磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及检测领域，特别涉及一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒、磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的制备方法、磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的检测方法和磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒在制备检测早期癫痫或先兆子痫药物中的应用。


背景技术：

2.公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
3.子痫前期是妊娠期常见的并发症，目前全球发病率约为3-5％。同时，子痫前期是孕产妇死亡的主要原因之一，约42％的孕产妇死亡由子痫前期导致。此外，全球约15％的早产亦由子痫前期导致。
4.子痫前期的基本病理生理变化为血管内皮细胞受损、全身细小动脉痉挛，继而可能导致全身各系统、脏器损伤，导致一系列严重并发症，严重威胁母婴健康。目前子痫前期的治疗方法主要为对症治疗，包括解痉、降压、利尿、合理扩容、终止妊娠；然而，这些方法并不能从根本上治疗子痫前期。只有终止妊娠才能解除疾病对母体的短期危害。如果能在孕早期识别子痫前期风险并对高危患者予以预防，可能是降低孕产妇不良结局的途径。


技术实现要素：

5.发明目的
6.本发明的目的在于提供一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒及其制备方法、检测方法，本发明根据双抗体夹心法实验原理，利用磁微粒及吖啶酯化学发光免疫分析技术，建立一种定量测定血清中可溶性fms样酪氨酸激酶-1(sflt-1)及胎盘生长因子(plgf)含量的检测方法。由于吖啶酯化学发光免疫技术是一种非常精确的定量检测，使检测确率更高，而一般免疫学检测的准确率明显低于吖啶酯发光免疫技术的结果，且时间长，不方便。
7.解决方案
8.为实现本发明目的，第一方面，本发明实施例提供了一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒，包括sflt-1抗体检测试剂和/或pigf抗体检测试剂；还包括预激发液和激发缓冲液；
9.所述sflt-1抗体检测试剂包括吖啶酯标记的第一sflt-1抗体、包被有第二sflt-1抗体的磁微粒；吖啶酯标记的sflt-1抗体中sflt-1抗体与吖啶酯摩尔比为1：(5-15)；
10.所述第一、第二sflt-1抗体分别识别可溶性fms样酪氨酸激酶-1的不同表位；
11.所述pigf抗体检测试剂包括吖啶酯标记的第一pigf抗体、包被有第二pigf抗体的磁微粒；吖啶酯标记的pigf抗体中pigf抗体与吖啶酯摩尔比为1：(5-15)；
12.所述第一、第二pigf抗体分别识别胎盘生长因子的不同表位；
13.所述预激发液包括无机酸和氧化剂，且ph＜2；
14.所述激发缓冲液包括无机碱和增强剂，且缓冲液的ph》13；
15.所述增强剂为季铵盐型阳离子表面活性剂，选自八烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基碘化铵、十四烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基碘化铵和二十二烷基三甲基氯化铵中的一种或几种；可选地为十六烷基三甲基溴化铵。
16.本发明所述方法的第一sflt-1抗体或第一pigf抗体与吖啶酯摩尔比为1：(5-15)，实现对不同抗原的检测，不适当的配比会出现发光信号弱或非特异性结合等情况，导致检测灵敏度低或结果不准确。此摩尔比是通过一系列实验设计，筛选出的适宜比值范围。
17.进一步地，吖啶酯标记的第一sflt-1抗体中，第一sflt-1抗体与吖啶酯摩尔比为1：10。
18.进一步地，吖啶酯标记的第一pigf抗体中，第一pigf抗体与吖啶酯摩尔比为1：10。
19.进一步地，吖啶酯标记的第一sflt-1抗体中，还包括包括用于定容吖啶酯标记的第一sflt-1抗体的标记缓冲液；可选地吖啶酯标记的第一sflt-1抗体的浓度为0.5ug/ml，可选地，标记缓冲液为磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液，可选地为0.1mol/l的碳酸盐缓冲液，ph8.2。
