一种同时测定农产品中30种农药残留量的方法与流程

1.本发明涉及一种同时测定农产品中30种农药残留量的方法，属于农药残留检测技术领域。


背景技术：

2.化学农药在农作物病虫害的综合防治中具有举足轻重的地位和作用，但人们长期大量的使用化学农药，造成不易分解的化学成分在动植物体内不断积累，甚至造成严重的食品安全问题，继而威胁人们的身体健康和生命安全。另外，农产品中农残留量的超标，也影响我国农产品的出口创汇，从而影响农业生态效应及经济效益的提高。
3.目前，测定植物类农产品农药残留量测定的方法主要有《gb 23200.113
ꢀ‑
2018食品安全国家标准植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》和《gb23200.116-2019食品安全国家标准植物源性食品中90种有机磷类农药及其代谢物残留量的测定气相色谱法》。上述两种方法的前处理采用固相萃取(solid-phase extraction，简称spe)，需要对spe柱进行活化、洗脱和浓缩等，存在操作不简便、操作繁琐，耗时长和试剂成本比较高的问题。
4.鉴于此，有必要提供一种更为快速、准确和高灵敏的农产品中农药残留量的检测方法，以解决现有技术的不足。


技术实现要素：

5.本发明的目的是克服现有技术的不足，是提供一种同时测定农产品中30 种农药残留量的方法。
6.本发明解决上述问题的技术方案如下：一种同时测定农产品中30种农药残留量的方法，包括如下步骤：
7.步骤1：样品前处理
8.准确称取10.0g
±
0.1g待测农产品样品，置于50ml离心管中，加入10ml 蒸馏水，振荡混匀，冷藏后，准确加入20ml体积分数为0.1％的甲酸乙腈溶液，振荡混匀，冷冻后,加入1.5g氯化钠和0.3g无水硫酸镁，振荡混匀，离心后，取10ml上清液，浓缩至2ml，得到待净化溶液；
9.步骤2：净化处理
10.吸取2ml上述待净化溶液，加入695mg吸附净化试剂，振荡吸附后，再离心，取上清液，过滤后，取滤液，即为上机溶液；
11.步骤3：农药残留量测定
12.取步骤2的上机溶液，用三重四级杆液质联用仪测定，分别得到30种农药的含量。
13.本发明的同时测定农产品中30种农药残留量的方法的原理说明：
14.本发明的步骤1中，采用改进的样品前处理方法，缩短了样品的前处理时间，提高了分析效率，简化了操作流程。
15.本发明的步骤2中，采用改进的吸附净化试剂，可以达到快速净化的效果。
16.本发明的步骤3，采用三重四级杆液质联用仪进行快速定性定量检测，具有高精密、灵敏度和抗干扰能力强等优势，在加标量10ppb级别，回收率依旧能满足《gb/t 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测》的标准规范要求。
17.综上，本发明的待测农产品样品用水溶解，采用酸化乙腈提取，盐析离心，采用快速净化方式，用液质联用质谱仪测定，最后外标法定量分析。
18.本发明的同时测定农产品中30种农药残留量的方法的有益效果是：
19.1、本发明的方法，具有灵敏度高、重复性好和准确性高的优点，可同时实现农产品中30种农药残留量的检测。
20.2、本发明的方法，特别适用于大批量农产品的检测分析，有利于农产品中农药残留量的检测标准的建立，有利于保证农产品产业的发展。
21.3、本发明的方法，操作简单，成本低廉，市场前景广阔，适合规模化推广应用。
22.在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
23.进一步，步骤1中，所述农产品为可食用的、且源于农业的植物类产品。
24.采用上述进一步的有益效果是：本发明主要针对食用的，源于农业的植物类产品，如罗汉果、柑橘类、叶菜类蔬菜、茄果类蔬菜等。
25.进一步，步骤1中，所述振荡混匀的时间均为10s。
26.采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，混匀的效果更好。
27.进一步，步骤1中，所述冷藏的温度为4℃，时间为1h。
28.采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，冷藏的效果更好。
29.进一步，步骤1中，所述离心的转速为4000r/min，时间为5min。
