用于抑制和/或治疗神经退行性疾病和/或其临床病症的组合物和方法与流程

用于抑制和/或治疗神经退行性疾病和/或其临床病症的组合物和方法
1.相关申请的交叉引用
2.该申请要求2019年11月4日提交的美国临时申请第62/930022号的权益，其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
3.本文公开的各个方面和实施方案通常涉及与神经退行性疾病或其相关临床病症有关的病症/疾病的建模、治疗、降低对治疗的抗性、预防和诊断。实施方案包括用于治疗病症/疾病的组合物和方法，包括向对象提供至少一个治疗有效剂量的本文公开的组合物。其他实施方案包括用于改变和/或增强对象中glp-1的活性的方法。


背景技术：

4.包括阿尔茨海默病(ad)和帕金森病(pd)的神经退行性疾病可能在老年人群中发现，并且随着社会老龄化，患者的数量可能以指数增长。早发性神经退行性疾病在年轻人中并不少见。阿尔茨海默病是老年人中最常见的痴呆症，是一种不可逆的大脑退化，会导致扰乱记忆、认知、人格和其他功能，最终导致大脑完全衰竭而死亡。遗传因素和环境因素，包括饮食、活动、吸烟、创伤性脑损伤、糖尿病和其他医学疾病，都会增加患这种疾病的风险。帕金森病是最普遍的痴呆症，特征在于认知不足和行为改变，其影响记忆和学习能力、日常功能和生活质量。帕金森病可能是由大脑中产生多巴胺的神经元的主要损失引起的。
5.一些研究报道，胰高血糖素样肽-1(glp-1)与神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病的发展有关。glp-1会影响神经功能和认知功能，并对葡萄糖代谢有调节作用。据推测，认知障碍的机制包括脑胰岛素信号转导障碍、淀粉样蛋白代谢改变、晚期糖基化终末产物积累和氧化应激。由于涉及神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病调节过程的复杂性，非常需要开发新的治疗方案。


技术实现要素：

6.考虑到cxxc5作为glp-1的负调节因子的参与和cxxc5在患有阿尔茨海默病和/或帕金森病的对象的脑中的意外过表达，cxxc5是开发能够通过干扰cxxc5-dvl相互作用面改善这些疾病的化合物的有吸引力的目标。
7.本公开的一些方面包括干扰cxxc5-dvl相互作用面的化合物和使用其影响和/或治疗对象中的神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病的方法。本技术的实施方案涉及用于治疗对象中与神经退行性疾病或相关临床病症有关的病症和/或疾病的组合物和方法。在某些实施方案中，本文公开的组合物和方法包括抑制治疗方案的一种或多于一种副作用。其他实施方案涉及用于治疗被诊断出患有至少部分由于对象中活性glp-1的表达受抑制而导致神经退行性疾病的疾病或病症的对象的组合物和方法。
8.在第一方面，本文公开的组合物包含至少一种药剂，所述药剂可通过抑制对象中
的cxxc5-dvl相互作用面——cxxc指蛋白5(cxxc5)和散乱蛋白(dvl)之间的相互作用面来起作用。在一些实施方案中，至少一种抑制cxxc5-dvl相互作用面的药剂包括至少一种结合到散乱蛋白(dvl)的pdz结构域和/或dvl结合基序的药剂、至少一种gsk3β抑制剂、至少一种glp-1类似物、和/或至少一种glp-1受体激动剂、或其组合。
9.第一实施方案包括式i的化合物，其用于治疗对象中与神经退行性疾病或相关临床病症有关的病症和/或疾病的方法，
[0010][0011]
其中x是o或任选地由r1取代的n；
[0012]
r1是氢、羟基、烷基、烯基或任选地由烷基、烯基、卤代烷基、芳基或苄基取代的烷氧基；或者r1是氢、烷基、烯基或由丁基、烯基、卤代烷基、芳基或苄基取代的烷氧基。
[0013]
r2是氢、硝基、卤素、烷基、烯基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基或羧基。
[0014]
r3是氢、硝基、卤素、烷基、烯基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基或羧基；或r3是氢、氟、碘、砹、烷基、烯基、卤代烷基、ocf3、乙氧基、丙氧基、丁氧基、卤代烷氧基或羧基，和/或其中当r3是溴或氯时，r4不是氢；和/或其中当r3是氯时，r4不是氯。
[0015]
r4是氢、硝基、卤素、烷基、烯基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基或羧基；或r4是氢、硝基、氟、溴、碘、砹、烷基、烯基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基或羧基；和/或其中当r4是氯时，r3不是氢或硝基。
[0016]
r5是氢、硝基、卤素、烷基、烯基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基或羧基。
[0017]
第二实施方案包括根据第一实施方案所述的化合物的化合物，其中x是o。
[0018]
第三实施方案包括根据第一实施方案所述的化合物的化合物的化合物，其中x是n，并且r1是羟基或任选由烷基、烯基、卤代烷基、芳基或苄基取代的烷氧基，或r1是氢、烷基、烯基或由丁基、烯基、卤代烷基、芳基或苄基取代的烷氧基。
[0019]
第四实施方案包括根据第一至第三实施方案中任一项所述的化合物的化合物，其中r1是任选由烷基、烯基、卤代烷基、芳基或苄基取代的烷氧基。
[0020]
第五实施方案包括根据第一至第四实施方案中任一项所述的化合物的化合物，其中所述化合物是图11、图12和/或表2至表5中公开的任一个化合物。
[0021]
第六实施方案包括根据第一至第五实施方案中任一项所述的化合物，其中所述化合物包括至少一种包含以下的化合物
[0022][0023]
第七实施方案包括式ii的化合物，其用于治疗对象中与神经退行性疾病或相关临床病症有关的病症和/或疾病的方法，
[0024][0025]
其中r6、r7、r8、r9和r
10
各自独立地是氢、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基或
[0026]r11
是c
1-c6烷基、c
1-c6烯基、n、二酰亚胺，每个都由r
12
所取代，
[0027][0028]r11
是
[0029][0030]r12
是
[0031]r13
是氢或任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷基；
[0032]
每个r
14
、每个r
15
和每个r
16
独立地是氢；卤素；任选地由氢、卤素、羟基或烷氧基取代的卤代烷基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷基；任选地由氢、卤素、
羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷氧基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烯基；或任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的炔基；和
[0033]
x1、x2和x独立地是碳、氮、氧或硫。
[0034]
第八实施方案包括根据第七实施方案所述的化合物，其中r
11
是n或二酰亚胺，每个都由r
12
所取代。
[0035]
第九实施方案包括根据第七至第八实施方案中任一项所述的化合物，其中r
11
是
[0036][0037]
第十实施方案包括根据第七至第九实施方案中任一项所述的化合物，其中所述化合物是
[0038][0039]
第十一实施方案包括式iii的化合物，其用于治疗对象中与神经退行性疾病或相关临床病症有关的病症和/或疾病的方法，
[0040][0041]
其中每个r
17
独立地是氢；卤素；任选地由氢、卤素、羟基或烷氧基取代的卤代烷基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷氧基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烯基；或任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的炔基；和
[0042]
x4和x5独立地是氮、氧或硫。
[0043]
第十二实施方案包括根据第十一实施方案所述的化合物，其中每个r
17
独立地是卤素或羟基。
[0044]
第十三实施方案包括根据第十一至第十二实施方案中任一项所述的化合物，其中所述化合物是
[0045][0046]
第十四实施方案包括式iv的化合物，其用于治疗对象中与神经退行性疾病或相关临床病症有关的病症和/或疾病的方法，
[0047][0048]
其中每个r
18
和r
19
独立地是氢；羟基；卤素；任选地由氢、卤素、羟基或烷氧基取代的卤代烷基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷氧基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烯基；或任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的炔基。
[0049]
第十五实施方案包括根据第十四实施方案所述的化合物，其中r
19
是任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷基。
[0050]
第十六实施方案包括根据第十四至第十五实施方案中任一项所述的化合物，其中每个r
18
