胶原蛋白产生促进剂、药物、化妆品和胶原蛋白产生促进剂的制造方法与流程

1.本发明涉及胶原蛋白产生促进剂、药物、化妆品和胶原蛋白产生促进剂的制造方法。


背景技术：

2.近年来，随着关于人体皮肤结构、其新陈代谢的机制等的研究的深入，伴随年龄增长的人体皮肤出现皱纹、细纹、雀斑和松弛等变化的原因、机理正逐渐清晰。皮肤由外侧的薄的表皮(上皮组织)和其下层的厚的真皮(结缔组织)构成。表皮作为身体的最外层来保护生物体免受外界影响，并且防止内部的水分、营养成分漏出到外界。真皮为主要具有成纤维细胞、胶原纤维(胶原蛋白)、弹性纤维(弹性蛋白)和蛋白聚糖等复合地扩展成三维状的结构的结缔组织，起到给皮肤带来强度、伸展性和弹性的作用。如果随着年龄增长而皮肤中的皮脂、水分的量减少，则皮肤表面的角质层的保湿能力丧失，容易因干燥等而产生细纹、皮肤干燥。对此，提出了使用发酵品来改善皮肤功能的方案(例如，参照专利文献1～7)。
3.现有技术文献
4.专利文献
5.专利文献1：国际公开第2018/123828号
6.专利文献2：日本专利第5468183号公报
7.专利文献3：日本特开2015－156832号公报
8.专利文献4：日本专利第5467106号公报
9.专利文献5：日本专利第4990297号公报
10.专利文献6：日本特开2009－249366号公报
11.专利文献7：日本特开2009－249365号公报


技术实现要素：

12.本发明的目的在于提供以新型天然来源成分为有效成分的胶原蛋白产生促进剂、药物、化妆品和胶原蛋白产生促进剂的制造方法。
13.本发明的一个方面的胶原蛋白产生促进剂具备唇形科植物的发酵物。本发明的一个方面的药物具备唇形科植物的发酵物。本发明的一个方面的化妆品具备唇形科植物的发酵物。本发明的一个方面的胶原蛋白产生促进剂的制造方法包括使唇形科植物发酵。
14.根据本发明，能够提供以新型天然来源成分为有效成分的胶原蛋白产生促进剂、药物、化妆品和胶原蛋白产生促进剂的制造方法。
附图说明
15.图1是表示实施例3的胶原蛋白的表达量的表。
16.图2是表示实施例4的抗菌试验的结果的表。
17.图3是表示实施例5的抗病毒试验的结果的表。
具体实施方式
18.以下，对本发明的实施方式进行详细说明。应予说明，以下示出的实施方式例示用于将该发明的技术思想具体化的装置、方法，该发明的技术思想并非将构成部件的组合等特定为下述的方式。该发明的技术思想可以在请求保护的范围内加以各种变更。
19.实施方式的胶原蛋白产生促进剂具备唇形科植物的发酵物。作为唇形科(lamiaceae或labiatae)植物的例子，可举出香茶菜属(isodon或rabdosia)植物。作为香茶菜属植物的例子，可举出毛叶香茶菜(isodon japonicus hara或rabdosia japonica hara)。毛叶香茶菜也被称为延命草(isodonis herba)。
20.实施方式的胶原蛋白产生促进剂可以具备来自唇形科植物的乳酸菌。乳酸菌例如为乳杆菌(lactobacillus)属。乳杆菌属为乳酸杆菌的一种，是一种革兰氏阳性的兼性厌氧菌。乳杆菌属使糖发酵而产生乳酸。乳杆菌属也栖息于包括人在内的动物体内，但实施方式的乳杆菌属是来自唇形科植物的乳杆菌属。例如，使唇形科植物发酵来提取实施方式的乳杆菌属。
21.来自唇形科植物的乳杆菌属例如包含类谷糠(parafarraginis)种、类布氏(parabuchneri)种、布氏(buchneri)种和哈尔滨(harbinensis)种等。或者，来自唇形科植物的乳杆菌属例如包含维氏(vini)种和内氏(nagelii)种。实施方式的胶原蛋白产生促进剂可以包含乳杆菌属的多个种。
22.实施方式的胶原蛋白产生促进剂促进细胞的胶原蛋白产生。胶原蛋白例如为i型胶原蛋白。i型胶原蛋白对皮肤赋予紧致、弹力、强度。i型胶原蛋白的减少成为皱纹和老化的原因。另外，i型胶原蛋白参与创伤治愈。i型胶原蛋白由2条α1链和1条α2链构成，α1链由col1a1基因表达，α2链由col1a2基因表达。
23.实施方式的胶原蛋白产生促进剂能够作为用于对皮肤赋予紧致、弹力和强度中的至少任一者的药物、化妆品和/或食品使用。另外，实施方式的胶原蛋白产生促进剂能够作为用于提高抗皱功能的药物、化妆品和/或食品使用。实施方式的胶原蛋白产生促进剂能够作为抗皱用药物、抗老化用药物、抗皱用化妆品和抗老化用化妆品使用。进而，实施方式的胶原蛋白产生促进剂能够作为用于治愈创伤的药物、化妆品和/或食品使用。应予说明，皱纹包括细纹。