20.进一步地，吖啶酯标记的第一pigf抗体中，还包括用于定容吖啶酯标记的第一pigf抗体的标记缓冲液；可选地吖啶酯标记的第一pigf抗体的浓度为0.25ug/ml，可选地，标记缓冲液为磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液，可选地为0.1mol/l的碳酸盐缓冲液，ph8.2。
21.进一步地，包被有第二sflt-1抗体的磁微粒中，磁微粒和第二sflt-1抗体的质量比为100：(4～8)；可选地，还包括用于定容包被有第二sflt-1抗体的磁微粒的mes缓冲液，可选地，第二sflt-1抗体的磁微粒的浓度为0.5mg/ml；可选地，mes缓冲液的浓度为0.02mol/l，ph4.5-5.5。
22.进一步地，包被有第二pigf抗体的磁微粒中，磁微粒和第二pigf抗体的质量比为100：(4～8)；可选地，还包括用于定容包被有第二pigf抗体的磁微粒的mes缓冲液，可选地，第二pigf抗体的磁微粒的浓度为0.5mg/ml；可选地，mes缓冲液的浓度为0.02mol/l，ph4.5-5.5。
23.进一步地，所述预激发液中，所述酸为硝酸或盐酸或硫酸或硼酸；所述氧化剂为过氧化氢或过氧化脲；可选地，所述预激发液中，所述酸的浓度为0.01-0.18m，所述氧化剂的质量浓度为0.1-2.0％；进一步可选地，所述预激发液中包括0.07m硝酸和0.6wt％过氧化氢，ph为1.1。
24.进一步地，所述激发缓冲液中，所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾；可选地，所述缓冲液中，所述碱的浓度为0.2-0.8m，所述增强剂的质量浓度为0.2-2.0％；
25.进一步可选地，所述缓冲液中包括0.5m氢氧化钾和0.478wt％十六烷基三甲基溴化铵，ph为13.5。
26.第二方面，提供一种所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
27.吖啶酯标记的第一sflt-1抗体的制备方法包括：标记缓冲液中加入第一sflt-1抗体和吖啶酯溶液，混匀，室温避光震荡反应，透析，加入标记缓冲液定量，获得吖啶酯标记的第一sflt-1抗体试剂；
28.包被有第二sflt-1抗体的磁微粒的制备方法包括：磁微粒悬浮液中加入edc水溶
液混悬30-60min，磁分离去上清，重悬，加入第二sflt-1抗体包被，混悬16-20h；磁分离去上清，定量，获得包被有第二sflt-1抗体的磁微粒试剂；
29.吖啶酯标记的第一pigf抗体的制备方法包括：标记缓冲液中加入第一pigf抗体和吖啶酯溶液，混匀，室温避光震荡反应，透析，加入标记缓冲液定量，获得吖啶酯标记的第一pigf抗体试剂；优选地，标记缓冲液为0.1mol/l的碳酸盐缓冲液，ph8.2；
30.包被有第二pigf抗体的磁微粒的制备方法包括：磁微粒悬浮液中加入edc水溶液混悬30-60min，磁分离去上清，重悬，加入第二pigf抗体包被，混悬16-20h；磁分离去上清，定量，获得包被有第二pigf抗体的磁微粒试剂；
31.进一步地，吖啶酯标记的第一sflt-1抗体的制备方法和吖啶酯标记的第一pigf抗体的制备方法中相互独立地包括：室温避光震荡反应的时间为10-120分钟。
32.进一步地，标记缓冲液为磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液，可选地为0.1mol/l的碳酸盐缓冲液，ph8.2。
33.进一步地，透析方法包括：将反应混合物装入透析袋中，2-8℃避光透析，2h/次更换一次透析液，可选地透析液为磷酸盐缓冲液溶液，可选地其浓度为0.02mol/l。
34.进一步地，包被有第二sflt-1抗体的磁微粒的制备方法、包被有第二pigf抗体的磁微粒的制备方法中相互独立地包括：每100g磁微粒对应加入0.5-1ml的浓度为10mg/ml的edc水溶液；可选地，磁微粒悬浮液采用mes缓冲液重悬磁微粒获得；可选地，重悬或定量时采用mes缓冲液；可选地，mes缓冲液的浓度为0.02mol/l，ph4.5-5.5；可选地，定量浓度为0.5mg/ml；可选地，磁微粒悬浮液或重悬液中，每100g磁微粒对应10ml的mes缓冲液；可选地，混悬为室温混悬。
35.上述所涉及的标记缓冲溶液为磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液，不同的缓冲液体系及其浓度和ph对吖啶酯的发光强度有不同程度的影响。
