PLGA载药微球的制备方法以及PLGA载药微球与流程

disease,critrevtherdrug31(2)(2014)89-119。10.[6]m.ghavami-lahiji,f.shafiei,f.najafi,m.erfan,drug-loadedpolymericfilmsasapromisingtoolforthetreatmentofperiodontitis,jdrugdelivscitec52(2019)122-129。[0011][7]m.szulc,a.zakrzewska,j.zborowski,localdrugdeliveryinperiodontitistreatment:areviewofcontemporaryliterature,dentalandmedicalproblems55(3)(2018)333-342。[0012][8]q.x.ji,q.s.zhao,j.deng,r.lü,anovelinjectablechlorhexidinethermosensitivehydrogelforperiodontalapplication:preparation,antibacterialactivityandtoxicityevaluation,journalofmaterialsscience:materialsinmedicine21(8)(2010)2435-2442。[0013][9]s.rajendran,k.s.kumar,s.ramesh,s.r.rao,thermoreversibleinsitugelforsubgingivaldeliveryofsimvastatinfortreatmentofperiodontaldisease,internationaljournalofpharmaceuticalinvestigation7(2)(2017)101-106。技术实现要素：[0014]基于此，有必要提供一种可以提高plga载药微球的载药量的plga载药微球的制备方法。[0015]此外，还有必要提供一种上述plga载药微球的制备方法制得的plga载药微球。[0016]一种plga载药微球的制备方法，包括如下步骤：[0017]提供plga和负载药物的混合溶液；[0018]对所述plga和负载药物的混合溶液进行静电喷加工，得到加工混合物；以及[0019]从所述加工混合物中分离得到所需要的plga载药微球。[0020]在一个实施例中，所述对所述plga和负载药物的混合溶液进行静电喷加工的操作为：将所述plga和负载药物的混合溶液装入设有电喷雾针的注射器中，在所述电喷雾针和接收溶液之间施加电压，推动所述注射器，将所述plga和负载药物的混合溶液从所述电喷雾针喷入所述接收溶液内。[0021]在一个实施例中，所述接收溶液为聚乙烯醇溶液、维生素e溶液、二甲胺基甲硼烷溶液或泊洛沙姆407溶液；[0022]所述聚乙烯醇溶液的浓度为0.25％w/v～4％w/v，所述维生素e溶液的浓度为0.03％w/v～1％w/v，所述二甲胺基甲硼烷溶液的浓度为0.1％w/v～1％w/v，所述泊洛沙姆407溶液的浓度为0.1％w/v～1％w/v。[0023]在一个实施例中，所述电喷雾针和接收溶液之间施加的电压为15kv～20kv，所述电喷雾针和所述接收溶液之间的距离为10cm～20cm，所述电喷雾针的直径为18g～27g，所述注射器的推动速度为1μl/min～50μl/min。[0024]在一个实施例中，所述plga和负载药物的混合溶液中，所述plga和所述负载药物的质量比为5：0.3～0.7。[0025]在一个实施例中，所述plga和负载药物的混合溶液通过如下操作制备：将plga溶液和负载药物饱和溶液混合均匀，得到所述plga和负载药物的混合溶液，其中，所述plga溶液的浓度为0.1g/ml～0.16g/ml。[0026]在一个实施例中，所述plga溶液的溶剂为乙腈或丙酮，所述负载药物饱和溶液的溶质为米诺环素、盐酸米诺环素、多西环素或盐酸多西环素，所述负载药物饱和溶液的溶剂为甲醇或乙醇。