独立地是氢、羟基、卤素、烷氧基、烷基、烯基或卤代烷基。
[0051]
第十七实施方案包括根据第十四至第十六实施方案中任一项所述的化合物，其中所述化合物是
[0052][0053]
第十八实施方案包括式v的化合物，其用于治疗对象中与神经退行性疾病或相关临床病症有关的病症和/或疾病的方法，
[0054][0055]
其中每个r’和每个r”独立地是氢；卤素；任选地由氢、卤素、羟基或烷氧基取代的卤代烷基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷氧基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烯
基；或任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的炔基。
[0056]
第十九实施方案包括根据第十八实施方案所述的化合物，其中每个r’和每个r”独立地是氢、卤素、羟基、烷基、烯基、烷氧基或卤代烷基。
[0057]
第二十实施方案包括根据第十八至第十九实施方案中任一项所述的化合物，其中所述化合物是
[0058][0059]
第二十一实施方案包括式vi的化合物，其用于治疗对象中与神经退行性疾病或相关临床病症有关的病症和/或疾病的方法，
[0060][0061]
其中每个r
20
和每个r
21
独立地是氢；卤素；任选地由氢、卤素、羟基或烷氧基取代的卤代烷基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷基，或任选被氢、卤素、烷基、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的羰基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烷氧基；任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的烯基；或任选地由氢、卤素、羟基、烷氧基或卤代烷基取代的炔基。
[0062]
第二十二实施方案包括根据第二十一实施方案所述的化合物，其中每个r
20
和每个r
21
独立地是氢、卤素、羟基、烷基、烯基、烷氧基、羰基、羧基或卤代烷基。
[0063]
第二十三实施方案包括根据第二十一至第二十二实施方案中任一项所述的化合物，其中所述化合物是
[0064][0065]
第二十四实施方案包括至少一种根据第一至第二十三实施方案中任一项所述的化合物，其中所述化合物抑制或减少cxxc5-dvl相互作用面、cxxc5和dvl之间的相互作用、和/或cxxc5和/或cxxc5-dvl相互作用面的活性；和/或其中所述化合物增加或提高对象中glp-1的表达和/或活性；和/或其中神经退行性疾病或类似病症包括至少一种选自或包括
痴呆症、阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、老年性痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、路易体痴呆(lbd)、帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、皮质基底节变性(cbd)、进行性核上性麻痹(psp)、亨廷顿舞蹈病(hd)、肌萎缩性侧索硬化症(als，或也称为卢伽雷氏病)、原发性侧索硬化症(pls)、进行性延髓麻痹(pbp)、进行性肌萎缩(pma)、假性延髓麻痹、遗传性痉挛性截瘫(hsp)、小脑性共济失调、克雅氏病(cjd)、多发性硬化(ms)和/或格林-巴利综合征(gbs)的病症。
[0066]
第二十五实施方案包括至少一种根据前述实施方案中任一项所述的化合物，其中所述化合物通过直接与cxxc5竞争dvl中的结合位点、通过直接与dvl结合和/或通过直接与dvl的pzd结构域结合，来抑制或减少cxxc5和dvl之间的相互作用。
[0067]
第二十六实施方案包括一种药物组合物，其包含至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或其药学上可接受的水合物、盐、代谢物或载体。
[0068]
在第二方面，本文公开的方法包括治疗至少一种临床病症的方法，其包括向对象施用至少一种治疗有效剂量的本文公开的组合物。该对象可以被诊断患有选自和/或包括神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病或其类似病症的临床病症。在某些实施方案中，本文公开的方法还包括向对象施用多个治疗有效剂量的本文公开的任意组合物。
[0069]
第二十七实施方案包括治疗神经退行性疾病或类似病症的方法，其包括：向对象施用至少一个治疗有效剂量的至少一种药剂，所述药剂抑制或减少cxxc5-dvl相互作用面、cxxc5和dvl之间的相互作用、和/或cxxc5和/或cxxc5-dvl相互作用面的活性；和/或向对象施用至少一个治疗有效剂量的至少一种药剂，所述药剂提高glp-1的表达和/或活性；和/或向对象施用至少一个治疗有效剂量的至少一种药剂，所述药剂包含至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物。
[0070]
第二十八实施方案包括根据第二十七实施方案所述的方法，其还包括：检测对象中cxxc5的上调表达。与这些实施方案一致，cxxc5的上调表达可在对象的血液、血液单核细胞、中枢神经系统和/或脑中检测到。
[0071]
第二十九实施方案包括根据第二十七至第二十八实施方案中任一项所述的方法，其还包括：确定有患神经退行性疾病或类似病症的风险的对象。
[0072]
第三十实施方案包括至少一种根据第二十七至第二十九实施方案中任一项所述的方法，其中神经退行性疾病或类似病症包括至少一种选自或包括痴呆症、阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、老年性痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、路易体痴呆(lbd)、帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、皮质基底节变性(cbd)、进行性核上性麻痹(psp)、亨廷顿舞蹈病(hd)、肌萎缩性侧索硬化症(als，或也称为卢伽雷氏病)、原发性侧索硬化症(pls)、进行性延髓麻痹(pbp)、进行性肌萎缩(pma)、假性延髓麻痹、遗传性痉挛性截瘫(hsp)、小脑性共济失调、克雅氏病(cjd)、多发性硬化(ms)和/或格林-巴利综合征(gbs)的病症。
[0073]
第三十一实施方案包括至少一种根据第二十七至第三十实施方案中任一项所述的方法，其中对象表现出异常的glp-1水平、血脂谱、胰岛素抵抗和/或血糖水平。
[0074]
第三十二实施方案包括至少一种根据第二十七至第三十一实施方案中任一项所述的方法，其中对象被诊断患有肥胖症、糖尿病、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、痴呆症、阿尔茨海默病(ad)和/或帕金森病(pd)。
[0075]
第三十三实施方案包括至少一种根据第二十七至第三十二实施方案中任一项所述的方法，其中抑制cxxc5-dvl相互作用面、抑制cxxc5和dvl之间的相互作用、抑制cxxc5和/或cxxc5-dvl相互作用面的活性、和/或提高glp-1的表达和/或活性的至少一种药剂包含至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物。
[0076]
第三十四实施方案包括至少一种根据第三十三实施方案所述的方法，其中所述方法还包括：施用至少一个治疗有效剂量的至少一种另外的药剂，所述药剂选自或包含gsk3β抑制剂、wnt/β-连环蛋白通道的抑制剂、glp-1类似物、glp-1受体激动剂、减肥药物、和/或糖尿病药物。与这些实施方案一致，至少一种另外的药剂包括奥利司他、氯卡色林、芬特明-托吡酯、纳曲酮-安非他酮、利拉鲁肽、苄非他明、二乙胺苯丙酮、磺酰脲类、氯茴苯酸类、噻唑烷二酮类、dpp-4抑制剂、胰岛素类似物、α-葡萄糖苷酶抑制剂、sgl t2抑制剂、西格列汀、二甲双胍、罗格列酮、奥贝胆酸、司隆色替(selonsertib)、伊拉布诺(elafibranol)、赛尼克韦罗(cenicriviroc)、mgl-3196、gr-md-02、阿拉姆霍尔(aramchol)、glp-1类似物和/或glp-1受体激动剂。
[0077]
第三十五实施方案包括至少一种根据第二十七至第三十四实施方案中任一项所述的方法，其中对象是成年人、小孩和/或动物。
[0078]
第三十六实施方案包括至少一种根据第二十七至第三十五实施方案中任一项所述的方法，其中至少一种药剂和/或至少一种另外的药剂通过口服、鼻内、皮下或静脉内施用。
[0079]
第三十七实施方案包括至少一种根据第二十七至第三十六实施方案中任一项所述的方法，其中至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量为约5mg至约2000mg，并且所述化合物的剂量向对象至少每天施用一次。在一些实施方案中，至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量包括但不限于：约10mg至约1900mg；约15mg至约1800mg；约15mg至约1700mg；约20mg至约1600mg；约25mg至约1500mg；约30mg至约1000mg；约50mg至约1000mg；约50mg至约800mg；约100mg至约800mg；约300mg至约800mg；约500mg至约800mg；约5mg至约50mg；约1000mg至约1700mg；约1200mg至约1700mg；约1500mg至约1700mg；约10mg至约1000mg；约10mg至约30mg；约1500mg至约2000mg；约100mg至约200mg；约100mg至约150mg；和/或其任意组合。与这些实施方案一致，至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量包括但不限于：约1mg/m2至约1500mg/m2；约10mg/m2至约1000mg/m2；约20mg/m2至约800mg/m2；约10mg/m2至约50mg/m2；约800mg/m2至约1200mg/m2；约50mg/m2至约500mg/m2；约500mg/m2至约1000mg/m2；约80mg/m2至约150mg/m2；约80mg/m2至约120mg/m2；和/或其任意组合。