36.进一步地，上述抗体与吖啶酯室温避光震荡反应的时间为10-120分钟。通常该反应时间的长短会影响抗体偶联程度，发光信号强度，但随着时间延长，会出现更高的假阳现象，因此，需要通过实验验证最适偶联时间。
37.进一步地，预激发液的制备方法包括：将纯化水、浓硝酸和30％双氧水混合，定容，搅拌混匀后，过滤得预激发液；预激发液的ph为1.10，其中各组分的浓度为：0.07m硝酸和0.6wt％过氧化氢。
38.进一步地，激发缓冲液的制备方法包括：将纯化水、增强剂，溶解，加入氢氧化钾，溶解，定容，过滤得激发缓冲液；可选地，激发缓冲液的ph为13.5，可选地，激发缓冲液中氢氧化钾浓度为0.5m；可选地，增强剂为十六烷基三甲基溴化铵，可选地其质量分数为0.478wt％。
39.第三方面，提供一种磁微粒吖啶酯化学发光检测方法，包括如下步骤：
40.s1、加20体积份的的校准品、质控品或待测标本至检测管中；
41.s2、加50体积份的包被有抗体的磁微粒至检测管中；
42.s3、加50体积份的吖啶酯标记的抗体至检测管中；
43.s4、混匀后，37
±
0.5℃温育15分钟；
44.s5、加300体积份的清洗液至检测管中，混匀；
45.s6、磁分离去上清；
46.s7、重复步骤s5、s6，至少两遍；
47.s8、加入预激发液及激发缓冲液至检测管中，预激发液及激发缓冲液的加入量为200体积份；
48.s9、1s后检测发光强度；
49.其中，当定量检测样本中的可溶性fms样酪氨酸激酶-1时，步骤s2中抗体为第二sflt-1抗体，步骤s3中抗体为第一sflt-1抗体；当定量检测样本中的胎盘生长因子时，步骤s2中抗体为第二pigf抗体，步骤s3中抗体为第一pigf抗体；
50.预激发液与激发缓冲液的体积比为2∶5-5∶2；可选地为1∶1；
51.可选地，还包括：计算可溶性fms样酪氨酸激酶-1与胎盘生长因子的比值，用于作为判断早期癫痫的依据。
52.第四方面，本发明提供一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒在制备检测早期癫痫或先兆子痫药物中的应用，采用第一方面所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒或第二方面所述的制备方法制备的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒。
53.本发明还提供上述方法得到的吖啶酯标记物用于sflt-1/pigf两种定量试剂盒的制备方法。其检测特异性和发光信号均很强，灵敏度高。
54.有益效果
55.(1)本发明在评估血压和蛋白尿的基础上，研发了磁微粒-吖啶酯系统平台下的两个联检项目试剂盒，可以同时检测sflt-1/plgf两个项目，并计算其比值进行结果判定，能够辅助临床更早期、快速的进行子痫前期诊断、预测不良妊娠结局，帮助医生对高危人群进行识别与治疗，从而保障妊娠期母婴安全。本发明所述方法吖啶酯与抗体偶联的标记方法简单，重复性较好，并且偶联效率高，发光信号强，便于大规模应用。以该方法可以得到灵敏度更高、线性范围广。
56.(2)pigf主要生物学功能包括诱导血管内皮细胞增值、迁移和激活，促使胎盘血管的生成，而sflt-1有下调并抑制pigf促进胎盘血管生长的生物活性。研究发现，sflt-1和pigf浓度的改变明显早于子痫前期发病，且sflt-1/pigf比值可以更好地反映胎盘血管的生长情况。在评估蛋白尿和血压的基础上，联合检测sflt-1/pigf比值对子痫前期具有良好的预测价值和诊断指导意义。
57.(3)本发明提供了一种基于磁微粒的吖啶酯化学发光免疫学检测先兆子痫早诊的方法及sflt-1/pigf磁微粒吖啶酯化学发光试剂盒的研制。所采用化学发光分析法具有灵敏度高、设备简单、操作方便、线性范围广、分析快、也便于实现自动化等优点。另外优选的吖啶酯系统是化学发光法常用的发光剂，其标记抗体的工艺直接影响发光效率，即影响检测结果的灵敏度及准确性。本发明开展的目的是探索一种稳定性较好，性能优良的定量检测免疫诊断方法及试剂，辅助临床更早期、快速的进行子痫前期诊断、预测不良妊娠结局，帮助医生对高危人群进行识别与治疗，从而保障妊娠期母婴安全。
