MAdCAM拮抗剂的剂量方案的制作方法

madcam拮抗剂的剂量方案
1.本技术是申请号为201680014443.3的中国发明专利申请(其申 请日为2016年1月6日，发明名称为“madcam拮抗剂的剂量方案”) 的分案申请，原申请为国际申请号为pct/ib2016/050047的中国国家 阶段申请，该国际申请要求2015年1月9日提交的美国临时申请第 62/101,877号、2015年12月4日提交的美国临时申请第62/263,197 号和2015年12月7日提交的美国临时申请第62/263,910号的优先权， 所述临时申请的全部内容特此以引用的方式并入。
发明领域
2.本发明涉及madcam拮抗剂抗体的剂量方案。
3.发明背景
4.粘膜地址素细胞粘附分子(madcam；也称为地址素)是细胞粘附 受体免疫球蛋白超家族的成员。淋巴细胞归巢于胃肠道的特化淋巴组 织和粘膜部位的选择性由madcam的内皮表达决定。madcam只 在有组织的肠淋巴组织(如派尔结(peyer’s patch)和肠系膜淋巴结)的 高内皮小静脉的细胞表面上表达，但也在其它淋巴器官，如胰腺、胆 囊和脾小静脉及脾白髓的边缘窦内表达。
5.虽然madcam在肠道免疫监视中起着生理作用，但似乎在慢性 胃肠道炎症的情况下会促进炎症性肠病中的过度淋巴细胞外渗。 tnfα和其它促炎性细胞因子增加内皮madcam表达并且，在取自 克罗恩氏病(crohn’s disease)和溃疡性结肠炎(uc)患者的活检样本中， 炎症部位的madcam表达病灶性增加大约2-3倍。已经在结肠炎实 验模型中观察到表达升高的相似模式。在炎性病状的其它临床前模 型，如胰岛素依赖性糖尿病移植物抗宿主病、慢性肝病、炎症性脑病 和胃炎中，也存在胎儿madcam表达再次唤醒和活化α4β
7
淋巴细胞 参与疾病发病机制。在这些炎性模型以及半抗原介导的(例如，tnbs、 dss等)或过继转移(cd4

cd45rb
高
)小鼠结肠炎模型中，阻断α4β
7
淋巴细胞与madcam结合的大鼠抗小鼠madcam单克隆抗体 (mab)，即meca-367，减少淋巴细胞募集、组织外渗、炎症和疾病 严重度。
6.wo2005067620公开了madcam拮抗剂抗体及其用途。 wo2006096490公开了madcam拮抗剂抗体及其组合物。


技术实现要素：

7.本发明提供了如下所述的实施方案，其中每一个由e表示：
8.e1.一种用于治疗易感或诊断患有与madcam表达增加相关的 病状的患者的方法，其包括向所述患者施用介于约5mg和约150mg 之间的初始剂量的madcam拮抗剂抗体。
9.e2.一种用于治疗易感或诊断患有与madcam表达增加相关的 病状的患者的方法，其包括向所述患者施用介于约5mg和少于约 150mg之间的初始剂量的madcam拮抗剂抗体。
10.e3.一种用于治疗易感或诊断患有溃疡性结肠炎(uc)的患者的 方法，其包括向所述患者施用介于约5mg和约150mg之间的初始剂 量的madcam拮抗剂抗体。
11.e4.一种用于治疗易感或诊断患有uc的患者的方法，其包括向 所述患者施用介于约5mg和少于约150mg之间的初始剂量的 madcam拮抗剂抗体。
12.下面阐述了其它实施方案，其中实施方案用“e”表示。
13.e5.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述患 者施用介于约7.5mg和约75mg之间的初始剂量的madcam拮抗剂 抗体。
14.e6.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述患 者施用介于约20mg和约75mg之间的初始剂量的madcam拮抗剂 抗体。
15.e7.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述患 者施用介于约22.5mg和约75mg之间的初始剂量的madcam拮抗 剂抗体。
16.e8.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述患 者施用介于约25mg和约75mg之间的初始剂量的madcam拮抗剂 抗体。
17.e9.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述患 者施用约50mg初始剂量的madcam拮抗剂抗体。
18.e10.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于约50mg和约150mg之间的初始剂量的madcam拮抗 剂抗体。
19.e11.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于约75mg和约125mg之间的初始剂量的madcam拮抗 剂抗体。
20.e12.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用约100mg初始剂量的madcam拮抗剂抗体。
21.e13.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中所述 madcam拮抗剂抗体按以下范围给药，所述范围的下限选自由以下 组成的组：约5mg、约6mg、约7mg、约7.5mg、约8mg、约9mg、 约10mg、约12mg、约15mg、约20mg、约22.5mg、约25mg、约30mg、 约35mg、约45mg、约50mg、约55mg、约65mg、约65mg、约70mg、 约75mg、约80mg、约85mg、约90mg约95mg、约100mg，且所述 范围的上限选自由以下组成的组：约22.5mg、约25mg、约30mg、 约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、 约70mg、少于约75mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约 95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、约120mg、125mg、 约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、少于约150mg和约150mg。
22.e14.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用一个或多个后续剂量的madcam拮抗剂抗体。
23.e15.如e14中所阐述的方法，其中按与所述初始剂量大约相同 的量或少于所述初始剂量的量施用所述一个或多个后续剂量的所述 madcam拮抗剂抗体。
24.e16.如e14中所阐述的方法，其中按与所述初始剂量大约相同 的量施用所述一个或多个后续剂量的所述madcam拮抗剂抗体。
25.e17.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于约5mg和约150mg之间的后续剂量的madcam拮抗 剂抗体。
26.e18.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于约20mg和约75mg之间的后续剂量的madcam拮抗 剂抗体。
27.e19.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于约22.5mg和约75mg之间的后续剂量的madcam拮 抗剂抗体。
28.e20.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于约25mg和约75mg之间的后续剂量的madcam拮抗 剂抗体。
29.e21.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用约50mg后续剂量的madcam拮抗剂抗体。
30.e22.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于约50mg和约150mg之间的后续剂量的madcam拮抗 剂抗体。
31.e23.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于约75mg和约125mg之间的后续剂量的madcam拮抗 剂抗体。
32.e24.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用约100mg后续剂量的madcam拮抗剂抗体。
33.e25.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括按以下 范围向所述患者施用后续剂量的madcam拮抗剂抗体就，所述范围 的下限选自由以下组成的组：约5mg、6mg、约7mg、约7.5mg、约 8mg、约9mg、约10mg、约12mg、约15mg、约20mg、约22.5mg、 约25mg、约30mg、约35mg、约45mg、约50mg、约55mg、约65mg、 约65mg约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg 和约100mg，且所述范围的上限选自由以下组成的组：22.5mg、约 25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、 约60mg、约65mg、约70mg、少于约75mg、约75mg、约80mg、约 85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、 约120mg、125mg、约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、少 于约150mg和约150mg。
34.e26.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或少于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约1周至约12周提供。
35.e27.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或少于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约4周至约12周提供。
36.e28.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或低于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约2周至约8周提供。
37.e29.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或低于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约4周至约8周提供。
38.e30.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或低于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约4周提供。
39.e31.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或低于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约1个月提供。
40.e32.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或低于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约6周提供。
41.e33.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或低于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约8周提供。
42.e34.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中按与所述 初始剂量大约相同或低于所述初始剂量的量施用后续剂量，所述后续 剂量在所述初始剂量后约2个月提供。
43.e35.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约3％。
44.e36.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约5％。
45.e37.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约10％。
46.e38.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约11％。
47.e39.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约12％。
48.e40.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约14％。
49.e41.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约15％。
50.e42.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约16％。
51.e43.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约18％。
52.e44.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约20％。
53.e45.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在初始剂 量后约12周，如使用mayo评分所测定，所观察到的临床缓解率为 至少约23％。
54.e46.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在所述初 始剂量后约12周的临床反应率为至少约28％。
55.e47.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在所述初 始剂量后约12周的所述临床反应率为至少约30％。
56.e48.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在所述初 始剂量后约12周的所述临床反应率为至少约35％。
57.e49.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在所述初 始剂量后约12周的所述临床反应率为至少约38％。
58.e50.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在所述初 始剂量后约12周所述的临床反应率为至少约40％。
59.e51.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在所述初 始剂量后约12周的所述临床反应率为至少约45％。
60.e52.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中在所述初 始剂量后约12周的所述临床反应率为至少约50％。
