用于疗法中的抗分拣蛋白抗体的制作方法

one 5,e13368.)和关节炎(tang,w等人,(2011).science 332,478-484)的模型中的病变，以及预防了阿尔茨海默氏病模型中的记忆缺陷(minami,s.s等人,(2014).nat med 20,1157-1164)。
8.通过它与诸如颗粒体蛋白前体的蛋白质的各种相互作用，已显示分拣蛋白和它的多种配体涉及于各种疾病、病症和疾患中，诸如额颞性痴呆(ftd)、肌萎缩性侧索硬化(als)、肌萎缩性侧索硬化-额颞性痴呆表型、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、抑郁、神经精神病症、血管性痴呆、发作、视网膜营养不良、年龄相关性黄斑变性、青光眼、创伤性脑损伤、老化、发作、伤口愈合、中风、关节炎和动脉粥样硬化性血管疾病。
9.靶向分拣蛋白的新型治疗性抗体是一种用以治疗与分拣蛋白活性相关的疾病的解决方案。全身性施用的单克隆抗体通常展现双相药物代谢动力学概况，即首先相对快速地分布，接着更加缓慢地消除(ovacik,m和lin,l,(2018)clin transl sci 11,540-552)。全身性施用的抗体的循环通常限于脉管系统和间质间隙(ovacik,m和lin,l,(2018)clin transl sci 11,540-552)。这是由于它们的大小、极性、再循环和清除动力学以及通常相对长久的半衰期，所述半衰期在人中经常是11-30天(ovacik,m和lin,l,(2018)clin transl sci 11,540-552)。
10.单克隆抗体的施用给治疗用途带来了挑战。单克隆抗体具有有限的口服生物可用度，因此它们通常经静脉内、皮下或肌肉内施用(ovacik,m和lin,l,(2018)clin transl sci 11,540-552)。在那些选项之中，皮下施用是最方便的，因为它可在家并且经常由患者自己进行，但静脉内施用递送更高全身性暴露。递送至脑脊髓液(csf)需要较高全身性剂量。因此，当治疗需要影响csf时，静脉内施用通常是需要的，因为皮下施用不能递送足够高的剂量。
11.然而，对于患有神经变性疾病诸如ftd和als的患者，静脉内施用是特别具有挑战性的。这些疾病长期影响患者，因此需要在许多年的过程期间进行定期治疗。因为静脉内施用不能在家进行，所以患者必须被定期运送至输注中心，此成为患者与照料者两者的负担。最后，记忆丧失、情绪波动、攻击行为以及这些疾病的其他行为症状使得难以达成患者顺应性。
12.因此，存在对特异性结合分拣蛋白，并且阻断分拣蛋白与它的配体诸如颗粒体蛋白前体的结合，或以其他方式调节配体的有效浓度以治疗一种或多种与分拣蛋白活性相关的疾病、病症和疾患的治疗性抗体的需要。此外，由于施用和给药的模式的限制，所以另外需要鉴定用恰当剂量治疗患者以及以容易达成患者顺应性的方式施用所述剂量的方法。本文引用的所有参考文献，包括专利、专利申请和出版物，都据此通过引用以它们的整体并入本文。


技术实现要素：

13.本公开总体上涉及使用包括特异性结合人分拣蛋白的抗体例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等的组合物的方法。
14.在某些方面，本文提供了一种治疗个体中的疾病或损伤和/或延迟所述疾病或损伤的进展的方法，所述方法包括每四周一次或更频繁地以至少约30mg/kg的剂量经静脉内向所述个体施用抗分拣蛋白抗体，其中所述抗体包含：(i)重链可变区，所述重链可变区包
含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsiqqgyygmdv(seq id no:5)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3；(ii)重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsiqqgyygmdv(seq id no:5)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnrvs(seq id no:30)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqetplt(seq id no:33)的hvr-l3；(iii)重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpsles(seq id no:3)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsiqqgyygmdv(seq id no:5)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3；(iv)重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3；(v)重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrstgynyld(seq id no:9)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3；(vi)重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqetplt(seq id no:33)的hvr-l3；(vii)重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsiqqgyygmdv(seq id no:5)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllhsngynyld(seq id no:26)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqetplt(seq id no:33)的hvr-l3；或(viii)重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqgllrsngynyld(seq id no:27)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
15.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重
链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2和含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；并且所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
16.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中抗体包含具有包含氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、包含氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2和包含氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3的重链可变区；并且所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrstgynyld(seq id no:9)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
17.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:54的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:57的氨基酸序列的轻链可变区。
18.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:54的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:58的氨基酸序列的轻链可变区。
19.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:54的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:59的氨基酸序列的轻链可变区。
20.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:55的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:57的氨基酸序列的轻链可变区。
21.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:55的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:58的氨基酸序列的轻链可变区。
22.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:57的氨基酸序列的轻链可变区。
23.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:77的氨基酸序列的轻链可变区。
24.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:78的氨基酸序列的轻链可变区。
25.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:54的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:79的氨基酸序列的轻链可变区。
26.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:80的氨基酸序列的轻链可变区。
27.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:57的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:60的氨基酸序列的轻链可变区。
28.在一些实施方案中，抗体是igg1同种型，并且fc区在位置l234a、l235a和p331s处包含氨基酸取代，其中残基位置的编号根据eu编号。
29.在一些实施方案中，剂量是至少约35mg/kg、至少约40mg/kg、至少约45mg/kg、至少约50mg/kg、至少约55mg/kg或至少约60mg/kg。在一些实施方案中，剂量在约30mg/kg与约
60mg/kg之间。在一些实施方案中，剂量是约60mg/kg。
30.在一些实施方案中，每两周一次施用抗分拣蛋白抗体。在一些实施方案中，每三周一次施用抗分拣蛋白抗体。在一些实施方案中，每四周一次施用抗分拣蛋白抗体。
31.在一些实施方案中，每四周一次以约60mg/kg的剂量施用抗分拣蛋白抗体。
32.在一些实施方案中，疾病或损伤选自由额颞性痴呆、进行性核上麻痹、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、发作、视网膜营养不良、肌萎缩性侧索硬化、创伤性脑损伤、脊髓损伤、痴呆、中风、帕金森氏病、急性播散性脑脊髓炎、视网膜变性、年龄相关性黄斑变性、青光眼、多发性硬化、败血性休克、细菌性感染、关节炎和骨关节炎组成的组。在一些实施方案中，疾病或损伤是额颞性痴呆。在一些实施方案中，疾病或损伤是肌萎缩性侧索硬化。
33.在一些实施方案中，个体对于grn中的突变而言是杂合的。在一些实施方案中，grn中的突变是功能丧失突变。在一些实施方案中，个体对于c9orf72六核苷酸重复扩增而言是杂合的。在一些实施方案中，个体显示额颞性痴呆的症状。在一些实施方案中，个体没有显示额颞性痴呆的症状。
34.在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少一倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少两倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约五天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约42天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约56天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约四十天时，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少.25倍高。
35.在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少两倍、三倍或四倍高。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约五天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约28天、35天、42天、49天或56天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。
36.在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少.8倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少一倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约十二天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约24天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约56天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约42天时，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少.2倍高。
37.在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水
平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少两倍高。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约十二天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约24天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约28、35、42、49或56天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约28天、35天、42天、49天或56天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。
38.在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平降低至少50％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平降低至少70％。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约十二天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约十七天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约四十天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约十二天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约十七天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约四十天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。
39.在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体在血浆中的半衰期是约5天。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体在血浆中的半衰期是约8天。
40.在一些实施方案中，治疗个体持续时长多达48周的治疗期。在一些实施方案中，治疗个体持续时长是48周的治疗期。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体的施用在治疗期的第一天以及此后每四周发生。在一些实施方案中，在治疗期期间施用抗分拣蛋白抗体总计13次。
41.在一些实施方案中，疾病或损伤是额颞性痴呆(ftd)，并且血浆神经丝轻链(nfl)水平降低至少10％。在一些实施方案中，疾病或损伤是额颞性痴呆(ftd)，并且相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前的血浆神经丝轻链(nfl)水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后的血浆神经丝轻链(nfl)水平降低至少10％。
42.在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的csf中ctsb的蛋白质水平，个体的csf中ctsb的蛋白质水平增加至少约20％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的csf中spp1的蛋白质水平，个体的csf中spp1的蛋白质水平降低至少约10％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的csf中ctsb的蛋白质水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的csf中ctsb的蛋白质水平增加至少约20％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的csf中spp1的蛋白质水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的csf中spp1的蛋白质水平降低至少约10％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的csf中n-乙酰基葡糖胺激酶(nagk)的蛋白质水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的csf中nagk的蛋白质水平增加。在一些实施方案
中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的csf中一种或多种炎症蛋白的蛋白质水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的csf中所述一种或多种炎症蛋白的蛋白质水平降低，其中所述一种或多种炎症蛋白选自由14-3-3蛋白ε(ywhae)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chitinase 1，chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)和cd86组成的组。
43.在另一方面，本文提供了一种监测对正被施用抗分拣蛋白抗体的个体的治疗的方法，所述方法包括在所述个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前和之后测量来自所述个体的样品中一种或多种蛋白质的水平，其中所述一种或多种蛋白质是ctsb和/或spp1。在一些实施方案中，监测对正被施用抗分拣蛋白抗体的个体的治疗的方法还包括基于样品中一种或多种蛋白质的水平来评估所述个体中所述抗分拣蛋白抗体的活性的步骤。在一些实施方案中，样品来自个体的脑脊髓液或个体的血液。在一些实施方案中，样品来自个体的脑脊髓液。
44.在另一方面，本文提供了一种监测对正被施用抗分拣蛋白抗体的个体的治疗的方法，所述方法包括在所述个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前和之后测量来自所述个体的样品中一种或多种蛋白质的水平，其中所述一种或多种蛋白质选自由ctsb、spp1、nagk、ywhae、aif1、csf1、chit1、ly86和cd86组成的组。在一些实施方案中，方法还包括基于样品中一种或多种蛋白质的水平来评估个体中抗分拣蛋白抗体的活性。在一些实施方案中，样品来自个体的脑脊髓液。在一些实施方案中，如果相较于在个体接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中ctsb的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中ctsb的水平增加，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。在一些实施方案中，如果相较于在个体接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中ctsb的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中ctsb的水平增加至少约20％，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。在一些实施方案中，如果相较于在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中spp1的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中spp1的水平降低，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。在一些实施方案中，如果相较于在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中spp1的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中spp1的水平降低至少约10％，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。在一些实施方案中，如果相较于在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中nagk的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中nagk的水平增加，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。在一些实施方案中，如果相较于在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中一种或多种炎症蛋白的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中所述一种或多种炎症蛋白的水平降低，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性，其中所述一种或多种炎症蛋白选自由14-3-3蛋白ε(ywhae)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)和cd86组成的组。在一些实施方案中，样品来自个体的血液。
附图说明
45.图1a至图1c提供被施用单次剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps的非人灵长类动物的药物代谢动力学和药物效应动力学研究。图1a以相对于基线的百分比形式提供在用指定抗分拣蛋白抗体剂量处理之后指示时间(小时)时，外周白血细胞中sort1的水平。在测试的所有抗分拣蛋白抗体剂量下，sort1表达都降低。相较于较低抗分拣蛋白抗体剂量(5mg/kg、20mg/kg)，较高抗体剂量(60mg/kg、200mg/kg)导致sort1水平更早并且更延长降低。图1b以相对于基线的百分比形式提供在用指定抗分拣蛋白抗体剂量处理之后指示时间(小时)时，血浆中pgrn的水平。pgrn的水平以时间和剂量依赖性方式增加。具体地说，对于测试的所有抗分拣蛋白抗体剂量，相较于基线水平，在c
最大
下，血浆pgrn水平增加至3至4倍，并且在较高抗体剂量下，持续更长时期保持升高。图1c以相对于基线的百分比形式提供在用指定抗分拣蛋白抗体剂量处理之后指示时间(小时)时，csf中pgrn的水平。在被施用20mg/kg、60mg/kg或200mg/kg的动物中，csf pgrn水平增加至基线的2至3倍。如同关于血浆pgrn水平所观察(图1b)，在较高抗体剂量组中，csf pgrn水平随时间保持升高。对于图1a至图1c，n＝每种剂量3个动物。
[0046]
图2a至图2c提供被施用重复剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps的非人灵长类动物的药物代谢动力学和药物效应动力学研究。以60mg/kg的剂量每周一次持续四周向动物(2个雄性和2个雌性)施用抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps。进行给药的时日由竖直虚线表示。图2a以基线的百分比形式提供在指示时间(天)时，外周白血细胞(wbc)中sort1的浓度的平均值( /-标准偏差)。在研究的整个持续期中，外周白血细胞中的sort1水平保持降低。图2b以基线的百分比(归一化)形式提供在指示时间(天)时，血浆中pgrn的浓度的平均值( /-标准偏差)。在峰值水平下，血浆pgrn水平增加至基线的5至6倍。在第四次并且是最后一次施用抗分拣蛋白抗体之后观察到血浆pgrn的降低；然而，血浆pgrn水平保持升高至基线的2倍。图2c以基线的百分比(归一化)形式提供在指示时间(天)时，csf中pgrn的浓度的平均值( /-标准偏差)。csf pgrn水平增加至基线的3至4倍(图2c)。
[0047]
图3a至图3c显示抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps对白血细胞中sort1水平以及对血浆pgrn水平的影响。在图3a中，虚线代表在用指定剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps处理的5个健康志愿者群组中在指示时间时外周白血细胞(wbc)上的sort1表达水平，呈自基线的变化百分比形式；实线代表在用指定剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps处理的5个健康志愿者群组中在指示时间时呈自基线的变化百分比形式的血浆(pl)pgrn水平。将抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps施用至人受试者导致外周白血细胞上sort1表达水平的降低以及血浆pgrn水平的增加。对在被施用抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps的人受试者中在指示时间(给药后天数)时外周白血细胞上的sort1水平的另一分析提供在图3b中。对在被施用抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps的人受试者中在指示时间(给药后天数)时相对于基线的pgrn水平的另一分析提供在图3c中。水平虚线指示相对于基线增加至2倍。
[0048]
图4a至图4c显示抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps对csf中的pgrn水平的影响。从以0mg/kg(安慰剂)、15mg/kg、30mg/kg或60mg/kg给药的健康志愿者群组获得csf pgrn水平的药物效应动力学数据。在给药前，接着在抗体施用之后约30小时、12天、24天和42天收集csf样品。如图4a中所示，用于所有群组，在30小时和12天时观察到csf pgrn水平
的统计显著增加(相较于在基线时观察到的pgrn水平)。此外，在60mg/kg下施用抗体导致csf pgrn的水平增加，持续在单次iv剂量的抗分拣蛋白抗体之后至少24天。图4b显示在第13研究日(给药后12天)，以0mg/kg(安慰剂)、15mg/kg(群组3)、30mg/kg(“群组4”)或60mg/kg(“群组5”)给药的健康志愿者中csf pgrn水平的自基线的变化百分比。星号指示统计显著性。(****：p《0.0001，关于多重性加以调整。)图4c显示在以60mg/kg给药的健康志愿者(“群组5”和“群组6”组合)中在指示的给药后天数时，csf pgrn水平的自基线的变化百分比。
[0049]
图5a至图5c显示抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps对aftd-grn和ftd-grn受试者的血浆和csf中的pgrn水平的影响。图5a提供一名aftd-grn受试者和三名ftd-grn受试者中在指示的给药后天数时，血浆pgrn水平的平均变化百分比。图5b提供一名aftd-grn受试者(第13研究日)和三名ftd-grn患者(第57研究日)中在csf pgrn水平方面自基线的平均变化百分比。图5c提供来自正常健康志愿者以及来自三名ftd-grn患者在给药前以及在第57研究日的csf中pgrn的浓度(ng/ml)。
[0050]
图6提供对实施例3中所述的2期研究的示意性描述。csf＝脑脊髓液；grn＝颗粒体蛋白；iv＝静脉内；mri＝磁共振成像；pd＝药物效应动力学；pet＝正电子发射断层摄影术；q4w＝每4周；tspo＝转位蛋白。
[0051]
图7显示如实施例5中所述，在施用抗体之后指示时间时，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps对aftd-grn和ftd-grn受试者的血浆中的pgrn浓度(ng/ml)的影响。sd＝单次剂量；md＝多次剂量。健康志愿者(hv)和ftd患者的血浆中pgrn的中值基线浓度由水平线指示。
[0052]
图8显示在施用抗体之后指示时间时，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps对aftd-grn(无症状)和ftd-grn(有症状)受试者的csf中的pgrn浓度(ng/ml)的影响。提供了健康志愿者(hv)的csf中pgrn的浓度。一名有症状受试者不具有在基线时的可报告csf pgrn结果。
[0053]
图9显示如实施例5中所述，根据对》1000种蛋白质的somascan分析，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps对ftd-grn患者中的csf蛋白质特征的影响。y轴提供ftd-grn患者中和健康志愿者中每种蛋白质的水平的比率的z评分。x轴提供在施用抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps之后57天时和在基线时(在施用抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps之前)，ftd-grn患者中每种蛋白质的水平的比率的z评分。在ftd-grn患者中上调并且在施用抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps之后正常化的蛋白质显示于散点图中的左上象限中。在ftd-grn患者中下调并且在施用抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps之后恢复的蛋白质显示于散点图中的右下象限中。
[0054]
图10a至图10b显示ftd-grn患者中的nfl血浆水平。在图10a中，nfl血浆水平使用quinterix的simoa nf-light advantage测定来测量。在图10a中，以相对于基线水平的比率指示了五名患者中的每一者在各种时间点时的nfl血浆水平。图10b显示图10a的数据的几何平均值。
[0055]
图11a至图11b显示抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps对在ftd患者中上调的生物标志物spp1和在ftd患者中下调的生物标志物ctsb的影响。图11a显示相对于健康志愿者，生物标志物spp1在ftd患者中上调，并且用s-60-15.1[n33t]lalaps治疗ftd患者使
spp1降低至接近正常水平。相反，图11b显示相对于健康志愿者，生物标志物ctsb在ftd患者中下调，并且用s-60-15.1[n33t]lalaps治疗ftd患者使ctsb水平增加至接近正常水平。
具体实施方式
[0056]
定义
[0057]
如本文所用，术语“预防”包括提供关于个体中特定疾病、病症或疾患的发生或复发的预防。个体可易患、易感于特定疾病、病症或疾患，或处于显现此种疾病、病症或疾患的风险下，但尚未被诊断有所述疾病、病症或疾患。
[0058]
如本文所用，处于显现特定疾病、病症或疾患的“风险下”的个体在本文所述的治疗方法之前可患有或可不患有可检测的疾病或疾病的症状，并且可已经或可尚未显示可检测的疾病或疾病的症状。“处于风险下”表示个体具有一种或多种风险因素，其是如本领域中已知的与特定疾病、病症或疾患的显现相关联的可测量参数。相比于不具有这些风险因素中的一者或多者的个体，具有这些风险因素中的一者或多者的个体具有更高概率显现特定疾病、病症或疾患。
[0059]
如本文所用，术语“治疗”是指旨在在临床病变的过程期间改变所治疗的个体的自然病程的临床干预。合乎需要的治疗作用包括降低特定疾病、病症或疾患的进展速率，改善或缓和特定疾病、病症或疾患的病理状态，以及缓解特定疾病、病症或疾患或改善特定疾病、病症或疾患的预后。举例来说，如果一种或多种与特定疾病、病症或疾患相关的症状得到缓和或消除，那么个体被成功“治疗”。
[0060]“有效量”是指在必要剂量下以及持续必要时期，有效实现所需治疗或预防结果至少需要的量。有效量可以一次或多次施用来提供。本文有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和重量以及治疗在个体中引发所需响应的能力的因素而变化。有效量还是治疗有益作用胜过治疗的任何毒性或有害作用的量。对于预防用途，有益或所需结果包括诸如消除或降低疾病(包括疾病的生物化学、组织学和/或行为症状，它的并发症以及在疾病的发展期间呈现的中间病理性表型)的风险，减轻疾病的严重性，或延迟疾病的发作的结果。对于治疗用途，有益或所需结果包括诸如减轻一种或多种由疾病所致的症状，增加罹患疾病者的生活品质，降低为治疗疾病所需的其他药物治疗的剂量，增强诸如通过靶向进行的另一药物治疗的作用，延迟疾病的进展，和/或延长存活期的临床结果。药物、化合物或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防性或治疗性治疗的量。如在临床情形下所了解，药物、化合物或药物组合物的有效量可或可不与另一药物、化合物或药物组合物联合实现。因此，可在施用一种或多种治疗剂的情形下考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他剂联合，可实现或实现了合乎需要的结果，那么单一剂可被视为以有效量给予。
[0061]
如本文所用，与另一化合物或组合物“联合”施用包括同时施用和/或在不同时间施用。联合施用还涵盖以共同制剂形式施用或以单独组合物形式施用，包括在不同给药频率或间隔下，以及使用相同施用途径或不同施用途径。
[0062]
出于治疗、预防或降低风险的目的，“个体”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家养和农场动物、以及动物园、运动或玩赏动物，诸如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫等。优选地，个体是人。
[0063]
除非另外指示，否则术语“分拣蛋白”或“分拣蛋白多肽”在本文中可互换用于指代
来自包括灵长类动物(例如人和食蟹猴)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)的任何哺乳动物来源的任何天然分拣蛋白。在一些实施方案中，所述术语涵盖野生型序列与天然存在的变异序列例如剪接变体或等位基因变体两者。在一些实施方案中，所述术语涵盖“全长”未加工分拣蛋白以及由细胞中的加工产生的任何形式的分拣蛋白。在一些实施方案中，分拣蛋白是人分拣蛋白。在一些实施方案中，一示例性人分拣蛋白的氨基酸序列是seq id no:81。
[0064]
术语“抗分拣蛋白抗体”、“结合分拣蛋白的抗体”和“特异性结合分拣蛋白的抗体”是指以下抗体：所述抗体能够以足够亲和力结合分拣蛋白，以致所述抗体可用作靶向分拣蛋白的诊断剂和/或治疗剂。在一个实施方案中，如例如通过放射免疫测定(ria)所测量，抗分拣蛋白抗体与无关非分拣蛋白多肽的结合的程度小于所述抗体与分拣蛋白的结合的约10％。在某些实施方案中，结合分拣蛋白的抗体具有《1μm、《100nm、《10nm、《1nm、《0.1nm、《0.01nm或《0.001nm(例如10-8m或更小，例如10-8m至10-13m，例如10-9m至10-13m)的解离常数(kd)。在某些实施方案中，抗分拣蛋白抗体结合分拣蛋白的在来自不同物种的分拣蛋白之中是保守的表位。
[0065]
术语“免疫球蛋白”(ig)在本文中可与“抗体”互换使用。术语“抗体”在本文中在最广泛意义上使用，并且特别涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)，包括由至少两个完整抗体形成的那些，以及抗体片段，只要它们展现所需生物活性即可。
[0066]“天然抗体”通常是约150,000道尔顿(dalton)的异四聚糖蛋白，由两个相同轻(“l”)链和两个相同重(“h”)链组成。每个轻链通过一个共价二硫键连接于重链，而在不同免疫球蛋白同种型的重链之间，二硫键的数目有变化。每个重链和轻链还具有规律间隔的链内二硫桥。每个重链在一端具有可变结构域(vh)，继之以许多恒定结构域。每个轻链具有在一端的可变结构域(v
l
)和在它的另一端的恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对准，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对准。特定氨基酸残基被认为形成轻链可变结构域与重链可变结构域之间的界面。
[0067]
对于不同类别的抗体的结构和性质，参见例如basic and clinical immunology,第8版,daniel p.stites,abba i.terr和tristram g.parslow(编),appleton&lange,norwalk,ct,1994,第71页和第6章。
[0068]
来自任何脊椎动物物种的轻链都可基于它们的恒定结构域的氨基酸序列而被指定为称为kappa(“κ”)和lambda(“λ”)的两种明确不同类型中的一者。视免疫球蛋白的重链的恒定结构域(ch)的氨基酸序列而定，免疫球蛋白可被指定为不同类别或同种型。存在免疫球蛋白的五个类别：iga、igd、ige、igg和igm，分别具有指定为alpha(“α”)、delta(“δ”)、epsilon(“ε”)、gamma(“γ”)和mu(“μ”)的重链。γ和α类别基于在ch序列和功能方面的相对微小差异而被进一步分为子类(同种型)，例如人表达以下子类：igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是熟知的，并且一般地描述于例如abbas等人,cellular and molecular immunology,第4版(w.b.saunders co.,2000)中。
[0069]
抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体的“可变区”或“可变结构域”是指所述抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可分别被称为“v
h”和“v
l”。这些结构域通常是抗体的最可变部分(相对于相同类别的其他抗体)，并且含有抗原结合位点。
[0070]
术语“可变”是指以下事实：在抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体之间，可变结构域的某些区段在序列方面广泛不同。可变结构域介导抗原结合，并且限定特定抗体对它的特定抗原的特异性。然而，可变性并非均匀分布在可变结构域的整个跨度上。而是在轻链可变结构域与重链可变结构域两者中，它均集中在三个称为高变区(hvr)的区段中。可变结构域的更高度保守部分被称为框架区(fr)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含主要采用β片层构型，由三个hvr连接的四个fr区，所述hvr形成连接β片层结构，并且在一些情况下形成β片层结构的一部分的环。每个链中的hvr通过fr区紧密邻近固持在一起，并且与来自另一链的hvr一起促进形成抗体的抗原结合位点(参见kabat等人,sequences of immunological interest,第五版,national institute of health,bethesda,md(1991))。恒定结构域不直接涉及于抗体与抗原的结合中，但展现各种效应子功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
[0071]“经分离”抗体，诸如本公开的抗分拣蛋白抗体，是已脱离它的产生环境(例如天然或重组)的组分来鉴定、分离和/或回收的抗体。优选地，经分离多肽不伴有来自它的产生环境的所有其他污染物组分。来自它的产生环境的污染物组分，诸如由重组经转染细胞产生的那些，是将通常干扰抗体的研究、诊断或治疗用途的物质，并且可包括酶、激素和其他蛋白质溶质或非蛋白质溶质。在优选实施方案中，多肽将被纯化：(1)以获得大于95重量％的抗体，如通过例如洛利(lowry)方法所测定，并且在一些实施方案中，以达到大于99重量％；(2)以达到足以通过使用旋转杯测序仪来获得n末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(3)以达到通过使用考马斯蓝(coomassie blue)或优选是银染色在非还原性或还原性条件下进行的sds-page所测定的同质性。经分离抗体包括重组t细胞内的原位抗体，因为将不存在抗体的天然环境的至少一种组分。然而，通常，将通过至少一个纯化步骤来制备经分离多肽或抗体。
[0072]
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从大致上同质抗体群体获得的抗体，诸如本公开的单克隆抗分拣蛋白抗体，即构成所述群体的单个抗体是相同的，例外之处是可少量存在的可能的天然存在突变和/或翻译后修饰(例如异构化、酰胺化等)。单克隆抗体具有高度特异性，针对单一抗原位点。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除它们的特异性之外，单克隆抗体在它们通过杂交瘤培养来合成，未受其他免疫球蛋白污染方面也是有利的。修饰语“单克隆”将抗体的特性指示为从大致上同质抗体群体获得，并且不应解释为需要通过任何特定方法来产生抗体。举例来说，待根据本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术制备，包括但不限于以下方法中的一者或多者：用一种或多种dna、病毒样粒子、一种或多种多肽和/或一种或多种细胞中的一者或多者使包括但不限于大鼠、小鼠、兔、豚鼠、仓鼠和/或鸡的动物免疫的方法；杂交瘤方法、b细胞克隆方法、重组dna方法以及用于在具有人免疫球蛋白基因座的部分或全部或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中产生人抗体或人样抗体的技术。
[0073]
术语“全长抗体”、“完整抗体”或“完全抗体”可互换用于指代与抗体片段不同，呈它的大致上完整形式的抗体，诸如本公开的抗分拣蛋白抗体。具体来说，完全抗体包括具有重链和轻链，包括fc区的那些。恒定结构域可为天然序列恒定结构域(例如人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整抗体可具有一种或多种效应子功能。
[0074]“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选是完整抗体的抗原结合区和/或可变区。
抗体片段的实例包括fab、fab'、f(ab')2和fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5,641,870，实施例2；zapata等人,protein eng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。
[0075]
木瓜蛋白酶(papain)消化抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体会产生两个相同抗原结合片段，称为“fab”片段；以及残余“fc”片段，此名称反映能够易于结晶。fab片段由整个l链以及h链的可变区结构域(vh)和一个重链的第一恒定结构域(ch1)组成。每个fab片段关于抗原结合是单价的，即它具有单一抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体会产生单一大型f(ab')2片段，其大致对应于两个具有不同抗原结合活性的二硫键连接fab片段，并且仍然能够交联抗原。fab'片段由于在ch1结构域的羧基末端具有少许额外残基而不同于fab片段，所述残基包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。fab'-sh是在本文中用于其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基携带游离硫醇基团的fab'的名称。f(ab')2抗体片段最初以在它们之间具有铰链半胱氨酸的成对fab'片段形式产生。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
[0076]
fc片段包含两个h链的通过二硫键固持在一起的羧基末端部分。抗体的效应子功能由fc区中的序列决定，所述fc区是还由见于某些类型的细胞上的fc受体(fcr)识别的区域。
[0077]“fv”是含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。这个片段由处于紧密非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。由这两个结构域的折叠，发散出贡献用于抗原结合的氨基酸残基，并且对抗体赋予抗原结合特异性的六个高变环(来自h链和l链各3个环)。然而，即使单一可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的hvr的半个fv)也能够识别和结合抗原，但亲和力低于整个结合位点。
[0078]“单链fv”，还缩写为“sfv”或“scfv”，是包含连接成单一多肽链的vh抗体结构域和vl抗体结构域的抗体片段。优选地，sfv多肽还包含在vh结构域与v
l
结构域之间的使得sfv能够形成为抗原结合所需的结构的多肽接头。对于对sfv的综述，参见pluckthun,the pharmacology of monoclonal antibodies,第113卷,rosenburg和moore编,springer-verlag,new york,第269-315页(1994)。
[0079]
抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体的“功能性片段”包含完整抗体的一部分，通常包括所述完整抗体的抗原结合区或可变区或抗体的保留fcr结合能力或具有改变的fcr结合能力的f区。抗体片段的实例包括线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。
[0080]
术语“双抗体”是指通过以下方式制备的小型抗体片段：构建在vh结构域与v
l
结构域之间具有短接头(约5-10个残基)以致实现可变结构域的链间而非链内配对的sfv片段(参见先前段落)，由此产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交换”sfv片段的异二聚体，其中两个抗体的vh结构域和v
l
结构域存在于不同多肽链上。
[0081]
如本文所用，“嵌合抗体”是指其中重链和/或轻链的一部分与源于特定物种或属于特定抗体类别或子类的抗体中的相应序列相同或同源，而一个或多个链的其余部分与源于另一物种或属于另一抗体类别或子类的抗体中的相应序列相同或同源的抗体(免疫球蛋白)，诸如本公开的嵌合抗分拣蛋白抗体，以及此类抗体的片段，只要它们展现所需生物活
性即可。本文中的目标嵌合抗体包括抗体，其中抗体的抗原结合区源于通过例如用目标抗原使猕猴免疫来产生的抗体。如本文所用，“人源化抗体”作为“嵌合抗体”的子组来使用。
[0082]
非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式，诸如本公开的抗分拣蛋白抗体的人源化形式，是包含来自非人hvr的氨基酸残基和来自人fr的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体将包含大致上全部的至少一个，并且通常是两个可变结构域，其中全部或大致上全部的hvr(例如cdr)对应于非人抗体的那些，而全部或大致上全部的fr对应于人抗体的那些。人源化抗体任选地可包含源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体例如非人抗体的“人源化形式”是指已经受人源化的抗体。
[0083]“人抗体”是具有与由人产生和/或已使用如本文公开的用于制备人抗体的任何技术制备的抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的这个定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可使用本领域中已知的各种技术来产生人抗体，所述技术包括噬菌体展示文库和基于酵母的平台技术。可通过将抗原施用至转基因动物来制备人抗体，所述转基因动物已被修饰来应答于抗原激发产生此类抗体，但其内源性基因座已被失能，例如经免疫异种小鼠，以及通过人b细胞杂交瘤技术来产生人抗体。
[0084]
术语“高变区”、“hvr”或“hv”当在本文中使用时是指抗体可变结构域的在序列方面高变和/或形成结构确定的环的区域，诸如本公开的抗分拣蛋白抗体的所述区域。通常，抗体包含六个hvr；三个在vh中(h1、h2、h3)，并且三个在v
l