58.(4)本发明的吖啶酯标记物的制备：吖啶酯标记物在化学结构上有产生发光的特殊基团，在发光免疫分析过程中添加激发液后即可直接参与发光反应，无需底物液，通常此类物质无本底发光，是一类发光效率很高的发光剂。吖啶酯或吖啶磺酰胺均可与抗体(或抗原)结合，生产具有化学发光活性强，免疫反应特异性高的标记物，吖啶酯通常标记在抗体或抗原的氨基上，标记抗体时最好定向偶联在抗体的固定区上，以便使得抗体既能比较高
效率标记又不会损伤抗体活性。磁微粒是由高分子单体聚合而成的微球或颗粒，直径多为微米级或毫米级，其表面带有能与抗体或抗原结合的功能团，如氨基，羧基，羟基等，故可以通过特定的偶联方法形成化学偶联，有结合力强，容量大的优点。在免疫反应时，磁微粒可以均匀地分散到反应溶液中，比表面积较大，有利于反应加速进行，提高了反应速率。
59.(5)本技术采用将抗体直接包被在磁微粒上，吖啶酯直接标记抗体的偶联方法，不需要引入生物素-链霉亲和素系统，操作简单，引入的不确定因素少，生产风险小。
具体实施方式
60.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
61.另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
62.实施例1
63.1、吖啶酯标记的第一sflt-1抗体制备方法为：
64.1)量取标记缓冲溶液于离心管中；
65.2)加入第一sflt-1抗体，充分混匀；
66.3)加入吖啶酯溶液，充分混匀，室温避光震荡反应；吖啶酯与第一sflt-1抗体摩尔比为1:10；第一sflt-1抗体与吖啶酯室温避光震荡反应的时间为10-120分钟；
67.4)将以上混合物装入透析袋中，2-8℃避光透析，2h/次更换一次透析液；透析液为0.02mol/l磷酸盐缓冲液溶液。
68.5)加入适量的标记缓冲液定量，2～8℃密封保存。
69.2、吖啶酯标记的第一pigf抗体的制备方法为：
70.1)量取标记缓冲溶液于离心管中；
71.2)加入第一pigf抗体，充分混匀；
72.3)加入吖啶酯溶液，充分混匀，室温避光震荡反应；吖啶酯与第一pigf抗体摩尔比为1:10；第一pigf抗体与吖啶酯室温避光震荡反应的时间为10-120分钟；
73.4)将以上混合物装入透析袋中，2-8℃避光透析，2h/次更换一次透析液；透析液为0.02mol/l磷酸盐缓冲液溶液。
74.5)加入适量的标记缓冲液定量，2～8℃密封保存。
75.3、包被有第二sflt-1抗体的磁微粒的制备方法为：
76.1)取100mg磁微粒，磁分离去上清，用0.02mol/l，ph4.5-5.5mes缓冲液10ml重悬；
77.2)加入0.5-1ml新鲜配制的浓度为10mg/ml的edc水溶液，室温混悬30-60min；
78.3)磁分离，去上清，用0.02mol/l，ph4.5-5.5mes缓冲液10ml重悬；
79.4)加入4-8mg的第二sflt-1抗体，室温混悬16-20h；
80.5)磁分离，去上清，用磁微粒缓冲液稀释重悬到0.5mg/ml，完成磁分离试剂的制备。
81.4、包被有第二pigf抗体的磁微粒的制备方法为：
82.1)取100mg磁微粒，磁分离去上清，用0.02mol/l，ph4.5-5.5mes缓冲液10ml重悬；
83.2)加入0.5-1ml新鲜配制的浓度为10mg/ml的edc水溶液，室温混悬30-60min；
84.3)磁分离，去上清，用0.02mol/l，ph4.5-5.5mes缓冲液10ml重悬；
85.4)加入4-8mg的第二pigf抗体，室温混悬16-20h；
86.5)磁分离，去上清，用磁微粒缓冲液稀释重悬到0.5mg/ml，完成磁分离试剂的制备。
87.本实施例的预激发液的制备方法为：将0.8l纯化水、4.862ml浓硝酸和5.46ml30％双氧水依次加入1l避光广口玻璃容器中，加纯化水定容至1l，搅拌混匀后，过滤得预激发液；其ph为1.10，其中各组分的浓度为：硝酸：0.07m；过氧化氢：0.6％；
88.本实施例制备激发缓冲液的方法为：将0.8l纯化水、4.82g十六烷基三甲基溴化铵依次加入到1l广口玻璃容器中，搅拌至固体完全溶解，加入28.056g氢氧化钾，搅拌至完全溶解后，加纯化水定容至1l，过滤得激发缓冲液；以上方法制备缓冲液b的ph为13.5，其中各组分的浓度如下：氢氧化钾：0.5m；十六烷基三甲基溴化铵：0.478wt％。
89.实施例2
90.与实施例1的区别在于，激发缓冲液中的十六烷基三甲基溴化铵(ctab)更换为十六烷基三甲基氯化铵(ctac)。
91.实施例3
92.与实施例1的区别在于，激发缓冲液中的十六烷基三甲基溴化铵(ctab)更换为十六烷基三甲基碘化铵。
