一种血液采集卡及其应用的制作方法

1.本发明属于样本采集装置技术领域，具体涉及一种血液采集卡及其应用。


背景技术：

2.血液由血浆和血细胞组成。血浆中除含有大量水分以外，还有无机盐、纤维蛋白原、白蛋白、球蛋白、酶、激素、各种营养物质、代谢产物等。除了这些之外，人体在受到病毒入侵时，人体内的血浆中还会存在大量病毒和核酸，因此血浆是疾病检测时最主要的样本类型。血细胞分为三类：红细胞、白细胞、血小板。
3.红细胞没有细胞核，没有遗传物质，通常不做为疾病检测的靶物质，又因为红细胞本身带有很深的颜色，数量又多，约占整体血液体积的45％，因此在很多疾病检测过程中都是起到干扰作用，因此在制备血液样本时将红细胞分离或去除，对检测有重要意义。
4.白细胞为无色有核细胞，包含人体的基因组，是基因检测的靶物质，尤其是在艾滋病核酸检测领域，艾滋病病毒会攻击人体的淋巴细胞，并将自身rna整合淋巴细胞的dna上，在艾滋病dna检测过程中，白细胞是重要的靶细胞，在进行人体dna相关检测时，血液样本预处理时将白细胞与其他血液组分分离，并进行保存，对检测结果的准确性有重要意义。
5.血浆是各种疾病检测时最主要的样本，在检测时通常涉及到复检、留样检测等，但液态血浆很难在常温或冷藏条件下稳定保存，冻存条件下的反复冻融仍会造成血浆中有些组分活性的下降。尤其涉及rna的检测，rna在人体内处在动态平衡，大约20min就可以完全降解一遍，在体内时rna会及时补充，但血液一但离体，样本中的rna会很快降解完全，无法检测到。能稳定保存rna对检测工作有重要意义。
6.专利cn107430114b公开了一种血浆分离卡，该卡片采用了垂直渗滤的方式分离血细胞与血浆，存在红细胞堵塞滤膜的风险，会造成血浆回收率低。


技术实现要素：

7.有鉴于此，本发明的目的在于提供一种血液采集卡及其应用，本发明的血液采集卡血浆回收率高。
8.本发明提供了一种血液采集卡，包括基本构件7和固定所述基本构件的底板8；所述基本构件7包括胶板1；在所述胶板1上顺次相互搭接地粘贴贴红细胞分离垫2和血浆保存垫4；所述红细胞分离垫2上包被有红细胞抗体和/或凝集素。
9.优选的，所述胶板1上还粘贴有白细胞保存垫3；所述粘贴的顺序为在所述胶板1上顺次相互搭接地粘贴红细胞分离垫2、白细胞保存垫3和血浆保存垫4；所述白细胞保存垫3的材质为亲水性滤膜，所述亲水性滤膜的孔径为0.5～5μm。
10.优选的，所述血液采集卡还包括盖板6；所述盖板6覆盖于所述血液采集卡基本构件7上；
11.所述盖板6设置有加样孔5，所述加样孔5的位置和红细胞分离垫2相对，所述加样孔5的孔径小于所述血细胞分离垫2的最小外径。
12.优选的，所述搭接的宽度为1～5mm。
13.优选的，所述血浆保存垫4与胶板1部分粘贴，所述血浆保存垫4的另一部分露出至胶板1外面。
14.优选的，所述红细胞抗体和/或凝集素在红细胞分离垫2上的包被量为0.01～10mg/cm2。
15.优选的，所述亲水性滤膜包括聚醚砜、尼龙、玻璃纤维或聚偏氟乙烯。
16.优选的，所述血浆保存垫4中包被有血浆组分保护剂。
17.本发明还提供了上述方案所述的血液采集卡在全血组分的分离和/或保存中的应用。
18.优选的，所述全血组分包括红细胞、白细胞和血浆中的一种或几种。
19.本发明提供了一种血液采集卡，包括基本构件7和固定所述基本构件的底板8；所述基本构件7包括胶板1；在所述胶板1上顺次相互搭接地粘贴贴红细胞分离垫2和血浆保存垫4；所述红细胞分离垫2上包被有红细胞抗体和/或凝集素。在本发明中，红细胞分离垫2包含红细胞抗体和/或凝集素，红细胞抗体和/或凝集素与红细胞发生特异性生化反应，使红细胞聚集形成超大颗粒并凝聚在红细胞分离垫2上，排除了后续白细胞和/或血浆分离时红细胞的干扰。同时，本发明的血液采集卡生产工艺简单，成本可控，易于在各检测机构、疾控系统及血站推广使用。此外，本发明的血液采集卡在采集末梢血或静脉血时，可即时进行红细胞分离、保存白细胞、保存血浆。