[0080]
第三十八实施方案包括至少一种根据第二十七至第三十六实施方案中任一项所述的方法，其中至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量为约0.01mg至约200mg，并且所述化合物的剂量向对象至少每天施用一次。在一些实施方案中，至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物
的治疗有效剂量包括但不限于：约0.01mg至约150mg；约0.01mg至约100mg；约0.01mg至约80mg；约0.01mg至约60mg；约0.05mg至约100mg；约0.05mg至约80mg；约0.05mg至约50mg；约0.1mg至约100mg；约0.1mg至约50mg；约0.2mg至约100mg；约0.2mg至约50mg；约0.5mg至约100mg；约0.5mg至约50mg；约100mg至约200mg；约100mg至约150mg；和/或其任意组合。在这些实施方案中的一些实施方案中，至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量包括但不限于：约0.01mg/m2至约100mg/m2；约0.01mg/m2至约80mg/m2；约0.01mg/m2至约50mg/m2；约0.01mg/m2至约25mg/m2；约0.05mg/m2至约100mg/m2；约0.05mg/m2至约80mg/m2；约0.05mg/m2至约50mg/m2；约80mg/m2至约150mg/m2；约80mg/m2至约120mg/m2；和/或其任意组合。
[0081]
在第三方面，本技术提供的方法减少和/或抑制治疗方案的副作用，所述方法包括向对象施用至少一个治疗有效剂量的至少一种药剂，其抑制或减少对象中cxxc5-dvl相互作用面和/或提高glp-1的表达和/或活性，和/或向对象施用至少一个治疗有效剂量的至少一种药剂，其包含至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物；其中对象已接受至少一种治疗方案，所述治疗方案选自药物治疗、手术治疗和/或其组合，并且其中对象由于治疗方案而经历至少一种副作用。与这些实施方案一致，副作用包括但不限于耐药性、复发、炎症或其任意组合。
[0082]
第三十九实施方案包括检测一种或多于一种神经退行性标志物的方法，其包括：提供来自怀疑患有或已知患有代谢性和/或神经退行性疾病或病症的对象的血液、细胞或组织样品；和检测样品中cxxc5和/或β-连环蛋白的上调，和/或检测glp-1的下调。
[0083]
第四十实施方案包括根据第三十九实施方案所述的方法，其中神经退行性疾病或类似病症包括至少一种选自或包括痴呆症、阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、老年性痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、路易体痴呆(lbd)、帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、皮质基底节变性(cbd)、进行性核上性麻痹(psp)、亨廷顿舞蹈病(hd)、肌萎缩性侧索硬化症(als，或也称为卢伽雷氏病)、原发性侧索硬化症(pls)、进行性延髓麻痹(pbp)、进行性肌萎缩(pma)、假性延髓麻痹、遗传性痉挛性截瘫(hsp)、小脑性共济失调、克雅氏病(cjd)、多发性硬化(ms)和/或格林-巴利综合征(gbs)的病症。
[0084]
与所有前述实施方案一致，其中与已知没有代谢和/或神经退行性疾病的正常对象相比，cxxc5在对象的血液、大脑和/或中枢神经系统中过表达至少约10％、约20％、约25％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约200％、约300％、约400％、约500％、和/或约1000％、或其任意组合；和/或与已知没有代谢和/或神经退行性疾病的正常对象相比，cxxc5在对象的血液、大脑和/或中枢神经系统中过表达至少约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍、约50倍、和/或约100倍、或其任意组合。
[0085]
第四十一实施方案包括至少一种根据第三十九至第四十实施方案所述的方法，其还包括：使用至少一种根据第二十七至第三十八实施方案中任一项所述的方法治疗对象。
[0086]
第四十二实施方案包括提高对象中glp-1活性的方法，其包括以下步骤：向对象提供至少一个治疗有效剂量的至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其代谢物；和/或其中有效剂量的至少一种化合物提高glp-1的活性和/或glp-1的表达。
[0087]
第四十三实施方案包括根据第四十二实施方案所述的方法，其中对象包括人、动物、细胞和/或组织。
[0088]
第四十四实施方案包括减少对治疗方案的抗性的方法，其包括：向对象施用至少一个治疗有效剂量的至少一种药剂，所述药剂抑制或减少cxxc5-dvl相互作用面、cxxc5和dvl之间的相互作用、和/或cxxc5和/或cxxc5-dvl相互作用面的活性；和/或向对象施用至少一个治疗有效剂量的至少一种药剂，所述药剂包含至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物。
[0089]
第四十五实施方案包括根据第四十四实施方案所述的方法，其中抑制cxxc5-dvl相互作用面、抑制cxxc5和dvl之间的相互作用、和/或抑制cxxc5和/或cxxc5-dvl相互作用面的活性的至少一种药剂包含至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物。
[0090]
第四十六实施方案包括根据第四十四至第四十五实施方案中任一项所述的方法，其中对象先前或正在伴随地进行至少一种治疗方案的治疗，所述治疗方案包括但不限于手术、减肥、健康饮食、体育活动、胰岛素治疗和/或药物治疗；和/或其中对象诊断出患有至少部分由于对象中活性glp-1的表达受抑制而导致神经退行性疾病的疾病或病症。
[0091]
第四十七实施方案包括根据第四十四至第四十六实施方案中任一项所述的方法，其中对象先前或正在伴随地进行至少一种药物的治疗，所述药物包括但不限于奥利司他、氯卡色林、芬特明-托吡酯、纳曲酮-安非他酮、利拉鲁肽、苄非他明、二乙胺苯丙酮、磺酰脲类、氯茴苯酸类、噻唑烷二酮类、二肽酰肽酶-4(dpp-4)抑制剂、胰岛素类似物、α-葡萄糖苷酶抑制剂、sgl t2抑制剂、西格列汀、二甲双胍、罗格列酮、奥贝胆酸、司隆色替、伊拉布诺、赛尼克韦罗、mgl-3196、gr-md-02、阿拉姆霍尔、glp-1类似物和/或glp-1受体激动剂。
[0092]
第四十八实施方案包括用于实施本文公开的任一种前述方法的试剂盒。试剂盒的组成部分包括但不限于一种或多于一种本文公开的药剂/组合物、试剂、容器、装置和/或使用试剂盒的说明书。
[0093]
第四十九实施方案包括根据第四十八实施方案所述的试剂盒，其中所述一种或多于一种药剂/组合物包括至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物。
[0094]
第五十实施方案包括至少一种根据第二十七至第四十七实施方案中任一项所述的方法，其中至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量为约5mg至约2000mg，并且所述化合物的剂量向对象至少每天施用一次。在一些实施方案中，至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量包括但不限于：约10mg至约1900mg；约15mg至约1800mg；约15mg至约1700mg；约20mg至约1600mg；约25mg至约1500mg；约30mg至约1000mg；约50mg至约1000mg；约50mg至约800mg；约100mg至约800mg；约300mg至约800mg；约500mg至约800mg；约5mg至约50mg；约1000mg至约1700mg；约1200mg至约1700mg；约1500mg至约1700mg；约10mg至约1000mg；约10mg至约30mg；约1500mg至约2000mg；约100mg至约200mg；约100mg至约150mg；和/或其任意组合。与这些实施方案一致，至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量包括但不限于：约
1mg/m2至约1500mg/m2；约10mg/m2至约1000mg/m2；约20mg/m2至约800mg/m2；约10mg/m2至约50mg/m2；约800mg/m2至约1200mg/m2；约50mg/m2至约500mg/m2；约500mg/m2至约1000mg/m2；约80mg/m2至约150mg/m2；约80mg/m2至约120mg/m2；和/或其任意组合。