30.采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，离心的效果更好。
31.进一步，步骤2中，所述吸附净化试剂由150mg乙二胺-n-丙基硅烷、 45mg的石墨化碳黑和500mg硫酸镁组成。
32.采用上述进一步的有益效果是：在样品前处理的净化中，可以通过加入吸附剂用于吸附样品中的部分基质，能够有效降低基质效应。石墨化碳黑主要是吸附产品中的色素；硫酸镁主要为吸水作用，使乙腈层析。采用上述原料组成的吸附净化试剂，吸附净化的效果更好。
33.进一步，步骤2中，所述振荡吸附的时间为2min。
34.采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，吸附的效果更好。
35.进一步，步骤2中，所述离心的转速为4000r/min，时间为5min。
36.采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，离心的效果更好
37.进一步，步骤2中，所述过滤采用孔径为0.22μm的滤膜。
38.采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数的滤膜，过滤的效果更好。
39.进一步，步骤3中，所述三重四级杆液质联用仪的测定参数为：
40.(1)色谱条件：
41.色谱柱：agilent zorbax eclipse plus-c18，规格为2.1mm
×
100mm， 1.8μm，柱温：35℃；洗针溶液：乙腈和水按体积比为10:90的混合液；洗针时间：3s；流动相a为含体积分数为0.1％甲酸和0.1mm甲酸胺的水溶液，流动相b为0.1％甲酸乙腈；流速为0.4ml/min；
进样量为1μl-5μl；梯度洗脱为:0-10min，流动相中流动相a和流动相b的体积比为90:10； 10min-12min，流动相中流动相a和流动相b的体积比为5:95；柱压为1000bar；停止时间：12min；后运行时间：3min；
42.(2)质谱条件
43.干燥气温度：250℃；干燥气流量：11l/min；雾化气压力：40psi；毛细管电压：3500v；鞘流气温度：350℃；鞘流气流速：12l/min。
44.采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，可以保证目标物无丢失，完全进入四级杆质量轴进行分析。
45.进一步，步骤3中，所述30种农药是指霜霉威、乙酰甲胺磷、多菌灵、吡虫啉、啶虫脒、三环唑、莠灭净、恶霜灵、甲基硫菌灵、嘧霉胺、甲霜灵、异丙威、三唑醇、烯酰吗啉、多效唑、杀扑磷、乙霉威、缬霉威、腈菌唑、嘧菌酯、粉锈宁、戊唑醇、氟硅唑、己唑醇、异丙甲草胺、烯唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑、氟苯脲和毒死蜱。
46.采用上述进一步的有益效果是：上述30个指标均为农产品中的一些高风险指标，对上述30种物质同时进行检测，更能进一步农产品的安全情况，从而建立快速、准确的检测方法。
附图说明
47.图1为本发明的实施例中霜霉威(propamocarb)的mrm色谱图。
48.图2为本发明的实施例中乙酰甲胺磷(acephate)的mrm色谱图。
49.图3为本发明的实施例中多菌灵(carbendazim)的mrm色谱图。
50.图4为本发明的实施例中吡虫啉(imidacloprid)的mrm色谱图。
51.图5为本发明的实施例中啶虫脒(吡虫清)acetamiprid的mrm色谱图。
52.图6为本发明的实施例中三环唑(tricyclazole)的mrm色谱图
53.图7为本发明的实施例中莠灭净(ametryn)的mrm色谱图。
54.图8为本发明的实施例中恶霜灵(oxadixyl)的mrm色谱图。
55.图9为本发明的实施例中甲基硫菌灵(thiophanate methyl)的mrm色谱图。
56.图10为本发明的实施例中嘧霉胺(pyrimathanil)的mrm色谱图。
57.图11为本发明的实施例中甲霜灵(metalaxyl)的mrm色谱图。
58.图12为本发明的实施例中异丙威(isoprocarb)的mrm色谱图。
59.图13为本发明的实施例中三唑醇(羟锈宁)(triadimenol)的mrm色谱图。
60.图14为本发明的实施例中烯酰吗啉(dimethomorph)的mrm色谱图。