propionate)、可待因(codeine)、樟脑 (camphor)、地塞米松(dexamethasone)、多虑平(doxepin)、狄诺塞麦 (denosumab)、双醋瑞因(diacerein)、双氯芬酸(diclofenac)、二氟尼柳 (diflunisal)、地夫可特(deflazacort)、双嘧达莫(dipyridamole)、二氢可 待因(dihydrocodeine)、地拉考昔(deracoxib)、度洛西汀(duloxetine)、 etrolizumab、依那西普(etanercept)、依法利珠单抗(efalizumab)、依托 度酸(etodolac)、依库丽单抗(eculizumab)、依托昔布(etoricoxib)、氟西 汀(fluoxetine)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、联苯乙酸(felbinac)、非诺 洛芬(fenoprofen)、芬太尼(fentanyl)、戈利木单抗(golimumab)、加巴 喷丁(gabapentin)、hmpl-004、氢化吗啡酮(hydromorphone)、氢可酮 (hydrocodone)、消炎痛(indomethacin)、布洛芬(ibuprofen)、英夫利昔 (infliximab)、白介素-2(interleukin-2)、丙咪嗪(imipramine)、iberogast、 水杨酸咪唑(imidazole salicylate)、艾拉莫德(iguratimod)、免疫球蛋白、 氢化可的松(hydroxycortisone)、羟基脲(hydroxyurea)、透明质酸 (hylauronic acid)、kappaproct、krp-203、洛哌丁胺(loperamide)、氯诺 昔康(lornoxicam)、鲁米昔布(lumericoxib)、来氟米特(leflunomide)、 利克飞龙(licofelone)、罗美昔布(lumiracoxib)、利多卡因(lidocaine)、 甲基强的松龙6-巯基嘌呤(methylprednisolone 6-mercaptopurine)、甲氨 蝶呤、甲硝哒唑(metronidazole)、美沙拉嗪(mesalamine)、褪黑激素 (melatonin)、美沙拉嗪、美洛昔康(meloxicam)、米索前列醇 (misoprostol)、水杨酸甲酯(methyl salicylate)、甲氧萘丙酸钠(naproxensodium)、尼古丁(nicotine)、去甲替林(nortriptyline)、萘普酮 (nambumetone)、奈帕芬胺(nepafenac)、去甲肾上腺素(noradrenaline)、 降肾上腺素(norepinephrine)、奥沙拉秦(olsalazine)、om-89、otzela、 奥普瑞白介素(oprelvekin)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥瑞珠单抗 (ocrelizumab)、羟考酮(oxycodone)、羟吗啡酮(oxymorphone)、强的松 (prednisone)、强的松龙(prednisolone)、磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)、帕罗西汀(paroxetine)、紫杉醇(paclitaxel)、prosorba、培鲁 比洛芬(pelubiprofen)、吡罗昔康(piroxicam)、培那西普(pegsunercept)、 普那卡生(pralnacasan)、普林贝瑞(prinaberel)、帕瑞昔布(parecoxib)、普 瑞巴林(pregabalin)、利美索龙(rimexolone)、利塞膦酸钠(risedronatesodium)、罗格列酮(rosiglitazone)、罗非昔布(rofecoxib)、罗哌卡因 (ropivacaine)、瑞波西汀(reboxetine)、(s,s)-瑞波西汀、雷马空 (reumacon)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、柳氮磺吡啶洛哌丁胺 (sulfasalazineloperamide)、舍曲林(sertraline)、西地那非(sildenafil)、曲 马多(tramadol)、去炎松(triamcinolone)、他克莫司(tacrolimus)、萨力 度胺(thalidomide)、托法替尼(tofacitinib)、猪鞭虫(trichuris suis)、曲唑 酮(trazodone)、他扎罗汀(tazarotene)、替加色罗(tegaserod)、托珠单抗 (tocilizumab)、替西罗莫司(temsirolimus)、替诺昔康(tenoxicam)、伐地 昔布(valdecoxib)、维多珠单抗(vedolizumab)、托法替尼(xeljanz)、唑 吡坦(zolpidem)、唑来膦酸(zoledronic acid)、153sm-edtmp，及 sk-1306x和10rt1抗体、cp-481715、abn-912、mln-3897、 humax-il-15、ra-1、org-37663、org 39141、aed-9056、amg-108、gw-274150、at-001、681323(gsk)k-832、r-1503、de-096、cpn10、 thc cbd(gw pharma)、856553(gsk)、ren-1869、mm-093、 scio-469、abt-874、lenkovax、ly-2127399、tru-015、kc-706 和tak-715、pg 760564、vx-702、pmx-53、cf-101、tgaav-tnfr:fc、 r-788、pmi-001、s-[2-[(1-亚氨乙基)氨
基]乙基]-l-高半胱氨酸、 s-[2-[(1-亚氨乙基)-氨基]乙基]-4,4-二氧代-l-半胱氨酸、s-[2-[(1-亚氨 乙基)氨基]乙基]-2-甲基-l-半胱氨酸、(2s,5z)-2-氨基-2-甲基-7-[(1-亚 氨乙基)氨基]-5-庚烯酸、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)-丁基] 硫代]-5-氯-3-吡啶甲腈、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基] 硫代]-4-氯苯甲腈、(2s,4r)-2-氨基-4-[[2-氯-5-(三氟甲基)苯基]硫代]-5
‑ꢀ
噻唑丁醇、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-6-(三氟 甲基)-3吡啶甲腈、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基]硫 代]-5-氯苯甲腈、n-[4-[2-(3-氯苄基氨基)乙基]苯基]噻吩-2-甲脒、 n-[({2-[4-(2-乙基-4,6-二甲基-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)苯基]乙基} 氨基)-羰基]-4-甲基苯磺酰胺、4-[(1s)-1-({[5-氯-2-(3-氟苯氧基)吡啶-3
‑ꢀ
基]羰基}氨基)乙基]苯甲酸和1-(3-联苯-4-基甲基-4-羟基-色满-7-基)
‑ꢀ
环戊烷羧酸。
[0074]
e66.如e65中所阐述的方法，其中所述患者同时用madcam 抗体和其它药剂治疗。
[0075]
e67.如e65中所阐述的方法，其中所述患者依序用madcam 抗体和其它药剂治疗。
[0076]
e68.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中所述 madcam拮抗剂抗体包含轻链和重链，所述轻链的cdr是根据seqid no:3的cdr，并且所述重链的cdr是根据seq id no:4的cdr。
[0077]
e69.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中所述 madcam拮抗剂抗体包含seq id no:3和seq id no:4。
[0078]
e70.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中所述madcam拮抗剂抗体包含seq id no:1和seq id no:2。
[0079]
e71.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用介于22.5mg和约75mg之间的初始剂量的madcam拮抗 剂抗体，接着按与所述初始剂量大约相同的量施用一个或多个后续剂 量的madcam拮抗剂抗体，其中所述一个或多个后续剂量是约每4 周一次的剂量。
[0080]
e72.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其包括向所述 患者施用约50mg初始剂量的madcam拮抗剂抗体，接着按与所述 初始剂量大约相同的量施用一个或多个后续剂量的madcam拮抗剂 抗体，其中所述一个或多个后续剂量是约每4周一次的剂量。
[0081]
e73.如实施方案e1-e71中的任一个所阐述的方法，其包括向所 述患者施用约40mg初始剂量的madcam拮抗剂抗体，接着按与所 述初始剂量大约相同的量施用一个或多个后续剂量的madcam拮抗 剂抗体，其中所述一个或多个后续剂量是约每4周一次的剂量。
[0082]
e74.如实施方案e1-e71中的任一个所阐述的方法，其包括向所 述患者施用约30mg初始剂量的madcam拮抗剂抗体，接着按与所 述初始剂量大约相同的量施用一个或多个后续剂量的madcam拮抗 剂抗体，其中所述一个或多个后续剂量是约每4周一次的剂量。
[0083]
e75.如实施方案e1-e71中的任一个所阐述的方法，其包括向所 述患者施用介于约50mg和约150mg之间的初始剂量的madcam拮 抗剂抗体，接着按与所述初始剂量大约相同的量施用一个或多个后续 剂量的madcam拮抗剂抗体，其中所述一个或多个后续剂量是约每 8周一次的剂量。
[0084]
e76.如实施方案e1-e71中的任一个所阐述的方法，其包括向所 述患者施用介于约75mg和约125mg之间的初始剂量的madcam拮 抗剂抗体，接着按与所述初始剂量大约相同的量施用一个或多个后续 剂量的madcam拮抗剂抗体，其中所述一个或多个后续剂量是约
每 8周一次的剂量。
[0085]
e77.如实施方案e1-e71中的任一个所阐述的方法，其包括向所 述患者施用约100mg初始剂量的madcam拮抗剂抗体，接着按与所 述初始剂量大约相同的量施用一个或多个后续剂量的madcam拮抗 剂抗体，其中所述一个或多个后续剂量是约每8周一次的剂量。
[0086]
e78.如前述实施方案中的任一个所阐述的方法，其中与 madcam表达增加相关的所述病状选自由以下组成的组：溃疡性结 肠炎(uc)、克罗恩氏病(cd)、肠易激综合征(ibs)、肠易激病(ibd)、 类风湿性关节炎、反应性关节炎、骨关节炎、感染性关节炎、银屑病 性关节炎、多关节炎、幼年型关节炎、幼年型类风湿性关节炎、幼年 型反应性关节炎、幼年型银屑病性关节炎、疼痛、纤维化、纤维肌痛 综合征、强直性脊柱炎、未分化脊柱关节病、幼年发作型脊椎关节炎、 银屑病、痛风、卡斯尔曼病(castleman's disease)、败血症、i型糖尿病、 ii型糖尿病、多发性骨髓瘤和肾细胞癌。
[0087]
e79.一种用于如实施方案e1-e78中的任一个所阐述的方法中的 madcam拮抗剂抗体。
[0088]
e80.一种药物组合物，其包含如e79中所阐述的抗体。
[0089]
e81.如e80中所阐述的药物组合物，其包含madcam拮抗剂 抗体，所述madcam拮抗剂抗体呈供溶解的干燥配制物，如冻干粉、 冷冻-干燥粉或无水浓缩物。
[0090]
e82.如e80中所阐述的药物组合物，其包含呈液体配制物的 madcam拮抗剂抗体。
[0091]
e83.如e79中所阐述的madcam拮抗剂抗体在制备用于治疗 选自由以下组成的组的病状的药剂中的用途：溃疡性结肠炎(uc)、克 罗恩氏病(cd)、肠易激综合征(ibs)、肠易激病(ibd)、乳糜泻、原发 性硬化性胆管炎、胆道疾病、类风湿性关节炎、反应性关节炎、骨关 节炎、感染性关节炎、银屑病性关节炎、多关节炎、幼年型关节炎、 幼年型类风湿性关节炎、幼年型反应性关节炎、幼年型银屑病性关节 炎、疼痛、纤维化、纤维肌痛综合征、强直性脊柱炎、未分化脊柱关 节病、幼年发作型脊椎关节炎、银屑病、痛风、卡斯尔曼病、败血症、 i型糖尿病、ii型糖尿病、多发性骨髓瘤和肾细胞癌。
[0092]
e84.如e79中所阐述的madcam拮抗剂抗体在制备用于治疗 溃疡性结肠炎的药剂中的用途。
[0093]
e85.如e79中所阐述的madcam拮抗剂抗体在制备用于治疗 克罗恩氏病的药剂中的用途。
[0094]
e86.根据实施方案e1-e78中任一项所述的方法，其还包括：
[0095]
(a)测量来自所述患者的生物样品中的生物标志物的水平，其中 所述生物标志物为：(i)选自由以下组成的组的生物标志物中的任一 种或组合：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、ar、chi3l1、cxcl1、 cxcl11、cxcl13、cxcl9.dkk-1、egf、en-rage、epo、fgf-21、 gh、il-17c、il-6、il-7、il-8、mip-1α、mmp-1、mmp-10、mmp-12、 mmp-3、nt-pro-bnp、osm、ptpn22、ptx3、reg-4、retn、 tnfrsf4、trance和vegf-a；(ii)ccr9；(iii)循环α4β7 细胞； 或(iv)前述物质的任何组合；并且
[0096]
(b)将所述水平与对照进行比较；
[0097]
使得与所述对照相比，所述生物标志物水平的变化预示在所述病 状中有益的治疗反应。
[0098]
e87.一种用于评估在施用madcam拮抗剂抗体之后溃疡性结 肠炎(uc)患者中有益
反应的存在或不存在的方法，其包括：
[0099]
(a)测量来自所述患者的生物样品中的生物标志物的水平，其中所 述生物标志物为：(i)选自由以下组成的组的生物标志物中的任一种或 组合：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、ar、chi3l1、cxcl1、 cxcl11、cxcl13、cxcl9.dkk-1、egf、en-rage、epo、fgf-21、 gh、il-17c、il-6、il-7、il-8、mip-1α、mmp-1、mmp-10、mmp-12、 mmp-3、nt-pro-bnp、osm、ptpn22、ptx3、reg-4、retn、 tnfrsf4、trance和vegf-a；(ii)ccr9；(iii)循环α4β7 细胞； 或(iv)前述物质的任何组合；并且
[0100]
(b)将所述水平与对照进行比较；
[0101]
其中与所述对照相比，生物标志物水平的变化预示在所述患者中 的有益反应。
[0102]
e88.一种用于鉴定将受益于用madcam拮抗剂抗体治疗的溃 疡性结肠炎(uc)患者的方法，其包括：
[0103]
(a)测量来自所述患者的生物样品中的生物标志物的水平，其中 所述生物标志物为：(i)选自由以下组成的组的生物标志物中的任一 种或组合：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、ar、chi3l1、cxcl1、 cxcl11、cxcl13、cxcl9.dkk-1、egf、en-rage、epo、fgf-21、 gh、il-17c、il-6、il-7、il-8、mip-1α、mmp-1、mmp-10、mmp-12、 mmp-3、nt-pro-bnp、osm、ptpn22、ptx3、reg-4、retn、 tnfrsf4、trance和vegf-a；(ii)ccr9；(iii)循环α4β7 细胞； 或(iv)前述物质的任何组合；
[0104]
(b)将所述水平与对照进行比较；其中与所述对照相比，生物标 志物水平的变化预示所述患者将受益于用madcam拮抗剂抗体治 疗；并且
[0105]
(c)选择所述患者以供用madcam拮抗剂抗体治疗。
[0106]
e89.根据实施方案e86-e88中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物选自由以下组成的组：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、ar、chi3l1、cxcl1、cxcl11、cxcl13、cxcl9.dkk-1、egf、 en-rage、epo、fgf-21、gh、il-17c、il-6、il-7、il-8、mip-1α、 mmp-1、mmp-10、mmp-12、mmp-3、nt-pro-bnp、osm、ptpn22、 ptx3、reg-4、retn、tnfrsf4、trance、vegf-a及前述物质 的任何组合。
[0107]
e90.根据实施方案e86-e89中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物选自由以下组成的组：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、 chi3l1、cxcl1、cxcl13、cxcl9.dkk-1、egf、en-rage、epo、 il-17c、il-6、il-7、mip-1α、mmp-1、mmp-10、mmp-12、mmp-3、 nt-pro-bnp、ptpn22、ptx3、retn、tnfrsf4、trance及前述 物质的任何组合。
[0108]
e91.根据实施方案e86-e90中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物选自由以下组成的组：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、 ar、cxcl11、cxcl13、epo、fgf-21、gh、il-6、il-7、il-8、 mmp-1、mmp-10、mmp-3、osm、ptpn22、reg-4、retn、vegf-a 及前述物质的任何组合。
[0109]
e92.根据实施方案e86-e91中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物选自由以下组成的组：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、 cxcl13、epo、il-6、il-7、mmp-1、mmp-10、mmp-3、ptpn22、 retn及前述物质的任何组合。
[0110]
e93.根据实施方案e86-e92中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物选自由以下组成的组：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、 cxcl13、il-7、ptpn22、retn及前述物质的任何组合。
[0111]
e94.根据实施方案e86-e93中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物选自由以
下组成的组：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp及 前述物质的任何组合。
[0112]
e95.根据实施方案e86-e94中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物为：(i)粪钙卫蛋白、smadcam或hscrp；(ii)ccr9；(iii) 循环α4β7 细胞；或(iv)前述物质的任何组合。
[0113]
e96.根据实施方案e86-e95中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物为粪钙卫蛋白，并且其中与对照相比，粪钙卫蛋白水平的降 低预示所述患者将受益于用madcam拮抗剂抗体治疗。
[0114]
e97.根据实施方案e86-e95中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物为smadcam，并且其中与对照相比，smadcam水平的降 低预示所述患者将受益于用madcam拮抗剂抗体治疗。
[0115]