附图说明
20.图1为本发明的一个实施例中血液采集卡的示意性分解图；
21.图2为本发明的一个实施例中血液采集卡基本构件7的示意图；
22.图3为本发明的一个实施例中血液采集卡基本构件7的示意图，该实施例中血液采集卡基本构件7的胶板1上只粘贴有红细胞分离垫2和血浆保存垫4两部分；
23.图4为本发明的一个实施例中血液采集卡的整体示意图；
24.图5为图4所述整体示意图正上方俯视图；
25.图6为本发明的一个实施例中血液采集卡基本构件7实物图片；
26.图7为本发明的一个实施例中血液采集卡的实物图片；
27.图8为本发明的一个实施例中血液采集卡中的血液采集卡基本构件7的红细胞分离垫2使用抗人红细胞处理(左图)与未进行处理的试验结果对比图片；
28.其中，1-胶板、2-红细胞分离垫、3-白细胞保存垫、4-血浆保存垫、5-加样孔、6-盖板、7-血液采集卡基本构件、8-底板。
具体实施方式
29.本发明提供了一种血液采集卡，包括基本构件7和固定所述基本构件的底板8；所述基本构件7包括胶板1；在所述胶板1上顺次相互搭接地粘贴贴红细胞分离垫2和血浆保存垫4；所述红细胞分离垫2上包被有红细胞抗体和/或凝集素。
30.在所述胶板1上顺次相互搭接地粘贴红细胞分离垫2和血浆保存垫4时，血浆保存垫收集白细胞和血浆，能够满足对包含白细胞的血浆采集和保存的要求。
31.在本发明中，红细胞分离垫2包含红细胞抗体和/或凝集素，红细胞抗体和/或凝集素与红细胞发生特异性生化反应，使红细胞聚集形成超大颗粒并凝聚在红细胞分离垫2上，排除了后续白细胞和/或血浆分离时红细胞的干扰。在本发明中，所述胶板1上优选的还粘贴有白细胞保存垫3；所述粘贴的顺序为在所述胶板1上顺次相互搭接地粘贴红细胞分离垫2、白细胞保存垫3和血浆保存垫4；所述白细胞保存垫3的材质优选为亲水性滤膜，所述亲水性滤膜的孔径优选为0.5～5μm。在本发明中，白细胞通过红细胞分离垫后，层析至白细胞保存垫3，再通过孔径为0.5～5μm的白细胞保存垫3的物理截留作用使白细胞被截留在白细胞保存垫3上，而血浆组分则继续层析，被血浆保存垫4吸收并保存，实现全血中红细胞、白细胞和血浆这三种有效组分的分离。
32.在本发明中，所述血液采集卡优选的还包括盖板6；所述盖板6覆盖于所述血液采集卡基本构件7上；所述盖板6的宽度以至少能够完全覆盖住红细胞分离垫2为准；所述盖板6优选的设置有加样孔5，所述加样孔5的位置和红细胞分离垫2相对，所述加样孔5的孔径优选的小于所述血细胞分离垫2的最小外径。
33.在本发明中，所述搭接的宽度优选为1～5mm，更优选为2～3mm。
34.在本发明中，所述血浆保存垫4与胶板1部分粘贴，所述血浆保存垫4的另一部分露出至胶板1外面，以方便后续检测时将血浆保存垫4从基本构件7中分离。在本发明中，与所述胶板1粘贴的血浆保存垫4的部分的长度优选为2～20mm，更优选为5～10mm。
35.在本发明中，所述红细胞分离垫2的材质优选为亲水性材质；所述亲水性材质优选的包括玻璃纤维、聚酯纤维或滤纸。在本发明中，所述红细胞抗体和/或凝集素在红细胞分离垫2上的包被量优选为0.01～10mg/cm2，更优选为0.1～1mg/cm2。在本发明中，所述红细胞分离垫2优选的采用以下方法制备得到：将所述红细胞抗体和/或凝集素稀释后吸附于亲水性材质，干燥，得到红细胞分离垫2；所述稀释采用的稀释液优选为生理盐水。
