一种康复新液与FGF-10在协同调节肠道菌群和免疫系统稳态改善中的应用的制作方法

一种康复新液与fgf-10在协同调节肠道菌群和免疫系统稳态改善中的应用
技术领域
1.本发明涉及生物医药领域，更为具体的，本发明涉及一种fgf-10和康复新液在调节肠道菌群和免疫系统稳态改善中的应用。


背景技术：

2.慢性肠炎又叫炎症性肠病(inflammatory bowel disease，ibd)是一种累及回肠、直肠和结肠的特发性慢性肠道炎症，主要包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，uc)和克隆恩症(crohn's disease，cd)。临床主要表现为长期慢性、或反复发作的腹痛、腹泻及消化不良，重者可有粘液便或水样便。ibd被认为是一种全身性疾病，可累及多种肠外组织和器官，并引起肠外表现和全身消化与代谢功能紊乱。
3.人体肠道组织内生活着不同种类的微生物，包括细菌，病毒和真菌等。据估计人体肠道内细菌数目高达100万亿个，是人体总细胞数目的10倍，且它们编码的基因数目是人体自身基因数目的100倍，对生理机能和营养的摄取有很大的影响。近年来研究表明，肠道菌群是人体不可缺少的重要组成部分，是组成人体重要的“器官”之一，对我们个体的成长和生活产生很大影响。肠道菌群失调在ibd 疾病的发生过程中起着重要角色。在健康个体中，95%的肠道菌属于杆菌门和球形梭菌、柔梭菌群亚组，但是在 ibd 患者肠道中上述菌群数目减少，特别是双歧杆菌和硬壁菌门。在cd患者中，肠道菌群的多样性减少，以及占主要比例的硬壁菌门数目大幅度降低，而类杆菌数目增多。此外，在cd 患者中新发现属于梭菌家族具有抗炎作用的普氏杆菌数目同样减少。肠道菌群移植实验已经证明肠道菌群失调是导致 ibd 等症状的因素之一。研究表明将 ibd患者肠道菌群移植至无病菌的小鼠体内，该移植小鼠表现出ibd症状，且小鼠肠道菌群多样性和数目比例同 ibd 患者的相类似。同样，在临床研究中，通过移植健康个体的肠道粪便菌群可以对 ibd 症状进行改善和治疗。例如，肠中部位进行标准化的粪便菌群移植至 cd 患者体内明显增加患者体重和营养状况，以及增加 igm 含量，其可能作用机制为 iv, xiva 和 xviii 梭菌群通过提供细菌抗原和 tgf-β微环境和细菌代谢产物短链脂肪酸（scfas），诱导 treg 细胞分化和产生，产生具有抗炎作用的 il
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10 等和增加肠道菌群的多样性。通过以上研究数据我们得出结论，肠道菌群在维持肠道正常生理过程中起着重要作用，肠道菌群失调可引起ibd的发生和进展。因此，通过对肠道菌群的调节来改善和治疗ibd具有可行性和研究价值。
4.康复新液是美洲大蠊干燥虫体提取物，主要成分为氨基酸，小分子多肽和核酸。目前康复新液用于临床主要作用于各种溃疡性疾病，尤其是皮肤溃疡。药理研究表明，康复新液可以增强免疫力，减少炎症，促进表皮细胞生长和肉芽组织增生，并能加速损伤组织的修复和再生，进而促进伤口愈合。fgf10是成纤维细胞生长因子家族的一员,参与多种器官的发育和成熟过程，有研究显示，fgf10在人类肛门直肠发育过程中可能发挥重要作用。然而目前尚未见fgf10对ibd的治疗作用的研究和报道。