中(l1、l2、l3)。在天然抗体中，h3和l3显示六个hvr的最大多样性，并且特别是h3被认为在对抗体赋予精细特异性方面起独特作用。天然存在的仅由重链组成的骆驼科动物抗体在不存在轻链下具有功能性和稳定性。
[0085]
许多hvr描绘处于使用中，并且被涵盖在本文中。在一些实施方案中，hvr可为基于序列变异性的kabat互补决定区(cdr)，并且是最通常使用的(kabat等人(上文))。在一些实施方案中，hvr可为chothia cdr。chothia改为涉及结构环的位置(chothia和lesk j.mol.biol.196:901-917(1987))。在一些实施方案中，hvr可为abm hvr。abm hvr代表kabat cdr与chothia结构环之间的折中，并且由oxford molecular的abm抗体建模软件使用。在一些实施方案中，hvr可为“contact”hvr。“contact”hvr基于对可用复合物晶体结构的分析。以下指示来自这些hvr中的每一者的残基。
[0086][0087]
hvr可包括如下的“延伸hvr”：vl中的24-36或24-34(l1)、46-56或50-56(l2)和89-97或89-96(l3)，以及vh中的26-35(h1)、50-65或49-65(一优选实施方案)(h2)和93-102、94-102或95-102(h3)。对于这些延伸hvr定义中的每一者，可变结构域残基根据kabat等人(上文)来编号。
[0088]“框架”或“fr”残基是除如本文定义的hvr残基以外的那些可变结构域残基。
[0089]
如本文所用的“接受体人框架”是包含源于人免疫球蛋白框架或人共有框架的v
l
或vh框架的氨基酸序列的框架。“源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的接受体人框架可包含其相同氨基酸序列，或它可包含预先存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，预先存在的氨基酸变化的数目是10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、或2或更少。当预先存在的氨基酸变化存在于vh中时，优选的那些变化仅存在于位置71h、73h和78h中的三者、两者或一者处；举例来说，在那些位置处的氨基酸残基可为71a、73t和/或78a。在一个实施方案中，vl接受体人框架在序列方面与v
l
人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
[0090]“人共有框架”是代表在所选择的人免疫球蛋白v
l
或vh框架序列中最通常存在的氨基酸残基的框架。通常，所选择的人免疫球蛋白v
l
或vh序列来自可变结构域序列的子组。通常，序列的子组是如kabat等人,sequences of proteins of immunological interest,第5版public health service,national institutes of health,bethesda,md(1991)中的子组。实例包括对于v
l
，子组可为如kabat等人(上文)中的子组κi、κii、κiii或κiv。另外，对于vh，子组可为如kabat等人(上文)中的子组i、子组ii或子组iii。
[0091]
在例如本公开的抗分拣蛋白抗体的指定位置处的“氨基酸修饰”是指取代或缺失指定残基，或邻近指定残基插入至少一个氨基酸残基。“邻近”于指定残基的插入意指在其一个至两个残基内的插入。插入可在指定残基的n末端或c末端。本文中的优选氨基酸修饰是取代。
[0092]“亲和力成熟”抗体，诸如本公开的抗分拣蛋白抗体，是在其一个或多个hvr中具有一个或多个改变的抗体，所述一个或多个改变导致相较于不具有那一个或多个改变的亲本
抗体，所述抗体对抗原的亲和力改善。在一个实施方案中，亲和力成熟抗体对靶标抗原具有纳体积摩尔浓度或甚至皮体积摩尔浓度亲和力。通过本领域中已知的程序来产生亲和力成熟抗体。举例来说，marks等人,bio/technology 10:779-783(1992)描述通过vh结构域和vl结构域改组进行的亲和力成熟。hvr和/或框架残基的随机诱变由例如：barbas等人proc nat.acad.sci.usa 91:3809-3813(1994)；schier等人gene169:147-155(1995)；yelton等人j.immunol.155:1994-2004(1995)；jackson等人,j.immunol.154(7):3310-9(1995)；以及hawkins等人,j.mol.biol.226:889-896(1992)描述。
[0093]
如本文所用，术语“特异性识别”或“特异性结合”是指靶标与抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体之间的可测量和可重现相互作用诸如吸引或结合，所述可测量和可重现相互作用确定在包括生物分子的分子的异质群体存在下所述靶标的存在。举例来说，特异性或优先结合靶标或表位的抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体是相比于它结合其他靶标或所述靶标的其他表位，以更大亲和力、亲合力，更容易地，和/或以更久持续期结合这个靶标或表位的抗体。通过阅读这个定义还应了解，举例来说，特异性或优先结合第一靶标的抗体(或部分)可或可不特异性或优先结合第二靶标。因此，“特异性结合”或“优先结合”不一定要求(尽管它可包括)排他性结合。特异性结合靶标的抗体可具有至少约10 3
m-1
或10 4
m-1
，有时是约10 5
m-1
或10 6
m-1
，在其他情况下是约10 6
m-1
或10 7
m-1
、约10 8
m-1
至10 9
m-1
、或约10 10
m-1
至10 11
m-1
或更高的缔合常数。多种免疫测定形式可用于选择与特定蛋白质具有特异性免疫反应性的抗体。举例来说，固相elisa免疫测定常规地用于选择与蛋白质具有特异性免疫反应性的单克隆抗体。对于可用于测定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件的描述，参见例如harlow和lane(1988)antibodies,alaboratory manual,cold spring harbor publications,new york。
[0094]
如本文所用，分拣蛋白与第二蛋白质之间的“相互作用”涵盖但不限于蛋白质-蛋白质相互作用、物理相互作用、化学相互作用、结合、共价结合和离子结合。如本文所用，当抗体破坏、降低或完全消除两种蛋白质之间的相互作用时，所述抗体“抑制所述两种蛋白质之间的相互作用”。当本公开的抗体或其片段结合两种蛋白质中的一者时，所述抗体或其片段“抑制所述两种蛋白质之间的相互作用”。
[0095]“激动剂”抗体或“活化性”抗体是在抗体结合抗原之后诱导(例如增加)抗原的一种或多种活性或功能的抗体，诸如本公开的激动剂抗分拣蛋白抗体。
[0096]“阻断”抗体、“拮抗剂”抗体或“抑制性”抗体是在抗体结合抗原之后抑制或降低(例如减小)抗原与一种或多种配体的结合，和/或在抗体结合抗原之后抑制或降低(例如减小)抗原的一种或多种活性或功能的抗体，诸如本公开的抗分拣蛋白抗体。在一些实施方案中，阻断抗体、拮抗剂抗体或抑制性抗体大致上或完全抑制抗原与一种或多种配体的结合和/或抗原的一种或多种活性或功能。
[0097]
抗体“效应子功能”是指可归因于抗体的fc区(天然序列fc区或氨基酸序列变异fc区)的那些生物活性，并且随抗体同种型而变化。
[0098]
术语“fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的c末端区域，包括天然序列fc区和变异fc区。尽管免疫球蛋白重链的fc区的边界可能变化，但人igg重链fc区通常被定义为从在位置cys226处的氨基酸残基或从pro230延伸至其羧基末端。fc区的c末端赖氨酸(根据eu编号系统的残基447)可例如在抗体的产生或纯化期间，或通过重组工程改造编码抗体的
重链的核酸来移除。因此，完整抗体的组合物可包括所有k447残基都被移除的抗体群体、未移除k447残基的抗体群体、以及具有含k447残基的抗体和不含k447残基的抗体的混合物的抗体群体。适用于本公开的抗体中的天然序列fc区包括人igg1、igg2、igg3和igg4。
[0099]“天然序列fc区”包含与见于自然界中的fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人fc区包括天然序列人igg1 fc区(非a和a同种异型)；天然序列人igg2 fc区；天然序列人igg3 fc区；和天然序列人igg4 fc区以及它们的天然存在的变体。
[0100]“变异fc区”包含由于至少一个氨基酸修饰优选是一个或多个氨基酸取代而与天然序列fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列。优选地，相较于天然序列fc区或亲本多肽的fc区，变异fc区具有至少一个氨基酸取代，例如是在天然序列fc区中或在所述亲本多肽的fc区中约一个至约十个氨基酸取代，并且优选是约一个至约五个氨基酸取代。本文中的变异fc区将优选地具有与天然序列fc区和/或与亲本多肽的fc区的至少约80％同源性，并且最优选是与其的至少约90％同源性，更优选是与其的至少约95％同源性。
[0101]“fc受体”或“fcr”描述结合抗体的fc区的受体。优选fcr是天然序列人fcr。此外，优选fcr是结合igg抗体的fcr(γ受体)，并且包括fcγri、fcγrii和fcγriii子类的受体，包括这些受体的等位基因变体和选择性剪接形式，fcγrii受体包括具有类似氨基酸序列，不同之处主要在于它们的细胞质结构域的fcγriia(“活化性受体”)和fcγriib(“抑制性受体”)。活化性受体fcγriia在它的细胞质结构域中含有免疫受体酪氨酸基活化基序(“itam”)。抑制性受体fcγriib在它的细胞质结构域中含有免疫受体酪氨酸基抑制基序(“itim”)。其他fcr，包括待在未来鉴定的那些，由本文中的术语“fcr”涵盖。fcr还可增加抗体的血清半衰期。如本文所用，关于肽、多肽或抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”是指在将序列对准以及必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比，并且不将任何保守性取代考虑为序列同一性的一部分之后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以属于本领域中的技能的各种方式实现，例如使用可公开获得的计算机软件，诸如blast、blast-2、align或megalign
tm
(dnastar)软件。本领域技术人员可确定适用于测量比对的参数，包括本领域中已知的为在所比较序列的全长上实现最大对准所需的任何算法。
[0102]“经分离”细胞是脱离至少一种它在它被产生所处的环境中通常与其相伴的污染物细胞来鉴定和分离的分子或细胞。在一些实施方案中，经分离细胞不伴有与产生环境相关的所有组分。经分离细胞呈除它见于自然界中所采用的形式或安置以外的形式。经分离细胞不同于天然地存在于组织、器官或个体中的细胞。在一些实施方案中，经分离细胞是本公开的宿主细胞。
[0103]
编码抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体的“经分离”核酸分子是脱离至少一种它在它被产生所处的环境中通常与其相伴的污染物核酸分子来鉴定和分离的核酸分子。优选地，经分离核酸不伴有与产生环境相关的所有组分。编码本文中的多肽和抗体的经分离核酸分子呈除它见于自然界中所采用的形式或安置以外的形式。因此，经分离核酸分子不同于天然地存在于细胞中的编码本文中的多肽和抗体的核酸。
[0104]
如本文所用的术语“载体”意指能够运输它已与其连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其是指额外dna区段可被连接至其中的环状双链dna。另一类型的载体是噬菌体载体。另一类型的载体是病毒载体，其中额外dna区段可被连接至病毒基因组
中。某些载体能够在它们所引入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其他载体(例如非游离型哺乳动物载体)可在引入至宿主细胞中后整合至所述宿主细胞的基因组中，并且由此连同宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够引导它们所操作性地连接的基因的表达。此类载体在本文中被称为“重组表达载体”，或简称为“表达载体”。一般来说，在重组dna技术中有用的表达载体常常呈质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最通常使用的载体形式。
[0105]
如在本文中可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸聚合物，并且包括dna和rna。核苷酸可为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰核苷酸或碱基、和/或它们的类似物或可通过dna或rna聚合酶或通过合成反应来并入至聚合物中的任何底物。
[0106]“宿主细胞”包括可为或已为用于并入多核苷酸插入物的一种或多种载体的接受者的单个细胞或细胞培养物。宿主细胞包括单一宿主细胞的子代，并且所述子代可由于天然、偶然或故意突变而未必与原始亲本细胞完全相同(在形态方面或在基因组dna互补方面)。宿主细胞包括用一种或多种本公开的多核苷酸在体内转染的细胞。
[0107]
如本文所用的“载体”包括在采用的剂量和浓度下对被向其暴露的细胞或哺乳动物无毒的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
[0108]
如本文所用的术语“约”是指相应值的易于为本技术领域中的熟练人士所知的通常误差范围。在本文中提及“约”某一值或参数包括(并且描述)涉及所述值或参数本身的实施方案。
[0109]
除非上下文另外明确指示，否则如本文中以及随附权利要求中所用，单数形式“一个(种)(a/an)”和“这个(种)(the)”包括复数个(种)指示物。举例来说，提及一个(种)“抗体”是提及一个(种)至许多个(种)抗体，诸如摩尔量，并且包括其为本领域技术人员所知的等效物，以此类推。
[0110]
应了解，本文所述的本公开的方面和实施方案包括“包含”、“由
……
组成”以及“基本上由
……
组成”方面和实施方案。
[0111]
概述
[0112]
本公开涉及通过将抗分拣蛋白抗体施用至个体来治疗所述个体中的疾病或损伤和/或延迟所述疾病或损伤的进展的方法。可治疗或延迟的疾病的非限制性实例包括额颞性痴呆(ftd)和肌萎缩性侧索硬化(als)。如下所述，本公开的方法满足本领域中对鉴定用恰当剂量治疗患者以及以容易达成患者顺应性的方式施用所述剂量的方法的需要。
[0113]
有利的是，将单次或重复剂量的本公开的抗分拣蛋白抗体静脉内施用至非人灵长类动物(参见例如实施例1)以剂量依赖性方式导致白血细胞上sort1蛋白的降低以及血浆(例如2至6倍增加)和脑脊髓液(csf)(例如2至4倍增加)中pgrn蛋白水平的增加。此外，尽管抗分拣蛋白抗体的半衰期相对短暂(例如至多73.6小时)，但出乎意料的是，白血细胞上sort1蛋白的降低以及血浆和csf中pgrn蛋白水平的增加随时间持续存在(例如多达在末次剂量的抗分拣蛋白抗体之后14天)。此外，有利的是，暴露随时间而增加(例如第1天相对于第22天)，从而指示抗分拣蛋白抗体的积累。
[0114]
类似地，将单次剂量的本公开的抗分拣蛋白抗体静脉内施用至健康人(参见例如实施例2)以剂量依赖性方式导致白血细胞上sort1蛋白的降低(例如50％或70％降低)以及血浆(例如1.29至2.14倍增加)中和csf(例如0.57至1.13倍增加)中pgrn蛋白水平的增加。
此外，尽管抗分拣蛋白抗体的半衰期相对短暂(例如至多190小时)，但出乎意料的是，白血细胞上sort1蛋白的降低(例如40天或更久)以及血浆(例如40天至42天或更久)和csf(例如至少24天)中pgrn蛋白水平的增加随时间持续存在。
[0115]
患有神经变性疾病诸如ftd和als的患者长期受疾病的影响，因此需要在许多年的过程期间进行定期治疗。因为治疗剂的静脉内施用不能在家进行，所以患者必须被运送至输注中心，此成为患者与护理者两者的负担。最后，记忆丧失、情绪波动、攻击行为以及这些疾病的其他行为症状使得难以达成患者顺应性。
[0116]
有利的是，尽管本公开的抗分拣蛋白抗体展现相对短暂的半衰期，因此可能不被预期会在治疗上有用，但当根据本文提供的方法施用时，抗体出乎意料地展现持久的药物效应动力学(pd)效应(例如血浆和csf中pgrn水平的增加，以及wbc上和csf中sort1水平的降低)。因此，本文提供的方法容许相对不频繁施用抗分拣蛋白抗体，此特别有益于患有神经变性疾病诸如ftd和als的患者。
[0117]
因此，在一些实施方案中，本公开还涉及通过至少每四周一次以至少约30mg/kg的剂量经静脉内向个体施用抗分拣蛋白抗体来治疗所述个体中的ftd(参见例如实施例3)或als(参见例如实施例4)和/或延迟所述ftd或als的进展的方法。在一些实施方案中，每四周一次以约60mg/kg的剂量施用抗分拣蛋白抗体。
[0118]
本文引用的所有参考文献，包括专利、专利申请和出版物，都据此通过引用以它们的整体并入本文。
[0119]
治疗用途
[0120]
本公开提供了治疗个体中的疾病或损伤和/或延迟所述疾病或损伤的进展的方法，所述方法包括向所述个体施用抗分拣蛋白抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含含有seq id no:1的氨基酸序列的hvr-h1；含有选自由seq id no:2-3组成的组的氨基酸序列的hvr-h2；和含有选自由seq id no:5-6组成的组的氨基酸序列的hvr-h3；并且所述轻链可变区包含：含有选自由seq id no:8-27组成的组的氨基酸序列的hvr-l1；含有选自由seq id no:29-30组成的组的氨基酸序列的hvr-l2；和含有seq id no:32的氨基酸序列的hvr-l3。
[0121]
如本文所公开，本公开的抗分拣蛋白抗体可用于治疗以下疾病和/或延迟所述疾病的进展：额颞性痴呆、进行性核上麻痹、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、发作、视网膜营养不良、肌萎缩性侧索硬化、创伤性脑损伤、脊髓损伤、痴呆、中风、帕金森氏病、边缘主导的年龄相关性tdp43脑病变(late)、急性播散性脑脊髓炎、视网膜变性、年龄相关性黄斑变性、青光眼、多发性硬化、败血性休克、细菌性感染、关节炎或骨关节炎。在一些实施方案中，疾病或损伤是额颞性痴呆或肌萎缩性侧索硬化。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体可用于治疗或缓和tdp43病变，包括但不限于与痴呆、c9orf72相关的疾病、ftd、阿尔茨海默氏病、als、late和帕金森氏病相关的tdp43病变。
[0122]
在一些实施方案中，本公开的方法包括包含两种或更多种抗分拣蛋白抗体的抗分拣蛋白抗体。
[0123]
痴呆
[0124]
痴呆是一种表现为先前未受损伤的人士的整体认知能力严重丧失的非特定综合征(即一组体征和症状)，所述严重丧失超出可能从正常老化所预期的丧失。痴呆可由于独
word interference test)、人际反应指针量表、winterlight实验室言语评估(wla)和summerlight实验室言语评估(sla)。在一些实施方案中，通过在一种神经认知和/或功能测试或评估中自基线的变化来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。在一些实施方案中，通过在超过一种神经认知和/或功能测试或评估(例如2、3、4、5、6、7、8、9或更多种神经认知和/或功能测试或评估)中自基线的变化来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。
[0133]
在一些实施方案中，通过在整体性和/或区域性脑体积、白质高信号的体积、脑灌注、各向异性分数、平均扩散率、轴向扩散率和径向扩散率、和/或功能性脑活动方面自基线的变化来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。在某些实施方案中，通过动脉自旋标记mri来测量脑灌注。在某些实施方案中，通过扩散张量成像来测量径向扩散率。在某些实施方案中，通过功能性mri来测量功能性脑活动。
[0134]
在一些实施方案中，通过在全血、血浆和csf中神经变性的标志物方面自基线的变化来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。神经变性的标志物可包括但不限于神经丝轻链[nfl]、τ蛋白和/或磷酸化τ蛋白(ptau)。可通过包括但不限于来自quanterix和/或roche diagnostics的测定的方法来测量神经丝轻链。在一些实施方案中，用本公开的抗分拣蛋白抗体进行的治疗使nfl水平降低至少10％、12％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％。在一些实施方案中，通过在溶酶体功能的标志物方面自基线的变化(例如增加)来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。溶酶体功能的标志物可为但不限于组织蛋白酶(cathepsin)诸如组织蛋白酶b(ctsb)。在一些实施方案中，相较于一种或多种溶酶体标志物诸如ctsb的基线水平，用本公开的抗分拣蛋白抗体进行的治疗使所述一种或多种溶酶体标志物诸如ctsb的水平增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多中的任一者。在一些实施方案中，相较于ctsb的基线水平，用本公开的抗分拣蛋白抗体进行的治疗使ctsb的水平增加至少约20％。溶酶体标志物的另一非限制性实例是n-乙酰基葡糖胺激酶(nagk)。在一些实施方案中，相较于nagk的基线水平，用本公开的抗分拣蛋白抗体进行的治疗使nagk的水平增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多中的任一者。
[0135]
在一些实施方案中，通过在炎症标志物诸如骨桥蛋白(osteopontin，spp1)的水平方面自基线的变化(例如降低)来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。在一些实施方案中，相较于一种或多种炎症标志物诸如spp1的基线水平，用本公开的抗分拣蛋白抗体进行的治疗使所述一种或多种炎症标志物诸如spp1的水平降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多中的任一者。在一些实施方案中，相较于一种或多种炎症标志物诸如spp1的基线水平，用本公开的抗分拣蛋白抗体进行的治疗使所述一种或多种炎症标志物诸如spp1的水平降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或100％中的任一者。在一些实施方案中，相较于spp1的基线水平，用本公开的抗分拣蛋白抗体进行的治疗使spp1的水平降低至少约10％。炎症标志物的其他实例包括但不限于ywhae(14-3-3蛋白ε)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)和cd86。在一些实施方案中，相较于一种或多种炎症标志物诸如ywhae(14-3-3蛋白ε)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁
质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)或cd86的基线水平，用本公开的抗分拣蛋白抗体进行的治疗使所述一种或多种炎症标志物诸如ywhae(14-3-3蛋白ε)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)或cd86的水平降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或100％中的任一者。
[0136]
在一些实施方案中，通过在小胶质细胞活性的标志物方面自基线的变化来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。小胶质细胞活性的标志物可为但不限于ykl-40和/或白介素-6。在一些实施方案中，通过外周细胞中信使核糖核酸(mrna)表达的自基线的变化来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。在一些实施方案中，通过在与ftd疾病生物学和/或对抗分拣蛋白抗体的响应相关的分析物方面自基线的变化来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。
[0137]
在一些实施方案中，可测量从个体获得的样品诸如全血、血浆和/或csf的样品中一种或多种蛋白质(例如ykl-40、il-6、ctsb、spp1、nagk、ywhae、aif1、csf1、chit1、ly86或cd86中的一者或多者)的水平。可用于测量从个体获得的样品中一种或多种蛋白质(例如ykl-40、il-6、ctsb、spp1、nagk、ywhae、aif1、csf1、chit1、ly86或cd86中的一者或多者)的水平的方法的非限制性实例包括somascan测定(参见例如candia等人(2017)sci rep 7,14248)、蛋白质印迹、质谱测定法、流式细胞计量术和酶联免疫吸附测定(elisa)。
[0138]
在一些实施方案中，通过在神经炎症和/或小胶质细胞活化方面自基线的变化来确定对ftd的治疗和/或对ftd进展的延迟。可通过本领域中的任何已知方法来测量神经炎症和/或小胶质细胞活化。在某些实施方案中，可使用转位蛋白-正电子发射(tspo-pet)成像来测量神经炎症和/或小胶质细胞活化。在某些实施方案中，[18f]pbr06和/或[11c]pbr28 pet用作tspo-pet成像中的放射性示踪剂。在某些实施方案中，[18f]pbr06用作tspo-pet成像中的放射性示踪剂。在某些实施方案中，[11c]pbr28 pet用作tspo-pet成像中的放射性示踪剂。
[0139]
在一些实施方案中，个体对于grn(颗粒体蛋白基因)中的突变而言是杂合的。在一些实施方案中，grn中的突变是功能丧失突变。在一些实施方案中，个体对于c9orf72六核苷酸重复扩增而言是杂合的。在一些实施方案中，个体显示ftd的症状。在一些实施方案中，个体没有显示ftd的症状。
[0140]
在一些实施方案中，如果个体满足关于可能的行为变异型ftd(bvftd)或很可能的bvftd或原发性进行性失语(ppa)的诊断准则，那么个体显示ftd的症状。在一些实施方案中，个体具有为诊断可能的bvftd所需的行为/认知症状中的一者或多者(rascovsky等人,(2011)brain 134(9):2456-2477)。在一些实施方案中，个体具有不显著影响日常生活活动的轻度复合症状(例如轻度认知损害、轻度行为损害)。在某些实施方案中，个体患有bvftd或ppa，伴有运动神经元疾病。在一些实施方案中，个体患有轻度严重性的ftd，如通过临床痴呆评级量表(cdr)整体评分是1或更低以及关于额颞性痴呆临床评级量表(fcrs)的语言范畴以及行为、举动和人格范畴两者的方框评分是1或更低所确定。
[0141]
阿尔茨海默氏病
[0142]
阿尔茨海默氏病(ad)是痴呆的最常见形式。不存在用于所述疾病的治愈方法，所述疾病随着它进展而恶化，并且最终导致死亡。最经常地，ad在超过65岁的人中被诊断。然
而，较不普遍的早期发作型阿尔茨海默氏病的发生可早得多。
[0143]
阿尔茨海默氏病的常见症状包括行为症状，诸如难以记住新近事件；认知症状、意识错乱、易怒和攻击行为、情绪波动、在语言方面有困难以及长期记忆丧失。随着疾病进展，身体功能丧失，最终导致死亡。阿尔茨海默氏病在变得充分明显之前持续未知和可变的时间量进行发展，并且它可持续多年在未诊断的情况下进展。
[0144]
已显示分拣蛋白结合淀粉样前体蛋白(app)和app加工酶bace1。在不希望受理论束缚下，据信这些相互作用涉及于阿尔茨海默氏病中。因此，以及在不希望受理论束缚下，据信本公开的抗分拣蛋白抗体可用于抑制此类相互作用，并且预防有需要的个体中的阿尔茨海默氏病，降低所述阿尔茨海默氏病的风险，或治疗所述阿尔茨海默氏病。
[0145]
在一些实施方案中，以及在不希望受理论束缚下，据信抑制分拣蛋白与本公开的神经营养素(neurotrophin)(例如神经营养素前体、神经营养素前体-3、神经营养素前体-4/5、ngf前体、bdnf前体、神经营养素-3、神经营养素-4/5、ngf、bdnf等)、p75、淀粉样前体蛋白(app)和/或aβ肽之间的相互作用，或抑制分拣蛋白的一种或多种活性的本公开的抗分拣蛋白抗体可用于治疗有需要的个体中的阿尔茨海默氏病和/或延迟所述阿尔茨海默氏病的进展。
[0146]
在一些实施方案中，施用本公开的抗分拣蛋白抗体可治疗阿尔茨海默氏病和/或延迟阿尔茨海默氏病的进展。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可调节患有阿尔茨海默氏病的个体中的一种或多种分拣蛋白活性。
[0147]
血管性痴呆
[0148]
血管性痴呆(vad)是记忆和其他认知功能的微妙进行性恶化，被认为归因于脑血管疾病(脑内的血管疾病)。脑血管疾病是脑(大脑)中我们的血管(脉管系统)中的进行性变化。与年龄相关的最常见血管变化是胆固醇和其他物质在血管壁中的积累。这导致壁增厚和变硬以及血管狭窄，此可导致由受影响动脉提供的向脑区域的血流降低或甚至完全停止。血管性痴呆患者经常呈现有与阿尔茨海默氏病(ad)患者类似的症状。然而，脑中的相关变化不归因于ad病变，而是归因于脑中血流慢性降低，最终导致痴呆。vad被视为年长成人中最常见痴呆类型中的一者。vad的症状包括记忆困难、组织和解决复杂问题困难、思考缓慢、分心或“心不在焉”、从记忆中提取词汇困难、情绪或行为的变化诸如抑郁、易怒或冷漠，以及幻觉或妄想。
[0149]
在不希望受理论束缚下，据信分拣蛋白的一种或多种活性，或分拣蛋白与颗粒体蛋白前体、本公开的神经营养素(例如神经营养素前体、神经营养素前体-3、神经营养素前体-4/5、ngf前体、bdnf前体、神经营养素-3、神经营养素-4/5、ngf、bdnf等)、神经降压素(neurotensin)、脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase)、载脂蛋白av(apolipoprotein av)和/或受体相关的蛋白质之间的一种或多种相互作用涉及于血管性痴呆中。因此，以及在不希望受理论束缚下，据信抑制分拣蛋白与本公开的神经营养素(例如神经营养素前体、神经营养素前体-3、神经营养素前体-4/5、ngf前体、bdnf前体、神经营养素-3、神经营养素-4/5、ngf、bdnf等)、神经降压素、p75、分拣蛋白前导肽(sort-pro)、淀粉样前体蛋白(app)、aβ肽、脂蛋白脂肪酶(lpl)、载脂蛋白av(apoa5)、载脂蛋白e(apoe)和/或受体相关的蛋白质(rap)之间的相互作用；或抑制分拣蛋白的一种或多种活性的本公开的抗分拣蛋白抗体可用于预防有需要的个体中的血管性痴呆，降低所述血管性痴呆的风险，或治疗所述血管性痴呆。
[0150]
在一些实施方案中，施用本公开的抗分拣蛋白抗体可治疗vad和/或延迟vad的进展。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可调节患有vad的个体中的一种或多种分拣蛋白活性。
[0151]
发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤和脊髓损伤
[0152]
如本文所用，视网膜营养不良是指涉及视网膜的变性的任何疾病或疾患。此类疾病或疾患可导致视力丧失或完全失明。
[0153]
如本文所用，发作还包括癫痫发作，并且是指脑中异常过度或同步神经元活动的短暂症状。外部影响可如同狂乱扭动运动一样剧烈，或如同短暂意识丧失一样轻微。发作可显现为精神状态的改变、强直性或阵挛性运动、惊厥以及各种其他精神症状。
[0154]
创伤性脑损伤(tbi)也可被称为颅内损伤。创伤性脑损伤在外力以造成创伤的方式使脑受损时发生。创伤性脑损伤可基于严重性、机制(闭合性或穿透性头部损伤)或其他特征(例如发生在特定位置中还是在广泛区域上)来分类。
[0155]
脊髓损伤(sci)包括由创伤而非疾病引起的对脊髓的任何损伤。视脊髓和神经根受损害的位置而定，症状可从疼痛至麻痹至失禁广泛变化。脊髓损伤以可从对患者不具有影响开始进行变化的“不完全”损伤至意指功能全部丧失的“完全”损伤的各种水平来描述。
[0156]
已显示神经营养素前体(例如神经营养素前体-4/5、神经营养素-4/5、ngf前体、bdnf前体等)在发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤和脊髓损伤中起作用。
[0157]
因此，以及在不希望受理论束缚下，据信抑制分拣蛋白与本公开的神经营养素(例如神经营养素前体、神经营养素前体-3、神经营养素前体-4/5、ngf前体、bdnf前体、神经营养素-3、神经营养素-4/5、ngf、bdnf等)之间的相互作用；或抑制分拣蛋白的一种或多种活性的本公开的抗分拣蛋白抗体可用于预防有需要的个体中的发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤和/或脊髓损伤，降低所述发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤和/或脊髓损伤的风险，或治疗所述发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤和/或脊髓损伤。
[0158]
在一些实施方案中，施用本公开的抗分拣蛋白抗体可治疗发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤和/或脊髓损伤，和/或延迟发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤和/或脊髓损伤的进展。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可调节患有发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤和/或脊髓损伤的个体中的一种或多种分拣蛋白活性。
[0159]
老化的不合需要的症状
[0160]
如本文所用，老化的不合需要的症状包括但不限于记忆丧失、行为变化、痴呆、阿尔茨海默氏病、视网膜变性、动脉粥样硬化性血管疾病、听力丧失和细胞分解。
[0161]
在一些实施方案中，以及在不希望受理论束缚下，据信抑制分拣蛋白与颗粒体蛋白前体、本公开的神经营养素(例如神经营养素前体、神经营养素前体-3、神经营养素前体-4/5、ngf前体、bdnf前体、神经营养素-3、神经营养素-4/5、ngf、bdnf等)、神经降压素、p75、脂蛋白脂肪酶(lpl)、载脂蛋白av(apoa5)和/或受体相关的蛋白质(rap)之间的相互作用；或抑制分拣蛋白的一种或多种活性的本公开的抗分拣蛋白抗体可用于预防老化的一种或多种不合需要的症状，降低老化的一种或多种不合需要的症状的风险，或治疗老化的一种或多种不合需要的症状。
[0162]
在一些实施方案中，施用本公开的抗分拣蛋白抗体可治疗老化的一种或多种不合需要的症状，和/或延迟老化的一种或多种不合需要的症状的进展。在一些实施方案中，施
用抗分拣蛋白抗体可调节患有老化的一种或多种不合需要的症状的个体中的一种或多种分拣蛋白活性。
[0163]
肌萎缩性侧索硬化(als)
[0164]
如本文所用，肌萎缩性侧索硬化(als)或运动神经元疾病或洛盖赫里格氏病(lou gehrig's disease)可互换使用，并且是指一种具有变化的病因的致衰弱性疾病，其特征在于快速进行性虚弱、肌肉萎缩和肌束震颤、肌肉痉挛、说话有困难(构音困难)、吞咽有困难(吞咽困难)和呼吸有困难(呼吸困难)。
[0165]
归因于grn基因中的杂合性功能丧失突变的pgrn单倍剂量不足导致csf pgrn水平的降低，并且是显现伴有tdp-43病变的额颞性痴呆(ftd)的原因(sleegers等人,(2009)ann neurol 65:603；smith等人,(2012)am j hum genet 90:1102)。tdp-43还已被鉴定为als中的主要病理蛋白，从而表明als与ftd之间的类似性。
[0166]
举例来说，已在散发性和家族性als患者中鉴定到tdp-43中超过二十种显性突变(lagier-tourenne等人,(2009)cell 136:1001)，并且tdp-43阳性聚集物见于约95％的als病例中(prasad等人,(2019)front mol neurosci 12:25)。此外，als风险基因诸如mobp、c9orf72、mobkl2b、nsf和fus也可导致ftd(karch等人,(2018)jama neurol 75:860)。此外，pgrn突变与c9orf72突变两者均与似乎是ftd和als的另一共同病理的异常小胶质细胞活化相关联(haukedal等人,(2019)j mol biol 431:1818)。其他证据也表明als和ftd是具有重叠的遗传、神经病理学和临床特征的密切相关疾患(weishaupt等人,(2016)trends mol med 22:769；mccauley等人,(2018)acta neuropathol 137:715)。总之，这些结果表明两种疾病均可受益于共有的治疗，并且pgrn遗传变异性充当als的病程的调节因素。
[0167]
此外，除证明了pgrn的丧失在急性和慢性神经变性的多种模型中有害(boddaert等人,(2018)methods mol biol 1806:233)之外，还已发现pgrn的过度表达在als的许多动物模型中具有保护性(laird等人,(2010)plos one5:e13368；tauffenberger等人,(2013)hum mol genet 22:782；beel等人,(2018)mol neurodegener 13:55；chang等人,(2017)j exp med 214:2611)。此外，grn中的常见变体与als患者的发作年龄的降低以及在发作之后的存活期较短显著相关联(sleegers等人,(2008)neurology 71:253)。
[0168]
总之，人类遗传学与来自疾病模型的数据两者均支持pgrn在减轻与tdp-43病变相关的als患者中的病变方面具有保护功能。
[0169]
在一些实施方案中，以及在不希望受理论束缚下，据信抑制分拣蛋白与颗粒体蛋白前体、本公开的神经营养素(例如神经营养素前体、神经营养素前体-3、神经营养素前体-4/5、ngf前体、bdnf前体、神经营养素-3、神经营养素-4/5、ngf、bdnf等)、神经降压素、p75、脂蛋白脂肪酶(lpl)、载脂蛋白av(apoa5)和/或受体相关的蛋白质(rap)之间的相互作用；或抑制分拣蛋白的一种或多种活性的本公开的抗分拣蛋白抗体可用于预防或治疗als的一种或多种不合需要的症状。
[0170]
在一些实施方案中，施用本公开的抗分拣蛋白抗体可治疗als和/或延迟als的进展。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可调节患有als的个体中的一种或多种分拣蛋白活性。在一些实施方案中，个体对于c9orf72六核苷酸重复扩增而言是杂合的。
[0171]
在一些实施方案中，通过在脑萎缩、脑连接性、脑游离水和/或脑炎症方面自基线的变化来确定对als的治疗和/或对als进展的延迟。包括但不限于mri的本领域中已知的任
何方法都可用于测量脑萎缩、脑连接性、脑游离水和/或脑炎症。在某些实施方案中，使用结构性mri测量脑萎缩。在某些实施方案中，使用扩散张量成像(dti)测量脑游离水和/或脑炎症。
[0172]
在一些实施方案中，通过在颗粒体蛋白前体、神经变性的标志物、胶质细胞活化的标志物、和/或tdp-43病变的标志物方面自基线的变化来确定对als的治疗和/或对als进展的延迟。在某些实施方案中，使用adipogen免疫测定测量颗粒体蛋白前体。在某些实施方案中，神经变性的标志物包括但不限于神经丝轻链。可通过本领域中的任何已知方法来测量神经丝轻链，包括但不限于来自quanterix和/或roche diagnostics的测定。在某些实施方案中，胶质细胞活化的标志物包括但不限于ykl-40(chi3l)、il-6和/或gfap。gfap可使用本领域中已知的任何方法，包括但不限于来自roche diagnostics的测定来测量。
[0173]
帕金森氏病
[0174]
帕金森氏病，可被称为特发性或原发性帕金森综合征、运动功能减退的强直综合征(hrs)或震颤麻痹，是一种影响运动系统控制的神经变性脑病症。脑中产生多巴胺的细胞的进行性死亡导致帕金森氏病的主要症状。最经常地，帕金森氏病在超过50岁的人中被诊断。在大多数人中，帕金森氏病是特发性的(不具有已知原因)。然而，遗传因素也在疾病中起作用。
[0175]
帕金森氏病的症状包括但不限于手、手臂、腿、颌和面部的震颤、肢体和躯干的肌强直、运动缓慢(运动徐缓)、姿势不稳定、行走困难、神经精神问题、言语或行为变化、抑郁、焦虑、疼痛、精神病、痴呆、幻觉和睡眠问题。
[0176]
在一些实施方案中，施用本公开的抗分拣蛋白抗体可治疗帕金森氏病和/或延迟帕金森氏病的进展。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可诱导患有帕金森氏病的个体中的一种或多种颗粒体蛋白前体活性。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可调节患有帕金森氏病的个体中的一种或多种分拣蛋白活性。
[0177]
多发性硬化
[0178]
多发性硬化(ms)也可被称为播散性硬化症或散播性脑脊髓炎。ms是一种炎症性疾病，其中在脑和脊髓的轴突周围的脂肪髓鞘受损害，从而导致脱髓鞘和瘢痕形成以及广泛范围的体征和症状。参见例如www.ninds.nih.gov/disorders/patient-caregiver-education/hope-through-resear ch/multiple-sclerosis-hope-through-research。
[0179]
ms的症状包括但不限于感觉变化，诸如敏感性丧失或麻刺感；刺痛感或麻木，诸如感觉减退和感觉异常；肌肉无力；阵挛；肌肉痉挛；移动困难；协调和平衡困难，诸如共济失调；在言语方面有问题诸如构音困难，或在吞咽方面有问题诸如吞咽困难；视觉问题，诸如眼球震颤、包括光幻视的视神经炎以及复视；疲劳；急性或慢性疼痛；以及膀胱和肠道困难；不同程度的认知损害；抑郁或不稳定情绪的情绪症状；乌托夫氏现象(uhthoff'sphenomenon)，其是由于暴露于高于通常的环境温度的温度而导致的现存症状的恶化；以及莱尔米特氏征(lhermitte's sign)，其是当弯曲颈部时沿着背部向下行进的过电感。
[0180]
在一些实施方案中，施用本公开的抗分拣蛋白抗体可治疗多发性硬化和/或延迟多发性硬化的进展。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可诱导患有多发性硬化的个体中的一种或多种颗粒体蛋白前体活性。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可调节患有多发性硬化的个体中的一种或多种分拣蛋白活性。
[0181]
青光眼和黄斑变性
[0182]
青光眼描述但不限于特征在于视神经受损害，从而导致视力丧失和失明的一组疾病。青光眼通常由在角膜下部的前房中的液压(＝眼内压)增加引起。青光眼导致对于视力是重要的视网膜神经节细胞的相继丧失。年龄相关性黄斑变性通常影响老年人，并且主要导致丧失黄斑中的视力，即中心视野。黄斑变性导致但不限于脉络膜小疣、色素变化、视物变形、眼出血、萎缩、视敏度降低、视力模糊、中心暗点、色觉降低和对比敏感度降低。
[0183]
在不希望受理论束缚下，据信施用本公开的抗分拣蛋白抗体可治疗青光眼和黄斑变性，和/或延迟青光眼和黄斑变性的进展。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可诱导患有青光眼或黄斑变性的个体中的一种或多种颗粒体蛋白前体活性。在一些实施方案中，施用抗分拣蛋白抗体可调节患有青光眼或黄斑变性的个体中的一种或多种分拣蛋白活性。
[0184]
颗粒体蛋白突变
[0185]
在一些实施方案中，个体对于grn(颗粒体蛋白基因)中的突变而言是杂合的。在一些实施方案中，grn中的突变是功能丧失突变。
[0186]
在一些实施方案中，通过本领域中的任何已知方法来确定grn中突变的存在。可用于确定grn中突变的存在的方法的非限制性实例包括dna测序、dna杂交、聚合酶链式反应(pcr)、多重pcr、巢式pcr、实时pcr、定量pcr、半定量pcr、dna微阵列、多重连接依赖性探针扩增、单链构象多态性分析、变性梯度凝胶电泳、异源双链体分析、dna印迹、遗传连锁分析(例如使用短串联重复序列和/或可变数目串联重复序列)、荧光原位杂交、比较基因组杂交、等位基因特异性扩增、和/或限制酶消化方法(例如限制片段长度多态性分析)(mahdieh等人,iran j pediatr(2013)23(4):375-388)。
[0187]
在一些实施方案中，通过dna测序来确定grn中突变的存在(chang等人,(2010)arch neurol 67(2):161-170)。在一些实施方案中，通过dna测序和基因分型来确定grn中突变的存在(chang等人,(2010)arch neurol 67(2):161-170)。
[0188]
在一些实施方案中，低血清颗粒体蛋白前体预示grn中突变的存在(schofield等人,(2010)j alzheimers dis 22(3):981-4)。pgrn的水平可如以下“pgrn水平”章节中所讨论来测定。
[0189]
c9orf72突变
[0190]
在一些实施方案中，个体对于c9orf72六核苷酸重复扩增而言是杂合的。
[0191]
在一些实施方案中，通过本领域中的任何已知方法来确定c9orf72六核苷酸重复扩增的存在。可用于确定c9orf72六核苷酸重复扩增的存在的方法的非限制性实例包括dna测序、长读段dna测序、dna杂交、聚合酶链式反应(pcr)、多重pcr、巢式pcr、实时pcr、定量pcr、半定量pcr、dna微阵列、dna印迹、多重连接依赖性探针扩增、单链构象多态性分析、变性梯度凝胶电泳、异源双链体分析、遗传连锁分析(例如使用短串联重复序列和/或可变数目串联重复序列)、荧光原位杂交、比较基因组杂交、等位基因特异性扩增、和/或限制酶消化方法(例如限制片段长度多态性分析)(mahdieh等人,iran j pediatr(2013)23(4):375-388)。
[0192]
在一些实施方案中，通过dna测序来确定c9orf72六核苷酸重复扩增的存在(ebbert等人,mol neurodegener(2018)13(1):46)。在一些实施方案中，通过长读段测序来
确定c9orf72六核苷酸重复扩增的存在(ebbert等人,mol neurodegener(2018)13(1):46)。在一些实施方案中，使用pacific biosciences测序平台或oxford nanopore technologies测序平台来确定c9orf72六核苷酸重复扩增的存在(ebbert等人,mol neurodegener(2018)13(1):46)。在一些实施方案中，使用可商购获得的测试来确定c9orc72六核苷酸重复扩增的存在。可商购获得的测试的非限制性实例包括来自genedx(可在网站www[dot]genedx[dot]com/wp-content/uploads/2017/06/info_sheet_c9orf72.pdf处获得)、fulgent(可在网站www[dot]fulgentgenetics[dot]com/repeatexpansion-c9orf72处获得)、prevention genetics(可在网站www[dot]preventiongenetics.[dot]com/testinfo.php？sel＝test&val＝c9orf72 gene hexanucleotide repeat expansion处获得)和/或athena diagnostics(可在网站www[dot]athenadiagnostics[dot]com/view-full-catalog/c/c9orf72-dna-test处获得)的测试。
[0193]
药物剂量
[0194]
本文提供的抗体(以及任何额外治疗剂)可通过包括胃肠外、肺内、鼻内、病变内施用、脑脊髓内、颅内、脊柱内、滑膜内、鞘内、口服、表面或吸入途径在内的任何适合手段来施用。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内施用(以团注形式或通过在一段时期内连续输注)、动脉内、关节内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，施用是静脉内施用。在一些实施方案中，施用是皮下的。给药可通过任何适合途径来进行，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射，部分地取决于施用是短暂的还是长期的。本文考虑各种给药时程，包括但不限于单次施用或在各种时间点的多次施用、团式施用和脉冲输注。
[0195]
本文提供的抗体将以符合良好医学规范的方式配制、给药和施用。在这个情形下的考虑因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定哺乳动物、单个患者的临床状况、病症的原因、剂的递送部位、施用方法、施用时程以及为医学从业者所知的其他因素。抗体无需但任选地与一种或多种当前用于预防或治疗所论述的病症的剂一起配制。此类其他剂的有效量取决于存在于制剂中的抗体的量、病症或治疗的类型、以及以上讨论的其他因素。这些剂通常以与本文所述相同的剂量以及以如本文所述的施用途径来使用，或本文所述的剂量的约1至99％，或以凭经验/在临床上被确定是适当的任何剂量以及通过凭经验/在临床上被确定是适当的任何途径。
[0196]
可凭经验确定已被给予抗分拣蛋白抗体的一次或多次施用的个体中特定抗分拣蛋白抗体的剂量。对个体给予递增剂量的抗分拣蛋白抗体。为评估抗分拣蛋白抗体的功效，可监测本公开的任何疾病、病症或疾患(例如额颞性痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤、脊髓损伤、长期抑郁、动脉粥样硬化性血管疾病和正常老化的不合需要的症状)的临床症状。
[0197]
对于预防或治疗疾病，本发明的抗体(当单独或与一种或多种其他额外治疗剂组合使用时)的适当剂量将取决于待治疗的疾病的类型、抗体的类型、疾病的严重性和病程、抗体被施用来达成预防目的还是治疗目的、先前疗法、患者的临床史和对抗体的响应、以及主治医师的判断。抗体适合地以一次或在一系列治疗期间来施用至患者。
[0198]
视疾病的类型和严重性而定，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)的抗体可为用于施用至个体的初始候选剂量，无论是例如通过一次或多次分开施用，还是通过
