新型交联海藻酸结构体的制作方法

1.本发明涉及新型交联海藻酸、用于形成该交联海藻酸的海藻酸衍生物等。


背景技术：

2.海藻酸是从巨藻（
レッソニア
）、巨囊藻（
マクロシスティス
）、海带（
ラミナリア
）、泡叶藻（
アスコフィラム
）、丛梗藻（
ダービリア
）、褐藻苷苔(ecklonia cava)、黑海带（
アラメ
）、昆布等褐藻类中提取的生体内吸收性的多糖类，是d-甘露糖醛酸(m)和l-葡糖醛酸(g)这2种糖醛酸聚合成直链状的聚合物。更具体而言，是d-甘露糖醛酸的均聚物组分(mm组分)、l-葡糖醛酸的均聚物组分(gg组分)、和d-甘露糖醛酸与l-葡糖醛酸随机配列而得的组分(m/g组分)任意地键合而得的嵌段共聚物。海藻酸被用于食品、医疗、化妆品、纤维、造纸等广泛领域中。
3.海藻酸的1价盐的海藻酸碱金属盐类(例如，海藻酸钠等)为水溶性，但2价盐的海藻酸碱土金属盐类(例如，海藻酸钙等)通过金属离子交联而凝胶化(不溶化)。即，通过在海藻酸的水溶液中添加包含2价金属离子(例如，钙离子、钡离子等)的水溶液，可得到通过离子交联而形成三维网格结构的海藻酸凝胶(离子交联海藻酸)。利用该性质进行了改变或成形为适于各种用途的海藻酸碱金属盐类的尝试(专利文献1 ~ 3 )。另一方面,已知下述情况：前述海藻酸凝胶例如通过存在乙二胺四乙酸(edta)等螯合剂，从而在凝胶中捕获形成离子交联的2价金属离子，由此容易凝胶结构破坏而恢复为海藻酸。
4.已知记载关于马来酰亚胺基和/或硫醇基作为形成化学交联的反应性基团的多糖类衍生物(专利文献4~10、非专利文献1~2)。
5.现有技术文献专利文献[专利文献1]日本特开2010-209130号公报[专利文献2]日本特开2007-99902号公报[专利文献3]国际公开第2004/099259号[专利文献4]日本特表2003-516519号公报[专利文献5]日本特表2015-502957号公报[专利文献6]fr2967678号[专利文献7]国际公开第2014/058359号[专利文献8]日本特开2010-512433号公报[专利文献9]国际公开第2018/151186号[专利文献10]国际公开第2019/189330号非专利文献[非专利文献1]acs nano (2012), 6(6), 4796-4805.[非专利文献2]biomacromolecules (2019), 20(6), 2350-2359。


技术实现要素：

[0006]
发明要解决的问题在上述情况下，寻求新型交联海藻酸、用于形成该交联海藻酸的海藻酸衍生物、交联海藻酸结构体和它们的制备方法。
[0007]
用于解决问题的手段本发明人等为了解决上述课题而反复进行了深入研究，结果发现，使用导入了规定的交联基的海藻酸衍生物(后述的式(i)和式(ii)所示的海藻酸衍生物)，成形交联海藻酸和交联海藻酸结构体(珠/含色素的珠)，结果该珠具有高稳定性，且具有物质透过性的凝胶等，从而完成了本发明。即，本发明如下所述。
[0008]
在此，提供以下的方式所示的式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物、通过使用它们进行迈克尔加成反应而得到的新型交联海藻酸、和通过对将前述海藻酸衍生物滴加在含有2价金属离子的溶液中而得到的凝胶进行迈克尔加成反应而得到的交联海藻酸结构体、以及前述海藻酸衍生物、交联海藻酸、和交联海藻酸结构体的制备方法。
[0009]
即，例示的方式如以下的〔1〕~〔27〕所述。
[0010]
〔1〕交联海藻酸，其是通过使用下述式(i)所示的海藻酸衍生物和下述式(ii)所示的海藻酸衍生物实施交联反应而得到的，[化1][式(i)中，-l
1-、-nhco-和(alg)与后述第1方式中的定义相同]，[化2][式(ii)中，-l
2-、-nhco-和(alg)与后述第1方式中的定义相同]。
[0011]
〔2〕下述式(i)所示的海藻酸衍生物：[化3][式(i)中，-l
1-、-nhco-和(alg)与后述第1或第2方式中的定义相同]。
[0012]
〔3〕前述〔1〕或〔2〕所述的式(i)所示的海藻酸衍生物，其中，下述式(br-1)：
[化4][式(br-1)中，-l
1-与后述第3方式中的定义相同]所示的反应性基团的导入率为0.5%~30%或1%~30%。
[0013]
〔4〕前述〔1〕或〔2〕所述的式(i)所示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的利用凝胶过滤色谱法测定得到的重均分子量为10万da~300万da。
[0014]
〔5〕下述式(ii-p)所示的海藻酸衍生物：[化5][式(ii-p)中，p1、-l
2-、-nhco-和(alg)与后述第5方式中的定义相同]。
[0015]
〔6-1〕前述〔1〕所述的式(ii)所示的海藻酸衍生物，其中，下述式(br-2)：[化6][式(br-2)中，-l
2-与后述第6-1方式中的定义相同]所示的反应性基团的导入率为1.0%~30%。
[0016]
〔6-2〕前述〔5〕所述的式(ii-p)所示的海藻酸衍生物，其中，下述式(br-2-p)：[化7][式(br-2-p)中，p1、-l
2-与后述第6-2方式中的定义相同]所示的反应性基团的导入率为1.0%~30%。
[0017]
〔7-1〕前述〔1〕所述的式(ii)所示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的利用凝胶过滤色谱法测定得到的重均分子量为10万da~300万da。
[0018]
〔7-2〕前述〔5〕所述的式(ii-p)所示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的利用凝胶过滤色谱法测定得到的重均分子量为10万da~300万da。
[0019]
〔8〕前述〔1〕所述的交联海藻酸，其中，化学交联为下述式(lk-1)的结构：[化8]
[式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-、-l
1-、以及-l
2-与后述第8方式中的定义相同]。
[0020]
〔8-1〕下述式(cal-1)所示的交联海藻酸：[化9][式(cal-1)中，(alg)、-conh-、-nhco-、-l
1-、和-l
2-与前述〔1〕中的定义相同]。
[0021]
〔8-2〕利用前述〔1〕所述的交联反应而得到的下述式(cal-1)所示的交联海藻酸：[化10][式(cal-1)中，(alg)、-conh-、-nhco-、-l
1-、和-l
2-与前述〔1〕中的定义相同]。
[0022]
〔9〕制备前述〔1〕所述的交联海藻酸的方法，其包括将式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液加入式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液而实施交联反应。
[0023]
〔10〕制备前述〔1〕所述的交联海藻酸的方法，其包括将式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液加入式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液而实施交联反应、。
[0024]
〔11〕制备前述〔1〕所述的交联海藻酸的方法，其中，通过使用式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物进行迈克尔加成反应而形成的化学交联为下述式(lk-1)的结构：[化11]
[式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-、-l
1-、以及-l
2-与后述第11方式中的定义相同]。
[0025]
〔12〕交联海藻酸结构体，其是通过对将式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得的凝胶、在式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应从而得到的，作为交联，包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联。
[0026]
〔13〕交联海藻酸结构体，其是通过对将式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得的凝胶、在式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应从而得到的，作为交联，包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联。
[0027]
〔14〕交联海藻酸结构体，其是将含有式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物的组合物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得到的，作为交联，包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联。
[0028]
〔15〕前述〔12〕~〔14〕中任一项所述的交联海藻酸结构体，其中，通过使用式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物进行迈克尔加成反应而形成的化学交联为下述式(lk-1)的结构：[化12][式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-、-l
1-、以及-l
2-与后述第15方式中的定义相同]。
[0029]
〔16〕前述〔12〕~〔15〕中任一项所述的交联海藻酸结构体，其为纤维状结构体、纤维、珠、凝胶或近球形的凝胶。
[0030]
〔17〕医疗用材料，其包含前述〔12〕~〔16〕中任一项所述的交联海藻酸结构体。
[0031]
〔18〕前述〔17〕所述的医疗用材料，其为纤维状结构体、纤维、珠、凝胶或近球形的凝胶。
[0032]
〔19〕组合物，其含有式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物。
[0033]
〔19-1〕组合物，其含有式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii-p)所示的海藻酸衍生物。
[0034]
〔19-2〕组合物，其含有选自式(i)所示的海藻酸衍生物、式(ii)所示的海藻酸衍生物或式(ii-p)所示的海藻酸衍生物中的海藻酸衍生物。
[0035]
〔20〕制备交联海藻酸结构体的方法，其包括将含有式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物的组合物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中。
[0036]
〔21〕制备交联海藻酸结构体的方法，其包括：通过对将式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得的凝胶在式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液
中实施交联反应，从而得到包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联作为交联的交联海藻酸结构体。
[0037]
〔22〕制备交联海藻酸结构体的方法，其包括：通过对将式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得的凝胶在式(i)所示的海藻酸酸衍生物的溶液中实施交联反应，从而得到包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联作为交联的交联海藻酸结构体。
[0038]
〔23〕前述〔20〕~〔22〕中任一项所述的制备交联海藻酸结构体的方法，其中，通过使用式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物进行迈克尔加成反应而形成的化学交联为下述式(lk-1)的结构：[化13][式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-、-l
1-、以及-l
2-与后述第23方式中的定义相同]。
[0039]
〔24〕交联海藻酸结构体，其是对式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物行利用2价金属离子的离子交联和利用迈克尔加成反应的化学交联而得到的，其具有内容物的保持性。
[0040]
〔25〕前述〔1〕或〔8〕所述的交联海藻酸或前述〔12〕~〔16〕和〔24〕中任一项所述的交联海藻酸结构体，其具有生物适应性。
[0041]
〔26a〕前述〔2〕所述的式(i)所示的海藻酸衍生物、前述〔5〕所述的式(ii-p)所示的海藻酸衍生物，其具有生物适应性。
[0042]
〔27〕下述式(am-2)所示的氨基化合物或其制药学上可接受的盐：[化14][式(am-2)中，p1、-l
2-与后述第27方式中的定义相同]。
[0043]
发明效果本发明提供形成了化学交联的新型交联海藻酸、交联海藻酸结构体、可在该交联海藻酸和交联海藻酸结构体的形成中使用的新型海藻酸衍生物、和用于制备该衍生物的中间体(氨基化合物)等。
[0044]
优选的是交联海藻酸和作为原料的海藻酸衍生物对生体生物而言可期待安全性。
[0045]
此外，本发明的海藻酸衍生物的交联反应通过迈克尔加成反应在温和的条件下完成，因此可安全且容易地使用。
[0046]
一些方式的交联海藻酸通过迈克尔加成反应进行化学交联。本发明的交联海藻酸可以组合使用化学交联和进一步的其他交联方法、例如利用钙离子的利用2价金属离子的
交联，调整反应条件，由此其稳定性与非交联海藻酸(例如，海藻酸的1价钠盐)或非化学交联海藻酸(例如，钙离子交联而得的交联海藻酸)相比得到改善。
[0047]
此外，某方式中，可调整交联体的凝胶物性，也可调整物质透过性。
[0048]
本发明至少具有这些效果中1种以上。
附图说明
[0049]
[图1]示出交联海藻酸结构体的凝胶稳定性的评价的图。
[0050]
[图2]示出交联海藻酸结构体的edta下的凝胶的稳定性的评价的图。
[0051]
[图3]示出交联海藻酸结构体的凝胶稳定性的评价的图。
[0052]
[图4]示出交联海藻酸结构体的edta下的凝胶的稳定性的评价的图。
[0053]
[图5]示出交联海藻酸结构体的凝胶透过率的评价的图。
[0054]
[图6]示出交联海藻酸结构体的凝胶透过率的评价的图。
[0055]
[图7]示出交联海藻酸衍生物的凝胶的生物适应性评价的图。
[0056]
[图8]示出交联海藻酸结构体的凝胶稳定性的评价的图。
[0057]
[图9]示出交联海藻酸结构体的edta下的凝胶的稳定性的评价的图。
[0058]
[图10]示出交联海藻酸结构体的凝胶透过率的评价的图。
[0059]
[图11]示出交联海藻酸衍生物的凝胶的生物适应性评价的图。
具体实施方式
[0060]
[具体的方式]更具体而言，可包括以下方式[1]~[24]。
[0061]
[1]第1方式如下所述。交联海藻酸，其是通过使用下述式(i)所示的海藻酸衍生物和下述式(ii)所示的海藻酸衍生物实施交联反应而得到的。
[0062]
[式(i)所示的海藻酸衍生物]下述式(i)所示的海藻酸衍生物：[化15](式(i)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化16]
(式(l1-1)~式(l1-4)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l1-1)~式(l1-4)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l1-3)和式(l1-4)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n为1~18的整数；m为1~9的整数；j为0~9的整数))。
[0063]
[式(ii)所示的海藻酸衍生物]下述式(ii)所示的海藻酸衍生物：[化17](式(ii)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化18]
(式(l2-1)~式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-1)~式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)~式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；m2为1~9的整数；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；j2为0~9的整数))。
[0064]
本说明书中，连接基(-l
1-、-l
2-)的结构式中，用于表示整数的符号中，相同符号多次使用时，分别可以为相同的整数也可以不同。
[0065]
本说明书中，式(i)、式(ii)、式(ii-p)和式(cal-1)中，式中的(alg)所键合的酰胺键(-nh-co-或-co-nh-)的-co-为源自海藻酸的羧基的羰基。
[0066]
以下，对前述方式[1]中的式(i)和式(ii)中的各基团具体地进行说明。关于化合物的说明中，例如“c
1~6”表示构成碳原子数为1至6，除非另有限定，表示直链、支链或环状基团的总碳原子数。对于包含链状基团和环状基团的基团，是指“链和环的总碳原子数”。
[0067]
此外，除非另有限定，对于方式[1]的下位方式中的各基团，也与方式[1]中的各基团的定义相同。
[0068]
本说明书中，除非另有限定，作为“c
6~10
芳基”，可举出例如苯基、1-萘基、2-萘基、
缩合而形成的稠环中，可从部分氢化的稠环除去任意的氢原子而成的1价基团。该任意的氢原子可以为除去稠环内的“杂环基”、“芳基”和“杂芳基”的任意环部的氢原子或者被氢化的环部的氢原子的任意者，例如若为喹啉被部分氢化的四氢喹啉基，可举出5,6,7,8-四氢喹啉基或者1,2,3,4-四氢喹啉基等。这些基团取决于除去任意的氢原子的位置，例如，若为5,6,7,8-四氢喹啉基，可例示出-2-基、-3-基、-4-基、-5-基、-6-基、-7-基、-8-基等，若为1,2,3,4-四氢喹啉基，可例示出例如-1-基、-2-基、-3-基、-4-基、-5-基、-6-基、-7-基、-8-基等。
[0079]
作为“被部分氢化的稠环式杂芳基”，优选环元数为8~12，即，作为“被部分氢化的8~12元稠环式杂芳基”，可举出例如吲哚基、2,3-二氢苯并呋喃基、4,5,6,7-四氢-苯并呋喃基、2,3-二氢苯并[d]噁唑基、2,3-二氢苯并[d]噻唑基、4,5,6,7-四氢苯并[d]噁唑基、4,5,6,7-四氢苯并[d]噻唑基、4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d]咪唑基、苯并[d][1,3]二噁唑基、2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英基、2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂硫杂环己烯基、3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪基、3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噻嗪基、1,2,3,4-四氢喹喔啉基、3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]二氧杂环庚烯基、2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]二氧杂环辛基、n-乙酰基-2,3-二氢苯并[d]噁唑基、n-乙酰基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪基、n-乙酰基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂环庚烯基、n-乙酰基-3,4,5,6-四氢-2h-苯并[b][1,4]噁唑啉基、n-甲烷磺酰基-2,3-二氢苯并[d]噁唑基、n-甲烷磺酰基-3,4-二氢-2h-苯并[b][1,4]噁嗪基、n-甲烷磺酰基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂环庚烯基、n-甲烷磺酰基-3,4,5,6-四氢-2h-苯并[b][1,4]噁唑啉基等。
[0080]
本说明书中，除非另有限定，“非芳族杂环基”是指“3~14元的饱和或不饱和的非芳族杂环基”。
[0081]
本说明书中，除非另有限定，“3~14元的饱和或不饱和的非芳族杂环基”是指可从含有1~4个选自氧原子、硫原子和氮原子中的杂原子的3~14元的饱和或不饱和的杂环除去任意的氢原子而成的1价基团。
[0082]
本说明书中，除非另有限定，作为“非芳族杂环基”，可举出例如氮丙啶基、氮杂环丁烷基、氧杂环戊烷基、噻喃基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、、四氢呋喃基、二氢呋喃基、硫代呋喃基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉烷基、哌啶基、二氢吡喃基、四氢吡喃基(2-四氢-2h-吡喃基、3-四氢-2h-吡喃基、4-四氢-2h-吡喃基(4-四氢-2h-吡喃-4-基))、四氢硫代吡喃基、哌嗪基、二噁烷基、噁唑烷基、异噁唑啉基、1,3-噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑啉基、异噻唑啉基、1、3-噻唑啉基、异噻唑啉基、噁二唑啉基、1、3、4-噁二唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基、奎宁环基、氮杂环庚烷基、二氮环庚烯基或氧杂环庚烷基等基团。
[0083]
本说明书中，除非另有限定，作为“卤素原子”，可举出例如氟原子、氯原子、溴原子或碘原子等。
[0084]
本说明书中，除非另有限定，“卤化c
1~6
烷基”等中的“卤化”是指作为取代基具有几个、优选为1~5个前述“卤素原子”。
[0085]
本说明书中，除非另有限定，作为“c
1~6
烷基”，可举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基或己基等基团。
[0086]
本说明书中，除非另有限定，“卤化c
1~6
烷基”是指前述“c
1~6
烷基”被几个、优选为1~5个卤素原子任意取代而得的基团，可举出例如氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1,1,2,2-四氟乙基或五氟乙基等基团。
[0087]
本说明书中，除非另有限定，“c
1~6
烷氧基”表示前述“c
1~6
烷基”与氧原子键合而得的烷氧基，可举出例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊基氧基或己基氧基等基团。
[0088]
本说明书中，除非另有限定，
“‑
nrarb基”是指“氨基”的氮原子上的二个氢原子被-r
a、-rb取代的基团。
[0089]
本说明书中，除非另有限定，ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团，可举出例如氨基、n-甲基氨基、n-乙基氨基、n,n-二甲基氨基、n-乙酰基氨基、n-甲烷磺酰基氨基或n-乙酰基-n-甲基氨基等基团。
[0090]
本说明书中，除非另有限定，“c
2~7
烷酰基”是指前述“c
1~6
烷基”与羰基键合而得的“c
1~6
烷基羰基”，可举出例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、特戊酰基、己酰基、庚酰基、环丙基羰基、环丁基羰基、环戊基羰基、环己基羰基、环丙基甲基羰基或2-甲基环丙基羰基等基团。
[0091]
本说明书中，除非另有限定，“c
1~6
烷基磺酰基”是指“磺酰基：-so2‑”
取代前述“c
1~6
烷基”而得的基团，可举出例如甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基或异丙基磺酰基等基团。
[0092]
本说明书中，除非另有限定，“环状醚”是指具有环状烃(例如，单环式或多环式的饱和烃环基中碳原子数为3~8的环状烃(c
3~8
环烷基环)的环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、环辛烷等)的碳被氧取代而得的结构的醚，可举出例如环氧丙烷、氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃、1,3-二氧杂环戊烷、1,3-二氧杂环己烷、1,4-二氧杂环己烷、1,3-二氧杂环庚烷、1,4-二氧杂环庚烷、1,4-二噁烷或1,5-二噁烷等环状醚。
[0093]
本说明书中，除非另有限定，“3-n-(c
2~7
烷酰基)噁唑烷环”是指噁唑烷环的nh基的氢原子取代为前述“c
2~7
烷酰基”的环，可举出例如3-n-乙酰基-噁唑烷环、3-n-乙基羰基-噁唑烷环等环。
[0094]
本说明书中，除非另有限定，“4-n-(c
2~7
烷酰基)吗啉环”是指吗啉环的nh基的氢原子取代为前述“c
2~7
烷酰基”的环，可举出例如4-n-乙酰基-吗啉环、4-n-乙基羰基-吗啉环等环。
[0095]
本说明书中，除非另有限定，“4-n-(c
2~7
烷酰基)-1,4-氧杂氮杂环庚烷环”是指1,4-氧杂氮杂环庚烷环的nh基的氢原子取代为前述“c
2~7
烷酰基”的环，可举出例如4-n-乙酰基-1,4-氧杂氮杂环庚烷环、4-n-乙基羰基-1,4-氧杂氮杂环庚烷环等环。
[0096]
本说明书中，除非另有限定，“3-n-(c
1~6
烷基磺酰基)噁唑烷环”是指噁唑烷环的nh基的氢原子取代为前述“c
1~6
烷基磺酰基”的环，可举出例如3-n-甲烷磺酰基-噁唑烷环、3-n-乙基磺酰基-噁唑烷环等环。
[0097]
本说明书中，除非另有限定，“4-n-(c
1~6
烷基磺酰基)吗啉环”是指吗啉环的nh基的氢原子取代为前述“c
1~6
烷基磺酰基”的环，可举出例如4-n-甲烷磺酰基-吗啉环、4-n-乙基磺酰基-吗啉环等环。
[0098]
本说明书中，除非另有限定，“4-n-(c
2~7
烷酰基)-1,4-氧杂氮杂环庚烷环”是指1,4-氧杂氮杂环庚烷环的nh基的氢原子取代为前述“c
1~6
烷基磺酰基”的环，可举出例如4-n-甲烷磺酰基-1,4-氧杂氮杂环庚烷环、4-n-乙基磺酰基-1,4-氧杂氮杂环庚烷环等环。
[0099]
本说明书中，除非另有限定，“羟基c
1~6
烷基”是指前述“c
1~6
烷基”的任意的氢原子
被优选为1~5个羟基任意取代的基团，可举出例如羟基甲基、2-羟基乙基、3-羟基丙基或2,2-二甲基-2-羟基乙基(=2-羟基-2-甲基丙基)等基团。
[0100]
本说明书中，除非另有限定，“硫醇c
1~6
烷基”是指前述“c
1~6
烷基”被几个、优选为1~5个硫醇基(-sh基)任意取代的基团，可举出例如硫醇甲基、2-硫醇乙基或3-硫醇丙基等基团。
[0101]
本说明书中，除非另有限定，“c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基”是指前述“硫醇c
1~6
烷基”的硫醇基(-sh基)的氢原子被“c
1~6
烷基”取代的基团，可举出例如甲基硫基甲基、甲基硫基乙基、乙基硫基甲基或乙基硫基乙基等基团。
[0102]
本说明书中，除非另有限定，
“‑
coo（c
1~6
烷基）”是指前述“羧基”的氢原子被前述c
1~6
烷基取代的基团，可举出例如羧基甲基、羧基乙基、羧基丙基等基团。
[0103]
本说明书中，除非另有限定，“（rarbn）-c
1~6
烷基”是指前述“c
1~6
烷基”的任意的氢原子被
“‑
nrarb基”(本说明书中，ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团。)任意取代的基团，可举出例如氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、氨基丁基、n-甲基氨基甲基、n-乙酰基氨基甲基或n-甲烷磺酰基氨基甲基等基团。
[0104]
本说明书中，除非另有限定，“(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基”是指前述“c
1~6
烷基”的任意的氢原子被“(rarbn)c(=o)-基”(本说明书中中，ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团。)任意取代的基团，可举出例如氨基羰基甲基、氨基羰基乙基、n-甲基氨基羰基甲基、n-乙酰基氨基羰基乙基或n-甲烷磺酰基氨基羰基乙基等基团。
[0105]
本说明书中，除非另有限定，“胍基c
1~6
烷基”是指“c
1~6
烷基”的任意的氢原子取代为“胍基(-nh-c(=nh)-nh2)”而得的基团，可举出例如胍基甲基、胍基乙基或胍基丙基等基团。
[0106]
本说明书中，除非另有限定，“c
7~16
芳烷基”是指前述“c
1~6
烷基”的任意的氢原子被前述“c
6~10
芳基”取代而得的基团，可举出例如苯甲基、苯乙基、二苯基甲基、三苯甲基、联苯基甲基、萘基甲基、茚满基甲基或1,2,3,4-四氢萘-1-基甲基等基团。
[0107]
本说明书中，除非另有限定，“羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基”是指前述“c
7~16
芳烷基”的“c
6~10
芳基”的氢原子被几个、优选为1~5个羟基任意取代的基团，可举出例如2-羟基苯甲基、3-羟基苯甲基或4-羟基苯甲基等基团。
[0108]
本说明书中，除非另有限定，“杂芳基c
1~6
烷基”是指前述“杂芳基”的任意的氢原子被前述“c
1~6
烷基”取代而得的基团，可举出例如2-吡啶基甲基、4-咪唑基甲基或3-吲哚基甲基等基团。
[0109]
本说明书中，除非另有限定，“非芳族杂环”是指“3~14元的饱和或不饱和的非芳族杂环”。
[0110]
本说明书中，除非另有限定，“3~14元的饱和或不饱和的非芳族杂环”是指含有1~4个选自氧原子、硫原子和氮原子中的杂原子的3~14元的饱和或不饱和的杂环。
[0111]
本说明书中，除非另有限定，作为“非芳族杂环”，可举出例如氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯烷、吡唑烷、噁唑烷、噻唑烷异噁唑烷、异噻唑烷、咪唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、氧杂氮杂环庚烷、二氮杂环庚烷、硫氮杂环庚烷、噁唑烷、重氮烷、硫唑烷或噁嗪等环。
[0112]
本说明书中，除非另有限定，“c
3~8
环烷基环”是指碳原子数为3~8的环状的饱和烃
环(包含单环式或多环式)，可举出例如环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷或环辛烷等环。
[0113]
[1-1]前述方式[1]的式(i)中，-l
1-优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化19](式(l1-1)~式(l1-3)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l1-1)~式(l1-3)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l1-3)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n为1~18的整数；m为1~9的整数；j为0~9的整数)；更优选-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化20](式(l1-1)~式(l1-3)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的中的多个基团（例如，1~5个）取代；n为1~9的整数；m为1~5的整数；j为0~5的整数)；进一步优选-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：
[化21](式(l1-1)~式(l1-3)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的多个基团（例如，1~3个）取代；n为1~3的整数；m为1~3的整数；j为0~2的整数)；特别优选-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化22]最优选-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化23]。
[0114]
[1-2]前述方式[1]的式(ii)中，-l
2-优选为选自下述部分结构式的连接基[各式
中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化24](式(l2-3)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-3)、式(l2-5)和式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；j2为0~9的整数)；更优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化25]
(式(l2-3)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；n2为1~9的整数；m3为1~6的整数；n3为1~6的整数；j2为0~6的整数)；进一步优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化26](式(l2-5-1)和式(l2-6-1)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的基团；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数)；特别优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化27]
最优选-l
2-为下述部分结构式[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化28][1-2a]前述方式[1]的式(ii)中，-l
2-优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化29](式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~