[0027]在一个实施例中，所述plga溶液通过如下操作制备：将所述plga溶解在所述plga溶液的溶剂中，持续搅拌至无明显结晶后半小时停止，得到所述plga溶液；[0028]所述负载药物饱和溶液通过如下操作制备：将所述负载药物溶解到所述负载药物饱和溶液的溶剂中，用涡旋震动方式至溶解，得到所述负载药物饱和溶液。[0029]在一个实施例中，所述从所述加工混合物中分离得到所需要的plga载药微球的操作为：将所述加工混合物离心去除液相后，得到plga载药微球，将所述plga载药微球分散到超纯水中并在-75℃～-80℃预冻1h～12h后，冷冻干燥得到干燥的所述plga载药微球。[0030]一种plga载药微球，由上述的plga载药微球的制备方法制备得到。[0031]结合说明书实施例部分的数据可以看出，这种plga载药微球的制备方法制得的plga载药微球具有较高的载药量，相对于传统的plga载药微球，这种plga载药微球的制备方法制得的plga载药微球的载药量得到了提高。[0032]此外，这种plga载药微球的制备方法可以通过调控不同浓度、不同种类的接收溶液来提高plga载药微球的载药效率。附图说明[0033]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。[0034]其中：[0035]图1为一实施方式的plga载药微球的制备方法的流程图。[0036]图2为实施例1制得的plga载药微球的载药率测试结果图。[0037]图3为实施例2制得的plga载药微球的载药率测试结果图。[0038]图4为实施例3制得的plga载药微球的载药率测试结果图。[0039]图5为实施例4制得的plga载药微球的载药率测试结果图。[0040]图6为实施例5制得的plga载药微球的载药率测试结果图。[0041]图7为实施例1制得的plga载药微球的释药时间测试结果图。[0042]图8为实施例2制得的plga载药微球的释药时间测试结果图。[0043]图9为实施例3制得的plga载药微球的释药时间测试结果图。[0044]图10为实施例4制得的plga载药微球的释药时间测试结果图。[0045]图11为实施例5制得的plga载药微球的释药时间测试结果图。具体实施方式[0046]下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。[0047]结合图1，本发明公开了一实施方式的额plga载药微球的制备方法，包括如下步骤：[0048]s10、提供plga和负载药物的混合溶液。[0049]本实施方式中，plga和负载药物的混合溶液通过如下操作制备：将plga溶液和负载药物饱和溶液混合均匀，得到plga和负载药物的混合溶液，其中，plga溶液的浓度为0.1g/ml～0.16g/ml。[0050]负载药物饱和溶液的浓度由实际的负载药物和溶剂确定。[0051]在其他的实施方式中，plga和负载药物的混合溶液也可以通过其他方法制备，只要能够得到均一的溶液即可。[0052]本实施方式中，plga可以为酸端基或脂端基。[0053]本实施方式中，plga溶液的溶剂为乙腈或丙酮，负载药物饱和溶液的溶质为米诺环素、盐酸米诺环素、多西环素或盐酸多西环素，负载药物饱和溶液的溶剂为甲醇或乙醇。[0054]上述plga溶液的溶剂(或负载药物的溶剂)的具体选择，需要同时满足溶解性、无毒(或低毒性)以及s20中满足静电喷加工的需求，即，理论上满足上述需求的溶剂，均可以用作plga溶液的溶剂(或负载药物的溶剂)。[0055]本实施方式中，plga溶液通过如下操作制备：将plga溶解在plga溶液的溶剂中，持续搅拌至无明显结晶后半小时停止，得到plga溶液。[0056]一般来说，得到的plga溶液为透明粘稠液体。[0057]本实施方式中，负载药物饱和溶液通过如下操作制备：将负载药物溶解到负载药物饱和溶液的溶剂中，用涡旋震动方式至溶解，得到负载药物饱和溶液。[0058]得到的负载药物饱和溶液需要在4摄氏度低温保存。[0059]在具体的制备过程中，plga和负载药物的质量比可以根据实际需求设置。[0060]优选的，本实施方式中，plga和负载药物的混合溶液中，plga和负载药物的质量比为5：0.3～0.7。