连续输注。视以上提及的因素而定，一种典型每日剂量可在约1μg/kg至100mg/kg或更大的范围内。对于在数天或更长时间内的重复施用，视疾患而定，治疗将通常持续直至出现所需的疾病症状阻抑。抗体的一种示例性剂量将在约15mg/kg至约70mg/kg的范围内。因此，可将一次或多次的约15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg或70mg/kg(或它们的任何组合)剂量施用至个体。抗体的另一示例性剂量将在约30mg/kg至约60mg/kg的范围内。因此，可将一次或多次的30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg或60mg/kg(或它们的任何组合)剂量施用至个体。
[0199]
在一些方面，本公开的方法包括以至少约30mg/kg的剂量经静脉内向个体施用抗分拣蛋白抗体。在一些实施方案中，剂量是至少约35mg/kg、至少约40mg/kg、至少约45mg/kg、至少约50mg/kg、至少约55mg/kg或至少约60mg/kg。在一些实施方案中，剂量在约30mg/kg与约60mg/kg之间。在一些实施方案中，剂量是约60mg/kg。
[0200]
此类剂量可间歇地施用，例如每周或每三周(例如以致个体接受约两次至约二十次，或例如约六次剂量的抗体)。在某些实施方案中，给药频率是每天三次、每天两次、每天一次、每隔一天一次、每周一次、每两周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、或每月一次、每两个月一次、每三个月一次，或更久。在一些实施方案中，约一个月一次施用剂量。在一些实施方案中，给药频率等于或大于q2w(即每两周一次或频率小于每两周一次施用剂量)，等于或大于q3w，等于或大于q4w，等于或大于q5w，等于或大于q6w，等于或大于q7w，或等于或大于q8w。
[0201]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少约30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少约30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少约30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少约30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0202]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少约35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少约35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少约35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少约35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0203]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少约40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少约40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少约40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少约40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0204]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少约45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少约45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少约45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少约45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0205]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少约50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少约50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少约50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少约50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0206]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少约55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少约55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少约55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少约55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0207]
在一些实施方案中，每四周一次或更频繁地以约60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以约60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以约60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以约60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0208]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0209]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0210]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0211]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0212]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少
50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0213]
在一些方面，本公开的方法包括每四周一次或更频繁地以至少55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以至少55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以至少55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以至少55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0214]
在一些实施方案中，每四周一次或更频繁地以60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每两周一次以60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每三周一次以60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在一些实施方案中，每四周一次以60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0215]
在某些实施方案中，在约60分钟内经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0216]
在某些实施方案中，在约60分钟内以至少约30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少约30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少约35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少约35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少约40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少约40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少约45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少约45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少约50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少约50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少约55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少约55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以约60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以约60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0217]
在某些实施方案中，在约60分钟内以至少30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少30mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少35mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少40mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少45mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少50mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至
个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以至少55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以至少55mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在约60分钟内以60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，在至少60分钟内以60mg/kg的剂量经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0218]
在某些实施方案中，经静脉内将至少2次剂量、至少4次剂量、至少6次剂量、至少8次剂量、至少10次剂量、至少12次剂量、至少14次剂量、至少16次剂量、至少18次剂量或至少20次剂量的抗分拣蛋白抗体施用至个体。在某些实施方案中，将总计13次剂量的抗分拣蛋白抗体施用至个体。
[0219]
在一些实施方案中，治疗个体持续时长多达24周、多达25周、多达26周、多达27周、多达28周、多达29周、多达30周、多达31周、多达32周、多达33周、多达34周、多达35周、多达36周、多达37周、多达38周、多达39周、多达40周、多达41周、多达42周、多达43周、多达44周、多达45周、多达46周、多达47周或多达48周的治疗期。在一些实施方案中，治疗个体持续时长多达48周的治疗期。在一些实施方案中，治疗个体持续时长是48周的治疗期。
[0220]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体的施用在治疗期的第一天以及此后每四周发生。
[0221]
在一些实施方案中，在治疗期期间施用抗分拣蛋白抗体总计13次。
[0222]
可施用初始较高负荷剂量，继之以一次或多次较低剂量。然而，其他剂量方案可为有用的。这个疗法的进展容易地通过常规技术和测定来监测。
[0223]
pgrn水平
[0224]
在一些方面，本公开的方法包括经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体，其中在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平高于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平。在一些实施方案中，个体的血浆中pgrn蛋白的水平的1倍增加对应于个体的血浆中pgrn蛋白的水平的100％增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少1倍高、至少1.25倍高、至少1.5倍高、至少1.75倍高、至少2倍高、至少2.25倍高、至少2.5倍高、至少2.75倍高或至少3倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少1倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少2倍高。
[0225]
在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平的2倍增加对应于相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平，个体的血浆中pgrn蛋白的水平的100％增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少两倍、至少三倍或至少四倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少两倍高。
[0226]
在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约5天时、约6天时、约7天时、约8
天时、约9天时、约10天时、约11天时或约12天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约五天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约42天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约56天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。
[0227]
在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约5天时、约6天时、约7天时、约8天时、约9天时、约10天时、约11天时或约12天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约28天、35天、42天、49天或56天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约五天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约28天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约35时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约42天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约49天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。
[0228]
在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约56天时存在个体的血浆中pgrn蛋白的水平的倍数增加。
[0229]
在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约四十天、约41天或约42天时，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少0.25倍高、至少0.3倍高、至少0.35倍高、至少0.4倍高、至少0.45倍高、至少0.5倍高、至少0.55倍高、至少0.6倍高、至少0.65倍高、至少0.7倍高、至少0.75倍高、至少0.8倍高、至少0.85倍高、至少0.9倍高、至少0.95倍高、至少1倍高或至少1.5倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约四十天时，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的血浆中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的血浆中pgrn蛋白的水平的至少0.25倍高。
[0230]
在一些实施方案中，通过在多个时间点时抽血来测定个体的血浆中pgrn蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用抗分拣蛋白抗体之前8、5、3、2、1和/或0天以及在施用抗分拣蛋白抗体之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、18、30、42、43、57、85和/或113天抽血来测定个体的血浆中pgrn蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用抗分拣蛋白抗体之前8、5、3、2、1和/或0天以及在施用抗分拣蛋白抗体之后1、2、3、6、8、13、30、43、57、85和113天抽血来测定个体的血浆中pgrn蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之前多达6周、多达5周、多达4周、多达3周、多达2周、多达1周、多达7天、多达6天、多达5天、多达4天、多达3天、多达2天、多达1天、和/或0天，在每次施用抗分拣蛋白抗体的当天，以及在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之后10周、20周、30周、40周、50周、60周和/或70周抽血来测定个体的血浆中pgrn蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之前多达6周、多达5周、多达4周、多达3周、多达2周、多达1周、多达7天、多达6天、多达5天、多达4天、多达3天、多达2天、多达1天、和/或0天，在每次施用抗分拣蛋白抗体的当天，以及在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之后61周抽血来测定个体的血浆中pgrn蛋白的水平。
[0231]
在一些方面，本公开的方法包括经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体，其中在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平高于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平。在一些实施方案中，个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的1倍增加对应于个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的100％增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少0.8倍高、至少0.85倍高、至少0.9倍高、至少0.95倍高、至少1倍高或至少1.2倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少0.8倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少1倍高。
[0232]
在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约1天时、约2天时、约3天时、约4天时、约5天时、约6天时、约7天时、约8天时、约9天时、约10天时、约11天时、约12天时、约13天时、约14天时、约15天时、约16天时、约17天时、约18天时、约19天时、约20天时、约21天时、约22天时、约23天时、约24天时、约25天时、约26天时、约27天时、约28天时、约29天时、约30天时、约31天时、约32天时、约33天时、约34天时、约35天时、约36天时、约37天时、约38天时、约39天时、约40天时、约41天时或约42天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约十二天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约24天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约56天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。
[0233]
在一些实施方案中，个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的两倍增加对应于个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的100％增加。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少2倍高、至少2.5倍高、至少3倍高、至少3.5倍高、至少4倍高、至少4.5倍高、至少5倍高中的任一者。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少两倍高。
[0234]
在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约1天时、约2天时、约3天时、约4天时、约5天时、约6天时、约7天时、约8天时、约9天时、约10天时、约11天时、约12天时、约13天时、约14天时、约15天时、约16天时、约17天时、约18天时、约19天时、约20天时、约21天时、约22天时、约23天时、约24天时、约25天时、约26天时、约27天时、约28天时、约29天时、约30天时、约31天时、约32天时、约33天时、约34天时、约35天时、约36天时、约37天时、约38天时、约39天时、约40天时、约41天时或约42天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约28天、35天、42天、49天或56天中的任一者时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约十二天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约24天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约
28天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约35天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约42天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约49天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约56天时存在个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的倍数增加。
[0235]
在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约1天时、约2天时、约3天时、约4天时、约5天时、约6天时、约7天时、约8天时、约9天时、约10天时、约11天时、约12天时、约13天时、约14天时、约15天时、约16天时、约17天时、约18天时、约19天时、约20天时、约21天时、约22天时、约23天时、约24天时、约25天时、约26天时、约27天时、约28天时、约29天时、约30天时、约31天时、约32天时、约33天时、约34天时、约35天时、约36天时、约37天时、约38天时、约39天时、约40天时、约41天时或约42天时，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少0.2倍高。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约42天时，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平是在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平的至少0.2倍高。
[0236]
在一些实施方案中，通过在多个时间点时进行腰椎穿刺来测定个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用抗分拣蛋白抗体之前8、5、3、2、1和/或0天以及在施用抗分拣蛋白抗体之后1天、30小时、2天、12天、24天和/或42天进行腰椎穿刺来测定个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之前多达6周、多达5周、多达4周、多达3周、多达2周、多达1周、多达7天、多达6天、多达5天、多达4天、多达3天、多达2天、多达1天、和/或0天以及在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之后至少10周、至少15周、至少20周、至少25周、至少30周、至少40周、至少50周和/或至少60周进行腰椎穿刺来测定个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之前多达6周、多达5周、多达4周、多达3周、多达2周、多达1周、多达7天、多达6天、多达5天、多达4天、多达3天、多达2天、多达1天、和/或0天以及在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之后在第25周期间和在第61周期间进行腰椎穿刺来测定个体的脑脊髓液中pgrn蛋白的水平。
[0237]
在一些实施方案中，使用本领域中已知的定量蛋白质的任何方法来测定个体的血浆或脑脊髓液中pgrn蛋白的水平。可用于定量pgrn蛋白的方法的非限制性实例包括somascan测定(参见例如candia等人(2017)sci rep7,14248)、蛋白质印迹、质谱测定法、流式细胞计量术和酶联免疫吸附测定(elisa)。在某些实施方案中，使用elisa测定来测定个体的血浆或脑脊髓液中pgrn蛋白的水平。
[0238]
sort1水平
[0239]
在一些方面，本公开的方法包括经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体，其中相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平降低。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平降低至少40％、至少
45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平降低至少50％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的外周白血细胞上sort1蛋白的表达水平降低至少70％。
[0240]
在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约10天或更久、11天或更久、12天或更久、13天或更久、14天或更久、15天或更久、16天或更久、17天或更久、18天或更久、19天或更久、20天或更久、21天或更久、22天或更久、23天或更久、24天或更久、25天或更久、26天或更久、27天或更久、28天或更久、29天或更久、30天或更久、31天或更久、32天或更久、33天或更久、34天或更久、35天或更久、36天或更久、37天或更久、38天或更久、39天或更久、40天或更久、41天或更久、42天或更久、43天或更久、44天或更久、或45天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约十二天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后十七天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在施用抗分拣蛋白抗体之后约四十天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。
[0241]
在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约10天或更久、11天或更久、12天或更久、13天或更久、14天或更久、15天或更久、16天或更久、17天或更久、18天或更久、19天或更久、20天或更久、21天或更久、22天或更久、23天或更久、24天或更久、25天或更久、26天或更久、27天或更久、28天或更久、29天或更久、30天或更久、31天或更久、32天或更久、33天或更久、34天或更久、35天或更久、36天或更久、37天或更久、38天或更久、39天或更久、40天或更久、41天或更久、42天或更久、43天或更久、44天或更久、或45天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约十二天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约十七天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。在一些实施方案中，在末次施用抗分拣蛋白抗体之后约四十天或更久时存在个体的外周白血细胞中sort1的表达水平的降低。
[0242]
在一些方面，本公开的方法包括经静脉内将抗分拣蛋白抗体施用至个体，其中相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平降低。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平降低至少50％。在一些实施方案中，相较于在施用抗分拣蛋白抗体之前个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平，在施用抗分拣蛋白抗体之后个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平降低至少70％。
[0243]
在一些实施方案中，通过在多个时间点时抽血来测定个体的外周白血细胞上
sort1蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用抗分拣蛋白抗体之前8、5、3、2、1和/或0天以及在施用抗分拣蛋白抗体之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、18、30、42、43、57、85和/或113天抽血来测定个体的外周白血细胞上sort1的水平。在某些实施方案中，通过在施用抗分拣蛋白抗体之前8、5、3、2、1和/或0天以及在施用抗分拣蛋白抗体之后1、2、3、6、8、9、13、18、30、43、57、85和113天抽血来测定个体的外周白血细胞上sort1的水平。在某些实施方案中，通过在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之前多达6周、多达5周、多达4周、多达3周、多达2周、多达1周、多达7天、多达6天、多达5天、多达4天、多达3天、多达2天、多达1天、和/或0天，在每次施用抗分拣蛋白抗体的当天，以及在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之后10周、20周、30周、40周、50周、60周和/或70周抽血来测定个体的外周白血细胞上sort1蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之前多达6周、多达5周、多达4周、多达3周、多达2周、多达1周、多达7天、多达6天、多达5天、多达4天、多达3天、多达2天、多达1天、和/或0天，在每次施用抗分拣蛋白抗体的当天，以及在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之后在第61周期间抽血来测定个体的外周白血细胞上sort1蛋白的水平。
[0244]
在一些实施方案中，通过在多个时间点时进行腰椎穿刺来测定个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用抗分拣蛋白抗体之前8、5、3、2、1和/或0天以及在施用抗分拣蛋白抗体之后1天、30小时、12天、24天和/或42天进行腰椎穿刺来测定个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之前多达6周、多达5周、多达4周、多达3周、多达2周、多达1周、多达7天、多达6天、多达5天、多达4天、多达3天、多达2天、多达1天、和/或0天以及在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之后至少10周、至少15周、至少20周、至少25周、至少30周、至少40周、至少50周和/或至少60周进行腰椎穿刺来测定个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平。在某些实施方案中，通过在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之前多达6周、多达5周、多达4周、多达3周、多达2周、多达1周、多达7天、多达6天、多达5天、多达4天、多达3天、多达2天、多达1天、和/或0天以及在施用第一剂抗分拣蛋白抗体之后在第25周期间和在第61周期间进行腰椎穿刺来测定个体的脑脊髓液中sort1蛋白的水平。
[0245]
在一些实施方案中，使用本领域中已知的定量蛋白质的任何方法来测定个体的外周白血细胞上sort1蛋白的水平或脑脊髓液中可溶性sort1蛋白的水平。可用于定量sort1蛋白的方法的非限制性实例包括somascan测定(参见例如candia等人(2017)sci rep 7,14248)、蛋白质印迹、质谱测定法、流式细胞计量术和酶联免疫吸附测定(elisa)。在某些实施方案中，使用elisa测定来测定个体的外周白血细胞上或脑脊髓液中sort1蛋白的水平。在某些实施方案中，使用用抗分拣蛋白抗体特异性抗独特型抗体进行的elisa测定来测定个体的外周白血细胞上或脑脊髓液中sort1蛋白的水平。
[0246]
抗分拣蛋白抗体的药物代谢动力学
[0247]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体在血浆中的半衰期是约5天、约6天、约7天、约8天或约9天。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体在血浆中的半衰期是约5天。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体在血浆中的半衰期是约8天。
[0248]
诊断用途
[0249]
本公开的经分离抗体(例如本文所述的抗分拣蛋白抗体)还具有诊断效用。因此，本公开提供了出于诊断目的诸如检测个体中或源于个体的组织样品中的分拣蛋白来使用
本公开的抗体或其功能性片段的方法。
[0250]
在一些实施方案中，个体是人。在一些实施方案中，个体是罹患本公开的疾病、病症或损伤，或处于显现本公开的疾病、病症或损伤的风险下的人患者。在一些实施方案中，诊断方法涉及检测生物样品诸如活检样本、组织或细胞中的分拣蛋白。使本文所述的抗分拣蛋白抗体与生物样品接触，并且检测抗原结合的抗体。举例来说，可将活检样本用本文所述的抗分拣蛋白抗体染色以检测和/或定量疾病相关的细胞。检测方法可涉及对抗原结合的抗体的定量。生物样品中的抗体检测可用包括免疫荧光显微术、免疫细胞化学分析、免疫组织化学分析、elisa、facs分析、免疫沉淀或微型正电子发射断层摄影术在内的本领域中已知的任何方法进行。在某些实施方案中，例如用
18
f对抗体进行放射性标记，并且随后利用微型正电子发射断层摄影术分析进行检测。还可通过非侵袭性技术诸如正电子发射断层摄影术(pet)、x射线计算机断层摄影术、单光子发射计算机断层摄影术(spect)、计算机断层摄影术(ct)和计算机轴向断层摄影术(cat)来定量个体中的抗体结合。
[0251]
在其他实施方案中，本公开的经分离抗体(例如本文所述的抗分拣蛋白抗体)可用于检测和/或定量例如取自临床前疾病模型(例如非人疾病模型)的脑样本中的小胶质细胞。因此，本公开的经分离抗体(例如本文所述的抗分拣蛋白抗体)可用于评估神经系统疾病或损伤的模型中，相较于对照，在治疗之后的治疗响应，所述神经系统疾病或损伤诸如是额颞性痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、发作、视网膜营养不良、动脉粥样硬化性血管疾病、那须-哈科拉病(nasu-hakola disease)或多发性硬化。
[0252]
分拣蛋白抗体
[0253]
本公开的某些方面涉及包含一种或多种改善的和/或增强的功能特征的抗分拣蛋白抗体。在一些实施方案中，相对于具有如wo2016164637中所述的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体s-60，本公开的抗分拣蛋白抗体包含一种或多种改善的和/或增强的功能特征。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对分拣蛋白(例如人分拣蛋白)具有的亲和力高于对照抗分拣蛋白抗体(例如包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的对照抗分拣蛋白抗体)的亲和力。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的对照抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体在更大程度上以及以更低的半数最大有效浓度(ec
50
)降低分拣蛋白的细胞水平(例如细胞表面水平)。在一些实施方案中，相对于包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体改善分拣蛋白的细胞表面水平的最大降低。在一些实施方案中，相对于包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体增加细胞外颗粒体蛋白前体(pgrn)的分泌。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的对照抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体在更大程度上以及以更低的半数最大有效浓度(ec
50
)阻断pgrn与分拣蛋白的结合。在一些实施方案中，相对于包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体改善对pgrn与分拣蛋白的结合的最大阻断。
[0254]
本文还考虑具有不同fc变体的抗分拣蛋白抗体，相对于包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，所述抗分拣蛋白抗体展现一种或多种改善的和/或增强的功能特征，包括降低用以降低分拣蛋白的细胞表面水平的半数最大有效浓度(ec
50
)，改善分拣蛋白的细胞表面水平的最大降低，增加pgrn的细胞外分泌，降低用以阻断pgrn与
60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19、s-60-24的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3或它们的任何组合(如表11至表13中所示)。
[0265]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括重链可变区，其中所述重链可变区包含以下中的一者或多者：(a)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-h1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-h1；(b)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-h2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-h2；和(c)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-h3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-h3。
[0266]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2和含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3。
[0267]
b.轻链hvr
[0268]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含一个或多个(例如一个或多个、两个或更多个或全部三个)选自hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3(如表14至表16中所示)的hvr。在一些实施方案中，轻链可变区包含hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3(如表14至表16中所示)。
[0269]
在一些实施方案中，hvr-l1包含根据式iii：rssqx1llx2sx3gynyld(seq id no:28)的序列，其中x1是s或g，x2是r或h，并且x3是n、t、s、g、r、d、h、k、q、y、e、w、f、i、v、a、m或l。在一些实施方案中，hvr-l1包含选自seq id no:8-27的序列。在一些实施方案中，hvr-l1包含rssqsllrsngynyld(seq id no:8)、rssqsllrstgynyld(seq id no:9)、rssqs llrssgynyld(seq id no:10)、rssqsllrsggynyld(seq id no:11)、rssqsllrsrg ynyld(seq id no:12)、rssqsllrsdgynyld(seq id no:13)、rssqsllrshgynyld(seq id no:14)、rssqsllrskgynyld(seq id no:15)、rssqsllrsqgynyld(seq id no:16)、rssqsllrsygynyld(seq id no:17)、rssqsllrsegynyld(seq id no:18)、rssqsllrswgynyld(seq id no:19)、rssqsllrsfgynyld(seq id no:20)、rssqsl lrsigynyld(seq id no:21)、rssqsllrsvgynyld(seq id no:22)、rssqsllrsag ynyld(seq id no:23)、rssqsllrsmgynyld(seq id no:24)、rssqsllrslgynyld(seq id no:25)、rssqsllhsngynyld(seq id no:26)、或rssqgllrsngynyld(seq id no:27)的序列。在一个具体实施方案中，hvr-l1包含rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的序列。在另一具体实施方案中，hvr-l1包含rssqsllrstgynyld(seq id no:9)(如表14中所示)的序列。
[0270]
在一些实施方案中，hvr-l2包含根据式iv：lgsnrx1s(seq id no:31)的序列，其中x1是a或v。在一些实施方案中，hvr-l2包含选自seq id no:29-30的序列。
[0271]
在一些实施方案中，hvr-l3包含根据式v：mqqqex1plt(seq id no:34)的序列，其中x1是a或t。在一些实施方案中，hvr-l3包含选自seq id no:32-33的序列。
[0272]
在一些实施方案中，hvr-l1包含与选自seq id no:8-27的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，hvr-l1包含含有取代(例如相对于选自seq id no:8-27的氨基酸序列的保守性取代、插入或缺失)的氨基酸序列，但保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在选自seq id no:8-27的hvr-l1氨基酸序列中取代、插入和/或缺失多达1个、多达2个、多达3个、多达4个或多达5个氨基酸。在一些实施方案中，hvr-l2包含与选自seq id no:29-30的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，hvr-l2包含含有取代(例如相对于选自seq id no:29-30的氨基酸序列的保守性取代、插入或缺失)的氨基酸序列，但保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在选自seq id no:29-30的hvr-l2氨基酸序列中取代、插入和/或缺失多达1个、多达2个、多达3个、多达4个或多达5个氨基酸。在一些实施方案中，hvr-l3包含与选自seq id no:32-33的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，hvr-l3包含含有取代(例如相对于选自seq id no:32-33的氨基酸序列的保守性取代、插入或缺失)的氨基酸序列，但保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在选自seq id no:32-33的hvr-l3氨基酸序列中取代、插入和/或缺失多达1个、多达2个、多达3个、多达4个或多达5个氨基酸。
[0273]
在一些实施方案中，轻链可变区包含含有根据式iii的序列的hvr-l1、含有根据式iv的序列的hvr-l2和含有根据式v的序列的hvr-l3。在一些实施方案中，轻链可变区包含含
有选自seq id no:8-27的序列的hvr-l1、含有选自seq id no:29-30的序列的hvr-l2和含有选自seq id no:32-33的序列的hvr-l3。
[0274]
在一些实施方案中，轻链可变区包含抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19、s-60-24的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3或它们的任何组合(如表14至表16中所示)。
[0275]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括轻链可变区，其中所述轻链可变区包含以下中的一者或多者：(a)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-l1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-l1；(b)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-l2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-l2；和(c)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-l3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-l3。
[0276]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0277]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有氨基酸序列rssqsllrstgynyld(seq id no:9)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的
hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0278]
c.重链hvr和轻链hvr
[0279]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括重链可变区，所述重链可变区包含一个或多个(例如一个或多个、两个或更多个或全部三个)选自hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3(如表11至表13中所示)的hvr，以及轻链可变区，所述轻链可变区包含一个或多个(例如一个或多个、两个或更多个或全部三个)选自hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3(如表14至表16中所示)的hvr。在一些实施方案中，重链可变区包含hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3(如表11至表13中所示)，并且轻链可变区包含hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3(如表14至表16中所示)。
[0280]
