胞保存液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、n-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份、脯氨酸3份，液基标本与细胞保存液加入的体积比为一比三，能够清除液基标本中的红细胞，及时固定具有诊断价值的细胞的原始形态；对黏液和表皮组织进行软化和降解，使有效细胞从黏液中分离出来。
37.预处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换pbs缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；细胞处理保存：将液基标本加入到细胞保存液中，充分震荡；沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入镁盐缓冲液，置入苏木素染液，置入镁盐缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入巴氏染色液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；离心制片，将染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。
38.实施例四：
39.在实施例三中，再加上下述工序：
40.在s3中，静置时间为3小时，便可以完成沉淀。
41.预处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换pbs缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；细胞处理保存：将液基标本加入到细胞保存液中，充分震荡；沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入镁盐缓冲液，置入苏木素染液，置入镁盐缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入巴氏染色液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；离心制片，将染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。
42.实施例五：
43.在实施例四中，再加上下述工序：
44.在s4中，置入无水乙醇或异丙醇10-12秒，置入镁盐缓冲液5-8秒，置入苏木素染液3-6分钟，置入镁盐缓冲液0.8-1.2分钟，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置入巴氏染色液
2-4分钟，置入无水乙醇或异丙醇9-12秒，重复2遍，置于二甲苯8-12秒，重复2遍，将细胞标记出来，方便后续的探查。
45.预处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换pbs缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；细胞处理保存：将液基标本加入到细胞保存液中，充分震荡；沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入镁盐缓冲液，置入苏木素染液，置入镁盐缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入巴氏染色液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；离心制片，将染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。
46.实施例六：
47.在实施例五中，再加上下述工序：
48.在s5中，离心机进行制片时，离心速度为800r/min，离心时间为6min，封片采用的封片试剂为紫外光固化胶，可以稳定的完成制片作业。
49.预处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换pbs缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；细胞处理保存：将液基标本加入到细胞保存液中，充分震荡；沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入镁盐缓冲液，置入苏木素染液，置入镁盐缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入巴氏染色液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；离心制片，将染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。
50.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。