一种利用非激素类化合物制备ZZ基因型中华鳖伪雌个体的方法

技术特征：
1.一种利用非激素类化合物制备zz基因型中华鳖伪雌个体的方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、收集中华鳖胚胎，挑选良好的受精的胚胎，将挑选的胚胎放置在经过消毒的黄沙中，孵化至第15.5期时，用微量注射器向胚胎注射3-5μl诱导剂，诱导剂的有效成分为特异性激动剂1,3,5-三(4-羟基苯基)-4-丙基-1h-吡唑；s2、注射诱导剂后，按照与步骤s1相同的孵化条件孵化至稚鳖出壳；s3、在胚胎发育至27期时，收集性腺，进行组织学分析，鉴定中华鳖为生理性雌性或雄性，统计性别比例；s4、对中华鳖的zz或zw基因型进行鉴定，分析zz伪雌鳖的数量及比例。2.根据权利要求1所述的利用非激素类化合物制备zz基因型中华鳖伪雌个体的方法，其特征在于，所述步骤s1中，诱导剂的制备方法为将特异性激动剂溶于92％-98％的酒精或二甲基亚砜溶剂中，诱导剂的特异性激动剂浓度为2μg/μl。3.根据权利要求2所述的利用非激素类化合物制备zz基因型中华鳖伪雌个体的方法，其特征在于，所述步骤s1中，诱导剂的制备方法具体包括以步骤，取20μl体积的浓度为100mg/ml的dmso诱导剂母液加到400μl的peg300中，混合均匀后加入50μl tween-80，混合均匀，继续加入530μl生理盐水定容至1ml得到诱导剂，诱导剂中dmso的含量为2％。4.根据权利要求1所述的利用非激素类化合物制备zz基因型中华鳖伪雌个体的方法，其特征在于，所述步骤s1包括通过手电筒照射确定胚胎气室的位置，使气室朝上，用医用酒精消毒后，在气室上方的卵壳上用不锈钢注射器针头刺破卵壳，用微量注射器向胚胎的气室中注射诱导剂，之后用组织胶水粘合注射位置，并使气室的位置朝上，摆放于黄沙中继续孵化。5.根据权利要求1-4任一所述的利用非激素类化合物制备zz基因型中华鳖伪雌个体的方法，其特征在于，所述步骤s1中，孵化条件为温度25-33℃，空气相对湿度70％-90％。6.根据权利要求1所述的利用非激素类化合物制备zz基因型中华鳖伪雌个体的方法，其特征在于，所述步骤s3中，采用组织学切片h&e染色法进行生理性性别鉴定，采用雌性相关基因foxl2、雄性相关基因sox9的免疫荧光染色法进行生理性性别鉴定。7.根据权利要求1所述的利用非激素类化合物制备zz基因型中华鳖伪雌个体的方法，其特征在于，所述步骤s4中，采用pcr法鉴定基因型。8.根据权利要求7所述的利用非激素类化合物制备zz基因型中华鳖伪雌个体的方法，其特征在于，所述步骤s4中，所用上游引物的序列为5
’‑
gatcgaattacatcctgcct-3’，下游引物的序列为5
’‑
taaattaggactggaagacacc-3’。

技术总结
本发明提供了一种利用非激素类化合物制备ZZ基因型中华鳖伪雌个体的方法，包括以下步骤：S1、收集中华鳖胚胎，在温度为25-33℃，空气相对湿度为70％-90％的孵化条件下，孵化至第15.5期时(参照中华鳖胚胎发育分期标准)，用微量注射器向胚胎注射3-5μL诱导剂，诱导剂的有效成分为特异性激动剂1,3,5-三(4-羟基苯基)-4-丙基-1H-吡唑；S2、注射诱导剂后，按照与步骤S1相同的孵化条件孵化至稚鳖出壳；S3、在胚胎发育至27期时，收集性腺，进行组织学分析，鉴定中华鳖性别；S4、对中华鳖的ZZ或ZW基因型进行鉴定，分析ZZ伪雌鳖的数量及比例。本发明提供了一种全新的ZZ伪雌鳖诱导方法，具有绿色生态、性别逆转率高、环境污染小的特点。环境污染小的特点。环境污染小的特点。


技术研发人员：葛楚天 郭银 孙伟 李攀 钱国英 王伟
受保护的技术使用者：浙江万里学院
技术研发日：2021.12.10
技术公布日：2022/4/15