e98.根据实施方案e86-e95中任一项所述的方法，其中所述生 物标志物为hscrp，并且其中与对照相比，hscrp水平的降低预示所 述患者将受益于用madcam拮抗剂抗体治疗。
[0116]
e99.根据实施方案e86-e88和e95中任一项所述的方法，其中 所述生物标志物为ccr9，并且其中与对照相比，ccr9水平的增加 预示所述患者将受益于用madcam拮抗剂抗体治疗。
[0117]
e100.根据实施方案e86-e88和e95中任一项所述的方法，其中 所述生物标志物为循环α4β7 细胞，并且其中与对照相比，循环α4β7 细胞水平的增加预示所述患者将受益于用madcam拮抗剂抗体治 疗。
[0118]
e101.根据实施方案e86-e100中任一项所述的方法，其中在施 用madcam拮抗剂抗体后至少约4周获得所述生物样品。
[0119]
e102.根据实施方案e86-e101中任一项所述的方法，其中在施 用madcam拮抗剂抗体后约4周至约12周获得所述生物样品。
[0120]
e103.根据实施方案e86-e102中任一项所述的方法，其中在施 用madcam拮抗剂抗体后约12周获得所述生物样品。
[0121]
e104.根据实施方案e1-e78和e86-e103中任一项所述的方法， 其中所述患者还含在rs11171739处的风险等位基因(c)。
[0122]
e105.一种用于鉴定将受益于用madcam拮抗剂抗体治疗的溃 疡性结肠炎(uc)患者的方法，其包括：
[0123]
(a)测定来自所述患者的包含基因组dna的生物样品；并且
[0124]
(b)由所述基因组dna获得snp rs11171739序列；
[0125]
其中在rs11171739处的风险等位基因(c)的存在预示所述患者将 受益于用madcam拮抗剂抗体治疗。
[0126]
e106.一种治疗易感或诊断患有与madcam表达增加相关的病 状的患者的方法，其包括向所述患者施用介于约5mg和约150mg之 间的初始剂量的madcam拮抗剂抗体，其中所述患者含在 rs11171739处的风险等位基因(c)。
[0127]
e107.一种治疗易感或诊断患有与madcam表达增加相关的病 状的患者的方法，其包括向所述患者施用介于约5mg和约150mg之 间的初始剂量的madcam拮抗剂抗体，其中通过实施方案e86-e105 的方法中任一种鉴定所述。
[0128]
e108.一种试剂盒，其包括：
[0129]
(a)检测剂，其用于检测生物标志物的存在，或用于测量生物样 品中生物标志物的水平，其中所述生物标志物为：(i)表12、13、15 所列的生物标志物中任一种；(ii)循环α4β7 细胞；(iii)rs11171739 风险等位基因；或(iv)前述物质的任何组合；及
[0130]
(b)使用所述检测剂的说明书。
[0131]
作为可以独立地或与先前任何实施方案组合使用的其它实施方 案，本发明提供了治疗易感或诊断患有与madcam表达增加相关的 病状的患者的方法，其包括在一个或多个剂量的托法替尼之后，向所 述患者施用介于约5mg和约150mg之间的初始剂量的madcam拮 抗剂抗体。
[0132]
附图简述
[0133]
图1：第12周基于总mayo评分的临床缓解率(治疗失败的方法)。
[0134]
图2:第12周基于无经历的和有经历的群体的临床缓解率(治疗 失败的方法)。
[0135]
图3:第12周的临床反应和粘膜愈合率(治疗失败的方法)。
[0136]
图4:第12周基于总mayo评分的安慰剂校正的临床缓解率、临 床反应率和粘膜愈合率的分析结果(cmh法，中央读数，mitt群体)。
[0137]
图5:第12周基于总mayo评分的安慰剂校正的临床缓解率、临 床反应率和粘膜愈合率的分析结果(cmh法，本地读数，mitt群体)。
[0138]
图6:在第4、8、12周部分mayo评分从基线下降≤2，无个体分 项分数》1的受试者群体的分析结果(cmh法，mitt群体)。
[0139]
图7:第4、8、12周有临床缓解(定义为总sccai评分《2分)的受 试者的比例(和90％置信区间)。
*
置信区间使用精确方法计算。
[0140]
图8:粪钙卫蛋白(ug/g)从基线的百分比变化的几何平均数(和 90％置信区间)(mitt，观察到的情况)。
[0141]
图9:治疗组在第12周时可溶性madcam(pmol/l)从基线的百分比 变化的几何平均数(和90％置信区间)(mitt，观察到的情况)。
[0142]
图10:hscrp(mg/dl)从基线的百分比变化的几何平均数(和90％置 信区间)(mitt，第0-12周，观察到的情况)。
[0143]
图11:治疗组与模型预测(黑色，中值和95％预测区间)相比所观 察到的(红色)血清mab 7.16.6浓度。
[0144]
图12:功效表：治疗和随访时的mayo排便频率。
[0145]
图13:功效表：治疗和随访时的mayo直肠出血。
[0146]
图14:功效表：治疗和随访时的mayo可屈性乙状结肠镜检查。
[0147]
图15:功效表：治疗和随访时的mayo pga。
[0148]
图16:治疗组最常见的不良事件。
具体实施方式
[0149]
本发明提供了一种用于治疗易感或诊断患有溃疡性结肠炎(uc) 的患者的方法，其包括向所述患者施用介于约5mg和约75mg之间的 初始剂量的madcam拮抗剂抗体。
[0150]
本发明提供了一种用于治疗易感或诊断患有与madcam表达增 加相关的病状的患
者的方法，其包括向所述患者施用介于约5mg和 约150mg之间的初始剂量的madcam拮抗剂抗体。在一些情况下， madcam表达增加是与健康个体的madcam相比。
[0151]
在对mab 7.16.6在中度至重度溃疡性结肠炎患者中的安全性和 功效的ii期随机、多中心双盲、安慰剂对照研究中，22.5mg和75mg 剂量组与安慰剂组相比排放和粘膜愈合显着显著更高，而22.5mg和 225mg组与安慰剂组相比，反应显著更强。
[0152]
madcam拮抗剂抗体可按25mg(初始和/或后续剂量)给药。 madcam拮抗剂抗体可按50mg(初始和/或后续剂量)给药。 madcam拮抗剂抗体可按75mg给药。madcam拮抗剂抗体可按 25mg(初始和/或后续剂量)给药。
[0153]
mab 7.16.6满足研究中的主要功效终点。基于总mayo评分的临 床缓解率在四个治疗组中的三个中在统计上显著(7.5mg、22.5mg和 75mg)。抗tnf暴露层组(有经历或无经历的)的临床缓解率在无经历 患者中更高。临床反应、粘膜愈合和部分mayo评分的关键次要终点 结果通常支持主要终点分析的发现。mab 7.16.6在该患者群体中似乎 安全且耐受良好。
[0154]
在一些方面，患者未服用tnf拮抗剂或tnf抑制剂。在一些方 面，患者在初始剂量之前至少约1周未服用tnf拮抗剂或tnf抑制 剂。在一些方面，患者在初始剂量之前至少约2周未服用tnf拮抗 剂或tnf抑制剂。在一些方面，患者在初始剂量之前至少约3周未 服用tnf拮抗剂或tnf抑制剂。在一些方面，患者在初始剂量之前 至少约4周未服用tnf拮抗剂或tnf抑制剂。在一些方面，患者在 初始剂量之前至少约5周未服用tnf拮抗剂或tnf抑制剂。在一些 方面，患者在初始剂量之前至少约6周未服用tnf拮抗剂或tnf抑 制剂。在一些方面，患者在初始剂量之前至少约7周未服用tnf拮 抗剂或tnf抑制剂。在一些方面，患者在初始剂量之前至少约8周 未服用tnf拮抗剂或tnf抑制剂。在一些方面，患者在初始剂量之 前从未服用tnf拮抗剂或tnf抑制剂。
[0155]
第12周在总mayo评分计算中使用中央读取的内窥镜分项分数 (此后为中央读数)，在安慰剂、7.5mg、22.5mg、75mg和225mg的 mab 7.16.6组中观察到的临床缓解率(mitt群体)分别为2.7％、 11.3％、16.7％、15.5％和5.7％；并且使用cmh试验，与安慰剂的差 异和相应的双侧90％置信区间(ci)分别为8.0％(1.9％，14％)、 12.8％(5.6％，19.9％)、11.8％(4.8％，18.8％)和2.6％(-1.2％，6.4％)。
[0156]
在总mayo评分计算中使用本地读取的内窥镜分项分数(此后为 本地读数)，安慰剂、7.5mg、22.5mg、75mg和225mg的mab 7.16.6 观察到的临床缓解率(mitt群体)分别为5.5％、14.1％、23.6％、18.3％ 和12.9％；并且使用cmh试验，与安慰剂的差异和相应的90％ci 分别为8.0％(0.2％，15.9％)、17.8％(8.3％，27.2％)、12.2％(3.6％，20.8％) 和6.6％(-0.9％，14.2％)。
[0157]
因此，在一些方面，正如使用mayo评分所测定的，初始剂量 约12周后观察到的临床缓解率可选自由以下组成的组：至少约3％、 至少约5％、至少约10％、至少约11％、至少约12％、至少约13％、 至少约14％、至少约15％、至少约16％、至少约17％、至少约18％、 至少约19％、至少约20％、至少约21％、至少约21％、至少约22％ 和至少约23％。
[0158]
使用第12周中央读取的分项分数，观察到的安慰剂、7.5mg、 22.5mg、75mg和225mg的反应率分别为28.8％、38.0％、54.2％、45.1％ 和50.0％；并且相应的粘膜愈合率分别为8.2％、15.5％、27.8％、25.4％ 和14.3％。当使用本地读取的分项分数时，观察到的比率比
中央读数 更高；对于安慰剂、7.5mg、22.5mg、75mg和225mg而言，临床反 应率分别为32.9％、38.6％、54.2％、48.6％和51.4％，并且粘膜愈合 率分别为21.9％、22.5％、37.5％、35.2％和28.6％。无论内窥镜分项 分数的来源如何，对于22.5mg和225mg治疗组相对于安慰剂组的临 床反应率明显不同于安慰剂。使用中央读数的粘膜愈合率通常低于本 地读数，并且该趋势与其它终点一致。
[0159]
因此，在一些方面，正如使用mayo评分所测定的，初始剂量 约12周后观察到的临床反应率可选自由以下组成的组：至少约25％、 至少约27％、至少约28％、至少约30％、至少约32％、至少约33％、 至少约35％、至少约37％、至少约38％、至少约40％、至少约42％、 至少约43％、至少约45％、至少约47％、至少约48％和至少约50％。
[0160]
因此，在一些方面，正如使用mayo评分所测定的，初始剂量 约12周后的粘膜愈合率可选自由以下组成的组：至少约10％、至少 约14％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约27％、至 少约30％、至少约35％和至少约37％。
[0161]
mab 7.16.6在该患者群体中似乎安全且耐受良好。最常见的不良 事件与潜在疾病有关，且发生在安慰剂治疗的第一个月和7.5mg治疗 组中。
[0162]
血清mab 7.16.6暴露与在uc i期研究(clinicaltrials.gov标识符： nct00928681)中观察到的一致并且通过描述靶标介导的药物配置的 初步群体药代动力学模型来充分预测。这些pk水平对应于68至98％ 的可溶性madcam的抑制(第12周)，这与研究设计期间的模型预测 一致。总体证实抗药性抗体(ada)阳性率约为6.4％。没有治疗提高 ada反应的指示。在基线后确认阳性ada的受试者中的初步评估表 明ada对暴露、安全性或功效无明显影响。
[0163]
生物标志物
[0164]
本发明还提供了分子生物标志物，如患者，尤其是溃疡性结肠炎 (uc)患者中的遗传突变、转录组学rna表达、细胞蛋白标志物及对 抗madcam治疗的反应的各种度量。例如，生物标志物可用于建立 在溃疡性结肠炎患者中用mab 7.16.6治疗后观察到的非单调剂量反 应的潜在机制基础。mab 7.16.6治疗在较低的临床有效剂量下导致优 先于调节细胞对免疫效应子的优先抑制，其在较高的临床低有效剂量 下归一化。因此，与调节细胞相关的生物标志物可用于优化未来的剂 量选择。进一步地，生物标志物也可用于选择特别是对抗madcam 抗体治疗有反应的uc患者亚群。
[0165]
例如，可向uc患者施用至少初始剂量的madcam拮抗剂抗体， 及任选地以固定间隔的一个或多个后续剂量(例如，患者每4周给药 一次)。任选地，在初始剂量后4周或至少约4周、8周或至少约8 周、12周或至少约12周，可评估所述患者中的一种或多种生物标志 物以预测未来有益的治疗反应是否是可能的。阳性生物标志物测定结 果将表明该患者将受益于继续进行抗madcam治疗。可在抗 madcam治疗之前评估生物标志物，以选择可能会受益于抗 madcam治疗的患者亚群。在治疗过程中也可持续监测生物标志物， 例如以调整剂量或确定是否应该继续治疗。
[0166]
本文提供了四种类型的生物标志物：遗传生物标志物(如snprs11171739)、rna转录物标志物(如ccr9转录物)、蛋白质生物标志 物(如粪钙卫蛋白、smadcam和hscrp)及细胞生物标志物(如α4β7 细胞)。这些生物标志物中的任一种均可单独地或以任何组合使用， 以评估治疗效果和/或患者亚群。
[0167]
一方面，本发明提供了一种用于评估在施用madcam拮抗剂抗 体之后患者中有益反应的存在或不存在的方法，其包括：(a)测量来 自所述患者的生物样品中的生物标志物的水平；(b)将所述水平与对 照做比较；其中与所述对照相比，生物标志物水平的变化预示在所述 患者中的有益反应。另一方面，本发明提供了一种用于评估在施用 madcam拮抗剂抗体之后患者中有益反应的存在或不存在的方法， 其包括：(a)获得或接收来自所述患者的生物样品；(b)测量所述生 物样品中的生物标志物的水平；(c)将所述水平与对照进行比较；其 中与所述对照相比，生物标志物水平的变化预示在所述患者中的有益 反应。此类患者可继续进行madcam拮抗剂抗体治疗。可根据生物 标志物水平的变化调整进一步的剂量以达到所需的治疗效果。例如， 如果患者中的生物标志物水平变化尚未达到最小阈值，则可以增加剂 量。
[0168]
技术人员将能够确定适当的对照。在某些实施方案中，对照是抗 madcam治疗之前所述生物标志物的水平。在某些实施方案中，对 照是治疗期间某一时间点(例如，初始剂量后1周，初始剂量后2周) 所述生物标志物的水平。在某些实施方案中，对照是预定值(例如， 阈值、患者群体的平均水平)。
[0169]
在某些实施方案中，所述生物标志物是表12中的蛋白质生物标 志物，及粪钙卫蛋白、smadcam和hscrp中的任一种或任何组合。 在某些实施方案中，所述生物标志物是表13中的蛋白质生物标志物， 及粪钙卫蛋白、smadcam和hscrp中的任一种或任何组合。在某 些实施方案中，所述生物标志物是表15中的rna转录物生物标志物 中的任一种或任何组合，如ccr9。在某些实施方案中，所述生物标 志物是循环α4β7 细胞。也可使用本文公开的蛋白质、rna和细胞 生物标志物的任何组合。
[0170]
在某些实施方案中，生物标志物为：(i)选自由以下组成的组的 生物标志物中的任一种或组合：粪钙卫蛋白、smadcam、hscrp、 ar、chi3l1、cxcl1、cxcl11、cxcl13、cxcl9.dkk-1、egf、 en-rage、epo、fgf-21、gh、il-17c、il-6、il-7、il-8、mip-1α、 mmp-1、mmp-10、mmp-12、mmp-3、nt-pro-bnp、osm、ptpn22、 ptx3、reg-4、retn、tnfrsf4、trance和vegf-a；(ii)ccr9； (iii)循环α4β7 细胞；或(iv)前述物质的任何组合。
[0171]
一方面，本发明提供了一种用于鉴定将受益于madcam拮抗剂 抗体治疗的患者的方法，其包括：(a)获得来自所述患者的生物样品； (b)检测所述样品中rs11171739风险等位基因的存在；其中 rs11171739风险等位基因的存在预示所述患者中对madcam拮抗剂 抗体治疗的有益反应。rs11171739是12q13.2基因座(位置56076841) 处的snp，并且据报道与madcam1基因表达和某些自身免疫性疾 病相关。正常等位基因(面向dbsnp入口)为(t)(等位基因频率55.5％)， 而风险等位基因为(c)(等位基因频率44.5％)。对于基因型频率而言， (t；t)为40.9％，(c；t)为32.8％，且(c；c)为26.3％。
[0172]
可以使用公开的基因组、rna、蛋白质和细胞生物标志物的各种 组合。例如，可通过ccr9转录物和smadcam的组合，或rs11171739 风险等位基因、ccr9和smadcam的组合来鉴定患者亚群。
[0173]
在一些方面，本发明提供了一种评估患者对于病状的治疗方案的 适合性的方法，其包括：
[0174]
·
治疗之前测量选自由以下组成的组的一种或多种基因的基因表 达水平：粪钙卫蛋白、smadcam和hscrp；
量后约12周提供了至少约40％的粪钙卫蛋白减少量。在一些方面， 本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少约45％的粪钙卫蛋白 减少量。在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至 少约50％的粪钙卫蛋白减少量。在一些方面，本发明的方法在初始剂 量后约12周提供了至少约55％的粪钙卫蛋白减少量。前述％值可以 是与对照(如治疗前的粪钙卫蛋白水平)相比。在一些方面，与对照(如 治疗前的粪钙卫蛋白水平)相比，本发明的方法在初始剂量后约12周 提供了至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少 约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％的粪钙卫蛋白减少 量。
[0184]
