一种阿西替尼眼内植入剂的制作方法

1.本发明属于药物制剂学领域，涉及一种阿西替尼眼内植入剂和制备方法。


背景技术：

2.眼部疾病主要分为两种类型，前部眼疾病，包括但不限于青光眼、白内障、睑痉挛、结膜病、结膜炎和角膜病等，以及后部眼疾病，包括但不限于视网膜静脉阻塞(rvo)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿(dme)和年龄相关性黄斑变性(wamd和namd)等，这些炎性或退行性眼部疾病已影响了全球数百万人，如果治疗不当，则可能导致永久性视力障碍或失明。
3.全身性皮质类固醇激素疗法已被用于治疗严重的葡萄膜炎，然而全身给药由于血液-视网膜屏障等，仅有2％左右的药物进入眼部发挥作用，需要大剂量频繁给药，造成多种全身不良反应，通常不适用于其他慢性视网膜疾病(cheng c-k et al.(1995).intravitreal sustained-release dexamethasone device in thetreatment ofexperimental uveitis，invest.ophthalmol.vis.sci.36：442-53)。
4.直接眼部给药，例如玻璃体给药可提供最有针对性的药物递送，在限制全身暴露的同时，确保药物的有效浓度。目前已开发玻璃体植入剂，例如已上市的氟轻松玻璃体内植入剂用于治疗感染眼后段的慢性非传染性眼色素层炎。
5.阿西替尼是一种酪氨酸激酶抑制剂，化学名称为n-甲基-2-[3-((e)2-吡啶-2-基-乙烯基)-1h-吲唑-6-基硫基]-苯甲酰胺，具有以下化学结构式(化合物i)：
[0006][0007]
目前，其作为一种口服包衣片剂在美国上市，用于治疗既往接受过一种酪氨酸激酶抑制剂或细胞因子治疗失败的进展期肾细胞癌(rcc)的成人患者。作为一种vegf-r2和pdgfr-b双靶点抑制剂，阿西替尼具有期望的活性以抑制cnv形成(giddabasappa anand,lalwani kush,norberg rand,et al.axitinib inhibits retinal and choroidal neovascularization in in vitro and in vivo models.experimental eye research,2016.145)。
[0008]
专利wo2014204791公开了一种阿西替尼滴眼液，然而其载药量小，且由于药物屏障作用以及泪液稀释等问题，阻碍足量的药物到达治疗部位，需要多次重复给药，顺应性较差。wo2017120600公开了一种阿西替尼眼部注射剂，但是，其并未关注到阿西替尼制剂的稳定性问题。
[0009]
本发明申请人在实验中发现，阿昔替尼对光照高度敏感，在光照条件下，其含量变化差异较大，不利于其药用制剂的稳定性。同时，其低溶解度特性，也降低了阿西替尼药用
制剂的生物利用度。


技术实现要素：

[0010]
为了克服现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种稳定、安全且能实现长时间释放的阿西替尼植入剂，用于治疗包括但不限于青光眼、白内障、视网膜静脉阻塞(rvo)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿(dme)和年龄相关性黄斑变性(wamd和namd)等多种眼部疾病。
[0011]
本发明包括一种阿西替尼眼内植入剂，该植入剂包含阿西替尼和可生物降解聚合物。
[0012]
在某些实施方案中，可生物降解聚合物为聚(乳酸-共-乙醇酸)(plga)共聚物、聚丙交酯(pla)、聚乙交酯(pga)、聚乙二醇(peg)中的一种或多种。在某些实施方案中，可生物降解聚合物为plga，在一个实施方案中，可生物降解聚合物为酯封端plga。
[0013]
在某些实施方案中，酯封端plga的分子量为1.5万-10万。在某些实施方案中，酯封端plga的分子量为1.5万-7万。在一个优选的实施方案中，酯封端plga的分子量为7万。在一个优选的实施方案中，酯封端plga的分子量为1.5万。
[0014]
在某些实施方案中，plga中的乙醇酸和乳酸单体的比例为0:100到100:0，在某些实施方案中，乙醇酸和乳酸单体的比例为15:85到85:15，在某些的实施方案中，乙醇酸和乳酸单体的比例为50:50。
[0015]
在某些实施方案中，植入剂包含以重量计20％-90％的阿昔替尼，在某些实施方案中，植入剂包含以重量计30％-80％阿西替尼，在某些实施方案中，植入剂包含以重量计,30％-70％阿西替尼，在某些实施方案中，植入剂包含以重量计40％-70％阿西替尼，在某些实施方案中，植入剂包含以重量计45％-70％阿西替尼，在某些实施方案中，植入剂包含以重量计40％-50％阿西替尼，在某些实施方案中，植入剂包含以重量计45％-50％阿西替尼，在某些实施方案中，植入剂包含以重量计50％-70％阿西替尼。在某些实施方案中，植入剂包含以重量计30％-80％阿西替尼和20％-70％酯封端plga。在某些实施方案中，眼内植入剂包含以重量计50％-70％阿西替尼和30％-50％酯封端plga。