[0095]
第五十一实施方案包括至少一种根据第二十七至第四十七实施方案中任一项所述的方法，其中至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量为约0.01mg至约200mg，并且所述化合物的剂量向对象至少每天施用一次。在一些实施方案中，至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量包括但不限于：约0.01mg至约150mg；约0.01mg至约100mg；约0.01mg至约80mg；约0.01mg至约60mg；约0.05mg至约100mg；约0.05mg至约80mg；约0.05mg至约50mg；约0.1mg至约100mg；约0.1mg至约50mg；约0.2mg至约100mg；约0.2mg至约50mg；约0.5mg至约100mg；约0.5mg至约50mg；约100mg至约200mg；约100mg至约150mg；和/或其任意组合。在这些实施方案中的一些实施方案中，至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物的治疗有效剂量包括但不限于：约0.01mg/m2至约100mg/m2；约0.01mg/m2至约80mg/m2；约0.01mg/m2至约50mg/m2；约0.01mg/m2至约25mg/m2；约0.05mg/m2至约100mg/m2；约0.05mg/m2至约80mg/m2；约0.05mg/m2至约50mg/m2；约80mg/m2至约150mg/m2；约80mg/m2至约120mg/m2；和/或其任意组合。
[0096]
第五十二实施方案包括确定对象中存在神经退行性疾病的方法，所述方法包括测定与参考值相比对象的血液、大脑和/或中枢神经系统中升高的cxxc5基因的表达水平和/或cxxc5蛋白的表达水平。
[0097]
第五十三实施方案包括根据第五十二实施方案所述的方法，其中神经退行性疾病包括至少一种选自或包括痴呆症、阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、老年性痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、路易体痴呆(lbd)、帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、皮质基底节变性(cbd)、进行性核上性麻痹(psp)、亨廷顿舞蹈病(hd)、肌萎缩性侧索硬化症(als，或也称为卢伽雷氏病)、原发性侧索硬化症(pls)、进行性延髓麻痹(pbp)、进行性肌萎缩(pma)、假性延髓麻痹、遗传性痉挛性截瘫(hsp)、小脑性共济失调、克雅氏病(cjd)、多发性硬化(ms)和/或格林-巴利综合征(gbs)的病症。
[0098]
第五十四实施方案包括根据第五十二至第五十三实施方案中任一项所述的方法，其中所述参考值是已知没有代谢和/或精神退行性疾病的正常对象中cxxc5基因的表达水平或cxxc5蛋白的表达水平。
[0099]
第五十五实施方案包括根据第五十二至第五十四实施方案中任一项所述的方法，其进一步测定与参考值相比对象的血液、大脑、血液、大脑和/或中枢神经系统、白色脂肪组织、胰腺和/或肠中降低的glp-1基因的表达水平和/或glp-1蛋白的表达水平。
[0100]
第五十六实施方案包括根据第五十二至第五十五实施方案中任一项所述的方法，其中与参考值相比，cxxc5基因的表达水平和/或cxxc5蛋白的表达水平升高至少约10％、约20％、约25％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约200％、约300％、约400％、约500％、和/或约1000％、或其任意组合；和/或其中与参考值相比，cxxc5基因的表达水平和/或cxxc5蛋白的表达水平升高至少约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3
倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍、约50倍、和/或约100倍、或其任意组合。
[0101]
第五十七实施方案包括至少一种根据第五十二至第五十六实施方案中任一项所述的方法，其还包括：使cxxc5与至少一种药剂接触，所述药剂包含至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物和/或至少一种根据第二十六实施方案所述的组合物。
[0102]
第五十八实施方案包括至少一种根据第五十二至第五十七实施方案中任一项所述的方法，其还包括：检测对象的大脑和/或中枢神经系统中cxxc5的存在。
[0103]
第五十九实施方案包括至少一种根据第五十二至第五十八实施方案中任一项所述的方法，其还包括：使用至少一种根据第二十七至第三十八实施方案和第五十至第五十一实施方案中任一项所述的方法治疗对象。
[0104]
第六十实施方案包括至少一种根据第五十二至第五十九实施方案中任一项所述的方法，其中对象包括细胞、动物或人。与这些实施方案一致，细胞可以包括脂肪细胞、血液单核细胞和/或神经元。
[0105]
第六十一实施方案包括包含至少一种根据第一至第二十五实施方案中任一项所述的化合物或其药学上可接受的水合物、盐、代谢物或载体的组合物在制备用于神经退行性疾病或相关临床病症的药物中的用途。
[0106]
第六十二实施方案包括任意前述实施方案所述的方法或用途，其中通过口服、局部、鼻内、肠胃外、癌周围、经黏膜、经皮、肌内、静脉内、皮内、皮下、腹腔内、脑室内、颅内、瘤内或通过肺部给药向对象施用组合物。
[0107]
第六十三实施方案包括根据第六十一至第六十二实施方案中任一项所述的用途，其中神经退行性疾病或相关临床病症包括至少一种选自或包括痴呆症、阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、老年性痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、路易体痴呆(lbd)、帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、皮质基底节变性(cbd)、进行性核上性麻痹(psp)、亨廷顿舞蹈病(hd)、肌萎缩性侧索硬化症(als，或也称为卢伽雷氏病)、原发性侧索硬化症(pls)、进行性延髓麻痹(pbp)、进行性肌萎缩(pma)、假性延髓麻痹、遗传性痉挛性截瘫(hsp)、小脑性共济失调、克雅氏病(cjd)、多发性硬化(ms)和/或格林-巴利综合征(gbs)的病症。
[0108]
附图的简要说明
[0109]
以下附图形成本说明书的一部分，并被包含以进一步证实某些实施方案。通过单独参照一个或多于一个这些附图或结合所提供的具体实施方案的详细说明可以更好地理解一些实施方案。
[0110]
图1a：图表显示了与正常健康对照者相比，未经治疗的1期帕金森病(pd)患者的外周血中glp-1和cxxc5的mrna表达水平(平均值
±
平均值标准误差，n＝4，*p＜0.05和***p《0.0005)。
[0111]
图1b：图表显示了与正常健康对照者相比，未经治疗的1期阿尔茨海默病(ad)患者的外周血中glp-1和cxxc5的mrna表达水平(平均值
±
平均值标准误差，n＝13，*p《0.05)。
[0112]
图1c：图表显示了抗糖尿病药物吡格列酮对转基因阿尔茨海默病小鼠模型中cxxc5表达的影响(平均值
±
平均值标准误差，n＝7，*p《0.05)。
[0113]
图2a：图表显示了在高脂肪饮食(hfd)或正常饮食(ncd)的小鼠中，各种类型的组
织(epiwat、bat、肝脏、肌肉、胰腺、肠、脾、肾和心脏)中的相对glp-1 mrna表达。
[0114]
图2b：图表显示了高脂肪饮食(hfd)的cxxc5
/
和cxxc5-/-小鼠的epiwat中glp-1和其他wnt/β-连环蛋白信号靶基因(tcf7l2，axin2，dvl1，wisp1和fosl1)的相对表达水平。
[0115]
图2c：图表显示了用载体、a3334和西格列汀处理的ncd-小鼠和hfd-小鼠中glp-1和其他wnt/β-连环蛋白信号靶基因(tcl7l2，axin2，dvl1，wisp1和fosl1)的相对表达水平。
[0116]
图3a：图表显示了高脂肪饮食(hfd)的cxxc5
/
和cxxc5-/-小鼠中的血清活性glp-1水平。
[0117]
图3b：图表显示了hfd喂养的链脲佐菌素(stz)诱导的糖尿病cxxc5
/
小鼠和hfd喂养的stz诱导的糖尿病cxxc5-/-小鼠中的血清活性glp-1水平。
[0118]
图4a：图表显示了用载体、a3334和西格列汀处理的ncd-小鼠和hfd-小鼠中的血清活性glp-1水平。
[0119]
图4b：图表显示了用载体、a3334和西格列汀处理的hfd喂养的stz诱导的糖尿病小鼠中的血清活性glp-1水平。
[0120]
图5：图表显示了hfd喂养的ccl4诱导的nash cxxc5
/
小鼠和hfd喂养的ccl4诱导的nash cxxc5-/-小鼠中的血清活性glp-1水平。
[0121]
图6a：图表显示了用载体、a3334、a3051、司隆色替和奥贝胆酸处理的ncd-小鼠("食物")和hfd喂养的stz诱导的nash小鼠中的血清活性glp-1水平。
[0122]
图6b：图表显示了用载体、a3334、a3051、司隆色替、奥贝胆酸("oca")和a3486处理的ncd-小鼠(“chow”)和hfd喂养的蛋氨酸-胆碱缺乏饮食(mcd)诱导的nash小鼠中的血清活性glp-1水平。
