用于治疗疾病的方法和组合物与流程

1.本发明涉及用于治疗和预防慢性阻塞性肺病的方法和制剂，其包含(a)至少一种血管紧张素受体抑制剂，和(b)至少一种c-x-c基序趋化因子受体2抑制剂。


背景技术：

2.慢性阻塞性肺病(copd)是一个总称，用于描述进行性肺部疾病，包括肺气肿、慢性支气管炎、支气管扩张和难治性(不可逆)哮喘。这些疾病的特征是由于肺部气流受限而导致呼吸困难增加。copd的主要原因是接触烟草烟雾(主动吸烟或二次吸烟)，但其他风险因素包括接触室内和室外空气污染以及职业粉尘和烟雾。
3.copd是世界上第三大死亡原因，尽管存在改善copd症状的治疗方法，但目前没有登记用于减缓病症进展或治愈它的靶向治疗。此外，在前五位死因中，这种疾病是唯一一种死亡率上升的疾病。copd存在显著的未满足需求，这一点得到了nih等关键组织的认可，并在全球范围内得到了who和cdc的认可。2017年，nih发布了copd国家行动计划，以支持该疾病的研究、诊断和治疗。在这一认可后，fda于2018年发布了行业指南，以帮助赞助商开发治疗copd的药物。新指南将使用代理人(surrogate)和受试者报告的终点促进更短的临床试验。
4.copd的特征是肺气流受限，不完全可逆，并且通常随着异常炎症反应而进展(rabe等人，2007)。不存在可以防止copd受试者肺功能长期下降的靶向药物。然而，吸入性抗胆碱能药、β-肾上腺素能支气管扩张剂和皮质类固醇可用于治疗copd的症状和恶化。包括这些药物类别的固定剂量组合的新产品正在以一致的速度获得批准，并且正在进行具有新作用机制的化合物的后期试验。
5.在肺气肿中，肺泡受损；随着时间的推移，肺泡的内壁会变弱并破裂——形成更大的空气空间，而不是许多小的空气空间。这会减少肺部的表面积，进而减少到达血流的氧气量。
6.支气管炎是支气管内壁的炎症。支气管扩张的特征在于异常、不可逆的支气管扩张或气道直径固定增加。两者都以每天咳嗽和粘液(痰)产生为特征。
7.难治性(不可逆)哮喘对常用的哮喘药物没有反应。在哮喘发作时，支气管气道收紧和肿胀。药物通常可以扭转这种情况，打开呼吸道并使它们恢复到发作前的状态。在难治性哮喘中，药物不能逆转气道的收紧和肿胀。
8.需要开发治疗或预防copd的方法；或至少提供替代方法来补充先前已知的改善copd症状的方法。因此，本发明寻求提供用于治疗或预防copd的改进或替代方法。
9.背景技术的前述讨论仅旨在促进对本发明的理解。讨论不是承认或允许所提及的任何材料在申请的优先权日是或曾经是公知常识的一部分。
10.发明总述
11.本发明提供了药物制剂，其包含：
12.a)至少一种血管紧张素1型受体(at1r)阻断剂；和
13.b)至少一种cxc趋化因子受体2(cxcr2)通路抑制剂。
14.优选地，该制剂用于治疗、改善或预防copd的病症或疾病。优选地，copd选自：肺气肿、慢性支气管炎、支气管扩张和难治性(不可逆)哮喘。
15.cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以以相同的剂型或分开的剂型施用。
16.cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以同时或依次给药。
17.cxcr2抑制剂包括cxcr2抑制剂的药学上可接受的盐和cxcr2的抗体抑制剂。at1r阻断剂包括at1r阻断剂的药学上可接受的盐和at1r的抗体阻断剂。cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以是相同的活性剂，例如双特异性抗体。优选地，cxcr2通路抑制剂是直接cxcr2拮抗剂、负变构cxcr2调节剂、cxcr2反向激动剂或变构反向激动剂。
18.本发明进一步提供了用于治疗、改善或预防病症或疾病的方法，所述方法包括以下步骤：
19.i)向受试者施用治疗有效量的(a)血管紧张素1型受体(at1r)阻断剂和(b)cxc趋化因子受体2(cxcr2)通路抑制剂的组合。
20.本发明还提供了(a)至少一种血管紧张素1型受体(at1r)阻断剂和(b)至少一种cxc趋化因子受体2(cxcr2)通路抑制剂用于制造用于治疗或预防病症或疾病的剂型的用途。
21.本发明提供了用于治疗、改善或预防病症或疾病的试剂盒，所述试剂盒包含：
22.a)至少一种血管紧张素1型受体(at1r)阻断剂；
23.b)至少一种cxc趋化因子受体2(cxcr2)通路抑制剂；和
24.c)使用说明。
25.本发明提供了至少一种at1r阻断剂和至少一种cxcr2抑制剂，其用于治疗、改善或预防疾病的制剂中。
26.本发明提供了至少一种at1r阻断剂，其用于治疗、改善或预防疾病的制剂中，其中所述至少一种at1r阻断剂与至少一种cxcr2抑制剂同时或依次施用于受试者。
27.本发明提供了用于治疗、改善或预防疾病的制剂中的至少一种cxcr2抑制剂，其中将至少一种cxcr2抑制剂与至少一种at1r阻断剂同时或依次施用于受试者。
附图说明
28.在以下几个非限制性实施方案的描述中更全面地描述了本发明的其他特征。仅出于举例说明本发明的目的而包括该描述。不应将其理解为对上述本发明的广泛概述、公开或描述的限制。注意所有的生物发光共振能量转移(bret)信号都是在37℃从瞬时转染的人胚胎肾(hek)293ft细胞测量的，并且在这些实验中，在需要保持cdna水平相同的地方共转染了pcdna3，该描述将参照附图进行，其中：
29.图1a显示了在仅用10-7
m(100nm)cxcl8或10-6
m(1μm)angii或cxcl8和angii组合处理后来自表达cxcr2/rluc8(用rluc8标记的cxcr2)和venus/mgsi(mgsi作为用venus标记的gi活性传感器)，而没有血凝素表位标记的at1r(ha-at1r)表达的细胞的bret信号。
30.图1b显示了在仅用10-7
m(100nm)cxcl8或10-6
m(1μm)angii或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
31.图2a显示，在用at1r cdna(750ng)和cxcr2 cdna(250ng)瞬时转染的hek293细胞
中，在用指示的cxcl8浓度范围或指示的angii浓度范围或指示的angii浓度范围与10nm cxcl8组合处理后d-myo-肌醇1-磷酸盐(ip1)积累的浓度-响应曲线。
32.图2b显示，在稳定表达cxcr2并用at1r cdna(500ng)瞬时转染的hek293细胞中，在用指示的cxcl8浓度范围或指示的angii浓度范围或指示的angii浓度范围与1nm cxcl8组合处理后d-myo-肌醇1-磷酸盐(ip1)积累的浓度-响应曲线。
33.图3显示了亚细胞标记物定位和受体运输的简化示意图(发表于tiulpakov等人(2016)mol.endocrinol.30,889
–
904)。使用带rluc8标记的目标蛋白，通过测量经由bret与质膜标记物venus/kras(k-ras)或亚细胞区室标记物rabs的邻近度监测配体诱导的运输：venus/rab5(5)对应于早期内体；venus/rab4(4)对应于早期内体循环；venus/rab11a(11)对应于循环内体；venus/rab7(7)对应于晚期内体/溶酶体；venus/rab9(9)对应于晚期内体运输到反式高尔基体网络；venus/rab1(1)对应于向顺式高尔基体运输的内质网；venus/rab6(6)对应于高尔基器和反式高尔基网络；或venus/rab8(8)对应于反式高尔基网络到质膜。
34.图4a显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/kras而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
35.图4b显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
36.图4c显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/rab1而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
37.图4d显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab1和ha-at1r的细胞的bret信号。
38.图4e显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/rab4而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
39.图4f显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab4和ha-at1r的细胞的bret信号。
40.图4g显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/rab5而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
41.图4h显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
42.图4i显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/rab6而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
43.图4j显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab6和ha-at1r的细胞的bret信号。
44.图4k显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/rab7而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
45.图4l显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab7和ha-at1r的细胞的bret信号。
46.图4m显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/rab8而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
47.图4n显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
48.图4o显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/rab9而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
49.图4p显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab9和ha-at1r的细胞的bret信号。
50.图4q显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8和venus/rab11a而没有ha-at1r的细胞的bret信号。
51.图4r显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab11a和ha-at1r的细胞的bret信号。
52.图5a显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8和venus/kras而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
53.图5b显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/kras和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
54.图5c显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8和venus/rab1而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
55.图5d显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab1和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
56.图5e显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8和venus/rab4而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
57.图5f显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab4和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
58.图5g显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8和venus/rab5而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
59.图5h显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab5和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
60.图5i显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8和venus/rab6而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
61.图5j显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab6和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
62.图5k显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8和venus/rab7而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
63.图5l显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab7和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
64.图5m显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8和venus/rab8而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
65.图5n显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab8和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
66.图5o显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，
来自表达at1r/rluc8和venus/rab9而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