[0061]s20、对s10得到的plga和负载药物的混合溶液进行静电喷加工，得到加工混合物。[0062]静电喷加工是一种利用高压电场将聚合物溶液雾化成球的过程，其可通过调节工艺参数及溶液本身性质、得到不同形貌微球。[0063]本实施方式中，对plga和负载药物的混合溶液进行静电喷加工的操作为：将plga和负载药物的混合溶液装入设有电喷雾针的注射器中，在电喷雾针和接收溶液之间施加电压，推动注射器，将plga和负载药物的混合溶液从电喷雾针喷入接收溶液内。[0064]需要指出的是，收集器在接收过程中需不断晃动，避免值得的plga载药微球聚集成团。[0065]优选的，接收溶液为聚乙烯醇(polyvinylalcohol，pva)溶液、维生素e(vitamine)溶液、二甲胺基甲硼烷(didodecyldimethylammoniumbromide，dmab)溶液或泊洛沙姆407(poloxamer407)溶液。[0066]接收溶液为不同种类的表面活性剂的水溶液，可将微球很好的分散在液态溶液中，同时减少微球在制备过程中的药物损失。[0067]本实施方式中，聚乙烯醇溶液、维生素e溶液、二甲胺基甲硼烷溶液和泊洛沙姆407溶液的溶剂均为超纯水。[0068]优选的，聚乙烯醇溶液的浓度为0.25％w/v～4％w/v，维生素e溶液的浓度为0.03％w/v～1％w/v，二甲胺基甲硼烷溶液的浓度为0.1％w/v～1％w/v，泊洛沙姆407溶液的浓度为0.1％w/v～1％w/v。[0069]这里需要指出，w/v为质量体积比，1％w/v＝1g/100ml。[0070]具体来说，聚乙烯醇溶液的浓度可以为0.25％w/v、0.5％w/v、1％w/v、2％w/v、4％w/v，维生素e溶液的浓度可以为0.03％w/v、0.3％w/v、1％w/v，二甲胺基甲硼烷溶液的浓度可以为0.1％w/v、0.25％w/v、0.5％w/v、1％w/v，泊洛沙姆407溶液的浓度可以为0.1％w/v、0.25％w/v、0.5％w/v、1％w/v。[0071]在具体的制备过程中，静电喷加工的具体参数可以根据实际需求设置。[0072]优选的，本实施方式中，电喷雾针和接收溶液之间施加的电压为15kv～20kv，电喷雾针和接收溶液之间的距离为10cm～20cm，电喷雾针的直径为18g～27g，注射器的推动速度为1μl/min～50μl/min。[0073]具体来说，电喷雾针和接收溶液之间施加的电压为18kv，电喷雾针和接收溶液之间的距离为17cm，电喷雾针的直径为21g，注射器的推动速度为10μl/min。[0074]s30、从s20得到的加工混合物中分离得到所需要的plga载药微球。[0075]具体来说，本实施方式中，s30为：将加工混合物离心去除液相后，得到plga载药微球，将plga载药微球分散到超纯水中-75℃～-90℃(优选为-80℃)预冻1h～12h后，冷冻干燥得到干燥的plga载药微球。[0076]离心的操作中，转速为3000rpm～10000rpm。[0077]需要指出的是，当采用聚乙烯醇溶液作为接收溶液时，由于粘度聚乙烯醇溶液过大，增加了洗涤步骤。[0078]即，s30具体为：将加工混合物离心去除液相后，得到plga载药微球，后用超纯水清洗三次，再次离心去除超纯水后，再将plga载药微球分散到超纯水中保存1h～12h后，冷冻干燥得到干燥的plga载药微球。[0079]结合说明书具体实施例部分的数据可以看出，这种plga载药微球的制备方法制得的plga载药微球具有较高的载药量，相对于传统的plga载药微球，这种plga载药微球的制备方法制得的plga载药微球的载药量得到了提高。[0080]此外，这种plga载药微球的制备方法可以通过调控不同浓度、不同种类的接收溶液来提高plga载药微球的载药效率。[0081]此外，结合说明书具体实施例部分的数据还可以看出，这种plga载药微球的制备方法制得的plga载药微球可以满足在较长时间内持续释放负载药物。[0082]本发明还公开了一实施方式的由上述的plga载药微球的制备方法制备得到的plga载药微球。