在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供smadcam 减少。在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少 约25％的smadcam减少量。在一些方面，本发明的方法在初始剂 量后约12周提供了至少约50％的smadcam减少量。在一些方面， 本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少约60％的smadcam 减少量。在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至 少约65％的smadcam减少量。在一些方面，本发明的方法在初始 剂量后约12周提供了至少约70％的smadcam减少量。在一些方面， 本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少约75％的smadcam 减少量。在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至 少约80％的smadcam减少量。在一些方面，本发明的方法在初始 剂量后约12周提供了至少约85％的smadcam减少量。在一些方面， 本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少约90％的smadcam 减少量。前述％值可以是与对照(如治疗前的smadcam水平)相比。 在一些方面，与对照(如治疗前的smadcam水平)相比，本发明的方 法在初始剂量后约12周提供了至少约95％的smadcam减少量。
[0185]
在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了hscrp 减少。在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少 约5％的hscrp减少量。在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约 12周提供了至少约10％的hscrp减少量。在一些方面，本发明的方 法在初始剂量后约12周提供了至少约15％的hscrp减少量。在一些 方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少约65％的hscrp 减少量。在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至 少约16％的hscrp减少量。在一些方面，本发明的方法在初始剂量 后约12周提供了至少约20％的hscrp减少量。前述％值可以是与对 照(如治疗前的hscrp水平)相比。在一些方面，与对照(如治疗前的 hscrp水平)相比，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少约 25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约 50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约 75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％的hscrp 减少量。
[0186]
在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了ccr9 rna转录物增加。在一些方面，与对照(如治疗前的ccr9水平)相比， 本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少约1.1倍、至少约1.2 倍、至少约1.3倍、至少约1.4倍、至少约1.5倍、至少约1.6倍、至 少约1.7倍、至少约1.8倍、至少约1.9倍、至少约2.0倍、至少约 2.1倍、至少约2.2倍、至少约2.3倍、至少约2.4倍、至少约2.5倍、 至少约3.0倍、至少约3.5倍、至少约4.0倍、至少约4.5倍、至少约 5.0倍、至少约5.5倍、至少约6.0倍、至少约6.5倍、至少约7.0倍、 至少约7.5倍、至少约8.0倍、至少约8.5倍、至少约9.0倍、至少约 9.5倍或至少约10.0倍的ccr9 rna转录物增加量。
[0187]
在一些方面，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了循环 α4β7 细胞增加。在
一些方面，与对照(如治疗前的循环α4β7 细胞水 平)相比，本发明的方法在初始剂量后约12周提供了至少约1.1倍、 至少约1.2倍、至少约1.3倍、至少约1.4倍、至少约1.5倍、至少约 1.6倍、至少约1.7倍、至少约1.8倍、至少约1.9倍、至少约2.0倍、 至少约2.1倍、至少约2.2倍、至少约2.3倍、至少约2.4倍、至少约 2.5倍、至少约3.0倍、至少约3.5倍、至少约4.0倍、至少约4.5倍、 至少约5.0倍、至少约5.5倍、至少约6.0倍、至少约6.5倍、至少约 7.0倍、至少约7.5倍、至少约8.0倍、至少约8.5倍、至少约9.0倍、 至少约9.5倍或至少约10.0倍的循环α4β7 细胞增加量。
[0188]
在某些方面，接受madcam拮抗剂抗体治疗的患者含杂合子 rs11171739风险等位基因(c；t)。在某些方面，接受madcam拮抗剂 抗体治疗的患者含纯合子rs11171739风险等位基因(c；c)。
[0189]
以上公开的变化的任何组合也为本发明所涵盖。例如，为评估对 抗madcam治疗的有益反应的存在，或选择患者亚群，可以将 smadcam减少50％和ccr9转录物增加2倍组合作为标准。
[0190]
制品
[0191]
本发明还提供了一种制品，其包括容器、容器内包含madcam 拮抗剂抗体的组合物，以及含有根据本文所述的方法和用途对抗体进 行给药的说明书的包装插页。
[0192]
本发明还涉及用作药剂的madcam拮抗剂抗体或其抗原结合部 分。
[0193]
本发明还涉及用作药剂的madcam拮抗剂抗体或其抗原结合部 分。
[0194]
剂量间隔
[0195]
在一些方面，本发明的方法还按与初始剂量大约相同或少于所述 初始剂量的量提供后续剂量抗体的施用。
[0196]
在一些方面，在第一剂量后约2至约12周提供第一后续剂量。 在一些方面，在第一剂量后约4周提供第一后续剂量。
[0197]
在一些方面，间隔约4至约12周给予后续剂量。在一些方面， 间隔约2至约8周给予后续剂量。在一些方面，间隔约2至约10周 给予后续剂量。在一些方面，间隔约4至约10周给予后续剂量。在 一些方面，间隔约4周给予后续剂量。
[0198]
在一些方面，间隔约1至约3个月给予后续剂量。在一些方面， 间隔约1个月给予后续剂量。在一些方面，间隔约2个月给予后续剂 量。
[0199]
在一些方面，本发明的方法还按与初始剂量大约相同或少于所述 初始剂量的量提供维持剂量抗体的施用，其在第一剂量和第一后续剂 量之间提供。
[0200]
抗体可施用一次，或者可多次施用。
[0201]
在一些方面，本发明提供了madcam拮抗剂抗体的使用方法， 包含madcam拮抗剂抗体连同药学上可接受的赋形剂或载体的用于 治疗患者的药物组合物，其中为患者提供的madcam拮抗剂抗体剂 量足以使madcam水平在施用后至少约1周、至少约2周、至少约 3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约 8周、至少约9周、至少约10周、至少约11周、至少约12周的时 期内持续降低。
[0202]
在一些方面，初始剂量介于选自约5mg、6mg、约7mg、约7.5mg、 约8mg、约9mg、约10mg、约12mg、约15mg、约20mg、约22.5mg、 约25mg、约30mg、约35mg、约45mg、约50mg的下限和选自约50mg、 约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、少于约75mg和约75mg的 上限之间，并且
后续剂量按与初始剂量大约相同或少于所述初始剂量 的量递送，且后续剂量在初始剂量后约2至约6周施用。在一些方面， 在初始剂量后约4周施用后续剂量。
[0203]
在一些方面，初始剂量介于选自约50mg、约55mg、约60mg、 约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg约95mg 和约100mg的下限和选自约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、 约95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、约120mg、 125mg、约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、少于约150mg 和约150mg的上限之间，并且后续剂量按与初始剂量大约相同或少 于所述初始剂量的量递送，且后续剂量在初始剂量后约6至约10周 施用。在一些方面，在初始剂量后约8周施用后续剂量。
[0204]
施用途径
[0205]
相应地，本发明提供了用于治疗易于诊断为患有特征在于 madcam过度表达的病症的患者的方法，其包括皮下施用治疗有效 量的初始剂量的madcam拮抗剂抗体。
[0206]
在一些方面，本发明提供了治疗易于诊断为患有特征在于 madcam过度表达的病症的患者的方法，其包括静脉施用治疗有效 量的初始剂量的madcam拮抗剂抗体。
[0207]
在一些方面，所述至少一个后续剂量通过皮下注射施用。在一些 方面，所述至少一个后续剂量通过静脉内注射施用。
[0208]
所述抗体也可经由微型泵连续施用。所述抗体可经由粘膜、颊、 鼻内、可吸入、静脉内、皮下、肌内、肠胃外或瘤内途径施用。所述 抗体可施用一次、至少两次或至少一段时间，直至所述病状得到治疗、 减轻或治愈。通常只要所述病状存在就会施用所述抗体。
[0209]
本发明的madcam抗体
[0210]
本发明总体上涉及madcam抗体及其用途。在一些方面，所述 抗体为mab 7.16.6或其变体。在一些方面，madcam拮抗剂抗体包 含seq id no:1和seq id no:2的cdr。在一些方面，madcam 拮抗剂抗体包含seq id no:3和seq id no:4的cdr。在一些方面， madcam拮抗剂抗体包含seq id no:3和seq id no:4的可变结构 域。在一些方面，madcam拮抗剂抗体包含seq id no:1和seq idno:2。在一些方面，可以使用用于本发明方法和组合物中的替代性 madcam拮抗剂抗体。表1和2中列出了示例性madcam拮抗剂 抗体。wo2005067620的实例(通过引用并入本文)全面描述了表1和 2的抗体，并提供了表征信息如结合亲和力、k
on
、k
off
、kd等的详情。
[0211]
在一些方面，抗体可以是与mab 7.16.6(seq id no:1和2)交叉 竞争的madcam拮抗剂抗体。
[0212]
在一些方面，本发明的抗体具有以下特征中的一种或多种：
[0213]
ο在人患者中的半衰期介于20和60天之间；
[0214]
οsc生物利用率为至少50％；和/或
[0215]
οkd≤10nm。
[0216]
在一些方面，抗体在人患者中的半衰期可为至少30天。在一些 方面，抗体在人患者中的半衰期可为至少35天。在一些方面，抗体 在人患者中的半衰期可为至少40天。在一些方面，抗体在人患者中 的半衰期可为至少45天。在一些方面，抗体在人患者中的半衰期可 为至少50天。
[0217]
在一些方面，抗体的sc生物利用率可为至少60％。在一些方面， 抗体的sc生物利用率可为至少65％。在一些方面，抗体的sc生物 利用率可为至少70％。在一些方面，抗体的
sc生物利用率可为至少 75％。在一些方面，抗体的sc生物利用率可为至少80％。在一些方 面，抗体的sc生物利用率可为至少85％。在一些方面，抗体的sc 生物利用率可为至少90％。在一些方面，抗体的sc生物利用率可为 至少95％。在一些方面，抗体的sc生物利用率可为至少90％。在一 些方面，抗体的sc生物利用率可为至少99％。
[0218]
在一些方面，通过表面等离子体共振测量kd。在一些方面，可 以使用biocore测量表面等离子体共振。在一些方面，可以使用带有 捕获抗体和溶液相madcam的biacore测量spr。
[0219]
在一些方面，抗体的kd≤10nm。在一些方面，抗体的kd≤1nm。 在一些方面，抗体的kd≤500pm。在一些方面，抗体的kd≤200pm。 在一些方面，抗体的kd≤100pm。在一些方面，抗体的kd≤50pm。 在一些方面，抗体的kd≤20pm。在一些方面，抗体的kd≤10pm。 在一些方面，抗体的kd≤5pm。
[0220]
保存信息
[0221]
杂交瘤根据欧洲细胞培养保藏中心(h.p.a at camr,portondown,salisbury,wiltshire sp4 ojg布达佩斯条约(ecacc)的条款于 2003年9月9日以以下保存号保存。
[0222]
抗体轻链seq id no:重链seq id no:ecacc杂交瘤名称1.7.21718030909011.8.2192030909026.14.22122030909036.22.22324030909046.34.22526030909056.67.12728030909066.73.22930030909076.77.13132030909087.16.612030909097.20.53334030909107.26.43536030909119.8.2373803090912
[0223]
表1.madcam拮抗剂抗体保存物。
[0224]
该保存物是根据国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯 条约及其下条例(布达佩斯条约)的规定进行的。这确保从保存之日起 保持该保存物的活培养物30年。将由ecacc根据布达佩斯条约的 条款使保存物可用，并符合pfizer inc.与ecacc之间的协议，该协 议确保在颁布相关的美国专利或向公众公开任何美国或国外专利申 请后(以先到者为准)，保存物培养的子代对公众永久且无限可用，并 且确保子代对于由美国专利及其命名的商标委员根据美国法典第35 篇第122条及以此为依据的委员准则(包括特别提到886og 638的美 国联邦法规第37篇第1.14条)所确定的公众的可用性。
[0225]
本技术的受让人同意，如果保存材料的培养物在合适的条件下培 育时死亡或丢失或毁坏，则材料将在通知后立即用相同的另一份更 换。保存材料的可用性不得视为许可违反在任何政府职权下根据其专 利法授权的权利来实践发明。
[0226]
本发明的治疗方法
[0227]
本发明提供了治疗方法。治疗方法包括向有需要的受试者施用本 发明的化合物或组合物。
[0228]
如本文中所用，药物、化合物或药物组合物的“有效剂量”或“有 效量”是足以实现任一种或多种有益或所需结果的量。对于预防性使 用而言，有益或所需结果包括消除或降低疾病风险，减轻疾病严重程 度，或延迟疾病发作，包括疾病的生物化学、组织学和/或行为症状， 其并发症和疾病发展期间呈现的中间病理表型。对于治疗性用途而 言，有益或所需结果包括诸如减小治疗疾病所需的其它药剂的剂量， 增强另一种药剂的效果，和/或延迟患者疾病的进展等临床结果。有 效剂量可一次或多次施用。为了本发明的目的，药物、化合物或药物 组合物的有效剂量是足以直接或间接实现预防性或治疗性治疗的量。 正如在临床环境中所理解的，药物、化合物或药物组合物的有效剂量 可能或可能不连同另一种药物、化合物或药物组合物一起达到。因此， 如果连同一种或多种其它药剂一起，可以实现或实现了预期结果，则 在施用一种或多种治疗剂的情况下可以考虑“有效剂量”，并且可以考 虑按有效量给予单一试剂。
[0229]“治疗有效量”是指所施用的，将在一定程度上缓解所治病症的一 种或多种症状的治疗剂的量。
[0230]“治疗(treat/treating/treatment)”是指减轻或消除生物学病症和/或 其附带症状的方法。
[0231]“个体”或“受试者”为哺乳动物，更优选地为人。哺乳动物也包括 但不限于家畜、运动动物、宠物、灵长类动物和马。在一些方面，患 者为人患者。
[0232]
还提供了通过向有需要的患者施用madcam拮抗剂抗体来抑制madcam活性的方法。本文描述的任何抗体或其抗原结合部分均可 在治疗上使用。在一个优选实施方案中，madcam拮抗剂抗体为人、 嵌合或人源化抗体。在另一个优选实施方案中，madcam为人且患 者为患者。可选地，患者可以是表达与madcam拮抗剂抗体交叉反 应的madcam的哺乳动物。可以向表达madcam或作为人疾病的 动物模型的非人哺乳动物施用抗体。此类动物模型可用于证明抗体的 治疗功效。
[0233]
在一些方面，可向异常表达高水平madcam的患者施用 madcam拮抗剂抗体或其抗体部分。
[0234]
madcam抗体或其抗原结合部分可用于治疗涉及madcam的 疾病。可以使用madcam抗体或其抗原结合部分治疗的疾病的实例 包括溃疡性结肠炎(uc)、克罗恩氏病(cd)、肠易激综合征(ibs)、肠 易激病(ibd)、乳糜泻、原发性硬化性胆管炎、胆道疾病、类风湿性 关节炎、反应性关节炎、骨关节炎、感染性关节炎、银屑病性关节炎、 多关节炎、幼年型关节炎、幼年型类风湿性关节炎、幼年型反应性关 节炎、幼年型银屑病性关节炎、疼痛、纤维化、纤维肌痛综合征、强 直性脊柱炎、未分化脊柱关节病、幼年发作型脊椎关节炎、银屑病、 痛风、卡斯尔曼病(castleman’s disease)、成人发作型斯提耳氏病(still’sdisease)、败血症、i型糖尿病、ii型糖尿病、多发性骨髓瘤和肾细胞 癌。madcam抗体或其抗原结合部分可用于治疗uc。
[0235]
madcam抗体或其抗原结合部分可与一种或多种其它治疗剂组 合使用。例如，抗体或其抗原结合部分可与cox-2抑制剂如塞来昔 布一起，用于治疗疾病如类风湿性关节炎、骨关节炎和疼痛。 madcam抗体或其抗原结合部分和所述其它治疗剂可以相同的剂型 或以
不同的剂型向患者施用。而且，它们可以在相同时间或不同时间 施用。下面是疾病及其可以与抗madcam抗体或其抗原结合部分组 合使用的治疗剂的一些实例。
[0236]
溃疡性结肠炎
[0237]
在一些方面，本发明提供了用于治疗溃疡性结肠炎的组合物和方 法。在一些方面，本发明的组合物和方法提供了madcam拮抗剂抗 体与一种或多种其它附加治疗剂组合的用途。