5个)取代；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；j2为0~9的整数)；更优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化30](式(l2-4)、和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；n2为1~9的整数；m3为1~6的整数；n3为1~6的整数；j2为0~6的整数)；进一步优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化31](式(l2-4-1)和式(l2-6-1)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的基团；
n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数)；特别优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化32]最优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化33]。
[0115]
[1-2b]前述方式[1]的式(ii)中，-l
2-优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化34]
(式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；j2为0~9的整数)；更优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化35](式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被
选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~9的整数；m3为1~6的整数；n3为1~6的整数；j2为0~6的整数)；进一步优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化36](式(l2-3-1)、式(l2-4-1)、式(l2-5-1)和式(l2-6-1)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的基团；式(l2-3-1)、式(l2-4-1)、式(l2-5-1)和式(l2-6-1)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数)；特别优选为选自下述的连接基[化37]
(式(l2-4-1)、式(l2-6-1)和式(l2-6-1-a)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的基团；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数；k为1~4的整数)；最优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化38]
进一步最优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化39]。
[0116]
[2]第2方式如下所述。下述式(i)所示的海藻酸衍生物：
[化40](式(i)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化41](式(l1-1)~式(l1-4)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l1-1)~式(l1-4)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l1-3)和式(l1-4)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n为1~18的整数；m为1~9的整数；j为0~9的整数))。
[0117]
[2-1]前述方式[2]的式(i)中，-l
1-优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化42](式(l1-1)~式(l1-3)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素
原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l1-1)~式(l1-3)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l1-3)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n为1~18的整数；m为1~9的整数；j为0~9的整数)；更优选-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化43](式(l1-1)~式(l1-3)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的中的多个基团（例如，1~5个）取代；n为1~9的整数；m为1~5的整数；j为0~5的整数)；进一步优选-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化44](式(l1-1)~式(l1-3)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的多个基团（例如，1~3个）取代；n为1~3的整数；
m为1~3的整数；j为0~2的整数)；特别优选-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化45]最优选-l
1-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化46]。
[0118]
[3]第3方式如下所述。前述[2]所述的海藻酸衍生物，其中，式(br-1)：[化47](式(br-1)中，-l
1-与前述方式[1]或[2]中的定义相同)所示的基团的导入率为1%~30%。
[0119]
[4]第4方式如下所述。前述[2]所述的海藻酸衍生物，其中，式(i)所示的海藻酸衍
生物的利用凝胶过滤色谱法测定得到的重均分子量为10万da~300万da。
[0120]
[5]第5方式如下所述。下述式(ii-p)所示的海藻酸衍生物：[化48](式(ii-p)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；p1为氢原子或硫醇基(-sh基)的保护基；-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化49](式(l2-1)~式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-1)~式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)~式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；m2为1~9的整数；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；
j2为0~9的整数))。
[0121]
[5-1]前述方式[5]的式(ii-p)中，优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化50](式(l2-3)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-3)、式(l2-5)和式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；j2为0~9的整数)；更优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化51]
(式(l2-3)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；n2为1~9的整数；m3为1~6的整数；n3为1~6的整数；j2为0~6的整数)；进一步优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化52](式(l2-5-1)和式(l2-6-1)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的基团；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数)；
特别优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化53]最优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化54]。
[0122]
[5-1a]前述方式[5]的式(ii-p)中，-l
2-优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化55](式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷
基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；j2为0~9的整数)；更优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化56](式(l2-4)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；n2为1~9的整数；m3为1~6的整数；n3为1~6的整数；j2为0~6的整数)；进一步优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化57]
(式(l2-4-1)和式(l2-6-1)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的基团；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数)；特别优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化58]最优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化59]。
[0123]
[5-1b]前述方式[5]的式(ii-p)中，-l
2-优选为下述部分结构式[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化60]
(式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；j2为0~9的整数)；更优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化61]
(式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~9的整数；m3为1~6的整数；n3为1~6的整数；j2为0~6的整数)；进一步优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化62](式(l2-3-1)、式(l2-4-1)、式(l2-5-1)和式(l2-6-1)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的基团；式(l2-3-1)、式(l2-4-1)、式(l2-5-1)和式(l2-6-1)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数)；特别优选为选自下述的连接基，[化63]
(式(l2-4-1)、式(l2-6-1)和式(l2-6-1-a)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基或c
7~16
芳烷基中的基团；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数；k为1~4的整数)；最优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化64]
进一步最优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化65]。
[0124]
[5-2]前述方式[5]的式(ii-p)中，优选p1为氢原子、乙酰基或苯甲酰基。
[0125]
[5-2a]前述方式[5]的式(ii-p)中，p1优选为氢原子、乙酰基或苯甲酰基，更优选
为氢原子或苯甲酰基。
[0126]
[6-1]第6-1方式如下所述。前述方式[1]中所述的式(ii)所示的海藻酸衍生物，其中，下述式(br-2)：[化66](式(br-2)中，-l
2-与前述方式[1]或[5]中的定义相同)所示的反应性基团的导入率为1%~30%。
[0127]
[6-2]第6-2方式如下所述。前述[5]所述的式(ii-p)所示的海藻酸衍生物，其中，下述式(br-2-p)：[化67](式(br-2-p)中，p1、-l
2-与前述方式[1]或[5]中的定义相同)所示的反应性基团的导入率为1%~30%。
[0128]
[7-1]第7-1方式如下所述。前述方式[1]所述的式(ii)所示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的利用凝胶过滤色谱法测定得到的重均分子量为10万da~300万da。
[0129]
[7-2]第7-2方式如下所述。前述方式[5]所述的式(ii-p)所示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的利用凝胶过滤色谱法测定得到的重均分子量为10万da~300万da。
[0130]
[8]第8方式如下所述。前述[1]所述的交联海藻酸，前述方式[1]的交联海藻酸中，化学交联为下述式(lk-1)的结构：[化68][式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；-l
1-、和-l
2-与前述方式[1]中的定义相同]。
[0131]
[8-1]第8-1方式如下所述。前述方式[8]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
1-与前述方式[2-1]的定义相同。
[0132]
[8-2]第8-2方式如下所述。前述方式[8]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1]的定义相同。
[0133]
[8-3]第8-3方式如下所述。前述方式[8]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1a]的定义相同。
[0134]
[8-4]第8-4方式如下所述。前述方式[8]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选、最优选或进一步最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1b]的定义相同。
[0135]
[8a]第8a方式如下所述。下述式(cal-1)所示的交联海藻酸：
[化69][式(cal-1)中，-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；(alg)、-l
1-、和-l
2-与前述方式[1]中的定义相同；式(cal-1)中的2个(alg)为源自式(i)的海藻酸衍生物或式(ii)的海藻酸衍生物的海藻酸]。
[0136]
[8a-1]第8a-1方式如下所述。利用前述方式[1]所述的交联反应得到的下述式(cal-1)所示的交联海藻酸：[化70][式(cal-1)中，-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；(alg)、-l
1-、和-l
2-与前述方式[1]中的定义相同；式(cal-1)中的2个(alg)为源自式(i)的海藻酸衍生物或式(ii)的海藻酸衍生物的海藻酸]。
[0137]
[8a-2]第8a-2方式如下所述。前述方式[8a]或[8a-1]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
1-与前述方式[2-1]的定义相同。
[0138]
[8a-3]第8a-3方式如下所述。前述方式[8a]或[8a-1]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1]的定义相同。
[0139]
[8a-4]第8a-4方式如下所述。前述方式[8a]或[8a-1]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1a]的定义相同。
[0140]
[8a-5]第8a-5方式如下所述。前述方式[8a]或[8a-1]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选、最优选或进一步最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1b]的定义相同。
[0141]
[9]第9方式如下所述。制备前述方式[1]所述的交联海藻酸的方法，其包括将式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液在式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应。
[0142]
[10]第10方式如下所述。制备前述方式[1]所述的交联海藻酸的方法，其包括将式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液在式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应。
[0143]
[11]第11方式如下所述。制备前述[1]所述的交联海藻酸的方法，其中，通过使用式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物进行迈克尔加成反应而形成的化学交联为下述式(lk-1)的结构：[化71]
[式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；-l
1-、和-l
2-与前述方式[1]中的定义相同]。
[0144]
[11-1]第11-1方式如下所述。前述方式[11]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
1-与前述方式[2-1]的定义相同。
[0145]
[11-2]第11-2方式如下所述。前述方式[11]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1]的定义相同。
[0146]
[11-3]第11-3方式如下所述。前述方式[11]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1a]的定义相同。
[0147]
[11-4]第11-4方式如下所述。前述方式[11]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选、最优选或进一步最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1b]的定义相同。
[0148]
[12]第12方式如下所述。交联海藻酸结构体，其是通过对将式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得的凝胶、在式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应从而得到的，作为交联，包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联。
[0149]
[13]第13方式如下所述。交联海藻酸结构体，其是通过对将式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得的凝胶、在式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应从而得到的，作为交联，包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联。
[0150]
[14]第14方式如下所述。交联海藻酸结构体，其是将含有式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物的组合物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得到的，作为交联，包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联。
[0151]
[15]第15方式如下所述。前述[12]~[14]中任一项所述的交联海藻酸结构体，其中，通过使用式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物进行迈克尔加成反应而形成的化学交联为下述式(lk-1)的结构：[化72][式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺
键；-l
1-、和-l
2-与前述方式[1]中的定义相同]。
[0152]
[15-1]第15-1方式如下所述。前述方式[15]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
1-与前述方式[2-1]的定义相同。
[0153]
[15-2]第15-2方式如下所述。前述方式[15]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1]的定义相同。
[0154]
[15-3]第15-3方式如下所述。前述方式[15]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1a]的定义相同。
[0155]
[15-4]第15-4方式如下所述。前述方式[15]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选、最优选或进一步最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1b]的定义相同。
[0156]
[16]第16方式如下所述。前述方式[12]~[15]中任一项所述的交联海藻酸结构体，其为纤维状结构体、纤维、珠、凝胶或近球形的凝胶。
[0157]
[17]第17方式如下所述。医疗用材料，其包含前述方式[12]~[16]中任一项所述的交联海藻酸结构体。
[0158]
[18]第18方式如下所述。前述方式[17]所述的医疗用材料，其为纤维状结构体、纤维、珠、凝胶或近球形的凝胶。
[0159]
[19]第19方式如下所述。组合物，其含有式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物。
[0160]
[19-1]第19-1方式如下所述。组合物，其含有式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii-p)所示的海藻酸衍生物。
[0161]
[19-2]第19-2方式如下所述。组合物，其含有选自式(i)所示的海藻酸衍生物、式(ii)所示的海藻酸衍生物或式(ii-p)所示的海藻酸衍生物中任一者的海藻酸衍生物。
[0162]
[20]第20方式如下所述。制备交联海藻酸结构体的方法，其包括将含有式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物的组合物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中。
[0163]
[21]第21方式如下所述。制备交联海藻酸结构体的方法，其包括：通过对将式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得的凝胶在式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应，从而得到包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联作为交联的交联海藻酸结构体。
[0164]
[22]第22方式如下所述。制备交联海藻酸结构体的方法，其包括：通过对将式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中而得的凝胶在式(i)所示的海藻酸酸衍生物的溶液中实施交联反应，从而得到包含利用2价金属离子而部分地形成的离子交联和利用迈克尔加成反应而形成的化学交联作为交联的交联海藻酸结构体。
[0165]
[23]第23方式如下所述。前述方式[20]~[22]中任一项所述的制备交联海藻酸结构体的方法，其中，通过使用式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物进行迈克尔加成反应而形成的化学交联为下述式(lk-1)的结构：[化73]
[式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；-l
1-、和-l
2-与前述方式[1]中的定义相同]。
[0166]
[23-1]第23-1方式如下所述。前述方式[23]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
1-与前述方式[2-1]的定义相同。
[0167]
[23-2]第23-2方式如下所述。前述方式[23]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1]的定义相同。
[0168]
[23-3]第23-3方式如下所述。前述方式[23]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选或最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1a]的定义相同。
[0169]
[23-4]第23-4方式如下所述。前述方式[23]中，优选、更优选、进一步优选、特别优选、最优选或进一步最优选的连接基-l
2-与前述方式[5-1b]的定义相同。
[0170]
[24]第24方式如下所述。交联海藻酸结构体，其是对式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物行利用2价金属离子的离子交联和利用迈克尔加成反应的化学交联而得到的，其具有内容物的保持性。
[0171]
[25]第25方式如下所述。前述方式[1]或[8]所述的交联海藻酸或前述方式[12]~[16]和[24]中任一项所述的交联海藻酸结构体，其具有生物适应性。
[0172]
[26a]第26a方式如下所述。前述方式[2]所述的式(i)所示的海藻酸衍生物、前述方式[5]所述的式(ii-p)所示的海藻酸衍生物，其具有生物适应性。
[0173]
[27]第27方式如下所述。下述式(am-2)所示的氨基化合物或其制药学上可接受的盐：[化74](式(am-2)中，p1、-l
2-与前述方式[5]中的定义相同)。
[0174]
[27-1]前述方式[27]的式(am-2)中，-l
2-优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化75]
(式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的同一亚甲基(-ch
2-)的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环；式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~18的整数；m3为1~10的整数；n3为1~10的整数；j2为0~9的整数)；更优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化76](式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的亚甲基(-ch
2-)的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选
自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代； 式(l2-3)、式(l2-4)、式(l2-5)和式(l2-6)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~9的整数；m3为1~6的整数；n3为1~6的整数；j2为0~6的整数)；进一步优选-l
2-为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化77](式(l2-3-1)、式(l2-4-1)、式(l2-5-1)和式(l2-6-1)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)或c
7~16
芳烷基中的基团；式(l2-3-1)、式(l2-4-1)、式(l2-5-1)和式(l2-6-1)中的-nh-基可以与邻接的碳原子所键合的取代基一起形成非芳族杂环；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数)；特别优选为选自下述的连接基：[化78]
(式(l2-4-1)、式(l2-6-1)和式(l2-6-1-a)中，ra基各自独立地为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)或c
7~16
芳烷基中的基团；n2为1~5的整数；m3为1~3的整数；n3为1~4的整数；j2为0~3的整数；k为1~4的整数)。
[0175]
[27-2]前述方式[27]的式(am-2)中，p1优选为乙酰基或苯甲酰基，更优选为苯甲酰基。
[0176]
[28]第28方式如下所述。下述式(am-2)所示的氨基化合物或其制药学上可接受的盐：[化79][式(am-2)中，-l
2-为选自下述部分结构式的连接基(各式中，两端的虚线外侧不包括在内)：[化80]
(式(l2-a)中，rb为选自氢原子、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基或c
7~16
芳烷基中的基团)；p1为苯甲酰基或乙酰基(其中，-l
2-为式(l2-b)时，p1为苯甲酰基)]。
[0177]
[28-1]前述方式[28]的式(am-2)中，-l
2-优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化81](式(l2-a)中，rb为氢原子、c
1~6
烷基或c
7~16
芳烷基)；更优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化82]
(式(l2-a-1)中，rb为氢原子、c
1~6
烷基或c
7~16
芳烷基)；进一步优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化83](式(l2-a-1)中，rb为氢原子、c
1~6
烷基或c
7~16
芳烷基)；特别优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化84]
(式(l2-a-2)中，rb为氢原子、c
1~6
烷基或c
7~16
芳烷基)；特别优选为选自下述部分结构式的连接基[各式中，两端的虚线外侧不包括在内]：[化85]。
[0178]
[28-2]前述方式[28]的式(am-2)中，p1优选为苯甲酰基。
[0179]
[29]第29方式如下所述。选自下述式的氨基化合物或其制药学上可接受的盐：[化86]
(各式中，bz为苯甲酰基)。
[0180]
[29-1]前述方式[29]的氨基化合物或其制药学上可接受的盐中，氨基化合物优选为选自下述式的氨基化合物：[化87]
(各式中，bz为苯甲酰基)。
[0181]
1.海藻酸本说明书中，记载为海藻酸时，是指选自海藻酸、海藻酸酯、和它们的盐(例如，海藻酸钠)中的至少1种海藻酸(有时称为“海藻酸类”)。所使用的海藻酸可以源自天然，也可以为合成物，优选源自天然。优选使用的海藻酸类为由巨藻、巨囊藻、海带、泡叶藻、丛梗藻、褐藻苷苔、黑海带、昆布等褐藻类提取的生物体内吸收性的多糖类，是d-甘露糖醛酸(m)和l-葡糖醛酸(g)这2种糖醛酸聚合为直链状的聚合物。更具体而言，是d-甘露糖醛酸的均聚物组分(mm组分)、l-葡糖醛酸的均聚物组分(gg组分)、和d-甘露糖醛酸与l-葡糖醛酸随机配列而得的组分(m/g组分)任意地键合而得的嵌段共聚物。
[0182]
本说明书中，海藻酸、海藻酸衍生物、交联海藻酸、和交联海藻酸的分子量中，作为单位，有时记作da(道尔顿)。
[0183]
本说明书中，对于海藻酸，将海藻酸记作(alg)，海藻酸的任意1个羧基记作-cooh，有时将海藻酸记作(alg)-cooh。
[0184]
一些方式中，海藻酸为海藻酸钠。海藻酸钠可使用市售品的海藻酸钠。例如，可使用具有表1所示的物性值的海藻酸。在此，后述实施例10~12中，海藻酸钠使用表1所述的a-2的海藻酸钠(发售方 持田制药株式会社)。各海藻酸钠的1w/w%的水溶液的粘度、重均分子量和m/g比示于表1。此外，后述的实施例1~9中，海藻酸钠使用alg-2(销售方：株式会社
キミカ
)，具有后述的＜分子量的测定＞中记载的重均分子量。
[0185]
[表1]
。
[0186]
前述海藻酸钠a-1、a-2、a-3、b-1、b-2、和b-3的各物性值利用下述各种方法测定。测定方法不限于该方法，根据测定方法不同有时各物性值与上述不同。
[0187]
[海藻酸钠的粘度测定]根据日本药典(第16版)的粘度测定法，使用旋转粘度计法(锥板型旋转粘度计)测定。具体的测定条件如以下所示。试样溶液的制备使用milliq水进行。测定机器使用锥板型旋转粘度计(粘度粘弹性测定装置
レオストレス
rs600(thermo haake gmbh)传感器：35/1)。转速在1w/w%海藻酸钠溶液测定时为1rpm。读取时间设为测定2分钟，从开始1分钟至2分钟的平均值。将3次测定的平均值作为测定值。测定温度设为20℃。
[0188]
[海藻酸钠的重均分子量测定]利用(1)凝胶浸透色谱(gpc)、和(2)gpc-mals2种测定法测定。测定条件如以下所示。
[0189]
[前处理方法]在试样中加入溶离液而溶解后，将0.45μm膜过滤器过滤而得的溶液作为测定溶液。
[0190]
(1)凝胶浸透色谱(gpc)测定[测定条件(相对分子量分布测定)]柱：tskgel gmpw-xl
×
2＋g2500pw-xl(7.8mm i.d.