36.在本发明中，所述亲水性滤膜优选的包括聚醚砜、尼龙、玻璃纤维或聚偏氟乙烯，更优选为聚醚砜。在本发明中，所述亲水性滤膜的孔径优选为1～3μm。所述亲水性滤膜用于截留大颗粒细胞组分，如白细胞，而病毒、蛋白质等小颗粒物质。
37.在本发明中，所述血浆保存垫4的材质优选为亲水性材质，所述亲水性材质优选为纤维素滤纸。在本发明中，所述血浆保存垫4中优选的包被有血浆组分保护剂；所述血浆组分保护剂优选的包括核酸保存液，可对血浆中的核酸组分进行保护。在本发明中，所述血浆保存垫4优选的采用以下方法制备得到：使用血浆组分保护剂对亲水性材质进行浸泡，干燥，得到血浆保存垫4。在本发明中，所述血浆保存垫4优选的还包括具有蛋白保护作用的商品化滤纸；所述具有蛋白保护作用的商品化滤纸优选为whatman
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。
38.在本发明中，所述血液采集卡基本构件7优选的固定在底板8的特定区域，所述固定的方式优选为粘贴或固定槽固定。
39.在本发明中，所述盖板6优选的与底板8粘合或嵌合。
40.在本发明中，每张血液采集卡包括1个或多个血液采集卡基本构件7。
41.在本发明中，所述血液采集卡的优选的采用以下方法制备得到：顺次将细胞分离垫2、白细胞保存垫3和血浆保存垫4搭接地粘贴在胶板1上，制备得到血液采集卡基本构件7；将所述血液采集卡基本构件7固定在底板8上，将盖板6覆盖于血液采集卡基本构件7上，并固定，得到血液采集卡。
42.本发明还提供了上述方案所述的血液采集卡在全血组分的分离和/或保存中的应用。
43.在本发明中，所述全血组分优选的包括红细胞、白细胞和血浆中的一种或几种。
44.在本发明中，每个所述血液采集卡基本构件7采集与分离保存的全血样本的体积优选为20～1000μl。
45.下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。
46.实施例1
47.首先按要求制备红细胞分离垫2，使用材料为聚酯纤维垫，为mid品牌的pt-r5型号，使用生理盐水将鼠抗人红细胞抗体(购自厦门万勃生物技术有限公司，货号：abrbc001)稀释至1mg/ml，将pt-r5聚酯纤维垫浸入处理液中，充分浸润后，于室温条件下，湿度小于30％环境中晾干8h，完成红细胞分离垫2的制备。白细胞保存垫3使用非对称聚醚砜膜(购自杭州科百特过滤器材有限公司，货号：psm0180-b)。血浆保存垫4使用纤维素滤纸(例如whatman
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)，在本实施方案中，将纤维素滤纸使用核酸保存液(购自北京大文生物技术有限公司，货号：dwrna001)充分浸润，于室温条件下，湿度小于30％环境中晾干8h，完成血浆保存垫4的制备。之后将血浆保存垫4、白细胞保存垫3、红细胞分离垫2粘贴在胶板1上，制备血液采集卡基本构件7，其中白细胞保存垫3与血浆保存垫4搭接层叠1～5mm，红细胞分离垫2与白细胞保存垫3搭接层叠1～5mm，如图6。再将制备的血液采集卡基本构件7固定在底板8的特定区域，最后将盖板6盖好与底板8粘合或嵌合，完成血液采集卡的制备，如图7所示。
48.实施例2
49.使用实施例1中制备的血液采集卡基本构件7进行加入150μl全血样本，验证血液分离效果，如图8左图所示。同时对比了使用未经鼠抗人红细胞处理的细胞分离垫2制备的血液采集卡基本构件7的血液分离效果，如图8右图所示。在图8左图中，可明显观察到红细胞在红细胞分离垫2上被聚集截留，而图8右图中的红细胞被白细胞保存垫3截留；而图8左图中血浆的回收率明显高于图8中右图的血浆回收率。此实施方案说明了本专利在全血各组分分离以及血浆回收的有益效果。