[0238]
在一些方面，所述一种或多种附加治疗剂可选自由以下组成的 组：醋氨酚、甲氧萘丙酸钠、布洛芬、曲马多、阿司匹林、塞来昔布、 伐地昔布、消炎痛和其它nsaid。在一些方面，所述一种或多种附 加治疗剂可选自由以下组成的组：倍氯米松、氢化可的松、培他米松、 甲基强的松龙、布地奈德、强的松龙、可的松、强的松、地塞米松和 去炎松及其它糖皮质激素(glucorticoids)。在一些方面，所述一种或多 种附加治疗剂可选自由以下组成的组：6-颈基嘌呤、他克莫司、硫唑 嘌呤、萨力度胺、环孢霉素、托法替尼、甲氨蝶呤和其它免疫抑制剂 /免疫调节剂。在一些方面，所述一种或多种附加治疗剂可选自由以 下组成的组：阿巴西普、etrolizumab、阿达木单抗、戈利木单抗、 amg-181、英夫利昔、抗ip-10抗体、白细胞介素-2、avx 470、维 多珠单抗、赛妥珠单抗和其它生物制剂。在一些方面，所述一种或多 种附加治疗剂可选自由以下组成的组：aeb-071、褪黑激素、 alicaforsam、美沙拉嗪、苯并噻嗪酮、尼古丁、大麻、磷脂酰胆碱、 姜黄色素、干细胞、hmpl-004、柳氮磺吡啶、iberogast、猪鞭虫、 kappaproct、krp-203、柳氮磺吡啶、美沙拉嗪、巴柳氮、奥沙拉秦和 洛哌丁胺。
[0239]
因此，在一些方面，本发明的组合物和方法特别旨在与这些试剂、 产品和类别组合使用。
[0240]
克罗恩氏病
[0241]
在一些方面，本发明提供了用于治疗克罗恩氏病的组合物和方 法。
[0242]
产品：止痛剂如醋氨酚、甲氧萘丙酸钠、布洛芬、曲马多、阿司 匹林、塞来昔布、伐地昔布、消炎痛和其它nsaid；消炎药；柳氮 磺吡啶、美沙拉嗪、巴柳氮和奥沙拉秦；及皮质类固醇如强的松和布 地奈德；免疫抑制药物如硫唑嘌呤、巯基嘌呤、tnf阻断剂如英夫利 昔和阿达木单抗、甲氨蝶呤和环孢霉素；抗生素如甲硝哒唑和环丙沙 星；止泻剂如洛哌丁胺；和轻泻剂。类别：止痛剂；nsaid；cox-2 抑制剂；消炎药；tnf阻断剂；抗生素；止泻剂；和轻泻剂。
[0243]
因此，在一些方面，本发明的组合物和方法特别旨在与这些产品 和类别组合使用。
[0244]
其它适应症
[0245]
在一些方面，本发明提供了用于治疗以下疾病的组合物和方法： 类风湿性关节炎(ra)、莱特尔氏综合征(反应性关节炎)、骨关节炎、 感染性关节炎、银屑病性关节炎、多关节炎、幼年型关节炎、幼年型 类风湿性关节炎、幼年型反应性关节炎、幼年型银屑病性关节炎、疼 痛、纤维化、纤维肌痛综合征、强直性脊柱炎、未分化脊柱关节病 (uspa)、幼年发作型脊柱关节炎(jspa)、银屑病、痛风或肠易激综合 征(ibs)。
[0246]
与高水平madcam相关的其它疾病也可以用本发明的方法和化 合物治疗，如难治性抑郁症、癌性恶病质、ii型糖尿病、takayasu动 脉炎、grave眼病和老年人肌肉萎缩。
[0247]
药物组合物和施用
[0248]
还提供了用于治疗哺乳动物(包括人)中与madcam表达增加相 关的病状(如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病)的药物组合物，其包含一定 量的如本文所述，有效治疗异常细胞浸润的madcam拮抗剂抗体或 其抗原结合部分，及药学上可接受的载体。所述组合物为具有多种炎 症性和自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、肉芽肿 性疾病、多发性硬化、哮喘和癌症中的一种或多种的患者提供治疗益 处。
[0249]
madcam抗体及其抗原结合部分可以掺入适于向受试者施用的 药物组合物中。通常，药物组合物包含madcam拮抗剂抗体或其抗 原结合部分和药学上可接受的载体。如本文中所用，“药学上可接受 的载体”意指生理上相容的任何及所有溶剂、分散介质、包衣、抗细 菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。药学上可接受的载体的一些 实例为水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等及其组合。 在许多情况下，将优选在所述组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇 如甘露醇、山梨醇或氯化钠。药学上可接受的物质的其它实例是润湿 剂或少量辅助物质，例如增强抗体的保质期或有效性的润湿剂或乳化 剂、防腐剂或缓冲剂。
[0250]
本发明的组合物可以呈多种形式，例如液体、半固体和固体剂型， 如液体溶液(例如，注射和输注液)、分散液或悬浮液、片剂、丸剂、 粉剂、脂质体和栓剂。形式取决于预期施用模式和治疗应用。典型的 组合物呈注射或输注液形式，如类似于用于人的被动免疫的那些的组 合物。在一种情况下，施用模式为肠胃外(例如，静脉内、皮下、腹 膜内、肌内)。在另一种情况下，抗体通过静脉内输注或注射施用。 在另一种情况下，抗体通过肌内或皮下注射施用。用于注射的配制物 可呈单位剂型，例如在有或无添加的防腐剂的安瓿或多剂量容器中提 供。所述组合物可于油性或水性媒介物中呈诸如悬浮液、溶液或乳液 的形式，并且可以含有配制剂如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。可选 地，活性成分可呈粉末形式，以在使用之前用合适的媒介物，例如无 菌无热原水复水。可以通过将所需量的madcam拮抗剂抗体掺入具 有以上列举的一种成分或其组合的适当溶剂中，然后进行过滤灭菌来 制备无菌注射液。
[0251]
剂量值可根据待减轻的病状的类型和严重程度而变化。在用于制 备无菌注射液的无菌粉末的情况下，合适的制备方法包括真空干燥和 冷冻干燥，其由先前无菌过滤的溶液得到活性成分加上任何其它所需 成分的粉末。例如，可以通过使用包衣如卵磷脂，在分散液的情况下 通过维持所需粒度及通过使用表面活性剂来维持溶液的适当流动性。 通过在所述组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶而 致使可注射组合物的延长吸收。
[0252]
在某些情况下，可以用将会保护抗体免于迅速释放的载体制备 madcam拮抗剂抗体，所述载体如控释配制物，包括植入物、透皮 贴片和微胶囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合 物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚 乳酸。可以使用用于制备此类配制物的许多方法。参见，例如， sustained and controlled release drug delivery systems,j.r.robinson 编,marcel dekker,inc.,new york,1978，其通过引用并入本文。
[0253]
另外的活性化合物也可掺入组合物中(包括先前公开的附加治疗 剂中的一种或多种)。在一些情况下，抑制性madcam拮抗剂抗体 与一种或多种附加治疗剂一起共同配制
和/或共同施用。这些试剂包 括但不限于结合其它靶标的抗体、抗肿瘤剂、抗血管生成剂、信号转 导抑制剂、抗增殖剂、化学治疗剂或抑制madcam的肽类似物。此 类联合疗法可能需要较低剂量的抑制性madcam拮抗剂抗体以及共 同施用的试剂，从而避免了与各种单一疗法相关的可能毒性或并发 症。
[0254]
组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的抗体或抗原结 合部分。“治疗有效量”是指以必需的剂量和在必需时间段内有效实现 所需治疗结果的量。抗体或抗原结合部分的治疗有效量可以根据诸如 疾病状态、个体的年龄、性别和体重以及抗体或抗体部分在个体中引 起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量也是抗体或抗原结合部 分的任何毒性或不利影响被治疗有益效果超过的量。“预防有效量”是 指以必需的剂量和在必需时间段内有效实现所需预防结果的量。通 常，由于在疾病之前或早期阶段的受试者中使用预防剂量，所以预防 有效量可以小于治疗有效量。
[0255]
在一种情况下，将抗体于配制物中作为无菌水溶液施用，所述无 菌水溶液的ph范围为约5.0至约6.5且包含约1mg/ml至约200mg/ml 的抗体、约1毫摩尔至约100毫摩尔的组氨酸缓冲液、约0.01mg/ml 至约10mg/ml聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20、约100毫摩尔至约400 毫摩尔选自但不限于海藻糖或蔗糖的非还原糖、约0.01毫摩尔至约 1.0毫摩尔的edta二水合二钠，并且还任选地包含除了螯合剂之外 的药学上可接受的抗氧化剂。合适的抗氧化剂包括但不限于甲硫氨 酸、硫代硫酸钠、过氧化氢酶和铂。例如，组合物可以含有浓度范围 为1mm至约100mm，且尤其是约27mm的甲硫氨酸。在一些情况 下，配制物于20mm柠檬酸钠(ph 5.5)、140mm nacl和0.2mg/ml聚 山梨醇酯80的缓冲液中含有5mg/ml的抗体。
[0256]
在一些方面，所述配制物如wo2006/096490所述，其内容据此 并入。在一些方面，所述配制物包含75mg/ml抗体、10mm组氨酸 ph 5.5、90mg/ml海藻糖、二水合物、0.1mg/ml edta二水合二钠和 0.4mg/ml聚山梨醇酯80。
[0257]
另一方面，所述配制物包含：20mm组氨酸、7％海藻糖、0.4mg/ml 聚山梨醇酯80、0.1mg/ml edta(ph 5.5)及25mg/ml和75mg/ml抗 madcam抗体。
[0258]
试剂盒
[0259]
本文提供的另一方面是试剂盒，其包括madcam拮抗剂抗体或 抗原结合部分或包含此类抗体或抗原结合部分的组合物。除抗体或组 合物外，试剂盒还包括一种或多种附加治疗剂和或一种或多种附加诊 断剂。试剂盒还可包括用于诊断或治疗方法中的说明书。在一种情况 下，试剂盒包括抗体或包含抗体的组合物及可用于本文所述方法的诊 断剂。在另一种情况下，试剂盒包括抗体或包含抗体的组合物及可用 于本文所述方法的一种或多种治疗剂。
[0260]
在一些方面，本发明提供了一种制品，其包括容器、容器内包含 madcam拮抗剂抗体的组合物，以及含有根据本发明方法的说明书 的包装插页。本文提供的另一方面是包括用于检测或量化本文所述生 物标志物的探针的试剂盒。所述试剂盒可用于评估对于抗madcam 治疗的有益反应的存在或不存在。该试剂盒用于确定患者是否应继续 进行抗madcam治疗，鉴定可能受益于抗madcam治疗的患者亚 群，或调整抗madcam拮抗剂抗体的剂量。
[0261]
定义
[0262]
抗体
[0263]“抗体”是免疫球蛋白分子，其能够通过位于免疫球蛋白分子的可 变区内的至少一个抗原结合位点，特异性结合靶标或抗原，如碳水化 合物、多核苷酸、脂质、多肽等。
[0264]
如本文中所用，除非上下文另外指出，否则该术语旨在不但涵盖 包含两个相同的全长重链多肽和两个相同的轻链多肽的完整多克隆 或单克隆抗体，而且涵盖其片段(如fab、fab’、f(ab’)2、fv)、单链(scfv) 和单结构域抗体(dab)，包括鲨鱼和骆驼抗体，及包含抗体部分、多 价抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体，只要它们表现出所需的 生物学活性)和如本文所述的抗体片段的融合蛋白，以及包含抗原识 别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰的构型，例如但不限于微 型抗体(minibody)、巨型抗体(maxibody)、单链抗体(monobody)、肽抗 体(peptibody)、内抗体(intrabody)、双抗体(diabody)、三抗体(triabody)、 四抗体(tetrabody)、v-nar和双scfv。
[0265]
抗原结合部分可通过重组dna技术或通过酶促或化学裂解完整 抗体而产生。抗原结合部分尤其包括fab、fab'、f(ab')2、fv、dab 和互补决定区(cdr)片段、单链抗体(scfv)、嵌合抗体、双抗体和多 肽，其含有ig的足以致使抗原与多肽特异性结合的至少一部分。
[0266]
免疫球蛋白(ig)为异源多聚体分子。在自然存在的ig中，每个多 聚体主要由相同的多肽链对构成，每一对具有一条“轻链”(约25kda) 和一条“重链”(约50-70kda)。
[0267]
每条链的氨基末端部分包括约100至110个或更多个主要负责抗 原识别的氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分限定主要负责效应 功能的恒定区。人轻链分为κ和λ轻链。重链分为α、δ、ε、γ和μ， 并且分别将抗体的同种型定义为iga、igd、ige、igg、igm。这些类 别中的几个可进一步细分为以下同种型：igg1、igg2、igg3、igg4、 iga1和iga2。
[0268]
在轻链和重链中，可变区和恒定区通过约12个或更多个氨基酸 的“j”区连接，重链还包括约10个或更多个氨基酸的“d”区(在整个抗 体序列的情况下，d和j区在连接之后有时被视为可变区的部分)。 每个轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点，使得完整ig具有2个 结合位点。
[0269]
可变结构域展现出通过3个超变区(也称为互补决定区或cdr) 连接的相对保守性骨架区(fr)的相同总体结构。来自每对的2条链的 cdr被骨架区对齐，使得能够与特异性表位结合。从n端到c端， 轻链和重链均包含结构域fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3 和fr4。
[0270]
可以使用本领域公知的方法测定特定抗体中构成cdr的氨基酸 残基的同一性。例如，可将抗体cdr鉴定为最初由kabat等人定义 的超变区(kabat等人，1991,sequences of proteins of immunologicalinterest，第5版，public health service,nih,washington d.c.，nih公 开号91-3242)。也可将cdr的位置鉴定为chothia等人描述的结构环 结构(chothia等人，1989,nature 342:877-883)。其它cdr鉴定方法 包括“abm定义”，其是kabat和chothia之间的折衷并且基于观察到 的抗原接触推导出abysis程序(www.abysis.org)或cdr的“接触定 义”，如maccallum等人，1996,j.mol.biol.,262:732-745所述。north 已经使用不同的优选cdr定义集合鉴定了规范的cdr构象(north等 人，2011,j.mol.biol,406:228-256)。在本文称为cdr的“构象定义
”ꢀ
的另一种方法中，可将cdr的位置鉴定为对抗原结合产生焓贡献的 残基(makabe等人，2008,journal of biological chemistry, 283:1156-1166)。还有其它cdr边界定义可能不严格遵循上述方法之 一，尽管根据特定残基或残基组或甚至整个cdr不显著影响抗原结 合的预测或实验发现，可将cdr缩短或延长，但仍将与kabat cdr 的至少一部分重叠。如本文中所用，cdr可指通过本领域已知的任 何方法
(包括方法的组合)定义的cdr。本文所用的方法可利用根 据这些方法中的任一种定义的cdr。对于含有一个以上cdr的任何 给定实施方案，cdr(或抗体的其它残基)可以根据kabat、chothia、 north、延伸、abm、接触和/或构象定义中的任何一个来定义。
[0271]
哺乳动物轻链有两种类型，κ和λ，并且在任何给定的自然存在 的抗体分子中仅存在一种类型。在人中产生λ分子大约两倍之多的κ 分子，但是在其它哺乳动物中该比率可变。每个自由轻链分子在单条 多肽链中含有约220个氨基酸，其经折叠以形成恒定和可变区域结构 域。
[0272]
恒定κ(clκ)区由单个基因编码，而λ恒定(clλ)区由多个基因编 码，并且经历剪接。已知与clλ的特定多态种类相关的几种标志物： 例如，igclλ1(mcg标志物)；iglc2
–
igclλ2(kern-oz-标志物)；igclλ 3(kern-oz 标志物)和igclλ7。技术人员可以容易地确定迄今为止在 人clλ链中鉴定的所有多态性。本发明的序列通常包括clκ和clλ 的其它已知多态性，及抗体。已经在clκ中鉴定出两种多态性基因 座；clκ-v/a
153
和clκ-l/v
191
。迄今为止鉴定的三种多态性为：km(1)： clκ-v
153
/l
191
；km(1,2)：clκ-a
153
/l
191
；和km(3)：clκ-a
153
/v
191
。
[0273]
如本文中所用的术语“fc区”通常是指包含免疫球蛋白重链的c 端多肽序列的二聚体复合物，其中c端多肽序列是可通过木瓜蛋白酶 消化完整抗体获得的多肽。fc区可包含天然或变体fc序列。免疫球 蛋白的fc序列通常包含两个恒定结构域，ch2结构域和ch3结构域， 并且任选地包含ch4结构域。术语“fc多肽”在本文中用于指构成fc 区的多肽之一。在一些实施方案中，fc多肽可由任何合适的免疫球 蛋白，例如由各种igg1、igg2、igg3或igg4亚型，或由iga、ige、 igd或igm中的至少一种获得或得到。在一些实施方案中，fc多肽 包含野生型铰链序列的一部分或全部(通常在其n端)。在一些实施方 案中，fc多肽不含野生型铰链序列。fc多肽可包含天然或变体fc序 列。
[0274]
如本文所用的“免疫球蛋白样铰链区”、“免疫球蛋白样铰链序列
”ꢀ
及其变型是指免疫球蛋白样或抗体样分子(例如免疫粘附素)的铰链区 和铰链序列。在一些实施方案中，免疫球蛋白样铰链区可以来自或源 自任何igg1、igg2、igg3或igg4亚型，或来自iga、ige、igd或 igm，包括其嵌合形式，例如嵌合igg1/2铰链区。