×
300mm
×
3根)洗脱液：200mm硝酸钠水溶液流量：1.0ml/min浓度：0.05%检测器：ri检测器柱温度：40℃注入量：200μl分子量标准：标准支链淀粉、葡萄糖。
[0191]
(2)gpc-mals测定[折射率增量(dn/dc)测定(测定条件)]差示折射率计：optilab t-rex测定波长：658nm
测定温度：40℃溶剂：200mm硝酸钠水溶液试样浓度：0.5~2.5mg/ml(5浓度)。
[0192]
[测定条件(绝对分子量分布测定)]柱：tskgel gmpw-xl
×
2＋g2500pw-xl(7.8mm i.d.
×
300mm
×
3根)洗脱液：200mm硝酸钠水溶液流量：1.0ml/min浓度：0.05%检测器：ri检测器、光散射检测器(mals)柱温度：40℃注入量：200μl。
[0193]
本说明书中，海藻酸、海藻酸衍生物、交联海藻酸、和交联海藻酸的分子量中，作为单位有时记作da(道尔顿)。
[0194]
海藻酸类的d-甘露糖醛酸和l-葡糖醛酸的构成比(m/g比)主要根据源自海藻等的生物的种类而不同，此外，受到由该生物的生育场所、季节带来的影响，遍及m/g比为约0.2的高g型至m/g比为约5的高m型的高范围。海藻酸类的凝胶化能力和所生成的凝胶的性质根据m/g比而受到影响，一般已知g比率高时凝胶强度变高。除此之外，m/g比对凝胶的硬度、脆度、吸水性、柔软性等也带来影响。所使用的海藻酸类和/或其盐的m/g比通常为0.2~4.0，更优选为0.4~3.0、进一步优选为0.5~3.0。
[0195]
本说明书中，使用“~”表示的数值范围表示包含“~”前后记载的数值作为各自最小值和最大值的范围。
[0196]
本说明书中，所使用的“海藻酸酯”、“海藻酸盐”没有特别限定，为了与交联剂反应，需要不具有阻碍交联反应的官能团。作为海藻酸酯，优选举出海藻酸丙二醇酯等。
[0197]
本说明书中，作为海藻酸盐，可举出例如海藻酸的1价盐、海藻酸的2价盐。作为海藻酸的1价盐，优选举出海藻酸钠、海藻酸钾、海藻酸铵等，更优选为海藻酸钠或海藻酸钾，特别优选为海藻酸钠。作为海藻酸的2价盐，优选举出海藻酸钙、海藻酸镁、海藻酸钡、海藻酸锶等。
[0198]
海藻酸为高分子多糖类，难以正确地确定分子量，一般为重均分子量为1000~1000万、优选为1万~800万、更优选为2万~300万的范围。源自天然物的高分子物质的分子量测定中，已知根据测定方法不同会产生值的差异。
[0199]
例如，通过凝胶浸透色谱(gpc)或凝胶过滤色谱(它们也被统称为尺寸排除色谱)测得的重均分子量优选为10万以上、更优选为50万以上，且优选为500万以下、更优选为300万以下。其优选范围为10万~500万，更优选为15万~300万。
[0200]
此外，例如，根据gpc-mals法，可以测定绝对重均分子量。通过gpc-mals法测得的重均分子量(绝对分子量)优选为1万以上、更优选为5万以上、进一步优选为6万以上，且优选为100万以下、更优选为80万以下、进一步优选为70万以下、特别优选为50万以下。其优选范围为1万~100万，更优选为5万~80万，进一步优选为6万~70万、特别优选为6万~50万。
[0201]
通常利用上述方法计算高分子多糖类的分子量时，会产生10%~20%的测定误差。例如，若为40万，则在32万~48万左右的范围产生值的浮动，若为50万，则在40万~60万左右的
范围产生值的浮动，若为100万，则在80万~120万左右的范围产生值的浮动。
[0202]
海藻酸类的分子量的测定可根据常规方法测定。
[0203]
分子量测定中使用凝胶过滤色谱时的代表性条件如后述本说明书的实施例所述。柱例如可使用superose6 increase10/300 gl柱(ge医疗科学公司)，作为展开溶剂，例如可使用包含0.15mol/l nacl的10mmol/l磷酸缓冲液(ph7.4)，作为分子量标准，可以使用蓝色葡聚糖、甲状腺球蛋白、铁蛋白、醛缩酶、伴白蛋白、卵白蛋白、核糖核酸酶a和抑肽酶。
[0204]
本说明书中使用的海藻酸的粘度没有特别限定，以1w/w%的海藻酸类的水溶液的形式测定粘度时，优选为10mpa
・
s~1000mpa
・
s、更优选为50mpa
・
s~800mpa
・
s。
[0205]
海藻酸的水溶液的粘度的测定可以根据常规方法测定。例如，可以使用旋转粘度计法的同轴双筒型形旋转粘度计、单筒型旋转粘度计（brookfield型粘度计)、圆锥-平板型旋转粘度计(锥板型粘度计)等测定。优选期望根据日本药典(第16版)的粘度测定法。更优选使用锥板型粘度计。
[0206]
海藻酸类由褐藻类提取而得，最初分子量大、粘度高，但通过基于热的干燥、纯化等过程，分子量变小，粘度变低。通过制备步骤的温度等条件管理、作为原料的褐藻类的选择、制备步骤中的分子量的分级等方法可制备分子量不同的海藻酸类。进一步，通过与具有不同分子量或者粘度的其他种类的海藻酸类混合，也能形成具有目标分子量的海藻酸类。
[0207]
本说明书中使用的海藻酸在一些方式中为未经低内毒素处理的海藻酸，或在另一些方式中，为经低内毒素处理的海藻酸。低内毒素是指内毒素水平低至不实质性引发炎症、或发热的程度。更优选期望为经低内毒素处理的海藻酸类。
[0208]
低内毒素处理可以通过公知的方法或基于其的方法进行。例如，可以通过纯化透明质酸钠的菅等的方法(例如，参照日本特开平9-324001号公报等)、纯化β1,3-葡聚糖的吉田等的方法(例如，参照日本特开平8-269102号公报等)、纯化海藻酸钠、结冷胶等生物体高分子盐的威廉等的方法(例如，参照特表2002-530440号公报等)、纯化多糖的詹姆斯等的方法(例如，参照国际公开第93/13136号单行本等)、路易斯等的方法(例如，参照美国专利第5589591号说明书等)、纯化海藻酸盐的赫尔曼弗兰克等的方法(例如，参照appl microbiol biotechnol(1994)40：638-643等)等或基于它们的方法而实施。低内毒素处理不限于它们，可以通过洗涤、基于过滤器(除去内毒素的过滤器、帯电过滤器等)的过滤、超滤、使用柱(内毒素吸附亲和柱、凝胶过滤柱、基于离子交换树脂的柱等)的纯化、在疏水性物质、树脂或活性炭等中的吸附、有机溶剂处理(基于有机溶剂的提取、添加有机溶剂导致的的析出
・
沉降等)、表面活性剂处理(例如，参照日本特开2005-036036号公报等)等公知的方法、或者适当组合它们而实施。在这些处理的步骤中可以适当组合离心分离等公知的方法。期望根据海藻酸的种类而适当选择。
[0209]
内毒素水平可利用公知的方法确认，例如，可以通过利用鲎试剂(lal)的方法、使用
エンドスペシー
(注册商标)es-24s set(生化学工业株式会社)的方法等测定。
[0210]
所使用的内毒素的处理方法没有特别限定，作为其结果，进行利用鲎试剂(lal)的内毒素测定时，海藻酸类的内毒素含量优选为500内毒素单位(eu)/g以下，进一步优选为100eu/g以下，尤其优选为50eu/g以下，特别优选为30eu/g以下。经低内毒素处理的海藻酸钠可通过例如sea matrix(注册商标)(持田制药株式会社)、pronova
tm up lvg(fmcbiopolymer)等市售品而获得。
[0211]
2.海藻酸衍生物本说明书中，可提供新型海藻酸衍生物。本说明书中，作为海藻酸衍生物，在海藻酸的任意的1个以上羧基上介由酰胺键合和2价连接基而导入迈克尔加成反应中的反应性基团或与该反应性基团互补的反应性基团。
[0212]
更具体而言，为下述式(i)所示的海藻酸衍生物和下述式(ii)所示的海藻酸衍生物：[化88][式(i)中，(alg)、-conh-、和-l
1-的定义与前述方式[1]或[2]中的定义相同]，[化89][式(ii)中，(alg)、-conh-、-l
2-的定义与前述方式[1]或[5]中的定义相同]。
[0213]
式(i)所示的海藻酸衍生物的反应性基团具有丙烯酸残基，式(ii)所示的海藻酸衍生物的反应性基团(与式(i)所示的海藻酸衍生物的反应性基团互补的反应性基团)为硫醇残基。丙烯酸残基和硫醇残基这两种反应性基团可通过迈克尔加成反应而容易地形成共价键。
[0214]
丙烯酸残基例如可举出可通过与硫醇残基的迈克尔加成反应而形成加成体的残基，具体而言，可举出丙烯酰基、丙烯酸基、马来酰基、马来酰亚胺基、富马基等，优选为丙烯酰基或马来酰亚胺基，更优选为马来酰亚胺基。
[0215]
作为硫醇残基，例如可举出可通过与丙烯酸残基的迈克尔加成反应而形成加成体的残基，具体而言，可举出苯甲基硫醇基、苯硫酚基、烷基硫醇基(例如，可举出甲烷硫醇残基、乙烷硫醇残基、半胱氨酸残基等硫醇基取代为c
1~6
烷基的残基)等，优选为苯甲基硫醇基或烷基硫醇基，更优选为烷基硫醇基。
[0216]
前述的2价连接基(-l
1-或-l
2-)只要不阻碍反应性基团和与该反应性基团互补的反应性基团的反应，能以反应性基团或互补的反应性基团与海藻酸保持一定的距离的方式使用任意的直链状基。作为2价连接基，例如可举出直链的亚烷基(-(ch2)
n-、n=1~30)(亚烷基中的-ch
2-可以被多个(例如，1~10个或1~5个)-c(=o)-、-conh-、-o-、-nh-、-s-、苯环、杂环(吡啶环、哌啶环、哌嗪环等5~6元芳族杂环或5~6元非芳族杂环)等基团取代；-ch
2-的氢原子可以被选自氧代基(=o)、卤素原子、羟基、c
1~6
烷基、羟基c
1~6
烷基、硫醇c
1~6
烷基、c
1~6
烷基硫基c
1~6
烷基、-cooh基、-coom基(m为li、na、k或1/2ca)、-coo(c
1~6
烷基)基、-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基、(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基(前述-nrarb基、(rarbn)-c
1~6
烷基或(rarbn)c(=o)-c
1~6
烷基中的ra和rb各自独立地为选自氢原子、c
1~6
烷基、c
2~7
烷酰基或c
1~6
烷基磺酰基中的基
团)、胍基c
1~6
烷基、c
7~16
芳烷基、羟基c
6~10
芳基c
1~6
烷基或杂芳基c
1~6
烷基中的多个基团(例如，1~10个或1~5个)取代、同一-ch
2-的2个氢原子被取代为c
1~6
烷基时，该烷基可以相互键合而形成c
3~8
环烷基环)，但不限定于它们。
[0217]
具体而言，关于-l
1-，为前述方式[1]或[2]中记载的2价连接基，关于-l
2-，可举出前述方式[1]或[5]中记载的2价连接基。
[0218]
本说明书中，式(i)中的连接基-l
1-(式(l1-1)~式(l1-4))中，式中存在手性碳时，是指也包含其各光学异构体。
[0219]
例如，式(i)中的-l
1-为下述式(l1-3-1-a)(式中，虚线两外侧不包括在内)时：[化90]是指包含苯甲基所取代的碳的立体构型为s体的下述式(l1-3-1-as)和苯甲基所取代的碳的立体构型为r体的下述式(l1-3-1-ar)所示的连接基(任意式中，虚线两外侧不包括在内)：[化91]此外,同样地，在式(ii)或式(ii-p)中的连接基-l
2-(式(l2-1)~式(l2-6))中，式中存在手性碳时，是指也包含其各光学异构体。
[0220]
例如，式(ii)或式(ii-p)中的-l
2-为式下述(l2-6-1-a)(式中，虚线两外侧不包括在内)时：[化92]
是指包含苯甲基所取代的碳的立体构型为s体的下述式(l2-6-1-as)和苯甲基所取代的碳的立体构型为r体的下述式(l2-6-1-ar)所示的连接基(任意式中，虚线两外侧不包括在内)：[化93]本说明书中的式(i)中，连接基-l
1-中存在手性碳时(为光学活性体时)，合成式(i)所对应的胺衍生物(am-1)的步骤中，能由其消旋体通过通常的光学拆分手段(分离手法)而分离为各光学活性体，并且，在合成式(i)所对应的胺衍生物(am-1)的步骤中，通过使用不对称合成可选择性地合成光学异构体的一者，而能合成各光学活性体。通过使用所得各光学活性的胺衍生物，能合成具有手性碳的(光学活性的)式(i)的海藻酸衍生物。并且，本说明书中的式(ii)或式(ii-p)中，连接基-l
2-中存在手性碳时，在合成式(ii)或式(ii-p)分别对应的胺衍生物(am-2)的步骤中，也与前述的方法同样地，能合成各光学活性体和具有手性碳的(光学活性的)式(ii)或式(ii-p)的海藻酸衍生物。
[0221]
作为前述分离方法，例如可举出分级重结晶法、非对映体法、和手性柱法等光学拆分法。以下对各拆分法进行详述。
[0222]
分级重结晶法：使消旋体与光学拆分剂进行离子键合而得到晶体性非对映体后，将其晶体性非对映体通过分级重结晶法分离，根据需要经过光学拆分剂的除去步骤而得到光学上纯粹的化合物的方法。光学拆分剂例如可举出(＋)-扁桃酸、(-)-扁桃酸、(＋)-酒石酸、(-)-酒石酸、(＋)-1-苯乙胺、(-)-1-苯乙胺、辛可宁、(-)-辛可尼定、和马钱子碱等。
[0223]
非对映体法：使消旋体的混合物与光学拆分剂进行共价键合而得到非对映体的混合物，接着，通过通常的分离手段(例如，分级重结晶、硅胶柱色谱、和hplc等)而分离为光学上纯粹的非对映体，然后，经过基于化学反应(水解反应等)的光学拆分剂的除去步骤而得到光学上纯粹的光学异构体的反应。
[0224]
例如，本说明书中的化合物或中间体化合物具有羟基或氨基(伯、仲)时，通过该化合物与光学活性有机酸(例如，α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酸、和(-)-薄荷氧基乙酸等)的缩合反应，可分别得到酯体或酰胺体的非对映体。并且，本说明书中的化合物具有羧基时，通过该化合物与光学活性胺或光学活性醇的缩合反应，可分别得到酰胺体或酯体的非对映体。分离通过缩合反应而得到的非对映体，使各非对映体进行基于酸或碱的水解反应，从而转换为原化合物的光学上纯粹的光学异构体。
[0225]
手性柱法：通过将消旋体或其盐供于基于手性柱(光学异构体分离用柱)的色谱，而直接进行光学拆分的方法。
[0226]
例如，高效液相色谱法(hplc)时，向手性柱(例如，
ダイセル
公司制chiral系列等)添加光学异构体的混合物，使用溶出溶剂(水、各种缓冲液(例如，磷酸缓冲液)、和有机溶剂(例如，乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈、三氟乙酸、和二乙基胺等)等单独溶剂或它们的混合溶剂)而展开，由此能分离光学异构体。并且，例如，气相色谱法时，使用手性柱(例如，cp-chirasil-dex cb(
ジーエルサイエンス
公司制)等)，能分离光学异构体。并且，例如，超临界流体色谱(sfc)时，向手性柱(例如，
ダイセル
公司制chiral系列等)添加光学异构体的混合物，对溶出溶剂使用二氧化碳和适当的有机溶剂(例如，甲醇、乙醇、异丙醇、三氟乙酸、和二乙基胺等)，能分离光学异构体。
[0227]
作为选择性地合成前述光学异构体的一者的不对称合成，可举出(1)使消旋化合物对映选择性地反应而导入光学活性体的不对称合成反应、(2)由天然存在的光学活性化合物(糖、氨基酸等)选择性地合成非对映体的方法等。
[0228]
本说明书中的作为新型海藻酸衍生物的式(i)和式(ii)所示的海藻酸衍生物例如能通过下述式的方法(详细参照后述一般的制备方法)而制备。
[0229]
[化94]本说明书的式(i)、式(ii)或式(ii-p)所示的海藻酸衍生物的重均分子量为10万da~300万da，优选为30万da~250万da，更优选为50万da~200万da。该两海藻酸衍生物的分子量可利用后述方法求出。
[0230]
本说明书中，式(i)所示的海藻酸衍生物中的下述式(br-1)：[化95]的基团不需要键合于海藻酸构成单元的全部羧基。并且，式(ii)所示的海藻酸衍生物中的下述式(br-2)：[化96]的基团不需要键合于海藻酸构成单元的全部羧基。并且，式(ii-p)所示的海藻酸
衍生物中的下述式(br-2-p)：[化97]的基团不需要键合于海藻酸构成单元的全部羧基。
[0231]
本说明书中，将式(i)的海藻酸衍生物中的式(br-1)的基团称为反应性基团时，式(ii)的海藻酸衍生物中的式(br-2)的基团成为互补的反应性基团。并且，相反，将式(ii)的海藻酸衍生物中的式(br-2)的基团称为反应性基团时，式(i)的海藻酸衍生物中的式(br-1)的基团成为互补的反应性基团。
[0232]
本说明书中，反应性基团或互补的反应性基团的导入率分别例如为0.1%~30%或1%~30%，优选为2%~20%，更优选为3%~10%。
[0233]
前述反应性基团或互补的反应性基团的导入率是在作为海藻酸类的重复单元的糖醛酸单糖单元中将导入了各反应性基团的糖醛酸单糖单元的数以百分数表示的值。本说明书中，只要没有特别限定，海藻酸衍生物(式(i)或式(ii))中的反应性基团或互补的反应性基团的导入率所用的%指mol%。各反应性基团或互补的反应性基团的导入率可利用后述实施例所述的方法求出。
[0234]
式(ii-p)所示的海藻酸衍生物中的硫醇基的保护基p1可适当选择容易进行保护
・
去保护的保护基，例如，可适当选择“有机合成中的保护基(protective groups in organic synthesis 5th edition) 第5版、2014年、john wiley ＆ sons、greene等”等中记载的文献公知的保护基。更具体而言，作为保护基p1，可举出乙酰基、乙基羰基等c
2~6
烷酰基；苯甲酰基、萘基羰基等c
6~10
芳基羰基；三苯甲基(三苯基甲基)、二苯基甲基；甲基氨基羰基、乙基氨基羰基等n-c
1~6
烷基-氨基甲酰基等保护基，但不限定于它们。
[0235]
本说明书中，式(i)中的海藻酸衍生物中的式(br-1)基中的马来酰亚胺基、和式(ii)的海藻酸衍生物中的硫醇(hs-)基可通过迈克尔加成反应形成共价键，从而形成交联。
[0236]
3.海藻酸衍生物的合成方法本说明书中，式(i)所示的海藻酸衍生物可通过式(am-1)所示的胺衍生物(式中-l
1-与前述方式[1]或[2]中的定义相同)或其盐与海藻酸类的任意羧基的缩合反应而制备。并且，式(ii)所示的海藻酸衍生物可通过式(am-2)(式中-l
2-和p1与前述方式[1]或[5]中的定义相同)所示的胺衍生物或其盐与海藻酸类的任意羧基的缩合反应而得到式(ii-p)所示的海藻酸衍生物后，通过保护基p1基的去保护而制备。
[0237]
[化98]
具体而言，使用0.5重量%~1重量%的海藻酸水溶液和式(am-1)或式(am-2)所示的胺衍生物或它们的盐，根据文献公知的方法，例如，“实验化学讲座 第5版 16、有机化合物的合成iv、羧酸和衍生物、酸酰胺和酸酰亚胺、118-154页、氨基酸
・
肽、258-283页、2007年、丸善”等中记载的方法，在1,3-二环己基碳二酰亚胺(dcc)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二酰亚胺盐酸盐(wsc
・
hcl)、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(bop试剂)、双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(bop-cl)、2-氯-1,3-二甲基咪唑啉鎓六氟磷酸盐(cip)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)等缩合剂的存在下，在水、1、4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、甲醇、乙醇等醇系溶剂、n,n-二甲基甲酰胺等极性溶剂或它们的混合溶剂中(其中，混合溶剂为海藻酸不析出程度的混合溶剂)，在碳酸氢钠、碳酸钠等无机碱或三乙基胺、吡啶等有机碱的存在下或非存在下，在0℃至50℃的温度下进行反应，由此可制备式(i)或式(ii-p)所示的海藻酸衍生物。进而，通过将式(ii-p)的保护基p1基去保护，可制备式(ii)所示的海藻酸衍生物。
[0238]
式(ii-p)的p1基为乙酰基、苯甲酰基等c
2~6
烷酰基、苯甲酰基系的保护基时，可利用以下的方法进行去保护。相对于式(ii-p)的海藻酸衍生物的水溶液(例如，0.5重量%~1重量%)中导入的下述式(br-2-p)，[化99]以过量的方式加入氢氧化钠、氢氧化钾等无机碱，在0℃至30℃的反应温度下进行水解，由此可制备式(ii)的海藻酸衍生物的盐。然后，通过中和反应溶液，作为式(ii)的海藻酸衍生物的溶液，可直接用于交联反应。
[0239]
前述式(i)的海藻酸衍生物或式(ii-p)的海藻酸衍生物的制备方法中，式(am-i)或式(am-ii)的胺衍生物的导入率由于考虑该胺的性质等，可通过适当选择下述(i)~(v)等反应条件并组合而调节。为了(i)缩合剂的等量增减、(ii)反应温度的上升
・
下降、(iii)反应时间的延长
・
缩短、(iv)反应基质的海藻酸的浓度的调整、(v)提高式(am-1)或式(am-2)的氨基衍生物的溶解度，添加与水混合的有机溶剂等。
[0240]