67.图5p显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab9和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
68.图5q显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8和venus/rab11a而没有未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
69.图5r显示了在仅用100nm cxcl8或1μm angii处理后或cxcl8和angii组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab11a和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
70.图6a显示用媒介物预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
71.图6b显示用cxcr2变构反向激动剂sb265610预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
72.图6c显示用cxcr2拮抗剂sb225002预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
73.图6d显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
74.图6e显示用cxcr2拮抗剂azd5069预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
75.图6f显示用cxcr2拮抗剂danirixin预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
76.图7a显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦(irbesartan)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
77.图7b显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
78.图7c显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
79.图7d显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
80.图7e显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，
来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
81.图7f显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
82.图8a显示用at1r拮抗剂奥美沙坦(olmesartan)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
83.图8b显示用at1r拮抗剂奥美沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
84.图8c显示用at1r拮抗剂奥美沙坦和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
85.图8d显示用at1r拮抗剂奥美沙坦和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
86.图8e显示用at1r拮抗剂奥美沙坦和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
87.图8f显示用at1r拮抗剂奥美沙坦和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
88.图9a显示用at1r拮抗剂坎地沙坦(candesartan)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
89.图9b显示用at1r拮抗剂坎地沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
90.图9c显示用at1r拮抗剂坎地沙坦和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
91.图9d显示用at1r拮抗剂坎地沙坦和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
92.图9e显示用at1r拮抗剂坎地沙坦和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
93.图9f显示用at1r拮抗剂坎地沙坦和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理
后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
94.图10a显示用at1r拮抗剂缬沙坦(valsartan)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
95.图10b显示用at1r拮抗剂缬沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
96.图10c显示用at1r拮抗剂缬沙坦和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
97.图10d显示用at1r拮抗剂缬沙坦和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
98.图10e显示用at1r拮抗剂缬沙坦和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
99.图10f显示用at1r拮抗剂缬沙坦和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
100.图11a显示用at1r拮抗剂依普沙坦(eprosartan)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
101.图11b显示用at1r拮抗剂依普沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
102.图11c显示用at1r拮抗剂依普沙坦和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
103.图11d显示用at1r拮抗剂依普沙坦和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
104.图11e显示用at1r拮抗剂依普沙坦和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
105.图11f显示用at1r拮抗剂依普沙坦和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
106.图12a显示用at1r拮抗剂阿齐沙坦(azilsartan)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/
rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
107.图12b显示用at1r拮抗剂阿齐沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
108.图12c显示用at1r拮抗剂阿齐沙坦和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
109.图12d显示用at1r拮抗剂阿齐沙坦和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
110.图12e显示用at1r拮抗剂阿齐沙坦和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
111.图12f显示用at1r拮抗剂阿齐沙坦和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
112.图13a显示用at1r拮抗剂氯沙坦(losartan)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
113.图13b显示用at1r拮抗剂氯沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
114.图13c显示用at1r拮抗剂氯沙坦和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
115.图13d显示用at1r拮抗剂氯沙坦和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
116.图13e显示用at1r拮抗剂氯沙坦和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
117.图13f显示用at1r拮抗剂氯沙坦和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
118.图14a显示用at1r拮抗剂exp3174(氯沙坦的活性代谢物)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
119.图14b显示用at1r拮抗剂exp3174(氯沙坦的活性代谢物)和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii
处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
120.图14c显示用at1r拮抗剂exp3174(氯沙坦的活性代谢物)和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
121.图14d显示用at1r拮抗剂exp3174(氯沙坦的活性代谢物)和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
122.图14e显示用at1r拮抗剂exp3174(氯沙坦的活性代谢物)和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
123.图14f显示用at1r拮抗剂exp3174(氯沙坦的活性代谢物)和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
124.图15a显示用at1r拮抗剂替米沙坦(telmisartan)预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
125.图15b显示用at1r拮抗剂替米沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
126.图15c显示用at1r拮抗剂替米沙坦和cxcr2拮抗剂sb225002两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
127.图15d显示用at1r拮抗剂替米沙坦和cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
128.图15e显示用at1r拮抗剂替米沙坦和cxcr2拮抗剂azd5069两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
129.图15f显示用at1r拮抗剂替米沙坦和cxcr2拮抗剂danirixin两者组合预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞的bret信号。
130.图16a显示用媒介物预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
131.图16b显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用仅100nm angii处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
132.图16c显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
133.图16d显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)、拮抗剂sb225002(sb22)或变构反向激动剂sb265610(sb26)预处理50分钟后，用仅100nm angii处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
134.图16e显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)、拮抗剂sb225002(sb22)或变构反向激动剂sb265610(sb26)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
135.图16f显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
136.图16g显示用cxcr2拮抗剂sb225002(sb22)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
137.图16h显示用cxcr2变构反向激动剂sb265610(sb26)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞的bret信号。
138.图17a显示用媒介物预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
139.图17b显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用仅100nm angii处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
140.图17c显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
141.图17d显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)、拮抗剂sb225002(sb22)或变构反向激动剂sb265610(sb26)预处理50分钟后，用仅100nm angii处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
142.图17e显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)、拮抗剂sb225002(sb22)或变构反向激动剂sb265610(sb26)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