24.另外，实施方式的胶原蛋白产生促进剂也具有减少微生物的功能。作为微生物的例子，可举出细菌和病毒。作为细菌的例子，可举出革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。
25.实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如使革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌在24小时以内减少80％以上、85％以上、90％以上或95％以上。作为革兰氏阴性菌，可举出大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、肺炎杆菌和绿脓杆菌等，但不限定于此。作为革兰氏阳性菌，可举出金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)、形成孢子的蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌等，但不限定于此。
26.实施方式的胶原蛋白产生促进剂也具有使病毒减少的功能。实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如使病毒在24小时以内减少80％以上、85％以上、90％以上或95％以上。病毒包含作为具有包膜的病毒的包膜病毒和作为不具有包膜的病毒的非包膜病毒。另外，病毒
包含dna病毒和rna病毒。
27.作为具有包膜的dna病毒，可举出人类疱疹病毒、牛痘病毒和乙型肝炎病毒等，但不限定于此。
28.作为具有包膜的rna病毒，可举出流感病毒、sars冠状病毒、rs病毒、腮腺炎病毒、拉沙病毒、登革热病毒、风疹病毒、人类免疫缺陷病毒、麻疹病毒、丙型肝炎病毒、埃博拉病毒、黄热病毒和日本脑炎病毒等，但不限定于此。
29.作为不具有包膜的dna病毒，可举出腺病毒，b19病毒，乳多空病毒和人乳头瘤病毒等，但不限定于此。
30.作为不具有包膜的rna病毒，可举出诺如病毒、杯状病毒、脊髓灰质炎病毒、埃可病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、鼻病毒、星状病毒、轮状病毒、柯萨奇病毒、肠道病毒和札幌病毒等，但不限定于此。
31.实施方式的胶原蛋白产生促进剂包含有效量的唇形科植物的发酵物。实施方式的胶原蛋白产生促进剂可以在水等溶剂中包含唇形科植物的发酵物，也可以在植物的发酵液中含有唇形科植物的发酵物。作为用于得到发酵液的植物，与乳杆菌属同样地可举出唇形科植物。有效量是指用于促进细胞的胶原蛋白产生所需的量，可根据作为对象的人或动物的年龄、种类和应用部位等而适当地决定。
32.实施方式的胶原蛋白产生促进剂中包含的乳酸菌可以为活菌，也可以为例如加热处理后的死菌。因此，实施方式的胶原蛋白产生促进剂可以包含乳酸菌的死菌。乳酸菌也可以为菌体干燥物。乳酸菌的死菌或菌体干燥物也起到促进胶原蛋白产生的效果。另外，乳酸菌的死菌或菌体干燥物容易运输、长期保存。
33.实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如也可以为液体、乳霜、软膏、硬膏、凝胶、蜡和喷雾。
34.实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如可以为肌肤调理用化妆品。作为肌肤调理用化妆品的例子，可举出化妆水、美容液和面膜。实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如也可以为保护用化妆品。作为保护用化妆品的例子，可举出保护用乳液和保护用乳霜。实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如也可以为底妆化妆品。作为底妆化妆品的例子，可举出粉底、白粉和妆前乳。实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如也可以为焦点彩妆(point makeup)化妆品。作为焦点彩妆化妆品的例子，可举出口红、眼妆、腮红和指甲油。
35.另外，实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如可以以消毒药、涂布治疗药等皮肤外用药、滴眼剂和内服药的形式提供。实施方式的胶原蛋白产生促进剂例如向包括手指和脚趾的人体的皮肤、毛发、口腔和眼球等给予。