在一些实施方案中，重链可变区包含含有ysissgyywg(seq id no:1)的序列的hvr-h1、含有根据式i的序列的hvr-h2和含有根据式ii的序列的hvr-h3，并且轻链可变区包含含有根据式iii的序列的hvr-l1、含有根据式iv的序列的hvr-l2和含有根据式v的序列的hvr-l3。在一些实施方案中，重链可变区包含含有seq id no:1的序列的hvr-h1、含有选自seq id no:2-3的序列的hvr-h2和含有选自seq id no:5-6的序列的hvr-h3，并且轻链可变区包含含有选自seq id no:8-27的序列的hvr-l1、含有选自seq id no:29-30的序列的hvr-l2和含有选自seq id no:32-33的序列的hvr-l3。
[0281]
在一些方面，重链可变区包含含有seq id no:1的序列的hvr-h1、含有选自seq id no:2-3的序列的hvr-h2和含有选自seq id no:5-6的序列的hvr-h3，并且轻链可变区包含含有选自seq id no:8-27的序列的hvr-l1、含有选自seq id no:29-30的序列的hvr-l2和含有seq id no:32的序列的hvr-l3。
[0282]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19、s-60-24的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3或它们的任何组合(如表11至表13中所示)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19、s-60-24的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3或它们的任何组合(如表14至表16中所示)。
[0283]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3的重链可变区和含有hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3的轻链可变区，其中抗体包含抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-h1、hvr-h2、
hvr-h3、hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3(如表11至表16中所示)。
[0284]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下中的一者或多者：(a)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-h1氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-h1；(b)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-h2氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-h2；和(c)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-h3氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-h3；并且其中所述轻链可变区包含以下中的一者或多者：(a)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-l1氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-l1；(b)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-l2氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-l2；和(c)包含与抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33
(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的hvr-l3氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的hvr-l3。
[0285]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsiqqgyygmdv(seq id no:5)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0286]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsiqqgyygmdv(seq id no:5)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnrvs(seq id no:30)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqetplt(seq id no:33)的hvr-l3。
[0287]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpsles(seq id no:3)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsiqqgyygmdv(seq id no:5)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0288]
在一些方面，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0289]
在一些方面，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrstgynyld(seq id no:9)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0290]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列
tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqetplt(seq id no:33)的hvr-l3。
[0291]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsiqqgyygmdv(seq id no:5)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllhsngynyld(seq id no:26)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqetplt(seq id no:33)的hvr-l3。
[0292]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2、含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqgllrsngynyld(seq id no:27)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0293]
d.重链可变区
[0294]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括包含选自seq id no:54-56的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，重链可变区包含与选自seq id no:54-56的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变区包含含有取代(例如相对于选自seq id no:54-56的氨基酸序列的保守性取代、插入或缺失)的氨基酸序列，但保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在选自seq id no:54-56的重链可变区氨基酸序列中取代、插入和/或缺失多达1个、多达2个、多达3个、多达4个、多达5个、多达6个、多达7个、多达8个、多达9个或多达10个氨基酸。
[0295]
在一些实施方案中，重链可变区包含seq id no:56的氨基酸序列。
[0296]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的重链可变区(如表25中所示)。
[0297]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列ysissgyywg(seq id no:1)的hvr-h1、含有氨基酸序列tiyhsgstyynpslks(seq id no:2)的hvr-h2和含有氨基酸序列arqgsikqgyygmdv(seq id no:6)的hvr-h3。
[0298]
e.轻链可变区
[0299]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括包含选自seq id no:57-80的
氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，轻链可变区包含与选自seq id no:57-80的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变区包含含有取代(例如相对于选自seq id no:57-80的氨基酸序列的保守性取代、插入或缺失)的氨基酸序列，但保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在选自seq id no:57-80的轻链可变区氨基酸序列中取代、插入和/或缺失多达1个、多达2个、多达3个、多达4个、多达5个、多达6个、多达7个、多达8个、多达9个或多达10个氨基酸。
[0300]
在一些实施方案中，轻链可变区包括seq id no:57的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变区包括seq id no:60的氨基酸序列。
[0301]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的轻链可变区(如表26中所示)。
[0302]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrsngynyld(seq id no:8)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0303]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列rssqsllrstgynyld(seq id no:9)的hvr-l1、含有氨基酸序列lgsnras(seq id no:29)的hvr-l2和含有氨基酸序列mqqqeaplt(seq id no:32)的hvr-l3。
[0304]
f.重链可变区和轻链可变区
[0305]
在一些方面，本公开的抗分拣蛋白抗体包括包含选自由seq id no:54-56组成的组的氨基酸序列的重链可变区；和/或包含选自由seq id no:57-80组成的组的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，重链可变区包含与选自seq id no:54-56的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、或100％同一性的氨基酸序列，并且轻链可变区包含与选自seq id no:57-80的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包括重链可变区，所述重链可变区包含含有取代(例如相对于选自seq id no:54-56的氨基酸序列的保守性取代、插入或缺失)的氨基酸序列，以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有取代(例如相对于选自seq id no:57-80的氨基酸序列的保守性取代、插入或缺失)的氨基酸序列；但保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在选自seq id no:54-56的重链可变区氨基酸序列中取代、插入和/或缺失多达1个、多达2个、多达3个、多达4个、多达5个、多达6个、多达7个、多达8个、多达9个或多达10个氨基酸；并且已在选自seq id no:57-80的轻链可变区氨基酸序列中取代、插入和/或缺失多达1个、多达2个、多达3个、多达4个、多达5个、多达6个、多达7个、多达8个、多达9个或多达10个氨基酸。
[0306]
在一些方面，本公开的抗分拣蛋白抗体包括包含选自由seq id no:54-56组成的组的氨基酸序列的重链可变区；和/或包含选自由seq id no:57-58、60-78和80组成的组的氨基酸序列的轻链可变区。
[0307]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体结合分拣蛋白，其中所述抗体包括包含seq id no:54的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:57的氨基酸序列的轻链可变区；包含seq id no:54的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:58的氨基酸序列的轻链可变区；包含seq id no:54的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:59的氨基酸序列的轻链可变区；包含seq id no:55的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:57的氨基酸序列的轻链可变区；包含seq id no:55的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:58的氨基酸序列的轻链可变区；包含seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:57的氨基酸序列的轻链可变区；包含seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:77的氨基酸序列的轻链可变区；包含seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:78的氨基酸序列的轻链可变区；包含seq id no:54的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:79的氨基酸序列的轻链可变区；或包含seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:80的氨基酸序列的轻链可变区。
[0308]
在一个方面，本公开的抗分拣蛋白抗体包括具有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和具有seq id no:57的氨基酸序列的轻链可变区。
[0309]
在一个方面，本公开的抗分拣蛋白抗体包括具有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和具有seq id no:60的氨基酸序列的轻链可变区。
[0310]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的重链可变区(如表25中所示)，以及抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的轻链可变区(如表26中所示)。
[0311]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:56的氨基酸序列的重链可变区和含有选自seq id no:57和60的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含s-60-15[n33(wt)]的重链可变区(如表25中所示)和抗体s-60-15[n33(wt)]的轻链可变区(如表26中所示)。在一些实施方案中，抗体包含s-60-15.1[n33t]的重链可变区(如表25中所示)和抗体s-60-15.1[n33t]的轻链可变区(如表26中所示)。
[0312]
示例性抗分拣蛋白抗体
[0313]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含选自s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3
[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白单克隆抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含选自s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的抗体的重链和轻链的抗分拣蛋白单克隆抗体。
[0314]
(1)s-60-10
[0315]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-10的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-10的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-10的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含抗体s-60-10的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-10的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含抗体s-60-10的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-10的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(vh)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-10的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:54的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-10的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:54的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-10或seq id no:54的vh序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vh包含一个、两个或三个选自以下的的hvr：(a)抗体s-60-10的hvr-h1氨基酸序列，(b)抗体s-60-10的hvr-h2氨基酸序列，和(c)抗
体s-60-10的hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-10的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(vl)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-10的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:57的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-10的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:57的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-10或seq id no:57的vl序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vl包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-10的hvr-l1氨基酸序列，(b)抗体s-60-10的hvr-l2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-10的hvr-l3氨基酸序列。
[0316]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:86或seq id no:87的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:92的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:86或seq id no:87的氨基酸序列的重链和含有seq id no:92的氨基酸序列的轻链。
[0317]
(2)s-60-11
[0318]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-11的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-11的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:58的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-11的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含抗体s-60-11的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-11的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:58的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含抗体s-60-11的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-11的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(vh)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-11的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:54的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1
至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-11的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:54的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-11或seq id no:54的vh序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vh包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-11的hvr-h1氨基酸序列，(b)抗体s-60-11的hvr-h2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-11的hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-11的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:58的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(vl)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-11的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:58的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-11的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:58的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-11或seq id no:58的vl序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vl包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-11的hvr-l1氨基酸序列，(b)抗体s-60-11的hvr-l2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-11的hvr-l3氨基酸序列。
[0319]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:86或seq id no:87的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:93的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:86或seq id no:87的氨基酸序列的重链和含有seq id no:93的氨基酸序列的轻链。
[0320]
(3)s-60-12
[0321]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-12的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-12的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:59的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-12的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含抗体s-60-12的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-12的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:59的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含抗体s-60-12的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3氨
基酸序列。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-12的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(vh)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-12的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:54的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-12的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:54的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-12或seq id no:54的vh序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vh包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-12的hvr-h1氨基酸序列，(b)抗体s-60-12的hvr-h2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-12的hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-12的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:59的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(vl)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-12的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:59的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-12的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:59的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-12或seq id no:59的vl序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vl包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-12的hvr-l1氨基酸序列，(b)抗体s-60-12的hvr-l2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-12的hvr-l3氨基酸序列。
[0322]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:86或seq id no:87的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:94的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:86或seq id no:87的氨基酸序列的重链和含有seq id no:94的氨基酸序列的轻链。
[0323]
(4)s-60-13
[0324]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-13的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:55的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-13的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-13的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:55的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含抗体s-60-13的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-13的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含抗体s-60-13的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-13的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:55的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(vh)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-13的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:55的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-13的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:55的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-13或seq id no:55的vh序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vh包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-13的hvr-h1氨基酸序列，(b)抗体s-60-13的hvr-h2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-13的hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-13的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(vl)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-13的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:57的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-13的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:57的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-13或seq id no:57的vl序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vl包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-13的hvr-l1氨基酸序列，(b)抗体s-60-13的hvr-l2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-13的hvr-l3氨基酸序列。
[0325]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:88或seq id no:89的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:92的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:88或seq id no:89的氨基酸序列的重链和含有seq id no:92的氨基酸序列的轻链。
[0326]
(5)s-60-14
[0327]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-14的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:55的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
no:93的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:88或seq id no:89的氨基酸序列的重链和含有seq id no:93的氨基酸序列的轻链。
[0329]
(6)s-60-15
[0330]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-15的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-15的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-15的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含抗体s-60-15的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-15的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含抗体s-60-15的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-15的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(vh)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-15的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:56的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-15的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:56的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-15或seq id no:56的vh序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vh包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-15的hvr-h1氨基酸序列，(b)抗体s-60-15的hvr-h2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-15的hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-15的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:57的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(vl)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-15的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:57的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-15的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:57的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在
一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-15或seq id no:57的vl序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vl包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-15的hvr-l1氨基酸序列，(b)抗体s-60-15的hvr-l2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-15的hvr-l3氨基酸序列。
[0331]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:92的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链和含有seq id no:92的氨基酸序列的轻链。
[0332]
(7)s-60-15.1
[0333]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-15.1的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-15.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:60的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-15.1的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含抗体s-60-15.1的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-15.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:60的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含抗体s-60-15.1的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-15.1的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(vh)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-15.1的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:56的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-15.1的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:56的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-15.1或seq id no:56的vh序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vh包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-15.1的hvr-h1氨基酸序列，(b)抗体s-60-15.1的hvr-h2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-15.1的hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-15.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:60的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至
少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(vl)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-15.1的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:60的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-15.1的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:60的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-15.1或seq id no:60的vl序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vl包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-15.1的hvr-l1氨基酸序列，(b)抗体s-60-15.1的hvr-l2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-15.1的hvr-l3氨基酸序列。
[0334]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:95的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链和含有seq id no:95的氨基酸序列的轻链。
[0335]
(8)s-60-16
[0336]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-16的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-16的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:77的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-16的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含抗体s-60-16的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-16的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:77的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含抗体s-60-16的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-16的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(vh)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-16的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:56的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-16的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:56的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取
代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-16或seq id no:56的vh序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vh包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-16的hvr-h1氨基酸序列，(b)抗体s-60-16的hvr-h2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-16的hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-16的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:77的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(vl)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-16的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:77的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-16的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:77的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-16或seq id no:77的vl序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vl包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-16的hvr-l1氨基酸序列，(b)抗体s-60-16的hvr-l2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-16的hvr-l3氨基酸序列。
[0337]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:112的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链和含有seq id no:112的氨基酸序列的轻链。
[0338]
(9)s-60-18
[0339]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-18的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-18的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:78的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-18的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含抗体s-60-18的hvr-h1、hvr-h2和hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-18的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:78的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含抗体s-60-18的hvr-l1、hvr-l2和hvr-l3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-18的重链可变结构域氨基