以下示出式(am-1)或式(am-2)所示的胺衍生物的制备方法。
[0241]
[制备方法a]＜式(am-1)的胺衍生物和其盐的合成法＞[化100]
[0242]
[制备方法a]＜步骤1＞使用式(iii)[式(iii)的化合物为市售化合物或可由市售化合物利用文献公知的制备方法制备的化合物。式中p2为氨基的保护基，可适当选择]所示的胺和马来酸，根据文献公知的方法、例如“实验化学讲座 第5版 16、有机化合物的合成iv、羧酸和衍生物、酸酰胺和酸酰亚胺、146-154页、2007年、丸善”等中记载的方法，在选自四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷等卤素系溶剂、n,n-二甲基甲酰胺等极性溶剂等的溶剂中，在选自1,3-二环己基碳二酰亚胺(dcc)、1-乙基-3-(3
’‑
二甲基氨基丙基)碳二酰亚胺盐酸盐(wsc
・
hcl)、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(bop试剂)、双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(bop-cl)、2-氯-1,3-二甲基咪唑啉鎓六氟磷酸盐(cip)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)等的缩合剂的存在下，在选自碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾等无机碱或三乙基胺、n,n-二异丙基乙基胺、吡啶等有机碱的碱的存在下或非存在下，在0℃至50℃之间的温度下反应，由此可制备式(iv)的化合物。
[0243]
此外,使马来酸酐与式(iii)所示的胺在甲醇、乙醇等醇系溶剂等溶剂中，在三乙基胺、n,n-二异丙基乙基胺、吡啶等碱存在下或非存在下反应，由此可制备式(iv)的化合物。
[0244]
[制备方法a]＜步骤2＞使用式(iv)所示的化合物和乙酸钠等碱，在选自四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、1,2-二甲氧基乙烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等烃系溶剂、1,2-二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿等卤素系溶剂或乙酸酐等的溶剂中，在40℃至溶剂回流之间的温度下反应，由此可制备式(vi)的化合物。
[0245]
并且，使用[制备方法a]＜步骤1＞中得到的式(iv)的粗化合物和乙酸钠等碱，在乙酸酐中进行反应，由此可制备式(vi)的化合物。
[0246]
并且，使[制备方法a]＜步骤1＞中得到的式(iv)的化合物或粗化合物与适当的缩合剂反应而衍生为活性酯体后，进行环化反应，由此可制备式(vi)的化合物。
the thiol group、457-486页、1999年”等中记载的方法，导入保护基p1，由此可制备式(ix)的化合物。例如，p1为乙酰基时，可使用乙酰基氯；为苯甲酰基时，可使用苯甲酰基氯；为三苯甲基时，可使用三苯基甲基氯；为etnhco-基时，可使用乙基异氰酸酯，由此可导入保护基。
[0254]
并且，使用式(viii)所示的化合物和乙酸、苯甲酸等羧酸衍生物，根据[制备方法a]＜步骤1＞的方法，进行缩合反应，由此可制备式(ix)的化合物。
[0255]
[制备方法b]＜步骤2＞使用式(xi)[式(xi)的化合物为市售化合物或可由市售化合物利用文献公知的制备方法制备的化合物。式中p3为氨基的保护基，可适当选择。x可选自卤素原子，例如氯原子、溴原子、碘原子。]所示的化合物和硫代苯甲酸、硫代乙酸或硫代乙酸钾等酰基硫代衍生物等，在选自乙腈、二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺等的溶剂中，在碳酸钾等碱的存在下或非存在下，进行反应，由此可制备式(ix)的化合物。
[0256]
[制备方法b]＜步骤3＞将式(ix)所示的化合物根据文献公知的方法、例如“有机合成中的保护基(protective groups in organic synthesis 5th edition) 第5版、2014年、john wiley ＆ sons、greene等”等中记载的氨基的保护基的去保护法，根据保护基p3的种类而进行去保护，由此可制备式(am-2)的胺衍生物。
[0257]
式(am-2)的胺衍生物可以根据需要而以盐的形式获得，例如，可举出盐酸盐、三氟乙酸盐等盐。
[0258]
[制备方法b]中的p3表示胺的保护基，例如，可适当选择“有机合成中的保护基(protective groups in organic synthesis 5th edition) 第5版、2014年、john wiley ＆ sons、greene等”等中记载的保护基。作为p3，例如为-c(o)o-tertbu基、-c(o)o-bn基、-c(o)o-ch
2-ch=ch2基、-c(o)ch3基、-c(o)cf3基、-so2ph、-so2phme基、-so2ph(no2)基等保护基，但不限定于它们。
[0259]
p3例如为-c(o)o-tertbu基时，可通过使用酸(氯化氢(可以为包含氯化氢的1,4-二氧杂环己烷、环戊基甲基醚、乙酸乙酯等溶液)、三氟乙酸等)而进行去保护。更详细而言，例如可参照“有机合成中的保护基(protective groups in organic synthesis 5th edition) 第5版、2014年、john wiley ＆ sons、greene等”等文献公知的方法，根据保护基的种类而选择去保护方法。
[0260]
本说明书中，式(am-1)或式(am-2)所示的胺衍生物(氨基化合物)(也包括各式的下位式子)有时形成制药学上可接受的盐(例如，酸加成盐)。作为这样的盐，只要为制药学上可接受的盐则没有特别限定，例如，可举出与无机酸的盐、与有机酸的盐、与酸性氨基酸的盐等。作为与无机酸的盐的适合例，可举出例如与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸等的盐。作为与有机酸的盐的适合例，可举出例如与甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、庚酸、癸酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、乳酸、山梨酸、扁桃酸等脂肪族单羧酸等的盐、与草酸、丙二酸、丁二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、酒石酸等脂肪族二羧酸的盐、与柠檬酸等脂肪族三羧酸的盐、与苯甲酸、水杨酸等芳族单羧酸的盐、与邻苯二甲酸等芳族二羧酸的盐、与肉桂酸、乙醇酸、丙酮酸、肉铁质酸（
オキシル
酸）、水杨酸、n-乙酰基半胱氨酸等有机羧酸的盐、与甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等有机磺酸的盐、与天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸类
的酸加成盐。作为与酸性氨基酸的盐的适合例，可举出例如与天冬氨酸、谷氨酸等的盐。其中，优选为药学上可接受的盐。
[0261]
本说明书中，式(am-1)或式(am-2)所示的胺衍生物(氨基化合物)(也包括各式的下位式子)中取代有羧基时，有时可形成制药学上可接受的盐(例如，碱加成盐)。作为这样的盐，只要为制药学上可接受的盐则没有特别限定，例如，可举出金属盐、铵盐、与有机碱的盐等。作为金属盐的适合例，可举出例如锂盐、钠盐、钾盐、铯盐等碱金属盐、钙盐、镁盐、钡盐等碱土金属盐、铝盐等。作为与有机碱的盐的适合例，可举出例如与甲基胺、乙基胺、叔丁基胺、叔辛基胺、二乙基胺、三甲基胺、三乙基胺、环己基胺、二环己基胺、二苯甲基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、哌啶、吗啉、吡啶、甲基吡啶、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、乙二胺、n-甲基葡糖胺、葡萄糖胺、苯基甘氨酸烷基酯、胍、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、n,n'-二苯甲基乙二胺等的盐。
[0262]
根据常规方法，例如，通过混合本发明的化合物和包含适量的酸或碱的溶液，形成目标的盐后分别滤取、或馏去该混合溶剂，由此可得到前述盐。作为关于盐的总论，已出版handbook of pharmaceutical salts：properties, selection, and use、stahl＆wermuth (wiley-vch、2002)，该书中详细进行了记载。
[0263]
本说明书中，式(am-1)或式(am-2)所示的胺化合物(也包括各式的下位式子)或其盐可以与水、乙醇、甘油等溶剂形成溶剂合物。
[0264]
4.迈克尔加成反应迈克尔加成反应是指如下述反应式所示，共轭有吸电子性基团的缺电子双键(例如，可举出丙烯酰基、肉桂酸基、马来酰亚胺基等)与碳阴离子、有机金属化合物、胺、醇盐、硫代醇盐进行1,4-加成(共轭加成)反应，而形成共价键的反应。
[0265]
[化102](前述反应式中，ewg表示吸电子基团(例如，coor,conhr等)；nu-表示选自碳阴离子(r-m)、r-nh2(或r-nh-)、r-oh(或r-o-)、r-sh(或r-s-)等的亲核性试剂；r表示c
1~6
烷基等各种取代基；r
x
或ry表示氢原子、c
1~6
烷基等各种取代基；m表示li、na等金属)。
[0266]
更具体而言，本说明书中的迈克尔加成反应是使下述反应式所示的马来酰亚胺化合物与硫醇化合物进行1,4-加成(共轭加成)反应而形成共价键的反应。
[0267]
[化103](前述反应式中，r表示c
1~6
烷基等各种取代基)。
[0268]
一些方式中，迈克尔加成反应可不生成不期望的副产物地、短时间、容易且高效地
在海藻酸分子间形成基于共价键的交联。
[0269]
在优选的方式的海藻酸衍生物的交联方法中，该迈克尔加成反应中几乎不形成不期望的副产物。此时，使用了海藻酸的新型方式的生物适应性材料的制作、和海藻酸水凝胶的形成中，可导入各种生物活性分子，并且，通过用于重建外科或用于基因疗法的海藻酸水凝胶，可导入细胞物质。
[0270]
5.交联海藻酸交联海藻酸存在(i)介由2价金属离子键合而得的交联海藻酸、(ii)介由化学键合而得的交联海藻酸、或(iii)介由2价金属离子键合和化学键合二者而得的交联海藻酸。任何交联海藻酸均具有由凝胶状形成半固体、有时可形成海绵样的形态的特性。
[0271]
介由2价金属离子键合而得的交联海藻酸以超高速进行反应，是可逆的，与此相对，介由化学键合而得的交联海藻酸在比较温和的条件下缓慢进行反应，是不可逆的。交联海藻酸的物性可通过例如改变所使用的包含2价金属离子的水溶液(例如，氯化钙水溶液)的浓度、或导入海藻酸的反应性基团的导入率等方法而调整。
[0272]
通过利用前述交联反应，能制成各种海藻酸结构体。例如，利用离子交联反应，可由海藻酸溶液瞬时制成特定的结构体，为了该结构体的结构强化(例如，长期稳定性的获得等)，可利用基于化学键合的交联反应。而且，例如，在介由2价金属离子键合和化学键合二者的交联海藻酸结构体中，利用离子交联获得的2价金属离子可逆地释放，也能制作仅残留基于化学键合的交联的结构体。
[0273]
某方式的交联海藻酸可通过混合前述式(i)和前述式(ii)的海藻酸衍生物进行迈克尔加成反应而得到。
[0274]
本说明书中，实施交联反应是指：通过使用前述式(i)所示的海藻酸衍生物和前述式(ii)所示的海藻酸衍生物进行迈克尔加成反应，从而在该式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物间形成化学交联(化学键合)、或通过使前述式(i)所示的海藻酸衍生物和前述式(ii)所示的海藻酸衍生物与2价金属离子共存，从而在该式(i)所示的海藻酸衍生物和/或式(ii)所示的海藻酸衍生物的各衍生物间形成离子交联(离子键合)或形成基于前述迈克尔加成反应的化学交联和基于2价金属离子的离子交联两者。
[0275]
本说明书中，可在包含式(i)的海藻酸衍生物和式(ii-p)的海藻酸衍生物(其中，式(ii-p)中，p1不是氢原子)的混合溶液或包含式(i)的海藻酸衍生物和式(ii-p)的海藻酸衍生物(其中，式(ii-p)中，p1不是氢原子)的组合物的溶液中，为了对前述式(ii-p)的海藻酸衍生物的保护基p1进行去保护而添加去保护剂(例如，p1为乙酰基、苯甲酰基等酰基系保护基时，可举出氢氧化钠水溶液等碱。去保护剂可根据保护基p1而适当选择)，由此形成化学交联(化学键合)。
[0276]
某方式的交联海藻酸介由化学交联(由马来酰亚胺基与硫醇基形成的基于共价键的交联)而形成三维网目结构。优选的海藻酸衍生物为交联后的交联海藻酸的稳定性得到改善的物质。
[0277]
一些方式的交联海藻酸为第1海藻酸的任意羧基与第2海藻酸的任意羧基间介由下述式(lk-1)进行酰胺键合而得到的交联海藻酸。：[化104]
[式(lk-1)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得的酰胺键；-l
1-、和-l
2-与前述方式[1]中的定义相同]。
[0278]
一些方式中，制备交联海藻酸时的式(i)的海藻酸衍生物与式(ii)的海藻酸衍生物的混合比以式(i)的衍生物与式(ii)衍生物的重量比计，例如为1~1.5：1、优选为1.2~1.5：1或1~1.2：1、更优选为1：1。
[0279]
一些方式中，制备交联海藻酸时的式(ii)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的混合比以式(ii)的衍生物与式(i)衍生物的重量比计，例如为1~4.0：1、优选为1.5~4.0：1或1.2~1.5：1或1~1.2：1、更优选为1：1。
[0280]
一些方式中，制备交联海藻酸时的式(i)的海藻酸衍生物与式(ii)的海藻酸衍生物的混合比更优选以式(i)的海藻酸衍生物与式(ii)的海藻酸衍生物的反应性基团的导入率(mol%)比计，例如为1~1.5：1、优选为1.2~1.5：1或1~1.2：1、更优选为1：1。
[0281]
一些方式中，制备交联海藻酸时的式(ii)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的混合比更优选以式(ii)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的反应性基团的导入率(mol%)比计，例如为1~4.0：1、优选为1.5~4.0：1或1.2~1.5：1或1~1.2：1、更优选为1：1。
[0282]
应予说明，前述混合比中，可分别地将式(i)的海藻酸衍生物取代为式(ii)的海藻酸衍生物、将式(ii)的海藻酸衍生物取代为式(i)的衍生物。
[0283]
交联海藻酸不需要海藻酸的构成单元的全部羧基具有上述式(lk-1)的交联。交联海藻酸中的上述式(lk-1)所示的交联的导入率(也称为交联率)例如为0.1~80%、0.3~60%、0.5~30%或1.0~10%的范围。
[0284]
用于得到交联海藻酸的迈克尔加成反应中的式(i)或式(ii)的海藻酸衍生物的浓度通常为1~500mg/ml，优选为5~100mg/ml的范围。
[0285]
迈克尔加成反应的反应温度通常为外温4~60℃，优选为外温15~40℃的范围。
[0286]
用于形成交联海藻酸(水凝胶)的搅拌时间例如为数秒~24小时、数秒~12小时、数秒~30分钟或数秒~10分钟。
[0287]
迈克尔加成反应中使用的反应溶剂或反应溶液没有特别限定，可举出例如自来水、纯水(例如，蒸馏水、离子交换水、ro水、ro-edi水等)、超纯水、细胞培养用培养基、磷酸缓冲生理食盐水(pbs)、和生理食盐水等，优选为超纯水。
[0288]
一些方式的交联海藻酸为包含基于通过迈克尔加成反应形成的共价键的化学交联、和通过2价金属离子(例如，钙离子等)部分地形成的离子交联作为交联的交联海藻酸。
[0289]
6.组合物可提供包含前述式(i)所示的海藻酸衍生物、和前述式(ii)所示的海藻酸衍生物的组合物。各式中的(alg)、-nhco-、-l
1-、和-l
2-如前述方式所述。
[0290]
[化105]
一些方式的组合物中，式(i)的海藻酸衍生物与式(ii)的海藻酸衍生物的重量比(式(i)的海藻酸衍生物：式(ii)的海藻酸衍生物)例如为1：1~1.5、优选为1：1.2~1.5或1：1~1.2、更优选为1：1。
[0291]
一些方式的组合物中，式(ii)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的重量比(式(ii)的海藻酸衍生物：式(i)的海藻酸衍生物)例如为1：1~1.5、优选为1：1.2~1.5或1：1~1.2、更优选为1：1。
[0292]
一些方式的组合物中，式(i)的海藻酸衍生物与式(ii)的海藻酸衍生物的混合比以式(i)的海藻酸衍生物中的式(br-1)基与式(ii)的海藻酸衍生物的中的式(br-2)基的导入率(mol%)比计，例如为1：1~1.5、优选为1：1.2~1.5或1：1~1.2、更优选为1：1。
[0293]
一些方式的组合物中，式(ii)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的混合比以式(ii)的海藻酸衍生物中的式(br-2)基与式(i)的海藻酸衍生物的中的式(br-1)基的导入率(mol%)比计，例如为1：1~1.5、优选为1：1.2~1.5或1：1~1.2、更优选为1：1。
[0294]
可提供包含前述式(i)所示的海藻酸衍生物、和前述式(ii-p)所示的海藻酸衍生物的组合物。各式中的(alg)、-nhco-、p1、-l
1-、和-l
2-如前述方式所述。
[0295]
[化106]一些方式的组合物中，式(i)的海藻酸衍生物与式(ii-p)的海藻酸衍生物的重量比(式(i)的海藻酸衍生物：式(ii-p)的海藻酸衍生物)例如为1：1~1.5、优选为1：1.2~1.5或1：1~1.2、更优选为1：1。
[0296]
一些方式的组合物中，式(ii-p)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的重量比(式(ii-p)的海藻酸衍生物：式(i)的海藻酸衍生物)例如为1：1~1.5、优选为1：1.2~1.5或1：1~1.2、更优选为1：1。
[0297]
一些方式的组合物中，式(i)的海藻酸衍生物与式(ii-p)的海藻酸衍生物的混合比以式(i)的海藻酸衍生物中的式(br-1)基与式(ii-p)的海藻酸衍生物的中的式(br-2-p)基的导入率(mol%)比计，例如为1：1~1.5、优选为1：1.2~1.5或1：1~1.2、更优选为1：1。
[0298]
一些方式的组合物中，式(ii-p)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的混合比以式(ii-p)的海藻酸衍生物中的式(br-2-p)基与式(i)的海藻酸衍生物的中的式(br-1)基的导入率(mol%)比计，例如为1：1~1.5、优选为1：1.2~1.5或1：1~1.2、更优选为1：1。
[0299]
7.交联海藻酸结构体交联海藻酸结构体可以通过包括对前述海藻酸衍生物实施交联反应的方法而得到。作为特定的交联海藻酸结构体，可举出例如纤维状结构体、纤维、珠、凝胶、近球形的凝胶等。优选交联海藻酸结构体的稳定性得到改善。此外，交联海藻酸结构体可具有在其内部保持内容物的能力(内容物保持性)。交联海藻酸结构体例如可利用以下方法制备，但不限定于它们。
[0300]
[混合法(1)]通过将混合式(i)的海藻酸衍生物和式(ii)的海藻酸衍生物而得到的海藻酸衍生物的混合溶液或包含式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii)所示的海藻酸衍生物的组合物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中，从而可得到形成化学交联(通过迈克尔加成反应形成的基于共价键的交联)和离子交联(通过2价金属离子部分地形成的交联)的特定的结构体即交联海藻酸结构体。
[0301]
[混合法(2)]在混合式(i)的海藻酸衍生物和式(ii-p)的海藻酸衍生物(其中，式(ii-p)中，p1不是氢原子)而得到的海藻酸衍生物的混合溶液或包含式(i)所示的海藻酸衍生物和式(ii-p)所示的海藻酸衍生物(其中，式(ii-p)中，p1不是氢原子)的组合物的溶液中，为了将前述式(ii-p)的海藻酸衍生物的保护基p1去保护而添加去保护剂(例如，p1为乙酰基、苯甲酰基等酰基系保护基时，可举出氢氧化钠水溶液等碱。去保护剂可根据保护基p1而适当选择)后，滴加在包含2价金属离子的溶液中，从而可得到形成化学交联(通过迈克尔加成反应形成的基于共价键的交联)和离子交联(通过2价金属离子部分地形成的交联)的特定的结构体即交联海藻酸结构体。