143.图17f显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
144.图17g显示用cxcr2拮抗剂sb225002(sb22)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
145.图17h显示用cxcr2变构反向激动剂sb265610(sb26)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab5和ha-at1r的细胞的bret信号。
146.图18a显示用媒介物预处理50分钟后，用媒介物处理或仅10nm cxcl8处理或仅100nm angii处理或cxcl8和angii组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
147.图18b显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用仅100nm angii处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
148.图18c显示用at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
149.图18d显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)、拮抗剂sb225002(sb22)或变构反向激动剂sb265610(sb26)预处理50分钟后，用仅100nm angii处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
150.图18e显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)、拮抗剂sb225002(sb22)或变构反向激动剂sb265610(sb26)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8/venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
151.图18f显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
152.图18g显示用cxcr2拮抗剂sb225002(sb22)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
153.图18h显示用cxcr2变构反向激动剂sb265610(sb26)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达cxcr2/rluc8、venus/rab8和ha-at1r的细胞的bret信号。
154.图19a显示用媒介物或者at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用媒介物或仅100nm angii处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/kras和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
155.图19b显示用媒介物或者at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/kras和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
156.图19c显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)、拮抗剂sb225002(sb22)、变构反向激动剂sb265610(sb26)、拮抗剂azd5069(azd)或拮抗剂danirixin(dnrx)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、
venus/kras和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
157.图19d显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/kras和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
158.图19e显示用cxcr2拮抗剂sb225002(sb22)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/kras和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
159.图19f显示用cxcr2变构反向激动剂sb265610(sb26)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/kras和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
160.图20a显示用媒介物或者at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用媒介物或仅100nm angii处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab5和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
161.图20b显示用媒介物或者at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab5和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
162.图20c显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)、拮抗剂sb225002(sb22)、变构反向激动剂sb265610(sb26)、拮抗剂azd5069(azd)或拮抗剂danirixin(dnrx)预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab5和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
163.图20d显示用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；sch)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab5和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
164.图20e显示用cxcr2拮抗剂sb225002(sb22)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab5和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。
165.图20f显示用cxcr2变构反向激动剂sb265610(sb26)和at1r拮抗剂伊贝沙坦(irb)、缬沙坦(val)或阿齐沙坦(azil)两者预处理50分钟后，用10nm cxcl8和100nm angii两者组合处理后，来自表达at1r/rluc8、venus/rab5和未标记的cxcr2的细胞的bret信号。


技术实现要素：

166.发明详述
167.本发明预料不到地鉴定了血管紧张素1型受体(at1r；at1r)和cxc趋化因子受体2(cxcr2)之间的异聚体关联。这两种受体都独立地参与了copd的病理生理学(traves等人(2004)specific cxc but not cc chemokines cause elevated monocyte migration in copd:a role for cxcr2.j.leukoc.biol.76,441
–
450)。先前已发现cxcr2可减少中性粒细胞趋化性并减少慢性阻塞性肺病(copd)中的粘液产生和气道炎症。然而，cxcr2抑制剂治疗
copd的疗效在临床研究中一直令人失望。
168.不拘泥于任何理论，认为cxcr2抑制剂不能治疗copd是由于cxcr2和at1r的异聚性质。
169.组合物
170.本发明提供了药物制剂，其包含：
171.a)至少一种血管紧张素1型受体(at1r)阻断剂；和
172.b)至少一种cxc趋化因子受体2(cxcr2)通路抑制剂。
173.at1r阻断剂抑制或部分抑制at1r。优选地，at1r阻断剂直接与at1r相互作用，并且不包括治疗剂，例如作用于at1r上游以阻止功能性配体产生但不与at1r本身相互作用的血管紧张素转化酶抑制剂(acei)治疗剂。
174.术语“at1r阻断剂”包括at1r阻断剂的药学上可接受的盐。或者，at1r阻断剂可以是at1r的抗体阻断剂。
175.cxcr2通路抑制剂抑制或部分抑制cxcr2和/或cxcr2信号传导通路。例如，cxcr2通路抑制剂可以包括抑制或部分抑制与cxcr2信号传导相关的任何一种通路的任何化合物或试剂，包括抑制除趋化因子受体本身之外的cxcr2通路组分的化合物或试剂。cxcr通路抑制剂可以是，但不限于，cxcr2或除cxcr2之外的cxcr2通路组分的拮抗剂、cxcr2或除cxcr2之外的cxcr2通路组分的反向激动剂，或cxcr2或除cxcr2之外的cxcr2通路组分的负变构调节剂。
176.cxcr2的反向激动剂也可以是cxcr2的负变构调节剂。在这种情况下，它可以被称为cxcr2变构反向激动剂。
177.cxcr2抑制剂可以作为不同信号通路的拮抗剂或反向激动剂。例如，cxcr2抑制剂可以是一种信号通路的cxcr2拮抗剂和另一种信号通路的cxcr2反向激动剂。
178.cxcr2反向激动剂可归类为cxcr2拮抗剂，其中固有活性(constitutive activity)对于评估的信号传导通路不明显，以便能够定义为反向激动剂。
179.如果cxcr2负变构调节剂抑制cxcr2但结合模式尚未明确定义(正构对变构)或被理解，则它可归类为cxcr2拮抗剂。
180.优选地，cxcr2通路抑制剂直接抑制受体本身，而不是cxcr2通路的上游或下游组分。
181.术语“cxcr2抑制剂”包括cxcr2抑制剂的药学上可接受的盐。或者，cxcr2抑制剂可以是cxcr2的抗体抑制剂。
182.cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以是相同的活性剂，例如双特异性抗体。
183.药物制剂可以任选地包括赋形剂、溶剂、载体和其他药学上可接受的成分。
184.如本文在本发明药物制剂的上下文中使用的术语“组分”是指at1r阻断剂或cxcr2通路抑制剂。
185.如本文所用，术语“抑制”是指与参考相比降低到可检测限度以下。该短语包括阻断、延缓或阻碍防止不良结果的行为。
186.如本文所用，术语“部分抑制”是指与参考相比时在可检测限度内的任何降低。该短语包括阻断、延缓或阻碍防止不良结果的行为。
187.cxc趋化因子受体2
188.cxc趋化因子受体2(cxcr2)是一种g蛋白偶联受体。
189.短语“cxcr2通路抑制剂”旨在包括抑制或部分抑制与cxcr2相关的任何一种通路的任何化合物或试剂，包括抑制除趋化因子受体本身之外的cxcr2通路组分的化合物或试剂。例如，抑制剂可以抑制或部分抑制与cxcr2相关的蛋白质，或可以抑制cxcr2本身之前和/或之后的化合物或通路步骤。优选地，所述cxcr2通路抑制剂是一种cxcr2拮抗剂、cxcr2反向激动剂或cxcr2负变构调节剂。
190.如本文所用，术语“除cxcr2之外的cxcr2通路组分”应理解为包括由cxcr2触发的上述任一通路的组分，其中该组分本身不是cxcr2。优选地，该组分是蛋白质，例如，但不限于，转导或信号传导蛋白。趋化因子受体通路的组分可能直接与cxcr2相互作用。或者，趋化因子受体通路的组分可以通过蛋白质-蛋白质相互作用或复合物形成的方式与cxcr2间接相互作用。或者，趋化因子受体通路的组分可以通过如本领域已知的信号级联间接与cxcr2相互作用。
191.cxcr2通路抑制剂可以选自：直接cxcr2拮抗剂、反向cxcr2激动剂、负变构cxcr2调节剂、变构反向cxcr2激动剂、间接cxcr2拮抗剂、间接反向cxcr2激动剂和间接负变构cxcr2调节剂。优选地，cxcr2通路抑制剂是cxcr2拮抗剂、cxcr2反向激动剂、cxcr2负变构调节剂或cxcr2变构反向激动剂。优选地，cxcr2通路抑制剂是直接cxcr2拮抗剂、负变构cxcr2调节剂、cxcr2反向激动剂或cxcr2变构反向激动剂。
192.在一个优选的实施方案中，趋化因子受体通路抑制剂选自：
193.i)cxcr2或除cxcr2之外的cxcr2通路组分的拮抗剂；
194.ii)cxcr2或除cxcr2之外的cxcr2通路组分的反向激动剂；
195.iii)cxcr2或除cxcr2之外的cxcr2通路组分的负变构调节剂。
196.术语“cxcr2抑制剂”包括cxcr2抑制剂的药学上可接受的盐。或者，cxcr2抑制剂可以是cxcr2的抗体抑制剂。
197.cxcr2的已知拮抗剂包括：repertaxin(reparixin)、danirixin(gsk1325756)、azd5069、sb225002和elubrixin。
198.cxcr2的已知反向激动剂包括：sb265610和navarixin(mk-7123；sch527123)。
199.cxcr2的已知负变构调节剂包括：sb265610。
200.在一个优选的实施方案中，cxcr2通路抑制剂是cxcr2的拮抗剂。例如，cxcr2通路抑制剂可以选自：repertaxin、danirixin(gsk1325756)、azd5069、sb225002和elubrixin。
201.在一个优选的实施方案中，cxcr2通路抑制剂是cxcr2的反向激动剂。例如，cxcr2通路抑制剂可以选自：sb265610(bradley等人(2009)br.j.pharmacol.158,328-338)和navarixin(mk-7123；sch527123；kredel等人(2009)j biol screen 14,1076-1091)。
202.在一个优选的实施方案中，cxcr2通路抑制剂是cxcr2的负变构调节剂。例如，cxcr2通路抑制剂可以选自：sb265610(bradley等人(2009)br.j.pharmacol.158,328-338)。
203.血管紧张素1型受体
204.血管紧张素1型受体(at1r、at1r、血管紧张素ii受体1型)是一种g蛋白偶联受体。
205.短语“血管紧张素1型受体抑制剂”(也称为血管紧张素受体阻断剂或arb)应理解为表示可抑制或部分抑制at1r活化的药剂或化合物。这包括at1r拮抗剂、反向激动剂和负变
构调节剂。
206.术语“at1r阻断剂”包括at1r阻断剂的药学上可接受的盐。或者，at1r阻断剂可以是at1r的抗体阻断剂。
207.例如，at1r阻断剂可选自：伊贝沙坦(例如)、依普沙坦(例如)、氯沙坦(例如)、缬沙坦(例如)、替米沙坦(例如)、坎地沙坦(例如)、奥美沙坦(例如)、阿齐沙坦(例如)和zd-7115。例如，血管紧张素受体抑制剂可以是伊贝沙坦。
208.cxcr2抑制剂和at1r阻断剂都可以是相同的活性剂，例如双特异性抗体。