[0083]以下为具体实施例。[0084]实施例1[0085](1)将5g酸端基plga(purac)溶解在50ml丙酮溶液(sigma-aldrich)中，持续搅拌至无明显结晶后半小时停止，可观测到透明粘稠液体，得到无色透明的plga溶液。[0086](2)将0.5g盐酸多西环素(sigma-aldrich)溶解到微量(以溶解度计算)甲醇溶液(sigma-aldrich)中，用涡旋震动方式至溶解，得到的盐酸多西环素溶液在4摄氏度低温保存。[0087](3)将plga溶液与盐酸多西环素溶液进行混合，迅速搅拌得到混合溶液。[0088](4)采用静电喷加工设备，分别以浓度为0.1％w/v、0.25％w/v、0.5％w/v、1％w/v的二甲胺基甲硼烷溶液(sigma-aldrich)作为接收溶液，对(3)中所获得的混合溶液进行静电喷加工，将混合溶液装入注射器，并以恒定速度推动，速度为10μl/分钟。在电喷雾针(直径为21g)和接收溶液之间施加18kv的电压，制备距离设定为17cm。收集器在接收过程中需不断晃动，避免plga载药微球聚集成团，得到加工混合物。[0089](5)收集后，plga载药微球分散在加工混合物中，离心去除接收溶液后，将plga载药微球分散在少量超纯水中，-80℃保存6小时，然后冷冻干燥24小时获得干燥后的plga载药微球。[0090]实施例2[0091](1)将5g酸端基plga溶解在50ml丙酮溶液中，持续搅拌至无明显结晶后半小时停止，可观测到透明粘稠液体，得到无色透明的plga溶液。[0092](2)将0.5g盐酸多西环素溶解到微量(以溶解度计算)甲醇溶液中，用涡旋震动方式至溶解，得到的盐酸多西环素溶液在4摄氏度低温保存。[0093](3)将plga溶液与盐酸多西环素溶液进行混合，迅速搅拌得到混合溶液。[0094](4)采用静电喷加工设备，分别以浓度为0.1％w/v、0.25％w/v、0.5％w/v、1％w/v的泊洛沙姆407溶液(sigma-aldrich)作为接收溶液，对(3)中所获得的混合溶液进行静电喷加工，将混合溶液装入注射器，并以恒定速度推动，速度为10μl/分钟。在电喷雾针(直径为21g)和接收溶液之间施加18kv的电压，制备距离设定为17cm。收集器在接收过程中需不断晃动，避免plga载药微球聚集成团，得到加工混合物。[0095](5)收集后，plga载药微球分散在加工混合物中，离心去除接收溶液后，将plga载药微球分散在少量超纯水中，-80℃保存6小时，然后冷冻干燥24小时获得干燥后的plga载药微球。[0096]实施例3[0097](1)将5g酸端基plga溶解在50ml丙酮溶液中，持续搅拌至无明显结晶后半小时停止，可观测到透明粘稠液体，得到无色透明的plga溶液。[0098](2)将0.5g盐酸多西环素溶解到微量(以溶解度计算)甲醇溶液中，用涡旋震动方式至溶解，得到的盐酸多西环素溶液在4摄氏度低温保存。[0099](3)将plga溶液与盐酸多西环素溶液进行混合，迅速搅拌得到混合溶液。[0100](4)采用静电喷加工设备，分别以浓度为0.03％w/v、0.3％w/v、1％w/v的维生素e溶液(sigma-aldrich)作为接收溶液，对(3)中所获得的混合溶液进行静电喷加工，将混合溶液装入注射器，并以恒定速度推动，速度为10μl/分钟。在电喷雾针(直径为21g)和接收溶液之间施加18kv的电压，制备距离设定为17cm。收集器在接收过程中需不断晃动，避免plga载药微球聚集成团，得到加工混合物。[0101](5)收集后，plga载药微球分散在加工混合物中，离心去除接收溶液后，将plga载药微球分散在少量超纯水中，-80℃保存6小时，然后冷冻干燥24小时获得干燥后的plga载药微球。[0102]实施例4[0103](1)将5g酸端基plga溶解在50ml丙酮溶液中，持续搅拌至无明显结晶后半小时停止，可观测到透明粘稠液体，得到无色透明的plga溶液。[0104](2)将0.5g盐酸多西环素溶解到微量(以溶解度计算)甲醇溶液中，用涡旋震动方式至溶解，得到的盐酸多西环素溶液在4摄氏度低温保存。[0105](3)将plga溶液与盐酸多西环素溶液进行混合，迅速搅拌得到混合溶液。