[0302]
[涂布法(1)]将包含式(i)的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中等而得到部分地进行交联的特定结构体。通过将前述得到的例如凝胶等结构体添加在前述包含式(ii)的海藻酸衍生物的溶液中，通过在前述结构体的表面等进一步实施交联反应(迈克尔加成反应)，由此可得到交联海藻酸结构体。应予说明，该方法也可分别将式(i)的海藻酸衍生物替换为式(ii)的海藻酸衍生物、将式(ii)的海藻酸衍生物替换为式(i)的海藻酸衍生物而实施。
[0303]
[涂布法(2)]将包含式(i)的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中等而得到部分地进行交联的特定结构体。通过将前述得到的例如凝胶等结构体添加在前述包含式(ii-p)的海藻酸衍生物(其中，式(ii-p)中，p1不是氢原子)的溶液中，进而为了将前述式(ii-p)所示的海藻酸衍生物的保护基p1去保护而添加去保护剂(例如，p1为乙酰基、苯甲酰基等酰基系保护基时，可举出氢氧化钠水溶液等碱。去保护剂可根据保护基p1而适当选择)，从而在前述结构体的表面等进一步实施交联反应(迈克尔加成反应)，由此可形成交联海藻酸结构体。
[0304]
并且，将包含式(ii-p)的海藻酸衍生物(其中，式(ii-p)中，p1不是氢原子)的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中等而得到部分地进行交联的特定结构体。通过将前述得到的例如凝胶等结构体添加在前述包含式(i)的海藻酸衍生物溶液中，进而为了将前述式
(ii-p)所示的海藻酸衍生物的保护基p1去保护而添加去保护剂（例如，p1为乙酰基、苯甲酰基等酰基系保护基时，可举出氢氧化钠水溶液等碱。去保护剂可根据保护基p1而适当选择)，从而在前述结构体的表面等进一步实施交联反应(迈克尔加成反应)，由此可形成交联海藻酸结构体。
[0305]
作为前述方法中使用的2价金属离子，没有特别限定，例如，可举出钙离子、镁离子、钡离子、锶离子、锌离子等，优选为钙离子。
[0306]
作为前述方法中使用的包含钙离子溶液，没有特别限定，例如，可举出氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液等水溶液，优选为氯化钙水溶液。
[0307]
前述方法中使用的包含钙离子的溶液的钙离子浓度没有特别限定，例如，可举出1mm~1m，优选为5mm~500mm，更优选为10mm~300mm。
[0308]
前述方法中使用的溶剂或溶液也没有特别限定，例如，可举出自来水、纯水(例如，蒸馏水、离子交换水、ro水、ro-edi水等)、超纯水、细胞培养用培养基、磷酸缓冲生理食盐水(pbs)、和生理食盐水等，优选为超纯水。
[0309]
海藻酸凝胶的物性可通过硬度、弹性、排斥力、断裂力、破裂时应力等物性值而调节。
[0310]
8.海藻酸衍生物、交联海藻酸、交联海藻酸结构体的生物适应性本说明书中，海藻酸衍生物、交联海藻酸、交联海藻酸结构体具有生物适应性。本说明书中，生物适应性是指将不引起生物体用材料(在此，是指导入了式(i)或式(ii)所示的海藻酸衍生物、和使用该两种海藻酸衍生物制备的交联海藻酸或交联海藻酸结构体)与生物体间的相互作用、与前述生物体用材料邻接的组织的局部反应、或全身反应等反应的性质称为具有生物适应性(biocompatibility)。
[0311]
本说明书中，关于海藻酸衍生物、交联海藻酸或交联海藻酸结构体的生物适应性，可利用后述关于生物适应性的实施例确认。
[0312]
9.交联海藻酸结构体的稳定性交联海藻酸结构体的稳定性可以通过例如测定凝胶稳定性确认、透过性可以通过测定凝胶透过率等确认。
[0313]
[凝胶稳定性的测定法]在装入容器的交联海藻酸结构体凝胶中添加磷酸缓冲生理食盐水(pbs)，测定pbs中泄漏的海藻酸的浓度(μg/ml)。将所测定的海藻酸浓度除以通过分解交联海藻酸结构体凝胶而得的总海藻酸浓度而得到的值以百分值表示的值作为崩解率。凝胶稳定性具体而言可利用后述实施例所述的方法求出。
[0314]
本说明书中，交联海藻酸结构体的凝胶崩解率优选为0%~90%，更优选为0%~70%，进一步优选为0%~50%。交联海藻酸结构体的稳定性是指水溶液中泄漏的海藻酸的浓度越低、即凝胶崩解率越低，则稳定性越高。
[0315]
[凝胶透过率的测定法]制备内包异硫氰酸荧光素-葡聚糖的交联海藻酸结构体凝胶，在装入容器的前述凝胶中添加生理食盐水，测定生理食盐水中泄漏的葡聚糖浓度。将所测定的葡聚糖的浓度除以通过分解内包异硫氰酸荧光素-葡聚糖的交联海藻酸结构体凝胶而得的总葡聚糖浓度而得到的值以百分数表示，得到的值为凝胶透过率。凝胶透过率具体而言可利用后述实施
例所述的方法求出。
[0316]
对于交联海藻酸的生理食盐水添加24小时后的凝胶透过率，例如内包分子量200万的葡聚糖时，优选为0%~90%，更优选为0%~70%，进一步优选为0%~50%。此外，内包分子量15万的葡聚糖时，例如，若该交联海藻酸结构体凝胶的使用目的为蛋白质、抗体的释放
・
产生，则优选为1%~100%，更优选为10%~100%，进一步优选为30%~100%。此外，若使用目的为免疫屏障，则优选为0%~90%，更优选为0%~70%，进一步优选为0%~50%。
[0317]
对于交联海藻酸结构体的透过性而言，透过率越低，表示内容物、凝胶外物质的透过性越低，透过率越高，表示内容物、凝胶外物质的透过性越高。
[0318]
凝胶的透过率可以根据所使用的海藻酸的分子量、浓度、导入海藻酸的交联基的种类、导入率、凝胶化中使用的2价金属离子的种类、浓度、或它们的组合而调整。
[0319]
[内包内容物的交联海藻酸结构体凝胶的制备方法]例如，作为内容物内包异硫氰酸荧光素-葡聚糖的交联海藻酸结构体凝胶可利用以下的方法制备。
[0320]
(1)混合式(i)所示的海藻酸衍生物的溶液和异硫氰酸荧光素-葡聚糖溶液。
[0321]
(2)在(1)中得到的混合溶液中混合式(ii)所示的海藻酸衍生物的溶液。
[0322]
(将(1)的式(i)变更为式(ii)时，(2)的式(ii)变更为式(i))(3)将(2)中得到的混合溶液滴加在包含钙离子的溶液中而得到的凝胶在溶液中形成化学交联和离子交联，由此可得到内包异硫氰酸荧光素的葡聚糖的交联海藻酸结构体凝胶。
[0323]
10.海藻酸衍生物、交联海藻酸结构体的用途海藻酸衍生物在食品、医疗、化妆品、纤维、制纸等广泛的领域中可代替以往的海藻酸使用。作为海藻酸衍生物或交联海藻酸结构体的优选用途，具体而言，可举出创伤包覆材料、术后防粘连材料、药剂缓释用基材、细胞培养用基材、细胞移植用基材等医疗用材料。作为基于细胞移植的治疗对象疾病，可举出糖尿病、帕金森病、血友病等。
[0324]
作为用作医疗用材料时的交联海藻酸结构体的形状，可举出纤维状结构体、纤维、珠、凝胶、近球形的凝胶等，优选为珠、凝胶或近球形的凝胶，更优选为近球形的凝胶。
[0325]
应予说明，本说明书中引用的全部发行物、例如现有技术文献、和公开公报、专利公报和其他专利文献作为参照组合入本说明书中。
[0326]
并且，本发明的目的、特征、优点及其构思通过本说明书的记载，对于本领域技术人员来说是显而易见的，根据本说明书的记载，只要是本领域技术人员，就能够容易地实施本发明。用于实施发明的最佳方式以及具体的实施例等表示本发明的优选实施方式，是为了例示或者说明而示出的，本发明不限于它们。对于本领域技术人员来说显而易见的是，在本说明书公开的本发明的意图和范围内，基于本说明书的记载，可以进行各种修改。
实施例
[0327]
核磁共振光谱(nmr)的测定使用jeol jnm-ecx400 ft-nmr(日本电子)。液相色谱-质谱(lc-mass)使用以下的方法测定。使用waters aquity uplc系统和beh c18柱(2.1mm
×
50mm、1.7μm)(waters)，使用乙腈：0.05%三氟乙酸水溶液=5：95(0分钟)~95：5(1.0分钟)~95：5(1.6分钟)~5：95(2.0分钟)的流动相和梯度条件。
[0328]1h-nmr数据中，nmr信号模式中，s表示单重态，d表示双重态，t表示三重态，q表示四重态，m表示多重态，br表示宽范围，j表示偶联常数，hz表示赫兹、cdcl3表示氘代氯仿、dmso-d6表示氘代二甲基亚砜、d2o表示氘代水，cd3od表示氘代甲醇。1h-nmr数据中，关于羟基(oh)、氨基(nh2)、羧基(cooh)的质子等由于为宽带而无法确认的信号，未记载数据。lc-mass数据中，m表示分子量，[m h] 表示分子离子峰。
[0329]
实施例中的“室温”通常表示约0℃至约35℃的温度。
[0330]
实施例中的“导入率”是在d2o中进行1h-nmr测定，根据反应性取代基的马来酰亚胺基或芳环与环海藻酸的质子积分值的比，以“mol%(nmr积分比)”记载。
[0331]
(实施例1)导入2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基氨基的海藻酸(al-ex-1)的合成[化107]＜步骤1＞(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(ex1-im-1)的合成将马来酸酐(600 mg)悬浮于乙醇(6.0 ml)，在冰水冷却下加入(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁基酯(1.03 g)和三乙基胺(0.90 ml)的乙醇(3.0 ml)溶液。将反应液在室温下搅拌2小时后，减压馏去乙醇。将残渣溶解于乙酸酐(6.0 ml)，加入乙酸钠(502 mg)，在70℃下搅拌1.5小时。加入乙酸乙酯(25 ml)和水(10 ml)，分液。将有机层依次用饱和小苏打水(10 ml、3次)、饱和食盐水(10 ml)洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压馏去溶剂。将残渣用硅胶柱色谱(庚烷~50%乙酸乙酯/庚烷)纯化。将所得油状物用庚烷(20 ml)磨碎。滤取固体，用庚烷洗涤后，减压干燥，以白色固体形式得到标题化合物(1.01 g)。
[0332]
＜步骤2＞1-(2-氨基乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮 盐酸盐(ex1-im-2)的合成在(实施例1)＜步骤1＞中得到的化合物(500 mg)中加入4当量浓度-氯化氢乙酸乙酯溶液(5.0 ml)，在室温下搅拌1.5小时。加入乙酸乙酯(5.0 ml)后，滤取沉淀，用乙酸乙酯洗涤。将所得吸湿性固体悬浮于乙酸乙酯，减压馏去乙酸乙酯后，减压干燥，以白色固体形式得到标题化合物(328 mg)。
[0333]
＜步骤3＞导入2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基氨基的海藻酸(al-ex-1)的合成在制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(20 ml)中加入(实施例1)＜步骤2＞中得到的化合物(36 mg)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(84 mg)、1摩尔浓度-小苏打水(252 μl)，在30℃下搅拌3小时。加入氯化钠(200 mg)后，加入乙醇(40 ml)，在室温下搅拌30分钟。滤取所得沉淀，用乙醇洗涤后，减压干燥，以白色固体形式得到标题化合物(183 mg)。
[0334]
(实施例2)导入2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙基氨基的海藻酸(al-ex-2)的合成[化108]＜步骤1＞ (2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(ex2-im-1)的合成将1h-吡咯-2,5-二酮(0.7 g)、(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(1.0 g)、三苯基膦(1.4 g)溶于四氢呋喃(20 ml)。在盐冰水冷却下滴加偶氮二甲酸二异丙基酯 (1.9 mol/l-甲苯溶液、2.8 ml)后，在冰水冷却下搅拌30分钟。在室温下搅拌1小时后，加入乙酸乙酯(20 ml)和水(10 ml)，分液。将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压馏去溶剂。将残渣用硅胶柱色谱(庚烷~乙酸乙酯)纯化后，减压干燥，以淡黄色油状物形式得到标题化合物(0.5 g)。
[0335]
＜步骤2＞1-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮 三氟乙酸盐(ex2-im-2)的合成在冰水冷却下在(实施例2)＜步骤1＞中得到的化合物(0.5 g)中加入三氟乙酸(2.3 ml)，在室温下搅拌1小时。加入二异丙基醚(11.3 ml)，在室温下搅拌30分钟后，滤取析出的固体，用二异丙基醚洗涤。将所得吸湿性固体悬浮于二异丙基醚，馏去溶剂后，减压干燥，以淡黄色固体形式得到标题化合物(0.3 g)。
[0336]
＜步骤3＞导入2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙基氨基的海藻酸
(al-ex-2)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(20 ml)和(实施例2)＜步骤2＞中得到的化合物(60 mg)，进行与(实施例1)＜步骤3＞相同的操作，以白色固体形式得到标题化合物(183 mg)。
[0337]
(实施例3)导入2-(2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基氨基的海藻酸(al-ex-3)的合成[化109]＜步骤1＞ (2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(ex3-im-1)的合成在冰水冷却下花费4.75小时将二碳酸二叔丁基酯(3.0 g)的二氯甲烷(37.5 ml)溶液滴加在2,2
’‑
(乙烷-1,2-二基双(氧基))乙烷-1-胺)(3.2 g)和三乙基胺(11.5 ml)的二氯甲烷(30.0 ml)溶液中后，在室温下搅拌18.5小时。将反应液减压浓缩，向残渣中加入二氯甲烷(30 ml)后，过滤除去不溶物。将滤液依次用水(10 ml)、饱和食盐水(10 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压馏去溶剂。将残渣减压干燥，以无色油状物形式得到标题粗化合物(2.7 g)。
[0338]
＜步骤2＞ (2-(2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(ex3-im-2)的合成将(实施例3)＜步骤1＞中得到的化合物(500 mg)、马来酸酐(217 mg)悬浮于乙醇(5.0 ml)，在室温下搅拌30分钟。减压馏去乙醇，将残渣用硅胶柱色谱(庚烷~乙酸乙酯)纯化，得到酰胺体(423 mg)。在所得无色油状物和乙酸钠(100 mg)中加入乙酸酐(4.2 ml)，在40℃下搅拌1小时后，在60℃下搅拌1小时、在80℃下搅拌1.5小时、在100℃下搅拌2小时。在反应液中加入乙酸乙酯(25 ml)、水(10 ml)，分液。将有机层依次用饱和小苏打水(10 ml)、水(10ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。将残渣用硅胶柱色谱(庚烷~80%乙酸乙酯/庚烷)纯化，以无色油状物形式得到标题化合物(275 mg)。
[0339]
＜步骤3＞1-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮 三氟乙酸盐(ex3-im-3)的合成在冰水冷却下在(实施例3)＜步骤2＞中得到的化合物(275 mg)中加入三氟乙酸(1.9 ml)，在室温下搅拌15分钟。将反应液减压浓缩，将残渣用硅胶柱色谱(乙酸乙酯~30%甲醇/乙酸乙酯)纯化，以无色油状物形式得到标题化合物(231 mg)。
[0340]
＜步骤4＞导入2-(2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基氨基的海藻酸(al-ex-3)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(20 ml)和(实施例3)＜步骤3＞中得到的化合物(69 mg)，进行与(实施例1)＜步骤3＞相同的操作，以白色固体形式得到标题化合物(145 mg)。
[0341]
(实施例4)导入2-氨基-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)乙酰胺基的海藻酸(al-ex-4)的合成[化110]＜步骤1＞ (2-((2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁基酯(ex4-im-1)的合成相对市售的1-(2-氨基乙基)-1h-吡咯-2、5-二酮盐酸盐[cas no.134272-64-3](92.43 mg)和水(750 μl)的混合物在室温下加入1摩尔浓度-小苏打水(578.5 μl)。相对该混合物在室温下加入市售的2,5-二氧代吡咯烷-1-基 (叔丁氧基羰基)甘氨酸酯[cas：3392-07-2](150 mg)的四氢呋喃(1500 μl)溶液，在相同温度下搅拌30分钟。反应结束后，加入乙酸乙酯(10 ml)和水(5 ml)，分离。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩。将粗产物用硅胶柱色谱(25%乙酸乙酯/庚烷~100%乙酸乙酯、乙酸乙酯~60%甲醇/乙酸乙酯)纯化，以无色油状化合物形式得到标题化合物(74 mg)。
[0342]
＜步骤2＞2-氨基-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)乙酰胺 三氟乙酸盐
(ex4-im-2)的合成相对(实施例4)＜步骤1＞中得到的化合物(0.074 g)和二氯甲烷(0.22 ml)的混合物在冰冷却搅拌下加入三氟乙酸(0.52 ml)，在室温下搅拌2小时。反应结束后，浓缩反应液，加入二异丙基醚(20 ml)。由于形成胶状化合物，因此将混合物在减压下浓缩，干燥，由此以淡黄色胶状化合物形式得到标题粗化合物(0.097 g)。
[0343]
＜步骤3＞导入2-氨基-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)乙酰胺基的海藻酸(al-ex-4)的合成在室温下在制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(29.7 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(68.6 mg)、1摩尔浓度-小苏打水(68.6 μl)。接着，在相同温度下缓慢加入(实施例4)＜步骤2＞中得到的化合物(21.4 mg)、水(1 ml)和乙醇(1 ml)的混合物，在40℃下搅拌4小时。加入氯化钠(300 mg)后，加入乙醇(59.3 ml)，在室温下搅拌30分钟。滤取所得沉淀，用乙醇洗涤后，减压干燥，以白色絮状化合物形式得到标题化合物(221.3 mg)。
[0344]
(实施例5)导入(s)-2-氨基-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)-3-苯基丙酰胺基的海藻酸(al-ex-5)的合成[化111]＜步骤1＞ (s)-(1-((2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(ex5-im-1)的合成相对市售的1-(2-氨基乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮 盐酸盐[cas：134272-64-3](100 mg)、市售的(叔丁氧基羰基)-l-苯丙氨酸[cas no.13734-34-4](150.23 mg)和二氯甲烷(1 ml)的混合物，在冰冷却搅拌下加入三乙基胺(78.9 μl)。对该混合物，在相同温度下加入n,n
’‑
二环己基碳二酰亚胺(116.8 mg)，在室温下搅拌30分钟。反应结束后，用乙酸乙酯(20 ml)稀释，过滤悬浮液。将粗产物用硅胶柱色谱(12%乙酸乙酯/庚烷~100%乙酸乙酯)纯化，以白色无定形形式得到标题化合物(108 mg)。
[0345]
＜步骤2＞