36.实施方式的胶原蛋白产生促进剂除了唇形科植物的发酵物以外，还可以根据目的适当地包含液体油脂、固体油脂、蜡、烃、高级脂肪酸、高级醇、酯、有机硅、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子性表面活性剂、保湿剂、水溶性高分子、增稠剂、被膜剂、金属离子封锁剂、低级醇、多元醇、糖类、氨基酸类、有机胺类、ph调节剂、皮肤营养剂、维生素类、抗氧化剂、香料、粉体、色材和水等化妆品和药物的配合成分。
37.实施方式的胶原蛋白产生促进剂包含油性成分时，实施方式的胶原蛋白产生促进剂中的油性成分的浓度没有特别限定，例如为0.1质量％～90质量％或0.5质量％～90质量％。实施方式的胶原蛋白产生促进剂包含水性成分时，实施方式的胶原蛋白产生促进剂
中的水性成分的浓度没有特别限定，例如为0.1质量％～90质量％或0.5质量％～90质量％。实施方式的胶原蛋白产生促进剂中的油性成分与水性成分之比可根据实施方式的胶原蛋白产生促进剂为水包油(o/w)型或油包水(w/o)型而适当地设定。实施方式的胶原蛋白产生促进剂包含表面活性剂时，实施方式的胶原蛋白产生促进剂中的表面活性剂的浓度没有特别限定，例如为2质量％～10质量％。
38.实施方式的胶原蛋白产生促进剂通过使唇形科植物发酵，得到发酵物而制造。使唇形科植物发酵时，在唇形科植物中添加盐和糖蜜等糖。发酵温度例如为30℃。所得到的发酵液的氢离子指数(ph)为4.0左右。可以从发酵液中提取乳杆菌属的分泌物。
39.可以将所得到的发酵液加热，使发酵液中包含的乳杆菌属变为死菌。因此，发酵液也可以为热处理发酵液。另外，也可以将发酵液进行喷雾干燥而得到乳杆菌属的菌体干燥物。菌体干燥物也可以通过冷冻干燥法和热风干燥法等而制作。
40.进而，也可以将所得到的发酵液、乳杆菌属的菌体或乳杆菌属的菌体干燥物添加到豆乳中，使豆乳发酵而得到豆乳发酵液。豆乳发酵液也起到胶原蛋白产生促进剂效果。
41.如上所述，本发明的各实施方式的胶原蛋白产生促进剂等具有基于上述的任一个或多个的组合的以下例子的构成和作用效果。
42.本实施方式的胶原蛋白产生促进剂具备唇形科植物的发酵物。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂中，唇形科植物可以为香茶菜属植物。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂中，香茶菜属植物可以为毛叶香茶菜。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂中，香茶菜属植物可以为延命草。
43.本实施方式的胶原蛋白产生促进剂可以促进细胞中的i型胶原蛋白的表达。
44.本实施方式的胶原蛋白产生促进剂可以具备来自唇形科植物的乳酸菌。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂中，乳酸菌可以包含乳杆菌(lactobacillus)属。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂中，乳杆菌属的种可以为选自类谷糠(parafarraginis)种、类布氏(parabuchneri)种、布氏(buchneri)种、哈尔滨(harbinensis)种、维氏(vini)种和内氏(nagelii)种中的至少一种。
45.本实施方式的胶原蛋白产生促进剂中，乳酸菌可以为活菌，也可以为死菌。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂中，也可以对乳酸菌进行加热处理。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂中，乳酸菌也可以为菌体干燥物。
46.本实施方式的药物具备唇形科植物的发酵物。本实施方式的药物中，唇形科植物可以为香茶菜属植物。本实施方式的药物中，香茶菜属植物可以为毛叶香茶菜。本实施方式的药物中，香茶菜属植物可以为延命草。
47.本实施方式的药物可以具备来自唇形科植物的乳酸菌。本实施方式的药物中，乳酸菌可以包含乳杆菌(lactobacillus)属。本实施方式的药物中，乳杆菌属的种可以为选自类谷糠(parafarraginis)种、类布氏(parabuchneri)种、布氏(buchneri)种、哈尔滨(harbinensis)种、维氏(vini)种和内氏(nagelii)种中的至少一种。
48.本实施方式的药物中，乳酸菌可以为活菌，也可以为死菌。本实施方式的药物中，也可以对乳酸菌进行加热处理。本实施方式的药物中，乳酸菌也可以为菌体干燥物。
49.本实施方式的药物可以促进细胞中的胶原蛋白的表达。本实施方式的药物可以促进细胞中的i型胶原蛋白的表达。