[0106](4)采用静电喷加工设备，分别以浓度为0.25％w/v、0.5％w/v、1％w/v、2％w/v、4％w/v的聚乙烯醇溶液(sigma-aldrich)作为接收溶液，对(3)中所获得的混合溶液进行静电喷加工，将混合溶液装入注射器，并以恒定速度推动，速度为10μl/分钟。在电喷雾针(直径为21g)和接收溶液之间施加18kv的电压，制备距离设定为17cm。收集器在接收过程中需不断晃动，避免plga载药微球聚集成团，得到加工混合物。[0107](5)收集后，plga载药微球分散在加工混合物中，离心去除接收溶液后，将plga载药微球分散在少量超纯水中，-80℃保存6小时，然后冷冻干燥24小时获得干燥后的plga载药微球。[0108]实施例5[0109](1)将5g酸端基plga溶解在50ml丙酮溶液中，持续搅拌至无明显结晶后半小时停止，可观测到透明粘稠液体，得到无色透明的plga溶液。[0110](2)将0.5g盐酸多西环素溶解到微量(以溶解度计算)甲醇溶液中，用涡旋震动方式至溶解，得到的盐酸多西环素溶液在4摄氏度低温保存。[0111](3)将plga溶液与盐酸多西环素溶液进行混合，迅速搅拌得到混合溶液。[0112](4)采用静电喷加工设备，分别以浓度为0.25％w/v、0.5％w/v、1％w/v、2％w/v、4％w/v的聚乙烯醇溶液(sigma-aldrich)作为接收溶液，对(3)中所获得的混合溶液进行静电喷加工，将混合溶液装入注射器，并以恒定速度推动，速度为10μl/分钟。在电喷雾针(直径为21g)和接收溶液之间施加18kv的电压，制备距离设定为17cm。收集器在接收过程中需不断晃动，避免plga载药微球聚集成团，得到加工混合物。[0113](5)收集后，plga载药微球分散在加工混合物中，离心去除接收溶液后，得到plga载药微球。由于聚乙烯醇溶液粘度过大，用聚乙烯醇溶液收集的微球需要额外增加洗涤步骤(洗脱)。即，得到plga载药微球后用超纯水清洗三次，离心去除超纯水，再将plga载药微球分散在少量超纯水中，-80℃保存6小时，然后冷冻干燥24小时获得干燥后的plga载药微球。[0114]实施例6plga载药微球的载药率测试。[0115](1)分别将5.0mg实施例1～5制得的plga载药微球溶解在1ml氯仿(sigma-aldrich，seelze，德国)中。完全溶解后，加入5ml超纯水，然后搅拌混合三十分钟，然后静置，得到透明分层溶液。[0116](2)通过使用高效液相色谱(hplc)(biotek,synergyhtx,usa)测量360nm处的吸收来分析分层溶液上层水相的dox含量。[0117]使用以下公式计算plga载药微球的载药效率：ee(％)＝(检出药量(mg))/(理论药量(mg))×100％，得到图2～图6。[0118]结合图2～图6，可以看出，实施例1～5制得的plga载药微球具有较高的载药量，并且可以通过调控不同浓度、不同种类的接收溶液来提高plga载药微球的载药效率。[0119]实施例7plga载药微球的释药时间测试[0120]分别将5.0mg实施例1～5制得的plga载药微球加入1.5ml-eppendorf管(n＝3)中，并在每个管中加入500μl磷酸盐缓冲盐水(pbs；gibco，paisley，uk)。[0121]将1.5ml-eppendorf管在37℃下在旋转板上以90rpm的转速孵育。在每个时间点(1h、4h、24h、48h、72h、7d、10d、14d)将试管以10,000rpm离心2分钟，得到400μl上清液用于进一步分析，过滤并储存上清液。[0122]将新鲜的pbs添加到管中。微球通过涡旋再分散，然后放回培养箱直到下一个释放时间点。[0123]分别对相应的测试点得到的上清液中的负载药物含量进行测量，得到图7～图11。[0124]由图7～图11可以看出，实施例1～5制得的plga载药微球均可以满足在较长时间内持续释放负载药物。[0125]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页12当前第1页12