在某些实施方案中，眼内植入剂包含以重量计40％-70％阿西替尼和30％-50％酯封端plga。在某些实施方案中，眼内植入剂包含以重量计40％-50％阿西替尼和40％-50％酯封端plga。在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含以重量计70％的阿昔替尼和30％的酯封端plga。在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含以重量计50％的阿昔替尼和40％的酯封端plga。在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含以重量计50％的阿昔替尼和45％的酯封端plga。在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含以重量计50％的阿昔替尼和50％的酯封端plga。在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含以重量计50％的阿昔替尼和50％的酯封端plga，其中酯封端plga的分子量为7万。在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含以重量计50％的阿昔替尼和50％的酯封端plga，其中酯封端plga的分子量为1.5万。
[0016]
在某些实施方案中，植入剂中包含阿西替尼的重量为200微克到1.5毫克，在某些实施方案中，植入剂中包含阿西替尼的重量为200微克到1毫克，在某些实施方案中，植入剂中包含阿西替尼的重量为1毫克到1.5毫克。在某些实施方案中，眼内植入剂重量为200微克、400微克、500微克、600微克、700微克、1毫克或者150毫克。
[0017]
在某些实施方案中，植入剂中包含释放调节剂，所述释放调节剂包括羟丙基甲基
纤维素、透明质酸及其钠盐、泊洛沙姆、聚醚、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、聚乙二醇、甘露醇、葡萄糖、麦芽糖、氯化钠、氯化钾、碳酸镁、碳酸氢钠、碳酸氢钾或蔗糖中的一种或多种，在某些实施方案中，所述释放调节剂包括聚乙二醇、甘露醇、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种。在某些实施方案中，所述释放调节剂包括甘露醇、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种。
[0018]
在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计0％-10％，在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计2.5％-10％，在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计5％-10％，在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计0％，在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计10％。
[0019]
在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含：以重量计50％的阿昔替尼，40％的酯封端plga,和10％的甘露醇，所述酯封端plga分子量为1.5万或者7万。
[0020]
在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含：以重量计50％的阿昔替尼，40％的酯封端plga,和10％的聚乙烯吡咯烷酮，所述酯封端plga分子量为1.5万或者7万。
[0021]
在某些实施方案中，所述眼内植入剂包含：以重量计50％的阿昔替尼，45％的酯封端plga,和5％的氯化钠，所述酯封端plga分子量为1.5万或者7万。
[0022]
在某些实施方案中，眼内植入剂用于玻璃体给药。
[0023]
本发明进一步提供一种制备上述眼内植入剂的制备方法。在某些实施方案中，所述制备方法采用热熔挤出法，在某些实施方案中，所述制备方法采用单次挤压或者双次挤压法，在某些实施方案中，采用单次挤压法。
[0024]
在一个实施方案中，制备方法可包括如下具体步骤：将阿西替尼粉碎，与聚合物和/或其他任选的赋形剂(例如释放调节剂等)等物理混合，将上述混合物加入双螺杆热熔挤出机挤压，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，挤压，挤压完成后将挤压物切割至所需长度。
[0025]
在一个实施方案中，制备方法可包括如下具体步骤：将阿西替尼和聚合物分别粉碎，与其他任选的赋形剂(例如释放调节剂等)等物理混合，将上述混合物加入双螺杆热熔挤出机挤压，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，挤压，挤压完成后将挤压物切割至所需长度。
[0026]
