一种模拟真实战场环境下小鼠脓毒症模型构建方法与流程

1.本发明属于动物模型制作领域，具体涉及一种模拟真实战场环境下小鼠脓毒症模型构建方法。


背景技术：

2.脓毒症是由全身感染引起的全身炎症反应综合症；脓毒症动物模型是指人为构建的，用于模仿脓毒症发生、发展机制的一种疾病动物模型；一般构建脓毒症有多种方式，例如细菌攻击、内毒素攻击、腹膜炎攻击等。


技术实现要素：

3.为了解决上述技术问题，本发明设计了一种可模拟真实战场环境下的浓度症小鼠模型，通过本方法的构建加上外部环境的刺激，模型构建后症状表现符合研究实验标准，能最大程度的还原战场上脓毒症的症状；
4.为了达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现的：一种模拟真实战场环境下小鼠脓毒症模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.s1：配置0.5％巴比妥钠，按照35mg/kg的剂量腹腔注射小鼠，诱导小鼠全身麻醉；
6.s2：待小鼠全麻后，用电动剃毛刀剃光小鼠腹部毛发，产生足够手术操作面积大小的区域，并用碘酒消毒两次；
7.s3：用组织镊拽起小鼠腹部外皮，用外科剪竖直剪开小鼠外皮，剪出1-2cm的伤口即可；
8.s4：寻找小鼠腹膜中线，并适当剥离外皮与腹膜的黏着，方便手术完成后的缝合；
9.s5：组织镊拽起小鼠的腹膜，避开腹膜肌肉的血管，沿腹膜中线剪开1cm左右的伤口，避免剪到腹膜血管以及腹膜下方的肠道组织，导致小鼠的失血过多和手术失败死亡；
10.s6：用无损镊寻找小鼠的盲肠，将其放置于外皮消过毒的区域，用2-0号线结扎适当长度的小鼠盲肠，用6号注射器针头对盲肠进行穿刺，并挤出少许盲肠内容物；
11.s7：将盲肠放回腹腔原位，并用小号圆针缝合腹膜肌肉；
12.s8：用角针缝合小鼠外皮，并消毒；
13.s9：皮下注射200μl，37℃的生理盐水，进行体液复苏，放于加热垫上保温；
14.s10：小鼠苏醒后，将小鼠放回饲养笼中，隔2-3h检查小鼠状况，若出现脓毒休克改为每半小时观察一次；
15.s11：饲养笼中通过扩音器持续播放枪弹声音，同时使用烟雾发生装置持续给予饲养笼烟雾；
16.优选的，所述s1中选用的小鼠模型为7-10周龄的c57小鼠，小鼠体重大致在24-30g；
17.优选的，所述s11中枪弹声音和烟雾发生的间隔时间为20-30min。
18.本发明的有益效果是：
19.通过本发明的构建方法加上外部环境的刺激，模型构建后症状表现符合研究实验标准，能最大程度的还原战场上脓毒症的症状。
具体实施方式
20.为了说明本发明的技术方案及效果，通过以下实施例进行详细说明。
21.实施例1
22.s1：选取8周龄的c57小鼠，小鼠体重大致在24-30g，配置0.5％巴比妥钠，按照35mg/kg的剂量腹腔注射小鼠，诱导小鼠全身麻醉；
23.s2：待小鼠全麻后，用电动剃毛刀剃光小鼠腹部毛发，产生足够手术操作面积大小的区域，并用碘酒消毒两次；
24.s3：用组织镊拽起小鼠腹部外皮，用外科剪竖直剪开小鼠外皮，剪出1-2cm的伤口即可；
25.s4：寻找小鼠腹膜中线，并适当剥离外皮与腹膜的黏着，方便手术完成后的缝合；
26.s5：组织镊拽起小鼠的腹膜，避开腹膜肌肉的血管，沿腹膜中线剪开1cm左右的伤口，避免剪到腹膜血管以及腹膜下方的肠道组织，导致小鼠的失血过多和手术失败死亡；
27.s6：用无损镊寻找小鼠的盲肠，将其放置于外皮消过毒的区域，用2-0号线结扎适当长度的小鼠盲肠，用6号注射器针头对盲肠进行穿刺，并挤出少许盲肠内容物，对照组为打开腹对小鼠盲肠进行检查；
28.s7：将盲肠放回腹腔原位，并用小号圆针缝合腹膜肌肉；
29.s8：用角针缝合小鼠外皮，并消毒；
30.s9：皮下注射200μl，37℃的生理盐水，进行体液复苏，放于加热垫上保温；
31.s10：小鼠苏醒后，将小鼠放回饲养笼中，隔2-3h检查小鼠状况，若出现脓毒休克改为每半小时观察一次；
32.s11：饲养笼中通过扩音器每间隔30min播放枪弹声音，同时使用烟雾发生装置每间隔30min给予饲养笼烟雾。
33.实施例2
34.按照实施例1中的方法构建得到脓毒症小鼠动物模型，将其与打开腹腔进行盲肠检查的对照组进行对比，其症状表现如下：
35.脓毒症小鼠模型组：小鼠逐渐出现竖毛、腹泻、脓尿，饮水、进食及活动次数减少，造模完成12h后，全身炎性反应达到峰值，小鼠活动次数明显减少，且活动失去昼夜规律；
36.对照组：小鼠饮水，进食正常，活动规律，活力表现正常。
37.实施例3
38.模型小鼠的心脏指标评估
39.评估方法：elisa法检测血液中的心肌损伤标志物，具体方法如下：
40.1)先将elisa板置于室温平衡半小时；
41.2)将取到的血浆平均分为三等份，记录其体积，样本稀释液稀释至100ul，并准备梯度稀释标准品；
42.3)将样本与标准品加入到elisa孔中，37℃，60转，孵育2h；
43.4)扣出液体，pbst洗涤3次，每次5min；
44.5)加入100ul的链霉亲和素标记的二抗，37℃，60转，1h；
45.6)扣掉液体，pbst洗涤三次，每次5min；
46.7)加入100ul的生物素标记的hrp，37℃，60转，1h；
47.8)扣掉液体，pbst洗涤三次，每次5min；
48.9)加入a、b显色液，避光显色10min；
49.10)酶标板od450测量吸光度；
50.11)elisa的数据处理，用spass对标准曲线进行多种函数形式的线性回归分析，再根据线性回归的方程算出每个孔中的浓度，并计算其初始浓度。
51.实施例4
52.模型小鼠超声心功能验证
53.在脓毒症模型建立之前，分别测量并记录实验组和对照组左室射血分数，脓毒休克出现后再对小鼠进行一次左室射血分数的测量。
54.用1.5％的异氟烷对小鼠进行麻醉。
55.用电动剃毛刀，剃去小鼠胸部的毛发，放于超声台上，滴加液体石蜡为超声耦合剂。
56.用超声刀分别找到心脏横切与纵切最大面积处，在迈瑞m7系列便携式超声的m模式下分别测定其收缩和舒张时的lvl，lvw，lvh，通过心脏超声三点测体积功能测定收缩舒张时的左心室体积，每次测量三次，去除一个偏差较大的数值，再取平均值。