50.本实施方式的药物可以为抗皱用药物。本实施方式的药物也可以为抗老化用药物。
51.本实施方式的化妆品具备唇形科植物的发酵物。本实施方式的化妆品中，唇形科植物可以为香茶菜属植物。本实施方式的化妆品中，香茶菜属植物可以为毛叶香茶菜。本实施方式的化妆品中，香茶菜属植物可以为延命草。
52.本实施方式的化妆品可以具备来自唇形科植物的乳酸菌。本实施方式的化妆品中，乳酸菌可以包含乳杆菌(lactobacillus)属。本实施方式的化妆品中，乳杆菌属的种可以为选自类谷糠(parafarraginis)种、类布氏(parabuchneri)种、布氏(buchneri)种、哈尔滨(harbinensis)种、维氏(vini)种和内氏(nagelii)种中的至少一种。
53.本实施方式的化妆品中，乳酸菌可以为活菌，也可以为死菌。本实施方式的化妆品中，也可以对乳酸菌进行加热处理。本实施方式的化妆品中，乳酸菌也可以为菌体干燥物。
54.本实施方式的化妆品可以促进细胞中的胶原蛋白的表达。本实施方式的化妆品可以促进细胞中的i型胶原蛋白的表达。
55.本实施方式的化妆品可以为抗皱用化妆品。本实施方式的化妆品也可以为抗老化用化妆品。
56.本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法的制造方法包括使唇形科植物发酵。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法中，唇形科植物可以为香茶菜属植物。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法中，香茶菜属植物可以为毛叶香茶菜。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法中，香茶菜属植物可以为延命草。
57.本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法可以包括得到来自唇形科植物的乳酸菌。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法中，乳酸菌可以包含乳杆菌(lactobacillus)属。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法中，乳杆菌属的种可以为选自类谷糠(parafarraginis)种、类布氏(parabuchneri)种、布氏(buchneri)种、哈尔滨(harbinensis)种、维氏(vini)种和内氏(nagelii)种中的至少一种。
58.本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法中，可以得到作为活菌的乳酸菌，也可以得到作为死菌的乳酸菌。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法中，也可以对乳酸菌进行加热处理。本实施方式的胶原蛋白产生促进剂的制造方法中，也可以将乳酸菌制成菌体干燥物。
59.实施例
60.以下，对本发明的实施例进行说明。但是，当然本发明不限定于以下的实施例。
61.(实施例1：唇形科植物发酵物)
62.唇形科植物的发酵中，一般认为一天中日出时间前后1小时、合计2小时的期间，乳酸菌的数量最大。另外，一般认为该时间段以外，乳酸菌减少，光合细菌增加。因此，在这2小时的期间，从延命草的前端采取约20cm的部分。将所采取的6.3kg的延命草立刻放入其中铺有乙烯袋的第1腌渍桶中，在延命草上撒上3.2kg的糖蜜和0.6kg的粗盐后，将塑料袋的口封闭并密封。在塑料袋的上面载置重石，腌制延命草。
63.在几天后腌汁上升到延命草的上面后，取下重石。接下来，向第2腌渍桶中放入冲洗用的不含氯的10l的水，在水中放入延命草的腌渍物和10kg的腌汁。进一步准备第3腌渍桶，在第3腌渍桶的开口上载置金属网过滤器。从第2腌渍桶中一边用手搓洗一边一点点地
取出延命草，在第3腌渍桶的开口上的金属网过滤器上用手掌轻轻地按压延命草，压榨出腌汁。
64.将延命草完全压榨后，将残留于第2腌渍物汁的腌汁通过金属网过滤器进行过滤。接下来，在第3腌渍桶中的腌汁溶解糖蜜(波照间黑糖)使最终浓度为10重量％，并且溶解粗盐使最终浓度为3重量％。然后，使第3腌渍桶的周围温度约为30℃，从而开始发酵。最初确认到大的气泡的发泡，逐渐变为细小的气泡的起泡，最终发泡结束。约1周后，发泡结束时的ph为3.8左右。将此时的腌汁作为延命草发酵液。将所得到的延命草发酵液的一部分在70℃加热30分钟，得到使乳酸菌等细菌灭活后的热处理延命草发酵液。