[0123]
图7a：大鼠神经元干细胞(nsc)的照片，显示了未分化状态(“ bfgf”)和分化状态(
“‑
bfgf”)。将未分化的nsc维持在含有10ng/ml bfgf(“ bfgf”)的培养基中。
[0124]
图7b：大鼠神经元干细胞(nsc)的照片，显示了用不同浓度(0μm、1μm、5μm和10μm)的a3051处理后的形态学变化。将未分化的nsc维持在含有10ng/ml bfgf的培养基中。
[0125]
图8a:蛋白质免疫印迹显示了h4野生型(wt)细胞(对照细胞)和h4/swe细胞(app瑞典突变神经胶质瘤h4细胞系)中β-连环蛋白、cxxc5和gsk3β灭活形式(p-gsk3β)的表达。
[0126]
图8b：图表显示了h4 wt细胞和h4/swe细胞中β-连环蛋白、cxxc5和p-gsk3β(s9)的相对表达水平。
[0127]
图9a：蛋白质免疫印迹显示了用dmso(对照)、a3334、a3051、a4733、a4735、靛玉红、靛玉红-3'-肟(i3o)、6-溴靛玉红-3
’‑
肟(bio)处理的h4/swe细胞和h4 wt细胞中β-连环蛋白、cxxc5和p-gsk3β(s9)以及α-微管蛋白的水平。
[0128]
图9b：免疫细胞化学图像显示了用dmso、a3334、a3051、a4733、a4735、靛玉红、i3o、bio处理的h4/swe细胞和h4 wt细胞中β-连环蛋白的水平和定位。绿色信号代表β-连环蛋白的表达，蓝色信号代表用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)染色的细胞核。
[0129]
图10：人aβ-42酶联免疫吸附试验(elisa)显示了用dmso、a3334、a3051、a4733、a4735、靛玉红、i3o、bio处理的h4/swe细胞和h4 wt细胞中分泌型人淀粉样蛋白β-42的水平。
[0130]
图11：本文公开的靛玉红类似物的实例的化学结构。
[0131]
图12：本文公开的靛玉红类似物的实例的化学结构。
[0132]
定义
[0133]“约”是指值加上或减去10％的范围，例如约1.0包括从0.9到1.1的值。
[0134]“cxxc5-dvl相互作用面”是指cxxc5(cxxc指蛋白5)和dvl(散乱蛋白)之间的相互作用和/或结合，其可以诱导本领域已知的生物活性。该相互作用和/或结合可以是物理或化学相互作用，其可以激活对象中的cxxc5-dvl通道。cxxc5-dvl相互作用面可以以复合体的形式存在。
[0135]“cxxc5-dvl相互作用面的抑制剂”是指改变cxxc5-dvl相互作用面的功能和/或活性或是诱导cxxc5-dvl相互作用面的构象变化的药剂。cxxc5-dvl相互作用面的抑制剂的实例包括但不限于改变cxxc5和dvl之间的结合或分离的药剂和/或抑制cxxc5-dvl复合体组装/功能的药剂。
[0136]“神经退行性疾病或类似病症”可以包括但不限于痴呆症、阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、老年性痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、路易体痴呆(lbd)、帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、皮质基底节变性(cbd)、进行性核上性麻痹(psp)、亨廷顿舞蹈病(hd)、肌萎缩性侧索硬化症(als，或也称为卢伽雷氏病)、原发性侧索硬化症(pls)、进行性延髓麻痹(pbp)、进行性肌萎缩(pma)、假性延髓麻痹、遗传性痉挛性截瘫(hsp)、小脑性共济失调、克雅氏病(cjd)、多发性硬化(ms)和/或格林-巴利综合征(gbs)。
[0137]“代谢性疾病或类似病症”可以包括但不限于代谢障碍、代谢综合征、肥胖症、高血压、高血糖、高血清甘油三酯、高尿酸血症、脂肪肝、多囊卵巢综合征、勃起功能障碍、黑棘皮病、2型糖尿病、低脂联素血症、肝硬化、门静脉高压、心血管疾病、冠状动脉疾病、脂肪营养不良、血脂异常、肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝病(nafld)和/或非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0138]“药学上可接受的”是指由政府监管机构如美国fda或ema批准或认可的，或列于美国药典或其它公认的药典中的，用于哺乳动物和/或动物，更具体地用于人类。
[0139]
除非另有说明或暗示，否则“药学上可接受的载体”在本文中用于描述可包含在制剂中的除活性成分以外的任何成分。载体的选择在很大程度上取决于例如施用方式、载体对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质等因素。
[0140]“药物组合物”是指cxxc5-dvl相互作用面的治疗活性抑制剂或gskβ的治疗活性抑制剂，以及至少一种药学上可接受的载体，利用其向对象施用cxxc5-dvl相互作用面的抑制剂和/或gskβ的抑制剂。
[0141]“对象”是指人(成人和/或小孩)、动物、牲畜、细胞和/或组织。
[0142]“治疗有效剂量”是指cxxc5-dvl相互作用面的抑制剂、至少一种本文公开的化合物、glp-1类似物、glp-1受体激动剂或gskβ的抑制剂在施用至对象用于治疗疾病或疾病的至少一种临床症状时的量，该量足以影响这种疾病或其症状的治疗。“治疗有效量”可以根据例如cxxc5-dvl相互作用面的抑制剂、疾病和/或疾病的症状、疾病的严重性和/或疾病或病症的症状、待治疗对象的年龄、重量、和/或健康状况以及处方医生的判断而变化。
[0143]“治疗有效剂量”是指向对象中的疾病或病症提供有效治疗的剂量。治疗有效剂量可以因化合物和对象而异，并且可以取决于例如对象的病症和给药途径等因素。
[0144]“治疗方案”包括但不限于手术、减肥、健康饮食、体育运动、胰岛素治疗和/或药品/药物治疗。在一些实施方案中，药品/药物治疗包括利用至少一种药剂的一种或多于一
种治疗，所述药剂包括但不限于奥利司他、氯卡色林、芬特明-托吡酯、纳曲酮-安非他酮、利拉鲁肽、苄非他明、二乙胺苯丙酮、磺酰脲类、氯茴苯酸类、噻唑烷二酮类、dpp-4抑制剂、胰岛素类似物、α-葡萄糖苷酶抑制剂、sgl t2抑制剂、西格列汀、二甲双胍、罗格列酮、奥贝胆酸、司隆色替、伊拉布诺、赛尼克韦罗、mgl-3196、gr-md-02、阿拉姆霍尔、glp-1类似物和/或glp-1受体激动剂。
[0145]
任何疾病或病症的“治疗”是指逆转、减轻、抑制或改善疾病或疾病的至少一种临床症状，降低患上疾病或疾病的至少一种临床症状的风险，抑制疾病或疾病的至少一种临床症状的进展，或降低发展疾病或疾病的至少一种临床症状的风险。在一些实施方案中，“治疗”也指在物理上(例如可辨别症状的稳定)、在生理上(例如物理参数的稳定)或在物理上和生理上抑制疾病，和抑制至少一个对对象可辨别或不可辨别的物理参数。在某些实施方案中，“治疗”是指在可能暴露于或易患疾病或病症的对象中延迟疾病或病症或其至少一种或多于一种症状的发作，即使该对象还未经历或表现出疾病的症状。
具体实施方式
[0146]
为了促进对新技术原理的理解，现在将参考其优选实施方案，并且将使用特定的语言来描述这些实施方案。然而，应当理解，这并不意味着对新技术的范围进行限制，与新技术相关的本领域技术人员通常会想到的对新技术原理的这种改变、修改和进一步应用都在本公开和权利要求的范围内。
[0147]
由于神经元功能的丧失或降低，神经退行性疾病具有与各种系统如运动控制、认知、感知、感觉功能和自主神经系统中的功能障碍相关的多种病理状态。神经退行性疾病长期以来被认为是不可治愈的复杂疾病，没有一种药物或其他干预可以成功治疗这些疾病。目前的方法主要在于帮助人们保持精神功能、管理行为症状和减缓疾病的症状。因此，目前还没有通过靶向全身性病理过程来改善神经退行性疾病总体状况的有效药物。
[0148]
代谢性疾病具有与肥胖、致动脉粥样硬化性血脂异常、胰岛素抵抗和发展为2型糖尿病(t2dm)的风险增加相关的多种病理状态。非酒精性脂肪性肝炎(nash)的特征在于由肝脏中脂肪积聚引起的肝脏炎症和损伤。许多受影响的患者表现出肥胖、2型糖尿病、葡萄糖不耐受、血脂异常和/或代谢性疾病。虽然随着肥胖的增加，nash的发病率在世界范围内不断增加，但并未很好地了解其病理机制。
[0149]
最近的研究表明，阿尔茨海默病(ad)和/或帕金森病(pd)具有于胰岛素抵抗和2型糖尿病(t2dm)相关的多种病理状态。伴随着t2dm的全身性胰岛素抵抗可能与帕金森病有关，并且患有帕金森病的患者通常显示出糖耐量减低，其会导致大脑胰岛素抵抗。称为t2dm的病理生理学特征的高胰岛素血症和胰岛素抵抗也被证明对认知障碍具有显著影响。而且，受损的胰岛素信号不仅与α-突触核蛋白积聚和线粒体功能障碍有关，还与帕金森病患者的行为异常如认知障碍、焦虑和抑郁障碍有关。据推测，认知障碍的机制包括脑胰岛素信号障碍、淀粉样蛋白代谢改变、晚期糖基化终末产物积累和氧化应激。另外，一些研究发现，胰岛素信号通路可能在帕金森病中发挥作用，并且糖尿病和神经退行性疾病之间可能有联系。
[0150]
阿尔茨海默病是老年人中最常见的痴呆症，是一种不可逆的大脑退化，会导致扰乱记忆、认知、人格和其他功能，最终导致大脑完全衰竭而死亡。帕金森病是最普遍的痴呆
症，特征在于认知不足和行为改变，其影响记忆和学习能力、日常功能和生活质量。帕金森病可能是由大脑中产生多巴胺的神经元主要损失引起的。
[0151]