技术实现要素：

5.为了填补现有技术的空白，本发明提供一种fgf-10和康复新液在调节肠道菌群和免疫系统肠道稳态改善中的应用。具体的，本发明提供如下的技术方案：
6.本发明的第一个方面，提供一种用于治疗肠道炎症的组合物，所述组合物包括fgf-10 和康复新液。
7.在一种实施方式中，所述组合物为液体制剂。
8.在一种实施方式中，所述组合物的使用方式为灌肠用。
9.本发明的另一个方面，提供一种上述组合物在用于制备肠道菌群调节药物中的应用。
10.本发明的另一个方面，提供一种上述组合物在用于制备改善肠道免疫系统稳态药物中的应用。
11.本发明的另一个方面，提供一种上述组合物在用于制备修复肠道粘膜屏障的药物中的应用。
12.本发明相对于现有技术具有如下有益的技术效果：
13.本发明首次公开了康复新液与fgf-10在肠道炎症治疗中的协同作用，并且惊喜的发现， fgf-10可显著改善康复新液灌肠后肠道菌群的结构，促进肠道炎症的恢复，并且对于肠道免疫系统稳态和肠道粘膜屏障修复均可起到协同促进的作用。
附图说明
14.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
15.图1不同分组小鼠th细胞和treg细胞数量变化情况；
16.图2不同分组小鼠粪便中短链脂肪酸含量。
具体实施方式
17.以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
18.实施例1小鼠肠炎模型的构建方法
19.通过本领域常规的葡聚糖硫酸钠(dss)诱导小鼠炎症性肠病(ibd)模型，具体操作如下：
20.取8周龄balb/c小鼠10只，体重16～18g，雌雄各半，5％dss以蒸馏水配制而成。小鼠自由饮用5％dss 7天后，改为自由饮用蒸馏水10天，构成1个循环。小鼠在造模开始后的第4～5天即出现腹泻，隐血试验阳性，第5～7天肉眼血便，持续到第8～9天。1 个循环结束7天后随机选取10只小鼠处死，病理结果可见：小鼠病变自肛门向口端连续性发展，以直肠最为严重。病变部位黏膜充血水肿，可见散在性糜烂或溃疡。黏膜和黏膜下层以中性粒细胞浸润为主。显示小鼠ibd模型造模成功。
21.实施例2通过dai评分评价康复新液和fgf-10对小鼠ibd模型的协同治疗作用
22.取8周龄balb/c小鼠80只，体重16～18g，雌雄各半，将其随机分为三组：
23.正常对照组：20只，雌雄各半，每日正常饲料 蒸馏水喂养；
24.ibd模型组：20只，雌雄各半，在每日正常饲料喂养下，按照实施例1的方法建模；
25.ibd康复新液治疗组：20只，雌雄各半，在每日正常饲料喂养下，按照实施例1的方法建模，从建模第5日起每日采用添加有fgf-10的康复新液(购自四川好医生攀西药业有限责任公司)对小鼠实施灌肠，灌肠液中康复新液浓度为6mg/ml；
26.ibd康复新液 fgf-10治疗组：20只，雌雄各半，在每日正常饲料喂养下，按照实施例1的方法建模，从建模第5日起每日采用添加有fgf-10的康复新液(购自四川好医生攀西药业有限责任公司)对小鼠实施灌肠，灌肠液中康复新液浓度为6mg/ml，fgf-10的浓度为1mg/ml；
27.从造模第1日开始，每日观察小鼠的毛色、精神状态、活动情况、粪便性状、隐血及肉眼血便情况，按照表1进行疾病活性指数(disease activity index，dai)评分，根据体质量下降、粪便性状及隐血情况评分计算每只小鼠每日的dai值，并计算均值。以评估其疾病活性情况。
28.表1：dai评分标准
[0029][0030][0031]
注：正常粪便：成形粪便；
[0032]
松散粪便：不黏附于肛门的糊状、半成形粪便；
[0033]
稀便：可黏附与肛门口的稀水样便。
[0034]
实验结果如表2所示，使用dss诱导小鼠肠炎后，小鼠体重下降，出现肉眼血便。经复新液灌肠治疗后，可显著改善小鼠dai指数。在康复新液中添加fgf-10可协同提高康复新液对ibd的治疗效果，显著改善小鼠体重下降，肉眼下无血便。
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表2：不同处理组小鼠dai评分
[0036]
组别ndai评分对照组200ibd模型组203.33ibd模型 康复新液治疗组201.32ibd模型 康复新液 fgf-10治疗组200.96
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实施例3康复新液和fgf-10对肠炎小鼠的肠道菌群的协同调节作用
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采用实时荧光定量pcr法检测4组不同处理小鼠肠道菌群总数及2种肠道益生菌 (如：双歧杆菌、乳酸杆菌)及6种肠道致病菌(大肠杆菌、葡萄球菌、韦荣球菌、幽门螺杆菌、链球菌、铜绿假单胞菌)水平。结果如表3所示，dss诱导肠炎模型小鼠肠道致病菌数量增加，益生菌数量减少；而康复新液治疗后可显著降低肠道致病菌数量，增加肠道益生菌，然而通
过表3可见，康复新液灌肠后，虽然致病菌数量显著降低，然而对于肠道益生菌的恢复来讲效果并不明显，这可能是由于康复新液在灌肠中更多起到的是降低炎症反应的作用，而加入fgf-10后，不仅进一步提升了对肠道致病菌的抑制作用，而且显著提升了肠道内益生菌的含量，说明fgf-10对肠道环境的恢复起到了重要的作用。
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表3三组肠道菌群比较(对数/g粪便，x
±
s)
[0040][0041]
实施例4康复新液和fgf-10对肠炎小鼠肠道免疫系统稳态的改善作用
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为了进一步研究康复新液和fgf-10在肠道免疫稳态中的作用，我们在建模第10 天(即治疗第5天)对各组小鼠结肠组织中免疫细胞的数量进行流式检测，各组检测结果如图1所示，dss诱导的肠炎小鼠th细胞数目增加，treg细胞数量减少，而康复新液治疗能抑制th细胞的增加、并增加treg细胞数目，在康复新液中添加fgf-10可协同提高肠道中免疫细胞的数量。
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实施例5康复新液对小鼠肠道上皮细胞粘膜屏障功能的修复作用
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短链脂肪酸(short-chain fattyacids,scfas)对肠道粘膜屏障的维持等有重要作用。短链脂肪酸是含1～6个碳原子的有机羧酸，包含乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、异丁酸、异成酸和异己酸等。90％scfas是由肠道不消化的碳水化合物，在结肠内经细菌发酵而产生，余下部分则是由饮食摄入和蛋白质等代谢产生，正常人体肠道每日可产生约50～100mmolscfa。大部分scfas在肠道被吸收发挥作用，有少量scfa(约占总量5％-10％)可在大便样本中被检出，因此粪便中scfa浓度一定程度上可反映肠道产生的scfas浓度。
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为了研究康复新液对炎症性肠病肠道通透性的影响，我们在建模第10天(即治疗第5 天)利用气相色谱法对各组小鼠粪便中的短链脂肪酸含量进行测量。结果如图2所示，dss 诱导的肠炎小鼠总的短链脂肪酸(scfa)大量减少，而康复新液治疗后可显著增加scfa含量，在康复新液中添加fgf-10更可以起到协同修复肠道粘膜屏障的效果。
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以上结果均显示，fgf-10可显著增强康复新液对ibd的治疗效果，促进ibd模型的肠道功能恢复，二者具有协同的技术效果。
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显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围
之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。