酸序列或与seq id no:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(vh)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-18的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:56的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-18的重链可变结构域氨基酸序列或seq id no:56的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-18或seq id no:56的vh序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vh包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-18的hvr-h1氨基酸序列，(b)抗体s-60-18的hvr-h2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-18的hvr-h3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含与抗体s-60-18的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:78的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(vl)序列，并且含有取代(例如相对于参考序列的保守性取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗分拣蛋白抗体保留结合分拣蛋白的能力。在某些实施方案中，已在抗体s-60-18的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:78的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，已在抗体s-60-18的轻链可变结构域氨基酸序列或seq id no:78的氨基酸序列中取代、插入和/或缺失总计1至5个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在hvr外部的区域中(即在fr区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在fr区中。任选地，抗分拣蛋白抗体包含抗体s-60-18或seq id no:78的vl序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一特定实施方案中，vl包含一个、两个或三个选自以下的hvr：(a)抗体s-60-18的hvr-l1氨基酸序列，(b)抗体s-60-18的hvr-l2氨基酸序列，和(c)抗体s-60-18的hvr-l3氨基酸序列。
[0340]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:113的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链和含有seq id no:113的氨基酸序列的轻链。
[0341]
(10)s-60-19
[0342]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体s-60-19的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体s-60-19的轻链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:79的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有与抗体s-60-19的重链可变结构域氨基酸序列或与seq id no:54的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
no:91的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:115的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含含有seq id no:90或seq id no:91的氨基酸序列的重链和含有seq id no:115的氨基酸序列的轻链。
[0347]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体与包含选自由s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-16、s-60-18、s-60-19和s-60-24组成的组的抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的抗体结合基本上相同的分拣蛋白表位。
[0348]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-10。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-10结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-10的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-10的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-10的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0349]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-11。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-11结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-11的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-11的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-11的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0350]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-12。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-12结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-12的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-12的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-12的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0351]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-13。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-13结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-13的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-13的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-13的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0352]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-14。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-14结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-14的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-14的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-14的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0353]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-15。在一些实
施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-15结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-15的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-15的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-15的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0354]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-15.1。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-15.1结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-15.1的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-15.1的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-15.1的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0355]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-16。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-16结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-16的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-16的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-16的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0356]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-18。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-18结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-18的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-18的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-18的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0357]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-19。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-19结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-19的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-19的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-19的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0358]
在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是抗分拣蛋白单克隆抗体s-60-24。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是与s-60-24结合基本上相同的分拣蛋白表位的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-24的重链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-24的轻链可变区的经分离抗体。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是包含单克隆抗体s-60-24的重链可变区和轻链可变区的经分离抗体。
[0359]
在某些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是拮抗剂抗体。在某些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是激动剂抗体。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体属于igg类别、igm类别或iga类别。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体属于igg类别，并且具有igg1、igg2、igg3或igg4同种型。
[0360]
可通过本领域中已知的各种测定来鉴定、筛选和/或表征额外抗分拣蛋白抗体例如特异性结合本公开的分拣蛋白的抗体的物理/化学性质和/或生物活性。
[0361]
本公开的某些方面涉及使用两种或更多种抗分拣蛋白抗体，相较于对相应单一抗分拣蛋白抗体的利用，所述两种或更多种抗分拣蛋白抗体在一起利用时显示累加或协同作用。
[0362]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体是结合人分拣蛋白的抗体片段。
[0363]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体是结合一种或多种选自由人分拣蛋白、人分拣蛋白的天然存在的变体以及人分拣蛋白的疾病变体组成的组的人蛋白质的抗体片段。
[0364]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体是抗体片段，其中所述抗体片段是fab、fab’、fab
’‑
sh、f(ab’)2、fv或scfv片段。
[0365]
抗体框架
[0366]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含一个或多个(例如一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)选自vh fr1、vh fr2、vh fr3和vh fr4(如表17至表20中所示)的框架区。在一些实施方案中，vh fr1包含qvqlqesgpglvkpsetlsl tcavsg(seq id no:35)的序列。在一些实施方案中，vh fr2包含wirqppgkglewig(seq id no:36)的序列。在一些实施方案中，vh fr3包含根据式vi：x1vtisvdtsknqfslx2lssvtaadtavyyc(seq id no:39)的序列，其中x1是q或r，并且x2是e或k。在一些实施方案中，vh fr3包含选自由seq id no:37-38组成的组的序列。在一些实施方案中，vh fr4包含wgqgttvtvss(seq id no:40)的序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有seq id no:35的序列的vh fr1、含有seq id no:36的序列的vh fr2、根据式vi的vh fr3和含有seq id no:40的序列的vh fr4。
[0367]
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有seq id no:35的序列的vh fr1、含有seq id no:36的序列的vh fr2、含有选自seq id no:37-38的序列的vh fr3和含有seq id no:40的序列的vh fr4。
[0368]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含抗体s-60-10、s-60-11、s-60-12、s-60-13、s-60-14、s-60-15[n33(wt)]、s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的vh fr1、vh fr2、vh fr3和vh fr4(如表17至表20中所示)。
[0369]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含一个或多个(例如一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)选自vl fr1、vl fr2、vl fr3和vl fr4(如表21至表24中所示)的框架区。在一些实施方案中，vl fr1包含根据式vii：divmtqsplslpvtpgx1x2asisc(seq id no:44)的序列，其中x1是e或g，并且x2是p或s。在一些实施方案中，vl fr1包含选自由seq id no:41-43组成的组的序列。在一些实施方案中，vl fr2包含根据式viii：wylqkpgqx1pqlliy(seq id no:47)的序列，其中x1是s或p。在一些实施方案中，vl fr2包含选自由seq id no:45-46组成的组的序列。在一些实施方案
15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]、s-60-15.17[n33l]、s-60-16、s-60-18、s-60-19或s-60-24的vl fr1、vl fr2、vl fr3和vl fr4(如表21至表24中所示)。
[0375]
抗分拣蛋白抗体活性
[0376]
在任何抗分拣蛋白抗体的某些方面，本公开的抗分拣蛋白抗体可抑制分拣蛋白的一种或多种活性，包括但不限于降低分拣蛋白的细胞水平(例如分拣蛋白的细胞表面水平、分拣蛋白的细胞内水平和/或分拣蛋白的总体水平)；增加颗粒体蛋白前体水平(例如颗粒体蛋白前体的细胞外水平和/或颗粒体蛋白前体的细胞水平)；以及抑制颗粒体蛋白前体与分拣蛋白之间的相互作用(例如结合)。如本文所考虑，本公开的抗分拣蛋白抗体可抑制分拣蛋白的额外活性，包括但不限于抑制与本公开的神经营养素前体(神经营养素前体-3、神经营养素前体-4/5、ngf前体、bdnf前体等)、本公开的神经营养素(神经营养素-3、神经营养素-4/5、ngf、bdnf等)、神经降压素、p75、分拣蛋白前导肽(sort-pro)、淀粉样前体蛋白(app)、aβ肽、脂蛋白脂肪酶(lpl)、载脂蛋白av(apoa5)、载脂蛋白e(apoe)和受体相关的蛋白质(rap)中的一者或多者的相互作用(例如结合)，降低pcsk9的分泌，降低β淀粉样肽的产生。
[0377]
在某些实施方案中，本公开提供了一种抗分拣蛋白抗体，其中(a)所述抗分拣蛋白抗体增加颗粒体蛋白前体的细胞外水平，降低分拣蛋白的细胞水平，抑制分拣蛋白与颗粒体蛋白前体之间的相互作用，或它们的任何组合；(b)所述抗分拣蛋白抗体降低分拣蛋白的细胞表面水平，增加颗粒体蛋白前体的细胞外水平，抑制分拣蛋白与颗粒体蛋白前体之间的相互作用，或它们的任何组合；(c)所述抗分拣蛋白抗体降低分拣蛋白的细胞表面水平，降低分拣蛋白的细胞内水平，降低分拣蛋白的总体水平，或它们的任何组合；(d)所述抗分拣蛋白抗体诱导分拣蛋白降解、分拣蛋白裂解、分拣蛋白内化、分拣蛋白下调、或它们的任何组合；(e)所述抗分拣蛋白抗体降低分拣蛋白的细胞水平，并且抑制分拣蛋白与颗粒体蛋白前体之间的相互作用；(f)所述抗分拣蛋白抗体降低分拣蛋白的细胞水平，并且增加颗粒体蛋白前体的细胞水平；和/或(g)所述抗分拣蛋白抗体增加颗粒体蛋白前体的有效浓度。
[0378]
在某些实施方案中，本公开提供了一种抗分拣蛋白抗体，其中所述抗分拣蛋白抗体降低分拣蛋白的细胞表面水平，增加颗粒体蛋白前体的细胞外水平，抑制分拣蛋白与颗粒体蛋白前体之间的相互作用，或它们的任何组合。
[0379]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体(a)以小于150pm的半数最大有效浓度(ec
50
)降低分拣蛋白的细胞表面水平，如通过流式细胞计量术所测量；(b)相对于对照，在1.25nm igg下以超过约50％，在0.63nm igg下以超过约80％，或在150nm igg下以超过约69％来降低分拣蛋白的细胞表面水平，如通过流式细胞计量术所测量；使颗粒体蛋白前体分泌在0.63nm igg下，相对于对照，增加至超过约1.13倍，或在50nm igg下，相对于对照，增加至超过约1.22倍，如通过标准elisa所测量；以小于.325nm的半数最大有效浓度(ec
50
)阻断颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合，如通过流式细胞计量术所测量；(e)相对于对照，在50nm igg下以超过约88％，或在150nm igg下以超过约27.5％来阻断颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合，如通过流式细胞计量术所测量；或(f)它们的任何组合。
[0380]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体(a)以小于681pm的半数最大有效浓度(ec
50
)降低分拣蛋白的细胞表面水平，如通过流式细胞计量术所测量；(b)相对于对照，在1.25nm igg下以超过约40％，在0.6nm igg下以超过约29％，或在150nm igg下以超过约62％来降低分拣蛋白的细胞表面水平，如通过流式细胞计量术所测量；(c)使颗粒体蛋白前体分泌在0.63nm igg下，相对于对照，增加至超过约1.11倍，或在50nm igg下，相对于对照，增加至超过约1.75倍，如通过标准elisa所测量；(d)以小于0.751nm的半数最大有效浓度(ec
50
)阻断颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合，如通过流式细胞计量术所测量；(e)相对于对照，在50nm igg下以超过约90％，或在150nm igg下以超过约95％来阻断颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合，如通过流式细胞计量术所测量；或(f)它们的任何组合。
[0381]
降低分拣蛋白水平
[0382]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体结合在细胞的表面上表达的本公开的分拣蛋白，并且在结合表面表达的分拣蛋白之后调节(例如诱导或抑制)一种或多种本公开的分拣蛋白活性。
[0383]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体在体外降低分拣蛋白的细胞水平。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体可在体内(例如个体的脑和/或外周器官中)降低分拣蛋白的细胞水平。在一些实施方案中，分拣蛋白的细胞水平的降低包括分拣蛋白的细胞表面水平的降低。如本文所用，如通过本文所述或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或适合体内模型所测量，如果抗分拣蛋白抗体在饱和抗体浓度(例如0.6nm、0.63nm、1.25nm、50nm或150nm)下和/或相对于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)诱导分拣蛋白的细胞表面水平的降低，那么它降低分拣蛋白的细胞表面水平。在一些实施方案中，分拣蛋白的细胞水平的降低包括分拣蛋白的细胞内水平的降低。如本文所考虑，如通过本文所述或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或适合体内模型所测量，如果抗分拣蛋白抗体在饱和抗体浓度下和/或相对于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)诱导分拣蛋白的细胞内水平的降低，那么它降低分拣蛋白的细胞内水平。在一些实施方案中，分拣蛋白的细胞水平的降低包括分拣蛋白的总体水平的降低。如本文所考虑，如通过本文所述或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或适合体内模型所测量，如果抗分拣蛋白抗体在饱和抗体浓度下和/或相对于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)诱导分拣蛋白的总体水平的降低，那么它降低分拣蛋白的总体水平。
[0384]
如本文所用，分拣蛋白的水平可指编码分拣蛋白的基因的表达水平；一种或多种编码分拣蛋白的转录物的表达水平；分拣蛋白的表达水平；和/或存在于细胞内和/或细胞表面上的分拣蛋白的量。本领域中已知的用于测量基因表达、转录、翻译的水平和/或蛋白质丰度或定位的任何方法都可用于测定分拣蛋白的水平。
[0385]
分拣蛋白的细胞水平可指但不限于分拣蛋白的细胞表面水平、分拣蛋白的细胞内水平和分拣蛋白的总体水平。在一些实施方案中，分拣蛋白的细胞水平的降低包括分拣蛋白的细胞表面水平的降低。在一些实施方案中，降低分拣蛋白的细胞水平(例如分拣蛋白的细胞表面水平)的本公开的抗分拣蛋白抗体具有以下特征中的一者或多者：(1)抑制或降低一种或多种分拣蛋白活性；(2)能够抑制或降低分拣蛋白与它的配体中的一者或多者的结合；(3)能够降低分拣蛋白表达性细胞中的分拣蛋白表达；(4)能够相互作用于、结合或识别
分拣蛋白；(5)能够与分拣蛋白特异性相互作用或结合；以及(6)能够治疗、改善或预防本文描述或考虑的疾病或病症的任何方面。
[0386]
在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体诱导分拣蛋白的下调。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体诱导分拣蛋白的裂解。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体诱导分拣蛋白的内化。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体诱导分拣蛋白的脱落。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体诱导分拣蛋白的降解。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体诱导分拣蛋白的脱敏。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体充当配体模拟物以短暂活化分拣蛋白。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体充当配体模拟物，并且短暂活化分拣蛋白，随后诱导分拣蛋白的细胞水平的降低和/或分拣蛋白与一种或多种分拣蛋白配体之间的相互作用(例如结合)的抑制。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体充当配体模拟物，并且短暂活化分拣蛋白，随后诱导分拣蛋白的降解。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体充当配体模拟物，并且短暂活化分拣蛋白，随后诱导分拣蛋白的裂解。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体充当配体模拟物，并且短暂活化分拣蛋白，随后诱导分拣蛋白的内化。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体充当配体模拟物，并且短暂活化分拣蛋白，随后诱导分拣蛋白的脱落。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体充当配体模拟物，并且短暂活化分拣蛋白，随后诱导分拣蛋白表达的下调。在一些实施方案中，本公开的经分离抗分拣蛋白抗体充当配体模拟物，并且短暂活化分拣蛋白，随后诱导分拣蛋白的脱敏。
[0387]
在某些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体可通过诱导分拣蛋白降解来降低分拣蛋白的细胞水平(例如分拣蛋白的细胞表面水平、分拣蛋白的细胞内水平和/或分拣蛋白的总体水平)。因此，在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体诱导分拣蛋白降解。
[0388]
本公开的抗分拣蛋白抗体可以在皮体积摩尔浓度范围内的半数最大有效浓度(ec
50
)(例如当在体外测量时)降低分拣蛋白的细胞水平(例如细胞表面水平)。在某些实施方案中，抗体的ec
50
小于约680.9pm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
是约72.58pm至约680.9nm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
是约103.6pm至约680.9nm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
小于约600pm、500pm、400pm、300pm、200pm、100pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、1pm或0.5pm。
[0389]
在一些实施方案中，抗体的ec
50
小于约或等于约675pm、650pm、625pm、600pm、575pm、550pm、525pm、500pm、475pm、450pm、425pm、400pm、375pm、350pm、325pm、300pm、275pm、250pm、225pm、200pm、175pm、150pm、125pm、100pm、90pm、80pm、70pm、60pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、9pm、8pm、7pm、6pm、5pm、4pm、3pm、2pm、1pm或0.5pm。
[0390]
在一些实施方案中，抗体的ec
50
小于约680.9pm。在一些实施方案中，抗体的ec
50
大于约或等于约0.1pm、0.5pm、1pm、10pm、20pm、30pm、40pm、50pm、60pm、70pm、80pm、90pm、100pm、125pm、150pm、175pm、200pm、225pm、250pm、275pm、300pm、325pm、350pm、375pm、400pm、425pm、450pm、475pm、500pm、525pm、550pm、575pm、600pm、625pm、650pm、675pm。也就是说，抗体的ec
50
可为具有约675pm、650nm、650pm、625pm、600pm、575pm、550pm、525pm、500pm、475pm、450pm、425pm、400pm、375pm、350pm、325pm、300pm、275pm、250pm、225pm、200pm、175pm、150pm、125pm、100pm、90pm、80pm、70pm、60pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、
1pm或0.5pm的上限和约0.1pm、0.5pm、1pm、10pm、20pm、30pm、40pm、50pm、60pm、70pm、80pm、90pm、100pm、125pm、150pm、175pm、200pm、225pm、250pm、275pm、300pm、325pm、350pm、375pm、400pm、425pm、450pm、475pm、500pm、525pm、550pm、575pm、600pm、625pm、650pm或675pm的独立选择下限的任何范围，其中所述下限小于所述上限。在一些实施方案中，抗体的ec
50
是约1pm、2pm、3pm、4pm、5pm、6pm、7pm、8pm、9pm、10pm、15pm、20pm、25pm、30pm、35pm、40pm、45pm、50pm、55pm、60pm、65pm、70pm、75pm、80pm、85pm、90pm、95pm、100pm、105pm、110pm、115pm、120pm、125pm、130pm、135pm、140pm、145pm、150pm、155pm、160pm、165pm、170pm、175pm、180pm、185pm、190pm、195pm或200pm中的任一者。
[0391]
在一些实施方案中，如通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体以小于150pm的半数最大有效浓度(ec
50
)降低分拣蛋白的细胞表面水平。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体的ec
50
是约103.6pm。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体的ec
50
是约72.58pm。
[0392]
在一些实施方案中，如通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在1.25nm igg下以超过约40％，或在0.63nm igg下以超过约80％来降低分拣蛋白的细胞表面水平。在一些实施方案中，如通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在1.25nm igg下使分拣蛋白的细胞表面水平降低约60.92％。在一些实施方案中，如通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在150nm igg下使分拣蛋白的细胞表面水平降低约69.3％。在一些实施方案中，如通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在150nm igg下使分拣蛋白的细胞表面水平降低约70.3％。
[0393]
测量抗体ec
50
值的各种方法在本领域中是已知的，包括例如通过流式细胞计量术。在一些实施方案中，使用被工程改造来表达人分拣蛋白的细胞在体外测量ec
50
。在一些实施方案中，在约4℃的温度下测量ec
50
。在一些实施方案中，在约25℃的温度下测量ec
50
。在一些实施方案中，在约35℃的温度下测量ec
50
。在一些实施方案中，在约37℃的温度下测量ec
50
。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如fab)或呈单价形式的全长抗体测定ec
50
。在一些实施方案中，使用含有显示增强的fc受体结合的恒定区的抗体测定ec
50
。在一些实施方案中，使用含有显示降低的fc受体结合的恒定区的抗体测定ec
50
。
[0394]
在一些实施方案中，相对于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体在降低分拣蛋白的细胞表面水平方面具有更高的效能。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体以更低的ec
50
(例如如在体外所测量)降低分拣蛋白的细胞水平(例如细胞表面水平)。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)的ec
50
，本公开的抗分拣蛋白抗体以低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的ec
50
降低分拣蛋白的细胞水平(例如细胞表面水平)。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)的ec
50
，本公开的抗分拣蛋白抗体以至少低至约1/1、至少低至约1/1.1、至少低至约1/1.5、至少低至约1/2、至少低至约1/3、至少低至约1/4、至少低至约1/5、至少低至约1/6、至少低至约1/
igg下，相对于对照，使颗粒体蛋白前体分泌增加至超过约1.11倍。在一些实施方案中，如通过标准elisa所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在0.63nm igg下，相对于对照，使颗粒体蛋白前体分泌增加至约1.42倍。在一些实施方案中，如通过标准elisa所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在50nm igg下，相对于对照，使颗粒体蛋白前体分泌增加至超过约1.75倍。在一些实施方案中，如通过标准elisa所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在50nm igg下，相对于对照，使颗粒体蛋白前体分泌增加至约1.97倍。在一些实施方案中，如通过标准elisa所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在50nm igg下，相对于对照，使颗粒体蛋白前体分泌增加至约2.29倍。
[0402]
测量颗粒体蛋白前体分泌的各种方法在本领域中是已知的，包括例如通过elisa。在一些实施方案中，使用表达人分拣蛋白的细胞在体外测量ec
50
。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如fab)或呈单价形式的全长抗体测定颗粒体蛋白前体分泌。在一些实施方案中，使用含有显示增强的fc受体结合的恒定区的抗体测定颗粒体蛋白前体分泌。在一些实施方案中，使用含有显示降低的fc受体结合的恒定区的抗体测定颗粒体蛋白前体分泌。
[0403]
在一些实施方案中，相对于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体在增加颗粒体蛋白前体的水平方面具有更高的效能。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体以更低的ec
50
(例如如在体外所测量)增加颗粒体蛋白前体的水平(例如细胞外水平)。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体使颗粒体蛋白前体的水平(例如细胞外水平)增加至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体使颗粒体蛋白前体的水平(例如细胞外水平)增加至约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍或至少约100倍高。
[0404]
在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体使颗粒体蛋白前体水平增加至约1.1倍高。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体使颗粒体蛋白前体水平增加至约1.3倍高。
[0405]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体增加颗粒体蛋白前体的有效浓度。颗粒体蛋白前体的有效浓度是指血浆或脑脊髓液中颗粒体蛋白前体的浓度。在一些实施方案中，颗粒体蛋白前体的有效浓度的增加是大于1.5倍的增加。在一些实施方案中，颗粒体蛋白前体的有效浓度增加持续7-28天。
[0406]
降低分拣蛋白与颗粒体蛋白前体之间的相互作用
[0407]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体增加颗粒体蛋白前体水平和/或降
低分拣蛋白的细胞水平，同时阻断(例如抑制)分拣蛋白与颗粒体蛋白前体之间的相互作用(例如结合)。因此，在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体阻断分拣蛋白与颗粒体蛋白前体之间的相互作用(例如结合)。如本文所用，如果抗分拣蛋白抗体在本文所述或本领域中已知的任何体外测定或基于细胞的培养测定中，在饱和抗体浓度(例如0.6nm、0.63nm、1.25nm、50nm或150nm)下，相对于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合，那么它阻断分拣蛋白与颗粒体蛋白前体之间的相互作用(例如结合)。
[0408]
本公开的抗分拣蛋白抗体可以在皮体积摩尔浓度范围内的半数最大有效浓度(ec
50
)(例如当在体外测量时)降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合。在某些实施方案中，抗体的ec
50
小于约2.2nm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
小于约1.22nm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
小于约751pm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
是约325pm至约751nm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
是约405pm至约751nm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
是约588pm至约751nm。在某些实施方案中，抗体的ec
50
小于约2.2nm、2.1nm、2.0nm、1.9nm、1.8nm、1.7nm、1.6nm、1.5nm、1.4nm、1.3nm、1.2nm、1.1nm、1.0nm、900pm、800pm、700pm、600pm、500pm、400pm、300pm、200pm、100pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、1pm或0.5pm。
[0409]
在一些实施方案中，抗体的关于降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合的ec
50
小于约或等于约2.2nm、2.1nm、2.0nm、1.9nm、1.8nm、1.7nm、1.6nm、1.5nm、1.4nm、1.3nm、1.2nm、1.1nm、1.0nm、900pm、800pm、700pm、600pm、500pm、475pm、450pm、425pm、400pm、375pm、350pm、325pm、300pm、275pm、250pm、225pm、200pm、175pm、150pm、125pm、100pm、90pm、80pm、70pm、60pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、9pm、8pm、7pm、6pm、5pm、4pm、3pm、2pm、1pm或0.5pm。
[0410]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体的ec
50
是约1.22nm。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体的ec
50
是约588pm。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体的ec
50
是约405pm。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体的ec
50
是约325pm。
[0411]
测量抗体ec
50
值的各种方法在本领域中是已知的，包括例如通过流式细胞计量术。在一些实施方案中，使用表达人分拣蛋白的细胞在体外测量关于降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合的ec
50
。在一些实施方案中，在约4℃的温度下测量ec
50
。在一些实施方案中，在约25℃的温度下测量ec
50
。在一些实施方案中，在约35℃的温度下测量ec
50
。在一些实施方案中，在约37℃的温度下测量ec
50
。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如fab)或呈单价形式的全长抗体测定关于降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合的ec
50
。在一些实施方案中，使用含有显示增强的fc受体结合的恒定区的抗体测定ec
50
。在一些实施方案中，使用含有显示降低的fc受体结合的恒定区的抗体测定关于降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合的ec
50
。
[0412]
在一些实施方案中，相对于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体在降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合方面具有更高的效能。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体以更低的ec
50
(例如如在体外所测量)降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)的ec
50
，本公
开的抗分拣蛋白抗体以低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的ec
50
降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)的ec
50
，本公开的抗分拣蛋白抗体以至少低至约1/1、至少低至约1/1.1、至少低至约1/1.5、至少低至约1/2、至少低至约1/3、至少低至约1/4、至少低至约1/5、至少低至约1/6、至少低至约1/7、至少低至约1/8、至少低至约1/9、至少低至约1/10、至少低至约1/12.5、至少低至约1/15、至少低至约1/17.5、至少低至约1/20、至少低至约1/22.5、至少低至约1/25、至少低至约1/27.5、至少低至约1/30、至少低至约1/50、至少低至约1/100的ec
50
降低颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合。
[0413]
在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体具有至少低至1/1.3的ec
50
。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体具有至少低至1/1.8的ec
50
。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体具有至少低至1/1.9的ec
50
。在一些实施方案中，相比于对照抗体(例如具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体具有至少低至1/2.3的ec
50
。
[0414]
本文所述或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或适合体内模型都可用于测量分拣蛋白与一种或多种分拣蛋白配体之间的相互作用(例如结合)的抑制或降低。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体通过降低分拣蛋白表达(例如通过降低分拣蛋白的细胞表面水平)来抑制或降低分拣蛋白与一种或多种分拣蛋白配体之间的相互作用(例如结合)。在一些实施方案中，利用本文所述或本领域中已知的任何体外测定或基于细胞的培养测定，在饱和抗体浓度下，本公开的抗分拣蛋白抗体使分拣蛋白与一种或多种分拣蛋白配体之间的相互作用(例如结合)抑制或降低至少21％、至少22％、至少23％、至少24％、至少25％、至少26％、至少27％、至少28％、至少29％、至少30％、至少31％、至少32％、至少33％、至少34％、至少35％、至少36％、至少37％、至少38％、至少39％、至少40％、至少41％、至少42％、至少43％、至少44％、至少45％、至少46％、至少47％、至少48％、至少49％、至少50％、至少51％、至少52％、至少53％、至少54％、至少55％、至少56％、至少57％、至少58％、至少59％、至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更多。
[0415]
在一些实施方案中，如通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在50nm igg下以超过约90％，或在150nm igg下以超过约96％来阻断颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合。在一些实施方案中，如通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在50nm igg下使颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合阻断约90.74％。在一些实施方案中，如
通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在150nm igg下使颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合阻断约96.5％。在一些实施方案中，如通过流式细胞计量术所测量，本公开的抗分拣蛋白抗体在150nm igg下使颗粒体蛋白前体与分拣蛋白的结合阻断约96.9％。
[0416]
降低促炎性介体的表达
[0417]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体可在结合在细胞中表达的分拣蛋白之后降低促炎性介体的表达。
[0418]
如本文所用，促炎性介体是直接或间接(例如经由促炎性信号传导通路)涉及于诱导、活化、促进或以其他方式降低炎症应答的机制中的蛋白质。可使用本领域中已知的用于鉴定和表征促炎性介体的任何方法。
[0419]
促炎性介体的实例包括但不限于细胞因子，诸如i型和ii型干扰素、il-6、il12p70、il12p40、il-1β、tnf-α、il-8、crp、il-20家族成员、il-33、lif、osm、cntf、gm-csf、il-11、il-12、il-17、il-18和crp。促炎性介体的其他实例包括但不限于趋化因子，诸如cxcl1、ccl2、ccl3、ccl4和ccl5。