209.at1r阻断剂和cxcr2抑制剂都可以是各自活性剂的药学上可接受的盐。药学和兽医学上可接受的盐包括保留本公开化合物的生物学有效性和性质并且在生物学或其他方面不是不期望的盐。在许多情况下，本文公开的化合物能够由于氨基和/或羧基或与其类似的基团的存在而形成酸和/或碱盐。可接受的碱加成盐可由无机和有机碱制备。衍生自无机碱的盐仅作为示例包括钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺的盐，仅作为示例例如烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代的烷基胺、二(取代的烷基)胺，三(取代烷基)胺、烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、取代的烯基胺、二(取代的烯基)胺、三(取代的烯基)胺、环烷基胺、二(环烷基)胺、三(环烷基)胺、取代的环烷基胺、二取代的环烷基胺、三取代的环烷基胺、环烯基胺、二(环烯基)胺、三(环烯基)胺、取代的环烯基胺、二取代的环烯基胺、三取代的环烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、杂芳基胺，二杂芳基胺、三杂芳基胺、杂环胺、二杂环胺、三杂环胺、混合的二胺和三胺，其中胺上的至少两个取代基不同并且选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、杂芳基、杂环等。还包括其中两个或三个取代基与氨基氮一起形成杂环或杂芳基的胺。
210.药学和兽医学上可接受的酸加成盐可以由无机酸和有机酸制备。可以使用的无机酸包括，仅举例来说，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以使用的有机酸包括，仅举例来说，乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。
211.可用于本公开的化合物的药学或兽医学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，此类盐可以通过将这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适当碱或酸在水中或有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备；通常，非水介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐列表见remington's pharmaceutical sciences.第17版，mack publishing company,easton,pa.(1985),p.1418，其公开内容通过引用并入本文。此类可接受的盐的实例是碘化物、乙酸盐、苯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸酸、邻乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、溴化物、异丁酸盐、苯基丁酸盐、γ-羟基丁酸盐、β-羟基丁酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、己酸盐、辛酸盐、氯化物、肉桂酸盐、柠檬酸盐、癸酸盐、甲酸盐、富马酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磷酸盐、磷
酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磺酸盐、苯磺酸盐、对溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、丙磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、甲基磺酸盐、萘-i-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸盐等。
212.病症或疾病
213.优选地，cxcr2通路抑制剂和/或at1r阻断剂与病症或疾病相关。更优选地，病症或疾病是慢性阻塞性肺病(copd)。copd是一个总称，用于描述进行性肺部疾病，包括肺气肿、慢性支气管炎、支气管扩张和难治性(不可逆)哮喘。这些疾病的特征是由于肺部气流受限而导致呼吸困难增加。
214.抑制的测量
215.由(i)cxcr2通路抑制剂，(ii)at1r阻断剂，或(iii)cxcr2通路抑制剂和at1r阻断剂的组合引起的cxcr2通路和/或at1r的抑制或部分抑制可使用本文所述的体外方法测量，包括但不限于用于评估表达cxcr2的嗜中性粒细胞和本领域已知的其他细胞的体外趋化迁移的生化或细胞测定，以及测量磷酸肌醇产生、细胞外调节激酶(erk)磷酸化、camp产生、无标记技术(例如使用阻抗、光折射或电荷再分配)、使用邻近度报告系统或其他方法的g蛋白偶联、β-抑制蛋白募集或介导的信号传导、基于转录因子的报告系统、使用荧光标记的显微镜可视化、使用抗体评估受体细胞定位(如酶联免疫单吸附测定)，使用生物发光共振能量转移来评估细胞定位和运输，以及荧光激活细胞分选。
216.由(i)cxcr2通路抑制剂，(ii)at1r阻断剂，或(iii)cxcr2通路抑制剂和at1r阻断剂的组合引起的cxcr2通路和/或at1r的抑制或部分抑制可使用本文所述的体内方法测量，包括但不限于，测量肺渗出液的细胞和细胞因子含量，测量肺功能，包括使用基于肺活量测定的肺功能的物理容量，或使用测量血气或其他生化测量测量的肺功能输出，或功能益处，包括通过定量方法(例如步行测试)或定性方法(例如患者报告的结果评估)测量的临床益处的改善。抑制或部分抑制可以通过肺结构的定性改善来指示，如通过一个或多个上述终点测量的。
217.在一个优选的实施方案中，与当施用任一组分而不施用任何其他组分时的at1r阻断剂或cxcr2通路抑制剂的功效相比，药物制剂的总功效更大。因此，组合制剂可以以单一剂量施用，包括亚治疗剂量，或者较不经常的，两种组分中的任一种可以作为单一化合物施用。
218.优选地，与当施用任一组分而不施用任何其他组分时的at1r阻断剂和cxcr2通路抑制剂的功效之和相比，药物制剂的总功效更大。更优选地，当同时或依次施用at1r阻断剂和cxcr2途径抑制剂时观察到功效的协同效应。
219.或者，药物制剂的总功效等于当施用任一组分而不施用任何其他组分时的at1r阻断剂和cxcr2途径抑制剂的功效之和。作为该替代方案的另一个优选实施方案，当同时或依次施用at1r阻断剂和cxcr2途径抑制剂时，观察到功效的相加效应。
220.在另一个替代方案中，药物制剂的总功效小于当施用任一组分而不施用任何其他组分时的at1r阻断剂和cxcr2途径抑制剂的功效之和。在进一步的实施方案中，虽然组合功效小于当施用每种组分而不施用任何其他组分时的at1r阻断剂和cxcr2途径抑制剂的功效之和，但与at1r阻断剂或cxcr2通路抑制剂单独施用的单次治疗相比，该治疗提供更大的功
效。
221.优选地，两种组分同时施用(例如作为一起服用的两片片剂，或作为与每种组分一起配制的单一片剂)或依次施用(例如服用一片片剂后服用另一片片剂)。每种组分的剂量可以一起服用(同时)，或依次服用，彼此相隔数秒、数分钟、数天、数周或数月。
222.本发明的组合的一种组分可能已经被施用于受试者，例如作为护理治疗的标准。在这种情况下，本发明组合的第二组分作为治疗中的第二组分施用以提供本发明的治疗组合。
223.治疗方法
224.本发明进一步提供了用于治疗、改善或预防病症或疾病的方法，所述方法包括以下步骤：
225.i)向受试者施用治疗有效量的(a)血管紧张素1型受体(at1r)阻断剂和(b)cxc趋化因子受体2(cxcr2)通路抑制剂的组合。
226.待治疗的受试者优选为哺乳动物，包括人类哺乳动物。
227.优选地，待治疗、改善或预防的病症或疾病是copd。优选地，copd选自：肺气肿、慢性支气管炎、支气管扩张和难治性(不可逆)哮喘。
228.cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以以相同的剂型或分开的剂型施用。
229.cxcr2抑制剂和/或at1r阻断剂可以是各自受体的抗体抑制剂或阻断剂。cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以是相同的活性剂，例如双特异性抗体。cxcr2抑制剂和/或at1r阻断剂可以是cxcr2抑制剂和/或at1r阻断剂的药学上可接受的盐。
230.cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以同时或依次施用。
231.本发明的组合的一种组分可能已经被施用于受试者，例如作为护理治疗的标准。在这种情况下，本发明组合的第二组分作为治疗中的第二组分施用以提供本发明的治疗组合。
232.尽管不旨在限于任何具体的作用模式，但在一个优选实施方案中，当cxcr2与血管紧张素受体at1r结合时，cxcr2抑制剂在与cxcr2相互作用或调节其下游途径时具有更大的亲和力和/或效力和/或功效。例如，cxcr2和血管紧张素受体at1r可以结合为cxcr2/at1r异聚体。
233.优选地，本发明的组合提供了比单独使用任何一种时更低剂量的at1r或cxcr2抑制剂。例如，可以以亚治疗剂量提供at1r或cxcr2抑制剂中的一种或两种。这将有利于减少at1r或cxcr2抑制剂的负面安全性，同时对copd具有相同的治疗益处。
234.在进一步优选的实施方案中，当将cxcr2抑制剂与at1r阻断剂同时或依次施用于受试者时，组合的亲和力、效力和/或功效大于相比于当cxcr2抑制剂不与at1r阻断剂组合(同时或依次)施用时已经实现的亲和力、效力和/或功效。在更进一步优选的实施方案中，当将cxcr2抑制剂与at1r阻断剂组合(同时或依次)施用于受试者时，实现了协同效应(如通过亲和力、效力和/或功效测量)。
235.尽管不旨在限于任何具体的作用方式，但在一个优选实施方案中，当血管紧张素受体at1r与cxcr2结合时，at1r阻断剂在与血管紧张素受体at1r相互作用时具有更大的亲和力和/或效力和/或功效。例如，cxcr2和血管紧张素受体at1r可以结合为cxcr2/at1r异聚体。在进一步优选的实施方案中，当at1r阻断剂与cxcr2抑制剂同时或依次施用于受试者时，组
合的亲和力、效力和/或功效大于相比于当at1r阻断剂不与cxcr2抑制剂组合(同时或依次)施用时已经实现的亲和力、效力和/或功效。在更进一步优选的实施方案中，当将at1r阻断剂与cxcr2抑制剂组合(同时或依次)施用于受试者时，实现了协同效应(如通过亲和力、效力和/或功效测量)。
236.递送
237.本发明提供的剂型还可以包含小瓶、药筒、容器、片剂或胶囊，其包含本发明药物制剂连同用于将剂型施用于受试者以治疗、改善或预防病症或疾病的剂量说明。
238.可以与载体材料组合以产生单一剂量的每种活性成分的量将根据待治疗的宿主和具体的施用方式而变化。例如，旨在用于人类口服施用的制剂可含有约0.5mg至1g的每种活性化合物以及合适且方便量的载体材料，其可在总制剂的约5％至95％变化。剂量单位形式通常含有约0.5mg至500mg的活性成分。
239.优选地，at1r阻断剂以每天50mg至500mg的量提供，以一个或多个剂量提供。甚至更优选地，at1r阻断剂以每天75mg至300mg的量提供。例如，at1r阻断剂是伊贝沙坦，以每天75、150或300mg的剂量施用，以一个或多个剂量提供。
240.优选地，cxcr2通路抑制剂以每天0.5mg至2000mg提供，以一个或多个剂量提供。甚至更优选地，cxcr2通路抑制剂以每天0.5mg至50mg的剂量提供，以一个或多个剂量提供。
241.每种活性剂的剂量可以单一剂型或两种分开的剂型提供，并且可以包含约5mg至1g的at1r阻断剂和约0.5mg至1g的cxcr2通路抑制剂。两种活性物的剂量可以单一剂型或两种分开的剂型提供，并且可以包含(i)约50mg至500mg之间的at1r阻断剂的日剂量，和(ii)约5mg至50mg之间的cxcr2通路抑制剂的日剂量。at1r阻断剂可以是伊贝沙坦，剂型可以包含约300mg的伊贝沙坦的日剂量。
242.然而，应当理解，任何具体受试者的特定剂量水平将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径、排泄率、药物组合以及正在接受治疗的具体病症或疾病的严重程度。
243.在各个方面，本发明的制剂可以通过注射施用，或被制备用于口服、肺、鼻或任何其他形式的施用。优选地制剂通过，例如，以下施用：静脉内、皮下、肌肉内、眶内、眼内、心室内、颅内、囊内、脊柱内、脑池内、腹膜内、口腔、直肠、阴道、鼻内或通过气雾剂施用。
244.施用模式在一方面至少适用于制备制剂的形式。可根据经验确定最有效反应的施用模式，下文所述的施用模式作为实例给出，并且不以任何方式限制本发明制剂的递送方法。所提供的所有制剂均常用于制药行业，并且为合格的从业人员所熟知。
245.注射剂型
246.本发明的制剂在某些方面可以包含药学上可接受的无毒赋形剂和载体，并通过任何非肠道技术如皮下、静脉内和腹膜内注射施用。此外，制剂可以任选地含有一种或多种佐剂。如本文所用，“药物载体”是向受试者递送化合物的药学上可接受的溶剂、悬浮剂、赋形剂或媒介物。载体可以是液体或固体，并根据计划的施用方式进行选择。
247.适合注射使用的药物形式任选地包含无菌水溶液(在水溶性的情况下)或分散体和用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。或者，本发明的化合物在某些方面被封装在脂质体中并以可注射溶液的形式递送以帮助它们跨细胞膜转运。或者或另外，此类制剂包含自组装孔结构的构成以促进跨细胞膜的转运。在各个方面，载体是溶剂或分散介
质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、它们的合适混合物和植物油。适当的流动性例如但不限于，通过使用包衣例如卵磷脂、通过在分散体的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂来保持。在某些方面，通过在制剂中使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可延长可注射制剂的吸收。
248.本发明还提供了可注射的持续释放药物制剂，其包含根据本发明的治疗有效的药物制剂和释放延迟剂。释放延迟剂可以是例如单硬脂酸铝和明胶。
249.通过将所需量的活性化合物与一种或多种上面列举的其他成分(根据需要)掺入适当的溶剂中，然后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。通常，分散体是通过将各种已杀菌活性成分掺入无菌媒介物中来制备的，该无菌介质中含有来自上面列举的那些基本分散体介质和所需的其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，某些方面的制备包括但不限于真空干燥和冷冻干燥技术，其从其先前无菌过滤的溶液中产生活性成分加上任何另外的所需成分的粉末。
250.口服剂型
251.本文考虑使用的是口服固体剂型，一般描述于martin，remington's pharmaceutical sciences，第18版。(1990mack publishing co.easton pa 18042)的第89章，通过引用将其并入本文。固体剂型包括片剂、胶囊、丸剂、口含片或锭剂、扁囊剂或小丸剂。此外，脂质体或类蛋白包封可用于配制本发明的制剂(例如，美国专利号4,925,673中报道的类蛋白微球)。可以使用脂质体封装并且可以用各种聚合物衍生脂质体(例如，美国专利号5,013,556)。marshall在modern pharmaceutics，第10章，banker and rhodes等人，(1979)中给出了治疗剂可能的固体剂型的描述，该文献以引用方式并入本文。一般而言，该制剂将包括作为本发明的一部分描述的化合物(或其化学改性形式)，以及允许保护免受胃环境影响和在肠中释放生物活性材料的惰性成分。