在一个实施方案中，制备方法包括如下步骤：将阿西替尼与plga和/或释放调节剂物理混合，将上述混合物加入双螺杆热熔挤出机中，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，挤压，将第一次挤压成型的杆状物粉碎，再次加入双螺杆挤压机中，进行第二次挤压成型，挤压完成后将挤压物切割至所需长度。
[0027]
本发明提供了上述植入剂在制备用于眼部疾病的药物的用途，所述眼部疾病的实例包括但不限于青光眼、白内障、视网膜静脉阻塞、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿和年龄相关性黄斑变性。
[0028]
本发明提供一种稳定、安全且能实现至少6个月缓释的阿西替尼植入剂，能有效治疗包括但不限于青光眼、白内障、视网膜静脉阻塞(rvo)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿(dme)和年龄相关性黄斑变性(wamd和namd)等多种眼部疾病，避免了多次重复给药，减少了副作用形成，降低用药成本且满足了药物制剂在生产、贮藏、运输中所需的高度稳定性，具有良好的应用前景，满足未被满足的临床需求。
附图说明
[0029]
图1为处方1到处方3的体外释放图
[0030]
图2为处方22的猴眼内荧光造影检查图(a为造模前，b为造模结束后，c为给药后四周)
具体实施方式
[0031]
现在将在下文中更全面地描述各个方面。然而，这类方面可以按多种不同的形式实施，不应当理解为限于本文提出的实施方式；而是，提供这些实施方式使揭示的内容能够透彻而完整，且能够向本领域技术人员完全地展示其范围。
[0032]
定义
[0033]
本文所使用的下列术语具有如下的含义：
[0034]“药物”，指的是任何用于治疗眼部疾病的物质。
[0035]“眼内”，指的是全部眼部区域涵盖但不限于前房、后房、玻璃体腔、脉络膜、眼周、眼表、脉络膜周隙、结膜、结膜下隙、角膜、角膜内隙、角膜外隙、巩膜等区域。
[0036]“分子量”，指的是相对分子质量的总称，即组成分子的各原子原子量的总和。
[0037]“可生物降解聚合物”，指的是随着时间可在体内转化为无毒降解产物的聚合物，其中需要聚合物随时间的降解能获得根据本发明的药物释放动力学。
[0038]“酯封端”指在聚合物末端具有酯键，通常的酯封端基团包括但不限于烷基酯和芳族酯。
[0039]“眼部疾病”指影响或涉及眼或眼的某个或一部分区域的疾病、不适或疾患，例如视网膜疾病。眼包括眼球和组成眼球的组织和液体、眼周围肌(例如斜肌和直肌)和在眼球内或与眼球邻近的视神经部分。
[0040]“植入剂”，指将药物与辅料制成的供植入体内的无菌制剂，包括皮下植入，玻璃体植入，避孕环植入等多种给药形式。术语“植入剂”可与“植入物”替换使用
[0041]
每当术语“至少”在一系列两个或更多个数值中的第一个数值之前时，术语“至少”适用于该系列数值中的每个数值。
[0042]
本发明提供用于治疗眼部疾病的阿西替尼植入剂和方法。通常，所述植入剂持续向眼部区域释放阿西替尼的时间包括但不限于十二个月、九个月、六个月、三个月或少于三个月。
[0043]
阿西替尼眼内植入物
[0044]
本发明的植入剂包含分散于可生物降解聚合物中的阿西替尼，用于直接放置在眼睛中。在某些实施方案中，阿西替尼占植入物重量的20-90％，在某些实施方案中，阿西替尼占植入物重量的30-80％，在一个实施例中，阿西替尼占植入物重量的50-70％，在一个实施例中，阿西替尼占植入物重量的50％，在一个实施例中，阿西替尼占植入物重量的70％。在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为200微克到1.5毫克，在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为200微克到1毫克，在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为1微克到1.5毫克。在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为1.5毫克，在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为1毫克。在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为200微克。在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为
400微克。在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为500微克。在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为600微克。在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为700微克，在某些实施方案中，植入物中包含阿西替尼的重量为750微克。
[0045]