[0420]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体可降低促炎性介体il-6、il12p70、il12p40、il-1β、tnf-α、cxcl1、ccl2、ccl3、ccl4和ccl5的功能性表达和/或分泌。在某些实施方案中，促炎性介体的降低的表达发生在巨噬细胞、树突细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞(langerhans cell)、库普弗细胞(kupffer cell)、t细胞和/或小胶质细胞中。降低的表达可包括但不限于基因表达的降低、转录表达的降低或蛋白质表达的降低。可使用本领域中已知的用于测定基因、转录物(例如mrna)和/或蛋白质表达的任何方法。举例来说，rna印迹分析可用于测定促炎性介体基因表达水平，rt-pcr可用于测定促炎性介体转录的水平，并且蛋白质印迹分析可用于测定促炎性介体蛋白质水平。
[0421]
如本文所用，如果促炎性介体在用分拣蛋白剂诸如本公开的激动剂抗分拣蛋白抗体治疗的受试者的一种或多种细胞中的表达大于在未用所述激动剂抗分拣蛋白抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中表达的相同促炎性介体的表达，那么所述促炎性介体可具有降低的表达。在一些实施方案中，相较于未用抗分拣蛋白抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中的促炎性介体表达，本公开的抗分拣蛋白抗体可使受试者的一种或多种细胞中的促炎性介体表达降低例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，相较于未用抗分拣蛋白抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中的促炎性介体表达，抗分拣蛋白抗体可使受试者的一种或多种细胞中的促炎性介体表达例如至少至少降低至1/1.5、至少降低至1/1.6、至少降低至1/1.7、至少降低至1/1.8、至少降低至1/1.9、至少降低至1/2.0、至少降低至1/2.1、至少降低至1/2.15、至少降低至1/2.2、至少降低至1/2.25、至少降低至1/2.3、至少降低至1/2.35、至少降低至1/2.4、至少降低至1/2.45、至少降低至1/2.5、至少降低至1/2.55、至少降低至1/3.0、至少降低至1/3.5、至少降低至1/4.0、至少降低至1/4.5、至少降低至1/5.0、至少降低至1/5.5、至少降低至1/6.0、至少降低至1/6.5、至少降低至1/7.0、至少降低至1/7.5、至少降低至1/8.0、至少降低至1/8.5、至少降低至1/9.0、至少降低至1/9.5或至少
降低至1/10。
[0422]
在一些实施方案中，根据任何以上实施方案的抗分拣蛋白抗体可单独地或组合地并有如以下章节1-7中所述的任何特征：
[0423]
抗分拣蛋白抗体结合亲和力
[0424]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体具有《1μm、《100nm、《10nm、《1nm、《0.1nm、《0.01nm或《0.001nm(例如10-8
m或更小，例如10-8
m至10-13
m，例如10-9
m至10-13
m)的解离常数(kd)。
[0425]
本公开的抗分拣蛋白抗体可对靶标抗原(例如人分拣蛋白或哺乳动物分拣蛋白)具有纳体积摩尔浓度或甚至皮体积摩尔浓度的亲和力。在某些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对靶标抗原(例如人分拣蛋白或哺乳动物分拣蛋白)的结合亲和力通过解离常数kd来度量。解离常数可通过任何分析技术来测定，包括任何生物化学或生物物理学技术，诸如荧光激活的细胞分选(facs)、流式细胞计量术、酶联免疫吸附测定(elisa)、表面等离子体共振(spr)、生物膜层干涉测量术(参见例如fortebio的octet系统)、中尺度发现(参见例如msd-set)、等温滴定量热法(itc)、差示扫描量热法(dsc)、圆二色性(cd)、停流分析以及比色或荧光蛋白熔解分析；或细胞结合测定。在一些实施方案中，在约25℃的温度下测定分拣蛋白的kd。在一些实施方案中，可利用例如facs或生物膜层干涉测量术测定在4℃或室温下测量解离常数(kd)。
[0426]
在一些实施方案中，在约4℃的温度下测定分拣蛋白的kd。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如fab)或呈单价形式的全长抗体测定kd。在一些实施方案中，使用二价抗体和单体重组分拣蛋白测定kd。
[0427]
在某些实施方案中，使用如本文所述的facs测量本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白、哺乳动物分拣蛋白、或两者的kd。在某些实施方案中，使用如本文所述的生物膜层干涉测量术测量本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白、哺乳动物分拣蛋白、或两者的kd。
[0428]
在一些实施方案中，相比于包含含有seq id no:56的序列的重链可变区和含有seq id no:79的序列的轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有低至多达1/2.5的解离常数(kd)，其中所述kd通过facs来测定。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有的解离常数(kd)在约1.10e-8m至约4.68e-10m的范围内，其中所述kd通过facs来测定，或在约270至约2910pm的范围内，其中所述kd通过生物膜层干涉测量术来测定。
[0429]
在某些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白、哺乳动物分拣蛋白、或两者的kd可小于100nm、小于90nm、小于80nm、小于70nm、小于60nm、小于50nm、小于40nm、小于30nm、小于20nm、小于10nm、小于9nm、小于8nm、小于7nm、小于6nm、小于5nm、小于4nm、小于3nm、小于2nm、小于1nm、小于0.5nm、小于0.1nm、小于0.09nm、小于0.08nm、小于0.07nm、小于0.06nm、小于0.05nm、小于0.04nm、小于0.03nm、小于0.02nm、小于0.01nm、小于0.009nm、小于0.008nm、小于0.007nm、小于0.006nm、小于0.005nm、小于0.004nm、小于0.003nm、小于0.002nm、小于0.001nm或小于0.001nm。
[0430]
抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白、哺乳动物分拣蛋白、或两者的解离常数(kd)可小于10nm、小于9.5nm、小于9nm、小于8.5nm、小于8nm、小于7.5nm、小于7nm、小于6.9nm、小于6.8nm、小于6.7nm、小于6.6nm、小于6.5nm、小于6.4nm、小于6.3nm、小于6.2nm、小于6.1nm、
小于6nm、小于5.5nm、小于5nm、小于4.5nm、小于4nm、小于3.5nm、小于3nm、小于2.5nm、小于2nm、小于1.5nm、小于1nm、小于0.95nm、小于0.9nm、小于0.89nm、小于0.88nm、小于0.87nm、小于0.86nm、小于0.85nm、小于0.84nm、小于0.83nm、小于0.82nm、小于0.81nm、小于0.8nm、小于0.75nm、小于0.7nm、小于0.65nm、小于0.64nm、小于0.63nm、小于0.62nm、小于0.61nm、小于0.6nm、小于0.55nm、小于0.5nm、小于0.45nm、小于0.4nm、小于0.35nm、小于0.3nm、小于0.29nm、小于0.28nm、小于0.27nm、小于0.26nm、小于0.25nm、小于0.24nm、小于0.23nm、小于0.22nm、小于0.21nm、小于0.2nm、小于0.15nm、小于0.1nm、小于0.09nm、小于0.08nm、小于0.07nm、小于0.06nm、小于0.05nm、小于0.04nm、小于0.03nm、小于0.02nm、小于0.01nm、小于0.009nm、小于0.008nm、小于0.007nm、小于0.006nm、小于0.005nm、小于0.004nm、小于0.003nm、小于0.002nm或小于0.001nm。
[0431]
在某些实施方案中，例如当kd通过facs来测定时，抗体对分拣蛋白的解离常数(kd)是约0.560nm至约1.63nm。在某些实施方案中，例如当kd通过生物膜层干涉测量术来测定时，抗体对分拣蛋白的解离常数(kd)是约0.270nm至约2.910nm。在一些实施方案中，抗体对人分拣蛋白、小鼠分拣蛋白、或两者具有在约0.36nm至约0.43nm的范围内，或小于1.02nm的解离常数(kd)。在一些实施方案中，解离常数小于1.02nm。在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有.560nm或更小的解离常数。
[0432]
在一个具体实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有约.560nm的解离常数。在一个具体实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有约.423nm的解离常数。在一个具体实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有约.365nm的解离常数。在一个具体实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有约.344nm的解离常数。在一个具体实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有约.298nm的解离常数。在一个具体实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有约.270nm的解离常数。在另一具体实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有约.260nm的解离常数。
[0433]
在一些实施方案中，相比于对照抗分拣蛋白抗体(例如包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的对照抗分拣蛋白抗体)，本公开的抗分拣蛋白抗体对分拣蛋白具有更低的解离常数(kd)。在一些实施方案中，相比于对照抗分拣蛋白抗体(例如包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的对照抗分拣蛋白抗体)对靶标的kd，本公开的抗分拣蛋白抗体对所述靶标(例如人分拣蛋白)具有低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的kd。在一些实施方案中，相比于对照抗分拣蛋白抗体(例如包含对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的对照抗分拣蛋白抗体)对靶标的kd，本公开的抗分拣蛋白抗体对所述靶标(例如人分拣蛋白)具有至少低至约1/1、至少低至约1/1.1、至少低至约1/1.5、至少低至约1/2、至少低至约1/3、至少低至约1/4、至少低至约1/5、至少低至约1/6、至少低至约1/7、至少低至约1/8、至少低至约1/9、至少低至约1/10、至少低至约1/12.5、至少低至约1/15、至少低至约1/17.5、至少低至约1/20、至少低至约1/22.5、至少低至约1/25、至少低至约1/27.5、至少低至约1/30、至少低至约1/50、至少低至约1/100、至少低至约1/200、至少低至约1/300、至少低至约1/400、至少低至约1/500、至少低至约1/600、至
少低至约1/700、至少低至约1/800、至少低至约1/900或至少低至约1/1000的kd。
[0434]
在一些实施方案中，相比于具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有至少低至1/100的kd。在一些实施方案中，相比于具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有至少低至1/50的kd。在一些实施方案中，相比于具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有至少低至1/10的kd。在一些实施方案中，相比于具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有至少低至1/5的kd。在一些实施方案中，相比于具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有至少低至1/2的kd。
[0435]
在一具体实施方案中，相比于具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有低至约1/2.79的kd。在另一具体实施方案中，相比于具有对应于s-60的重链可变区和轻链可变区的抗分拣蛋白抗体，本公开的抗分拣蛋白抗体对人分拣蛋白具有低至约1/2.05的kd。
[0436]
(2)抗体片段
[0437]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2、fv和scfv片段以及以下描述的其他片段。对于对某些抗体片段的综述，参见hudson等人nat.med.9:129-134(2003)。对于对scfv片段的综述，参见例如wo 93/16185；以及美国专利第5571894和5587458号。对于对包含补救受体结合表位残基以及具有增加的体内半衰期的fab和f(ab')2片段的讨论，参见美国专利第5869046号。
[0438]
双抗体是可为二价的或双特异性的具有两个抗原结合位点的抗体片段。参见例如ep404097；wo 1993/01161；hudson等人nat.med.9:129-134(2003)。三抗体和四抗体也描述于hudson等人nat.med.9:129-134(2003)中。单结构域抗体是包含抗体的重链可变结构域的全部或一部分或轻链可变结构域的全部或一部分的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(参见例如美国专利第6248516号)。
[0439]
可通过各种技术来制备抗体片段，包括但不限于对完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞(例如大肠杆菌(e.coli)或噬菌体)来产生，如本文所描述。
[0440]
在一些实施方案中，抗体片段与第二分拣蛋白抗体和/或与一种或多种特异性结合选自以下的致病蛋白的抗体组合使用：β淀粉样蛋白或其片段、τ蛋白、iapp、α-突触核蛋白(alpha-synuclein)、tdp-43、fus蛋白、朊病毒蛋白、prpsc、亨廷顿蛋白(huntingtin)、降血钙素(calcitonin)、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白(ataxin)、路易体(lewy body)、心房利钠因子、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白ai、血清淀粉样蛋白a、介素(medin)、促乳素(prolactin)、转甲状腺素蛋白(transthyretin)、溶菌酶(lysozyme)、β2微球蛋白(beta 2microglobulin)、凝溶胶蛋白(gelsolin)、角膜上皮素(keratoepithelin)、胱抑素(cystatin)、免疫球蛋白轻链al、s-ibm蛋白、重复相关的非atg(ran)翻译产物、二肽重复(dpr)肽、甘氨酸-丙氨酸(ga)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(gp)重复肽、甘氨酸-精氨酸(gr)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(pa)重复肽、脯氨酸-精氨酸(pr)重复肽、以及它们的任何组合。
[0441]
(3)嵌合和人源化抗体
[0442]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体例如
在美国专利第4816567号中描述。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如源于小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物诸如猴的可变区)和人恒定区。在另一实例中，嵌合抗体是“类别转换”抗体，其中类别或子类已从亲本抗体的类别或子类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
[0443]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体是人源化抗体。通常，非人抗体被人源化来降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在某些实施方案中，人源化抗体在人中是大致上非免疫原性的。在某些实施方案中，人源化抗体与所述人源化抗体由其获得的来自另一物种的抗体具有大致上相同的对靶标的亲和力。参见例如美国专利第5530101、5693761；5693762；以及5585089号。在某些实施方案中，鉴定了抗体可变结构域的可被修饰而不减弱抗原结合结构域的天然亲和力，同时降低它的免疫原性的氨基酸。参见例如美国专利第5766886和5869619号。通常，人源化抗体包含一个或多个其中hvr(或其部分)源于非人抗体，而fr(或其部分)源于人抗体序列的可变结构域。人源化抗体任选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些fr残基被来自非人抗体(例如从其获得hvr残基的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
[0444]
人源化抗体以及制备它们的方法例如在almagro等人front.biosci.13:161 9-1633(2008)中综述，并且例如在美国专利第5821337、7527791、6982321和7087409号中进一步描述。可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最适匹配”方法选择的框架区(参见例如sims等人j.immunol.151:2296(1993))；源于具有特定子组的轻链可变区或重链可变区的人抗体的共有序列的框架区(参见例如carter等人proc.natl.acad.sci.usa 89:4285(1992)；以及presta等人,j.immunol.151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人种系框架区(参见例如almagro和fransson front.biosci.13:1619-1633(2008))；以及由筛选fr文库获得的框架区(参见例如baca等人j.biol.chem.272:10678-10684(1997)以及rosok等人j.biol.chem.271:22611-22618(1996))。
[0445]
(4)人抗体
[0446]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体是人抗体。人抗体可使用本领域中已知的各种技术来产生。人抗体一般地描述于van dijk等人curr.opin.pharmacol.5:368-74(2001)以及lonberg curr.opin.immunol.20:450-459(2008)中。
[0447]
可通过将免疫原施用至已被修饰来应答于抗原激发而产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体的转基因动物来制备人抗体。可用人ig基因座的大型片段对在小鼠抗体产生方面有缺陷的小鼠品系进行工程改造，以期望此类小鼠将在不存在小鼠抗体下产生人抗体。大型人ig片段可保留广大的可变基因多样性以及对抗体产生和表达的适当调控。通过利用小鼠机构进行抗体多样化和选择以及缺乏对人蛋白质的免疫耐受性，在这些小鼠品系中再现的人抗体谱系可产生针对包括人抗原的任何目标抗原的高亲和力完全人抗体。使用杂交瘤技术，可产生和选择具有所需特异性的抗原特异性人mab。某些示例性方法描述于美国专利第5545807号、ep 546073和ep 546073中。还参见例如描述xenomousetm技术的美国专利第6075181和6150584号；描述技术的美国专利第5770429号；描述k-m技术的美国专利第7041870号以及描述技术的美国专利申请公布第us2007/0061900号。来自通过此类动物产生的完整抗体的人可变区可例如通过
与不同人恒定区组合来进一步修饰。
[0448]
人抗体还可通过基于杂交瘤的方法制备。已描述用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系。(参见例如kozbor j.immunol.133:3001(1984)以及boerner等人j.immunol.147:86(1991))。通过人b细胞杂交瘤技术产生的人抗体还描述于li等人proc.natl.acad.sci.usa,103:3557-3562(2006)中。额外方法包括例如在美国专利第7189826号(描述从杂交瘤细胞系产生单克隆人igm抗体)中描述的那些。人杂交瘤技术(三源杂交瘤技术)还描述于vollmers等人histology and histopathology 20(3):927-937(2005)以及vollmers等人methods and findings in experimental and clinical pharmacology 27(3):185-91(2005)中。还可通过分离选自人源性噬菌体展示文库的fv克隆可变结构域序列来产生人抗体。此类可变结构域序列可接着与所需人恒定结构域组合。以下描述用于从抗体文库选择人抗体的技术。
[0449]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体是通过体外方法和/或筛选组合文库中具有一种或多种所需活性的抗体来分离的人抗体。适合实例包括但不限于噬菌体展示(cat、morphosys、dyax、biosite/medarex、xoma、symphogen、alexion(先前是proliferon)、affimed)、核糖体展示(cat)、基于酵母的平台(adimab)等。在某些噬菌体展示方法中，通过聚合酶链式反应(pcr)来分别克隆vh和vl基因的谱系，并且随机重组于噬菌体文库中，可接着筛选所述文库中的抗原结合噬菌体，如winter等人ann.rev.immunol.12:433-455(1994)中所述。举例来说，用于产生噬菌体展示文库以及筛选此类文库中具有所需结合特征的抗体的多种方法在本领域中是已知的。还参见sidhu等人j.mol.biol.338(2):299-310,2004；lee等人j.mol.biol.340(5):1073-1093,2004；fellouse proc.natl.acad.sci.usa 101(34):12467-12472(2004)；以及lee等人j.immunol.methods 284(-2):1 19-132(2004)。噬菌体通常展示呈单链fv(scfv)片段形式或呈fab片段形式的抗体片段。来自经免疫来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体而无需构建杂交瘤。或者，可克隆(例如从人克隆)原初谱系以提供单一来源的针对广泛范围的非自身抗原以及自身抗原的抗体而不进行任何免疫，如由griffiths等人embo j.12:725-734(1993)所述。最后，原初文库还可通过以下方式来合成制备：从干细胞克隆未重排v基因区段，以及使用包含随机序列的pcr引物来编码高变hvr3区并且完成体外重排，如由hoogenboom等人j.mol.biol.,227:381-388,1992所述。描述人抗体噬菌体文库的专利公布包括例如：美国专利第5750373号以及美国专利公布第2007/0292936和2009/0002360号。从人抗体文库分离的抗体在本文中被视为人抗体或人抗体片段。
[0450]
(5)包括fc区的恒定区
[0451]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体包含fc。在一些实施方案中，fc是人igg1、igg2、igg3和/或igg4同种型。在一些实施方案中，抗体属于igg类别、igm类别或iga类别。
[0452]
在本文提供的任何抗体的某些实施方案中，抗体具有igg2同种型。在一些实施方案中，抗体含有人igg2恒定区。在一些实施方案中，人igg2恒定区包括fc区。在一些实施方案中，抗体诱导一种或多种分拣蛋白活性，或独立于与fc受体的结合。在一些实施方案中，抗体结合抑制性fc受体。在某些实施方案中，抑制性fc受体是抑制性fc-γ受体iib(fcγiib)。
[0453]
在本文提供的任何抗体的某些实施方案中，抗体具有igg1同种型。在一些实施方案中，抗体含有小鼠igg1恒定区。在一些实施方案中，抗体含有人igg1恒定区。在一些实施方案中，人igg1恒定区包括fc区。在一些实施方案中，抗体结合抑制性fc受体。在某些实施方案中，抑制性fc受体是抑制性fc-γ受体iib(fcγiib)。
[0454]
在本文提供的任何抗体的某些实施方案中，抗体具有igg4同种型。在一些实施方案中，抗体含有人igg4恒定区。在一些实施方案中，人igg4恒定区包括fc区。在一些实施方案中，抗体结合抑制性fc受体。在某些实施方案中，抑制性fc受体是抑制性fc-γ受体iib(fcγiib)。
[0455]
在本文提供的任何抗体的某些实施方案中，抗体具有杂合igg2/4同种型。在一些实施方案中，抗体包括包含人igg2的根据eu编号的氨基酸118至260和人igg4的根据eu编号的氨基酸261-447的氨基酸序列(wo 1997/11971；wo 2007/106585)。
[0456]
在一些实施方案中，相较于包含不含有氨基酸取代的fc区的相应抗体，fc区在不活化补体的情况下增加聚簇。在一些实施方案中，抗体诱导由抗体特异性结合的靶标的一种或多种活性。在一些实施方案中，抗体结合分拣蛋白。
[0457]
还可合乎需要的是修饰本公开的抗分拣蛋白抗体以改变抗体的效应子功能和/或增加抗体的血清半衰期。举例来说，可修饰或突变恒定区上的fc受体结合位点以移除或降低对某些fc受体诸如fcγri、fcγrii和/或fcγriii的结合亲和力以降低抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。在一些实施方案中，通过移除抗体的fc区的n-糖基化(例如在igg的ch2结构域中)来损害效应子功能。在一些实施方案中，如wo 99/58572以及armour等人molecular immunology 40:585-593(2003)；reddy等人j.immunology 164:1925-1933(2000)中所述，通过修饰人igg的区域诸如233-236、297和/或327-331来损害效应子功能。在其他实施方案中，还可合乎需要的是修饰本公开的抗分拣蛋白抗体以改变效应子功能来增加对含有itim的fcgriib(cd32b)的结合选择性，以增加分拣蛋白抗体在邻近细胞上的聚簇，而不活化体液应答，包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性和抗体依赖性细胞性吞噬。
[0458]
为增加抗体的血清半衰期，可将补救受体结合表位并入至抗体(尤其是抗体片段)中，例如如美国专利5739277中所述。如本文所用，术语“补救受体结合表位”是指igg分子(例如igg1、igg2、igg3或igg4)的fc区的负责增加所述igg分子的体内血清半衰期的表位。其他氨基酸序列修饰。
[0459]
(6)多特异性抗体
[0460]
多特异性抗体是对至少两个不同表位具有结合特异性的抗体，所述至少两个不同表位包括相同或另一多肽(例如一种或多种本公开的分拣蛋白多肽)上的那些。在一些实施方案中，多特异性抗体可为双特异性抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体可为三特异性抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体可为四特异性抗体。此类抗体可源于全长抗体或抗体片段(例如f(ab’)2双特异性抗体)。在一些实施方案中，多特异性抗体包含结合分拣蛋白上的第一位点的第一抗原结合区，并且包含结合分拣蛋白上的第二位点的第二抗原结合区。在一些实施方案中，多特异性抗体包含结合分拣蛋白的第一抗原结合区和结合第二多肽的第二抗原结合区。
[0461]
本文提供了多特异性抗体，所述多特异性抗体包含第一抗原结合区，其中所述第一抗原结合区包含本文所述的抗体的六个hvr，所述第一抗原结合区结合分拣蛋白，以及第
二抗原结合区，所述第二抗原结合区结合第二多肽。在一些实施方案中，第一抗原结合区包含本文所述的抗体的vh或v
l
。
[0462]
在任何多特异性抗体的一些实施方案中，第二多肽是a)有助于穿过血脑屏障进行运输的抗原；(b)选自以下的有助于穿过血脑屏障进行运输的抗原：转铁蛋白受体(tr)、胰岛素受体(hir)、胰岛素样生长因子受体(igfr)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(lpr-1和lpr-2)、白喉毒素受体、crm197、美洲驼单结构域抗体、tmem 30(a)、蛋白质转导结构域、tat、syn-b、穿透蛋白(penetratin)、多聚精氨酸肽、血管肽素(angiopep)肽和ang1005；(c)选自以下的致病蛋白：β淀粉样蛋白、寡聚β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白斑块、淀粉样前体蛋白或其片段、τ蛋白、iapp、α-突触核蛋白、tdp-43、fus蛋白、c9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9ran蛋白、朊病毒蛋白、prpsc、亨廷顿蛋白、降血钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白ai、血清淀粉样蛋白a、介素、促乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、胱抑素、免疫球蛋白轻链al、s-ibm蛋白、重复相关的非atg(ran)翻译产物、二肽重复(dpr)肽、甘氨酸-丙氨酸(ga)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(gp)重复肽、甘氨酸-精氨酸(gr)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(pa)重复肽、泛素和脯氨酸-精氨酸(pr)重复肽；(d)在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或蛋白质选自cd40、ox40、icos、cd28、cd137/4-1bb、cd27、gitr、pd-l1、ctla-4、pd-l2、pd-1、b7-h3、b7-h4、hvem、btla、kir、gal9、tim3、a2ar、lag-3和磷脂酰丝氨酸；和/或(e)在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂，以及它们的任何组合。
[0463]
有助于穿过血脑屏障进行运输的众多抗原在本领域中是已知的(参见例如gabathuler r.neurobiol.dis.37:48-57(2010))。此类第二抗原包括但不限于转铁蛋白受体(tr)；胰岛素受体(hir)；胰岛素样生长因子受体(igfr)；低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(lpr-1和lpr-2)；白喉毒素受体，包括crm197(白喉毒素的一种无毒突变体)；美洲驼单结构域抗体诸如tmem 30(a)(翻转酶)；蛋白质转导结构域诸如tat、syn-b或穿透蛋白；多聚精氨酸或总体上带正电荷的肽；血管肽素肽诸如ang1005(参见例如gabathuler,2010)；以及在血脑屏障内皮细胞上富集的其他细胞表面蛋白(参见例如daneman等人plos one 5(10):e13741(2010))。
[0464]
多价抗体可识别分拣蛋白抗原以及但不限于额外抗原aβ肽抗原、或α-突触核蛋白抗原、或τ蛋白抗原、或tdp-43蛋白抗原、或朊病毒蛋白抗原、或亨廷顿蛋白抗原、或ran翻译产物抗原(包括由甘氨酸-丙氨酸(ga)、甘氨酸-脯氨酸(gp)、甘氨酸-精氨酸(gr)、脯氨酸-丙氨酸(pa)或脯氨酸-精氨酸(pr)组成的二肽重复(dpr肽))、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体。转铁蛋白受体或有助于抗体穿过血脑屏障进行转移的任何其他抗原。在一些实施方案中，第二多肽是转铁蛋白。在一些实施方案中，第二多肽是τ蛋白。在一些实施方案中，第二多肽是aβ。在一些实施方案中，第二多肽是trem2。在一些实施方案中，第二多肽是α-突触核蛋白。
[0465]
多价抗体含有至少一个多肽链(并且优选是两个多肽链)，其中所述一个或多个多肽链包含两个或更多个可变结构域。举例来说，一个或多个多肽链可包含vd1-(x1)
n-vd2-(x2)
n-fc，其中vd1是第一可变结构域，vd2是第二可变结构域，fc是fc区的一个多肽链，x1
和x2代表氨基酸或多肽，并且n是0或1。类似地，一个或多个多肽链可包含v
h-ch1-柔性接头-v
h-ch1-fc区链；或v
h-ch1-v
h-ch1-fc区链。本文中的多价抗体优选地还包含至少两个(并且优选是四个)轻链可变结构域多肽。本文中的多价抗体可例如包含约两个至约八个轻链可变结构域多肽。此处考虑的轻链可变结构域多肽包含轻链可变结构域，并且任选地还包含cl结构域。
[0466]
用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于重组共同表达具有不同特异性的两对免疫球蛋白重链-轻链(参见milstein和cuello nature 305:537(1983)，wo 93/08829，以及traunecker等人embo j.10:3655(1991))以及“孔中钮”工程改造(参见例如美国专利第5731168号)。还参见wo 2013/026833(crossmab)。多特异性抗体还可通过以下方式来制备：工程改造静电牵引效应以制备抗体fc异二聚分子(wo 2009/089004a1)；交联两个或更多个抗体(参见例如美国专利第4676980号)；使用亮氨酸；使用“双抗体”技术来制备双特异性抗体片段(参见例如hollinger等人proc.natl.acad.sci.usa 90:6444-6448(1993))；以及使用单链fv(sfv)二聚体(参见例如gruber等人j.immunol.152:5368(1994))；和如例如在tutt等人j.immunol.147:60(1991)中所述来制备三特异性抗体。
[0467]
本文还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的经工程改造抗体，包括“章鱼抗体”(参见例如us 2006/0025576)。本文中的抗体还包括包含结合多种分拣蛋白的抗原结合位点的“双重作用性fab”或“daf”(参见例如us 2008/0069820)。
[0468]
(7)具有改善的稳定性的抗体
[0469]
还考虑本公开的抗分拣蛋白抗体或其抗体片段的用以改善在制造、储存和体内施用期间的稳定性的氨基酸序列修饰。举例来说，可合乎需要的是降低通过包括但不限于氧化和脱酰胺的多种途径对本公开的抗体或抗体片段的降解。通过将适当核苷酸变化引入至编码抗体或抗体片段的核酸中或通过肽合成来制备抗体或抗体片段的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内的残基缺失和/或插入和/或取代。可进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终构建体，前提是最终构建体具有所需特征(即对降解的易感性降低)。
[0470]
在一些实施方案中，本公开的抗分拣蛋白抗体的hvr-l1区中的天冬酰胺(n33)位点可易经受借助于脱酰胺达成的降解。在某些实施方案中，s-60-15的hvr-l1区(seq id no:8)中的天冬酰胺(n33)位点可易经受脱酰胺。在脱酰胺后，s-60-15的hvr-l1区中的天冬酰胺(n33)位点产生asn至asp/异asp变化。在某些实施方案中，s-60-15的hvr-l1区中的天冬酰胺(n33)位点可被取代以阻止或降低脱酰胺。s-60-15的在hvr-l1区的天冬酰胺(n33)位点中具有氨基酸取代的非限制性示例性氨基酸序列变体包括s-60-15.1[n33t]、s-60-15.2[n33s]、s-60-15.3[n33g]、s-60-15.4[n33r]、s-60-15.5[n33d]、s-60-15.6[n33h]、s-60-15.7[n33k]、s-60-15.8[n33q]、s-60-15.9[n33y]、s-60-15.10[n33e]、s-60-15.11[n33w]、s-60-15.12[n33f]、s-60-15.13[n33i]、s-60-15.14[n33v]、s-60-15.15[n33a]、s-60-15.16[n33m]或s-60-15.17[n33l]。
[0471]
(8)抗体变体
[0472]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，考虑抗体的氨基酸序列变体。举例来说，可合乎需要的是改善抗体的结合亲和力和/或其他生物性质。
[0473]
取代、插入和缺失变体
[0474]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。可通过将适当修饰引入至编码抗体的核苷酸序列中或通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内的残基缺失和/或插入和/或取代。
[0475]
表1：氨基酸取代
[0476][0477][0478]
通过以下方式实现抗体的生物性质的实质性改变：选择在它们对维持(a)在取代区域中多肽主链的结构，例如呈片层或螺旋构象，(b)在靶标位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积的作用方面显著不同的取代。天然存在的残基被基于共同侧链性质而分成各组：
[0479]
(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
[0480]
(2)中性亲水性：cys、ser、thr、asn、gln；
[0481]
(3)酸性：asp、glu；
[0482]
(4)碱性：his、lys、arg；
[0483]
(5)影响链定向的残基：gly、pro；以及
[0484]
(6)芳族：trp、tyr、phe。
[0485]
举例来说，非保守性取代可涉及这些类别中的一者的成员更换成来自另一类别的成员。此类取代残基可例如引入至人抗体的与非人抗体同源的区域中，或分子的非同源区域中。
[0486]
在对本文所述的多肽或抗体进行变化时，根据某些实施方案，可考虑氨基酸的亲疏水性指数。已基于每种氨基酸的疏水性和电荷特征对它指定了亲疏水性指数。它们是：异亮氨酸( 4.5)；缬氨酸( 4.2)；亮氨酸( 3.8)；苯丙氨酸( 2.8)；半胱氨酸/胱氨酸( 2.5)；甲硫氨酸( 1.9)；丙氨酸( 1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；以及精氨酸(-4.5)。
[0487]
本领域中了解亲疏水性氨基酸指数在对蛋白质赋予相互作用性生物功能方面的重要性。kyte等人j.mol.biol.,157:105-131(1982)。已知的是某些氨基酸可被取代成具有类似亲疏水性指数或评分的其他氨基酸，并且仍然保留类似生物活性。在基于亲疏水性指数进行变化时，在某些实施方案中，包括亲疏水性指数在
±
2内的氨基酸的取代。在某些实施方案中，包括亲疏水性指数在
±
1内的氨基酸的取代，并且在某些实施方案中，包括亲疏水性指数在
±
0.5内的氨基酸的取代。
[0488]
本领域中还应了解，类似氨基酸的取代可基于亲水性来有效进行，特别是当由此产生的生物功能性蛋白质或肽意图用于免疫学实施方案中时，如同本案中一样。在某些实施方案中，蛋白质的如受它的邻近氨基酸的亲水性支配的最大局部平均亲水性与它的免疫原性和抗原性，即与蛋白质的生物性质相关联。
[0489]
以下亲水性值已指定给这些氨基酸残基：精氨酸( 3.0)；赖氨酸( 3.0
±
1)；天冬氨酸( 3.0
±
1)；谷氨酸( 3.0
±
1)；丝氨酸( 0.3)；天冬酰胺( 0.2)；谷氨酰胺( 0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5
±
1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)以及色氨酸(-3.4)。在基于类似亲水性值进行变化时，在某些实施方案中，包括亲水性值在
±
2内的氨基酸的取代，在某些实施方案中，包括亲水性值在
±
1内的氨基酸的取代，并且在某些实施方案中，包括亲水性值在
±
0.5内的氨基酸的取代。还可基于亲水性从一级氨基酸序列鉴定表位。这些区域也被称为“表位核心区域”。
[0490]
在某些实施方案中，取代、插入或缺失可发生在一个或多个hvr内，只要此类改变不实质上降低抗体结合抗原的能力即可。举例来说，可在hvr中进行不实质上降低结合亲和力的保守性改变(例如如本文提供的保守性取代)。此类改变可例如在hvr中的抗原接触残基外部。在以上提供的变异vh和vl序列的某些实施方案中，每个hvr是未改变的，或含有至多一个、两个或三个氨基酸取代。
[0491]
氨基酸序列插入物包括在长度方面在一个残基至包含一百个或更多个残基的多肽的范围内的氨基末端和/或羧基末端融合物，以及具有单一或多个氨基酸残基的序列内插入物。末端插入物的实例包括具有n末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他插入性变体包括抗体与酶(例如用于adept)或增加抗体的血清半衰期的多肽的n末端或c末端融合
物。
[0492]
不涉及维持抗体的适当构象的任何半胱氨酸残基都也可通常用丝氨酸取代，以改善分子的氧化稳定性，并且防止异常交联。相反，可将一个或多个半胱氨酸键添加至抗体中以改善它的稳定性(特别是当抗体是抗体片段诸如fv片段时)。
[0493]
(ii)糖基化变体
[0494]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体被改变以增加或降低抗体被糖基化的程度。可方便地通过改变氨基酸序列以致产生或移除一个或多个糖基化位点来实现对抗体添加或缺失糖基化位点。
[0495]
抗体的糖基化通常是n连接的或o连接的。n连接是指碳水化物部分连接于天冬酰胺残基的侧链。其中x是除脯氨酸之外的任何氨基酸的三肽序列天冬酰胺-x-丝氨酸和天冬酰胺-x-苏氨酸是碳水化物部分酶促连接于天冬酰胺侧链的识别序列。因此，多肽中存在这些三肽序列中的任一者都会产生潜在糖基化位点。o连接的糖基化是指糖n-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一者连接于羟基氨基酸，最通常是丝氨酸或苏氨酸，但还可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
[0496]
方便地通过改变氨基酸序列以致它含有上述三肽序列中的一者或多者来实现对抗体添加糖基化位点(对于n连接的糖基化位点)。改变还可通过对原始抗体的序列添加或取代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来进行(对于o连接的糖基化位点)。
[0497]
当抗体包含fc区时，可改变与其连接的碳水化合物。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分支双触角寡糖，其通常通过n键联来连接于fc区的ch2结构域的根据kabat编号的asn297。寡糖可包括各种碳水化合物，例如甘露糖、n-乙酰基葡糖胺(glcnac)、半乳糖和唾液酸、以及连接于双触角寡糖结构的“主干”中的glcnac的海藻糖。在一些实施方案中，可对本发明的抗体中的寡糖进行修饰以产生具有某些改善的性质的抗体变体。
[0498]
在一个实施方案中，提供了具有缺乏连接(直接或间接)于fc区的海藻糖的碳水化合物结构的抗体变体。参见例如美国专利公布第2003/0157108和2004/0093621号。与“去海藻糖基化”或“海藻糖缺乏性”抗体变体相关的出版物的实例包括：us 2003/0157108；us 2003/0115614；us 2002/0164328；us 2004/0093621；us 2004/0132140；us 2004/0110704；us 2004/0110282；us 2004/0109865；okazaki等人j.mol.biol.336:1239-1249(2004)；yamane-ohnuki等人biotech.bioeng.87:614(2004)。能够产生去海藻糖基化抗体的细胞系的实例包括缺乏蛋白质海藻糖基化作用的led 3cho细胞(ripka等人arch.biochem.biophys.249:533-545(1986)；us 2003/0157108)以及剔除细胞系，诸如α-1,6-海藻糖基转移酶基因fut8剔除cho细胞(参见例如yamane-ohnuki等人biotech.bioeng.87:614(2004)以及kanda等人biotechnol.bioeng.94(4):680-688(2006))。
[0499]
(iii)经修饰恒定区
[0500]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体fc是抗体fc同种型和/或修饰。在一些实施方案中，抗体fc同种型和/或修饰能够结合fcγ受体。
[0501]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，经修饰抗体fc是igg1经修饰fc。在一些实施方案中，igg1经修饰fc包含一个或多个修饰。举例来说，在一些实施方案中，igg1经修饰fc包含一个或多个氨基酸取代(例如相对于同一同种型的野生型fc区)。在一些实施方
案中，一个或多个氨基酸取代选自n297a(bolt s等人(1993)eur j immunol 23:403-411)、d265a(shields等人(2001)r.j.biol.chem.276,6591
–
6604)、l234a、l235a(hutchins等人(1995)proc natl acad sci usa,92:11980-11984；alegre等人,(1994)transplantation 57:1537-1543.31；xu等人,(2000)cell immunol,200:16-26)、g237a(alegre等人(1994)transplantation 57:1537-1543.31；xu等人(2000)cell immunol,200:16-26)、c226s、c229s、e233p、l234v、l234f、l235e(mcearchern等人,(2007)blood,109:1185-1192)、p331s(sazinsky等人,(2008)proc natl acad sci usa 2008,105:20167-20172)、s267e、l328f、a330l、m252y、s254t和/或t256e，其中氨基酸位置根据eu编号惯例。在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，抗体是igg1同种型，并且fc区在位置l234a、l235a和p331s处包含氨基酸取代，其中残基位置的编号根据eu编号。
[0502]
在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的n297a突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的d265a和n297a突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的d270a突变。在一些实施方案中，igg1经修饰fc包含根据eu编号的l234a和l235a突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的l234a和g237a突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的l234a、l235a和g237a突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的p238d、l328e、e233、g237d、h268d、p271g和a330r突变中的一者或多者(包括全部)。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的s267e/l328f突变中的一者或多者。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的p238d、l328e、e233d、g237d、h268d、p271g和a330r突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的p238d、l328e、g237d、h268d、p271g和a330r突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的p238d、s267e、l328e、e233d、g237d、h268d、p271g和a330r突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的p238d、s267e、l328e、g237d、h268d、p271g和a330r突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的c226s、c229s、e233p、l234v和l235a突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的l234f、l235e和p331s突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的s267e和l328f突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的s267e突变。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包含用具有κ轻链的igg2的ch1和铰链区(igg2的根据eu编号的氨基酸118-230)对igg1的恒定重链1(ch1)和铰链区的取代。
[0503]
