深海链霉菌基因工程突变株生产怡莱霉素E的高产培养基及其规模化发酵工艺

技术特征：
1.一种利用深海链霉菌scsio zh16生产怡莱霉素e的高产培养基，其特征在于，包括如下重量份的组分：可溶性淀粉96g-144g、黄豆粉16-24g、玉米浆1.92-2.88g、氯化钠4.8-7.2g、硝酸钠7.68-11.52g、硫酸铵5.12-7.68g、磷酸二氢钾0.192-0.288g、以去离子水溶解，并定容至1000ml，用3m氢氧化钠溶液调节ph至7.2-7.4后，加入1.53-17.67g碳酸钙。2.如权利要求1所述的高产培养基，其特征在于，包括如下重量份的组分：可溶性淀粉120g、黄豆粉23.488g、玉米浆2.4g、氯化钠6g、硝酸钠9.6g、硫酸铵4.677g、磷酸二氢钾0.24g、以去离子水溶解，并定容至1000ml，用3m氢氧化钠溶液调节ph至7.2-7.4后，加入17.670g碳酸钙。3.一种高效生产怡莱霉素e的基因工程菌株s.atratus scsio zh16δilar，其特征在于，其是基于crispr-cas9基因编辑技术，运用基因敲除质粒敲除s.atratus scsio zh16中ilar基因后获得。4.如权利要求3所述的基因工程菌株s.atratus scsio zh16δilar，其特征在于，所述敲除质粒为pkccas9dilar，其是通过酶切连接的方法，将用限制性内切酶spei及hindiii切割后的pkccas9do质粒和ilar基因第190位碱基区域组装有向导rna的上游片段及下游片段连接，然后转化至e.coil dh5α中获得，其中，装有向导rna的上游片段是以链霉菌s.atratus scsio zh16基因组dna为模板通过如seq id no.2所示的引物ur-f和如seq id no.3所示的引物ur-r进行pcr扩增获得长度为1114bp的片段1后，再以片段1为模板通过如seq id no.4所示的引物sgr和如seq id no.3所示的引物ur-r进行pcr扩增后获得的；下游片段是以链霉菌s.atratus scsio zh16基因组dna为模板通过如seq id no.5所示的引物dr-f与如seq id no.6所示的引物dr-r进行pcr扩增后获得的。5.一种高效生产怡莱霉素e的基因工程菌株scsio zh16δilar ilab::erme*，其特征在于，其是在s.atratus scsio zh16δilar基础上通过噬菌体φc31位点整合系统过表达ilab基因获得。6.一种如权利要求5所述的高效生产怡莱霉素e的基因工程菌株scsio zh16δilar ilab::erme*的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、通过酶切连接的方法，将用限制性内切酶ndei及ecori切割后的pib139质粒和外源ilab基因连接转化至e.coil dh5α中获得pib139-ilab重组质粒；步骤二、通过接合转移的方法，将pib139-ilab重组质粒导入e.coil s17-1感受态细胞中构建获得含有pib139-ilab重组质粒的e.coil s17-1；步骤三、将含有pib139-ilab重组质粒的e.coil s17-1与s.atratus scsio zh16δilar菌株接合而成。7.一种如权利要求5所述的高效生产怡莱霉素e的基因工程菌株scsio zh16δilar ilab::erme*在反应器水平上规模化发酵生产怡莱霉素e中的应用。8.一种使用如权利要求1或2所述的高产培养基发酵生产怡莱霉素e的发酵方法，其特征在于，其是将深海链霉菌种子液接种于如权利要求1或2所述的高产培养基中进行发酵，获得怡莱霉素e。9.如权利要求8所述的高产培养基发酵生产怡莱霉素e的发酵方法，其特征在于，所述深海链霉菌为如权利要求5所示的深海链霉菌scsio zh16δilar ilab::erme*或如权利要
求3所述的深海链霉菌s.atratus scsio zh16δilar。10.一种在反应器水平上发酵生产怡莱霉素e的规模化发酵工艺，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将-80℃冷冻保存的如权利要求5所述的深海链霉菌scsio zh16δilar ilab::erme*的孢子液解冻，在固体培养基中划线传代并生长7-14天，培养至产孢子量丰富状态，从固体培养基上挖取大小约0.5cm2的含有大量孢子和菌的琼脂块，接种至种子培养基或摇瓶中并发酵培养72h；步骤二、取所述新鲜种子液，按体积比为10％的接种量接入生物反应器中，所用的培养基为上述所述的高产培养基，以26℃培养8-9天，转速与溶氧联动，维持溶氧不低于20％，获得发酵液；步骤三、取所述发酵液进行高速离心、浸提、纯化，获得怡莱霉素e。

技术总结
本发明公开了一种利用深海链霉菌SCSIO ZH16生产怡莱霉素E的高产培养基，包括如下重量份的组分：可溶性淀粉96g-144g、黄豆粉16-24g、玉米浆1.92-2.88g、氯化钠4.8-7.2g、硝酸钠7.68-11.52g、硫酸铵5.12-7.68g、磷酸二氢钾0.192-0.288g、以去离子水溶解，并定容至1000mL，用3M氢氧化钠溶液调节pH至7.2-7.4后，加入1.53-17.67g碳酸钙。本发明还公开了利用所述的高产培养基发酵生产怡莱霉素E的规模化发酵工艺。本发明的高产培养基，原料易得，价格低廉，有利于推广应用。且可以提高怡莱霉素E的产量。产量。


技术研发人员：安法梁 郑高帆 朱云飞 鞠建华 马俊英
受保护的技术使用者：华东理工大学
技术研发日：2022.01.18
技术公布日：2022/5/30