在某些实施例中，阿西替尼可均匀分散于药物组合物的可生物降解基质中。所用的可生物降解聚合物基质的选择可随所需的释放动力学、患者耐受性、待治疗疾病的性质等因素而变化。所考虑的聚合物特性包括但不限于：给药部位的生物相容性和生物降解性、与阿西替尼的相容性和加工温度。在某些实施方案中，可生物降解聚合物基质占植入物重量的20％-70％，在一个实施例中，可生物降解聚合物基质通常占植入物重量的30％-50％，在一个实施例中，可生物降解聚合物基质通常占植入物重量的50％，在一个实施例中，可生物降解聚合物基质通常占植入物重量的30％，在一个实施例中，可生物降解聚合物基质通常占植入物重量的40％，在一个实施例中，可生物降解聚合物基质通常占植入物重量的45％。。
[0046]
可用的可生物降解聚合物基质包括但不限于由例如有机酯或有机醚的单体制成的聚合物，这种聚合物在降解时产生生理上可接受的降解产物。也可以使用酸酐、酰胺或原酸酯等自身聚合或与其他单体聚合。聚合物通常为缩聚物。聚合物可为交联的或非交联的。
[0047]
对于大部分聚合物，除了碳和氢以外还包括氧和氮，特别是氧，氧可以是含氧基团形式存在，如羟基、羧基、醚基、羰基、酯基等。氮可以酰胺、氨基等形式存在。可用的可生物降解聚合物的实例列表的描述可见于heller，biodegradable polymers in controlled drug delivery,in:“crc critical reviews in therapeutic drug carrier systems”,vol.1,crc press,boca raton,fl(1987)。
[0048]
在一些实施例中，可生物降解聚合物包含以下中的至少一种：聚(乳酸-共-乙醇酸)(plga)、聚丙交酯(pla)、聚乙交酯(pga)、聚乙二醇(peg)、d-交酯、d,l-交酯、l-交酯、d,l-交酯-共-ε-己内酯、l-交酯-共-ε-己内酯、d,l-交酯-共-乙交酯-共-ε-己内酯、聚(d,l-交酯-共-己内酯)、聚(l-交酯-共-己内酯)、聚(d-交酯-共-己内酯)、聚(d,l-交酯)、聚(d-交酯)、聚(l-交酯)、聚(酯酰胺)或其组合。在一些实施例中，可生物降解聚合物包含聚(交酯-共-乙交酯)(plga)。
[0049]
乙醇酸和乳酸的共聚物为特别关注的，乙醇酸和乳酸单体在plga中的百分比可为0-100％、15-85％、25-75％或35-65％。在一个优选的实施例中，使用乙醇酸和乳酸单体比例为50:50的plga。
[0050]
另一方面，发明人发现，使用酯封端的plga作为可生物降解聚合物基质可以增强阿西替尼药物组合物的稳定性，包括但不限于高温高湿下的稳定性、光照稳定性、长期稳定性等。酯封端plga在聚合物末端具有酯键，通常的酯封端基团包括但不限于烷基酯和芳族酯。酯封端plga的分子量在1.5万至10万之间，在一个变化的方案中，酯封端plga的分子量在1.5万至7万之间，在一个实施例中，酯封端plga的分子量为7万。
[0051]
在某些实施方案中，阿西替尼可被粉碎为颗粒或微粉，所述至少90％的阿西替尼颗粒或微粉直径小于或等于20微米，在一个变化的方案中，所述至少90％的阿西替尼颗粒或微粉直径小于或等于15微米。
[0052]
本发明可生物降解的聚合物可任选地被粉碎为颗粒或微粉，关于聚合物颗粒或微粉大小，在一个变化的方案中，至少90％聚合物微粉或颗粒直径为10-100μm，在一个变化的
方案中，至少90％的直径为10-50μm，在一个变化的方案中，至少90％聚合物微粉或颗粒的直径为20-40μm。
[0053]
在某些实施方案中，本发明植入剂还可以任选地和/或优选的包含其他赋形剂，例如可使用释放调节剂。所述释放调节剂可用于加速阿西替尼的释放但同时保持阿西替尼释放曲线平稳，在一个实施方案中，释放调节剂是一种或多种多糖，如纤维素基材料，包括：羟丙基甲基纤维素、透明质酸、泊洛沙姆、聚醚如聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。在一个实施方案中，释放调节剂是成孔剂和/或稳定性增强剂，任选地，为乳糖、甘露醇、葡萄糖、麦芽糖、氯化钠、氯化钾、碳酸镁、碳酸氢钠、碳酸氢钾或蔗糖等。在另一个实施方案中，释放调节剂是上述两种或多种调节剂的混合物。在本发明一个实施方案中，所述药物组合物不含任何释放调节剂。在本发明一个实施方案中，所述释放调节剂为氯化钠，在本发明一个实施方案中，所述释放调节剂为聚乙烯吡咯烷酮，在本发明一个实施方案中，所述释放调节剂为甘露醇。在本发明某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计0％-10％，在本发明某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计2.5％-10％，在本发明某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计5％-10％，在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计0％，在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计10％，在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计5％，在某些实施方案中，所述释放调节剂含量为以重量计2.5％。
