1.本发明涉及一株鸡源高效吸附铅乳酸菌菌株的pcr鉴定及测序，该菌株发酵液的制备，探明了其体内外嗜铅特异性及机理。
背景技术：
2.目前，已经有很多关于细菌、真菌对重金属污染水源的修复以及对污染土壤的修复的研究，但关于从环境及动物体内分离筛选具有重金属抗性的乳酸菌的报道较少，所以本研究通过进行深入的研究可以应用于动物及人体内重金属的去除，不仅可以保障动物性食品的安全，还可以确保人体的安全。利用16srdna通用引物进行pcr扩增，并进行测序，通过ncbi进行同源性比对。选择不同剂量的发酵液进行铅清除试验。利用icp-oes可以快速高效的测定痕量元素，灵敏度高，线性范围宽，可以同时测定多种元素等特点。研究ph对该菌铅的吸附力以及该菌吸附铅的可逆性。应用扫描电子显微镜、eds能谱观察以及透射电子显微镜分析观察吸附反应发生的部位；应用傅里叶变换红外光谱仪对该菌吸附铅有关的功能基团的特征进行验证。
技术实现要素：
3.通过16srdna序列测定，本试验所筛选的一株鸡源耐铅细菌与enterococcus faecium同源性达98%。genebank登录号为km233626。e. faecium jt1菌株具有吸附重金属铅特性，此外，重金属抗性、去除能力、抑菌性等特性显示，分离筛选的乳酸菌体外铅吸附效率为66.95%，可以在含铅浓度为800mg/l的平板上生长良好，测定其产酸效果、耐酸性、吸附条件、以及该菌吸附铅有关的功能基团的特征进行验证。选用清洁级wistar大鼠为体内试验的研究对象，利用扫描电子显微镜和eds能谱观察分析，研究了该菌在动物体内的清除机理。e. faecium jt1菌株可以作为益生菌添加到饲料或食品中，去除进入动物或人体内的重金属，从而可以控制重金属在体内的长期积累。
技术特征：
1.pcr测序分离筛选到的嗜铅菌株为乳酸菌，ncbi比对结果显示与enterococcus faecium同源性为97%，基因注册号genebank登录号：km233626。2.发酵液的制备及菌种的保存制备清除发酵液时按1%接种量于50mlmrs液体培养基中，140r/min摇床，37℃培养36h后菌体浓度为10
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cfu/ml，于4℃保存备用，菌种于脱脂乳中保存于-80℃。3.耐性菌株的驯化、筛选在含不同铅浓度的mrs琼脂培养基中对样品进行筛选，获得耐铅能力较强的菌株；再将耐铅菌株在更高铅浓度的培养基上进行分离纯化，得到一株耐铅浓度高达800mg/l的菌株jt1，体外铅吸附效率达66.95%，而且经过多次传代培养后，该菌株的耐铅性表现稳定，未发生显著的变化，说明经过多次传代后基因没有丢失，具有较高的、稳定的重金属耐受性。4.体外吸附铅特性该菌对铅离子的选择性吸附作用非常强，基本不受其它金属阳离子的干扰；菌体吸附铅具有可逆性，可被解离剂解离，透射电子显微镜照片显示，吸附铅离子之后的菌体表面有大量金属沉积物，eds能谱分析证明了菌体表面吸附的确实是铅沉积物；傅里叶红外变换光谱显示，菌体表面的氨基，羧基，羟基和磷酸基等官能团参与了对铅的吸附。5.体内吸附机理利用清洁级wistar大鼠作为试验动物，对jt1在大鼠体内排铅机理做了初步研究，应用扫描电子显微镜观察到试验大鼠结肠中存在大小、形态与供试菌jt1相似菌体，而空白组 未发现类似菌体，eds结果显示该菌体表面吸附了铅，因此嗜铅肠球菌jt1能够存活于大鼠结肠中，通过表面吸附方式结合铅离子。
技术总结
本发明涉及一株鸡源高效吸附铅乳酸菌菌株的PCR鉴定及测序，该菌株发酵液的制备，探明了其体内外嗜铅特异性及机理。耐铅细菌与Enterococcus faecium同源性达98%。Genebank登录号为KM233626。E.faecium JT1菌株具有吸附重金属铅特性，此外，重金属抗性、去除能力、抑菌性等特性显示，分离筛选的乳酸菌体外铅吸附效率为66.95%，可以在含铅浓度为800mg/L的平板上生长良好，测定其产酸效果、耐酸性、吸附条件、以及该菌吸附铅有关的功能基团的特征进行验证。选用清洁级Wistar大鼠为体内试验的研究对象，利用扫描电子显微镜和EDS能谱观察分析，研究了该菌在动物体内的清除机理。E.faecium JT1菌株可以作为益生菌添加到饲料或食品中，去除进入动物或人体内的重金属，从而可以控制重金属在体内的长期积累。而可以控制重金属在体内的长期积累。
技术研发人员：赵宏坤 满兆红
受保护的技术使用者：防城港千迪慷祛铅生物技术有限公司
技术研发日：2021.12.02
技术公布日：2022/4/15
再多了解一些
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