252.对于本发明的cxcr2通路抑制剂或at1r阻断剂，释放位置可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。本领域技术人员有可用的制剂，它们不会在胃中溶解，但会在十二指肠或肠的其他地方释放物质。一方面，通过保护制剂或通过将化合物释放到胃环境之外(例如在肠中)释放将避免胃环境的有害影响。
253.本发明进一步提供了口服缓释药物制剂，其包含根据本发明的治疗有效的药物制剂和释放延缓剂。
254.在本发明的一个方面，释放延迟剂是水溶性的、水可溶胀的和/或水不溶性的聚合物。特别地，水溶性聚合物选自乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、肠溶衣；和半透膜。在本发明的另一个方面，释放延迟剂是非聚合物释放延迟剂。更特别地，非聚合物释放延迟剂是氢化蓖麻油。根据本领域已知的常规程序，可以将本发明的制剂研磨或制粒并压制成片剂或封装成胶囊。
255.为确保完全抗胃酸，使用至少ph 5.0不可渗透的包衣。用作肠溶包衣的更常见的惰性成分的实例是醋酸偏苯三酸纤维素(cat)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(hpmcp)、hpmcp 50、hpmcp 55、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(polyvinyl acetate phthalate，pvap)、eudragit l30d、aquateric、邻苯二甲酸醋酸纤维素(cap)、eudragit l、eudragit s和虫胶。这些包衣可用作混合膜。
256.包衣或包衣混合物也可用于片剂，其不用于保护胃。这包括但不限于糖衣或使片
剂更容易吞咽的包衣。示例性胶囊由用于递送干治疗剂即粉末的硬壳(例如明胶)组成；对于液体形式，可以使用软明胶壳。扁囊剂的外壳材料在某些方面是厚淀粉或其他可食用纸。对于丸剂、锭剂、模制片剂或片剂研磨剂，也可考虑湿法聚集技术(moist massing techniques)，但不限于此。
257.如本文所用，术语“持续释放”是指口服摄取后治疗化合物内容物在相对延长的时期内逐渐但连续或持续释放。在药物制剂从胃中通过，通过直到药物制剂到达肠道和在此之后释放可以继续。短语“持续释放”还意指延迟释放，其中治疗化合物的释放不是在药物制剂到达胃时立即开始，而是延迟一段时间，例如，直到药物制剂到达肠时。在到达肠道后，ph值的增加可能会引发治疗化合物从药物制剂中的释放。
258.尽管在本文中使用术语“释放延迟剂”，但它是指当口服摄入时降低治疗化合物从药物制剂中释放的速率的物质。释放延迟剂可以是聚合物或非聚合物。缓释剂可以根据几种持续释放系统，包括例如扩散系统、溶解系统和/或渗透系统中的任何一种使用。
259.在某些方面，治疗剂作为颗粒或小丸形式的细多颗粒包含在制剂中，颗粒大小约为1mm。在某些方面，用于胶囊施用的材料的制剂是粉末、轻压塞或甚至片剂。一方面，治疗剂可以通过压制制备。
260.可以任选地包括着色剂和调味剂。例如，可以配制化合物(例如但不限于，通过脂质体或微球封装)，然后进一步包含在可食用产品，例如含有着色剂和调味剂的冷藏饮料中。
261.一方面，治疗剂的体积可以用惰性材料稀释或增加。这些稀释剂可以包括碳水化合物，尤其是甘露醇、α-乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性葡聚糖和淀粉。某些无机盐也可任选用作填料，包括三磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些市售稀释剂是fast-flo、emdex、sta-rx 1500、emcompress和avicell。
262.在其他实施方案中，崩解剂包含在将治疗剂制成固体剂型的制剂中。用作崩解剂的材料包括但不限于淀粉，包括基于淀粉的商业崩解剂explotab。还考虑羟基乙酸淀粉钠、amberlite、羧甲基纤维素钠、超支链淀粉、海藻酸钠、明胶、橘皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和膨润土。另一种形式的崩解剂是不溶性阳离子交换树脂。粉状胶也可任选用作崩解剂和粘合剂，这些包括但不限于粉状胶，例如琼脂、karaya或黄蓍胶。海藻酸及其钠盐也可用作崩解剂。
263.预期粘合剂将治疗化合物保持在一起以形成硬片剂并且包括但不限于来自天然产物的材料，例如阿拉伯胶、黄蓍胶、淀粉和明胶。其他粘合剂包括但不限于甲基纤维素(mc)、乙基纤维素(ec)和羧甲基纤维素(cmc)。聚乙烯吡咯烷酮(pvp)和羟丙基甲基纤维素(hpmc)被考虑用于酒精溶液中以使治疗剂成粒。
264.抗摩擦剂可以任选地包含在治疗剂的制剂中以防止在制剂过程中粘连。润滑剂可以任选地用作治疗剂和模具壁之间的层，这些可以包括但不限于：硬脂酸，包括其镁盐和钙盐、聚四氟乙烯(ptfe)、液体石蜡、植物油和蜡。还可以使用示例性的可溶性润滑剂，例如包括月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁、各种分子量的聚乙二醇以及carbowax 4000和6000。
265.可以任选地添加助流剂，该助流剂可在配制过程中改善化合物的流动特性并有助于压缩过程中的重排。助流剂可以包括但不限于淀粉、滑石、热解二氧化硅和水合硅铝酸盐。
266.为了帮助治疗剂溶解到水性环境中，在某些实施方案中可以添加表面活性剂作为润湿剂。表面活性剂可以包括，例如但不限于，阴离子去污剂，例如月桂基硫酸钠、二辛基磺基琥珀酸钠和二辛基磺酸钠。可以任选使用阳离子去污剂，并且可以包括但不限于苯扎氯铵或苄索氯铵。可以作为表面活性剂包含在制剂中的潜在非离子去污剂的列表是月桂醇400、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油10、50和60、单硬脂酸甘油酯、聚山梨醇酯40、60、65和80，蔗糖脂肪酸酯，甲基纤维素和羧甲基纤维素。当使用时，这些表面活性剂可以单独存在于化合物的制剂中，也可以作为不同比例的混合物存在。
267.可能需要增加化合物吸收的添加剂。这种添加剂包括脂肪酸油酸、亚油酸和亚麻酸。
268.可能需要控制释放制剂。在某些方面，可以将化合物掺入惰性基质中，该惰性基质允许通过扩散或浸出机制即树胶释放。在一些方面，还可以将缓慢退化的基质加入到制剂中。这种治疗剂的另一种控制释放形式是通过基于oros
tm
治疗系统(alza corp.)的方法，即药物被封闭在半透膜中，允许水进入并通过单个小开口将药物推出(由于渗透作用)。一些肠溶包衣还具有缓释作用。
269.在其他方面，可以使用混合材料来提供最佳薄膜包衣。薄膜包衣可以例如但不限于在锅包衣机中或在流化床中或通过压缩包衣进行。
270.肺部和鼻部剂型
271.本文还考虑了本发明制剂的肺部递送。在这些方面，at1r阻断剂或cxcr2通路抑制剂可在吸入时被递送至受试者的肺并穿过肺上皮衬里进入血流。
272.预期用于实施本发明的是广泛范围的设计用于肺部递送治疗产品的机械装置，包括但不限于雾化器、计量吸入器和粉末吸入器，所有这些都是本领域技术人员所熟悉的。
273.适用于实施本发明的市售装置的一些具体实例是例如但不限于ultravent
tm
雾化器，由mallinckrodt,inc.,st.louis,missouri制造；acorn
tm ii雾化器，由marquest medical products,englewood,colorado制造；ventolin
tm
计量吸入器，由glaxo inc.,research triangle park,north carolina制造；spinhaler
tm
粉末吸入器，由fisons corp.,bedford,massachusetts制造。
274.所有这些装置都需要使用适合化合物分配的制剂。通常，每种制剂都特定于所用装置的类型，并且除了用于治疗的常用稀释剂、佐剂和/或载体之外，还可能涉及使用适当的分装药材料。此外，考虑使用脂质体、微胶囊或微球、包合复合物或其他类型的载体。
275.适用于喷射或超声波喷雾器的制剂通常包含悬浮在水中的化合物。一方面，制剂还可以包含缓冲剂和单糖(例如，用于蛋白质稳定和渗透压调节)。在一个实施方案中，雾化器制剂还可以包含表面活性剂，以减少或防止在形成气溶胶时由溶液雾化引起的表面诱导的化合物聚集。
276.与计量吸入器装置一起使用的制剂在一方面通常包含细碎的粉末，该粉末含有借助表面活性剂悬浮在分装药中的化合物。分装药可以是为此目的使用的任何常规材料，例如但不限于氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃或烃，包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1,1,1,2四氟乙烷，或它们的组合。合适的表面活性剂包括但不限于脱水山梨糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂。在某些方面，油酸也可用作表面活性剂。
277.用于从粉末吸入器装置分配的制剂将包含含有该化合物的细碎干粉，并且还可以
包括填充剂，例如但不限于乳糖、山梨糖醇、蔗糖或甘露醇，其量有助于粉末从装置中分散粉末，例如，以重量计制剂的50至90％。在某些实施方案中，将化合物制备成平均粒度小于10微米、最优选0.5至5微米的颗粒形式，以最有效地递送至远端肺。
278.还考虑了化合物的鼻腔递送。鼻腔递送允许在将治疗产品施用于鼻子后直接将蛋白质通过血流，而无需将产品沉积在肺中。用于鼻腔递送的制剂包括具有例如但不限于葡聚糖或环葡聚糖的那些。
279.给药方案
280.应当理解，在某些方面，本发明的制剂可以作为单剂量方案给予，或者优选地，以多剂量方案给予。多剂量方案是这样一种方案，其中主要的递送过程可以是1至10个分开的剂量，随后任选地以维持或加强治疗所需的后续时间间隔给予其他剂量。剂量方案也将至少部分地由个体的需要和从业者的判断来确定。
281.因此，本发明提供了包含本发明药物制剂的片剂；包含本发明药物制剂的胶囊、包含本发明药物制剂的可注射混悬剂和包含本发明药物制剂的用于肺部递送的制剂。at1r阻断剂和cxcr2通路抑制剂可以在相同的制剂中递送，或者可以在分开的制剂中递送。
282.at1r阻断剂和cxcr2通路抑制剂可以在相同的剂型中，或者可以在分开的剂型中。施用at1r阻断剂和cxcr2通路抑制剂的受试者可能已经接受了一种活性剂，并且可以根据本发明施用本发明治疗的其他组分。
283.用途
284.本发明还提供了包含(a)至少一种血管紧张素1型受体(at1r)阻断剂和(b)至少一种cxc趋化因子受体2(cxcr2)通路抑制剂的药物制剂在制备用于治疗、改善或预防病症或疾病的的制剂中的用途。
285.本发明进一步提供至少一种at1r阻断剂和至少一种cxcr2抑制剂，用于治疗、改善或预防疾病的制剂中。
286.本发明进一步提供至少一种at1r阻断剂，用于治疗、改善或预防疾病的制剂中，其中所述至少一种at1r阻断剂与至少一种cxcr2抑制剂同时或依次施用于受试者。
287.本发明进一步提供了至少一种cxcr2抑制剂，用于治疗、改善或预防疾病的制剂中，其中将至少一种cxcr2抑制剂与至少一种at1r阻断剂同时或依次施用于受试者。
288.优选地，该制剂用于治疗、改善或预防copd的病症或疾病。优选地，copd选自：肺气肿、慢性支气管炎、支气管扩张和难治性(不可逆)哮喘。
289.cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以以相同的剂型或分开的剂型施用。
290.cxcr2抑制剂和/或at1r阻断剂可以是各自受体的抗体抑制剂或阻断剂。cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以是相同的活性剂，例如双特异性抗体。cxcr2抑制剂和/或at1r阻断剂可以是cxcr2抑制剂和/或at1r阻断剂的药学上可接受的盐。
291.cxcr2抑制剂和at1r阻断剂可以同时或依次施用。
292.试剂盒
293.本发明提供了用于治疗或预防病症或疾病的试剂盒，所述试剂盒包含：
294.a)至少一种血管紧张素1型受体(at1r)阻断剂；
295.b)至少一种cxc趋化因子受体2(cxcr2)通路抑制剂；和
296.c)使用说明。
297.该试剂盒的内容物可以被冻干并且该试剂盒可以另外包含用于重构冻干组分的合适溶剂。试剂盒的各分组件将包装在单独的容器中，并且与这些容器相关联的可以是监管药品或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的通知，该通知反映了该机构批准用于人类施用的制造、使用或销售。
298.当试剂盒的组分以一种或多种液体溶液形式提供时，液体溶液可以是水溶液，例如无菌水溶液。对于体内使用，表达构建体可以配制成药学上可接受的可注射组合物。在这种情况下，容器装置本身可以是吸入器、注射器、移液管、滴管或其他类似装置，制剂可以从这些装置施加到动物的受影响区域，例如肺，注射到动物体内，甚至适用于并与试剂盒的其他成分混合。
299.试剂盒的组分也可以干燥或冻干形式提供。当试剂或组分以干燥形式提供时，通常通过添加合适的溶剂进行重构。设想溶剂也可以提供在另一个容器装置中。不考虑容器的数量或类型，本发明的试剂盒还可以包括或包装有用于辅助注射/施用或放置最终复合组合物在动物体内的工具。这样的仪器可以是吸入器、注射器、移液管、镊子、量匙、滴眼管或任何这样的医学上批准的递送工具。
300.通用
301.本领域的技术人员将理解，本文描述的本发明易于进行除具体描述的那些之外的变化和修改。本发明包括所有这些变化和修改。本发明还单独或共同地包括说明书中提及或指示的所有步骤、特征、制剂和化合物，以及包括任何和所有组合或任何两个或更多个步骤或特征。
302.本文中引用的每篇文献、参考、专利申请或专利均通过引用明确地整体并入本文，这意味着读者应将其作为本文的一部分阅读和考虑。本文中引用的文献、参考、专利申请或专利在本文中不重复仅仅是为了简洁。
303.本文提及的或通过引用并入本文的任何文件中的任何产品的任何制造商的说明、描述、产品规格和产品表均通过引用并入本文，并且可以在本发明的实践中使用。
304.本发明的范围不受本文所述的任何具体实施方案的限制。这些实施方案仅用于示例目的。功能等同的产品、制剂和方法显然在本文所述的本发明范围内。
305.本文描述的本发明可以包括一个或多个值范围(例如，尺寸、位移和场强等)。值的范围将被理解为包括该范围内的所有值，其包括限定该范围的值，以及与该范围相邻的值，其导致与紧邻限定该范围边界的值相同或基本相同的结果。因此，除非有相反的说明，否则说明书和权利要求书中提出的数值参数是近似值，可以根据本发明寻求获得的所需特性而变化。因此，“约80％”意味着“约80％”以及“80％”。至少，每个数值参数都应该根据有效数字的数量和普通的四舍五入方法来解释。
306.在整个说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含”(“comprises”或诸如“comprised”或“comprising”)的变体将被理解为暗示包含所陈述的整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。还应注意，在本公开内容中，特别是在权利要求和/或段落中，诸如包含“(comprises”或诸如“comprised”或“comprising”)等术语可以具有美国专利法中赋予它的含义；例如，它们可以表示“包括”(“includes”、“included”、“including”)等；并且“基本上由