[0275]“抗体片段”仅包含完整抗体的一部分，其中当存在于完整抗体中 时，该部分优选保留通常与该部分相关的功能中的至少一种，优选大 部分或全部功能。
[0276]“二价抗体”每个分子(例如igg)包含两个抗原结合位点。在一些 情况下，所述两个结合位点具有相同的抗原特异性。然而，二价抗体 可为双特异性(见下文)。
[0277]“单价抗体”每个分子(例如igg)包含一个抗原结合位点。在一些 情况下，单价抗体可具有一个以上的抗原结合位点，但结合位点来自 于不同的抗原。
[0278]“多特异性抗体”是靶向一个以上的抗原或表位的抗体。“双特异 性”、“双重特异性”或“双功能”抗体是具有两个不同的抗原结合位点 的杂交抗体。双特异性抗体是一种多特异性抗体并且可以通过多种方 法产生，包括例如杂交瘤的融合或fab'片段的连接。参见，例如songsivilai和lachmann(1990),clin.exp.immunol.79:315-321；及 kostelny等人(1992),j.immunol.148:1547-1553。双特异性抗体的两个 结合位点将结合可位于相同或不同蛋白质靶标上的两个不同表位。
[0279]
如本文中所用的短语“抗原结合臂”、“靶分子结合臂”及其变型是 指具有特异性结合目标靶分子的能力的本发明抗体的组成部分。通常 且优选地，抗原结合臂是免疫球蛋
白多肽序列的复合物，例如免疫球 蛋白轻链和重链的cdr和/或可变结构域序列。
[0280]
如本文中所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同源的抗体群 体获得的抗体，即构成该群体的单个抗体除了可能少量存在的自然存 在的突变以外，是相同的。单克隆抗体具高度特异性，针对单一抗原。 此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制 剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。
[0281]
fab片段是由v
l
、vh、c
l
和ch1结构域组成的单价片段；f(ab')2 片段是包含在铰链区通过二硫桥连接的两个fab片段的二价片段；fd 片段由vh和ch1结构域组成；fv片段由抗体单臂的v
l
和vh结构域 组成；并且dab片段由vh结构域或v
l
结构域组成(例如人、骆驼或 鲨鱼)。
[0282]
单链抗体(scfv)是其中vl和vh区经由使其能够成为单一蛋白 链的合成接头配对形成单价分子的抗体。双抗体是二价、双特异性抗 体，其中vh和vl结构域在单条多肽链上表达，但使用太短而不能 在同一链上的2个结构域之间配对的接头，从而迫使结构域与另一条 链的互补结构域配对并产生2个抗原结合位点。一个或多个cdr可 以共价或非共价并入到分子中以使其成为免疫粘附素。免疫粘附素可 以将cdr作为较大多肽链的一部分并入，可以将cdr共价连接到另 一条多肽链，或者可以非共价并入cdr。cdr允许免疫粘附素特异 性结合特定的目标抗原。
[0283]
抗体可具有一个或多个结合位点。如果存在一个以上的结合位 点，该结合位点可彼此相同或者可以不同。例如，自然存在的抗体具 有2个相同的结合位点，单链抗体或fab片段具有一个结合位点，而
ꢀ“
双特异性”或“双功能”抗体具有2个不同的结合位点。
[0284]“分离的抗体”是(1)不与自然缔合组分(包括以自然状态伴随其的 其它自然缔合的抗体)缔合的抗体，(2)不含来自相同物种的其它蛋白 质，(3)由并非自然表达抗体的细胞表达，或由来自不同物种的细胞表 达，或(4)自然界不存在的抗体。
[0285]
术语“人抗体”包括具有源自人ig序列的一个或多个可变区和恒 定区的所有抗体。在本发明的一些实施方案中，抗体的所有可变结构 域和恒定结构域源自人ig序列(全人抗体)。
[0286]
人源化抗体是源自非人物种的抗体，其中某些氨基酸已突变以避 免或消除人中的免疫反应。可选地，可以通过使来自人抗体的恒定结 构域与非人物种的可变结构域融合来产生人源化抗体。
[0287]
术语“嵌合抗体”是指含有来自一种抗体的一个或多个区域和来 自一种或多种其它抗体的一个或多个区域的抗体。每种抗体可源于单 独的物种(如人和小鼠)。
[0288]
术语“表位”包括能够与ig或t细胞受体特异性结合的任何分子 决定簇。表位决定簇通常由诸如氨基酸或糖侧链的原子的表面分组组 成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特性。当解离 常数《1um，优选《100nm或《10nm时，抗体“特异性”结合抗原。
[0289]
预期全人抗体可以最小化小鼠或小鼠来源的单克隆抗体(mab)固 有的免疫原性和过敏反应，从而增加施用的抗体的功效和安全性。预 期使用全人抗体可以在治疗慢性和复发性人疾病如炎症和癌症方面 提供显著优点，这可能需要重复的抗体施用。
[0290]
另外，可以产生其中2个(或更多个)单链抗体彼此连接的融合抗 体。如果想要在单条多肽链上产生二价或多价抗体，或者想要产生双 特异性抗体，则这是有用的。
[0291]
通过使2种或更多种抗体交联(相同类型或不同类型；例如产生 双特异性抗体)产生一种类型的衍生化抗体。合适的交联剂包括异双 功能交联剂，其具有由适当间隔区隔开的2个明显反应性基团(例如 间马来酰亚胺基苯甲酰基-n-羟基琥珀酰亚胺酯)，或同双功能交联剂 (例如，二琥珀酰亚胺辛二酸酯)。
[0292]
另一种衍生化抗体是标记的抗体。可用其将本发明的抗体或抗体 部分衍生化的有用的检测剂包括荧光化合物，包括荧光素、异硫氰酸 荧光素、罗丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白、镧系磷光体等。 也可以用可用于检测的酶标记抗体，例如辣根过氧化物酶、半乳糖苷 酶、荧光素酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。抗体也可以用生物素 标记，并通过间接测量抗生物素蛋白或链霉亲和素结合来检测。抗体 可以用磁性剂如钆标记。也可以用由次级报告蛋白识别的预定多肽表 位(例如亮氨酸拉链对序列、二抗的结合位点、金属结合结构域、表 位标签)来标记抗体。在一些实施方案中，标记通过各种长度的间隔 臂连接以降低潜在的空间位阻。
[0293]
如本文中所用，“完全拮抗剂”是在有效浓度下，基本上完全阻断 madcam的可测效应的拮抗剂。用部分拮抗剂意指能够部分阻断可 测效应，但即使在最高浓度下也非完全拮抗剂的拮抗剂。用基本上完 全意指阻断至少约80％，优选至少约90％，更优选至少约95％且最 优选至少约98％或99％的可测效应。
[0294]
如本文中所用，“抗madcam拮抗剂抗体”或“madcam拮抗剂 抗体”是指能够抑制madcam生物活性和/或由madcam信号传导 所介导的下游途径的madcam拮抗剂抗体。madcam拮抗剂抗体 包括阻断、拮抗、抑制或降低(在任何程度上，包括显著地)madcam 生物活性，包括由madcam信号传导所介导的下游途径或引发对 madcam的细胞应答的抗体。对于本发明的目的，将明确地理解， 术语“madcam拮抗剂抗体”涵盖先前鉴定的所有术语、标题及功能 状态和特征，由此madcam本身，madcam生物活性或生物活性 的结果在任何有意义的程度上基本上无效，被减少或中和。在一些实 施方案中，madcam拮抗剂抗体结合madcam。madcam拮抗剂 抗体的实例在例如wo2005067620中提供，其通过引用整体并入本 文。
[0295]
通用术语
[0296]
如本文中所用，“生物活性”是指化合物、组合物或混合物的体内 活性，或体内施用化合物、组合物或其它混合物之后产生的生理反应。 生物活性涵盖此类化合物、组合物和混合物的治疗效果、诊断效果和 药物活性。
[0297]
如本文中所用的术语“生物相容”意指某物为生物惰性或与细胞 内和细胞外生物分子无反应性，且无毒。
[0298]“约”或“大致”在连同可测量的数字变量一起使用时是指变量的 指示值及该变量在指示值实验误差范围内(例如，在平均值95％置信 区间内)或在指示值的10％以内(以较大者为准)的所有值。数字范围包 括限定该范围的数字。在时段(年、月、周、日等)的上下文中使用术 语“约”时，术语“约”意指该时段加上或减去下一从属时段(例如，约1 年意指11-13个月；约6个月意指6个月加上或减去1周；约1周意 指6-8天；等等)，或在指示值的10％以内，以较大者为准。
[0299]
术语“竞争”意指第一抗体或其抗原结合部分与第二抗体或其抗 原结合部分竞争结合，其中第一抗体与其同源表位的结合在第二抗体 的存在下，与不存在第二抗体时第一抗体的结合相比，可检测地降低。 其中在第一抗体的存在下第二抗体与其表位的结合也可
检测地降低 的替代方案可以是，但不一定是这种情况。即，第一抗体可以抑制第 二抗体与其表位的结合，而第二抗体不抑制第一抗体与其各自表位的 结合。然而，当每种抗体可检测地抑制其它抗体与其同源表位或配体 的结合时，无论是在相同的、更大还是更小程度上，都称所述抗体彼 此“交叉竞争”以结合其各自的表位。不管发生此类竞争或交叉竞争的 机制如何(例如空间位阻、构象变化或与共同表位或其部分结合)，技 术人员将会基于本文提供的教导认识到，此类竞争和/或交叉竞争抗 体可用于本文公开的方法。
[0300]
如本领域已知的术语“同一性”是指通过比较序列测定的两个或 更多个多肽分子或两个或更多个核酸分子的序列之间的关系。在本领 域中，“同一性”还指多肽或核酸分子序列之间的序列相关性程度，视 情况而定，通过核苷酸段或氨基酸序列之间的匹配来测定。“同一性
”ꢀ
度量两个或更多个序列之间相同匹配的百分比，由计算机程序的特定 数学模型(即“算法”)解决的空位比对。
[0301]
术语“相似性”是一个相关概念，但与“同一性”大不相同，是指包 括相同匹配和保守性取代匹配两种的相似性的度量。由于保守性取代 适用于多肽而不适用于核酸分子，所以相似性仅涉及多肽序列比较。 如果两个多肽序列具有例如20分之10个相同氨基酸，并且其余部分 都是非保守性取代，则同一性和相似性百分比均为50％。如果在同一 个例子中，还有5个存在保守性取代的位置，则同一性百分比仍为 50％，但相似性百分比将为75％(20分之15)。因此，在存在保守性取 代的情况下，两个多肽序列之间的相似性程度将高于那两个序列之间 的同一性百分比。
[0302]
术语“保守氨基酸取代”是指用非天然残基取代天然氨基酸残基， 使得对该位置上的氨基酸残基的极性、电荷和近似体积几乎没有或没 有影响。例如，保守性取代是由任何其它非极性残基取代多肽中的非 极性残基引起的。该术语还可以指经鉴定在高度相似的蛋白质之间经 常发生的取代，如在blosum62基质或相关基质中 (proc.natl.acad.sci.usa 89(22),10915-9,1992)。
[0303]
除非另有说明，否则提到如本文中所用的核苷酸序列涵盖其互补 序列。因此，除非上下文另有定义，否则提到具有特定序列的核酸应 理解为涵盖具有其互补序列的其互补链。
[0304]
术语“纯化”及其语法变型用于指从含有多肽和一种或多种杂质 的混合物中去除(完全或部分地)至少一种杂质，从而提高组合物中多 肽的纯度水平(即，通过减少组合物中杂质的量(ppm))。
[0305]
术语“k
d”是指特定抗体-抗原相互作用的结合亲和力平衡常数。 当kd≤1mm，优选≤100nm且最优选≤10nm时，称抗体特异性结合抗 原。kd结合亲和力常数可通过表面等离子体共振(spr)，例如使用 biacore
tm
系统来测量。在一些方面，spr使用捕获抗体和溶液相 靶标。在一些方面，spr使用捕获靶标和溶液相抗体。
[0306]
术语“k
off”是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率常数。k
off
解离 速率常数可通过表面等离子体共振，例如使用biacore
tm
系统来测 量。
[0307]
术语“表面等离振子共振”是指允许通过检测生物传感器基质内 的蛋白质浓度变化来分析实时生物特异性相互作用的光学现象，例如 使用biacore
tm
系统(pharmacia biosensor ab,uppsala,sweden andpiscataway,n.j.)。对于进一步的描述，参见jonsson u.等人， ann.biol.clin.51:19-26(1993)；jonsson u.等人，biotechniques11:620-627
(1991)；jonsson b.等人，j.mol.recognit.8:125-131(1995)； 及johnsson b.等人，anal.biochem.198:268-277(1991)。
[0308]
可以使用任何合适的方法测定madcam拮抗剂抗体与 madcam的结合亲和力和解离速率。可通过elisa、ria、流式细 胞术和表面等离子体共振如biacore
tm
测量结合亲和力。可通过表 面等离子体共振测量解离速率。可以通过使用任何合适的方法确定抗 体是否具有与madcam拮抗剂抗体基本上相同的kd。us8188235 的实施例7(通过引用并入本文)例示了一种用于测定抗madcam单 克隆抗体的亲和力常数的方法。
[0309]
可以通过使用任何合适的方法确定抗体是否结合相同表位或与 madcam拮抗剂抗体交叉竞争结合。在一个实例中，允许madcam 拮抗剂抗体在饱和条件下与madcam结合，然后测量试验抗体结合 madcam的能力。如果试验抗体能够与madcam拮抗剂抗体同时 结合madcam，则试验抗体与madcam拮抗剂抗体结合不同的表 位。然而，如果试验抗体不能同时与madcam结合，则试验抗体结 合相同表位、重叠表位或紧邻由人madcam拮抗剂抗体所结合的表 位的表位。该实验可使用elisa、ria、biacore
tm
或流式细胞术 (facs)进行。
[0310]
为了测试madcam拮抗剂抗体是否与另一种madcam拮抗剂 抗体交叉竞争，可以在两个方向使用本文描述的竞争方法，即确定参 考抗体是否阻断试验抗体，且反之亦然。在一个实例中，该实验使用 elisa进行。
[0311]
madcam抗体或其抗原结合部分可以通过多种技术产生，包括 常规单克隆抗体方法，例如kohler和milstein(1975)nature 256:495 的标准体细胞杂交技术。也可采用产生单克隆抗体的其它技术，如b 淋巴细胞的病毒或致癌转化。
[0312]
可以通过在宿主细胞中重组表达免疫球蛋白轻链和重链基因来 制备madcam抗体或其抗原结合部分。例如，为了重组表达抗体， 用一个或多个携带编码抗体的免疫球蛋白轻链和重链的dna片段的 重组表达载体转染宿主细胞，使得轻链和重链在宿主细胞中表达，且 优选分泌到培养宿主细胞的培养基中，可从该培养基中回收抗体。使 用各种重组dna方法获得抗体重链和轻链基因，以将这些基因并入 重组表达载体中并将载体引入宿主细胞中，如sambrook、fritsch和 maniatis(编)，molecular cloning；a laboratory manual，第二版，coldspring harbor,n.y.,(1989),ausubel,f.m.等人(编)current protocolsin molecular biology,greene publishing associates,(1989)和美国专利 第4,816,397号中描述的那些，其公开内容通过引用并入本文。
[0313]
为表达madcam抗体及其抗原结合部分，将如本文所述获得的 编码部分或全长轻链和重链的dna插入表达载体中，使得基因与转 录和翻译控制序列可操作地连接。关于这点，术语“可操作地连接”意 在指将抗体基因连接到载体中，使得载体内的转录和翻译控制序列起 到调节抗体基因转录和翻译的预期功能。将表达载体和表达控制序列 选择为与所用表达宿主细胞相容。表达载体包括例如质粒、逆转录病 毒、腺病毒、腺相关病毒(aav)、植物病毒如花椰菜花叶病毒、烟草 花叶病毒、粘粒、yac和ebv来源的附加体。抗体基因连接到载体 中，使得载体内的转录和翻译控制序列起到调节抗体基因转录和翻译 的预期功能。将表达载体和表达控制序列选择为与所用表达宿主细胞 相容。可以将抗体轻链基因和抗体重链基因插入到单独的载体中，或 将两个基因插入相同的表达载体中。通过各种方法将抗体基因插入表 达载体中(例如，连接抗体基因片段和载体上的互补限制性位点，或 者如果不存在限制性位点，则平端连接)。
[0314]
另一方面，madcam抗体或其抗原结合部分可以使用例如pct 公开号：wo98/52976和wo00/34317(通过引用并入本文)中描述的技 术去免疫以降低其免疫原性。
[0315]
除非另外指出，否则“临床缓解”定义为总mayo评分≤2，无单独 分项分数》1且直肠出血分项分数为0或1。在指出的情况下，临床缓 解可以基于sccai，在这种情况下，临床缓解被定义为总sccai评 分《2。
[0316]“临床反应率”定义为总mayo评分从至少3分的基线降低，有至 少30％的变化，伴有直肠出血分项分数降低至少1分或绝对评分为0 或1
[0317]“粘膜愈合”定义为内窥镜检查的绝对mayo分项分数为0或1
[0318]
结构比对
[0319]
通常对蛋白质且有时对rna序列有特异性的结构比对，使用关 于蛋白质或rna分子二级和三级结构的信息来帮助比对序列。将结 构比对用作“黄金标准”，因为它们明确地比对蛋白质序列在结构上相 似的区域，而不是完全依赖于序列信息。结构比对的常用算法为 tm-align(zhang和skolnick，nucleic acids research,33:2302-2309 (2005))，其在叠加期间将增加的权重分配给该结构最相似的区域。
[0320]
序列比对
[0321]
在对本发明的蛋白质序列的结构比对不可能，例如由于不存在靶 序列nmr或晶体结构数据时，可以使用序列比对。技术人员熟悉序 列比对工具(例如blast、clustal和技术人员已知的其它工具， 如本文所述的那些)，并且能够根据已知的结构基序对序列，特别是 抗体恒定结构域序列进行比对，尤其是因为对于免疫球蛋白结构域、 抗体和抗体恒定结构域(特别是跨亚型和物种)已经存在大量示例性结 构研究。
[0322]