技术特征：
1.一种模拟真实战场环境下小鼠脓毒症模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：配置0.5％巴比妥钠，按照35mg/kg的剂量腹腔注射小鼠，诱导小鼠全身麻醉；s2：待小鼠全麻后，用电动剃毛刀剃光小鼠腹部毛发，产生足够手术操作面积大小的区域，并用碘酒消毒两次；s3：用组织镊拽起小鼠腹部外皮，用外科剪竖直剪开小鼠外皮，剪出1-2cm的伤口即可；s4：寻找小鼠腹膜中线，并适当剥离外皮与腹膜的黏着，方便手术完成后的缝合；s5：组织镊拽起小鼠的腹膜，避开腹膜肌肉的血管，沿腹膜中线剪开1cm左右的伤口，避免剪到腹膜血管以及腹膜下方的肠道组织，导致小鼠的失血过多和手术失败死亡；s6：用无损镊寻找小鼠的盲肠，将其放置于外皮消过毒的区域，用2-0号线结扎适当长度的小鼠盲肠，用6号注射器针头对盲肠进行穿刺，并挤出少许盲肠内容物；s7：将盲肠放回腹腔原位，并用小号圆针缝合腹膜肌肉；s8：用角针缝合小鼠外皮，并消毒；s9：皮下注射200μl，37℃的生理盐水，进行体液复苏，放于加热垫上保温；s10：小鼠苏醒后，将小鼠放回饲养笼中，隔2-3h检查小鼠状况，若出现脓毒休克改为每半小时观察一次；s11：饲养笼中通过扩音器播放枪弹声音，同时使用烟雾发生装置给予饲养笼烟雾。2.根据权利要求1所述一种模拟真实战场环境下小鼠脓毒症模型构建方法，其特征在于，所述s1中选用的小鼠模型为7-10周龄的c57小鼠，小鼠体重大致在24-30g。3.根据权利要求1所述一种模拟真实战场环境下小鼠脓毒症模型构建方法，其特征在于，所述s11中枪弹声音和烟雾发生的时间间隔为20-30min。

技术总结
本发明公开了一种模拟真实战场环境下小鼠脓毒症模型构建方法，本发明的方法采用盲肠结扎穿刺法(CLP)，通过手术方式将小鼠自身盲肠内容物释放到腹腔造成感染，从而模拟脓毒症的发生和发展；将经过盲肠结扎穿刺后腹腔缝合的小鼠放入笼中饲养，同时在饲养过程中给予战场模拟烟雾和声音的刺激，还原战场环境，最终成型脓毒症小鼠模型症状表现可最接近战场。成型脓毒症小鼠模型症状表现可最接近战场。


技术研发人员：贾雄飞 毛小琴 王珂 张霞
受保护的技术使用者：中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院
技术研发日：2021.12.13
技术公布日：2022/4/12