(s)-2-氨基-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)-3-苯基丙酰胺 三氟乙酸盐(ex5-im-2)的合成相对(实施例5)＜步骤1＞中得到的化合物(0.1 g)和二氯甲烷(1.3 ml)的混合物，在冰冷却搅拌下，加入三氟乙酸(0.7 ml)，在室温下搅拌30分钟。反应结束后，将反应液在减压下浓缩，加入二异丙基醚(20 ml)。过滤悬浮液，以白色固体形式得到标题化合物(0.12 g)。
[0346]
＜步骤3＞导入(s)-2-氨基-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)-3-苯基丙酰胺基的海藻酸(al-ex-5)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(29.7 ml)和(实施例5)＜步骤2＞中得到的化合物(27.5 mg)，进行与(实施例4)＜步骤3＞相同的操作，以白色絮状化合物形式得到标题化合物(264.8 mg)。
[0347]
(实施例6)导入(s)-2-(2-氨基乙酰胺)-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)-3-苯基丙酰胺基的海藻酸(al-ex-6)的合成[化112]＜步骤1＞(叔丁氧基羰基)甘氨酰-l-苯丙氨酸(ex6-im-1)的合成相对市售的l-苯丙氨酸[cas：63-91-2](0.12 g)和水(1 ml)的混合物，在室温下加入1摩尔浓度-小苏打水(0.73 ml)。相对该混合物在室温下加入市售的2,5-二氧代吡咯烷-1-基 (叔丁氧基羰基)甘氨酸酯[cas：3392-07-2](0.2 g)的四氢呋喃(4 ml)溶液，在相同温度下搅拌。1小时30分钟后，进一步加入2,5-二氧代吡咯烷-1-基 (叔丁氧基羰基)甘氨酸酯(0.02 g)，在室温下搅拌30分钟。反应结束后加入乙酸乙酯(10 ml)和1当量浓度-盐酸(3 ml)，分离。将有机层依次用水(5 ml)和饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩。将粗产物用硅胶柱色谱(25%乙酸乙酯/庚烷~100%乙酸乙酯、乙酸乙酯
~20%甲醇/乙酸乙酯)纯化，以白色无定形形式得到标题化合物(0.21 g)。
[0348]
＜步骤2＞ (s)-(2-((1-((2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁基酯(ex6-im-2)的合成相对市售的1-(2-氨基乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮 盐酸盐[cas：134272-64-3](114 mg)、(实施例6)＜步骤1＞中得到的化合物(208 mg)和二氯甲烷(2080 μl)的混合物，在冰冷却搅拌下加入三乙基胺(90 μl)。相对该混合物，在相同温度下加入n,n
’‑
二环己基碳二酰亚胺(133.1 mg)，在室温下搅拌1小时30分钟。反应结束后，用乙酸乙酯(20 ml)稀释，过滤悬浮液。将粗产物用硅胶柱色谱(25%乙酸乙酯/庚烷~100%乙酸乙酯、乙酸乙酯~20%甲醇/乙酸乙酯)纯化。将回收的组分在减压下浓缩，在叔丁基甲基醚(20 ml)中溶解。将该溶液依次用饱和小苏打水(5 ml)、水(5 ml)洗涤2次、用饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。将有机层在减压下浓缩，以白色无定形形式得到标题化合物(220 mg)。
[0349]
＜步骤3＞(s)-2-(2-氨基乙酰胺)-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)-3-苯基丙酰胺 三氟乙酸盐(ex6-im-3)的合成使用(实施例6)＜步骤2＞中得到的化合物(0.22 g)，进行与(实施例5)＜步骤2＞相同的操作，以白色固体形式得到标题化合物(0.25 g)。
[0350]
＜步骤4＞导入(s)-2-(2-氨基乙酰胺)-n-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙基)-3-苯基丙酰胺基的海藻酸(al-ex-6)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(49.4 ml)和(实施例6)＜步骤3＞中得到的化合物(52.4 mg)，进行与(实施例4)＜步骤3＞相同的操作，以白色絮状化合物形式得到标题化合物(485 mg)。
[0351]
(实施例7)导入s-(4-(2-氨基乙基)氨基甲酰基)苯甲基)硫代乙酸酯基的海藻酸(al-ex-7)的合成[化113]
＜步骤1＞ (2-(4-(氯甲基)苯甲酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(ex7-im-1)的合成将4-(氯甲基)苯甲酰氯(2.0 g)溶于四氢呋喃(10.0 ml)，在冰水冷却下滴加(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁基酯(1.7 g)和二异丙基乙基胺(3.7 ml)的四氢呋喃(10.0 ml)溶液，在室温下搅拌1.5小时。在反应液中加入乙酸乙酯(30 ml)和水(10 ml)，分液。将有机层依次用半饱和小苏打水(10 ml)、水(10 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩。将残渣用叔丁基甲基醚磨碎后，滤取所得固体，用叔丁基甲基醚洗涤，以白色固体形式得到标题化合物(2.9 g)。
[0352]
＜步骤2＞s-(4-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯甲基)硫代乙酸酯(ex7-im-2)的合成将(实施例7)＜步骤1＞中得到的化合物(1.20 g)悬浮于乙腈(24.0 ml)。加入硫代乙酸钾(0.53 g)，在室温下搅拌30分钟。在反应液中加入乙酸乙酯(50 ml)、水(20 ml)，分液。将有机层依次用水(20 ml)、饱和食盐水(10 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩。将残渣用叔丁基甲基醚磨碎后，滤取固体，用叔丁基甲基醚洗涤。将所得固体在40℃下减压干燥，以白色固体形式得到标题化合物(1.27 g)。
[0353]
＜步骤3＞s-(4-((2-氨基乙基)氨基甲酰基)苯甲基)硫代乙酸酯 盐酸盐(ex7-im-3)的合成在冰水冷却下在(实施例7)＜步骤2＞中得到的化合物(0.60 g)中加入4当量浓度-氯化氢/1,4-二氧杂环己烷(4.2 ml)，在室温下搅拌30分钟。追加4当量浓度-氯化氢/1,4-二氧杂环己烷(2.1 ml)，在室温下进一步搅拌30分钟。在反应液中加入二异丙基醚(12.6 ml)，滤取所得沉淀，用二异丙基醚洗涤后，减压干燥，以白色固体形式得到标题化合物(0.46 g)。
[0354]
＜步骤4＞导入s-(4-((2-氨基乙基)氨基甲酰基)苯甲基)硫代乙酸酯基的海藻酸(al-ex-7)
的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(20 ml)和(实施例7)＜步骤3＞中得到的化合物(58 mg)，进行与(实施例1)＜步骤3＞相同的操作，以白色固体形式得到标题化合物(189 mg)。
[0355]
(实施例7.1)导入2-(n-(4-(巯基甲基)苯甲酰胺基))乙基氨基的海藻酸(al-ex-7.1)的制备[化114]将(实施例7)＜步骤4＞中得到的化合物(160 mg)溶于水(8.0 ml)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(112 μl)，在25℃下搅拌2小时，制备标题化合物的2重量%溶液。进行乙醇的沉淀处理时，形成凝胶状，因此直接将溶液用于试验。部分进行乙醇处理，用nmr确认乙酰基的消失。
[0356]
(实施例8)导入s-(4-(3-((3-氨基丙基)氨基)-3-氧代丙基)苯甲基)硫代乙酸酯基的海藻酸(al-ex-8)的合成[化115]＜步骤1＞4-(3-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)-3-氧代丙基)苯甲酸 甲基酯(ex8-im-1)的合成
将3-(4-(甲氧基羰基)苯基)丙烷酸(1.15 g)、(3-氨基丙基)氨基甲酸叔丁基酯(0.96g)溶于甲醇(11.5 ml)。加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(2.14g)，在室温下搅拌2小时、在40℃下搅拌1小时。在反应液中加入乙酸乙酯(20 ml)、水(20 ml)，分液，将水层用乙酸乙酯(10 ml)提取。合并有机层，依次用半饱和小苏打水(10 ml)、水(10 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压馏去溶剂。将残渣用硅胶柱色谱(10%乙酸乙酯/庚烷~乙酸乙酯)纯化，以无色油状物形式得到标题化合物(0.76 g)。
[0357]
＜步骤2＞ (3-(3-(4-(羟基甲基)苯基)丙酰胺)丙基)氨基甲酸叔丁基酯(ex8-im-2)的合成将(实施例8)＜步骤1＞中得到的化合物(560 mg)溶于四氢呋喃(11.2 ml)。花费5分钟加入氢化铝锂(146 mg)，在室温下搅拌1小时。在冰水冷却下，加入饱和硫酸钠水溶液(50滴)后，在相同温度下搅拌1小时。过滤除去析出的不溶物，用四氢呋喃洗涤。将滤液减压浓缩，以无色油状物形式得到标题化合物(569 mg)。
[0358]
＜步骤3＞4-(3-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)-3-氧代丙基)苯甲基 4-甲基苯磺酸酯(ex8-im-3)的合成将(实施例8)＜步骤2＞中得到的化合物(400 mg)溶于四氢呋喃(8.0 ml)。加入对甲苯磺酰氯(272 mg)、n、n-二甲基-4-氨基吡啶(15 mg)、三乙基胺(0.33 ml)，在70℃下搅拌6小时。在反应液中加入乙酸乙酯(25 ml)、水(10 ml)，分液，将水层用乙酸乙酯(5 ml)提取。合并有机层，依次用半饱和小苏打水(10 ml)、水(10 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。将残渣用叔丁基甲基醚/庚烷磨碎，滤取所得固体后，用庚烷洗涤，以浅米色固体形式得到标题化合物(224 mg)。
[0359]
＜步骤4＞s-(4-(3-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)-3-氧代丙基)苯甲基)硫代乙酸酯(ex8-im-4)的合成将(实施例8)＜步骤3＞中得到的化合物(224 mg)悬浮于乙腈(4.5 ml)。加入硫代乙酸钾(87 mg)，在室温下搅拌30分钟。在反应液中加入乙酸乙酯(20 ml)、水(10 ml)，分液。将有机层依次用水(10ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩。将残渣用硅胶柱色谱(10%乙酸乙酯/庚烷~乙酸乙酯)纯化，以白色固体形式得到标题化合物(189 mg)。
[0360]
＜步骤5＞s-(4-(3-((3-氨基丙基)氨基)-3-氧代丙基)苯甲基)硫代乙酸酯盐酸盐(ex8-im-5)的合成使用(实施例8)＜步骤4＞中得到的化合物(189 mg)，进行与(实施例7)＜步骤3＞相同的操作，以白色固体形式得到标题化合物(140 mg)。
[0361]
＜步骤6＞导入s-(4-(3-((3-氨基丙基)氨基)-3-氧代丙基)苯甲基)硫代乙酸酯基的海藻酸(al-ex-8)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(20 ml)和(实施
例8)＜步骤5＞中得到的化合物(67 mg)，进行与(实施例1)＜步骤3＞相同的操作，以白色固体形式得到标题化合物(189 mg)。
[0362]
(实施例9)导入s-(2-(4-氨基丁酰胺基)乙基) 硫代苯甲酸酯基的海藻酸(al-ex-9)的合成[化116]＜步骤1＞s-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基) 硫代苯甲酸酯(ex9-im-1)的合成将2-氨基乙烷-1-硫醇 盐酸盐(3.0 g)和三乙基胺(4.1 ml)悬浮于二氯甲烷(20 ml)。在冰水冷却下加入二碳酸二叔丁基酯(6.3 g)的二氯甲烷(10 ml)溶液，在室温下搅拌2小时。在冰水冷却下加入三乙基胺(4.4 ml)和苯甲酰基氯(3.7 ml)，在室温下搅拌1小时。在反应液中加入叔丁基甲基醚(100 ml)、水(50 ml)，分液，将水层用叔丁基甲基醚(50 ml)提取。将有机层合并，依次用水(50 ml)、饱和食盐水(20 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩。将残渣用硅胶柱色谱(庚烷~30%乙酸乙酯/庚烷)纯化，以无色油状物形式得到标题化合物(5.2 g)。
[0363]
＜步骤2＞s-(2-氨基乙基) 硫代苯甲酸酯 盐酸盐(ex9-im-2)的合成在(实施例9)＜步骤1＞中得到的化合物(1.0 g)中加入4当量浓度-氯化氢/1,4-二氧杂环己烷(5.0 ml)，在室温下搅拌50分钟。加入4当量浓度-氯化氢/1,4-二氧杂环己烷(1.0 ml)，在室温下搅拌1小时，进一步加入4当量浓度-氯化氢/1,4-二氧杂环己烷(1.0 ml)，在室温下搅拌1.5小时。在反应液中加入二异丙基醚(14.0 ml)。滤取析出固体，用二异丙基醚洗涤后，减压干燥，以白色固体形式得到标题化合物(0.76 g)。
[0364]
＜步骤3＞s-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰胺基)乙基) 硫代苯甲酸酯(ex9-im-3)的合成将4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁烷酸(0.50 g)、三乙基胺(0.36 ml)溶于四氢呋喃(10.0 ml)。在冰水冷却下加入氯碳酸异丁基酯(0.34 ml)，在相同温度下搅拌20分钟。在相同温度下加入(实施例9)＜步骤2＞中得到的化合物(0.64 g)、三乙基胺(0.75 ml)，在相同温度下搅拌1.5小时。在反应液中加入乙酸乙酯(20 ml)、水(10 ml)，分液。将有机层依次用半饱和小苏打水(10 ml)、水(10 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压
浓缩。将残渣用硅胶柱色谱(庚烷~80%乙酸乙酯/庚烷)纯化，以白色固体形式得到标题化合物(0.74 g)。
[0365]
＜步骤4＞s-(2-(4-氨基丁酰胺基)乙基) 硫代苯甲酸酯 盐酸盐(ex9-im-4)的合成使用(实施例9)＜步骤3＞中得到的化合物(0.74 g)，进行与(实施例7)＜步骤3＞相同的操作，以白色固体形式得到标题化合物(0.59 g)。
[0366]
＜步骤5＞导入s-(2-(4-氨基丁酰胺基)乙基) 硫代苯甲酸酯基的海藻酸(al-ex-9)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(株式会社
キミカ
制、alg-2)水溶液(20 ml)和(实施例9)＜步骤4＞中得到的化合物(61 mg)，进行与(实施例1)＜步骤3＞相同的操作，以白色固体形式得到标题化合物(198 mg)。
[0367]
(实施例9.1)导入4-((2-巯基乙基)氨基)-4-氧代丁基氨基的海藻酸(ex-alg-9.1)的制备[化117]将(实施例9)＜步骤5＞中得到的化合物(25 mg)溶于水(2.48 ml)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(17 μl)，在25℃下搅拌2小时，制备标题化合物的1重量%溶液。
[0368]
(实施例10)导入s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-半胱氨酸甲酯基的海藻酸(al-ex-10)的合成[化118]
＜步骤1＞(叔丁氧基羰基)-l-半胱氨酸甲酯(ex-10-im-1)的合成参考文献公知的方法(chem. commun.(2012)48：7310-7312)，相对市售的l-半胱氨酸甲酯盐酸盐 [cas：18598-63-5](1 g)和四氢呋喃(7.5 ml)的混合物，在冰冷却搅拌下，加入2.3摩尔浓度-小苏打水(7.5 ml)。接着，在相同温度下加入二碳酸二叔丁基酯(1.29 ml)，在室温下搅拌70小时。反应结束后，在减压下馏去溶剂，将残留物用1当量浓度-盐酸(10 ml)制成酸性。将溶液用乙酸乙酯(20 ml)提取2次后，将有机层依次用水(10 ml)和饱和食盐水(10 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。将有机层过滤后，减压浓缩，得到标题化合物(1.308 g)的粗产物。
[0369]
＜步骤2＞s-苯甲酰基-n-(叔丁氧基羰基)-l-半胱氨酸甲酯(ex-10-im-2)的合成参考文献公知的方法(synthesis(2017)49：4879-4886)，相对苯甲酰基氯(0.39 ml)和二氯甲烷(4 ml)的混合物，在室温下加入(实施例10)＜步骤1＞中得到的化合物ex10-im-1(0.4 g)、三乙基胺(0.95 ml)和二氯甲烷(4 ml)的混合物，在相同温度下搅拌1小时30分钟。反应结束后，加入水(5 ml)和1当量浓度-盐酸(5 ml)，用乙酸乙酯(20 ml)提取3次，用饱和食盐水(5 ml)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩。将生成的残留物用硅胶柱色谱(5%乙酸乙酯/庚烷~40%乙酸乙酯/庚烷)纯化，以无色油状物形式得到标题化合物(0.499 g)。
[0370]
＜步骤3＞s-苯甲酰基-l-半胱氨酸甲酯 盐酸盐(ex-10-im-3)的合成相对(实施例10)＜步骤2＞中得到的化合物ex10-im-2(0.499 g)和1,4-二氧杂环己烷(3.49 ml)的混合物，在水冷却搅拌下，加入4当量浓度-氯化氢/1,4-二氧杂环己烷(3.49 ml)，在室温下搅拌8小时。反应结束后，加入二异丙基醚(40 ml)，过滤析出物。将回收的固体在减压下干燥，由此以白色固体形式得到标题化合物(0.376 g)。
[0371]
＜步骤4＞s-苯甲酰基-n-((叔丁氧基羰基)甘氨酰)-l-半胱氨酸甲酯(ex-10-im-4)的合成相对(实施例10)＜步骤3＞中得到的化合物ex10-im-3(100 mg)和四氢呋喃(2000 μl)的混合物，在冰冷却搅拌下，加入市售的2,5-二氧代吡咯烷-1-基 (叔丁氧基羰基)甘氨酸酯[cas：3392-07-2](98.7 mg)和1摩尔浓度-小苏打水(362.6 μl)，在室温下搅拌2小时。反应结束后，将混合物用乙酸乙酯(10 ml)提取3次，依次用水(5 ml)和饱和食盐水(5 ml)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩。将粗产物用硅胶柱色谱(25%乙酸乙酯/庚烷~100%乙酸乙酯、乙酸乙酯~20%甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到包含标题化合物(124 mg)的组分。
[0372]
＜步骤5＞s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-半胱氨酸甲酯 盐酸盐(ex-10-im-5)的合成使用(实施例10)＜步骤4＞中得到的包含化合物ex10-im-4(0.11 g)的组分，进行与(实施例9)＜步骤4＞相同的去保护操作，由此以白色固体形式得到标题化合物(0.08 g)。
[0373]
＜步骤6＞
导入s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-半胱氨酸甲酯基的海藻酸(al-ex-10)的合成相对制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制、a-2)水溶液(19.78 ml)，在室温下，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(45.76 mg)、1摩尔浓度-小苏打水(45.8 μl)。接着，在相同温度下滴加(实施例10)＜步骤5＞中得到的化合物ex10-im-5(15.23 mg)、水(1 ml)和乙醇(1 ml)的混合物。将反应混合物在40℃下搅拌4小时。加入氯化钠(200 mg)后，加入乙醇(39.6 ml)，在室温下搅拌30分钟。滤取所得沉淀，用乙醇洗涤后，减压干燥，以白色固体形式得到标题化合物(181 mg)。