[0054]
本文的眼内植入物通常为固体，可被制备成颗粒、片、块、膜、纤维、杆、盘等形状，或可为与选定的植入位置相容的任何大小或形状，只要植入物具有所需的释放动力学并能递送一定量的可治疗眼部疾病的药物。在某些实施方案中，根据植入物中所含的药物剂量、持续给药时间长短和临床给药方式，本发明植入剂优选外观呈长条圆柱形或细棒状，长度0.3毫米-10毫米，直径0.05毫米-1毫米，总重量为100-5000微克，通常为500-1500微克。在某些实施方案中，植入剂长度5毫米，直径0.5毫米，总重量为1000微克。在某些实施方案中，植入剂直径为0.5毫米，长度为5-7毫米，重量约为1.0-1.5毫克。
[0055]
制备方法
[0056]
本发明提供了一种制备包含上述阿西替尼药物组合物的植入物的制备方法，所述制备方法可通过热熔挤出法进行，例如，使用活塞挤压机、单螺杆热熔挤出机或者双螺杆热熔挤出机进行挤压，使阿西替尼均匀分散和分布于可生物降解聚合物中。在某些实施方案中，所述植入物通过单次挤压或者双次挤压进行制备，在优选的实施例中，采用单次挤压进行制备。通常来说，热熔挤出法的使用温度为约25℃到180℃，在某些实施方案中，温度为90℃到180℃，在某些实施方案中，温度为130到180℃，在某些实施方案中，温度为150到180℃，。在一个实施例中，所述的单次挤压的方法可包括如下步骤：将阿西替尼粉碎，与聚合物和/或其他任选的试剂(例如释放调节剂等)等物理混合，将上述混合物加入双螺杆热熔挤出机，逐渐升温，将温度设定在90℃到180℃之间，控制速度在5rpm到30rpm之间，以混合物熔化并充分混合为准，挤压，挤压完成后将挤压物切割至所需长度，在某些实施例中长度为5毫米。
[0057]
在另一个实施例中，制备方法可包括如下步骤：将阿西替尼、聚合物分别粉碎成颗粒或微粉，将上述颗粒或微粉和/或其他任选的试剂(例如释放调节剂等)等物理混合，将上述混合物加入双螺杆热熔挤出机，逐渐升温，将温度设定在90℃到180℃之间，控制速度在
5rpm到30rpm之间，以混合物熔化并充分混合为准，挤压，挤压完成后将挤压物切割至所需长度，在某些实施例中长度为5毫米。
[0058]
在另一个实施例中，制备方法可包括如下步骤：将阿西替尼与plga和/或释放调节剂物理混合，将上述混合物加入双螺杆热熔挤出机中，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，控制速度在5rpm到30rpm之间，以混合物熔化并充分混合为准，挤压，将第一次挤压成型的杆状物粉碎，再次加入双螺杆热熔挤出机中，进行第二次挤压成型，挤压完成后将挤压物切割至所需长度，在某些实施例中长度为5毫米。
[0059]
植入方法
[0060]
可通过各种方法将可生物降解植入物放置到眼中，包括在虹膜上制成切口后通过镊子、注射器、套针或其他类型的给药装置放置。在一些情况下，可在不切口的情况下使用镊子、注射器、套针或其他类型给药装置。在一个优选的变化方案中，可使用手持型给药装置将一个或多个植入物放置入眼内。
[0061]
植入方法通常首先包括使针头进入眼部区域中的目标区域，当进入例如玻璃体腔等目标区域后，推动手持型给药装置上的手柄以使推进器推动柱塞前移。当柱塞前移时，其将植入物推入目标区域。
[0062]
应用
[0063]
本发明的植入剂用于治疗眼部疾病，所述眼部疾病的实例包括但不限于青光眼、白内障、视网膜静脉阻塞、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿和年龄相关性黄斑变性。
[0064]
实施例
[0065]
本发明通过以下实施例对本发明的内容进一步详细说明，并不能用于限制本发明的保护范围。
[0066]
以下具体实施方式中，所使用的药品、试剂及仪器如下：
[0067]
仪器设备：
[0068][0069]
药品、辅料及试剂：
[0070]
名称型号/规格公司阿西替尼药用级浙江九洲药业股份有限公司plgarg502evonik industriesplgarg502hevonik industriesplgarg505evonik industriesplgarg858sevonik industriesplar205sevonik industriespeg3350clariant甲醇hplc级别成都市科隆化学品有限公司乙腈hplc级别成都市科隆化学品有限公司naclar级别sigmasdsar级别sigma甘露醇160c，药用级别roquettepvpva64,药用级别basf
[0071]
体外释放实验
[0072]
释放介质配制方法：释放介质:0.9％nacl 0.3％sds；
[0073]
称取氯化钠9g至1000ml脱气水中，使溶解后加入3g十二烷基硫酸钠后超声30分钟即得。
[0074]
设定恒温振荡器温度为37.0
±