65.(实施例2：使用唇形科植发酵物的豆乳发酵液)
66.将豆乳加热到70℃，进行约30分钟加热灭菌处理。在加热灭菌处理后的豆乳中加入实施例1中准备的未经热处理的延命草发酵液使其最终浓度约为10wt％，充分进行搅拌。其后，使添加有未热处理的延命草发酵液的豆乳在37℃发酵24小时。发酵后，通过过滤而除去固体成分，得到包含延命草发酵液的豆乳发酵液。
67.(实施例3：通过唇形科植发酵物促进胶原蛋白产生)
68.将正常人真皮成纤维细胞使用dmem培养基( 5％fbs)在培养器中维持至达到融合状态。达到融合后，从培养器中除去培养基，将含有600μmol/l的过氧化氢(h2o2)的dmem(0％fbs)添加到培养器中，在37℃将细胞培养1小时。培养1小时后，将含有h2o2的dmem(0％fbs)从培养器中除去，将dmem培养基( 10％fbs)添加到培养器中。将该操作重复4天后，用dmem(10％fbs)进一步将细胞培养3天，将所得到的细胞作为老化诱导处理细胞。
69.细胞被老化诱导通过作为老化标志物的衰老相关β－半乳糖苷酶(senescence－associated beta－galactosidase，sa－β－gal)染色来确认。
70.将老化诱导处理细胞使用dmem培养基( 5％fbs)以5.0
×
104cells/well的细胞密度接种于48孔板。接种24小时后，将培养基分别更换为以1.0％和10.0％的浓度包含实施例1中准备的未经热处理的延命草发酵液的dmem培养基( 0.5％fbs)、以25μmol/l包含维生素c磷酸镁的dmem培养基( 0.5％fbs)、以25μmol/l包含维生素c的dmem培养基( 0.5％fbs)以及dmem培养基( 0.5％fbs)。然后，将细胞培养48小时后，回收培养基，将培养基中的i型胶原蛋白量利用elisa法(使用anti－human collagen type i抗体(rabbit)的直接法)进行定量。
71.其结果，如图1所示，显示用包含维生素c磷酸镁或维生素c的培养基(阳性对照)培养细胞时，促进了i型胶原蛋白的产生。另外，显示用添加了延命草发酵液的培养基培养细胞时，也促进了i型胶原蛋白的产生。
72.(实施例4：唇形科植发酵物的抗菌效果)
73.准备作为革兰氏阴性球菌的大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌和肺炎杆菌，准备作为革兰氏阴性桿菌的绿脓杆菌。另外，准备作为革兰氏阳性球菌的金黄色葡萄球菌和mrsa，准备作为革兰氏阳性桿菌的枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌。
74.在10ml的实施例1中准备的未经热处理的延命草发酵液中接种以107个/ml的浓度包含上述菌中的任一者的0.1ml的菌液，在25℃下使其作用并经时地对所接种的菌的活菌数进行24小时测定。对照将延命草发酵液替换为磷酸缓冲液(1/15mol/l，ph7.2)，除此以外，是相同的。其结果，如图2所示，延命草发酵液在24小时以内使所准备的全部种类的细菌
减少。应予说明，在使用实施例2中准备的包含延命草发酵液的豆乳发酵液的情况下也可得到同样的结果。
75.(实施例5：唇形科植发酵物的抗病毒效果)
76.作为包膜病毒，准备甲型流感病毒(h1n1)的培养液。另外，作为非包膜病毒，准备作为诺如病毒的替代病毒的猫杯状病毒的培养液。病毒的培养液用纯化水按照每次10倍进行阶段稀释。然后，按照50％组织培养感染剂量(tcid50：50％tissue culture infectious dose)，在室温下实施利用实施例1中准备的未经热处理的延命草发酵液的抗病毒试验。抗病毒试验在日本食品分析中心实施。
77.其结果，如图3所示，延命草发酵液在1小时以内使流感病毒和猫杯状病毒的感染滴度减少。应予说明，在使用实施例2中准备的包含延命草发酵液的豆乳发酵液的情况下也可得到同样的结果。
78.以上说明的各实施方式和实施例是为了容易理解本发明，而不是为了限定性地解释本发明。本发明可以在不脱离其主旨的情况下进行变更/改进，并且其等同物也包含在本发明中。即，本领域技术人员对各实施方式和实施例适当地加以设计变更的方式只要具备本发明的特征，则也包含在本发明的范围中。例如，各实施方式和实施例所具备的各要素等并不限定于例示的内容，可以进行适当的变更。另外，各实施方式和实施例为例示，当然可以对不同实施方式中示出的构成进行部分替换或组合，它们只要包含本发明的特征，则也包含在本发明的范围中。