……
组成”(“consisting essentially of”和“consists essentially of”)等术语具有美国专利法赋予它们的含义，例如，它们允许未明确列举的元素，但排除现有技
术中发现的或影响本发明的基本或新颖特征的元素。
307.本文使用的选定术语的其他定义可在本发明的详细描述中找到并且自始至终适用。除非另有定义，本文使用的所有其他科学和技术术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。术语“活性剂”可以是指一种活性剂或可以包括两种或更多种活性剂。
308.以下实施例用于更全面地描述使用上述发明的方式，以及提出为实施本发明的各个方面所设想的最佳模式。应当理解，这些方法绝不用于限制本发明的真实范围，而是出于说明性目的而呈现的。
实施例
309.在以下非限制性实施例中更全面地描述了本发明的其他特征。仅出于举例说明本发明的目的而包括该描述。不应将其理解为对上述本发明的广泛描述的限制。
310.在以下实施例1、3、4和5的每一个中，除非上下文另有要求，否则以下通用材料和方法适用。
311.hek293ft细胞以约700,000个细胞/孔的密度接种在6孔板中，并保持在37℃、5％co2的完全培养基(含有0.3mg/ml谷氨酰胺、100iu/ml青霉素和100μg/ml链霉素(gibco/thermo fisher)的dmem)，其补充有10％胎牛血清(fcs；bovogen)。根据制造商的说明，在接种后24小时使用fugene6
tm
(promega)进行瞬时转染。转染后24小时，用pbs洗涤细胞，使用0.05％胰蛋白酶/0.53mm edta分离，重悬于含有5％fcs的hepes缓冲无酚红完全培养基中，添加到聚-l-赖氨酸包被的白色96-微孔板(greiner bio-one)。转染后48小时，在细胞与enduren
tm
(promega)以30μm的终浓度，于37℃、5％co2预孵育2小时后，进行生物发光共振能量转移(bret)测定。使用lumistar
tm
或clariostar
tm
(bmg labtech)在37℃进行bret测量。在每个“供体波长窗口”(lumistar
tm
为460-490nm或clariostar
tm
为410-490nm)和“受体波长窗口”(lumistar
tm
为520-550nm或clariostar
tm
为520-620nm)测量过滤后的光发射1s。
312.对于拮抗剂/反向激动剂测定，将细胞与enduren预孵育1.5小时，然后加入媒介物或拮抗剂/反向激动剂(10μm)再孵育30分钟。然后读数20分钟后，加入激动剂(cxc基序趋化因子配体8[cxcl8]10nm和/或血管紧张素ii[angii]100nm)(因此在初始媒介物或拮抗剂/反向激动剂添加后50分钟)并再测量该测定40分钟。
[0313]
在相互作用的蛋白质之间观察到的bret信号通过减去背景bret比率来归一化。这可以通过以下两种方式之一完成(参见pfleger等人(2006)cell signal 18:1664-1670；pfleger等人(2006)nat protoc 1:336-344)：1)从含有相互作用的受体和供体融合蛋白的样品的520-550nm或520-620nm发射与460-490nm或410-490nm发射的比率中减去仅含有供体构建体的细胞样品的相同比率；2)从用配体处理细胞的样品的第二个等分试样的520-550nm或520-620nm发射与460-490nm或410-490nm发射的比率中减去用载体处理的相同细胞样品的相同比率。在以下实施例中，将使用第二次计算，并将信号描述为“配体诱导的bret”。此外，对于图4至20中所示的数据，给定集合中的所有数据点都相对于激动剂处理前的最终数据点进行了校正，该最终数据点固定为零。在图7到20的键中，“》”表示“接着在50分钟后”，在x轴上的零时间添加激动剂。
[0314]
mini g(mg)蛋白是gα亚基的工程化gtpase结构域。它们已用于与荧光蛋白融合的
tb cryptate antibody(cisbio 62ipapec)添加到每个孔中在室温持续60分钟。使用337nm激发并收集620nm和665nm的供体/受体发射在兼容阅读器(pherastar
tm
，bmg labtech)上读取板。绘制标准曲线以将未知的htrf比率(665/620x 10 000)测量值内插(interpolate)为ip1浓度(nm)。然后将激动剂浓度-响应数据用4参数s型曲线拟合，以得出log ec
50
和适当时的最大响应r
max
。
[0323]
已知d-myo-肌醇1-磷酸盐(ip1)的积累是受体激活gq蛋白的结果，进而导致磷脂酶c的激活。众所周知，at1r可激活gq信号通路(cabana等人(2015)j biol chem 290,15835
–
15854)。众所周知，gi蛋白(对百日咳毒素敏感)的激活也可以通过gβγ亚基激活磷脂酶c的某些同种型(camps等人(1992)nature 360,684-686；katz等人(1992)nature 360,686-689)。cxcr2经典地通过gi蛋白的激活发出信号(liu等人(2020)nature 585,135-140)。
[0324]
现在参考图2a，仅用cxcl8处理的用at1r和cxcr2瞬时转染的hek293细胞产生logec
50
(m)为-7.40，r
max
为251nm的浓度响应曲线。仅用angii处理产生logec
50
(m)为-9.21，r
max
为567nm的浓度响应曲线。用10nm cxcl8和一系列浓度的angii处理产生logec
50
(m)为-9.18，r
max
为717nm的浓度反应曲线。值得注意的是，在没有angii的情况下，10nm cxcl8导致[ip1]约为171nm，仅比基线高(仅用媒介物处理的细胞；159nm)约12nm。
[0325]
现在参考图2b，仅用cxcl8处理的稳定表达cxcr2并用at1r瞬时转染的hek293细胞产生logec
50
(m)为-7.79，r
max
为68nm的浓度响应曲线。仅用angii处理产生logec
50
(m)为-8.77，r
max
为209nm的浓度响应曲线。1nm cxcl8和用一系列浓度的angii处理产生logec
50
(m)为-8.72，r
max
为266nm的浓度响应曲线。值得注意的是，在没有angii的情况下，1nm cxcl8导致[ip1]与基线没有明显不同。
[0326]
这个实施例表明，[ip1]有显著增强，因此磷脂酶c活性是由angii激活at1r和cxcl8激活cxcr2的结果。此外，这种增强与显示当at1r和cxcr2都存在时用cxcl8和angii两者处理对gi耦合(如向生物传感器mgsi的邻近所证明)超过相加效应的数据一致。
[0327]
实施例3
[0328]
现在参考图3(发表于tiulpakov等人(2016)mol.endocrinol.30,889
–
904)，rluc8标记的受体与venus标记的kras质膜标记物或特定于不同亚细胞位置的venus标记的rabs的邻近度，在活细胞中，并使用bret进行实时监测。rab标记物为：venus/rab5(5)对应于早期内体；venus/rab4(4)对应于早期内体循环；venus/rab11a(11)对应于循环内体；venus/rab7(7)对应于晚期内体/溶酶体；venus/rab9(9)对应于晚期内体运输到反式高尔基体网络；venus/rab1(1)对应于向顺式高尔基体运输的内质网；venus/rab6(6)对应于高尔基器和反式高尔基网络；或venus/rab8(8)对应于反式高尔基网络到质膜。
[0329]
现在参考图4a，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与质膜标记物venus/kras的邻近度显著降低，表明cxcr2被内化到细胞中。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0330]
现在参考图4b，在at1r存在下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与质膜标记物venus/kras的邻近度显著降低，再次表明cxcr2被内化到细胞中。然而，相比之下，angii处理导致cxcr2/rluc8和venus/kras的邻近度增加，这为通过angii激活at1r增加质膜上cxcr2的量提供了证据。不希望受理论束缚，这些数据表明cxcr2表现出显著的组成性内化，
其被angii激活at1r抑制，和/或angii激活at1r增加了cxcr2向质膜的前向运输以增加质膜上cxcr2的表达。与仅用cxcl8相比，用cxcl8和angii两者处理导致cxcr2净内化较少，这可能是由cxcl8诱导的内化和由angii激活at1r诱导的cxcr2向质膜前向运输的净作用。
[0331]
现在参考图4c，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab1的邻近度略有增加，表明cxcr2从内质网到顺式高尔基体的运输略有增加。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0332]
现在参考图4d，在at1r存在的情况下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与venus/rab1的邻近度略有增加，再次表明cxcr2从内质网到顺式高尔基体的运输略有增加。仅angii几乎没有任何作用，然而，与angii共同处理看起来会降低cxcl8的作用。
[0333]
现在参考图4e，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab4的邻近度增加，表明cxcr2的早期内体循环增加。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0334]
现在参考图4f，在存在at1r的情况下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与venus/rab4的邻近度增加，表明cxcr2的早期内体循环增加。angii仅在较晚时间点导致cxcr2的早期内体循环的非常小的增加，然而，与angii的共同处理看起来降低了cxcl8的作用，特别是在早期的时间点。
[0335]
现在参考图4g，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab5的邻近度显著增加，表明早期内体中cxcr2的显著增加。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0336]
现在参考图4h，在at1r存在的情况下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与venus/rab5的邻近度显著增加，表明早期内体中cxcr2的显著增加。仅angii导致早期内体中cxcr2的非常小的增加，然而，与angii的共同处理看起来大大降低了cxcl8的作用。这与在angii激活的at1r存在下cxcl8诱导的cxcr2内化减少一致，导致质膜上的cxcr2增加，如用kras数据观察到的。
[0337]
现在参考图4i，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab6的接近程度略有下降，表明通过高尔基体向反式高尔基网络的cxcr2运输略有下降。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0338]
现在参考图4j，在at1r存在的情况下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与venus/rab6的邻近度略有下降，再次表明通过高尔基体向反式高尔基网络的cxcr2运输略有下降。相比之下，仅angii处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab6的邻近度略有增加，表明angii激活的at1r促进了通过高尔基体向反式高尔基网络的cxcr2运输的小幅增加。因此，与angii的共同处理看起来使cxcl8在稍后时间点的作用无效，反之亦然。
[0339]
现在参考图4k，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab7的邻近度略有增加，表明晚期内体/溶酶体中cxcr2的小幅增加。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0340]
现在参考图4l，在at1r存在的情况下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与venus/rab7的邻近度略有增加，再次表明晚期内体/溶酶体中cxcr2的小幅增加。仅angii几乎没有任何作用，然而，与仅使用cxcl8相比，使用angii和cxcl8两者处理导致邻近度增加更大，特别是在较晚的时间点。
[0341]
现在参考图4m，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab8的邻近度略有下降，表明cxcr2从反式高尔基网络到质膜的运输略有减少。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0342]
现在参考图4n，在存在at1r的情况下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与venus/rab8的邻近度略有下降，尽管它可能不如在没有at1r时观察到的那么明显。引人注目的是，仅angii处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab8的邻近度明显增加。使用angii和cxcl8两者处理仍会导致邻近度明显增加，与仅angii相比略有降低。这些数据表明，angii对at1r的激活促进了cxcr2从反式高尔基网络向质膜的前向运输，这与在angii激活at1r后观察到的cxcr2/rluc8与venus/kras的邻近度增加一致。
[0343]
现在参考图4o，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab9的邻近度增加，表明cxcr2从晚期内体到反式高尔基网络的运输增加。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0344]
现在参考图4p，在at1r存在的情况下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与venus/rab9的邻近度增加，表明cxcr2从晚期内体到反式高尔基网络的运输增加。仅angii导致小幅增加，然而，与angii共同处理会略微降低cxcl8的作用。
[0345]
现在参考图4q，在没有at1r的情况下，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab11a的邻近度增加，表明通过循环内体的cxcr2运输增加。angii没有任何作用，cxcl8和angii两者组合与仅cxcl8具有相同的作用。
[0346]
现在参考图4r，在at1r存在的情况下，cxcl8处理再次导致cxcr2/rluc8与venus/rab11a的邻近度增加，再次表明通过循环内体的cxcr2运输增加。仅angii几乎没有任何作用，然而，与angii共同处理会降低cxcl8的作用。