0.5℃，转速为150rpm，运行方式为：回旋；采用10ml西林瓶加入配制好的0.9％nacl 0.3％sds溶液作为释放介质，每瓶加入4ml；将上述含有释放介质的样品加入恒温振荡器中进行温度平衡，待测定液体温度到达37℃后，加入切制好的尺寸为0.5mm直径，5-7mm左右长度的植入制剂，震荡使其沉到液面下，放入恒温振荡器中，保温运行样品，于预定时间取样通过高效液相色谱法(色谱条件如下)测定药液中api的浓度，其中取样方式为将样品瓶中4ml释放液移取3ml，并以3ml新鲜配制的0.9％nacl 0.3％sds溶液作为替换，重新放入设备进行考察；并由此计算样品单次释放量及累计释放量，形成释放行为测定结果。
[0075]
稳定性实验：将样品分别在高温(60℃)、高湿度(92.5％rh)、光照(4500lx
±
500lx)三种条件下裸放5天，10天或者30天，且尽量避免其他条件带来的的交叉影响。
[0076]
含量检测方法：照高效液相色谱法测定
[0077]
色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，以乙腈-水(50：50)为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长330nm，柱温：35℃，
[0078]
实施例一
[0079]
表1 制剂组成
[0080][0081]
制备工艺
[0082]
将阿西替尼加入气流粉碎机粉碎至目标粒径d90≤15微米，再将阿西替尼粉末与辅料物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径模口，加热，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。以上各个处方均采用处方总量为7g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5mm，重量约为1.0mg的植入制剂。
[0083]
释放度考擦：
[0084]
释放度结果见图1。
[0085]
稳定性考察：
[0086]
对处方1、处方2、处方3进行稳定性研究，将其分别在高温(60℃)、高湿度(92.5％rh)、光照(4500lx
±
500lx)三种条件下裸放5-10天，且尽量避免其他条件带来的的交叉影响。稳定性结果如表2-表4：
[0087]
表2 高温下5天稳定性数据
[0088][0089]
表3 高湿下5天稳定性数据
[0090][0091]
表4 光照下5天稳定性数据
[0092][0093]
实施例二
[0094]
表5 制剂组成
[0095][0096]
制备工艺
[0097]
将api加入气流粉碎机粉碎，再将api粉末与辅料物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径圆形模口，温度设定范围在150℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。处方采用处方总量为6g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5-6mm，重量约为1.0-1.5mg的单位植入制剂。
[0098]
稳定性考察：
[0099]
对处方3和处方4进行稳定性研究，将其在光照(4500lx
±
500lx)下裸放5天，且尽量避免其他条件带来的的交叉影响。稳定性结果如表6：
[0100]
表6 光照下5天稳定性数据
[0101][0102]
实施例三
[0103]
表7 制剂组成
[0104][0105]
制备工艺
[0106]
将api加入气流粉碎机粉碎，再将api粉末与辅料物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径圆形模口，温度设定范围在90℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。处方采用处方总量为6g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5-6mm，重量约为1.0-1.5mg的单位植入制剂。
[0107]
稳定性考察：
[0108]
对处方6-8进行稳定性研究，将其在光照(4500lx
±
500lx)三种条件下裸放10天，且尽量避免其他条件带来的的交叉影响。稳定性结果如表8：
[0109]
表8 光照下10天稳定性数据
[0110][0111]
实施例四
[0112]
表9 制剂组成
[0113][0114]
制备工艺
[0115]
将api加入气流粉碎机粉碎，再将api粉末与辅料物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径圆形模口，温度设定范围在130℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。处方采用处方总量为6g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5-6mm，重量约为1.0-1.5mg的单位植入制剂。
[0116]
稳定性考察：
[0117]
对处方9-11进行稳定性研究，将其在光照(4500lx
±
500lx)三种条件下裸放10天，且尽量避免其他条件带来的的交叉影响。稳定性结果如表10：
[0118]
表10 光照下10天稳定性数据