对于具有保守性结构的特定蛋白质家族，其它比对算法是可用 的。在抗体的情况下，可以使用用于分配kabat编号的各种算法。除 非另有说明，否则在本文中使用2012版abysis(www.abysis.org)中实 施的算法将kabat编号分配给可变区域。
[0323]
在核酸序列的上下文中，术语“序列同一性百分比”意是指当针对 最大一致性比对时，两个序列中相同的残基。序列同一性比较的长度 可以在至少约9个核苷酸，通常至少约18个核苷酸，更通常至少约 24个核苷酸，典型地至少约28个核苷酸，更典型地至少约32个核 苷酸，且优选地至少约36、48个或更多个核苷酸段上。本领域中已 知许多可以用于测量核苷酸序列同一性的不同算法。例如，多核苷酸 序列可以使用fasta、gap或bestfit比较，这些是wisconsin packageversion10.0,genetics computer group(gcg),madison,wisconsin中 的程序。fasta，其包括例如程序fasta2和fasta3，提供了查 询和搜索序列之间最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比(pearson, methods enzymol.183:63-98(1990)；pearson,methodsmol.biol.132:185-219(2000)；pearson,methods enzymol.266:227-258 (1996)；pearson,j.mol.biol.276:71-84(1998)；通过引用并入本文)。 除非另有说明，否则使用特定程序或算法的默认参数。例如，核酸序 列之间的序列同一性百分比可以使用fasta及其默认参数(为6的字 长和评分矩阵的nopam因子)或使用通过引用并入本文的gcgversion 6.1中所提供的gap及其默认参数来测定。
[0324]
表2：mab 7.16.6vh、vl和cdr序列
[0325][0326]
实施例
[0327]
实施例1研究设计
[0328]
该研究是为评估mab 7.16.6的功效、安全性和pk而进行的2b 期概念验证(poc)、随机、双盲、安慰剂对照、平行、剂量范围研究。 将具有中度至重度溃疡性结肠炎的受试者按1:1:1:1:1比率随机分配 mab 7.16.6或安慰剂的皮下(sc)剂量水平(7.5、22.5、75和225mg)。 参与这项研究约38个月，其中包括6周的筛查期，12周的治疗期和 24个月的随访期(6个月就诊，接着是18个月的长期联系(每6个月 电话联系一次))。
[0329]
为了观察至少300名受试者的12周的数据，将357名受试者随 机分组并在21个国家的105个地点进行治疗。
[0330]
将受试者被随机分配到以下分组之一：(1)7.5mg sc(n＝60)；(2) 22.5mg sc(n＝60)；(3)75mg sc(n＝60)；(4)225mg sc(n＝60)；和安 慰剂(n＝60)。患者在第0周(在6周筛查期后)接受初始剂量，并在第4 周和第8周接受后续剂量。
[0331]
实施例2研究终点
[0332]
本研究的主要目的是基于具有中度至重度溃疡性结肠炎的受试 者的总mayo评分表征mab 7.16.6在引起临床缓解方面的剂量反应和 功效。
[0333]
总mayo评分由4个组成部分组成，各自评分为0-3，3为最差。 其中两个组成部分，粪便计数和直肠出血，从患者输入互动语音应答 系统(ivrs)的每日日记获得。mayo评分的第三个组成部分是医师的 整体评估。最终组成部分是内窥镜检查评分(参见下文的mayo评 分)。所有内窥镜检查评分均由研究者(本地读取者)以及中央盲读取者 评估。历史上，溃疡性结肠炎患者的临床研究已经使用本地读取的内 窥镜检查计算总mayo评分。
[0334]
mayo评分
[0335]
排便频率0＝该受试者排便次数正常
[0336]
1＝排便超出正常1至2次
[0337]
2＝排便超出正常3至4次
[0338]
3＝排便超出正常5次或更多次
[0339]
分项分数，0至3
[0340]
直肠出血0＝未见出血
[0341]
1＝不到一半的时间大便带血丝
[0342]
2＝大部分时间大便有明显血液
[0343]
3＝仅血液通过
[0344]
分项分数，0至3
[0345]
内窥镜检查发现：0＝正常或非活动性疾病
[0346]
1＝轻度疾病(红斑、血管形态减少、轻度脆性)
[0347]
2＝中度疾病(红斑明显、缺乏血管形态、脆性、
[0348]
糜烂)
[0349]
3＝重度疾病(自发性出血、溃疡)
[0350]
分项分数，0至3
[0351]
医师的整体评估
§
：0＝正常
[0352]
1＝轻度疾病
[0353]
2＝中度疾病
[0354]
3＝重度疾病
[0355]
分项分数，0至3
[0356]
*mayo评分范围为0至12，分数越高表明疾病越严重。数据来 自schroeder等人。
[0357]
每位受试者作为他或她自己的对照以确定排便频率异常的程 度。
[0358]
每日出血评分表示当天最严重的出血。
[0359]
§
医师的整体评估承认了另外三个标准，该受试者每天对腹部不 适和总体健康感的回忆，以及其它观察结果，如身体发现和受试者的 表现状态。
[0360]
功效终点
[0361]
主要功效终点：
[0362]
·
第12周有临床缓解的受试者的比例(定义为mayo评分≤2，无 单独分项分数》1且直肠出血分项分数为0或1)。
[0363]
关键次要功效终点：
[0364]
·
第12周有临床反应的受试者的比例(定义为总mayo评分从至 少3分的基线降低，有至少30％的变化，伴有直肠出血分项分数降低 至少1分或绝对评分为0或1)。
[0365]
·
第12周有粘膜愈合的受试者的比例(定义为内窥镜检查的绝对 mayo分项分数为0或1)。
[0366]
·
第4、8、12周部分mayo评分从基线降低≤2，无单独分项分 数》1的受试者的比例。
[0367]
·
第12周总mayo评分从基线的变化(cfb)及第4、8、12周单 独的mayo分项分数的cfb。
[0368]
·
第4、8、12周粪钙卫蛋白和hscrp的cfb。
[0369]
安全性和pk及pk/pd终点：
[0370]
·
通过ae、sae的频率评估安全性和耐受性，ae导致停止研 究治疗
[0371]
·
mab 7.16.6浓度-时间曲线
[0372]
·
药代动力学和抗药物抗体数据总结，包括初步群体pk。
[0373]
探索性终点：
[0374]
·
第4、8和12周有临床缓解的受试者的比例(定义为总sccai 评分《2分)
[0375]
·
基线和第12周时血液中的可溶性madcam及cfb。
[0376]
实施例3分析方法
[0377]
主要终点的分析
[0378]
预先指定的主要终点分析基于1)emax模型；2)线性剂量模型； 或3)使用最小风险权重的cmh方法(mehrotra和railkar，2000)。由 于观察到的数据不支持emax和线性剂量模型的单调递增剂量-反应 趋势，所以使用按先前抗tnf治疗经验分层的cmh方法用于主要终 点的分析。尽管未预先指定，但本报告中呈现了使用hochberg的变 数增加法进行单侧调整的p值，以支持多次比较的调整。
[0379]
次要终点的分析
[0380]
使用cmh方法分析第4、8或12周使用二进制数据的关键次要 和探索性终点。使用协方差(ancova)模型和/或线性混合模型(lmm) 的分析来分析第4、8或12周的连续终点。
[0381]
二进制终点中缺失值的插补
[0382]
在使用cmh方法时在主要、次要和探索性终点的二进制终点分 析中，使用治疗失败方法对漏失受试者进行缺失值插补。对于 ancova和lmm模型而言，仅使用观测到的数据；未进行插补。 对于纵向分析，由于广义线性混合模型在假设为随机丢失的情况下是 有效的，因此不进行插补，使用所观测到的数据。
[0383]
分析群体集合
[0384]
根据研究设计，在第0-12周保持原始随机化，而不是在第12周 之后。对以下群体进行0-12周分析集合：
[0385]
·
调整意向治疗(mitt)群体：由接受至少一个剂量的研究产品的 所有随机受试者组成的全分析集合。
[0386]
·
安全性分析群体：包括接受至少一个剂量的研究药物的所有参 与受试者。该群体包括受治疗，但出于各种原因未接受随机分配的研 究产品的受试者。
[0387]
·
符合方案的(pp)群体：mitt分析群体的子集，但不包括经鉴 定违背关键方案的所有受试者。
[0388]
·
pk群体：包括接受1个剂量的研究产品并且具有关于至少一 个pk浓度时间点的数据的所有受试者。
[0389]
实施例4受试者配置和人口统计
[0390]
共筛选587名受试者，获得357名随机受试者，其全部接受至少 1个剂量的研究药物。这357名受试者构成了mitt分析群体和安全 性分析群体。有2名受试者接受全部3个剂量与所分配不同的治疗。 这两名受试者均随机分配到22.5mg剂量组并且两者均接受下表3中 反映的75mg剂量组。
[0391]
为了支持对主要和次要终点的分析，使用320名受试者构成的 pp群体进行敏感性分析。由于对关键方案偏差的鉴定，共有37名受 试者被排除在pp分析集合之外。这些受试者中有12名接受了一个或 多个不正确的剂量。
[0392]
表3：根据治疗组进行的受试者配置和评估
[0393]
[0394][0395]
*分配到22.5mg治疗组的两名受试者对于3个剂量全部接受75mg治疗组治疗。
[0396]
表4：人口统计和基线特征
[0397][0398]
[0399]
实施例5功效
[0400]
主要功效终点-第12周的临床缓解
[0401]
关键的次要功效终点-第12周的临床反应和粘膜愈合
[0402]
图1显示了源自mitt和pp群体的中央和本地读数的每个治疗 组在第12周观测到的临床缓解率。一般来说，使用本地读数的缓解 率高于使用中央读数的缓解率。使用安慰剂、7.5mg、22.5mg、75mg 和225mg的mab 7.16.6计算的mitt群体的缓解率分别为2.7％、 11.3％、16.7％、15.5％和5.7％；而使用本地读数计算的缓解率分别为 5.5％、14.1％、23.6％、18.3％和12.9％。在pp群体中，相应的比率 略高，但保持相同的趋势，其中22.5mg是四个治疗组中最高的，其 次是75mg的比率。
[0403]
分析了在第12周通过抗tnf暴露层组(有经历或无经历)观测到 的临床缓解率并呈现于图2中。一般来说，mitt群体中观测到的临 床缓解率显示出相似的趋势，并且在无经历患者中与有经历的患者相 比显示更高的比率。pp分析结果支持与mitt群体相同的结论，但 在治疗组和安慰剂组之间显示更高的效应量。
[0404]
基于中央读数的主要终点(临床缓解)和关键次要终点(临床反应 和粘膜愈合)的分析如图4所示。对于主要终点临床缓解，四个治疗 组中的三个(7.5mg、22.5mg和75mg)显示出优于安慰剂组的统计学显 著的功效益处。第12周7.5mg、22.5mg和75mg高于安慰剂的临床 缓解率分别为8.0％(p＝0.043)、12.8％(p＝0.010)和11.8％(p＝0.012)。在 临床反应方面，与安慰剂相比，四个治疗组中有三个(22.5mg、75mg 和225mg)显示出统计学功效，其效应量(rd＝风险差异)分别为25.4％(p＝0.004)、16.3％(p＝0.048)和21.3％(p＝0.016)。22.5mg和75mg 高于安慰剂的粘膜愈合率与安慰剂显著不同，效应量分别为 18.7％(p＝0.004)和15.9％(p＝0.008)。最高剂量225mg与安慰剂相比的 临床缓解和粘膜愈合率在所有剂量组中是最低的。相反，225mg剂量 组的临床反应是第二高的，且与安慰剂显著不同。
[0405]
对应于本地读数的结果遵循相似趋势(图5)。效应量通常高于使 用中央读数评分的效应量。22.5mg和75mg的临床缓解率在统计上显 著，效应量分别为17.8％(p＝0.006)和12.2％(p＝0.038)。22.5mg和225mg 的临床反应在统计上显著，效应量分别为21.2％(p＝0.023)和 18.5％(p＝0.044)。75mg的临床反应略不显著(p＝0.065)。没有一个剂量 在粘膜愈合方面与安慰剂在统计学上分开，这可能是由于安慰剂率高 (21.9％)。在这两项分析下，在pp群体中也观察到类似的结果。
[0406]
关键次要功效终点
–
部分mayo评分
[0407]
图6总结了第4、8、12周部分mayo评分从基线降低≤2，无单 独分项分数》1的受试者的比例。使用用于主要终点分析的相同cmh 方法分析这些数据。第12周部分mayo评分从基线的变化的结果与 主要终点分析一致：区别于安慰剂(p＝0.004)和75mg的22.5mg，虽然 不显著，但是下一个最接近的效应量。第4周，四个剂量全部显示出 几乎相似的效应量，然而从第8周开始，它们开始与安慰剂有区别。 pp群体的分析结果提供了相同的趋势，每个时间点的rd略高。
[0408]
以上对于主要和关键次要终点呈现的所有分析都使用二进制终 点。为了支持上述临床功效的发现，使用第12周的总mayo评分， 拟合ancova模型分析从基线的变化。表5中呈现了使用中央读数 数据，来自ancova的结果。来自安慰剂组与22.5mg的差异似乎 是最
高的，接着是225mg，并且四个治疗组全部在统计上不同于安慰 剂。这些发现与临床反应的分析相似，因为反应是基于mayo评分从 基线的变化来测定的。使用本地读数的分析也与这些发现一致。
[0409]
图12显示随机化导致基线时均衡的排便频率评分。所有治疗组 到第4周均优于安慰剂，并且在22.5mg治疗组中第12周观察到最大 效应。排便频率是全mayo评分和部分mayo评分的组成部分。每天 报告并归一化为病前值，且按0-3等级分级。0分表示排便频率与病 前值相同；1分表示比正常排便多1-2次/天；2分表示比正常排便多 3-4次/天；且3分表示每天比正常排便多》4次。每个受试者的数据表 示评估日之前的3个值的平均值。图上的每个点是评估日治疗的平均 值(sem)。数据表中，与平均值相邻的括号值是安慰剂校正的平均值， 即平均值减去相应的安慰剂值。
[0410]
图13显示随机化导致基线时均衡的直肠出血评分。所有治疗组 到第4周时均优于安慰剂，并且这种效应持续到第12周，在22.5mg 组中就诊时见到最大效应。直肠出血是全mayo评分和部分mayo评 分两者的组成部分。每天报告并按0-3等级分级。0分表示无出血；1 分表示有《50％的时间有可见便血；2分表示≥50％的时间有可见便血； 且3分表示血液单独通过，没有粪便。每个受试者的数据表示评估日 之前的3个值的平均值。图上的每个点是评估日治疗的平均值(sem)。 数据表中，与平均值相邻的括号值是安慰剂校正的平均值，即平均值 减去相应的安慰剂值。
[0411]
图14显示随机化导致基线时均衡的可屈性乙状结肠镜检查评 分。所有治疗组在第12周时均优于安慰剂，并且在22.5mg组中就诊 时见到最大效应。可屈性乙状结肠镜检查是全mayo评分的组成部分。 它是在基线就诊之前和就在第12周就诊之前进行的。按0-3等级评 分。0分表示结肠粘膜正常或非活动性疾病；1分表示轻度疾病，其 特征在于红斑，血管形态减少和/或轻度脆性；2分表示中度疾病，其 特征在于明显的红斑，不存在血管形态，脆性和/或糜烂；3分表示带 有溃疡和自发性出血的重度疾病。图上的每个点是评估日治疗的平均 值(sem)。数据表中，与平均值相邻的括号值是安慰剂校正的平均值， 即平均值减去相应的安慰剂值。
[0412]
图15显示随机化导致基线时均衡的pga评分。正如由方案所预 期的，受试者的疾病在基线时被视为中度至重度。所有治疗组在第 12周时均优于安慰剂，并且在22.5mg组中就诊时见到最大效应。医 师的整体评估是全mayo评分和部分mayo评分两者的组成部分。它 反映了主治医师考虑到受试者的溃疡性结肠炎的所有方面的主观评 估。按0-3等级评分。0分表示受试者正常；1分表示轻度疾病；2 分表示中度疾病；3分表示重度疾病。图上的每个点是评估日治疗的 平均值(sem)。数据表中，与平均值相邻的括号值是安慰剂校正的平 均值，即平均值减去相应的安慰剂值。
[0413]
表5：第12周总mayo评分从基线的变化(ancova，中央读数)
[0414]
[0415]
*：模型包括治疗、基线总mayo评分和作为固定效应的抗tnf状态。
[0416]
实施例6探索性终点-sccai
[0417]
基于另一个预先指定的评分系统的临床缓解，即简化临床结肠炎 活动性指数(sccai)作为临床效果一致性检查得出(表6)。sccai不 包括内窥镜检查。基于sccai的给定时间点的临床缓解定义为总 sccai评分《2。在图7中绘制观测到的缓解率(用治疗失败方法)和第 4、8和12周时相应的90％置信区间。在所有时间点，对应于22.5mg 和75mg剂量的缓解率高于其它两个剂量，并且随着时间的推移，这 两个剂量进一步分离。第12周的sccai结果与基于mayo评分的临 床缓解结果一致。
[0418]
表6：简化临床结肠炎活动性指数(sccai)
[0419][0420][0421]
实施例7安全性
[0422]
在本研究中没有观察到安全性信号的证据。安全性群体由357名 受试者组成，所述受试者被随机分组并接受至少一个剂量的研究药 物。根据接受的治疗来分析受试者。表7中呈现了受试者配置。有2 名受试者接受对于全部3个剂量与所分配不同的治疗。两者均被分配 到22.5mg剂量组并且两者均接受75mg。尽管没有与剂量关系的明确 证据，但不良事件在经治疗的受试者(162/284＝57％)中比安慰剂治疗 的受试者(39/73＝53％)略为更常见(表7)。
[0423]
表7：对于安全性的受试者配置(第0-12周)
[0424][0425]
中止
[0426]
治疗期间有21例中止，包括12例因不良事件退出(表8)。12例 不良事件退出大部分是由于溃疡性结肠炎(7)和其它gi事件(3)恶化。 这些事件大多数发生在研究前30天的7.5毫克mg(n＝6)组中。没有药 物或剂量反应的证据。
[0427]
表8：由于不良事件而中止
[0428][0429]
死亡数
[0430]