[0347]
现在参考图5a，在没有cxcr2的情况下，angii处理导致at1r/rluc8与质膜标记物venus/kras的邻近度显著降低，表明at1r被内化到细胞中。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0348]
现在参考图5b，在存在cxcr2的情况下，angii处理再次导致at1r/rluc8与质膜标记物venus/kras的邻近度显著降低，再次表明at1r被内化到细胞中。与在其他方向观察到的相反(图4b)，angii处理不会导致at1r/rluc8和venus/kras的邻近度显著增加，表明cxcl8对cxcr2的激活不会增加在质膜上at1r的量。因此，在图4b中清楚地观察到的作用看起来不是互为倒数的。与仅angii相比，使用cxcl8和angii两者处理导致较少的at1r内化。
[0349]
现在参考图5c，在没有cxcr2的情况下，angii处理导致at1r/rluc8与venus/rab1的邻近度增加，表明从内质网到顺式高尔基体的at1r运输增加。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0350]
现在参考图5d，在存在cxcr2的情况下，angii处理再次导致at1r/rluc8与venus/rab1的邻近度增加，再次表明从内质网到顺式高尔基体的at1r运输增加。仅cxcl8几乎没有任何作用(可能略有下降)，并且与cxcl8共同处理对angii的影响影响很小。
[0351]
现在参考图5e，在没有cxcr2的情况下，angii处理导致at1r/rluc8与venus/rab4的邻近度增加，表明at1r的早期内体循环增加。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0352]
现在参考图5f，在存在cxcr2的情况下，angii处理再次导致at1r/rluc8与venus/
rab4的邻近度增加，再次表明at1r的早期内体循环增加。仅cxcl8几乎没有任何作用(可能略有下降)，尽管与cxcl8共同处理会降低angii的作用。
[0353]
现在参考图5g，在没有cxcr2的情况下，angii处理导致at1r/rluc8与venus/rab5的邻近度显著增加，表明早期内体中at1r的显著增加。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0354]
现在参考图5h，在存在cxcr2的情况下，angii处理再次导致at1r/rluc8与venus/rab5的邻近度显著增加，表明早期内体中at1r的显著增加。仅cxcl8没有明显的作用，然而，与cxcl8共同处理看起来大大降低了angii的作用。这与在cxcl8激活的cxcr2存在下angii诱导的at1r内化减少，导致如用kras数据观察到的质膜上的cxcr2增加一致。
[0355]
现在参考图5i，在没有cxcr2的情况下，angii处理对at1r/rluc8与venus/rab6的邻近度几乎没有作用(可能是非常小的和短暂的下降)，表明对at1r通过高尔基体运输到反式高尔基网络几乎没有作用。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0356]
现在参考图5j，就at1r/rluc8与venus/rab6的邻近度而言，cxcr2的存在与没有cxcr2时观察到的结果相比几乎没有什么区别。
[0357]
现在参考图5k，在没有cxcr2的情况下，angii处理导致at1r/rluc8与venus/rab7的邻近度增加，表明晚期内体/溶酶体中at1r的增加。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0358]
现在参考图5l，在存在cxcr2的情况下，angii处理再次导致at1r/rluc8与venus/rab7的邻近度增加，再次表明晚期内体/溶酶体中at1r的增加。仅cxcl8没有作用，与cxcl8共同处理可能会增加在稍后时间点用angii观察到的效果)。
[0359]
现在参考图5m，在没有cxcr2的情况下，angii处理导致at1r/rluc8与venus/rab8的邻近度在后期时间点有小幅增加，这表明对从反式高尔基网络向质膜的at1r运输的作用很小。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0360]
现在参考图5n，就at1r/rluc8与venus/rab8的邻近度而言，cxcr2的存在与在cxcr2不存在的情况下观察到的结果几乎没有区别。如果有的话，cxcl8降低了邻近度，angii的作用较小，并且cxcl8和angii两者组合再次与仅angii具有相同的效果。
[0361]
现在参考图5o，在没有cxcr2的情况下，angii处理导致at1r/rluc8与venus/rab9的邻近度增加，表明从晚期内体到反式高尔基网络的at1r运输增加。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0362]
现在参考图5p，在存在cxcr2的情况下，angii处理再次导致at1r/rluc8与venus/rab9的邻近度增加，再次表明从晚期内体到反式高尔基网络的at1r运输增加。仅cxcl8几乎没有任何作用，尽管与cxcl8共同处理会降低angii的作用。
[0363]
现在参考图5q，在没有cxcr2的情况下，angii处理导致at1r/rluc8与venus/rab11a的邻近度显著增加，表明通过循环内体的at1r运输大幅增加。cxcl8没有作用，cxcl8和angii两者组合与仅angii的作用相同。
[0364]
现在参考图5r，在存在cxcr2的情况下，angii处理再次导致at1r/rluc8与venus/rab11a的邻近度显著增加，表明通过循环内体的at1r运输显著增加。仅cxcl8没有明显的作用，但是与cxcl8共同处理会降低angii的作用。
[0365]
这个实施例表明，at1r的激活通过减少cxcr2内化的量和/或通过增加cxcr2从反式高尔基网络到质膜的前向运输来增加质膜上cxcr2的表达。此外，由于at1r激活，质膜上cxcr2表达的这种增加与显示当存在at1r和cxcr2两者时用cxcl8和angii两者处理对gi耦合(如通过与生物传感器mgsi的邻近度证明)超过相加效应的数据一致。此外，由于at1r激活，质膜上cxcr2表达的这种增加与当细胞与固定浓度的cxcl8以及一系列浓度的angii共同处理时观察到的磷脂酶c活性的增强(如ip-1积累的增强所证明)一致。
[0366]
这个实施例还证明了cxcr2的激活减少了at1r内化的量，这与当at1r被激活时cxcr2上观察到的作用呈倒数关系。然而，相比之下，cxcr2激活不会增加从反式高尔基网络到质膜的at1r的前向运输，因此在这方面，与当at1r被激活时cxcr2观察到的作用不互为倒数。
[0367]
实施例4
[0368]
现在参考图6-15，在用媒介物或拮抗剂/反向激动剂(10μm)预处理后50分钟后通过仅用10nm cxcl8或100nm angii或cxcl8和angii两者组合处理(浓度比用于生成图1b数据的浓度低10倍)，从瞬时表达cxcr2/rluc8、venus/mgsi和ha-at1r的细胞测量bret信号。在激动剂处理之前(在0分钟添加)，记录每种组合的基线bret信号20分钟。数据计算为配体诱导的bret相对于“媒介物后媒介物”(veh》veh)数据集。
[0369]
现在参考图6a，用媒介物作为对照对细胞进行预处理，以建立“媒介物后媒介物”基线，并显示仅cxcl8、仅angii以及cxcl8和angii两者组合在用于后续使用拮抗剂/反向激动剂的实验的浓度下的作用。
[0370]
现在参考图6b、6c、6d、6e和6f，用cxcr2变构反向激动剂sb265610(图6b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图6c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图6d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图6e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图6f)预处理细胞，导致cxcl8的作用被完全抑制，但angii的作用没有改变。cxcl8和angii组合的效果与在每种情况下仅使用angii观察到的效果没有区别。
[0371]
现在参考图7a，用at1r拮抗剂伊贝沙坦预处理细胞，导致angii的作用被完全抑制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0372]
现在参考图7b、7c、7d、7e和7f，用at1r拮抗剂伊贝沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图7b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图7c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图7d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图7e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图7f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0373]
现在参考图8a，用at1r拮抗剂奥美沙坦预处理细胞，导致angii的作用被完全抑制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0374]
现在参考图8b、8c、8d、8e和8f，用at1r拮抗剂奥美沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图8b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图8c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图8d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图8e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图8f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0375]
现在参考图9a，用at1r拮抗剂坎地沙坦预处理细胞，导致angii的作用被完全抑
制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0376]
现在参考图9b、9c、9d、9e和9f，用at1r拮抗剂坎地沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图9b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图9c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图9d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图9e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图9f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0377]
现在参考图10a，用at1r拮抗剂缬沙坦预处理细胞，导致angii的作用被完全抑制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0378]
现在参考图10b、10c、10d、10e和10f，用at1r拮抗剂缬沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图10b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图10c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图10d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图10e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图10f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0379]
现在参考图11a，用at1r拮抗剂依普沙坦预处理细胞，导致angii的作用被完全抑制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0380]
现在参考图11b、11c、11d、11e和11f，用at1r拮抗剂依普沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图11b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图11c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图11d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图11e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图11f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0381]
现在参考图12a，用at1r拮抗剂阿齐沙坦预处理细胞，导致angii的作用被完全抑制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0382]
现在参考图12b、12c、12d、12e和12f，用at1r拮抗剂阿齐沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图12b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图12c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图12d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图12e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图12f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0383]
现在参考图13a，用at1r拮抗剂氯沙坦预处理细胞，导致angii的作用被完全抑制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0384]