[0119][0120]
实施例五
[0121]
表11 制剂组成
[0122][0123]
制备工艺
[0124]
将api和辅料加入气流粉碎机粉碎，再将api粉末与辅料粉末物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径圆形模口，温度设定范围在150℃-180℃之
间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。处方采用处方总量为6g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5-6mm，重量约为1.0-1.5mg的单位植入制剂。
[0125]
稳定性考察：
[0126]
对处方12-13进行稳定性研究，将其在光照(4500lx
±
500lx)三种条件下裸放10天，且尽量避免其他条件带来的的交叉影响。稳定性结果如表12：
[0127]
表12 光照下10天稳定性数据
[0128][0129]
实施例六
[0130]
表13 制剂处方
[0131]
组分处方14阿西替尼70plga rg858s30
[0132]
制备工艺
[0133]
将阿西替尼加入气流粉碎机粉碎至目标粒径d90≤15微米，再将阿西替尼粉末与辅料物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径模口，加热，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。收集得到的挤出物呈淡黄色杆状物。以上处方采用处方总量为7g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5mm，重量约为1.0mg的植入制剂。
[0134]
实施例七
[0135]
表14 制剂处方
[0136]
[0137][0138]
制备工艺
[0139]
将阿西替尼加入气流粉碎机粉碎至目标粒径d90≤15微米，再将阿西替尼粉末与辅料物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径模口，加热，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。收集得到的挤出物呈淡黄色杆状物。以上处方采用处方总量为7g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5mm，重量为1.0mg的植入制剂。
[0140]
实施例八
[0141]
表15 制剂处方
[0142]
组分处方16阿西替尼50plga rg50550
[0143]
制备工艺
[0144]
将阿西替尼粉末(粒径d90≤76.6μm)与辅料物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径模口，加热，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。收集得到的挤出物呈淡黄色杆状物。以上处方采用处方总量为7g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5mm，重量为1.0mg的植入制剂。
[0145]
实施例九
[0146]
表16 制剂处方
[0147]
组分处方17处方18阿西替尼5050plga rg50250/plga rg505/50
[0148]
制备工艺
[0149]
将阿西替尼加入气流粉碎机粉碎至目标粒径d90≤15微米，将阿西替尼粉末与辅料粉末物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径模口，加热，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。将第一次挤压成型的杆状物研磨粉碎，再次加入双螺杆热熔挤出机中，进行第二次挤出成型，收集挤出物。得到挤出物呈淡黄色杆状物。以上各个处方均采用处方总量为7g的方式，按照上述处方列表比例进行配制，挤出的制剂样品控制直径为0.5mm，长度为5mm，重量为1.0mg的植入制剂。
[0150]
实施例十 猴眼内体内释放实验
[0151]
样品：阿西替尼植入剂，按照处方19、处方20制备(表17)。
[0152]
制备工艺：将阿西替尼加入气流粉碎机粉碎至目标粒径d90≤15微米，再将阿西替尼粉末与辅料物理混合，以一定的速率加入双螺杆热熔挤出机中，采用0.5mm口径模口，加热，逐渐升温，温度设定范围在90℃-180℃之间，加热制备挤出物，以顺利挤出为宜。挤出样品采用履带式转接装置拉伸挤出物，控制速度在5rpm到30rpm之间，用以匹配顺利收集挤出杆状物的速度。将挤出物切割至所需长度。
[0153]
表17
[0154]
处方plga型号载药量(％)19rg5027020rg50570
[0155]
动物：2.5～6岁食蟹猴2只，购自成都华西海圻医药科技有限公司，购入及造模时体重均数2.5～6.0kg，体重个体值在均数
±
20％范围内。
[0156]
动物分组：1只猴给药处方19作为处方19组，另外一只猴给药处方20作为处方20组。
[0157]
