一种罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法与流程

cm大小组织块。
8.进一步的改进，所述步骤二中，固定液为4%多聚甲醛，固定时间为24h。
9.进一步的改进，所述步骤四中，冷冻温度为-35℃。
10.进一步的改进，对罗氏沼虾性腺组织冷冻切片进行观察前，先进行染色，染色步骤如下：将罗氏沼虾性腺组织冷冻切片先于4%多聚甲醛中固定10 min，之后放入1
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pbs中缓冲液清洗5 min，接着使用苏木素浸泡染色5 min，然后使用去离子水冲洗5min，接着在去离子水中反蓝30 s，然后将组织切片于95%乙醇中浸泡30 s，接着使用伊红染色30 s，然后使用70%乙醇清洗两次至无红色液体滴落，自然风干后，用中性树胶封片。
11.进一步的改进，所述冷冻切片机型号为thermo nx50。
12.本发明相较于石蜡切片技术，具有更高的切片效率，相较于新鲜组织直接冷冻切片的常规冷冻切片技术具有更完整的组织形态和切片效果。
13.【附图说明】附图作为本申请的一部分，用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，但不构成对本发明的不当限定。显然，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。在附图中：图1为未成熟卵巢前处理后冷冻切片染色结果；图2为冷冻切片脱脂后冷冻切片染色结果。
14.需要说明的是，这些附图和文字描述并不旨在以任何方式限制本发明的构思范围，而是通过参考特定实施例为本领域技术人员说明本发明的概念。
15.【具体实施方式】下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
16.一种罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，步骤如下：（1） 冷冻切片载玻片前处理：将载玻片在去离子水下洗净，过无水乙醇洗净，后自然风干，使用前均匀平铺一层多聚赖氨酸；（2） 罗氏沼虾冷冻麻醉后，解剖取得性腺组织（卵巢，精巢），立即放置于4%多聚甲醛中，组织与4%多聚甲醛的体积比大于1：10，于4℃下固定24h；（3） 当样品为罗氏沼虾成熟卵巢时，因罗氏沼虾成熟卵巢脂质成分含量较高，需在丙酮中浸泡脱脂处理8h，后进行脱水操作，其他性腺组织直接脱水处理；（4） 将固定好的性腺组织，切取0.5-1 cm大小组织块，放入30%蔗糖溶液，处理4h；（5） 取锡箔纸制成圆柱型包埋模型，加入少许otc冷冻切片胶水，没过底部。于-35℃箱体温度下，待底部出现凝固现象，放入组织，后加入otc冷冻切片胶水，没过组织，待胶水完全冷冻后取出包埋块，使用otc冷冻切片胶水将包埋块固定在样品托上；（6） 调节样品头温度为-30℃，将包埋好的样品卡入样品头，调整好刀片和防卷板位置，先在修片模式下对包埋块进行修理至组织暴露，再调整至切片模式，将切片厚度调整
为8μm，进行组织切片，切片置于如步骤1所述的载玻片上；染色步骤：组织切片先于4%多聚甲醛中固定10 min，之后放入1
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pbs中缓冲液清洗5 min，接着使用苏木素浸泡染色5 min，然后使用去离子水冲洗5min，接着在去离子水中反蓝30 s，然后将组织切片于95%乙醇中浸泡30 s，接着使用伊红染色30 s，然后使用70%乙醇清洗两次至无红色液体滴落，自然风干后，用中性树胶封片，结果如图2所示。
17.以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。


技术特征：
1.一种罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将载玻片洗净风干，使用前均匀平铺一层多聚赖氨酸；步骤二、将罗氏沼虾性腺组织解剖取样后，于固定液中固定得到固定好的罗氏沼虾性腺组织；步骤三、 将固定好的罗氏沼虾性腺组织，切取0.5-1 cm大小组织块，放入30%蔗糖溶液，处理4h；步骤四、取锡箔纸制成圆柱型包埋模型，加入otc冷冻切片胶水，没过锡箔纸底部，冷冻，待底部出现凝固现象，放入组织块，后加入otc冷冻切片胶水，没过组织块，待otc冷冻切片胶水完全冷冻后得到包埋块，取出包埋块，使用otc冷冻切片胶水将包埋块固定在样品托上；步骤五、 调节冷冻切片机的样品头温度为-30℃，将包埋块卡入样品头，调整好刀片和防卷板位置，先在修片模式下对包埋块进行修理至组织暴露，再调整至切片模式，将切片厚度调整为8μm，进行组织切片，切片置于步骤一中的载玻片上，即得到罗氏沼虾性腺组织冷冻切片。2.如权利要求1所述的罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，所述罗氏沼虾性腺组织包括卵巢和精巢。3.如权利要求2所述的罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，当罗氏沼虾性腺组织为罗氏沼虾成熟卵巢时，所述步骤三中，先将固定好的罗氏沼虾性腺组织置于丙酮中浸泡脱脂处理8h，后进行脱水操作，再切取0.5-1 cm大小组织块。4.如权利要求1所述的罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，所述步骤二中，固定液为4%多聚甲醛，固定时间为24h。5.如权利要求1所述的罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，所述步骤四中，冷冻温度为-35℃。6.如权利要求1所述的罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，对罗氏沼虾性腺组织冷冻切片进行观察前，先进行染色，染色步骤如下：将罗氏沼虾性腺组织冷冻切片先于4%多聚甲醛中固定10 min，之后放入1
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pbs中缓冲液清洗5 min，接着使用苏木素浸泡染色5 min，然后使用去离子水冲洗5min，接着在去离子水中反蓝30 s，然后将组织切片于95%乙醇中浸泡30 s，接着使用伊红染色30 s，然后使用70%乙醇清洗两次至无红色液体滴落，自然风干后，用中性树胶封片。7.如权利要求1所述的罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，所述冷冻切片机型号为thermo nx50。

技术总结
本发明公开了一种罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法，通过冷冻切片技术制作罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的方法和应用。本发明公开的罗氏沼虾性腺组织冷冻切片方法主要包括，切片前载玻片的预处理，4%多聚甲醛固定组织，组织包埋前处理，包埋，冷冻切片及HE染色步骤。本发明相较于石蜡切片技术，具有更高的切片效率，相较于常规冷冻切片技术具有更完整的组织形态。形态。形态。


技术研发人员：徐海晶
受保护的技术使用者：徐海晶
技术研发日：2022.02.09
技术公布日：2022/4/29