胰高血糖素样肽-1(glp-1)是来源于前胰高血糖素基因的30氨基酸长肽类激素，当食物进入十二指肠时从远端小肠分泌。在大脑的中枢神经系统中发现并普遍存在glp-1受体，当受到刺激时，其增强细胞存活并促进神经保护。glp-1影响神经和认知功能，以及其对葡萄糖代谢的调节作用。因此，glp-1受体激动剂已被考虑用于治疗神经退行性疾病，但是目前还没有通过靶向全身性病理过程来改善神经退行性疾病总体状况的有效药物。
[0152]
cxxc指蛋白5(cxxc5)是wnt/β-连环蛋白信号的负调节因子，其通过与细胞质中散乱蛋白(dvl)的pdz结构域相互作用来起作用。cxxc5-dvl相互作用的抑制通过wnt/β-连环蛋白信号的激活改善了几种涉及wnt/β-连环蛋白信号的病理生理学表型，包括骨质疏松症、骨骼纵向生长、皮肤创伤和脱发。
[0153]
如本文所公开的，cxxc5在诊断出患有阿尔茨海默病和/或帕金森病的患者的大脑组织中的表达出人意料地增加。而且，发现在患有阿尔茨海默病和/或帕金森病的患者的大脑组织中，wnt/β-连环蛋白信号靶基因glp-1被伴随cxxc5过表达的β-连环蛋白信号的失活所抑制。而且，wnt/β-连环蛋白通道靶向基因如glp-1、tcf7l2和fosl1在诊断出患有ad和/或pd的患者中被抑制。cxxc5-/-小鼠未出现包括ad和/或pd的神经退行性疾病的任何表型。本文公开的结果表明，cxxc5有助于神经退行性疾病的发展。因此，本公开提供了cxxc5-dvl相互作用面的新功能，其可以用于治疗神经退行性疾病，所述神经退行性疾病包括但不限于ad和/或pd。
[0154]
本文公开的实施方案涉及用于治疗对象中与神经退行性疾病或相关临床病症有关的病症和/或疾病的组合物和方法。在某些实施方案中，本文公开的组合物和方法涉及抑制治疗方案的副作用。其他实施方案涉及用于治疗诊断出患有神经退行性疾病或患有导致以下疾病的病症的对象的组合物和方法：痴呆症、阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、老年性痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、路易体痴呆(lbd)、帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、皮质基底节变性(cbd)、进行性核上性麻痹(psp)、亨廷顿舞蹈病(hd)、肌萎缩性侧索硬化症(als，或也称为卢伽雷氏病)、原发性侧索硬化症(pls)、进行性延髓麻痹(pbp)、进行性肌萎缩(pma)、假性延髓麻痹、遗传性痉挛性截瘫(hsp)、小脑性共济失调、克雅氏病(cjd)、多发性硬化(ms)和/或格林-巴利综合征(gbs)。
[0155]
本文公开的方法包括治疗临床病症的方法，其包括向对象施用至少一个治疗有效剂量的任意一种本文公开的化合物和/或组合物。该对象可以被诊断患有临床病症，所述临床病症是和/或包括神经退行性疾病或其类似的病症。在某些实施方案中，本文公开的方法还包括向对象施用多个治疗有效剂量的任意一种本文公开的化合物和/或组合物。
[0156]
在一些实施方案中，本文公开的组合物包含至少一种抑制对象中cxxc5-dvl相互作用面的药剂。与这些实施方案一致，所述至少一种抑制cxxc5-dvl相互作用面的药剂包括至少一种本文所述的化合物。在一些实施方案中，所述至少一种抑制cxxc5-dvl相互作用面的药剂可以物理地和/或化学地破坏cxxc5-dvl相互作用面的构象。而在一些实施方案中，所述至少一种本文公开的化合物提高对象中glp-1的表达和/或活性。
[0157]
药物组合物
[0158]
本公开提供的药物组合物可以包含治疗有效剂量的一种或多于一种本文公开的
组合物与合适量的一种或多于一种要学上可接受的载体，以提供向对象适当施用的组合物。合适的药物载体在本领域中进行了描述。
[0159]
适合用于口服施用的本公开的药物组合物可以以离散单位存在，例如胶囊、扁囊剂、片剂或锭剂，每种含有预定量的活性成分；以粉末或颗粒存在；以溶液或在水性液体或非水性液体中的悬浮液，例如糖浆、酏剂或饮剂，或者作为水包油液体乳液或油包水液体乳液存在。组合物也可以以大丸剂、药糖剂或糊剂形式存在。可以通过将活性成分与药学上可接受的载体压制或模制来制备片剂。压制片剂可以通过在合适的机器中压制与例如黏合剂、惰性稀释剂、润滑剂、崩解剂和/或表面活性剂混合的如粉末或颗粒的自由流动形式的活性成分来制备。模制片剂可以通过在合适的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物模制来制备。片剂可以任选地进行包衣或刻痕，并且可以进行配制以提供活性成分的缓慢释放或控制释放。
[0160]
适合用于肠胃外施用的本公开的药物组合物包括含水和不含水无菌注射溶液，还可以包括抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使组合物与受体的血液等渗的溶液，和含水和不含水无菌悬浮液，其可以含有例如悬浮剂和增稠剂。该制剂可以存在于单剂量或多剂量容器中，并且可以在冻干条件下储存，其在使用前需要加入无菌液体载体。
[0161]
药学上可接受的盐包括本公开提供的化合物的盐，其在用于哺乳动物中是安全有效的并且具有所需的治疗活性。药学上可接受的盐包括本公开提供的化合物中存在的酸性或碱性基团的盐。药学上可接受的酸加成盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖二酸盐(glucaronate)、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即1,1
’‑
亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸酯))盐。某些公开的化合物可以与各种各样的氨基酸形成药学上可接受的盐。合适的碱式盐包括但不限于铝盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐、锌盐和二乙醇胺盐。可以用于实践本文描述的方法的一些药学上可接受的盐的其他信息请参见例如berge等人，66 j.pharm.sci.1-19(1977),haynes等人，j.pharma.sci，第94卷，第10期，2005年10月，第2111-2120页等。
[0162]
在一些实施方案中，组合物可以含有药学上可接受的润滑剂。药学上可接受的润滑剂防止药物组合物的组分结块并防止黏附到产生所公开的组合物的压粒机上。润滑剂还确保在组合物和模压机壁之间的低摩擦下形成团粒以及从压粒机中脱模。在一些实施方案中，将润滑剂添加到药物组合物中，以改善加工特性，例如帮助增加组合物的柔韧性，从而减少破坏。
[0163]
可用于所公开的药物组合物中的润滑剂的类型可以变化。在一些实施方案中，药学上可接受的润滑剂选自滑石、二氧化硅、植物脂、硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钙、山嵛酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、矿物油、聚乙二醇、硬脂基富马酸钠、月桂基硫酸钠、植物油、硬脂酸锌及其组合。在一些实施方案中，药学上可接受的润滑剂是硬脂酸。
[0164]
可用于所公开的药物组合物中的载体的类型可以变化。在一些实施方案中，药学上可接受的载体选自黏合剂、填料及其组合。在一些实施方案中，药学上可接受的载体选自抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮k-30(聚维酮k-30)、单硬脂酸甘油酯(gms)或
单硬脂酸甘油酯盐、山嵛酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、糖、葡聚糖、玉米淀粉、磷酸氢钙、磷酸氢钙二水合物、硫酸钙、磷酸二钙、磷酸三钙、乳糖、纤维素(包括微晶纤维素)、甘露醇、氯化钠、干淀粉、预胶化淀粉、可压缩糖、甘露醇、乳糖一水合物、淀粉、磷酸氢钙二水合物、硫酸钙、磷酸二钙、磷酸三钙、粉状纤维素、微晶纤维素、乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露糖、右旋糖、半乳糖、相应的糖醇及其他糖醇，例如甘露醇、山梨醇、木糖醇，以及上述任何物质的组合。在一些实施方案中，药学上可接受的载体是聚乙烯吡咯烷酮k-30，也称为聚维酮k-30。在一些实施方案中，药学上可接受的载体是聚乙烯吡咯烷酮k-30，也称为聚维酮k-30，其平均分子量mw为40000(cas 9003-39-8)。在一些实施方案中，药学上可接受的载体选自单硬脂酸甘油酯(gms)或单硬脂酸甘油酯盐、山嵛酸甘油酯和棕榈酸硬脂酸甘油酯。在一些实施方案中，药学上可接受的载体是单硬脂酸甘油酯(gms)或单硬脂酸甘油酯盐。在一些实施方案中，药学上可接受的载体是山嵛酸甘油酯。在一些实施方案中，药学上可接受的载体是棕榈酸硬脂酸甘油酯。
[0165]
在一些实施方案中，抗氧化剂防止所公开的组合物的其他组分的氧化。氧化可以发生在例如产生自由基的杀菌过程中。添加抗氧化剂或自由基清除剂显著减少了氧化，并使组合物在对象中使用时更加在药学上可接受。
[0166]
可用于所公开的药物组合物中的抗氧化剂的类型可以变化。在一些实施方案中，抗氧化剂选自对羟基苯甲酸甲酯及其盐、对羟基苯甲酸丙酯及其盐、维生素e、维生素e tpgs、没食子酸丙酯、亚硫酸盐、抗坏血酸(又名l-抗坏血酸，也包括抗坏血酸的l-对映异构体、维生素c)、苯甲酸钠、柠檬酸、环糊精、过氧化物清除剂、苯甲酸、乙二胺四乙酸(edta)及其盐、链终止剂(例如硫醇和酚)、丁基化羟基甲苯(bht)、丁基化羟基茴香醚(bha)及其组合。
[0167]
用途或治疗方法
[0168]