[0374]
(实施例10.1)导入甘氨酰-l-半胱氨酸甲酯基的海藻酸(al-ex-10.1)的制备[化119]将(实施例10)＜步骤6＞中得到的化合物(50 mg)溶于水(2.48 ml)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(21.2 μl)，在室温下搅拌2小时，制备标题化合物的2重量%溶液。
[0375]
(实施例11)导入n-(l-苯丙氨基)-s-苯甲酰基
‑‑
l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-11)的合成[化120]＜步骤1＞n-((叔丁氧基羰基)-l-苯丙氨基)-s-三苯甲基-l-半胱氨酸(ex11-im-1)的合成相对(叔丁氧基羰基)-l-苯丙氨酸[cas：13734-34-4](200mg)、四氢呋喃(4 ml)和n-甲基吗啉(82.9 μl)的混合物，在冰冷却搅拌下，缓慢加入甲酸异丁基氯(99 μl)。将该混合物在相同温度下搅拌30分钟。然后，在冰冷却搅拌下，加入市售的s-三苯甲基-l-半胱氨酸[cas：2799-07-7](274 mg)，在相同温度下搅拌30分钟、在室温下搅拌30分钟后，加入水(5 ml)和1当量浓度-盐酸(5 ml)，使反应停止。将反应液用乙酸乙酯(10 ml)提取3次，将有机层依次用水(10 ml)和饱和食盐水(10 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。将有机层过滤后，在
减压下浓缩，将生成的粗产物用硅胶柱色谱(25%乙酸乙酯/庚烷~100%乙酸乙酯、乙酸乙酯~15%甲醇/乙酸乙酯)纯化，以白色无定形形式得到标题化合物(397 mg)。
[0376]
＜步骤2＞n-(l-苯丙氨基)-s-苯甲酰基-l-半胱氨酸 三氟乙酸盐(ex11-im-2)的合成相对(实施例11)＜步骤1＞中得到的化合物ex11-im-1(100 mg)和二氯甲烷(500 μl)的混合物，在冰冷却搅拌下，加入三氟乙酸(1500 μl)和三异丙基硅烷(35.4 μl)，在室温下搅拌30分钟。相对该混合物，在冰冷却搅拌下，滴加苯甲酰基氯(38 μl)。在室温下搅拌25小时后，在相同温度下搅拌加入苯甲酰基氯(19 μl)，进一步搅拌5小时。反应结束后，加入二异丙基醚(20 ml)，过滤析出物。由于过滤不充分，因此将滤液浓缩，加入二异丙基醚(20 ml)，在室温下搅拌30分钟。过滤析出物，在减压下干燥，由此以淡黄色固体形式得到标题化合物(27.5 mg)。
[0377]
＜步骤3＞使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制、a-2)水溶液(19.78 ml)和(实施例11)＜步骤2＞中得到的化合物ex10-im-5(15.23 mg)，进行与(实施例10)＜步骤6＞相同的操作，由此以白色固体形式得到标题化合物(179 mg)。
[0378]
(实施例11.1)导入l-苯丙氨基-l-半胱氨酸钠基的海藻酸(al-ex-11.1)的制备[化121]将(实施例11)＜步骤3＞中得到的化合物al-ex-11(50 mg)溶于水(2.48 ml)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(18.2 μl)，在室温下搅拌2小时，制备标题化合物的2重量%溶液。
[0379]
(实施例12)导入s-苯甲酰基-n-甘氨酰甘氨酰-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-12)的合成[化122]＜步骤1＞
n-(叔丁氧基羰基)甘氨酰甘氨酰-s-三苯甲基-l-半胱氨酸(ex12-im-1)的合成相对市售的(叔丁氧基羰基)甘氨酰甘氨酸[cas：31972-52-8](0.3 g)和四氢呋喃(6 ml)的混合物，在冰冷却搅拌下，加入三乙基胺(0.2 ml)和甲酸异丁基氯(0.19 ml)，在室温下搅拌30分钟。相对该混合物，在冰冷却搅拌下，加入市售的s-三苯甲基-l-半胱氨酸[cas：2799-07-7](0.52 g)和三乙基胺(0.4 ml)，在室温下搅拌20小时。加入水(5 ml)和1当量浓度-盐酸(5 ml)使反应停止，用乙酸乙酯(10 ml)提取3次。将有机层依次用水(5 ml)和饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩。将粗产物用硅胶柱色谱(25%乙酸乙酯/庚烷~100%乙酸乙酯、乙酸乙酯~20%甲醇/乙酸乙酯)纯化，以白色无定形形式得到标题化合物(0.581 g)。
[0380]
＜步骤2＞s-苯甲酰基-n-甘氨酰甘氨酰-l-半胱氨酸 三氟乙酸盐(ex12-im-2)的合成将(实施例12)＜步骤1＞中得到的化合物ex12-im-1(200 mg)溶于三氟乙酸(4000 μl)，在室温下加入三异丙基硅烷(74.8 μl)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟后，在相同温度下加入苯甲酰基氯(80.4 μl)。在室温下搅拌17小时后，在相同温度下加入苯甲酰基氯(80.4 μl)，进一步搅拌4小时。反应结束后，在冰冷却搅拌下加入二异丙基醚(20 ml)，在室温下搅拌3天。将悬浮液过滤，将回收的固体在减压下干燥，由此以淡黄色固体形式得到标题化合物(140 mg)。
[0381]
＜步骤3＞导入s-苯甲酰基-n-甘氨酰甘氨酰-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-12)的合成相对制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制、a-2)水溶液(49.44 ml)，在室温下，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(114.4 mg)、1摩尔浓度-小苏打水(114.4 μl)。接着，在相同温度下滴加(实施例12)＜步骤2＞中得到的化合物ex12-im-2(51.86 mg)、水(1 ml)和乙醇(1 ml)的混合物。将反应混合物在室温下搅拌17小时。加入氯化钠(500 mg)后，加入乙醇(98.9 ml)，在室温下搅拌30分钟。滤取所得沉淀，用乙醇洗涤后，减压干燥，以白色固体形式得到标题化合物(480 mg)。
[0382]
(实施例12.1)导入甘氨酰甘氨酰-l-半胱氨酸钠基的海藻酸(al-ex-12.1)的制备[化123]将(实施例12)＜步骤3＞中得到的化合物al-ex-12(50 mg)溶于水(2.48 ml)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(19.4 μl)，在室温下搅拌2小时，制备标题化合物的2重量%溶液。
[0383]
(实施例13)导入s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-13)的合成[化124]
＜步骤1＞n-((叔丁氧基羰基)甘氨酰)-s-三苯甲基-l-半胱氨酸(ex13-im-1)的合成相对市售的s-三苯甲基-l-半胱氨酸[cas：2799-07-7](0.27 g)和水(1 ml)的混合物，在室温下，加入市售的2,5-二氧代吡咯烷-1-基 (叔丁氧基羰基)甘氨酸酯[cas：3392-07-2](0.2 g)的四氢呋喃(2 ml)溶液，在相同温度下搅拌1小时30分钟。接着，追加2,5-二氧代吡咯烷-1-基 (叔丁氧基羰基)甘氨酸酯(0.04 g)，进一步搅拌30分钟后，加入乙酸乙酯(20 ml)和1当量浓度-盐酸(5 ml)，进行分离。将有机层依次用水(5 ml)和饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩，由此以白色无定形形式得到标题化合物的粗产物(0.43 g)。
[0384]
＜步骤2＞s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-半胱氨酸 三氟乙酸盐(ex13-im-2)的合成相对(实施例13)＜步骤1＞中得到的化合物ex13-im-1(150 mg)和二氯甲烷(750 μl)的混合物，在冰冷却搅拌下，加入三氟乙酸(2250 μl)和三异丙基硅烷(62.2 μl)。将混合物在室温下搅拌30分钟，在冰冷却搅拌下，滴加苯甲酰基氯(66.9 μl)，在室温下搅拌20小时30分钟。接着，在室温下加入苯甲酰基氯(133.8 μl)，在相同温度下搅拌24小时后，在减压下浓缩二氯甲烷。在残留物中加入二异丙基醚(20 ml)，将悬浮液在室温下搅拌整晚，过滤后，在减压下干燥，由此以淡黄色固体形式得到标题化合物(47.7 mg)。
[0385]
＜步骤3＞导入s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-13)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制、a-2)水溶液(49.44 ml)和(实施例13)＜步骤2＞中得到的化合物ex13-im-5(45.33 mg)，进行与(实施例12)＜步骤3＞相同的操作，由此以白色固体形式得到标题化合物(468 mg)。
[0386]
(实施例13.1)导入甘氨酰-l-半胱氨酸钠基的海藻酸(al-ex-13.1)的制备[化125]
将(实施例13)＜步骤3＞中得到的化合物al-ex-13(50 mg)溶于水(2.478 ml)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(21.8 μl)，在室温下搅拌2小时，制备标题化合物的2重量%溶液。
[0387]
(实施例14)导入n-(l-丙氨酰基)-s-苯甲酰基-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-14)的合成[化126]＜步骤1＞n-((叔丁氧基羰基)l-丙氨酰基)-s-三苯甲基-l-半胱氨酸(ex14-im-1)的合成将(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸[cas：15761-38-3](260.5 mg)溶于四氢呋喃(20 ml)。相对该溶液，在冰冷却搅拌下，缓慢加入n-甲基吗啉(151 μl)、甲酸异丁基氯(181 μl)。将该混合物在相同温度下搅拌25分钟。然后，在冰冷却搅拌下，加入市售的s-三苯甲基-l-半胱氨酸[cas：2799-07-7](500.3 mg)，在相同温度下搅拌1小时、在室温下搅拌1小时40分钟后，加入水(10 ml)和1当量浓度-盐酸(10 ml)，使反应停止。将反应液用乙酸乙酯(10 ml)提取3次，将有机层依次用水(5 ml)和饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。将有机层过滤后，在减压下浓缩，将生成的粗产物用硅胶柱色谱(25%乙酸乙酯/庚烷~100%乙酸乙酯、乙酸乙酯~15%甲醇/乙酸乙酯)纯化，以白色无定形形式得到标题化合物(0.674 g)。
[0388]
＜步骤2＞n-(l-丙氨酰基)-s-苯甲酰基-l-半胱氨酸 三氟乙酸盐(ex14-im-2)的合成将(实施例14)＜步骤1＞中得到的化合物ex14-im-1(0.674 g)在冰冷却下溶于三氟乙酸(6.1 ml)。将反应混合物在室温下搅拌1小时30分钟。在冰冷却下加入三异丙基硅烷(0.26 ml)，在室温下搅拌30分钟。接着，在冰冷却搅拌下，滴加苯甲酰基氯(0.335 ml)，在室温下搅拌17小时。进一步在冰冷却搅拌下加入苯甲酰基氯(0.335 ml)，在室温下搅拌3小时。加入二异丙基醚(80 ml)，将悬浮液在室温下搅拌整晚，过滤后，在减压下干燥，由此以米色固体形式得到标题化合物(0.271 g)。
[0389]
＜步骤3＞导入n-(l-丙氨酰基)-s-苯甲酰基-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-14)的合成相对制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制、a-2)水溶液(39.5 ml)，在水冷却搅拌下，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(121.8 mg)、1摩尔浓度-小苏打水(91 μl)。接着，在相同温度下滴加(实施例14)＜步骤2＞中得到的化合物ex14-im-2(37.5 mg)、水(1 ml)和乙醇(1 ml)的混合物。将反应混合物在室温下搅拌66小时。加入氯化钠(400 mg)后，加入乙醇(79 ml)，在室温下搅拌30分钟。滤取所得沉淀，用乙醇洗涤后，减压干燥。将所得固体溶于水，过滤后，进行冻干，以白色固体形式得到标题化合物(0.325 g)。
[0390]
(实施例14.1)导入l-丙氨酰基-l-半胱氨酸钠基的海藻酸(al-ex-14.1)的制备[化127]将(实施例14)＜步骤3＞中得到的化合物al-ex-14(100 mg)溶于水(4957 μl)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(42 μl)，在室温下搅拌2小时，制备标题化合物的2重量%溶液。
[0391]
(实施例15)导入n-(3-氨基丙酰基)-s-苯甲酰基
‑‑
l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-15)的合成[化128]＜步骤1＞n-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)-s-三苯甲基-l-半胱氨酸(ex15-im-1)的合成使用市售的n-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸[cas：3303-84-2](260.5 mg)、四氢呋喃(20 ml)、n-甲基吗啉(151 μl)、甲酸异丁基氯(181 μl)和市售的s-三苯甲基-l-半胱氨酸
[cas：2799-07-7](500 mg)，实施与(实施例14)＜步骤1＞相同的操作，由此以白色无定形形式得到标题化合物(0.445 g)。
[0392]
＜步骤2＞n-(3-氨基丙酰基)-s-苯甲酰基-l-半胱氨酸 三氟乙酸盐(ex15-im-2)的合成将(实施例15)＜步骤1＞中得到的化合物ex15-im-1(0.445 g)在冰冷却下溶于三氟乙酸(8.9 ml)。将反应混合物在室温下搅拌70分钟。在冰冷却下加入三异丙基硅烷(0.18 ml)，在室温下搅拌20分钟。接着，在室温下，加入苯甲酰基氯(0.19 ml)，在室温下搅拌17小时50分钟。进一步在室温下加入苯甲酰基氯(0.095 ml)，在相同温度下搅拌4小时后，加入等量的苯甲酰基氯，在室温下搅拌18小时。然后，在室温下加入苯甲酰基氯(0.19 ml)，在相同温度下搅拌2小时40分钟。加入二异丙基醚(50 ml)，将悬浮液在室温下搅拌4小时，过滤后，在减压下干燥，由此得到ex15-im-1和标题化合物的混合物(0.445 g)。将该混合物的一部分(0.1876 g)溶于三氟乙酸(1.69 ml)。接着，在室温下加入苯甲酰基氯(0.18 ml)，在相同温度下搅拌3小时。加入二异丙基醚(20 ml)，将悬浮液在室温下搅拌整晚，过滤后，在减压下干燥，由此以白色固体形式得到标题化合物(0.1055 g)。
[0393]
＜步骤3＞导入n-(3-氨基丙酰基)-s-苯甲酰基-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-15)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制、a-2)水溶液(39.5 ml)和(实施例15)＜步骤3＞中得到的化合物ex15-im-2(37.5 mg)，进行与(实施例14)＜步骤3＞相同的操作，由此以白色固体形式得到标题化合物(0.348 g)。
[0394]
(实施例15.1)导入(3-氨基丙酰基)-l-半胱氨酸钠基的海藻酸(al-ex-15.1)的制备[化129]将(实施例15)＜步骤3＞中得到的化合物al-ex-15(100 mg)溶于水(4957 μl)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(42 μl)，在室温下搅拌2小时，制备标题化合物的2重量%溶液。
[0395]
(实施例16)导入s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-脯氨酰-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-16)的合成[化130]
＜步骤1＞n-(叔丁氧基羰基)甘氨酰-l-脯氨酰-s-三苯甲基-l-半胱氨酸(ex16-im-1)的合成使用市售的(叔丁氧基羰基)甘氨酰-l-脯氨酸[cas：14296-92-5](374.3 mg)、四氢呋喃(20 ml)、n-甲基吗啉(151 μl)、甲酸异丁基氯(181 μl)和市售的s-三苯甲基-l-半胱氨酸[cas：2799-07-7](500 mg)，实施与(实施例14)＜步骤1＞相同的操作，由此以白色无定形形式得到标题化合物(0.453 g)。
[0396]
＜步骤2＞s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-脯氨酰-l-半胱氨酸 三氟乙酸盐(ex16-im-2)的合成使用(实施例16)＜步骤1＞中得到的化合物ex16-im-1(0.453 g)、三氟乙酸(4.1 ml)、三异丙基硅烷(0.15 ml)和苯甲酰基氯(0.45 ml)，实施与(实施例14)＜步骤2＞相同的操作，由此以米色固体形式得到标题化合物(0.2251 g)。
[0397]
＜步骤3＞导入s-苯甲酰基-n-甘氨酰-l-脯氨酰-l-半胱氨酸基的海藻酸(al-ex-16)的合成使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制、a-2)水溶液(39.5 ml)和(实施例16)＜步骤3＞中得到的化合物ex16-im-2(45.1 mg)，进行与(实施例14)＜步骤3＞相同的操作，由此以白色固体形式得到标题化合物(0.376 g)。
[0398]
(实施例16.1)导入甘氨酰-l-脯氨酰-l-半胱氨酸钠基的海藻酸(al-ex-16.1)的制备[化131]将(实施例16)＜步骤3＞中得到的化合物al-ex-16(30 mg)溶于水(1484 μl)，加入1当量浓度-氢氧化钠水溶液(16 μl)，在室温下搅拌2小时，制备标题化合物的2重量%溶液。
[0399]
[表2]
。
[0400]
[表3-1]
。
[0401]
[表3-2]
。
[0402]
[表3-3]
。
[0403]
[表4]
。
[0404]
＜反应性基团的导入率测定＞反应性基团的导入率是指将作为海藻酸的重复单元的每糖醛酸单糖单元所导入的反应性基团的数以百分数表示的值。
[0405]
本说明书的实施例中，反应性基团或互补的反应性基团导入率(mol%)通过1h-nmr的积分比计算。并且，算出导入率所必需的海藻酸的量通过利用校正曲线的咔唑硫酸法进行测定，反应性基团或互补的反应性基团的量也可通过利用校正曲线的吸光度测定法进行测定。
[0406]
＜分子量的测定＞称量实施例中得到的导入交联基的海藻酸固体，添加超纯水，制备1%水溶液。接着，以海藻酸浓度达到0.2%、溶液组成为包含0.15mol/l的nacl的10mmol/l磷酸缓冲液(ph7.4)的方式进行稀释。将该溶液通过孔径0.45μm或0.22μm的聚醚砜制minisart high flow过滤器(sartorius公司)而除去不溶物后，将该200μl供于superose6 increase 10/300 gl柱(ge医疗科学公司)，实施凝胶过滤。凝胶过滤使用akta explorer 10s作为色谱装置，使用包含0.15 mol/alacl的10mmol/l磷酸缓冲液(ph7.4)作为展开溶剂，在室温下流速为0.8ml/mim的条件下实施。检测220nm、240nm或235nm的吸収并制作各样品的色谱图。此外作为另一方法，检测215 nm的吸収。所得色谱图的峰解析使用unicorn5.31软件(ge医疗科学公司)进行。
[0407]
导入交联基的海藻酸的分子量使用蓝色葡聚糖(分子量200万da、sigma公司)、甲状腺球蛋白(分子量66.9万da、ge医疗科学公司)、铁蛋白(分子量44万da、ge医疗科学公司)、醛缩酶(分子量15.8万da、ge医疗科学公司)、伴白蛋白(分子量7.5万da、ge医疗科学公司)、卵白蛋白(分子量4.4万da、ge医疗科学公司)、核糖核酸酶a(分子量1.37万da、ge医疗科学公司)和抑肽酶(分子量6500da、ge医疗科学公司)作为标准品，由在相同条件下进行凝胶过滤时的各成分的280nm下的吸収峰的液体量和分子量制作校正曲线。从蓝色葡聚糖至铁蛋白、从铁蛋白至抑肽酶制作2种校正曲线。使用该校正曲线，先计算得到的色谱的洗脱时间i中的分子量(mi)。接着，读取洗脱时间i中的吸光度并作为hi，根据这些数据由下式求出重均分子量(mw)。