61.图15为本发明的实施例中多效唑(paclobutrazol)的mrm色谱图。
62.图16为本发明的实施例中杀扑磷(methidathion)的mrm色谱图。
63.图17为本发明的实施例中乙霉威(diethofencarb)的mrm色谱图。
64.图18为本发明的实施例中缬霉威(iprovalicarb)的mrm色谱图。
65.图19为本发明的实施例中腈菌唑(灭克落)(myclobutanil)的mrm 色谱图
66.图20为本发明的实施例中嘧菌酯(azoxystrobin)的mrm色谱图。
67.图21为本发明的实施例中粉锈宁(三唑酮)(triadimefon)的mrm色谱图。
68.图22为本发明的实施例中戊唑醇(tebuconazole)的mrm色谱图
69.图23为本发明的实施例中氟硅唑(flusilazole)的mrm色谱图。
70.图24为本发明的实施例中己唑醇(hexaconazole)的mrm色谱图。
71.图25为本发明的实施例中异丙甲草胺(metolachlor)的mrm色谱图。
72.图26为本发明的实施例中烯唑醇(diniconazole)的mrm色谱图。
73.图27为本发明的实施例中丙环唑(propiconazole)的mrm色谱图。
74.图28为本发明的实施例中苯醚甲环唑(difenoconazole)的mrm色谱图。
75.图29为本发明的实施例中氟苯脲(teflubenzuron)的mrm色谱图。
76.图30为本发明的实施例中毒死蜱(chloroyrifos)的mrm色谱图。
具体实施方式
77.以下结合具体附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
78.本实施例采用的试剂和材料有：乙腈(色谱级)、甲酸(质谱级)、甲酸胺(质谱级)、无水硫酸镁(ar)、氯化钠(优级纯)、农药残留净化试剂盒、微孔过滤膜0.22微米、30种农药残留标准溶液(霜霉威、乙酰甲胺磷、多菌灵、吡虫啉、啶虫脒、三环唑、莠灭净、恶霜灵、甲基硫菌灵、嘧霉胺、甲霜灵、异丙威、三唑醇、烯酰吗啉、多效唑、杀扑磷、乙霉威、缬霉威、腈菌唑、嘧菌酯、粉锈宁、戊唑醇、氟硅唑、己唑醇、异丙甲草胺、烯唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑、氟苯脲、毒死蜱)。
79.本实施例使用的仪器有：液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源 (esi)，分析天平：感量0.1mg和0.01g，高速组织捣碎机：转速不低于 20000r/min，离心管50ml，离心机：最大转速为4200r/min，移液器：5ml 和1ml，浓缩仪。
80.本实施例混合储备标样有：吸取30种用乙腈稀释成0.1mg/l的储备标样，30种农药标样(霜霉威、乙酰甲胺磷、多菌灵、吡虫啉、啶虫脒、三环唑、莠灭净、恶霜灵、甲基硫菌灵、嘧霉胺、甲霜灵、异丙威、三唑醇、烯酰吗啉、多效唑、杀扑磷、乙霉威、缬霉威、腈菌唑、嘧菌酯、粉锈宁、戊唑醇、氟硅唑、己唑醇、异丙甲草胺、烯唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑、氟苯脲、毒死蜱)均购自德国dr ehrenstorfer公司。
81.本实施例30种农药混合标准曲线的制作：分别吸取混合储备标样 0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml和20.0ml于100ml容量瓶中，用乙腈定容，配置成0.0005mg/l、0.001mg/l、0.002mg/l、0.005mg/l、0.01mg/l 和0.02mg/l的标准曲线溶液。
82.本实施例的同时测定柑橘中30种农药残留量的方法，包括如下步骤：
83.步骤1：样品前处理
84.准确称取10.0g
±
0.1g待测柑橘样品，置于50ml离心管中，加入10ml 蒸馏水，振荡混匀10s，于4℃冷藏1h后，准确加入20ml体积分数为0.1％的甲酸乙腈溶液，振荡混匀10s，冷冻后,加入1.5g氯化钠和0.3g无水硫酸镁，振荡混匀10s，采用转速4000r/min离心5min后，取10ml上清液，浓缩至2ml，得到待净化溶液。
85.步骤2：净化处理