实验用药：处方19样品2支(每支制剂尺寸为0.5mm*7mm，总重约1.42mg)；处方20样品2支(每支制剂尺寸为0.5mm*7mm，总重约1.45mg)
[0158]
给药过程：
[0159]
1)将一只猴固定后麻醉，观察无明显生理躯干活动后，采用聚维酮碘溶液对猴眼进行消毒处理；
[0160]
2)通过22g针头填入处方19的1支植入剂的方式，对猴左眼进行玻璃体植入，将植入剂推入猴玻璃体内，植入植入剂；
[0161]
3)同法进行处方20植入剂在另外一只猴的左眼植入植入剂。
[0162]
取样检测：处方19在猴子饲养到1月时，处死猴后，取眼内玻璃体液、晶状体及残余药物，分别标识后，采用高效液相法测定各组织浓度情况。另外处方20猴子饲养至6个月后，处死猴子，取眼内玻璃体液、晶状体及残余药物等，结果如表18-表19。
[0163]
晶状体中药物测定方法：采用高效液相色谱法(中国药典2020版通则0512)测定，配制阿西替尼浓度分别为0.2，1，4，10，14，20ug/ml6个浓度梯度的动物血浆标准溶液，以浓度对峰面积作图绘制标准曲线，按以下公式计算晶状体中阿昔替尼含量。
[0164]
玻璃体液中药物测定方法：采用高效液相色谱法(中国药典2020版通则0512)测定，配制阿西替尼浓度分别为0.2，1，4，10，14，20ug/ml6个浓度梯度的动物血浆标准溶液，以浓度对峰面积作图绘制标准曲线，按以下公式计算玻璃体液中阿昔替尼含量。
[0165]
计算公式：
[0166]
标准曲线：y＝kx b
[0167][0168][0169]
式中：
[0170]
y：标准溶液中阿昔替尼峰面积；
[0171]
x：标准溶液中阿昔替尼浓度；
[0172]
a样：待测样品中阿昔替尼峰面积；
[0173]
v稀释体积：待测玻璃体液稀释倍数。
[0174]
剩余药物含量测定方法：
[0175]
采用高效液相色谱法(中国药典2020版通则0512)测定，以阿昔替尼原料药为对照品，外标法计算剩余药物中阿昔替尼含量。计算公式如下：
[0176][0177]
式中：
[0178]a样
：待测样品中阿昔替尼峰面积；
[0179]c对照
：对照溶液浓度；
[0180]
对照溶液平均峰面积；
[0181]v稀释体积
：待测样品稀释体积；
[0182]m药段重量
：给药制剂重量。
[0183]
表18 处方19在猴眼内1个月样品释放数据
[0184][0185]
表19 处方20在猴眼内6个月样品释放数据
[0186][0187]
实施例十一 药效学实验
[0188]
对上述处方20在猴cnv模型下进行了药效学确认验证，具体如下所示：
[0189]
造模方法：
[0190]
处方20植入剂经眼玻璃体单次注射给药对食蟹猴激光致脉络膜新生血管渗漏和生长的疗效进行研究，试验采用激光围绕食蟹猴眼底黄斑中心凹光凝，诱导眼底脉络膜血管新生，建立与人类脉络膜新生血管类似的动物模型。光凝前、光凝后21、28天进行荧光素眼底血管造影，判定造模情况。
[0191]
分组方法：
[0192]
取1只食蟹猴(雄性)，为处方20组。
[0193]
施药及检测方法：
[0194]
光凝后21天，对处方20组模型双眼玻璃体注射给予处方20一支/眼。将处方20组动物分别于造模前，分组前，给药后第7、14、28天进行眼底彩色照相、荧光素眼底血管造影和oct检查，观察供试品对脉络膜新生血管的抑制情况，给药后29天后每2周进行一次眼底检查，在试验第51天及试验第204天进行大体解剖。
[0195]
实验结果总结如下：
[0196]
(1)一般状况
[0197]
处方20组猴造模开始至试验结束，精神状况良好，自主活动正常，外观无异常。
[0198]
(2)amd造模
[0199]
猴造模前处方20组所有眼球眼底彩色照相显示视网膜及视网膜血管未见异常改变，眼底血管荧光造影检查均未见荧光素渗漏，眼底oct扫描图片均可见视网膜色素层光滑平整，视网膜各层厚度均匀。激光造模后20天(给药前)，处方20组猴双眼眼底彩色照相可见眼底黄斑周围各9个激光斑，黄斑周围均可见有激光斑呈高荧光，明显的荧光素渗漏且渗漏超过光斑边缘。
[0200]
(3)荧光造影检查
[0201]
处方20组猴给药后28天，左眼荧光斑面积缩小，其荧光素渗漏面积减少量为10.821mm2；右眼荧光斑面积在给药后28天缩小，其荧光素渗漏面积减少量为7.193mm2。给药后14、28天4级荧光斑数分别为5、3个，与给药前的12个相比减少。
[0202]
表20：荧光斑面积(mm2)
[0203][0204]
注：荧光素渗漏面积为0代表ffa检查未见荧光素渗漏。
[0205]
(4)眼底检查
[0206]
处方20组猴试验第65、79、93、107、121、135、149、163、177、191、204天，眼底隐约可见视盘；试验第136、149、163、177、191、204天，可见前房细胞。
[0207]
综上所述，在本试验条件下，激光cnv模型的食蟹猴经双眼玻璃体单次注射给予处方20植入剂，经视网膜血管荧光造影、oct检查及眼底检查可见，处方22植入剂对猴cnv具有抑制作用。本技术阿昔替尼植入剂可实现不少于6个月的缓释治疗效果，具有稳定性，期望减少给药次数、延长给药间隔、降低用药成本、提高患者依从性。