在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，fc包括两个或更多个氨基酸取代，相较于具有不包括所述两个或更多个氨基酸取代的fc区的相应抗体，所述两个或更多个氨基酸取代在不活化补体的情况下增加抗体聚簇。因此，在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，igg1经修饰fc是包含fc区的抗体，其中根据eu编号，所述抗体包含在位置e430g处的氨基酸取代以及fc区中的在选自以下的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：l234f、l235a、l235e、s267e、k322a、l328f、a330s、p331s、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，根据eu编号，igg1经修饰fc在位置e430g、l243a、l235a和p331s处包含氨基酸取代。在一些实施方案中，根据eu编号，igg1经修饰fc在位置e430g和p331s处包含氨基酸取代。在一些实施方案中，根据eu编号，igg1经修饰fc在位置e430g和k322a处包含氨基酸取代。在一些实施方案
中，根据eu编号，igg1经修饰fc在位置e430g、a330s和p331s处包含氨基酸取代。在一些实施方案中，根据eu编号，igg1经修饰fc在位置e430g、k322a、a330s和p331s处包含氨基酸取代。在一些实施方案中，根据eu编号，igg1经修饰fc在位置e430g、k322a和a330s处包含氨基酸取代。在一些实施方案中，根据eu编号，igg1经修饰fc在位置e430g、k322a和p331s处包含氨基酸取代。
[0504]
在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，igg1经修饰fc还可在本文中包含可与根据eu编号惯例的a330l突变(lazar等人proc natl acad sci usa,103:4005-4010(2006))，或l234f、l235e和/或p331s突变(sazinsky等人proc natl acad sci usa,105:20167-20172(2008))中的一者或多者组合，以消除补体活化。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，igg1经修饰fc还可包含根据eu编号的a330l、a330s、l234f、l235e和/或p331s中的一者或多者。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，igg1经修饰fc还可包含一个或多个突变以增强人血清中的抗体半衰期(例如根据eu编号惯例的m252y、s254t和t256e突变中的一者或多者(包括全部))。在任何igg1经修饰fc的一些实施方案中，igg1经修饰fc还可包含根据eu编号的e430g、e430s、e430f、e430t、e345k、e345q、e345r、e345y、s440y和/或s440w中的一者或多者。
[0505]
本公开的其他方面涉及具有经修饰恒定区(即fc区)的抗体。如果被工程改造来消除fcgr结合，那么依赖于与fcgr受体的结合来活化所靶向受体的抗体可能丧失它的激动剂活性(参见例如wilson等人cancer cell 19:101-113(2011)；armour等人immunology 40:585-593(2003)；以及white等人cancer cell 27:138-148(2015))。因此，认为当具有恰当表位特异性的本公开的抗分拣蛋白抗体具有来自人igg2同种型(ch1和铰链区)的fc结构域或能够优先结合抑制性fcgriib r受体的另一类型的fc结构域或其变化形式时，所述抗体可活化靶标抗原而具有最小副作用。
[0506]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，经修饰抗体fc是igg2经修饰fc。在一些实施方案中，igg2经修饰fc包含一个或多个修饰。举例来说，在一些实施方案中，igg2经修饰fc包含一个或多个氨基酸取代(例如相对于同一同种型的野生型fc区)。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自根据eu编号惯例的v234a(alegre等人transplantation 57:1537-1543(1994)；xu等人cell immunol,200:16-26(2000))；g237a(cole等人transplantation,68:563-571(1999))；h268q、v309l、a330s、p331s(us 2007/0148167；armour等人eur j immunol 29:2613-2624(1999)；armour等人the haematology journal 1(增刊1):27(2000)；armour等人the haematology journal 1(增刊1):27(2000))、c219s和/或c220s(white等人cancer cell 27,138-148(2015))；s267e、l328f(chu等人mol immunol,45:3926-3933(2008))；以及m252y、s254t和/或t256e。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置v234a和g237a处包含氨基酸取代。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置c219s或c220s处包含氨基酸取代。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置a330s和p331s处包含氨基酸取代。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置s267e和l328f处包含氨基酸取代。
[0507]
在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号惯例的c127s氨基酸取代(white等人,(2015)cancer cell 27,138-148；lightle等人protein sci.19:753-762
(2010)；以及wo 2008/079246)。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，抗体具有含κ轻链恒定结构域的igg2同种型，所述κ轻链恒定结构域包含根据eu编号惯例的c214s氨基酸取代(white等人cancer cell 27:138-148(2015)；lightle等人protein sci.19:753-762(2010)；以及wo 2008/079246)。
[0508]
在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号惯例的c220s氨基酸取代。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，抗体具有含κ轻链恒定结构域的igg2同种型，所述κ轻链恒定结构域包含根据eu编号惯例的c214s氨基酸取代。
[0509]
在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号惯例的c219s氨基酸取代。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，抗体具有含κ轻链恒定结构域的igg2同种型，所述κ轻链恒定结构域包含根据eu编号惯例的c214s氨基酸取代。
[0510]
在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，fc包括igg2同种型重链恒定结构域1(ch1)和铰链区(white等人cancer cell 27:138-148(2015))。在任何igg2经修饰fc的某些实施方案中，igg2同种型ch1和铰链区包含根据eu编号的118-230的氨基酸序列。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，抗体fc区包含根据eu编号惯例的s267e氨基酸取代、l328f氨基酸取代、或两者，和/或n297a或n297q氨基酸取代。
[0511]
在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc还在位置e430g、e430s、e430f、e430t、e345k、e345q、e345r、e345y、s440y和s440w处包含一个或多个氨基酸取代。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，fc还可包含一个或多个突变以增强人血清中的抗体半衰期(例如根据eu编号惯例的m252y、s254t和t256e突变中的一者或多者(包括全部))。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，fc还可包含a330s和p331s。
[0512]
在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，fc是igg2/4杂合fc。在一些实施方案中，igg2/4杂合fc包含igg2 aa 118至260和igg4 aa 261至447。在任何igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置h268q、v309l、a330s和p331s处包含一个或多个氨基酸取代。
[0513]
在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，fc包含选自根据eu编号的a330l、l234f；l235e或p331s；以及它们的任何组合的一个或多个额外氨基酸取代。
[0514]
在任何igg1和/或igg2经修饰fc的某些实施方案中，根据eu编号，fc在选自c127s、l234a、l234f、l235a、l235e、s267e、k322a、l328f、a330s、p331s、e345r、e430g、s440y、以及它们的任何组合的残基位置处包含一个或多个氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g、l243a、l235a和p331s处包含氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g和p331s处包含氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g和k322a处包含氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g、a330s和p331s处包含氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g、k322a、a330s和p331s处包含氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g、k322a和a330s处包含氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g、k322a和p331s处包含氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置s267e和l328f处包含氨基酸取代。在任
何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置c127s处包含氨基酸取代。在任何igg1和/或igg2经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e345r、e430g和s440y处包含氨基酸取代。
[0515]
在本文提供的任何抗体的一些实施方案中，经修饰抗体fc是igg4经修饰fc。在一些实施方案中，igg4经修饰fc包含一个或多个修饰。举例来说，在一些实施方案中，igg4经修饰fc包含一个或多个氨基酸取代(例如相对于同一同种型的野生型fc区)。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自根据eu编号惯例的l235a、g237a、s229p、l236e(reddy等人j immunol 164:1925-1933(2000))、s267e、e318a、l328f、m252y、s254t和/或t256e。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，fc还可包含根据eu编号惯例的l235a、g237a和e318a。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，fc还可包含根据eu编号惯例的s228p和l235e。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，igg4经修饰fc还可包含根据eu编号惯例的s267e和l328f。
[0516]
在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，igg4经修饰fc包含可与根据eu编号惯例的s228p突变(angal等人mol immunol.30:105-108(1993))和/或与(peters等人j biol chem.287(29):24525-33(2012))中所述的一个或多个突变组合以增强抗体稳定化。
[0517]
在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，igg4经修饰fc还可包含一个或多个突变以增强人血清中的抗体半衰期(例如根据eu编号惯例的m252y、s254t和t256e突变中的一者或多者(包括全部))。
[0518]
在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，fc包含根据eu编号的l235e。在任何igg4经修饰fc的某些实施方案中，根据eu编号，fc在选自c127s、f234a、l235a、l235e、s267e、k322a、l328f、e345r、e430g、s440y、以及它们的任何组合的残基位置处包含一个或多个氨基酸取代。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g、l243a、l235a和p331s处包含氨基酸取代。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g和p331s处包含氨基酸取代。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430g和k322a处包含氨基酸取代。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e430处包含氨基酸取代。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc区在位置e430g和k322a处包含氨基酸取代。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置s267e和l328f处包含氨基酸取代。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置c127s处包含氨基酸取代。在任何igg4经修饰fc的一些实施方案中，根据eu编号，fc在位置e345r、e430g和s440y处包含氨基酸取代。
[0519]
核酸、载体和宿主细胞
[0520]
可使用例如如美国专利第4816567号中所述的重组方法和组合物来产生本公开的抗分拣蛋白抗体。在一些实施方案中，提供了具有编码本公开的任何抗分拣蛋白抗体的核苷酸序列的经分离核酸。此类核酸可编码包含抗分拣蛋白抗体的v
l
的氨基酸序列和/或包含抗分拣蛋白抗体的vh的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。在一些实施方案中，提供了一种或多种包含此类核酸的载体(例如表达载体)。在一些实施方案中，还提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞包含(例如已转导有)：(1)包含编码包含抗体的v
l
的氨基酸序列和包含抗体的vh的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)包含编码包含抗体的v
l
的氨基酸序列的核酸的第一载体以及包含编码包含抗体的vh的氨基酸序列的核酸
的第二载体。在一些实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(cho)细胞或淋巴系细胞(例如y0、ns0、sp20细胞)。本公开的宿主细胞还包括但不限于经分离细胞、体外培养的细胞和离体培养的细胞。
[0521]
提供了制备本公开的抗分拣蛋白抗体的方法。在一些实施方案中，方法包括在适于表达抗体的条件下培养包含编码抗分拣蛋白抗体的核酸的本公开的宿主细胞。在一些实施方案中，随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
[0522]
对于重组产生本公开的抗分拣蛋白抗体，将编码所述抗分拣蛋白抗体的核酸分离并插入至一个或多个载体中以进一步在宿主细胞中克隆和/或表达。此核酸可容易地使用常规程序(例如通过使用能够特异性结合编码抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)来分离和测序。
[0523]
包含编码本文所述的任何本公开的抗分拣蛋白抗体或其细胞表面表达的片段或多肽(包括抗体)的核酸序列的适合载体包括但不限于克隆载体和表达载体。适合克隆载体可根据标准技术来构建，或可选自本领域中可用的许多克隆载体。尽管所选克隆载体可根据意图使用的宿主细胞而变化，但有用的克隆载体通常具有自我复制的能力，可具有特定限制核酸内切酶的单一靶标，和/或可携带可用于选择包含载体的克隆的标记的基因。适合实例包括质粒和细菌病毒，例如puc18、puc19、bluescript(例如pbs sk )和它的衍生物、mpl8、mpl9、pbr322、pmb9、cole1、pcr1、rp4、噬菌体dna以及穿梭载体诸如psa3和pat28。这些和许多其他克隆载体可从商业供应商诸如biorad、strategene和invitrogen获得。
[0524]
适于克隆或表达抗体编码载体的宿主细胞包括原核或真核细胞。举例来说，可在细菌中产生本公开的抗分拣蛋白抗体，特别是当不需要糖基化和fc效应子功能时。对于在细菌中表达抗体片段和多肽，例如美国专利第5648237、5789199和5840523号。在表达之后，抗体可从细菌细胞糊状物以可溶性级分分离，并且可进一步纯化。
[0525]
除原核生物之外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母也是适于抗体编码载体的克隆或表达宿主，包括糖基化途径已被“人源化”，从而导致产生具有部分或完全人糖基化样式的抗体的真菌和酵母菌株(例如gerngross nat.biotech.22:1409-1414(2004)；以及li等人nat.biotech.24:210-215(2006))。
[0526]
适于表达糖基化抗体的宿主细胞还可源于多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物细胞和昆虫细胞。已鉴定可与昆虫细胞联合使用的众多杆状病毒株，特别是用于转染草地贪夜蛾(spodoptera frugiperda)细胞。植物细胞培养物也可用作宿主(例如美国专利第5959177、6040498、6420548、7125978和6417429号，所述美国专利描述用于在转基因植物中产生抗体的plantibodiestm技术)。
[0527]
脊椎动物细胞也可用作宿主。举例来说，适合于悬浮生长的哺乳动物细胞系可为有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由sv40转化的猴肾cv1株系(cos-7)；人胚肾株系(293或293细胞，如例如在graham等人j.gen virol.36:59(1977)中所述)；幼小仓鼠肾细胞(bhk)；小鼠塞尔托利细胞(sertoli cell)(tm4细胞，如例如在mather,biol.reprod.23:243-251(1980)中所述)；猴肾细胞(cv1)；非洲绿猴肾细胞(vero-76)；人宫颈癌细胞(hela)；犬肾细胞(mdck)；buffalo大鼠肝细胞(brl 3a)；人肺细胞(w138)；人肝细胞(hep g2)；小鼠乳腺肿瘤(mmt 060562)；tri细胞，如例如在mather等人annals n.y.acad.sci.383:44-68(1982)中所述；mrc 5细胞；和fs4细胞。其他有用的哺乳动物宿主
细胞系包括中国仓鼠卵巢(cho)细胞，包括dhfr-cho细胞(urlaub等人proc.natl.acad.sci.usa 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，诸如y0、ns0和sp2/0。对于对适于产生抗体的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如yazaki和wu,methods in molecular biology,第248卷(b.k.c.lo编,humana press,totowa,nj),第255-268页(2003)。
[0528]
生物标志物
[0529]
在一些实施方案中，相较于一种或多种溶酶体标志物诸如ctsb的基线水平(例如全血、血浆和/或csf中)，本公开的抗分拣蛋白抗体的施用使所述一种或多种溶酶体标志物诸如ctsb的水平(例如全血、血浆和/或csf中)增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多中的任一者。在一些实施方案中，相较于ctsb的基线水平(例如全血、血浆和/或csf中)，本公开的抗分拣蛋白抗体的施用使ctsb的水平(例如全血、血浆和/或csf中)增加至少约20％。溶酶体标志物的另一非限制性实例是n-乙酰基葡糖胺激酶(nagk)。在一些实施方案中，相较于nagk的基线水平(例如全血、血浆和/或csf中)，本公开的抗分拣蛋白抗体的施用使nagk的水平(例如全血、血浆和/或csf中)增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多中的任一者。
[0530]
在一些实施方案中，相较于一种或多种炎症标志物诸如spp1的基线水平(例如全血、血浆和/或csf中)，本公开的抗分拣蛋白抗体的施用使所述一种或多种炎症标志物诸如spp1的水平(例如全血、血浆和/或csf中)降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或100％中的任一者。在一些实施方案中，相较于spp1的基线水平(例如全血、血浆和/或csf中)，本公开的抗分拣蛋白抗体的施用使spp1的水平(例如全血、血浆和/或csf中)降低至少约10％。炎症标志物的其他实例包括但不限于ywhae(14-3-3蛋白ε)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)和cd86。在一些实施方案中，相较于一种或多种炎症标志物诸如ywhae(14-3-3蛋白ε)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)或cd86的基线水平(例如全血、血浆和/或csf中)，本公开的抗分拣蛋白抗体的施用使所述一种或多种炎症标志物诸如ywhae(14-3-3蛋白ε)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)或cd86的水平(例如全血、血浆和/或csf中)降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或100％中的任一者。
[0531]
本文还提供了监测对正被施用本公开的抗分拣蛋白抗体的个体的治疗的方法。
[0532]
在一些实施方案中，方法包括在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前和之后测量来自个体的样品中一种或多种蛋白质的水平，其中所述一种或多种蛋白质是ctsb和/或spp1。在一些实施方案中，方法还包括基于样品中一种或多种蛋白质的水平来评估个体中抗分拣蛋白抗体的活性的步骤。在一些实施方案中，样品来自个体的脑脊髓液或个体的血液。在一些实施方案中，样品来自个体的脑脊髓液。
[0533]
在一些实施方案中，方法包括在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前和之后测量来自个体的样品中一种或多种蛋白质的水平，其中所述一种或多种蛋白质选
自由ctsb、spp1、nagk、ywhae、aif1、csf1、chit1、ly86和cd86组成的组。在一些实施方案中，方法还包括基于样品中一种或多种蛋白质的水平来评估个体中抗分拣蛋白抗体的活性。在一些实施方案中，样品来自个体的脑脊髓液。在一些实施方案中，样品来自个体的血液。
[0534]
在一些实施方案中，如果相较于在个体接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中ctsb的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中ctsb的水平增加(例如增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多中的任一者)，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。在一些实施方案中，如果相较于在个体接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中ctsb的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中ctsb的水平增加至少约20％，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。
[0535]
在一些实施方案中，如果相较于在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中spp1的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中spp1的水平降低(例如降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或100％中的任一者)，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。在一些实施方案中，如果相较于在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中spp1的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中spp1的水平降低至少约10％，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。
[0536]
在一些实施方案中，如果相较于在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中nagk的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中nagk的水平增加(例如增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多中的任一者)，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性。
[0537]
在一些实施方案中，如果相较于在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之前脑脊髓液中一种或多种炎症蛋白的水平，在个体已接受一次或多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后脑脊髓液中所述一种或多种炎症蛋白的水平降低(例如降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多中的任一者)，那么将抗分拣蛋白抗体确定为在个体中具有活性，其中所述一种或多种炎症蛋白选自由14-3-3蛋白ε(ywhae)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)和cd86组成的组。
[0538]
在一些实施方案中，样品来自个体的脑脊髓液。
[0539]
在一些实施方案中，样品来自个体的血液。
[0540]
在一些实施方案中，可测量从个体获得的样品诸如全血、血浆和/或csf的样品中一种或多种蛋白质(例如ctsb、spp1、nagk、ywhae、aif1、csf1、chit1、ly86或cd86中的一者或多者)的水平。可用于测量从个体获得的样品中一种或多种蛋白质(例如ctsb、spp1、nagk、ywhae、aif1、csf1、chit1、ly86或cd86中的一者或多者)的水平的方法的非限制性实例包括somascan测定(参见例如candia等人(2017)sci rep 7,14248)、蛋白质印迹、质谱测定法、流式细胞计量术和酶联免疫吸附测定(elisa)。
[0541]
药物组合物
[0542]
本文提供了包含本公开的抗分拣蛋白抗体和药学上可接受的载体的药物组合物和/或药物制剂。
[0543]
在一些实施方案中，药学上可接受的载体优选地在所用剂量和浓度下对接受者无毒。本文所述的抗体可被配制成呈固体、半固体、液体或气体形式的制剂。此类制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球体和气雾剂。视所需制剂而定，药学上可接受的载体可包括药学上可接受的无毒载体或稀释剂，其是通常用于配制用于动物或人施用的药物组合物的媒介物。在某些实施方案中，药物组合物可包含用于调节、维持或保持例如组合物的ph、容积摩尔渗透浓度、粘度、澄清度、颜色、等张性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸附或穿透的配制材料。
[0544]
在某些实施方案中，药学上可接受的载体包括但不限于氨基酸(诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗微生物剂；抗氧化剂(诸如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)；缓冲剂(诸如硼酸盐、碳酸氢盐、tris-hcl、柠檬酸盐、磷酸盐或其他有机酸)；增积剂(诸如甘露糖醇或甘氨酸)；螯合剂(诸如乙二胺四乙酸(edta))；络合剂(诸如咖啡因(caffeine)、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)；填充剂；单糖；二糖；以及其他碳水化合物(诸如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白质(诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂、调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水性聚合物(诸如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐反离子(诸如钠)；防腐剂(诸如苯扎氯铵(benzalkoniumchloride)、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞(thimerosal)、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定(chlorhexidine)、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(诸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(诸如甘露糖醇或山梨糖醇)；助悬剂；表面活性剂或湿润剂(诸如普洛尼克(pluronic)、peg、脱水山梨糖醇酯、聚山梨醇酯诸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80，曲拉通(triton)、缓血酸胺(tromethamine)、卵磷脂、胆固醇、泰洛沙泊(tyloxapal))；稳定性增强剂(诸如蔗糖或山梨糖醇)；张力增强剂(诸如碱金属卤化物，优选是氯化钠或氯化钾，甘露糖醇、山梨糖醇)；递送载体；稀释剂；赋形剂和/或药物佐剂。适于各种类型的施用的制剂的其他实例可见于remington:the science and practice of pharmacy,pharmaceutical press第22版(2013)中。对于对药物递送方法的简要综述，参见langer,science 249:1527-1533(1990)。
[0545]
适于胃肠外施用的制剂包括水性和非水性等张无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂和致使制剂与预定接受者的血液等张的溶质；以及水性和非水性无菌混悬剂，其可包括助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。
[0546]
制剂可针对在脑或中枢神经系统中的保留和稳定化加以优化。当将剂施用至颅侧区室时，可合乎需要的是所述剂保留在区室中，而非扩散或以其他方式穿过血脑屏障。稳定化技术包括交联、多聚化、或连接于诸如聚乙二醇、聚丙烯酰胺、中性蛋白载体等的基团以实现分子量的增加。
[0547]
用于增加保留的其他策略包括将抗体诸如本公开的抗分拣蛋白抗体包埋在生物可降解或生物可蚀解植入物中。治疗活性剂的释放速率受穿过聚合基质进行运输的速率以及植入物的生物降解的控制。植入物可为粒子、薄片、贴片、板、纤维、微囊等，并且可具有可与所选插入部位相容的任何尺寸或形状。可采用的生物可降解聚合组合物可为有机酯或醚，其在降解时产生生理上可接受的降解产物，包括单体。可使用独自或与其他单体组合的
酐、酰胺、原酸酯等。聚合物将是缩合聚合物。聚合物可为交联的或非交联的。受到特别关注的是羟基脂族羧酸的聚合物(均聚物或共聚物)和多糖。包括在目标聚酯之中的是d-乳酸、l-乳酸、消旋乳酸、乙醇酸的聚合物；聚己内酯；以及它们的组合。在目标多糖之中的是海藻酸钙和官能化纤维素，特别是特征在于不溶于水，具有约5kd至500kd的分子量等的羧甲基纤维素酯。生物可降解水凝胶也可用于本发明的植入物中。水凝胶通常是共聚物材料，特征在于能够吸收液体。
[0548]
药盒/制品
[0549]
本文提供了包括本文所述的抗分拣蛋白抗体的制品(例如药盒)。制品可包括一个或多个包含本文所述的抗体的容器。容器可为任何适合包装，包括但不限于小瓶、瓶、罐、柔性包装(例如密封迈拉(mylar)或塑料袋)等。容器可为单位剂量容器、大包装(例如多次剂量包装)或亚单位剂量容器。
[0550]
在一些实施方案中，药盒还可包括第二剂。在一些实施方案中，第二剂是药学上可接受的缓冲剂或稀释剂，包括但不限于诸如抑菌性注射用水(bwfi)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液(ringer's solution)和右旋糖溶液。在一些实施方案中，第二剂是药物活性剂。
[0551]
在任何制品的一些实施方案中，制品还包括关于根据本公开的方法进行使用的说明书。说明书通常包括关于用于预定治疗的剂量、给药时程和施用途径的信息。在一些实施方案中，这些说明书包含对根据本公开的任何方法施用本公开的经分离抗体(例如本文所述的抗分拣蛋白抗体)以预防个体患有选自以下的疾病、病症或损伤，降低个体患有所述疾病、病症或损伤的风险，或治疗患有所述疾病、病症或损伤的个体的描述：痴呆、额颞性痴呆、阿尔茨海默氏病、戈谢氏病(gauche’s disease)、血管性痴呆、发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤、脊髓损伤、动脉粥样硬化性血管疾病、正常老化的不合需要的症状、肌萎缩性侧索硬化(als)、长期抑郁、帕金森氏病、亨廷顿氏病、τ蛋白病、多发性硬化、年龄相关性黄斑变性、青光眼、退变性椎间盘疾病(ddd)、克罗伊茨费尔特-雅各布病(creutzfeldt-jakob disease)、正常压力性脑积水、那须-哈科拉病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、克罗恩氏病(crohn's disease)、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、疟疾、原发性震颤、中枢神经系统狼疮、贝塞特氏病(behcet's disease)、混合性痴呆、路易体痴呆、多系统萎缩、夏伊-德雷格综合征(shy-drager syndrome)、进行性核上麻痹、皮质基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎和伤口愈合。在一些实施方案中，疾病、病症或损伤是额颞性痴呆。在一些实施方案中，说明书包括关于使用抗分拣蛋白抗体和第二剂(例如第二药物活性剂)的说明书。
[0552]
通过参考以下实施例，将更充分了解本公开。然而，它们不应解释为限制本公开的范围。在整篇本公开中的所有引文都据此通过引用明确并入本文。
[0553]
实施例
[0554]
实施例1：非人灵长类动物中的抗分拣蛋白抗体pk和pd
[0555]
在这个实施例中，测定了静脉内(iv)施用的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps在非人灵长类动物中的药物代谢动力学(pk)和药物效应动力学(pd)。
[0556]
材料和方法
[0557]
单次剂量药物代谢动力学和药物效应动力学研究
[0558]
对于单次剂量药物代谢动力学研究，在第0天以5mg/kg、20mg/kg、60mg/kg或200mg/kg的单次iv剂量(n＝每种剂量3个动物)来向食蟹猴施用抗分拣蛋白抗体。在此后多个时间点时从动物抽取血液和csf以获得血浆和脑脊髓液(csf)中的抗分拣蛋白抗体浓度，其是抗分拣蛋白抗体药物代谢动力学的测量结果。还测定颗粒体蛋白前体(pgrn)浓度和白血细胞(wbc)上分拣蛋白(sort1)的水平，其是药物效应动力学的测量结果。
[0559]
使用用抗分拣蛋白抗体特异性抗独特型抗体进行的elisa测定来测定抗分拣蛋白抗体浓度。用可商购获得的elisa试剂盒来测定pgrn浓度。使用elisa测定来测定白血细胞上sort1的水平，并且以蛋白质浓度作归一化。
[0560]
结果
[0561]
表2提供关于测试的抗分拣蛋白抗体剂量中的每一者的血浆平均c
最大
、平均auc和t
1/2
。
[0562]
表2.关于指示的抗分拣蛋白抗体剂量(对于每种剂量，n＝3)的c
最大
、平均auc和t
1/2
。
[0563][0564]
如图1a中所示，在用测试的抗分拣蛋白抗体剂量中的任一者处理之后，外周白血细胞中的sort1表达水平降低。相较于较低抗分拣蛋白抗体剂量(5mg/kg、20mg/kg)，较高抗分拣蛋白抗体剂量(60mg/kg、200mg/kg)导致外周白血细胞中的sort1水平更早并且更延长降低。
[0565]
被施用抗分拣蛋白抗体的单次iv注射的非人灵长类动物的血浆中pgrn的水平以时间和剂量依赖性方式增加(图1b)。具体地说，对于测试的所有抗分拣蛋白抗体剂量，相较于基线水平，在c
最大
下，血浆pgrn水平增加至3至4倍。在较高抗体剂量下，血浆pgrn水平持续更长时期保持升高。另外，血浆pgrn水平增加与外周白血细胞中sort1的表达水平降低相关联。
[0566]
在被施用抗分拣蛋白抗体的单次iv注射的非人灵长类动物中，csf中pgrn的水平也增加。如图1c中所示，在被施用20mg/kg、60mg/kg或200mg/kg的动物中，csf pgrn水平增加至基线的2至3倍。如同关于血浆pgrn水平所观察，在较高抗体剂量组中，csf pgrn水平随时间保持升高。
[0567]
表3提供非人灵长类动物中关于测试的抗分拣蛋白抗体剂量中的每一者的csf平均c
最大
、平均auc和t
1/2
。平均来说，抗分拣蛋白抗体csf浓度是血浆中观察量的约0.1％。
[0568]
表3.非人灵长类动物中的抗分拣蛋白抗体csf pk参数和估计半衰期。
[0569][0570]
重复剂量药物代谢动力学和药物效应动力学研究
[0571]
在遵循重复剂量方案施用抗分拣蛋白抗体的非人灵长类动物中进行进一步药物代谢动力学和药物效应动力学研究。在这些研究中，以60mg/kg的剂量每周一次持续四周向动物(2个雄性和2个雌性)施用抗分拣蛋白抗体。在此后各种时间点，测定外周白血细胞中的sort1表达水平。此外，测定抗分拣蛋白抗体的血浆和csf水平。
[0572]
如图2a中所示，在研究的整个持续期中，外周白血细胞中的sort1水平保持降低。在峰值水平下，血浆pgrn水平增加至基线的5至6倍(图2b)。在第四次并且是最后一次施用抗分拣蛋白抗体之后观察到血浆pgrn的降低；然而，血浆pgrn水平保持升高至基线的2倍。另外，csf pgrn水平增加至基线的3至4倍(图2c)。
[0573]
通过平均c最大和auc
0-168
来评估的全身性抗分拣蛋白抗体暴露是在第1天的2100μg/ml和114,000μg/ml
×
h，以及在第22天的3020μg/ml和174,000μg/ml
×
h。这些结果显示相较于第1天，在第22天的暴露是更高的，从而指示一定程度的抗体积累。
[0574]
这些动物中抗分拣蛋白抗体的csf浓度在血浆中观察浓度的0.03％至0.12％的范围内，这与其他抗体在csf中的分布一致(pestalozzi等人,(2000)jclin oncol 18(11):2349-51；petereit等人,(2009)mult scler 15(2):189-92)。
[0575]
实施例2：人健康志愿者中的抗分拣蛋白抗体pk和pd
[0576]
在这个实施例中，研究静脉内施用的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps在人中的药物代谢动力学和药物效应动力学。
[0577]
材料和方法
[0578]
为研究静脉内施用的抗分拣蛋白抗体在人中的药物代谢动力学和药物效应动力学，进行了以下人1a期临床研究：
[0579]
年龄是18-65岁的男性和女性健康志愿者的六个群组被包括在这些研究中，并且被在约一小时内以iv输注形式施用单次剂量的抗分拣蛋白抗体(或安慰剂对照)。每个群组包括至少8名健康志愿者受试者，其中至少6名受试者被施用抗分拣蛋白抗体，并且至少2名受试者被施用安慰剂对照。用于六个群组的抗体剂量水平是2mg/kg、6mg/kg、15mg/kg、30mg/kg和60mg/kg。在60mg/kg下研究两个单独群组以研究在不同给药后时间点时的脑脊髓液(csf)影响，如下所描述。
[0580]
在多个时间点时从人受试者抽取血液以获得血浆中的抗分拣蛋白抗体浓度，并且进行腰椎穿刺以收集csf，两者用于药物代谢动力学的测量；以获得白血细胞(wbc)上sort1表达水平，其是药物效应动力学的测量结果；并且以获得pgrn浓度，其是药物效应动力学的测量结果。对于csf测量，对被施用15mg/kg或更高的抗体剂量的人受试者进行腰椎穿刺。测定csf样品中抗分拣蛋白抗体浓度(pk)和pgrn浓度(pd)。
[0581]
使用用抗分拣蛋白抗体特异性抗独特型抗体进行的elisa测定来测定抗分拣蛋白
抗体浓度。用可商购获得的elisa试剂盒来测定pgrn浓度，并且使用elisa测定来测定白血细胞上sort1的水平，并且以蛋白质浓度作归一化。
[0582]
在所有健康志愿者群组中，抗分拣蛋白抗体或安慰剂都在第1研究日施用，并且在第1、2、3、6、8、13、18、30、43、57、85和113研究日从受试者获取血液样品以进行pk和pd测定。对于三个群组(15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg群组)，在第1(给药前)、2和13研究日获得csf样品。在第1(给药前)、25和43研究日从被施用60mg/kg的受试者的第二群组获得csf样品。
[0583]
结果
[0584]
总计五十名健康志愿者被施用单次剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps。
[0585]
血浆中的药物代谢动力学
[0586]
表4中提供健康志愿者中来自升高剂量群组的血浆pk数据，包括所有群组的至少30天的给药后数据。施用至健康志愿者的抗分拣蛋白抗体显示近似与剂量成比例的c
最大
(即在2mg/kg下的47.2μg/ml；在60mg/kg下的1540μg/ml)。结果还显示在将抗分拣蛋白抗体的剂量水平从2mg/kg增加至60mg/kg后，抗体的血浆清除率降低，血浆半衰期增加，并且总血浆暴露(计算为auc
0-inf
)以非线性方式增加。值得注意的是，在测试的所有剂量下，抗分拣蛋白抗体的血浆终末半衰期都是短暂的，在2mg/kg剂量下的29.6小时(1.2天)至60mg/kg剂量下的190小时(7.9天)的范围内。
[0587]
表4.以单次剂量施用的抗分拣蛋白抗体的血浆药物代谢动力学(对于每种剂量水平，呈现了平均值)。
[0588][0589][0590]
对表4中的血浆pk结果的另一分析提供在表5中。
[0591]
表5.对以单次剂量施用的抗分拣蛋白抗体的血浆药物代谢动力学的另一分析
[0592]
(对于每种剂量水平，呈现了平均值)。
[0593][0594]
总之，这些结果指示在测试的剂量下，抗分拣蛋白抗体比类似类别的其他治疗性抗体更快速地清除，因此显示，出乎意料地，相较于类似类别的其他抗体，抗分拣蛋白抗体显示这个抗体的较短半衰期(ovacik,m和lin,l,(2018)clin transl sci 11,540-552)。抗体的短暂半衰期表明它可能在治疗上不是有用的。
[0595]
csf中的药物代谢动力学
[0596]
收集了csf的三个单次升高剂量健康人志愿者群组的初步csf pk数据以下显示在表6中。
[0597]
在15mg/kg群组与30mg/kg群组两者中，抗分拣蛋白抗体的csf浓度显示从给药后30小时至给药后12天随时间降低(表6)。这些结果指示在被施用15mg/kg或30mg/kg抗体的健康志愿者中，csf中的抗分拣蛋白抗体浓度在给药后12天之前的某一时间达到峰值。相比之下，在60mg/kg群组中，抗分拣蛋白抗体的csf浓度从给药后30小时至给药后12天增加(表6)。
[0598]
表6.以单次剂量施用的抗分拣蛋白抗体的csf浓度(ng/ml)(对于每种水平，呈现了平均值)。
[0599][0600]
另外，测量了在给药后24天和42天时来自第二60mg/kg群组的健康志愿者的抗体的csf浓度，从而揭示给药后多达42天，抗分拣蛋白抗体存在于csf中(表7)。
[0601]
表7.以单次剂量施用的抗分拣蛋白抗体的csf浓度(ng/ml)(对于每种水平，呈现了平均值)。
[0602][0603]
确定了在15mg/kg、30mg/kg和60mg/kg剂量下抗分拣蛋白抗体的csf浓度与血浆浓度的百分比率，并且结果提供在表8中。
[0604]
如表8中所示，在给药后12天时csf中的抗分拣蛋白抗体浓度在15mg/kg剂量下是血浆中观察浓度的0.09％，在30mg/kg剂量下是血浆中观察浓度的0.12％，并且在60mg/kg剂量下是血浆中观察浓度的0.26％。这些结果指示随着剂量增加而观察到抗分拣蛋白抗体的更高中枢神经系统穿透。
[0605]
表8.以单次剂量施用的抗分拣蛋白抗体的csf浓度与血浆浓度的百分比(对于每种水平，呈现了平均值)。
[0606][0607]
对在15mg/kg、30mg/kg和60mg/kg剂量下抗分拣蛋白抗体的csf浓度与血浆浓度的百分比的另一分析提供在表9中。
[0608]
表9.对以单次剂量施用的抗分拣蛋白抗体的csf浓度与血浆浓度的百分比的另一分析(对于每种水平，呈现了平均值)。
[0609]
剂量水平第2天第13天15mg/kg0.010.0730mg/kg0.040.1260mg/kg0.050.27
[0610]
总之，这些结果指示抗分拣蛋白抗体以与其他igg抗体类似的比例进入csf，显示csf pk与血浆pk的％与其他治疗性单克隆抗体一致。
[0611]
血液中的药物效应动力学
[0612]
测定了抗分拣蛋白抗体对外周白血细胞上的sort1水平以及对血浆pgrn浓度水平的影响。在这些研究中，从5个健康志愿者群组(2mg/kg、6mg/kg、15mg/kg、30mg/kg和60mg/kg)测定sort1和pgrn水平。
[0613]
如图3a中(虚线)所示，将抗分拣蛋白抗体施用至人受试者导致外周白血细胞上sort1表达水平的降低。
[0614]
举例来说，在抗体施用后5-7天时，被施用2mg/kg的抗分拣蛋白抗体剂量的受试者
pgrn浓度水平分别平均增加0.83倍和0.23倍。这些结果以在60mg/kg剂量下以及在安慰剂的情况下在第25天和第43天时自基线的变化百分比形式显示于图4a中。
[0623]
此外，分析了从两个60mg/kg群组中的受试者获得的csf样品中从给药前至给药后42天的pgrn水平。这些结果以自基线的变化百分比形式显示于图4c中。
[0624]
这些结果显示抗分拣蛋白抗体施用增加了人中csf pgrn的浓度水平，并且csf pgrn的增加的浓度水平持续在单次60mg/kg iv剂量的抗分拣蛋白抗体之后至少24天。
[0625]
总之，尽管s-60-15.1[n33t]lalaps在血浆中具有短暂半衰期，但s-60-15.1[n33t]lalaps的施用在人中显示了有前景的药物效应动力学效应，诸如白血细胞上sort1表达的降低以及血浆中和csf中pgrn水平的增加。出乎意料的是，这些治疗作用在人受试者中持续长久持续期。因此，在人中对抗体继续进行了进一步研究。
[0626]
安全性概述
[0627]
在所有施用剂量下，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps都是总体上安全的和良好耐受的。未观察到剂量限制性不利影响、药物相关的严重不利事件(sae)或剂量限制性毒性(dlt)。大多数治疗中出现的不利事件(teae)具有轻度或中度严重性。在不利事件方面不存在明显剂量依赖性趋势。最常见的teae是腰椎穿刺后综合征(腰椎穿刺在15mg/kg剂量水平下开始进行)、穿刺部位疼痛、头痛、贫血和呕吐。表10显示在1期研究中观察到的不利事件。
[0628]
表10.对以指示剂量施用的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps的安全性分析。
[0629]
[0630][0631]
1b期研究
[0632]
在一项正在进行的开放标签1b期研究中，以60mg/kg向无症状颗粒体蛋白突变携带者(aftd-grn)施用单次剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps。在给药前以及在给药后12天和24天(在第1研究日(给药前)以及在第13和25研究日)对csf取样。以30mg/kg，q2w(每两周)向有症状颗粒体蛋白突变携带者(ftd-grn)施用三次剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps。在给药前以及给药后56天(在第1研究日(给药前)以及在第57研究日)，或在末次剂量之后约4周对csf取样。在研究期间在若干时间点时获得血浆样品以分析pgrn水平。这个研究的目标在于评估在颗粒体蛋白突变携带者和颗粒体蛋白突变ftd患者中的安全性和耐受性、药物代谢动力学和药物效应动力学。这个研究的探索性目标包括对生物标志物的分析。