50.实施例3
51.对实施例1中制备的血液采集卡对血浆中核酸保存能力进行试验。
52.样本制备：
53.a1：使用健康人新鲜全血样本，加入新冠基因组核酸，制备新冠核酸阳性的全血样本，并按150μl/孔滴入本发明实施例式1中制备的血液采集卡的加样孔5中，室温下放置4h，之后使用镊子等工具取下血浆保存垫4，放入1.5ml尖底离心管中，加入500μl核酸提取试剂，充分漩涡震荡约1min；进行后续的核酸提取及pcr检测，检测ct值，三孔重复，分别为a1-1、a1-2、a1-3；
54.a2：使用健康人新鲜全血样本，加入新冠n基因假病毒，制备n基因假病毒阳性的全血样本，并按150μl/孔滴入本发明实施例1中制备的血液采集卡的加样孔5中，室温下放置4h，之后使用镊子等工具取下血浆保存垫4，放入1.5ml尖底离心管中，加入500μl核酸提取试剂，充分漩涡震荡约1min；进行后续的核酸提取及pcr检测，检测ct值，三孔重复，分别为a2-1、a2-2、a2-3；
55.b1：使用健康人新鲜全血样本，加入新冠基因组核酸，制备新冠核酸阳性的全血样本，取150μl，离心分离去除红细胞，血浆加入500μl核酸提取试剂，进行后续的核酸提取及pcr检测，检测ct值，三孔重复，分别为b1-1、b1-2、b1-3；
56.b2：使用健康人新鲜全血样本，加入新冠n基因假病毒，制备n基因假病毒阳性的全血样本，取150μl，离心分离去除红细胞，血浆加入500μl核酸提取试剂，进行后续的核酸提取及pcr检测，检测ct值，三孔重复，分别为b2-1、b2-2、b2-3；
57.核酸检测结果如表1所示：
58.表1：核酸检测结果
[0059] ctorf1abctn ctorf1abctna1-1/20.12b1-1/20.30a1-2/20.71b1-2/21.15a1-3/20.65b1-3/20.38a2-125.8227.54b2-134.3532.85a2-224.4826.28b2-235.6333.26a2-326.1128.01b2-337.2831.04
[0060]
结果显示使用本发明实施例1中制备的检测卡，对核酸假病毒的保存效果与直接离心方法检测的结果相当，而在核酸保存上具有明显优势，这得益于本专利在加入核酸质控后迅速进行了全血分离同时对血浆中的核酸进行了有效保护，而传统操作过程中，血液中的核酸酶会与核酸充分反应，在极短的时间内对核酸进行了降解，导致ct值增加明显。而假病毒颗粒由于病毒外壳的保护，两种保存方式差异并不明显。
[0061]
实施例4
[0062]
为了进一步验证本专利对血浆样本长期保存效果，使用本专利对实施例3中的a1、a2样本进行常温保存一周后进行测试，结果如表2所示，而作为对照的b1、b2样本在4℃放置。
[0063]
表2 常温保存一周后核酸检测结果
[0064]
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ctorf1abctn ctorf1abctna1-1/21.65b1-1/阴性a1-2/22.51b1-2/阴性a1-3/20.16b1-3/阴性a2-126.3728.62b2-1阴性阴性a2-224.6727.22b2-2阴性阴性a2-327.4126.91b2-3阴性阴性
[0065]
试验结果表明，在血液状态下无论是病毒还是核酸，冷藏保存一周后核酸基本被完全降解，pcr无法检出，而使用本专利的血液采集卡保存的样本其核酸被完好保存，ct值基本不变。
[0066]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。