[0408]
[数1]
。
[0409]
导入反应性基团前的海藻酸的分子量如以下确定。即，考虑干燥减重，称量各海藻酸钠，加入超纯水，制成1%水溶液。接着，以海藻酸浓度达到0.2%、溶液组成为包含0.15 mol/l的nacl的10mmol/l磷酸缓冲液(ph7.4)的方式进行稀释。将不溶物利用孔径0.22μm的亲水性pvdf制mylex gv33过滤器(merck-millipore公司)除去后，将200μl供于凝胶过滤，在与导入交联基的海藻酸相同的条件下实施凝胶过滤。检测利用差示折射计实施。此外，作为另一方法，通过孔径0.45μm的聚醚砜制minisart high flow过滤器(sartorius公司)除去不溶物。
[0410]
导入交联基前的海藻酸钠的重均分子量利用与导入交联基的海藻酸的分子量的计算方法相同的方法确定。其中，hi根据差示屈折计的数据计算。
[0411]
(实施例1)~(实施例3)、(实施例7)~(实施例9)中使用的导入交联基前的海藻酸钠(株式会社
キミカ
公司制、alg-2)的分子量在260万da~14.5万da以宽范围洗脱，重均分子量计算为146万da。
[0412]
(实施例4)~(实施例6)中使用的导入交联基前的海藻酸钠(株式会社
キミカ
公司制、alg-2)的分子量在9600da~251万da以宽范围洗脱，重均分子量计算为138万da。
[0413]
(实施例10)~(实施例16.1)中使用的导入交联基前的海藻酸钠(持田制药制、a-2)的分子量为前述表1记载的分子量。
[0414]
＜凝胶稳定性的测定(1)＞将利用与(实施例2)＜步骤3＞相同的方法制备得到的海藻酸衍生物(al-ex-2)以浓度达到0.5重量%的方式溶于水而得到海藻酸水溶液(2-1)。
[0415]
进一步在利用与(实施例7)、(实施例10)、(实施例11)、(实施例12)和(实施例13)相同的方法制备得到的2重量%的海藻酸衍生物(al-ex-7.1)溶液、(al-ex-10.1)溶液、(al-ex-11.1)溶液、(al-ex-12.1)溶液和(al-ex-13.1)溶液中加入3容量的磷酸缓冲生理食盐水(pbs)而形成0.5重量%，得到海藻酸水溶液(7-1)、(10-1)、(11-1)、(12-1)和(13-1)。
[0416]
将海藻酸水溶液(2-1)和海藻酸水溶液(7-1)、(10-1)、(11-1)、(12-1)或者(13-1)分别以250 μl等量混合，添加40 ml的浓度为30 mmol/l的氯化钙溶液，搅拌5分钟，得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10 ml的pbs洗涤1次，得到化学交联海藻酸凝胶。在该凝胶中添加19.5 ml的pbs，在37℃下振荡，经时地回收水溶液，补充与回收的量等量的pbs。试验结束后，在试验溶液中添加10 μl的海藻酸裂解酶(
ニッポンジーン
、319-08261)，在37℃下整晚振荡使凝胶完全崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定回收的水溶液中的海藻酸浓度，将用已经回收的海藻酸量校正各时刻的水溶液中海藻酸量而得的值除以由全部时刻的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量而得的值以百分数表示，将得到的值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0417]
得到图1的结果。前述交联海藻酸凝胶(珠)的24小时后的崩解率为1%以下，而且96小时后的崩解率为40%以下，由此可确认凝胶的稳定性。即，表示通过形成基于迈克尔反应的化学交联，所制得的(珠)结构体经过长时间也可维持其结构。
[0418]
＜凝胶稳定性的测定(2)＞将＜凝胶稳定性的测定(1)＞中得到的海藻酸水溶液(2-1)和海藻酸水溶液(7-1)、(10-1)、(11-1)、(12-1)或者(13-1)分别以250 μl等量混合，添加40 ml的浓度为30 mmol/l的氯化钙溶液，搅拌5分钟，得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10 ml的生理食盐水洗涤1次，得到化学交联海藻酸凝胶。在该凝胶中添加19.5 ml的5 mm乙二胺四乙酸二钾盐二水合物(edta
・
2k)/生理食盐水溶液，在37℃下振荡24小时后回收水溶液，补充与回收的量等量的5 mm edta
・
2k/生理食盐水溶液。试验结束后，在试验溶液中添加10 μl的海藻酸裂解酶(
ニッポンジーン
、319-08261)，在37℃下整晚振荡使凝胶完全崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定回收的水溶液中的海藻酸浓度，将用已经回收的海藻酸量校正各时刻的水溶液中海藻酸量而得的值除以由全部时刻的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量而得的值以百分数表示，将得到的值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0419]
得到图2的结果。前述交联海藻酸凝胶(珠)即使经过24小时也为约40%左右的崩解率，可确认凝胶的稳定性。即，表示即使进行edta处理而制得的(珠)结构体，经过长时间也可维持其结构。
[0420]
＜凝胶稳定性的测定(3)＞将利用与(实施例5)＜步骤3＞相同的方法制备得到的海藻酸衍生物(al-ex-5)以浓度达到1.0重量%的方式溶于水而得到海藻酸水溶液(5-1)。进一步在利用与(实施例7)相同的方法制备得到的2重量%的海藻酸衍生物(al-ex-7.1)溶液和(实施例10)、(实施例11)、(实施例12)和(实施例13)中得到的(al-ex-10.1)溶液、(al-ex-11.1)溶液、(al-ex-12.1)溶液和(al-ex-13.1)溶液中等量添加pbs而形成1.0重量%，得到海藻酸水溶液(7-2)、(10-2)、(11-2)、(12-2)和(13-2)。
[0421]
将海藻酸水溶液(5-1)和海藻酸水溶液(7-2)、(10-2)、(11-2)、(12-2)或者(13-2)分别以250 μl等量混合，添加40 ml的浓度为30 mmol/l的氯化钙溶液，搅拌5分钟，得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10 ml的pbs洗涤1次，得到化学交联海藻酸凝胶。在该凝胶中添加19.5 ml的pbs，在37℃下振荡，经时地回收水溶液，补充与回收的量等量的pbs。试验结束后，在试验溶液中添加10 μl的海藻酸裂解酶(
ニッポンジーン
、319-08261)，在37℃下整晚振荡使凝胶完全崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定回收的水溶液中的海藻酸浓度，将用已经回收的海藻酸量校正各时刻的水溶液中海藻酸量而得的值除以由全部时刻的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量而得的值以百分数表示，将得到的值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0422]
将结果示于图3。前述各交联海藻酸凝胶(珠)的96小时后的崩解率为26%以下。应予说明，利用作为对照的(al-ex-7.1)和(al-ex-2)作成的交联海藻酸凝胶的崩解率在96小时时刻下为28.8%，由此表示出与对照相比为同等以上的稳定性。
[0423]
＜凝胶稳定性的测定(4)＞将＜凝胶稳定性的测定(3)＞中得到的海藻酸水溶液(5-1)和海藻酸水溶液(7-2)、(10-2)、(11-2)、(12-2)或者(13-2)分别以250 μl等量混合，添加40 ml的浓度为30 mmol/l的氯化钙溶液，搅拌5分钟，得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10 ml的生理食盐水洗涤1次，得到化学交联海藻酸凝胶。在该凝胶中添加19.5 ml的5 mm edta
・
2k/生理食盐水溶液，在37℃下振荡24小时后回收水溶液，补充与回收的量等量的5 mm edta
・
2k/生理食盐水溶
液。试验结束后，在试验溶液中添加10 μl的海藻酸裂解酶(
ニッポンジーン
、319-08261)，在37℃下整晚振荡使凝胶完全崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定回收的水溶液中的海藻酸浓度，将用已经回收的海藻酸量校正各时刻的水溶液中海藻酸量而得的值除以由全部时刻的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量而得的值以百分数表示，将得到的值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0424]
得到图4的结果。前述交联海藻酸凝胶(珠)即使经过24小时也为约30%左右的崩解率，可确认凝胶的稳定性。即，表示即使进行edta处理而制得的(珠)结构体，经过长时间也可维持其结构。
[0425]
＜凝胶稳定性的测定(5)＞将利用与(实施例2)＜步骤3＞相同的方法制备得到的海藻酸衍生物(al-ex-2)以浓度达到1.0重量%的方式溶于水而得到海藻酸水溶液(2-3)。
[0426]
进一步在利用与(实施例7)相同的方法制备得到的2重量%的海藻酸衍生物(al-ex-7.1)溶液和(al-ex-16.1)溶液中等量添加pbs而形成1.0重量%，得到海藻酸水溶液(7-2)和(16-1)。
[0427]
将海藻酸水溶液(2-3)和海藻酸水溶液(7-2)或者(16-1)分别以300μl等量混合，移液3次。将该溶液中的500μl分注于浓度为55 mmol/l的氯化钙溶液(2.5 ml)中，轻轻振荡后，静置5分钟。进一步添加相同浓度的氯化钙溶液(3.5 ml)，静置5分钟。将该凝胶用5 ml的生理食盐水洗涤2次，得到化学交联海藻酸凝胶。在该凝胶中添加19.5 ml的pbs，在37℃下振荡，经时地回收水溶液，补充与回收的量等量的pbs。试验结束后，在试验溶液中添加10 μl的海藻酸裂解酶(
ニッポンジーン
、319-08261)，在37℃下整晚振荡使凝胶完全崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定回收的水溶液中的海藻酸浓度，将用已经回收的海藻酸量校正各时刻的水溶液中海藻酸量而得的值除以由全部时刻的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量而得的值以百分数表示，将得到的值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0428]
得到图8的结果。前述交联海藻酸凝胶(珠)的24小时后的崩解率为15%以下，而且96小时后的崩解率为20%以下，由此可确认凝胶的稳定性。即，表示通过形成基于迈克尔反应的化学交联，所制得的(珠)结构体经过长时间也可维持其结构。
[0429]
＜凝胶稳定性的测定(6)＞将利用与(实施例2)＜步骤3＞和(实施例5)＜步骤3＞相同的方法制备得到的海藻酸衍生物(al-ex-2)和(al-ex-5)以浓度达到1.0重量%的方式溶于水而得到海藻酸水溶液(2-1)和(5-1)。进一步在利用与(实施例7)相同的方法制备得到的2重量%的海藻酸衍生物(al-ex-7.1)溶液和(实施例14)、(实施例15)和(实施例16)中得到的(al-ex-14.1)溶液、(al-ex-15.1)溶液和(al-ex-16.1)溶液中等量添加pbs而形成1.0重量%，得到海藻酸水溶液(7-2)、(14-1)、(15-1)和(16-1)。
[0430]
将海藻酸水溶液(2-1)或者(5-1)和海藻酸水溶液(7-2)、(14-1)、(15-1)或者(16-1)分别以300μl等量混合，移液几次。将该溶液中的500μl分注于浓度为55 mmol/l的氯化钙溶液(2.5 ml)中，轻轻振荡后，静置5分钟。进一步添加相同浓度的氯化钙溶液(3.5 ml)，静置5分钟。将该凝胶用5 ml的生理食盐水洗涤2次，得到化学交联海藻酸凝胶。在该凝胶中添加19.5 ml的5 mm乙二胺四乙酸二钾盐二水合物(edta
・
2k)/生理食盐水溶液，在37℃下振
荡24小时后回收水溶液，补充与回收的量等量的5 mm edta
・
2k/生理食盐水溶液。试验结束后，在试验溶液中添加10 μl的海藻酸裂解酶(
ニッポンジーン
、319-08261)，在37℃下整晚振荡使凝胶完全崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定回收的水溶液中的海藻酸浓度，将用已经回收的海藻酸量校正各时刻的水溶液中海藻酸量而得的值除以由全部时刻的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量而得的值以百分数表示，将得到的值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0431]
得到图9的结果。前述交联海藻酸凝胶(珠)即使经过24小时也为约40%左右的崩解率，可确认凝胶的稳定性。即，表示即使进行edta处理而制得的(珠)结构体，经过长时间也可维持其结构。
[0432]
＜凝胶透过率的测定＞将利用与(实施例2)＜步骤3＞相同的方法制备得到的海藻酸衍生物(al-ex-2)、利用与(实施例5)＜步骤3＞相同的方法制备得到的海藻酸衍生物(al-ex-5)以浓度达到2.0%的方式溶于水而制备海藻酸水溶液，在该海藻酸水溶液中加入4/5容量的制备为1 mg/ml的分子量15万的异硫氰酸荧光素-葡聚糖(
シグマアルドリッチ
、fd150s)、和2.2容量的pbs，得到含有0.2 mg/ml异硫氰酸荧光素-葡聚糖的0.5%海藻酸水溶液(2
‐
2)和(5-2)。
[0433]
进一步在利用与(实施例7)、(实施例10)、(实施例11)、(实施例12)和(实施例13)相同的方法制备得到的2%的海藻酸衍生物(al-ex-7.1)溶液、(al-ex-10.1)溶液、(al-ex-11.1)溶液、(al-ex-12.1)溶液和(al-ex-13.1)溶液中添加3容量的pbs而形成0.5重量%，得到海藻酸水溶液(7-1)、(10-1)、(11-1)、(12-1)和(13-1)。
[0434]
将海藻酸水溶液(2-2)或者(5-2)和海藻酸水溶液(7-1)、(10-1)、(11-1)、(12-1)或者(13-1)分别以250 μl等量混合，添加40 ml的浓度为30 mmol/l的氯化钙溶液，搅拌5分钟，得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10 ml的生理食盐水洗涤1次，得到内包异硫氰酸荧光素-葡聚糖的化学交联海藻酸凝胶。在该凝胶中添加19.5 ml的生理食盐水，在37℃下振荡，经时地回收水溶液，补充与回收的量等量的pbs。试验结束后，在试验溶液中添加10 μl的海藻酸裂解酶(
ニッポンジーン
、319-08261)，在37℃下振荡3小时以上而使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过荧光定量法(激发光：485nm、荧光：535nm)测定回收的水溶液中的葡聚糖浓度，将各时刻的葡聚糖量除以试验结束后的葡聚糖量而得的值以百分数表示，将所得值作为透过率。
[0435]
得到图5的结果。3小时后的透过率为约14~约20%左右。并且，24小时后的透过率为约30~约37%左右。
[0436]
并且，得到图6的结果。3小时后的透过率为约17~约27%左右。并且，24小时后的透过率为约31~约42%左右。
[0437]
＜凝胶透过率的测定(2)＞将利用与(实施例2)＜步骤3＞相同的方法制备得到的海藻酸衍生物(al-ex-2)以浓度达到2.0重量%的方式溶于水而制备海藻酸水溶液。在该海藻酸水溶液(1.0 ml)中加入制备为1 mg/ml的分子量15万的异硫氰酸荧光素-葡聚糖(
シグマアルドリッチ
、fd150s)(0.4 ml)和pbs(0.6 ml)，得到含有0.2 mg/ml异硫氰酸荧光素-葡聚糖的1.0%海藻酸水溶液(2-4)。
[0438]
进一步在利用与(实施例7)和(实施例16)相同的方法制备得到的2%的海藻酸衍生
物(al-ex-7.1)溶液和(al-ex-16.1)溶液中等量添加pbs而形成1.0重量%，得到海藻酸水溶液(7-2)和(16-1)。
[0439]
将海藻酸水溶液(2-4)、和海藻酸水溶液(7-2)或者(16-1)分别以300 μl等量混合，移液3次。将该溶液中的500μl分注于浓度为55 mmol/l的氯化钙溶液(2.5 ml)中，轻轻振荡后，静置5分钟。进一步添加相同浓度的氯化钙溶液(3.5 ml)，静置5分钟。将该凝胶用5 ml的生理食盐水洗涤2次，得到内包异硫氰酸荧光素-葡聚糖的化学交联海藻酸凝胶。在该凝胶中添加19.5 ml的生理食盐水，在37℃下振荡，经时地回收水溶液，补充与回收的量等量的pbs。试验结束后，在试验溶液中添加10 μl的海藻酸裂解酶(
ニッポンジーン
、319-08261)，在37℃下振荡3小时以上而使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过荧光定量法(激发光：485nm、荧光：535nm)测定回收的水溶液中的葡聚糖浓度，将各时刻的葡聚糖量除以试验结束后的葡聚糖量而得的值以百分数表示，将所得值作为透过率。
[0440]
得到图10的结果。3小时后的透过率为约5~约10%左右。并且，24小时后的透过率为约26~约37%左右。
[0441]
[生物适应性评价]制备(实施例2)、(实施例4)、(实施例5)、(实施例6)、(实施例7)中得到的海藻酸衍生物(al-ex-2)、(al-ex-4)、(al-ex-5)、(al-ex-6)、(al-ex-7.1)和利用与(实施例10)、(实施例11)、(实施例12)、(实施例13)相同的方法制备得到的(al-ex-10.1)、(al-ex-11.1)、(al-ex-12.1)和(al-ex-13.1)以形成浓度为1.0重量%的pbs溶液，得到海藻酸水溶液。
[0442]
将其利用minisart highflow(
ザルトリウス
、16532guk)过滤灭菌，得到导入1.0%交联基的海藻酸pbs溶液(2)、(4)、(5)、(6)、(7)、(10)、(11)、(12)和(13)。
[0443]
在以细胞浓度达到5
×
10＾3 细胞/孔的方式播种在96孔板后培养1天而得的hela细胞中，将导入1.0%交联基交联基的海藻酸pbs溶液以(2)或者(5)、和(7)、(10)、(11)、(12)或者(13)的组合、和(4)或者(6)和(7)的组合、以终浓度达到0.1%的方式进行添加，培养1天后，利用celltiter-glo 发光细胞活力检测(promega、g7571)评价atp活性作为细胞毒性的指标。
[0444]
得到图7的结果。前述全部的交联海藻酸凝胶中，即使与作为对照的pbs和海藻酸(a-2)相比，也可确认相同程度的atp活性，由此表示在交联海藻酸凝胶中没有细胞毒性，表示利用迈克尔反应形成化学交联的海藻酸结构体具有生物适应性。
[0445]
[生物适应性评价(2)]制备(实施例2)、(实施例5)和(实施例7)中得到的海藻酸衍生物(al-ex-2)、(al-ex-5)、(al-ex-7.1)和利用与(实施例14)、(实施例15)、(实施例16)相同的方法制备得到的(al-ex-14.1)、(al-ex-15.1)和(al-ex-16.1)以形成浓度为1.0重量%的pbs溶液，得到海藻酸水溶液。
[0446]
将其利用minisart highflow(
ザルトリウス
、16532guk)过滤灭菌，得到导入1.0%交联基的海藻酸pbs溶液(2)、(5)、(7)、(14)、(15)和(16)。
[0447]
在以细胞浓度达到5
×
10＾3 细胞/孔的方式播种在96孔板后培养1天而得的hela细胞中，将导入1.0%交联基交联基的海藻酸pbs溶液以(2)或者(5)、和(7)、(14)、(15)或者(16)的组合、以终浓度达到0.1%的方式进行添加，培养1天后，利用celltiter-glo 发光细胞活力检测(promega、g7571)评价atp活性作为细胞毒性的指标。
[0448]
得到图11的结果。前述全部的交联海藻酸凝胶中，即使与作为对照的pbs和海藻酸(a-2)相比，也可确认相同程度的atp活性，由此表示在交联海藻酸凝胶中没有细胞毒性，表示利用迈克尔反应形成化学交联的海藻酸结构体具有生物适应性。