现在参考图13b、13c、13d、13e和13f，用at1r拮抗剂氯沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图13b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图13c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图13d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图13e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图13f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0385]
现在参考图14a，用at1r拮抗剂exp3174(氯沙坦的活性代谢物)预处理细胞，导致angii的作用被完全抑制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0386]
现在参考图14b、14c、14d、14e和14f，用at1r拮抗剂exp3174(氯沙坦的活性代谢物)和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图14b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图14c)、cxcr2反向
激动剂navarixin(sch527123；图14d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图14e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图14f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0387]
现在参考图15a，用at1r拮抗剂替米沙坦预处理细胞，导致angii的作用被完全抑制，但cxcl8的作用没有改变。cxcl8和angii组合的作用与仅使用cxcl8观察到的作用没有区别。
[0388]
现在参考图15b、15c、15d、15e和15f，用at1r拮抗剂替米沙坦和cxcr2变构反向激动剂sb265610(图15b)、cxcr2拮抗剂sb225002(图15c)、cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123；图15d)、cxcr2拮抗剂azd5069(图15e)或cxcr2拮抗剂danirixin(图15f)两者组合预处理细胞，导致仅cxcl8的作用、仅angii的作用或两者组合的作用被完全抑制。
[0389]
该实施例表明，在at1r-cxcr2异聚体中的cxcr2和at1r两者激活时，gi偶联(如通过cxcr2/rluc8与venus/mgsi生物传感器的邻近度增加所表明)通过添加at1r拮抗剂与cxcr2拮抗剂、cxcr2反向激动剂或cxcr2变构反向激动剂(作为cxcr2负变构调节剂的实例，也是cxcr2反向激动剂)组合而被完全抑制。
[0390]
实施例5
[0391]
现在参考图16，在用媒介物或拮抗剂/反向激动剂(10μm)预处理后50分钟后通过仅用如所示的10nm cxcl8或100nm angii或cxcl8和angii两者组合处理(浓度比用于生成图4b数据的浓度低10倍)，从瞬时表达cxcr2/rluc8、venus/kras和ha-at1r的细胞测量bret信号。在激动剂处理之前(在0分钟添加)，记录每种组合的基线bret信号20分钟。数据计算为配体诱导的bret相对于“媒介物后媒介物”(veh》veh)数据集。
[0392]
现在参考图16a，如图4b中观察到的，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与质膜标记物venus/kras的邻近度显著降低，表明cxcr2被内化到细胞中。然而，相比之下，angii处理导致cxcr2/rluc8和venus/kras的邻近度增加，这为通过angii激活at1r增加质膜上cxcr2的量提供了证据。与仅用cxcl8相比，用cxcl8和angii两者处理导致cxcr2净内化较少，这可能是由cxcl8诱导的内化和由angii激活at1r诱导的cxcr2向质膜前向运输的净作用。用媒介物对细胞进行预处理作为对照，以建立“媒介物后媒介物”基线，并显示仅cxcl8、仅angii以及cxcl8和angii两者组合在用于后续使用拮抗剂/反向激动剂的实验的浓度下的作用。
[0393]
现在参考图16b，用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理完全抑制了angii的作用。
[0394]
现在参考图16c，用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用与在用媒介物预处理细胞时仅cxcl8观察到的作用没有区别。
[0395]
现在参考图16d，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)、cxcr2拮抗剂sb225002或cxcr2变构反向激动剂sb265610预处理不会改变angii的作用。
[0396]
现在参考图16e，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)、cxcr2拮抗剂sb225002或cxcr2变构反向激动剂sb265610预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用与在用媒介物预处理细胞时仅angii观察到的作用没有区别。
[0397]
现在参考图16f，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被抑制。
[0398]
现在参考图16g，用cxcr2拮抗剂sb225002与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐
沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被抑制。
[0399]
现在参考图16h，用cxcr2变构反向激动剂sb265610与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被抑制。
[0400]
现在参考图17a，如图4h中观察到的，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab5的邻近度显著增加，表明早期内体中cxcr2的显著增加。仅angii导致早期内体中cxcr2的非常小的增加，然而，与angii的共同处理大大降低了cxcl8的作用。这与在angii激活的at1r存在下cxcl8诱导的cxcr2内化减少，导致如用kras数据观察到的质膜上的cxcr2增加一致。
[0401]
用媒介物对细胞进行预处理作为对照，以建立“媒介物后媒介物”基线，并显示仅cxcl8、仅angii以及cxcl8和angii两者组合在用于后续使用拮抗剂/反向激动剂的实验的浓度下的作用。
[0402]
现在参考图17b，用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理完全抑制了angii的作用。
[0403]
现在参考图17c，用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用与在用媒介物预处理细胞时仅cxcl8观察到的作用没有区别。
[0404]
现在参考图17d，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)预处理不会改变angii的作用，而用cxcr2拮抗剂sb225002或cxcr2变构反向激动剂sb265610预处理看起来确实抑制了angii的作用。
[0405]
现在参考图17e，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用与在用媒介物预处理细胞时仅angii观察到的作用没有区别。相比之下，用cxcr2拮抗剂sb225002或cxcr2变构反向激动剂sb265610预处理看起来抑制了angii的作用以及cxcl8的作用。
[0406]
现在参考图17f，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0407]
现在参考图17g，用cxcr2拮抗剂sb225002与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0408]
现在参考图17h，用cxcr2变构反向激动剂sb265610与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0409]
现在参考图18a，如图4n中观察到的，cxcl8处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab8的邻近度略有下降。引人注目的是，仅angii处理导致cxcr2/rluc8与venus/rab8的邻近度明显增加，使用angii和cxcl8两者组合处理也一样。这些数据表明，angii对at1r的激活促进了cxcr2从反式高尔基网络向质膜的前向运输，这与在angii激活at1r后观察到的cxcr2/rluc8与venus/kras的邻近度增加一致。用媒介物对细胞进行预处理作为对照，以建立“媒介物后媒介物”基线，并显示仅cxcl8、仅angii以及cxcl8和angii两者组合在用于后续使用拮抗剂/反向激动剂的实验的浓度下的作用。
[0410]
现在参考图18b，用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理完全抑制了angii的作用。
[0411]
现在参考图18c，用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0412]
现在参考图18d，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)、cxcr2拮抗剂
sb225002或cxcr2变构反向激动剂sb265610预处理不会改变angii的作用。
[0413]
现在参考图18e，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)、cxcr2拮抗剂sb225002或cxcr2变构反向激动剂sb265610预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用与在用媒介物预处理细胞时仅angii观察到的作用没有区别。
[0414]
现在参考图18f，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0415]
现在参考图18g，用cxcr2拮抗剂sb225002与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0416]
现在参考图18h，用cxcr2变构反向激动剂sb265610与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0417]
现在参考图19a，angii处理导致at1r/rluc8与质膜标记物venus/kras的邻近度显著降低，表明at1r被内化到细胞中。用媒介物对一些细胞进行预处理作为对照，以建立“媒介物后媒介物”基线，并显示仅angii在用于后续使用拮抗剂/反向激动剂的实验的浓度下的作用。用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理完全抑制了angii的作用。
[0418]
现在参考图19b，cxcl8和angii两者组合的作用略低于仅angii观察到的作用(图19a)。用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理导致这种作用被完全抑制。
[0419]
现在参考图19c，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)、cxcr2拮抗剂sb225002、cxcr2变构反向激动剂sb265610、cxcr2拮抗剂azd5069或cxcr2拮抗剂danirxin预处理导致用cxcl8和angii两者组合处理后观察到的效果与当用媒介物预处理时仅angii观察到的效果没有区别(图19a)。
[0420]
现在参考图19d，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0421]
现在参考图19e，用cxcr2拮抗剂sb225002与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0422]
现在参考图19f，用cxcr2变构反向激动剂sb265610与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0423]
现在参考图20a，angii处理导致at1r/rluc8与早期内体标记物venus/rab5的邻近度显著增加，表明at1r被内化到细胞中。用媒介物对一些细胞进行预处理作为对照，以建立“媒介物后媒介物”基线，并显示仅angii在用于后续使用拮抗剂/反向激动剂的实验的浓度下的作用。用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理完全抑制了angii的作用。
[0424]
现在参考图20b，cxcl8和angii两者组合的作用小于仅angii观察到的作用(图20a)。用at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦预处理导致这种作用被完全抑制。
[0425]
现在参考图20c，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)、cxcr2拮抗剂sb225002、cxcr2变构反向激动剂sb265610、cxcr2拮抗剂azd5069或cxcr2拮抗剂danirxin预处理导致用cxcl8和angii两者组合处理后观察到的效果与当用媒介物预处理时仅angii观察到的效果没有区别(图19a)。
[0426]
现在参考图20d，用cxcr2反向激动剂navarixin(sch527123)与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0427]
现在参考图20e，用cxcr2拮抗剂sb225002与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐
沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用几乎被完全抑制。
[0428]
现在参考图20f，用cxcr2变构反向激动剂sb265610与at1r拮抗剂伊贝沙坦、缬沙坦或阿齐沙坦组合预处理导致cxcl8和angii两者组合的作用被完全抑制。
[0429]
该实施例表明，通过添加at1r拮抗剂与cxcr2拮抗剂、cxcr2反向激动剂或cxcr2变构反向激动剂(例如cxcr2负变构调节剂，也是cxcr2反向激动剂)抑制了在at1r-cxcr2异聚体中激活cxcr2和at1r后观察到的对内化的作用。
[0430]
此外，该实施例表明，通过添加at1r拮抗剂完全抑制了对cxcr2前向运输的作用，进一步支持了两种受体之间的功能相互作用，并提供了更多证据表明at1r激活增加了质膜上cxcr2的表达。这反过来提供了一种机制，其有助于增强由cxcr2介导的炎症信号传导，因此为抑制at1r和cxcr2以减少慢性阻塞性肺病等疾病中的炎症提供了理论依据。