该研究期间有1例死亡。在第一剂量的研究药物30天后，一名 接受7.5mg的30岁女性被诊断为结肠腺癌。进入研究之前，患者在 短时间内经历明显的体重减轻，筛查时bmi为15.8kg/m2。研究前结 肠镜检查异常，直肠内有狭窄区域，但活检未显示出发育异常。受试 者在研究药物的前四周内体重进一步减轻10％。重复乙状结肠镜检查 揭示更显著的狭窄，此时狭窄病变的活检显示为腺癌。她停用研究药 物，且于3个月后死于转移性结肠癌。尽管进行了阴性活检，但认为 癌症在进入研究之前就存在，而且这种致命的不良事件不太可能与研 究药物的使用相关。e-dmc也与这一因果关系一致。
[0431]
严重不良事件
[0432]
严重不良事件的频率在7.5mg治疗组(n＝10)中最高，但所有其它 组(包括安慰剂)均报告的sae频率相似(n＝1-4)。22名受试者中有26 例严重不良事件。最常见的sae是溃疡性结肠炎，有9名受试者报 告，其次是偏头痛，有2名受试者报告。其它胃肠道sae(各一个事 件)包括腹痛、结肠腺癌、肛门脓肿、肛裂、阑尾炎、腹泻、便秘、 艰难梭菌(c.difficile)感染和呕吐。其它非胃肠道sae(各一个事件) 包括复杂型偏头痛、偏头痛、癫痫、剧痛、视网膜动脉栓塞、血管迷 走性晕厥、肺栓塞和紧张性头痛。
[0433]
方案特定的医学重要性事件
[0434]
在研究过程中，非常活跃的监测程序就地评估pml和心肌炎的 任何风险。没有观察到这些事件中的任一种。
[0435]
不良事件
[0436]
总的来说，mab 7.16.6似乎耐受良好。不良事件的频率虽然在药 物治疗的受试者中(57％)略高于安慰剂治疗(53％)的受试者，但不随剂 量而增加。按系统器官分类(soc)最常见的不良事件是感染和侵染、 胃肠道疾病、神经系统疾病、肌肉骨骼疾病及全身性疾病和施用部位 病状(表9)。
[0437]
表9：按系统器官分类最常见的不良事件
[0438][0439]
在胃肠道和相关组织外，madcam组成型存在于乳腺、鼻组织 和脾脏中。对于乳腺或脾脏未报告不良事件。治疗组间鼻咽炎和上呼 吸道感染的发生率无差异(表10)。
[0440]
表10：鼻咽炎和上呼吸道感染
[0441][0442]
常见不良事件(在1个治疗组的至少4名受试者中观察到的不良 事件)是腹痛、溃疡性结肠炎、恶心、呕吐、头痛、咳嗽和贫血。最 常见的ae是头痛，有10％的受试者报告，其次是腹痛和溃疡性结肠 炎。对于任何这些事件而言没有剂量效应的证据(表11和图16)。
[0443]
报告为红斑、疼痛、肿胀和烧灼感的注射部位反应不常见，在225mg治疗组(10％)中更常观察到，但在包括安慰剂在内的其它治疗 组(3-4％)中均匀分布。mab 7.16.6在该患者群体中似乎安全且耐受良 好。
[0444]
表11：在至少一个治疗组的4名或更多受试者中发生的不良事件
[0445][0446]
实施例8生物标志物
[0447]
8.1通过血清蛋白质谱分析鉴定的蛋白质
[0448]
背景。在所有剂量组中在不同时间点收集血液和组织样品，并用 于使用olink biosciences高度多重化蛋白质测定平台测量一组蛋白 质。使用这种灵敏且准确的测定平台测量202种蛋白质的浓度，并在 治疗之前将所取的样品与初始剂量4周和12周后所取的样品间进行 比较。通过将来自治疗前所取样品的单一或多种蛋白质的起始浓度以 及蛋白质浓度从基线到第4周或第12周的变化相关联来分析预测对 治疗的反应的生物标志物。将这些蛋白质数据连同来自rna、基因 分型的数据和细胞群体数据一起分析。与其各自的对照值显示出偏差 的蛋白质测定的结果示于表12和13中。抗madcam抗体每4周施 用一次。
[0449]
方法。使用olink biosciences邻近延伸测定平台，由在治疗之前 和治疗给药期间第4周和12周所取的样品，测量来自入选madcamuc poc研究的患者的血清蛋白。总计，由在12周治疗期间的3个 时间点从331名受试者收集的937份血清样品中测量蛋白质。将三种 商用测定法，proseek multiplex cvd i
96x96
、proseek multiplex inf i
96x96
和proseek multiplex onc v2 i
96x96
用于通过olink测量研究血清样品 中的202种独特蛋白质。
[0450]
结果。与起始浓度值相比，在抗madcam治疗给药期间，4周 和12周时许多蛋白质具有不同的浓度。表12中总结了与治疗前和安 慰剂组第4周相比，在治疗前与抗madcam治疗4周后之间具有最 大中值差异的蛋白质。显示了每一组每种标志物的中值变化和四分位 数1、四分位数3值。使用统计建模分析对于反应的生物标志物的数 据。
[0451][0452]
表13中总结了与治疗前和安慰剂组第12周相比，在治疗前与抗 madcam治疗12周后之间具有最大中值差异的蛋白质。显示了每一 组的中值变化和四分位数1、四分位数3值。使用统计建模分析对于 反应的生物标志物的数据。
[0453]
另外，结合ibd节点，与其它ibd数据集相比，可以通过数据 挖掘来提取附加值，以进一步了解这种疾病，提出对这些样品已知或 新颖的治疗性蛋白质评估。
[0454]
具体而言，三种蛋白质生物标志物-粪钙卫蛋白、smadcam和 hscrp特别预示着患者对治疗的反应。蛋白质水平响应于治疗的变化 和蛋白质浓度从基线到第4周或基线到第12周的变化与临床终点相 关(例如，第12周的临床反应)，并且可用于预测临床反应或鉴定特别 适合这种治疗的患者亚群。
[0455][0456]
粪钙卫蛋白。粪钙卫蛋白数据从基线变化的估计值(和90％ci) 总结于图8中。第4
周，活跃组的粪钙卫生蛋白值从基线大幅下降， 第8周和第12周持续下降。从图8显而易见，与活跃组相比，安慰 剂组显示较少的下降。在第12周，对于安慰剂、7.5mg、22.5mg、75mg 和225mg剂量而言，从基线的变化％的几何平均值分别为-19％(下 降)、-60％(下降)、-59％(下降)、-55％(下降)和-60％(下降)。
[0457]
可溶性madcam(smadcam)。smadcam数据中从基线变化 的估计值(和90％ci)总结于图9中。与研究设计期间的预测一致， smadcam在剂量范围内显示出非常显著和单调的下降，在剂 量》＝22.5mg时平稳。第12周，对于安慰剂、7.5mg、22.5mg、75mg 和225mg剂量而言，从基线的变化％的几何平均值分别为4％(增加)、-68％(下降)、-90％(下降)、-94％(下降)和-98％(下降)。
[0458]
hscrp。hscrp数据中从基线变化的估计值(和90％ci)总结于图 10中。在第4周，活跃组的hscrp值从基线有所下降，直到第8周 持续下降，除7.5mg剂量组除外，其未显示出许多变化。活跃治疗组 到第12周显示出恢复到基线的趋势，尽管与临床发现一致，但在 22.5mg和75mg组中观察到最大且最持久的降低。从图2显而易见， 安慰剂组未随时间推移显示出许多变化。在第12周，对于安慰剂、 7.5mg、22.5mg、75mg和225mg剂量而言，从基线的变化％的几何 平均值分别为15％(增加)、5％(增加)、-20％(降低)、-16％(降低)和2％(增 加)。
[0459]
8.2通过对madcam uc的基因表达谱分析鉴定的rna生物 标志物
[0460]
背景。在所有剂量组中在不同时间点收集血液和组织样品，并用 于使用rna-seq技术平台测量全转录组。rna-seq是一种无偏性基 因表达谱分析技术，其允许同时且无偏差地测量给定细胞或组织类型 中存在的几乎所有转录物的转录水平。对转录组以每个样品约4000 万个配对末端读段的读段深度进行测序，这允许对包括各自同种型在 内的》15,000个基因进行详细的转录物分析。将在治疗之前所取的样 品与治疗4周和12周后所取的样品进行比较，并进行统计分析以鉴 定在这些取样时间点在不同剂量水平的转录物变化。通过将来自治疗 前所取样品的单一或多种转录物的起始浓度以及转录表达水平从基 线到第4周或第12周的变化相关联来分析预测对治疗的反应的生物 标志物。这些基因表达数据也连同来自蛋白质的数据和细胞群体数据 一起分析。
[0461]
方法。使用illumina rna-seq技术平台，由治疗之前和治疗给药 期间第4周和12周所取的样品，测量来自入选madcam uc研究的 患者的血液和组织rna，所述技术平台由以下组成：truseq mrna 链测序文库产生，接着是使用iiiumina hiseq 2000或4000系列测序 仪分析该文库。总计，在基线和第12周测量320名患者血液中的转 录物表达。来自该组的256名患者在第4周也进行了转录物分析。对 于组织活检样品分析，对126名受试者在筛查就诊和第12周时分析 了发炎的组织活检。
[0462]
结果。与基线(或筛查就诊)时的起始基因表达值相比，在抗 madcam治疗给药期间，4周和12周时许多转录物显示出不同的基 因表达水平。参见，表15。具体而言，ccr9的表达变化(例如，第 12周从基线的表达变化)被认为与临床功效相关。
[0463]
表15
[0464]
[0465][0466]
8.3通过facs鉴定的细胞生物标志物。
[0467]
b7整联蛋白facs测定。通过全血facs测定评估淋巴细胞亚 类中表面b7标志物的
频率和表达。在室温下将肝素钠血液的等分试 样(100μl)与30μl抗体混合物(cd45ro-fitc、b7整联蛋白或大鼠 igg2a同种型对照-pe、cd4-percpcy5.5、cd27-apc和cd3-apc-h7； 全部来自bd)孵育30分钟。向每支管中添加1ml的1x bd pharmlyse 溶液，用手振荡并在室温下孵育30分钟，同时避光30分钟。裂解的 血液在制备2小时内由facscanto ii获得。血细胞计数器设置为获 取每管的大多数样品。用bd quantibrite-pe作为校准物将该亚类中 表面b7蛋白的表达定量为标准单位mesf(等量可溶性荧光染料分 子)。
[0468]
madcam在肠内皮细胞和肠道相关淋巴组织上表达。抗 madcam阻断表达β7 的细胞与配体madcam之间的相互作用， 从而阻断表达β7 的细胞从循环中向肠道的外渗。因此用抗 madcam治疗增加了循环中的α4β7 细胞。在基线、第8周和第12 周取血样，并通过荧光激活细胞分选(facs)测量α4β7 中央记忆t细 胞。将β7 数据百分比报告为也表达b7的cd4 表达细胞％，还测量 了绝对数量(细胞数/μl)和mesf(等量可溶性荧光染料分子)，其是中 央记忆t细胞上β7蛋白表达的单位度量。使用线性混合模型，使用 从基线的变化作为反应，并且使用治疗、抗tnf经历状态、伴随的 is疗法、基线、就诊和通过就诊相互作用的治疗作为固定影响和受试 者作为随机影响分析facs参数。据信循环b7 中央记忆cd4 t淋 巴细胞在抗madcam治疗的患者中在第8周和第12周时以剂量依 赖性方式增加。对于所有剂量而言预计第8周和第12周时％β7 中央 记忆t细胞的倍数变化是统计学显著的。第8周和第12周对于所有 剂量的抗madcam组而言，与安慰剂相比，也预计β7 中央记忆t 细胞的绝对数量和mesf的增加将显著更高。
[0469]
8.4通过基因型分型鉴定的遗传生物标志物。
[0470]
使用pfizer定制illumina阵列为所有受试者生成全基因组基因型 数据。这种定制芯片主要基于illimuna omniexpressexome芯片设计， 旨在涵盖基因组中存在的大多数外显子变异。超出 omniexpressexome芯片的附加内容物旨在涵盖基于先前的研究，已 知与多种族群组的疾病相关的其它变体。样品水平和基因型水平的质 量控制将基于以下标准进行：
[0471]
样品水平
[0472]
·
样品检出率(call rate)检查-去除检出率《95％的样品。
[0473]
·
样品性别检查-去除性别与自我报告的性别不一致的样品。性 别由x染色体上的纯合率定义。对于男性而言，纯合率必须》＝0.8， 而对于女性而言，这应《＝0.2。通常，少于0.5％的样品性别不匹配。
[0474]
·
样品杂合率-去除杂合率高于平均值》3个标准偏差的样品。
[0475]
·
样品相关性检查-对于pi_hat评分》0.1875的配对，去除具有 较低检出率的样品。
[0476]
基因型水平
[0477]
·
snp检出率检查：去除检出率《95％的snp。
[0478]
·
snp标志物重复检查：去除芯片上重复的snp。保留检出率较 高的snp。
[0479]
基因型数据的分析。进行两项遗传分析。首先，分析候选snp 以评估在第12周与临床功效的关联。具体而言，分析rs11171739， 因为rs11171739是已经提出与madcam1基因的表达水平潜在相关 的snp。第二，基于根据公开可用数据已知与溃疡性结肠炎相关的顶 级遗传变体的组合构建基因评分，以测试该基因评分与对madcam 的临床反应的关联。基于uc
的风险等位基因的加权和计算基因评分。 权重将基于每个风险等位基因的已知效应量。为每名个体受试者计算 基因评分，然后测试在线性回归模型中各种临床功效度量的关联。
[0480]
所有分析都包括作为协变量的祖先(ancestry)，以避免检测与祖先 而不是药物反应相关的的信号。祖先由每名受试者的定量矢量表示， 代表其沿着许多主分量的值，并且作为种族替代包括在上述回归模型 中作为协变量。
[0481]
实施例9药代动力学、靶标覆盖和抗药物抗体
[0482]
暴露与在fih研究(a7281001，溃疡性结肠炎)中观察到的一致， 并且通过描述靶介导的药物配置的初步群体药代动力学模型来充分 预测。
[0483]
在7.5mg，22.5mg，75mg和225mg剂量下，第12周时观察到的 平均ctrough值分别为435ng/ml、1334ng/ml、5567ng/ml和 19860ng/ml。这些血清浓度对应于分别为68、90、94和98的可溶性 madcam的抑制(第12周从基线的几何平均百分比变化)，与研究设 计期间的模型预测一致。
[0484]
通常，本研究中的pk水平血清浓度与在单独的克罗恩氏病研究 中，使用相同治疗性抗体在相应剂量下观察到的相似。
[0485]
在分析到第12周的来自积极治疗的282名受试者的758份ada 样品中，709例报告为阴性。来自29名受试者的49份ada样品被 证实为阳性；服用7.5mg的7名受试者，服用22.5mg的6名受试者， 服用75mg的9名受试者和服用225mg的7名受试者。12名受试者 在基线时有确认为阳性的ada。基线时有确认为阳性的ada的12 名受试者中的9名受试者在基线后为阳性(服用7.5mg的3名受试者， 服用22.5mg的1名受试者，服用75mg的4名受试者和服用225mg 的1名受试者)，没有治疗提高ada反应(即与基线相比，治疗后ada 滴度更高)的指示。在709例报告为阴性的样品中，基于测量的血清 浓度分别》lloq(》10ng/ml)和blq(《10ng/ml)，396例(约56％)被视 为不确定而313(约44％)被确认为阴性。注意：在313个bloq值中， 245个是给药前的测量。
[0486]
总体确认阳性率为约6.4％，滴度通常较低且接近截止值(4.64)， 均不高于11.86。
[0487]
在基线后确认阳性ada的受试者的pk数据的初步评估指示阳 性ada对暴露、安全性或功效无明显影响。该评估是基于来自基线 后确认阳性ada的受试者(n＝26)的所有可用数据进行的。
[0488]
实施例10克罗恩氏病
[0489]
背景。抑制白细胞(wbc)从血流转移到肠道是一种有前景的管理 炎症性肠病的新方法。opera是一项随机、多中心双盲、安慰剂对 照的mab 7.16.6在患有克罗恩氏病(cd)的受试者中的安全性和功效 的研究。
[0490]
方法。18-75岁、具有活动性中度至重度cd(cdai 220-450)和抗 tnf和/或免疫抑制药物失败或不耐受史的成人，如果hscrp》3.0mg/l 且结肠镜检查出现溃疡，则符合条件。将受试者随机分为安慰剂、 22.5mg、75mg或225mg组。主要终点是第8或12周的cdai-70反 应。次要终点是缓解和cdai-100反应和安全性。研究的疾病生物标 志物是通过facs测定的血液β7 cd4 中央记忆t-细胞水平(频率和 β7表达)、crp和可溶性madcam。
[0491]
结果。267名受试者入选。虽然对于任何治疗而言，cdai-70反 应与安慰剂都没有显著差异，但是在具有较高基线crp(crp》18)的 受试者中的缓解似乎更高。所有组在基线
时的中值crp为18mg/l。 经治疗的而非对照受试者的可溶性madcam在第2周与基线相比以 剂量相关方式显著降低，并且在研究期间保持较低。在pf治疗的受 试者中循环β7 cd4 中央记忆t-淋巴细胞在第8和12周以剂量依 赖性方式增加。基线特征和功效结果子集在表14中。
[0492]
表14：患者特征和第12周的功效结果子集
[0493][0494]
*使用广义线性混合模型进行分析；#子集分析的报告比例。
[0495]
mab 7.16.6在该患者群体中似乎安全且耐受良好。最常见的不良 事件与潜在疾病有关，任何ae组中均没有剂量反应的证据。
[0496]
结论。由于高的安慰剂反应，未达到主要终点，mab 7.16.6具有 药理活性，如循环β7 t淋巴细胞的剂量相关性增加和madcam持 续剂量相关性降低所示。具有较高基线crp的受试者对mab 7.16.6 具有最佳反应。本研究中未观察安全性信号。
[0497]
实施例11克罗恩氏病的rna生物标志物
[0498]
使用illumina rna-seq技术平台，由治疗之前和治疗给药期间第 12周所取的样品，测量来自入选madcam uc研究的患者的血液来 源的rna，所述技术平台由以下组成：truseq mrna链测序文库产 生，接着是使用illumina hiseq 2000或4000系列测序仪分析该文库。 总计，在基线和第12周测量91名患者血液中的转录物表达。
[0499]
与基线时的起始基因表达值相比，在抗madcam治疗给药期间， 12周时许多转录物显示出不同的基因表达水平。表16中总结了在基 线与抗madcam治疗后12周在不同剂量水平统计学上200个最显 著的变化的转录物。显示了每个剂量水平下的平均倍数变化(avefc)， 接着是治疗剂量间变化的显著性(pvaluetrt)。前两列分别显示了 ensemble geneid和hugo基因命名委员会(hgnc)geneid。
[0500]
表16
[0501]
[0502]
[0503]
[0504]
[0505]