本文公开的方法和组合物可用于治疗患有神经退行性疾病、障碍、病症和症状的对象，已知cxxc5-dvl相互作用面和/或gskβ的抑制剂可提供或之后发现提供治疗益处。
[0169]
在一些实施方案中，本文公开的方法包括治疗神经退行性疾病或其临床病症的方法，其包括向对象施用至少一个治疗有效剂量的本文公开的任意组合物。对象可以被诊断患有临床病症，所述临床病症选自和/或包括痴呆症、阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、老年性痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、路易体痴呆(lbd)、帕金森病(pd)、多系统萎缩(msa)、皮质基底节变性(cbd)、进行性核上性麻痹(psp)、亨廷顿舞蹈病(hd)、肌萎缩性侧索硬化症(als，或也称为卢伽雷氏病)、原发性侧索硬化症(pls)、进行性延髓麻痹(pbp)、进行性肌萎缩(pma)、假性延髓麻痹、遗传性痉挛性截瘫(hsp)、小脑性共济失调、克雅氏病(cjd)、多发性硬化(ms)和/或格林-巴利综合征(gbs)。在某些实施方案中，本文公开的方法还包括向对象施用至少一个另外的治疗有效剂量的本文公开的任意组合物。在一些实施方案中，所述至少一个治疗有效剂量的本文公开的任意组合物可以通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、吸入和/或经皮施用。
[0170]
而其他实施方案可以包括用于减少治疗方案的副作用的方法，其包括向对象施用至少一个治疗有效剂量的至少一种药剂，所述药剂抑制对象中cxxc5-dvl相互作用面和/或提高glp-1的表达和/或活性；其中所述对象已接受至少一种治疗方案，所述治疗方案包括药物治疗、手术、治疗，并且其中所述对象经历至少一种来源于治疗方案的副作用。与这些
实施方案一致，副作用可以包括但不限于耐药性和/或复发。
[0171]
试剂盒
[0172]
在其他方面，本公开提供试剂盒，这种试剂盒包含：一种或多于一种药物组合物(每种组合物在容器内灭菌)、用于将药物组合物施用至对象的工具、以及使用说明书。
[0173]
一些实施方案包括用于进行本文所述的方法的试剂盒。这种试剂盒通常包括两种或多于两种治疗临床病症所需的组成部分。试剂盒的组成部分包括但不限于一种或多于一种本文公开的药剂/组合物、试剂、容器、装置和/或使用试剂盒的说明书。因此，本文公开的组合物和方法可以通过利用本文公开的预包装试剂盒来进行。
[0174]
实施例
[0175]
以下实例说明了本公开的各个方面。对于本领域技术人员来说，显而易见的是，在不脱离本公开的范围的情况下，可以对材料和方法进行许多修改。
[0176]
cxxc5型锌指蛋白5(cxxc5)是wnt/β-连环蛋白通路的负反馈调节因子，通过散乱蛋白(dvl)结合来起作用。cxxc5发挥多种病理生理作用，涉及再生组织重塑，尤其是在特定的病理生理状态下。然而，cxxc5在神经退行性疾病过程中的作用尚未明确。在本公开中，出人意料地发现，cxxc5在ad和/或pd患者的大脑组织和/或外周血中高度表达，因此，wnt/β-连环蛋白靶基因如glp-1的表达减少。
[0177]
如本文所公开的，干涉cxxc-dvl蛋白-蛋白相互作用(ppi)的小分子包括但不限于a3334和/或a3051，被认定和表征为可以改善诊断患有ad和pd的患者中glp-1的表达和活性的潜在药物。靛玉红衍生物通过激活wnt/β-连环蛋白信号靶基因发挥这些功能，所述靶基因涉及代谢，包括glp-1，通过cxxc5释放该途径的负反馈功能。因此，本公开涉及使用本文公开的靛玉红类似物诱导/激活对象的glp-1、将神经干细胞分化为产生多巴胺的神经细胞以及治疗包括ad和pd的神经退行性疾病。
[0178]
生物信息数据分析。cxxc5和glp-1 mrna表达的跨物种比较在来自geo数据库的分子途径基因组的空间中进行，并且在两个人帕金森氏病和人/小鼠阿尔茨海默病转录组数据集的任一个中由学生的t-检验定义了具有统计学意义的显著失调：正常(n＝4)对比帕金森病患者(n＝4)对象，正常(n＝13)对比阿尔茨海默病患者(n＝13)对象，以及对照(n＝7)对比吡格列酮(n＝7)。
[0179]
血液化学。通过心脏穿刺收集小鼠的全血。允许血液凝结30分钟，然后在3000x g下离心30分钟，以获得上清液来测量活性glp-1的浓度。lisa检测试剂盒用于评估血清活性glp-1(7-36)。
[0180]
定量实时聚合酶链反应(pcr)。根据制造商的说明书，使用trizol试剂(invitrogen)从研磨的组织粉末中提取总rna。使用2μg总rna用m-mlv逆转录酶(invitrogen)进行逆转录。将合成的cdna稀释为100ng/μl的浓度。使用sybr green试剂(qiagen)在rotor-gene q实时pcr循环仪(qiagen)中进行定量pcr分析，条件为95℃持续10分钟，然后在95℃持续5秒和60℃持续15秒下进行40个循环。使用对比ct法(aact)估计mrna水平的相对定量。glp-1 mrna值根据gapdh标准化。
[0181]
神经干细胞(nsc)培养。从e14.5大鼠的前脑中提取nsc，并通过在含有10ng/ml bfgf(peprotech)的培养基中培养来维持在未分化状态。用每种化合物(10μm)处理未分化的nsc(1
×
105)，并通过在24小时后拍摄细胞的黑白图像来评估细胞形态。
[0182]
动物。cxxc5-/-小鼠的产生之前已有描述。cxxc5杂合子小鼠杂交四代以获得同窝出生的野生型和cxxc5-/-小鼠，并维持在c57bl/6背景上。六周龄的cxxc5
/
和cxxc5-/-小鼠用hfd喂养8周。野生型雄性c57bl/6小鼠(韩国首尔koatech)用由来自脂肪(研究饮食，di2492)的60％卡路里组成的hfd喂养8周。为了验证成功建立了胰岛素抵抗小鼠模型，用one touch ultra血糖仪(lifescan)评估空腹血糖水平。然后，空腹血糖水平高于16.7毫摩尔/升的每只hfd喂养小鼠在第8周和第12周每天口服a3334(25mg
·
kg-1
)、西格列汀(50mg
·
kg-1
)或二甲双胍(100mg
·
kg-1
)5天。去除药物后，保持小鼠以hfd喂养3周。为了监测胰腺再生，用如上所述的hfd喂养六周龄的cxxc5
/
和cxxc5-/-小鼠。饮食治疗4周后，对小鼠腹腔内注射stz(50mg/kg/d)1周，对照组注射生理盐水。两周后，对cxxc5
/
小鼠每天口服灌胃施用a3334或a3051(25mg
·
kg-1
)以及西格列汀(50mg
·
kg-1
)持续4周。
[0183]
dvl-cxxc5体外结合分析。对于dvl-cxxc5体外结合分析，将100μl的5mg/ml纯化的dvl pdz结构域添加至96孔maxibinding immunoplate(spl)中，并在4℃室中孵育过夜。用pbs洗涤后，将10μm polyr-dbm
37
添加至每个孔，并在室温下孵育3h。用pbs洗涤后，将100μl的1μm、5μm和10μm的pbs中的a3334添加至每个孔，并在室温下孵育1h。用pbs洗涤三次后，使用fluorstar optima酶标仪(bgm lab technologies)测量每个孔的荧光。用于筛选的a3334由dr gyoonhee han(韩国首尔延世大学)设计和合成。
[0184]
免疫蛋白印迹法。在ripa缓冲液(150mm nacl，l0mm tris，ph 7.2，0.1％sds，1.0％triton x-100，1％脱氧胆酸钠和5mm edta)中裂解之前，用研钵和研杵研磨h4和h4/swe细胞。样品在6％至12％sds聚丙烯酰胺凝胶上分离，并转移到pro tran硝酸纤维素膜(schleicher和schuell co)上。用含有5％脱脂奶粉和0.07％(体积/体积)吐温20的pbs封闭膜，并用对β-连环蛋白(1：1000，santa cruz biotechnology，inc.)、cxxc5(1：500，santa cruz biotechnology，inc.)、p-gsk3β(s9)(1：500，santa cruz biotechnology，inc.)特异的抗体孵育。然后将膜与辣根过氧化物酶标记的抗兔(1：5000，bio-rad laboratories)或抗小鼠(1：5000，cell signaling technology)igg二级抗体一起孵育。使用发光图像分析仪las-3000(fujifilm)用增强化学发光(ge healthcare)观察蛋白质条带。使用multi-gauge v3.0软件(fujifilm)分析蛋白质印迹条带。
[0185]
免疫细胞化学分析。用pbs洗涤用每种化合物处理的h4或h4/swe细胞，并在室温下在pbs中的4％(重量/体积)多聚甲醛(pfa)中固定15分钟。然后用pbs洗涤细胞，并用pbs中的0.1％(体积/体积)triton x-100渗透化15分钟。用pbs洗涤后，将细胞与pbs中的10％牛血清白蛋白(bsa)孵育30分钟，然后与对β-连环蛋白特异的抗体(1：100；bd)在4℃下孵育过夜。在pbs中洗涤细胞，并与alexa fluor 488偶联igg二次抗体(1：400；molecular probes)在室温下孵育1h。将细胞核用dapi复染10分钟，并在lsm510 meta显微镜下检查染色的样品。
[0186]
人aβ42 elisa测试。在含有10％胎牛血清(fbs)的dulbecco改良eagle培养基(dmem,gibco)培养h4或h4/swe细胞，并在5％co2和95％空气湿润的气氛中生长至聚集。将细胞接种在补充有10％fbs的dmem中的6孔板，并使其黏附过夜。用每种化合物(1-20μm)处理细胞24小时，并收集在1ml的培养基中。用蛋白酶抑制剂混合物(pic)处理样品以避免淀粉样蛋白p被蛋白酶降解，并以3000rpm离心3分钟。根据人aβ42elisa试剂盒方案(invitrogen)的指导进行实验。通过测量总蛋白浓度使分泌的淀粉样蛋白β的量标准化。