86.吸取2ml上述待净化溶液，加入695mg吸附净化试剂，振荡吸附2min 后，再转速4000r/min离心5min，取上清液，过孔径为0.22μm的滤膜后，取滤液，即为上机溶液。其中，所述吸附净化试剂由150mg乙二胺-n-丙基硅烷、45mg的石墨化碳黑和500mg硫酸镁组成。
87.步骤3：农药残留量测定
88.取步骤2的上机溶液，用三重四级杆液质联用仪测定，分别得到30种农药的含量。三重四级杆液质联用仪的测定参数为：
89.(1)色谱条件：
90.色谱柱：agilent zorbax eclipse plus-c18，规格为2.1mm
×
100mm， 1.8μm，柱温：35℃；洗针溶液：乙腈和水按体积比为10:90的混合液；洗针时间：3s；流动相a为含体积分数为0.1％甲酸和0.1mm甲酸胺的水溶液，流动相b为0.1％甲酸乙腈；流速为0.4ml/min；进样量为1μl-5μl；梯度洗脱为:0-10min，流动相中流动相a和流动相b的体积比为90:10； 10min-12min，流动相中流动相a和流动相b的体积比为5:95；柱压为1000bar；停止时间：12min；后运行时间：3min；
91.(2)质谱条件
92.干燥气温度：250℃；干燥气流量：11l/min；雾化气压力：40psi；毛细管电压：3500v；鞘流气温度：350℃；鞘流气流速：12l/min。
93.霜霉威的mrm色谱图，如图1所示；乙酰甲胺磷的mrm色谱图，如图2 所示；多菌灵的mrm色谱图，如图3所示；吡虫啉的mrm色谱图，如图4所示；啶虫脒(吡虫清)的mrm色谱图，如图5所示；三环唑的mrm色谱图，如图6所示；莠灭净的mrm色谱图，如图7所示；恶霜灵的mrm色谱图，如图8所示；甲基硫菌灵的mrm色谱图，如图9所示；嘧霉胺的mrm色谱图，如图10所示；甲霜灵的mrm色谱图，如图11所示；异丙威的mrm色谱图，如图12所示；三唑醇(羟锈宁)的mrm色谱图，如图13所示；烯酰吗啉的 mrm色谱图，如图14所示；多效唑的mrm色谱图，如图15所示；杀扑磷的 mrm色谱图，如图16所示；乙霉威的mrm色谱图，如图17所示；缬霉威的 mrm色谱图，如图18所示；腈菌唑(灭克落)的mrm色谱图，如图19所示；嘧菌酯的mrm色谱图如图20所示；粉锈宁(三唑酮)的mrm色谱图如图21 所示；戊唑醇的mrm色谱图，如图22所示；氟硅唑的mrm色谱图，如图23 所示；己唑醇的mrm色谱图，如图24所示；异丙甲草胺的mrm色谱图，如图25所示；烯唑醇的mrm色谱图，如图26所示；丙环唑的mrm色谱图，如图27所示；苯醚甲环唑的mrm色谱图，如图28所示；氟苯脲的mrm色谱图，如图29所示；毒死蜱的mrm色谱图，如图30所示。
94.质谱仪检测参数条件：各农药组分监测离子对、定量离子对、去簇电压及碰撞能量见表1。
95.表1 30种农药母离子，定量及定性离子表
96.97.[0098][0099]
检测方法证实
[0100]
通过一系列的比对分析实验，该检测方法前处理便捷，耗时较短，检测分析时间较短，各物质出峰及分离度均能满足要求。方法证实过程如下：
[0101]
(1)线性：标准工作曲线
[0102]
标准溶液在0.0005mg/l、0.001mg/l、0.002mg/l、0.005mg/l、0.01mg/l 和0.02mg/l范围内呈线性线性回归方程的相关系数大于0.99，方程及相关系数见表2。由表2可知，各农药残留量浓度标准工作曲线，线性相关性良好。
[0103]
表2
[0104]
[0105][0106]
[0107]
(2)回收率
[0108]
加入200.0μl浓度为200.0ng/ml标准溶液，作为低浓度加标，样品称样量为1g，定容体积(v)为4ml。样品中低浓度加标回收率,回收率在 60％-120％，满足相关标准要求，见下表3。
[0109]
表3
[0110]
[0111][0112]
(3)检出限/定量限
[0113]
检出限/定量限见表4。由表4可知，本发明的方法具有较高的灵敏度。
[0114]
表4
[0115]
[0116]
[0117][0118]
由此可见，本发明的方法，具有灵敏度高、重复性好和准确性高的优点，可同时实现农产品中30种农药残留量的检测。
[0119]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。