[0633]
结果
[0634]
研究受试者
[0635]
以60mg/kg向三名aftd-grn受试者施用单次iv剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps。
[0636]
以30mg/kg，q2w(每两周)向六名ftd-grn患者施用三次iv剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps。
[0637]
在grn携带者中，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps是总体上安全的和良好耐受的。
[0638]
血浆pgrn水平
[0639]
对于一名aftd-grn受试者和三名ftd-grn患者，在指示的给药后天数时血浆pgrn水平的变化百分比提供在图5a中。
[0640]
csf pgrn水平
[0641]
一名aftd-grn受试者(第13研究日)和三名ftd-grn患者(第57研究日)中csf pgrn水平的变化百分比提供在图5b中。
[0642]
来自正常健康志愿者以及来自三名ftd-grn患者在给药前以及在第57研究日的csf中pgrn的浓度(ng/ml)提供在图5c中。
[0643]
结论
[0644]
这个正在进行的1b期研究迄今为止的结果显示直至60mg/kg的最高剂量水平，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps是总体上安全的和良好耐受的。此外，结果显示抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps导致grn突变携带者的血浆与csf两者中pgrn水平的剂量依赖性和长久持续增加(图5a至图5b)。此外，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps使
ftd-grn患者的csf中的pgrn水平恢复至与由正常健康志愿者展现的正常范围类似的水平(图5c)。
[0645]
实施例3：用以在导致额颞性痴呆的颗粒体蛋白或c9orf72突变的杂合性携带者中评估抗分拣蛋白抗体的2期研究。
[0646]
这个实施例描述用以评估抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps在导致额颞性痴呆(ftd)的颗粒体蛋白或c9orf72突变的杂合性携带者中的安全性、耐受性、药物代谢动力学和药物效应动力学的2期多中心开放标签研究。
[0647]
研究目标
[0648]
主要目标
[0649]
这个研究的主要目标在于评估在导致ftd的grn突变的无症状和有症状携带者中以及在导致ftd的c9orf72突变的有症状携带者中，静脉内(iv)施用抗分拣蛋白抗体在多达48周内的安全性和耐受性。
[0650]
次要目标
[0651]
这个研究的次要目标在于基于以下来评估在导致ftd的grn突变的无症状和有症状携带者中以及在导致ftd的c9orf72突变的有症状携带者中，iv施用抗分拣蛋白抗体在多达48周内的影响：
[0652]
·
药物代谢动力学(pk)。
[0653]
·
药物效应动力学(pd)生物标志物：
[0654]
ο纵向血浆和csf pgrn浓度水平。
[0655]
ο纵向白血细胞(wbc)上sort1的水平以及csf中的可溶性sort1(ssort1)水平。
[0656]
探索性目标
[0657]
这个研究的探索性目标在于基于以下来评估在导致ftd的grn突变的无症状和有症状携带者中以及在导致ftd的c9orf72突变的有症状携带者中，iv施用抗分拣蛋白抗体在多达48周内的影响：
[0658]
·
pd生物标志物：
[0659]
ο探索性神经变性、溶酶体功能和小胶质细胞活性生物标志物的纵向血液、血浆和csf浓度水平。
[0660]
ο用以评估脑中的变化的磁共振成像(mri)指标。
[0661]
ο脑小胶质细胞活化。
[0662]
ο在探索性体液pd生物标志物、成像pd指标和临床结果评估(coa)之间的关联。
[0663]
这个研究的探索性临床目标是如通过coa来测量的临床进展。
[0664]
研究参与者
[0665]
在这个研究中入组了两个群组中约32名参与者：
[0666]
·
grn群组(多达24名无症状和有症状参与者；具体来说，约6名无症状参与者和约18名有症状参与者)，包括：
[0667]
ο在健康志愿者和杂合性grn突变携带者中进行的先前1期抗分拣蛋白抗体研究(在下文中被称为“先前1期抗分拣蛋白抗体研究”)中的无症状和有症状参与者。
[0668]
ο新的有症状grn突变携带者。
[0669]
·
c9orf72群组(多达8名有症状患者)。
[0670]
仅当参与者满足所有纳入准则，并且不满足任何排除准则时对他们指定研究治疗。
[0671]
纳入准则
[0672]
每个参与者满足所有以下准则以在这个研究中入组：
[0673]
关键纳入准则
[0674]
参与者种类1：来自先前1期抗分拣蛋白抗体研究的有症状grn突变携带者：
[0675]
·
患者完成了直至第57天访视的先前1期抗分拣蛋白抗体研究，并且未经历研究者认为将阻止安全参与这个研究的不利事件(ae)。
[0676]
ο来自先前1期抗分拣蛋白抗体研究的所有患者都被再筛选，并且满足可适用于这个研究的所有纳入/排除准则。
[0677]
ο患者满足关于可能的行为变异型ftd(bvftd)或很可能的bvftd(rascovsky等人,(2011)brain 134(9):2456-2477)或原发性进行性失语(ppa)(gorno等人,(2011)neurology 76(11):1006-1014)的诊断准则。具有不显著影响日常生活活动的轻度复合症状(例如轻度认知损害、轻度行为损害)的患者；bvftd患者，如果他们具有为诊断可能的bvftd所需的6种行为/认知症状中的1者或更多者(rascovsky等人,(2011)brain 134(9):2456-2477)。患有相伴的运动神经元疾病的bvftd或ppa患者。
[0678]
参与者种类2：来自先前1期抗分拣蛋白抗体研究的无症状grn突变携带者：
[0679]
·
参与者完成了直至第43天访视的先前1期抗分拣蛋白抗体研究，并且未经历研究者认为将阻止安全参与这个研究的ae。
[0680]
ο来自先前1期抗分拣蛋白抗体研究的所有参与者都被再筛选，并且满足可适用于这个研究的所有纳入/排除准则。
[0681]
参与者种类3：新的有症状grn突变携带者：
[0682]
·
患者是导致ftd-grn的功能丧失grn突变的携带者，并且知晓他们的突变状况。
[0683]
·
患者满足关于可能的bvftd或很可能的bvftd(rascovsky等人,(2011)brain 134(9):2456-2477)或ppa(gorno等人,(2011)neurology 76(11):1006-1014)的诊断准则。具有不显著影响日常生活活动的轻度复合症状(例如轻度认知损害、轻度行为损害)的患者。bvftd患者，如果他们具有为诊断可能的bvftd所需的6种行为/认知症状中的1者或更多者(rascovsky等人,(2011)brain 134(9):2456-2477)。患有相伴的运动神经元疾病的bvftd或ppa患者。
[0684]
·
患者具有轻度严重性，如通过以下所确定：
[0685]
ο临床痴呆评级量表(cdr)整体评分是1或更低，以及
[0686]
ο关于额颞性痴呆临床评级量表(fcrs)的语言范畴以及行为、举动和人格范畴两者的方框评分是1或更低。
[0687]
参与者种类4：新的有症状c9orf72突变携带者
[0688]
·
患者是导致ftd-c9orf72的六核苷酸重复扩增c9orf72突变的携带者，并且知晓他们的突变状况。
[0689]
·
患者满足关于可能的bvftd或很可能的bvftd(rascovsky等人,(2011)brain 134(9):2456-2477)或ppa(gorno等人,(2011)neurology76(11):1006-1014)的诊断准则。具有不显著影响日常生活活动的轻度复合症状(例如轻度认知损害、轻度行为损害)的患
者。bvftd患者，如果他们具有为诊断可能的bvftd所需的6种行为/认知症状中的1者或更多者(rascovsky等人,(2011)brain 134(9):2456-2477)。患有相伴的运动神经元疾病的bvftd或ppa患者。
[0690]
·
患者具有轻度严重性，如通过以下所确定：
[0691]
οcdr整体评分是1或更低，以及
[0692]
ο关于fcrs的语言范畴以及行为、举动和人格范畴两者的方框评分是1或更低。
[0693]
一般性纳入准则
[0694]
每个参与者还满足所有以下准则以在这个研究中入组：
[0695]
·
在筛选时，参与者是18至80岁，包括18岁和80岁。
[0696]
·
在筛选时，女性参与者是非妊娠的和非哺乳的，并且以下条件中的至少一者适用：
[0697]
ο参与者不是具有生育潜力的妇女(wocbp)。
[0698]
ο参与者是wocbp，并且从筛选直至随访之后90天使用可接受的避孕方法。
[0699]
οwocbp在筛选时进行了血清妊娠测试。
[0700]
·
男性参与者，如果不是手术绝育的，那么同意使用可接受的避孕，并且从第1天直至随访之后90天不捐献精子。
[0701]
·
基于从医学史、体格检查(pe)、实验室测试、心电图(ecg)和生命体征无临床重大发现，参与者处于良好身体健康状况。
[0702]
·
参与者愿意并且能够遵守研究方案。
[0703]
·
参与者有与患者具有频繁和足够联系(例如每周≥10小时的亲自联系)，可提供关于参与者的认知和功能能力的准确信息，同意在需要伴侣进行输入以完成coa的现场访视时提供信息，并且签署必要的同意书的人员(“研究伴侣”)可用。
[0704]
排除准则
[0705]
满足以下准则中的任一者的参与者从研究排除：
[0706]
·
参与者具有已知的对嵌合抗体、人抗体或人源化抗体或融合蛋白的重度变态反应、过敏反应或其他超敏反应史。
[0707]
·
参与者在过去2年内具有酒精或物质使用障碍史(根据dsm-5,american psychiatric association,2013)。
[0708]
ο允许使用尼古丁(nicotine)。
[0709]
·
参与者在第1天之前30天内已捐献或丧失超过100ml血液。
[0710]
·
参与者在筛选之前30天内进行了输血。
[0711]
·
参与者在药物施用之前5天内患有可能影响安全性评估的临床重大和/或急性疾病。
[0712]
·
参与者在筛选之前30天期间经历手术、住院或需要口服或iv抗生素的临床重大感染。
[0713]
·
参与者已计划了在研究期间进行的会干扰进行研究评估的能力的程序或手术。
[0714]
·
参与者具有既往发作史，儿童期热性发作除外。
[0715]
·
参与者患有由于免疫阻抑药物治疗的持续影响的临床重大全身性免疫损害疾患。
[0716]
·
参与者具有重度抑郁障碍(除非在入组时以及在整个研究中处于缓解期并且加以治疗)或精神分裂症、分裂情感性障碍或双相障碍史(不考虑当前或既往治疗)。
[0717]
·
参与者具有癌症史，以下除外：
[0718]
ο如果临床上治愈。
[0719]
ο未正用抗癌疗法或放射疗法积极治疗，并且在随后3年中不可能需要治疗。
[0720]
ο被视为具有低复发概率。
[0721]
·
参与者具有临床相关的颅内肿瘤(例如神经胶质瘤、脑转移瘤)史或存在所述颅内肿瘤。
[0722]
·
参与者具有阻碍参与者安全参与和完成研究的任何临床重大医学状况或实验室异常。
[0723]
·
参与者关于乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、或人免疫缺陷病毒-1和人免疫缺陷病毒-2抗体或抗原呈阳性，或具有cns螺旋体感染(例如梅毒或疏螺旋体病)史。
[0724]
·
参与者患有重大肾病，如通过肌酐清除率筛选结果《30ml/min，并且如果再测试，其仍然《30ml/min所指示，所述肌酐清除率筛选结果如由中心实验室使用科克罗夫特-高尔特(cockcroft-gault)公式所计算。
[0725]
·
参与者具有受损的肝功能，如通过以下所指示：天冬氨酸转氨酶(ast)或丙氨酸转氨酶(alt)筛选结果≥2倍正常值上限(uln)或总胆红素≥1.5倍uln，并且如果再测试，其仍然高于这些限值中的任一者；临床重大的在合成功能方面的其他异常。
[0726]
·
参与者在过去2年内患有不稳定或临床重大心血管疾病(例如心肌梗塞、心绞痛、纽约心脏协会(new york heart association)iii类或更高类心力衰竭)。
[0727]
·
参与者具有不受控制的高血压(例如血压(bp)通常》140mm hg收缩压或》90mm hg舒张压)。
[0728]
·
参与者具有临床重大异常ecg史或存在临床重大异常ecg，包括完全左束支传导阻滞、二度或三度心脏传导阻滞、或既往心肌梗塞的证据。
[0729]
·
参与者具有的使用弗雷德里希亚(fridericia)公式修正的qt间期(qtcf)对于男性参与者》450ms，并且对于女性参与者》470ms，如通过相隔5分钟的至少2次ecg所证明。
[0730]
·
参与者具有室性节律障碍史或室性节律障碍的风险因素，诸如结构性心脏病(例如重度左心室收缩功能异常、左心室肥大)、冠心病(有症状或伴有通过诊断测试证明的缺血)、临床重大电解质异常(例如低钾血症、低镁血症、低钙血症)、或不明原因猝死或长qt综合征的家族史。
[0731]
·
参与者具有腰椎硬膜穿刺的禁忌证，包括凝血病变、相伴的抗凝作用(除血小板抑制剂诸如阿司匹林(aspirin)之外)、血小板减少症、或阻碍安全腰椎穿刺的其他因素。
[0732]
·
参与者患有归因于除ftd以外的疾患的痴呆或较轻度有症状综合征(例如轻度认知损害、轻度行为损害或轻度运动损害)，所述疾患包括但不限于阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、亨廷顿病或血管性痴呆。
[0733]
·
参与者具有有可能影响认知功能的潜在影响脑的临床明显血管疾病(例如临床重大颈动脉或椎动脉狭窄或斑块；主动脉瘤；颅内动脉瘤；脑出血；动静脉畸形)史或存在所述临床明显血管疾病。
[0734]
·
参与者在过去2年内具有有症状脑缺血史或存在有症状脑缺血，或在过去6个月
内具有有文件记载的与短暂性缺血性发作一致的急性事件史。
[0735]
·
参与者具有重度临床重大(持续神经缺陷或结构性脑损害)cns创伤(例如脑挫伤)史。
[0736]
·
参与者具有可被预期会进展、复发或变化达到以下程度的任何其他重度或不稳定医学状况：它可将参与者置于特殊风险下，在显著程度上使对参与者的临床或精神状况的评估产生偏差，干扰参与者完成研究评估的能力，或将需要机构或医院护理的等效护理。
[0737]
·
参与者不能耐受mri程序或具有mri的禁忌证，包括但不限于眼、皮肤或身体中存在将在mri扫描中禁用的起搏器、动脉瘤夹、人工心脏瓣膜、耳植入物或外来金属物件；或在与mri组合时将造成潜在危害的任何其他临床史或检查发现。
[0738]
药物治疗相关准则
[0739]
对于如所指示的在研究开始之前的预先指定的持续期，以及在整个研究参与时期(在研究期间开始这些药物治疗的参与者从研究治疗退出)期间，禁止以下药物治疗：
[0740]
·
已知会损害意识或认知的药物治疗的任何连续使用，除非这些药物治疗有医学监查员的核准为治疗医学状况所必需。可允许间歇或短期使用(《1周)这些药物治疗，但必须在除winterlight实验室言语评估(wla)或summerlight实验室言语评估(sla)之外的任何认知或行为评估之前停止2天或5个半衰期，以较长久者为准。在除wla或sla之外的任何认知或行为评估之前24小时内禁止使用大麻素(cannabinoid)。
[0741]
·
用以预防或推迟认知减退的处于评估下的任何研究性主动免疫疗法(疫苗)。
[0742]
·
在筛选的1年内用以预防或推迟认知减退的处于评估下的任何被动免疫疗法(免疫球蛋白)或其他长效生物剂。参与以上讨论的先前1期抗分拣蛋白抗体研究不适用于这个准则。
[0743]
·
在这个研究中的药物施用(第1天)之前30天内来自临床试验(不同于先前1期抗分拣蛋白抗体研究)的药物；在第1天之前30天或5个半衰期(以较长久者为准)内使用任何实验口服疗法；在第1天之前12周或5个半衰期(以较长久者为准)内使用任何生物疗法；或在筛选的5个半衰期或3个月(以较长久者为准)内的任何其他研究性治疗。接受不具有半衰期的实验疗法如疫苗的参与者在第1天之前至少12周完成那个疗法。
[0744]
·
在筛选的6个月内的典型抗精神病或神经阻滞药物治疗，作为对非精神病适应症(例如呕吐)的短暂治疗除外。
[0745]
·
在筛选的3个月内的抗凝血(库马定(coumadin)、类肝素(heparinoid)、阿哌沙班(apixaban))药物治疗。
[0746]
ο容许抗血小板治疗(例如阿司匹林、双嘧达莫(dipyridamol))。
[0747]
·
全身性免疫抑制疗法或预期在研究期间需要全身性免疫抑制疗法。
[0748]
ο如果在入组之前稳定至少3个月，并且血红蛋白》9g/dl，白血细胞计数》3000/mm3，绝对嗜中性粒细胞计数》1500/mm3，并且血小板计数》100000/mm3，那么允许使用≤10mg/天的泼尼松(prednisone)或等效皮质类固醇。
[0749]
·
在筛选的3个月内长期使用阿片制剂或阿片样物质(包括长效阿片样物质药物治疗)。
[0750]
ο容许间歇短期使用(《1周)针对疼痛的短效阿片样物质药物治疗，在任何神经认知评估之前2天或5个半衰期(以较长久者为准)内除外。
[0751]
·
在筛选的1个月内以及在整个研究中的任何刺激药物治疗(安非他明(amphetamine)、哌甲酯(methylphenidate)制剂或莫达非尼(modafinil))。
[0752]
·
从筛选之前3个月开始计算，长期使用巴比妥类药物或催眠药。
[0753]
ο允许间歇短期(《1周)使用针对睡眠或焦虑的丁螺环酮(buspirone)或短效催眠药物治疗，在任何神经认知评估之前2天或5个半衰期(以较长久者为准)内除外。
[0754]
研究设计
[0755]
这个2期多中心开放标签研究将评估抗分拣蛋白抗体在对于导致ftd的功能丧失grn突变而言是杂合的无症状携带者和有症状患者中以及在具有导致ftd的c9orf72六核苷酸重复扩增突变的有症状患者中的安全性、耐受性、pk、pd和对coa的影响。
[0756]
如图6中所示，研究包括筛选时期(在第1天之前6周内)、治疗期(48周)和随访时期(在末次剂量的抗分拣蛋白抗体之后12周)，以及在第61周(研究完成)时的随访。
[0757]
研究治疗和随访
[0758]
所有入组参与者都经受以磁共振成像(mri)、任选的tspo-pet成像、用于pd生物标志物测量的生物体液取样、用于csf收集的腰椎穿刺、安全性评估和若干coa进行的基线评估。
[0759]
在第1天以及此后每四周(q4w)以60mg/kg的剂量经静脉内向grn群组和c9orf72群组中的患者(参见以上“研究参与者”章节)施用抗分拣蛋白抗体，总计13次剂量(48周治疗期)，多达并且包括第49周。在约60分钟内iv施用抗分拣蛋白抗体。在iv输注结束以及完成访视当天的所有预定活动之后对参与者进行至少60分钟的随访。给药溶液制备说明书单独提供在制药手册中。
[0760]
在筛选期间，在基线评估之后每12周(即在第13、25和37周时)，以及在第61周时的研究完成访视(或早期终止访视)时进行包括参与者和研究伴侣的认知和功能测试。
[0761]
在筛选期间，在第13周、第25周时，以及在第61周时的研究完成访视(或早期终止访视)时进行成像。在筛选、第25周时，以及在第61周时的研究完成访视时进行用于csf收集的腰椎穿刺。
[0762]
在48周治疗期结束之后以及在末次剂量之后12周(第61周)要求参与者完成随访评估访视，撤回研究参与同意书的那些参与者除外。如果参与者由于ae而停止，那么对事件进行随访直至它消退。另外，对在研究期间的任何时间发生的被视为与研究药物或放射性示踪剂相关的严重ae(sae)进行报告直至消退，参与者撤回同意书，失访，或死亡，以适用者为准。
[0763]
在治疗和随访时期期间进行mri、任选的tspo-pet成像、用于pd生物标志物测量的生物体液取样、用于csf收集的腰椎穿刺和若干coa的评估。
[0764]
任选的tspo-pet成像评估
[0765]
进行任选的用以评估如通过tspo-pet成像来测量的脑小胶质细胞活化的探索性评估以评估在用抗分拣蛋白抗体iv给药之后脑小胶质细胞活化的变化。仅在患者已显示基于完成所有其他筛选评估的研究参与合格性之后在抗分拣蛋白抗体给药之前进行基线tspo-pet扫描，在第13周以及在第61周时的研究完成访视时进行tspo-pet扫描。
[0766]
研究药物
[0767]
抗分拣蛋白抗体(研究药物)以在50mg/ml的浓度下配制成水溶液的液体溶液形式
提供，所述水溶液含有处于20mm组氨酸/组氨酸盐酸盐、7.5％(w/v)蔗糖和0.02(w/v)聚山梨醇酯-80中的抗分拣蛋白抗体，在ph 5.5下。
[0768]
相伴和既往疗法
[0769]
在研究的过程期间，参与者继续使用根据研究纳入和排除准则在筛选程序期间鉴定的所接受的处方药物治疗。参与者被告诫避免在不咨询研究者的情况下采用任何新的处方和非处方药物治疗，除非新的药物治疗为紧急使用所需。
[0770]
在研究期间被认为为参与者的幸福所必需的任何相伴药物治疗都由研究者酌情决定来给予。
[0771]
如由研究纳入和排除准则所要求，停止任何受限制的药物治疗；由申办者的医学监查员酌情决定使在研究期间开始这些药物治疗的参与者从研究治疗退出。
[0772]
患者退出
[0773]
如果继续的话对参与者不是最有利的，那么参与者可在任何时间从研究药物或研究治疗停止。以下是研究药物或研究治疗停止的可能原因的清单：
[0774]
·
参与者不顺应方案。
[0775]
·
参与者失访。
[0776]
·
参与者撤回同意书。
[0777]
·
参与者具有在研究者看来需要从研究治疗退出的严重或无法忍受的ae。
[0778]
·
发生了在研究者看来在显著程度上影响对临床状况或安全性的评估的间发疾病。
[0779]
·
使用非容许的相伴药物治疗。
[0780]
·
妊娠。
[0781]
·
研究者的判断。
[0782]
·
死亡
[0783]
如果参与者由于ae或sae而停止，那么对事件进行随访直至它消退。
[0784]
在与研究者商议的情况下替换从研究退出的参与者。
[0785]
研究评估
[0786]
研究终点
[0787]
主要安全性终点
[0788]
为评估累积暴露对抗分拣蛋白抗体的安全性概况的潜在影响，通过剂量，诸如通过使用接受的实际剂量(以重量作归一化)的三分位数来评估以下各项：
[0789]
·
ae和sae的发生率、性质和严重性。
[0790]
·
归因于ae的治疗停止和研究停止的发生率。
[0791]
·
体格检查异常。
[0792]
·
神经检查异常。
[0793]
·
随时间自基线的生命体征变化。
[0794]
·
随时间自基线的ecg变化。
[0795]
·
相对于基线在给药之后的mri异常。
[0796]
·
随时间自基线的临床实验室测试变化。
[0797]
·
希恩自杀倾向追踪量表(sheehan suicidality tracking scale，希恩-sts)。
[0798]
·
针对抗分拣蛋白抗体的ada的发生率。
[0799]
次要pk终点
[0800]
这个研究的次要pk终点是：
[0801]
·
在指定时间点时抗分拣蛋白抗体的血清浓度。
[0802]
·
抗分拣蛋白抗体pk参数。
[0803]
·c最大
。
[0804]
·c谷底
。
[0805]
·
auc
ss
。
[0806]
这个研究的次要pd生物标志物终点是：
[0807]
·
csf中pgrn的自基线的总体变化。
[0808]
·
血浆中pgrn的自基线的总体变化。
[0809]
·
wbc上sort1以及csf中ssort1的自基线的总体变化。
[0810]
这个研究的探索性pd生物标志物终点是：
[0811]
·
在血液、血浆和csf中探索性神经变性、溶酶体功能和小胶质细胞活性生物标志物方面自基线的总体变化。
[0812]
·
整体性和区域性脑mri萎缩指标。
[0813]
·
通过tspo-pet评估的神经炎症(仅对于同意参与任选的成像评估的参与者)。
[0814]
·
在探索性体液生物标志物、成像指标和coa之间的关联。
[0815]
这个研究的探索性临床终点是：
[0816]
·
关于coa中量表的评分自基线的总体变化。
[0817]
·
ftd临床评级量表(fcrs)。
[0818]
·
额颞性痴呆评级量表(frs)。
[0819]
·
临床医师的整体印象-改善(cgi-i)。
[0820]
·
神经精神量表(npi)。
[0821]
·
彩色路径描绘测试(ctt)第2部分。
[0822]
·
可重复的成套神经心理状态评估(rbans)。
[0823]
·
德利斯-卡普兰执行功能系统(d-kefs；仅色词干扰)。
[0824]
·
人际反应指针量表。
[0825]
·
winterlight和summerlight实验室言语评估(wla和sla；仅对于同意参与这些任选评估的参与者)。
[0826]
分析群体
[0827]
入组群体：入组群体由签署知情同意书，并且有资格参与研究的所有参与者组成。入组群体用于研究群体和coa概要。
[0828]
安全性分析群体：安全性分析群体由接受至少1次剂量的抗分拣蛋白抗体的所有参与者组成。安全性分析群体用于安全性概要。
[0829]
pk分析群体：pk分析群体包括安全性群体中进行了足以确定至少1个pk参数的评估的所有参与者。pk分析群体用于pk概要。
[0830]
pd分析群体：pd分析群体包括安全性分析群体中进行了基线pd评估与至少1次给药后pd评估两者的所有参与者。pd分析群体用于pd活性的概要。
[0831]
生物标志物群体：生物标志物群体由安全性群体中进行了至少1个pd生物标志物参数的基线测量与至少1次给药后测量两者的所有参与者组成。pd生物标志物群体用于探索性pd生物标志物概要。
[0832]
描述统计用于评估临床重大相关发现(例如导致研究药物停止的研究药物相关ae或研究药物相关sae)。
[0833]
除安全性终点之外，以上指定的所有其他研究终点都通过grn突变携带者相对于c9orf72突变携带者来概述。
[0834]
统计分析方法
[0835]
使用9.4版或更高版sas软件(sas institute inc.,cary,north carolina,usa)进行统计分析。对于分类变量，呈现频率和百分比。使用描述统计(参与者的数目、平均值、标准偏差[sd]、中值、最小值、最大值和在适用时的95％置信区间[ci])来概述连续变量。所有ci都是2侧的，并且使用5％显著性水平来进行，使用90％ci和几何平均值的pk参数除外。
[0836]
如果亚型的大小是至少2名参与者，那么所有概要都根据参与者状况和在基线时的痴呆类型来呈现(aftd-grn相对于ftd-grn bvftd相对于ftd-grn ppa相对于ftd-c9orf72 bvftd相对于ftd-c9orf72 ppa)。
[0837]
基线定义为在开始第一次研究药物施用之前的末次非缺失评估，包括重复和非预定测量。
[0838]
参与者人口统计数据、医学史和基线特征
[0839]
在筛选时记录人口统计信息。
[0840]
在研究药物施用之前在筛选时记录所有相关医学史，包括当前疾病史、其他相关史和关于潜在疾病的信息。仅对于有症状参与者在筛选时完成诊断表征表格。还对于在研究的过程期间变得有症状的任何无症状参与者完成诊断表征表格；对于这些参与者，仅在他们展现临床复合症状所处的初次访视时完成诊断表征表格。
[0841]
人口统计数据(包括但不限于年龄、性别和种族)以及基线和背景特征呈现于汇总表中。定性数据(例如医学史、诊断表征)概述于列联表中。使用定量描述统计来概述定量数据(例如年龄)。所有基因型数据都呈现于汇总表中。
[0842]
研究药物和既往/相伴药物治疗
[0843]
通过接受的剂量的数目和接受的总剂量来概述研究药物施用数据。基于剂量间断/停止来计算总体治疗顺应性。
[0844]
使用2019年3月或以后的who-dd来对既往和相伴药物治疗编码。所有既往和相伴药物治疗数据都通过解剖学治疗学化学类别和通用名称来概述。呈现既往和相伴药物治疗的单独概要。
[0845]
安全性评估
[0846]
所有安全性概要都使用安全性分析群体来呈现。
[0847]
记录不利事件，不考虑与研究药物、放射性示踪剂(18f-pbr06或11c-pbr28)或tspo-pet任选评估程序的关系。根据21.1版或更高版meddra将ae编码成系统器官类别和优选术语。根据系统器官类别、优选术语、参与者状况和在基线时的痴呆类型来报告以下ae概要：
[0848]
·
治疗中出现的ae(teae)。
[0849]
·
治疗相关的teae。
[0850]
·
根据与研究药物的关系的teae。
[0851]
·
根据严重性的teae。
[0852]
·
sae。
[0853]
·
导致研究药物停止的teae。
[0854]
·
导致研究停止的teae。
[0855]
对于安全性报告，相对于基线在给药之后的任何临床重大mri变化都由研究者评估，并且作为ae来包括。不进行对通过mri鉴定的ae的单独分析。
[0856]
体格和神经检查
[0857]
进行全面神经检查，包括评估意识、定向、颅神经、运动和感觉系统、协调和步态、以及反射。在每次后续神经检查时记录自基线异常的变化和从先前神经检查的变化。新的或恶化的异常如果被视为是临床重大的，那么记录为ae。
[0858]
进行全面体格检查(pe)，包括评估头、眼、耳、鼻和喉、以及心血管系统、皮肤系统、肌肉骨骼系统、呼吸系统和胃肠系统。在所有其他指定时间点，在研究药物施用之前(如果可适用)，或如在临床上所指示，进行症状引导的限定检查。记录在基线时观察到的异常以及在所有其他访视时的新的或恶化的临床重大异常。在下次预定访视时对新的异常pe发现进行随访。新的或恶化的异常如果被视为是临床重大的，那么记录为ae。在筛选时测量身高(cm)。
[0859]
通过分类解释发现来产生体格和神经检查的单独变化表，并且根据身体系统来呈现。
[0860]
在参与者已以仰卧位静息≥5分钟之后记录仰卧收缩性和舒张性血压(bp)、脉搏、体温和呼吸频率。随后测量体温和呼吸频率。记录在基线时观察到的异常以及在后续访视时的新的或恶化的临床重大异常。新的或恶化的异常如果被视为是临床重大的，那么记录为ae。在获取生命体征的同一次访视时收集重量(kg)。
[0861]
使用描述统计来概述在每个时间点时生命体征和重量的实际值和自基线的变化。
[0862]
在患者已以仰卧位持续≥5分钟之后获得一式三份12导联ecg。所有ecg都基于临床安全性加以分析(无强化qt分析)。研究者在结合参与者的医学史、pe和相伴药物治疗对ecg报告审阅之后确定ecg变化的临床重要性。
[0863]
使用描述统计来概述在每个时间点时定量ecg结果的实际值和自基线的变化。产生ecg的分类解释的变化表。列出任何3级或更高等级qtcf延长。
[0864]
临床实验室分析
[0865]
收集血液和尿样品以进行临床安全性实验室测试(化学、凝血、血液学、尿分析、血清学和妊娠测试)。
[0866]
使用描述统计来概述在每个时间点时临床实验室测试结果的实际值和自基线的变化。产生临床实验室测试结果的变化表。
[0867]
自杀倾向追踪量表
[0868]
希恩自杀倾向追踪量表是被设计来随时间评估和监测自杀倾向的核心现象的简明量表。如果研究者进行评估并且认为存在自杀意念或行为，那么记录ae。
[0869]
使用描述统计，根据时间点来呈现希恩-sts总评分的汇总表。
[0870]
免疫原性分析
[0871]
收集血清样品以测定抗药物抗体(ada)。在具有输注相关反应的体征和症状的参与者中收集额外ada样品。在相同时间点获得相应额外pk样品以及用于细胞因子分析的血浆样品。
[0872]
针对抗分拣蛋白抗体的ada的免疫原性测试结果根据时间点来概述。
[0873]
药物代谢动力学和药物效应动力学评估
[0874]
样品收集
[0875]
收集血清样品以评估抗分拣蛋白抗体的血清浓度。所有pk样品都在研究药物施用当天从未用于输注的手臂收集。
[0876]
收集血液pgrn血浆样品以评估pgrn的水平。
[0877]
收集全血样品以评估wbc上sort1的水平，并且评估其他分析物。
[0878]
评估脑脊髓液样品中抗分拣蛋白抗体的浓度。还评估脑脊髓液样品中pgrn和ssort1的水平。在研究药物施用之前(如果可适用)、在筛选、第25周和研究完成/早期终止时通过腰椎穿刺来收集脑脊髓液样品以评估pk、pd和探索性pd生物标志物指标。基于对探索性pd生物标志物的审核来调整第25周腰椎穿刺。
[0879]
收集探索性全血、血浆和csf pd生物标志物样品以评估神经变性(即神经丝轻链[nfl]、τ蛋白、磷酸化τ蛋白)、溶酶体功能(即组织蛋白酶)和小胶质细胞活性(即ykl-40、白介素-6)，评估外周细胞中的信使核糖核酸(mrna)表达，并且潜在地评估与疾病生物学和对抗分拣蛋白抗体的响应相关的其他分析物的水平。
[0880]
次要药物代谢动力学终点的分析
[0881]
所有pk概要都使用pk分析群体来呈现。
[0882]
根据研究日和突变携带者来将单个和平均血清抗分拣蛋白抗体浓度-时间数据列成表格和绘图。当可适用时，根据研究日和群组，通过基于在多次剂量的抗分拣蛋白抗体之后获得的结果对最大观察浓度(c最大)、谷底浓度(c谷底)和浓度-时间曲线下面积(aucss)的估计来概述抗分拣蛋白抗体的血清pk。
[0883]
抗分拣蛋白抗体的单个血清浓度相对于实际时间数据用于使用6.4版或更高版(certara usa inc.,princeton,nj,usa)通过标准非房室方法来获得pk参数。单个pk参数呈现于列表中。使用以下描述统计来将pk参数概述于表格中：n、算术平均值、sd、变异系数(cv)、几何平均值、几何平均值cv、最小值、中值和最大值。对于c最大、c谷底和aucss，仅包括几何平均值以及几何平均值、90％ci和cv。
[0884]
当数据允许时，探究相关pk参数与人口统计数据、安全性(包括qt变化)和pd指标的潜在关联。进行额外建模(包括群体pk分析)以表征这些关联。
[0885]
次要和探索性药物效应动力学终点的分析
[0886]
所有pd概要都使用pd分析群体来呈现。
[0887]
根据研究日和突变携带者来描述和概述在基线和指定的每个时间点时的pd终点，以及每个pd终点的自基线的变化百分比。血浆和csf样品中评估的药物效应动力学终点包括但不限于pgrn、sort1、ssort1和nfl。
[0888]
根据研究日和群组将pd终点和它们的自基线的相应变化(即自基线的变化百分比)的汇总统计列成表格。以图解方式呈现观察值与自基线的变化百分比值两者的pd终点
时间过程。此外，重复测量的混合模型(mmrm)用于以95％ci概述pd终点自基线的平均变化百分比。还探究pd终点与临床响应之间的关联。
[0889]
使用非线性混合效应建模，通过群体pk/pd模型来对pk-pd关系建模。还探索基线探索性pd生物标志物作为对抗分拣蛋白抗体的响应的潜在预测物，包括基线血清或csf pgrn水平和pgrn基因分型。
[0890]
探索性药物效应动力学生物标志物终点的分析
[0891]
所有探索性pd生物标志物概要都使用生物标志物群体来呈现。
[0892]
评估在体液pd生物标志物水平、成像pd指标和临床结果指标之间的关联。
[0893]
磁共振成像(mri)
[0894]
进行对脑的mri扫描，并且集中审阅以评估安全性，并且评估整体性和区域性脑体积、白质高信号的体积、脑灌注(通过动脉自旋标记mri测量)、各向异性分数、平均扩散率、轴向扩散率和径向扩散率(通过扩散张量成像测量)和功能性脑活动(通过功能性mri测量)。
[0895]
使用描述统计根据访视来概述定量mri参数的实际结果和自基线的变化百分比值。还将自基线的平均变化百分比值连同加上或减去sd来呈现于图中。
[0896]
转位蛋白正电子发射断层摄影术(tspo-pet)
[0897]
归因于tspo中影响位置147处的氨基酸的多态性(rs6971)，群体中有约10％展现tspo放射性配体与tspo线粒体蛋白的低亲和力结合。作为筛选访视的一部分以及在前往成像地点之前，如果参与者同意并且提供同意书，那么对参与者进行预筛选以进行任选的tspo-pet成像评估。在临床中心收集任选的血液样品以对rs6971 tspo多态性进行基因分型以确定他们是高亲和力结合者(ala/ala氨基酸在位置147处)、中等亲和力结合者(ala/thr)、还是低亲和力结合者(thr/thr)。将所有是低亲和力结合者(thr/thr)的个体都从参与任选的tspo-pet成像评估排除。高亲和力结合者和中等亲和力结合者有资格参与任选的tspo-pet成像评估。
[0898]
任选的tspo-pet成像的参与者在抗分拣蛋白抗体给药之前以及在第13周和研究完成访视(第61周)时经受tspo-pet成像。仅在参与者已显示基于完成所有筛选评估的研究参与合格性之后在抗分拣蛋白抗体给药之前进行基线任选的tspo-pet成像。
[0899]
tspo-pet分析的总体目标在于评估在用抗分拣蛋白抗体治疗之前和之后的[11c]pbr28和[
18
f]pbr06，作为研究患者的脑中小胶质细胞活化的放射性示踪剂药物效应动力学(pd)生物标志物。
[0900]
此外，进行tspo-pet分析以评估在用抗分拣蛋白抗体iv给药之后，脑小胶质细胞活化的变化。在tspo-pet分析期间，将mri图像与[11c]pbr28和[
18
f]pbr06 pet图像共对准以基于解剖学来确定用于分析区域性[11c]pbr28和[
18
f]pbr06结合/摄取的目标区域(roi)。解剖模板用于确定mri扫描与pet扫描两者中的脑部子结构。
[0901]
其他探索性药物效应动力学生物标志物
[0902]
使用描述统计根据访视来概述其他探索性pd生物标志物参数的实际结果和自基线的变化值。还将自基线的平均变化值连同加上或减去sd来呈现于图中。
[0903]
探索性临床结果评估终点的分析
[0904]
进行以下神经认知和功能测试。在研究药物施用之前(如果可适用)以及在任何应
激程序(例如血液收集、成像)之前进行神经认知和功能测试。
[0905]
·
额颞性痴呆临床评级量表(fcrs)。
[0906]
·
额颞性痴呆评级量表(frs)。
[0907]
·
临床整体印象-改善(cgi-i)。
[0908]
·
神经精神量表(npi)。
[0909]
·
彩色路径描绘测试(ctt)第2部分。
[0910]
·
可重复的成套神经心理状态评估(rbans)。
[0911]
·
德利斯-卡普兰执行功能系统色词干扰测试。
[0912]
·
人际反应指针量表。
[0913]
·
winterlight实验室言语评估(wla)和summerlight实验室言语评估(sla)(仅对于精通英语并且同意和有资格参与任选评估的美国、英国和加拿大参与者)。
[0914]
所有临床结果评估(coa)概要都使用入组群体来呈现。coa分析的全部细节包括总体评分和子量表评分。
[0915]
使用描述统计根据访视来概述coa总体和/或子量表评分的实际结果和自基线的变化值。还将自基线的平均变化值连同加上或减去sd来呈现于图中。
[0916]
使用mmrm方法评估coa终点。因变量是自基线评分至每次基线后访视评估的变化。固定效应包括参与者突变类型和痴呆类型，并且时间点是重复测量数据。对包括但不限于基线pgrn水平、性别和年龄的协变量进行探索。
[0917]
药物基因组学评估
[0918]
在筛选时收集血液样品以提取dna以使得能够通过全基因组测序进行分析，以鉴定预示对研究药物的响应，与进展至更重度疾病状态相关联，与显现ae的易感性相关联，或可增加对疾病生物学的了解和理解的常见和罕见遗传变体。
[0919]
实施例4：用以在肌萎缩性侧索硬化(als)的情况下评估抗分拣蛋白抗体的2期临床研究。
[0920]
这个实施例描述用以评估抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps在als患者中的安全性、耐受性、药物代谢动力学和药物效应动力学的2期研究。
[0921]
研究目标
[0922]
主要目标
[0923]
这个研究的主要目标在于确定用抗分拣蛋白抗体治疗是否会影响als的病理生理学，并且施加临床益处。
[0924]
次要目标
[0925]
这个研究的次要目标是：
[0926]
·
评估抗分拣蛋白抗体在als患者中的安全性和耐受性。
[0927]
·
评估抗分拣蛋白抗体在als患者中的药物代谢动力学和药物效应动力学。
[0928]
研究群体
[0929]
满足以下准则中的任一者的患者被包括在这个研究中：
[0930]
·
展现tdp-43的积累或另一tdp-43相关病变的家族性或散发性als患者。
[0931]
·
携带tdp-43突变的家族性或散发性als患者。
[0932]
·
携带c9orf72六核苷酸重复扩增的家族性或散发性als患者。
[0933]
研究治疗
[0934]
在第1天以及此后每四周(q4w)以60mg/kg的剂量经静脉内向als患者施用抗分拣蛋白抗体。在约60分钟内iv施用抗分拣蛋白抗体。给药溶液制备说明书单独提供在制药手册中。
[0935]
研究评估
[0936]
药物代谢动力学评估
[0937]
通过使用免疫测定测量白血细胞中的游离sort1水平来评估血液中的靶标衔接。
[0938]
药物效应动力学评估
[0939]
测量血清与csf两者中的以下药物效应动力学标志物：
[0940]
·
颗粒体蛋白前体(adipogen免疫测定)。
[0941]
·
神经变性的标志物，例如神经丝轻链(quanterix或roche diagnostics)。
[0942]
·
胶质细胞活化的标志物，例如ykl-40(chi3l)、il-6、gfap(roche diagnostics)。
[0943]
·
tdp-43病变的标志物。
[0944]
此外，mri研究用于评估抗分拣蛋白抗体对脑萎缩(结构性mri)、连接性和游离水/炎症(dti)的影响。
[0945]
实施例5：用以评估单次静脉内剂量的抗分拣蛋白抗体在无症状grn突变携带者(aftd-grn)中以及多次静脉内剂量的抗分拣蛋白抗体在ftd-grn患者中的影响的1b期研究。
[0946]
这个实施例提供实施例2中所述的1b期开放标签研究的结果，所述研究评估了被以60mg/kg施用单次剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps的无症状颗粒体蛋白突变携带者(aftd-grn)以及被以30mg/kg、q2w(每两周)施用三次剂量的抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps的有症状颗粒体蛋白突变携带者(ftd-grn患者)。
[0947]
结果
[0948]
安全性结果
[0949]
未观察到严重不利事件(sae)。所有不利事件都是轻度的。未发生药物或研究停止。
[0950]
血浆pgrn水平
[0951]
如图7中所示，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps的施用增加了aftd-grn携带者(圆圈)和ftd-grn患者(方块)中的血浆pgrn浓度。图7中提供健康志愿者(hv)和ftd患者的中值血浆pgrn浓度以用于比较。在ftd-grn患者中，pgrn水平在整个研究中增加，相比于在ftd-grn患者中观察到的中值基线水平达到多达3倍高，并且达到与健康志愿者类似的水平。这个效应持续给药后多达第56天(在末次剂量之后约4周)。在aftd-grn携带者中观察到类似结果，其中相比于中值基线水平，pgrn的峰值水平达到多达4倍高。
[0952]
csf pgrn水平
[0953]
如图8中所示，在将抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps施用至ftd-grn患者(有症状)或aftd-grn携带者(无症状)之后，csf中pgrn的浓度增加。举例来说，在将抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps施用至ftd-grn患者之后56天时，csf中的中值pgrn浓度(ng/ml)是基线(给药前)pgrn水平的约2倍高。类似地，在将抗分拣蛋白抗体s-60-15.1
[n33t]lalaps施用至aftd-grn携带者之后12天，csf中的中值pgrn浓度是基线(给药前)pgrn水平的约2倍高。图8中提供健康志愿者(hv)中pgrn的浓度以用于比较。
[0954]
ftd-grn患者中的疾病蛋白质特征
[0955]
somascan基于适体的蛋白质组学测定(参见例如candia等人(2017)sci rep 7,14248)用于从ftd-grn患者的csf产生蛋白质特征概况。在这个测定中，分析在用s-60-15.1[n33t]lalaps治疗之前和之后(第57天)ftd-grn患者的csf中超过1,000种蛋白质的相对丰度，以鉴定相关生物标志物。图9显示使用四向恢复图的结果，其中每个数据点代表单个蛋白质。最高水平线以上的所有数据点都是在ftd中上调的蛋白质。最低水平线以下的所有数据点都是在ftd中下调的蛋白质。在由闭合箭头指示的竖直线右侧的所有数据点都是由s-60-15.1[n33t]lalaps上调的蛋白质。在由开放箭头指示的竖直线左侧的所有数据点都是由s-60-15.1[n33t]lalaps下调的蛋白质。因此，右下象限显示s-60-15.1[n33t]lalaps上调在ftd中下调的蛋白质，并且左上象限显示s-60-15.1[n33t]lalaps下调在ftd中上调的蛋白质。因此，s-60-15.1[n33t]lalaps抵抗疾病状态的如这些象限中指示的蛋白质特征，并且鉴于右上和左下象限中数据点(蛋白质)的数量较低，这个效应是高度统计显著的。
[0956]
右下象限中由s-60-15.1[n33t]lalaps上调的蛋白质包括在ftd中下调的溶酶体蛋白质，包括颗粒体蛋白和组织蛋白酶b(ctsb)。左上象限中由s-60-15.1[n33t]lalaps下调的蛋白质包括在ftd中上调的炎症蛋白，诸如骨桥蛋白(spp1)。因此，疾病蛋白质特征的逆转与这些蛋白质原本将在正常状态下所发挥的功能一致。图11a至图11b详细显示健康志愿者以及ftd-grn患者在用s-60-15.1[n33t]lalaps治疗之前和之后(第57天)的脑脊髓液(csf)中ctsb和spp1蛋白的水平。如图11a所显示，相对于健康志愿者(“hv-第0天”)，spp1在未治疗ftd患者(“ftd-第0天，治疗前”)中上调，并且用s-60-15.1[n33t]lalaps进行的治疗显著降低了ftd患者(“ftd
–
第57天，治疗后”)中的spp1水平。相反，如图11b所显示，相对于健康志愿者(“hv-第0天”)，ctsb在未治疗ftd患者(“ftd-第0天，治疗前”)中下调，并且用s-60-15.1[n33t]lalaps进行的治疗显著增加了ftd患者(“ftd
–
第57天，治疗后”)中的ctsb水平。
[0957]
鉴定了图9中所示的四向恢复图的左上象限中的额外蛋白质，并且包括以下炎症蛋白：ywhae(14-3-3蛋白ε)、同种异体移植炎症因子1(aif1)、集落刺激因子1(csf1)、几丁质酶1(chit1)、淋巴细胞抗原86(ly86)和cd86。这些结果显示在ftd中上调的某些炎症蛋白在施用s-60-15.1[n33t]lalaps之后下调或正常化。
[0958]
图9中所示的四向恢复图的右下象限中的另一蛋白质被鉴定为n-乙酰基葡糖胺激酶(nagk)。nagk是一种在ftd中下调的溶酶体蛋白质。这些结果显示在ftd中下调的某些溶酶体蛋白质在施用s-60-15.1[n33t]lalaps之后上调或正常化。
[0959]
神经丝轻链(nfl)水平
[0960]
神经丝轻链(nfl)是包括ftd的神经变性疾病的生物标志物。相较于对照，ftd-grn患者中的nfl水平升高至五至七倍。(meeter等人(2016)ann.clin.transl.neurol.3(8):623-636)。相反，已显示在用在其他神经变性病症中有效的药物治疗约6个月之后，nfl水平降低。(kuhle等人(2019年3月)neurology＝92＝(10)＝e1007-e1015)；olsson等人(2019)journal of neurology 266:2129-2136。)因此，考查在用s-60-15.1[n33t]lalaps治疗之后，ftd-grn患者中的血浆nfl水平。
[0961]
图10a显示来自直至第85天或在第一剂之后约三个月的血液样品可用的五名患者的初步数据。nfl血浆水平使用quinterix的simoa nf-light advantage测定来测量。在图10a中，以相对于基线水平的比率指示了五名患者中的每一者在各种时间点时的nfl血浆水平。图10b显示图10a的数据的几何平均值，从而表明血浆nfl水平降低约14％的初始趋势。
[0962]
结论
[0963]
这个正在进行的1b期研究的结果显示直至60mg/kg的最高剂量水平，抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps是总体上安全的和良好耐受的。此外，结果显示抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps增加了aftd-grn突变携带者和ftd-grn患者的血浆和csf中的pgrn水平，从而使水平恢复至在健康志愿者中观察到的正常范围内。此外，将抗分拣蛋白抗体s-60-15.1[n33t]lalaps施用至ftd-grn患者导致了csf中蛋白质特征的正常化。
[0964]
表11：抗sort1抗体的重链hvr h1序列
[0965][0966]
表12：抗sort1抗体的重链hvr h2序列
[0967]
[0968][0969]
表13：抗sort1抗体的重链hvr h3序列
[0970][0971]
表14：抗sort1抗体的轻链hvr l1序列
[0972]
[0973][0974]
表15：抗sort1抗体的轻链hvr l2序列
[0975][0976]
表16：抗sort1抗体的轻链hvr l3序列
[0977]
[0978][0979]
表17：抗sort1抗体的重链框架1序列
[0980][0981]
表18：抗sort1抗体的重链框架2序列
[0982]
[0983][0984]
表19：抗sort1抗体的重链框架3序列
[0985][0986]
表20：抗sort1抗体的重链框架4序列
[0987][0988]
表21：抗sort1抗体的轻链框架1序列
[0989]
[0990]
表22：抗sort1抗体的轻链框架2序列
[0991][0992]
表23：抗sort1抗体的轻链框架3序列
[0993]
[0994][0995]
表24：抗sort1抗体的轻链框架4序列
[0996][0997]
表25：抗sort1抗体的重链可变区序列
[0998]
[0999][1000]
表26：抗sort1抗体的轻链可变区序列
[1001]
[1002]
[1003]
[1004]
[1005][1006]
表27：分拣蛋白氨基酸序列
[1007]
[1008][1009]
表28：fc结构域氨基酸序列
[1010]
[1011][1012]
表29：全长重链氨基酸序列
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[1014]
[1015][1016]
表30：全长轻链氨基酸序列
[1017]
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