[0187]
统计分析。数据以平均值
±
标准偏差(sd)表示。使用不成对的双尾学生f检验进行统计分析。星号表示统计上的显著差异(*，p《0.05；**,p《0.01；***,p《0.005)。
[0188]
[0189]
[0190][0191]
筛选抑制cxxc5-dvl相互作用的化合物。为了初步鉴定抑制cxxc5-dvl相互作用的小分子，通过先前描述的体外结合试验筛选化学库(2280种化合物：1000种来自chemdiv，1280种来自sigmalopac)。参见例如kim等人，(2015)cxxc5 is a negativefeedback regulator of the wnt/beta-catenin pathway involved in osteoblast differentiation.cell.death.differ.22,912-920。简而言之，将5mg/ml纯化的dvl-pdz结构域在96孔maxibinding immunoplate(韩国首尔spl)的每个孔中在4℃下孵育16h。向每个孔中加入10μm fitc标记的ptd-dbmp之后，对孔中的化学库或对照(dmso)中的每种化合物进行处理，最
终浓度为30μm。使用fluorstar optima酶标仪(德国奥尔登堡bgm lab technologic)测量荧光强度，并标准化如下：“(
‘
化合物处理组’—
‘
空白’)/(dmso-处理对照’—
‘
空白’)*100”。
[0192]
选择19种化合物作为初始命中化合物，其抑制cxxc5-dvl(pzd-dvl-ptd-dbmp(fitc)相互作用超过90％，并且通过使用在其染色体中含有ptopflash报道基因的hek293细胞证实了它们激活wnt/β-连环蛋白通道的能力。在这些化合物中，鉴定出靛玉红类似物，包括bio和i3o。高通量筛选结果的总结示于表1。
[0193]
表1.高通量筛选结果汇总
[0194][0195]
表2.使用包含2280个小分子的化学库，通过体外cxxc5-dvl ppi抑制试验筛选出的顶级化合物的列表
[0196]
[0197]
[0198][0199]
靛玉红类似物化合物(#8和#12；表2)被反复认定为cxxc5-dvl抑制剂，并且使用报道基因分析显示出在wnt/β-连环蛋白通道的激活中的有效性。为了获得功能改进的化合物，基于靛玉红-3
’‑
肟(i3o)的结构，通过取代靛玉红主链的r1和r2位点的官能团，新合成了约60种靛玉红衍生物(#12；表2)。表3至表5描述了新合成的靛玉红衍生物，这些化合物的结构示于图11和图12。
[0200]
[0201]
[0202]
[0203][0204]
表5.显示至少部分抑制cxxc5-dvl活性的化学合成化合物的列表
[0205]
编号化合物#iupac名称3’部分1a46645-氟靛玉红o
2a46655-氟靛玉红-3
’‑
肟noh3a46666-溴靛玉红o4a46676-溴靛玉红-3
’‑
肟noh
[0206]
wnt/β-连环蛋白通路在病理过程中发挥作用，其应答基因可作为代谢性疾病的治疗靶点。cxxc5型锌指蛋白5(cxxc5)是wnt/β-连环蛋白通路的负反馈调节因子，通过散乱蛋白(dvl)结合来起作用。如本文所提供的，在人大脑组织、血液和小鼠模型中研究cxxc5在神经退行性疾病中的功能作用以及cxxc5和wnt/β-连环蛋白信号之间的关系。cxxc5在ad和/或pd患者的大脑和中枢神经系统中出人意料地过表达。
[0207]
喂养高脂肪饮食(hfd)的cxxc5-/-小鼠中glp-1和其他wnt/β-连环蛋白信号靶基因的相对mrna表达增加。本文提供的这些结果表明cxxc5作为治疗神经退行性疾病的治疗靶点。抑制cxxc5-dvl相互作用的小分子恢复了在hfd喂养的cxxc5-/-小鼠中观察到的表型。施用至少一种本文所述的化合物和/或组合物增加了hfd喂养的小鼠的血清活性glp-1水平。与ddp-4抑制剂西格列汀的效果相反，在hfd喂养的stz诱导的糖尿病小鼠中，血清活性glp-1水平的增加显著更高。总的来说，通过小分子介导的干扰dvl结合来抑制cxxc5活性可能是治疗包括ad和pd的神经退行性疾病的潜在治疗方法。
[0208]
诊断患有阿尔茨海默病和/或帕金森病的患者大脑中cxxc5水平升高和glp-1水平降低。现参考图1a至1b，诊断患有ad或pd的患者的外周血或血单核细胞中cxxc5的表达显著增加，而这些患者中glp-1的表达显著低于健康对照组。设计用于控制cebpα/pparβ的糖尿病药物吡格列酮抑制了cxxc5的表达，表明在神经退行性疾病中cxxc5过表达的抑制作用可以通过控制糖尿病来抑制(图1c)。总之，这些结果表明glp-1的表达可以由cxxc5过表达来抑制，cxxc5过表达通过cxxc5-dvl ppi的机制抑制wnt/β-连环蛋白通道。
[0209]
与用正常饮食喂养的小鼠(ncd)相比，用hfd喂养的小鼠在附睾白色脂肪组织(epiwat)、胰腺和肠中的glp-1 mrna表达较低。现参考图2a-2c，当给cxxc5
/
小鼠喂养高脂肪饮食(hfd)时，与喂养正常食物(ncd)的cxxc5
/
小鼠相比，epiwat中glp-1和其他wnt/β-连环蛋白信号靶基因(tcf7l2，axin2，dvl1，wisp1和fosl1)的相对表达水平降低。当给cxxc5-/-小鼠喂养hfd时，epiwat中glp-1和其他wnt/β-连环蛋白信号靶基因(tcf7l2，axin2，dvl1，wisp1和fosl1)的相对表达水平得到恢复(图2b)。用a3334治疗恢复了在hfd喂养的cxxc5-/-小鼠中观察到的表型，而西格列汀治疗没有恢复(图2c)。
[0210]
cxxc5-/-hfd-小鼠或stz诱导的cxxc5-/-hfd-小鼠中血清活性glp-1水平得到恢复。糖尿病是主要的代谢性疾病之一，并且目前临床上可用的药物包括磺脲类药物、sglt2抑制剂、pparγ激动剂、dpp4抑制剂和双胍类药物，它们可以通过作用于外周胰岛素靶组织如胰腺、肠、肌肉和肝脏来控制血糖水平。候选药物的一个实例是a3334，其恢复了饮食诱导的肥胖和糖尿病模型中受到抑制的wnt/β-连环蛋白通道，显示了与主要抗糖尿病药物、dpp4抑制剂西格列汀和双胍类药物二甲双胍相似的初始时间效应(数据未显示)。现参考图3a-3b，hfd诱导的低血清活性glp-1水平在cxxc5-/-小鼠和stz诱导的糖尿病cxxc5-/-小鼠中得都得到恢复。在hfd-小鼠和stz诱导的糖尿病hfd-小鼠中的a3334治疗将血清活性glp-1水平恢复到与喂养ncd的小鼠相当的水平。设计通过dpp4抑制来稳定glp-1的抗糖尿病药物西格列汀也用作阳性对照。与从西格列汀治疗中观察到的效果相比，a3334治疗显著挽救(增加)了血清中活性glp-1的表达。
[0211]
cch诱导的cxxc5-/-hfd-小鼠中血清活性glp-1水平得到恢复。现参考图5，hfd和cch诱导的血清活性glp-1水平的抑制通过在nash小鼠模型中敲除cxxc5来恢复。用a3334或a3051治疗显著挽救(增加)了血清中活性glp-1的表达，并模仿了cxxc5敲除所观察到的效果。然而，使用司隆色替和奥贝胆酸治疗没有任何效果(图6a-6b)。
[0212]
a3051诱导大鼠神经干细胞(nsc)的神经分化。现参考图7a-7b，从e14小鼠胚胎中分离nsc，并维持在含有bfgf和egf的维持培养基(补充)中。通过处理不同浓度的a3051来诱导神经元分化。在靛玉红类似物3051处理后24小时使用亮视野光学显微镜捕获细胞形态。
[0213]
app瑞典突变型神经胶质瘤h4细胞系中cxxc5水平升高和β-连环蛋白水平降低。现参考图8a-8b，使用具有导致早发性阿尔茨海默病的淀粉样前体蛋白(app-swe)的瑞典突变(k595n/m596l)的h4/swe细胞来证实cxxc5和β-连环蛋白的表达。蛋白质免疫印迹分析显示，与h4 wt细胞系相比，h4/swe细胞系具有较低的β-连环蛋白、gsk3β无活性形式(p-gsk3β(s9))表达水平和较高的cxxc5表达水平。
[0214]
几种靛玉红类似物化合物，包括a3051和a3334，增加了h4/swe细胞中β-连环蛋白的水平和核转位。现参考图9a-9b，与h4 wt细胞相比，h4/swe细胞显示出较低的β-连环蛋白表达。几种化合物，包括a3334、a3051、靛玉红、i3o和bio，恢复了h4/swe细胞中降低的β-连环蛋白水平，并增加了p-gsk3β(s9)，如蛋白质免疫印迹分析所示(图9a)。a3334和a3051也降低了这些细胞中cxxc5的水平(图9a)。免疫细胞化学分析也证明了,几种靛玉红类似物化合物，尤其是a3334和a3051，增加了h4/swe细胞中β-连环蛋白的核转位(图9b)。
[0215]
a3051和a3334抑制h4/swe细胞中aβ-42分泌的增加。现参考图10，用a3051和a3334，尤其是a3051进行处理，抑制了h4/swe细胞中aβ-42的分泌。
[0216]
虽然在附图和前面的描述中已经详细说明和描述了新技术，但是这些被认为是说明性的而不是限制性的，应理解，仅显示和描述了优选实施方案，并且在新技术的精神范围内的所有变化和修改都希望得到保护。此外，尽管使用具体的实施例、理论论据、描述和图示说明了新技术，但是这些图示和伴随的讨论决不应该被解释为限制该技术。在本技术中引用的所有专利、专利申请和对文本、科学论文、出版物等的参考文献在不与本说明书的明确教导相矛盾的程度上通过引用整体结合于此。