93.实施例4
94.与实施例1的区别在于，激发缓冲液中的十六烷基三甲基溴化铵(ctab)更换为二十二烷基三甲基氯化铵。
95.实施例5
96.与实施例1的区别在于，激发缓冲液中的十六烷基三甲基溴化铵(ctab)更换为十四烷基三甲基氯化铵。
97.实施例6
98.与实施例1的区别在于，激发缓冲液中的十六烷基三甲基溴化铵(ctab)更换为十二烷基三甲基碘化铵。
99.实施例7
100.与实施例1的区别在于，激发缓冲液中的十六烷基三甲基溴化铵(ctab)更换为十二烷基三甲基氯化铵。
101.实施例8
102.与实施例1的区别在于，激发缓冲液中的十六烷基三甲基溴化铵(ctab)更换为八烷基三甲基氯化铵。
103.检测实施例1
104.检测流程如下：
105.可溶性fms样酪氨酸激酶-1(sflt-1)定量检测试剂盒的使用方法如下：
106.1、加20μl校准品、质控品或待测标本至检测管中；
107.2、加50μl第二sflt-1抗体-磁微粒至检测管中；
108.3、加50μl第一sflt-1抗体-吖啶酯至检测管中；
109.4、混匀后，37
±
0.5℃温育15分钟；
110.5、加300μl清洗液至检测管中，混匀；
111.6、磁分离去上清；
112.7、重复步骤5、6，两遍；
113.8、加100μl预激发液a及100μl激发液b至检测管中；
114.9、1s后检测发光强度。
115.胎盘生长因子(plgf)定量检测试剂盒的使用方法如下：
116.1、加50μl校准品、质控品或待测标本至检测管中；
117.2、加50μl第二plgf抗体-磁微粒至检测管中；
118.3、加50μl第一plgf抗体-吖啶酯至检测管中；
119.4、混匀后，37
±
0.5℃温育10分钟；
120.5、加300μl清洗液至检测管中，混匀；
121.6、磁分离去上清；
122.7、重复步骤5、6，两遍；
123.8、加100μl预激发液a及100μl激发液b至检测管中；
124.9、1s后检测发光强度。
125.将实施例1、2的试剂盒按照检测实施例的方法对样品进行检测。
126.首先，对实施例1～8的增强剂进行信噪比检测，结果如表1所示，显而易见增强剂中添加了ctab后的信噪比数值更高，即此增强剂的灵敏度更高，是较为理想的选择。
127.信噪比检测方法为：利用全自动化学发光免疫分析仪检测吖啶酯样品及空白本底的发光值，两者的比值得到信噪比，信噪比数值较大者性能更优。
128.表1-1实施例2(ctac)和实施例1(ctab)的表面活性剂的的信噪比数据
[0129][0130][0131]
表1-2实施例3～5的表面活性剂的信噪比数据
[0132][0133]
表1-3实施例6～8的表面活性剂的信噪比数据
[0134]
[0135][0136]
检测实施例2
[0137]
sflt-1试剂盒原理：
[0138]
本试剂盒采用双抗体一步夹心法，是将化学发光免疫分析法与磁微粒分离技术相结合的一种检测方法。检测原理是：将待测样本，磁珠包被的sflt-1抗体和吖啶酯标记的sflt-1抗体依次加入，一对sflt-1单克隆抗体与样本中sflt-1抗原分子结合，形成免疫复合物。洗涤去除未结合的抗体和杂质后，依次加入激发液a，b，测定相对发光强度(rlu)。在一定范围内rlu与sflt-1抗原浓度呈正相关，通过rlu可以从标准曲线上计算出待测样本的sflt-1含量。
[0139]
plgf试剂盒原理：
[0140]
本试剂盒采用双抗体一步夹心法，是将化学发光免疫分析法与磁微粒分离技术相结合的一种检测方法。检测原理是：将待测样本，磁珠包被的plgf抗体和吖啶酯标记的plgf抗体依次加入，一对plgf单克隆抗体与样本中plgf抗原分子结合，形成免疫复合物。洗涤去除未结合的抗体和杂质后，依次加入激发液a，b，测定相对发光强度(rlu)。在一定范围内rlu与plgf抗原浓度呈正相关，通过rlu可以从标准曲线上计算出待测样本的plgf含量。
[0141]
为了更好的验证本发明试剂盒的检测效果，将实施例1、2的试剂盒按照检测实施例的方法对样品进行检测。
[0142]
一、sflt-1试剂盒的主要分析性能
[0143]
1、最低检测限
[0144]
要求：最低检测限应不大于1ng/ml，检测结果如表2。
[0145]
表2 sflt-1试剂盒检测sflt-1的最低检测限
[0146][0147]
2、线性
[0148]
要求：在[0，400]ng/ml的测量范围内，试剂盒的相关系数r应≥0.9900，检测结果如表3。
[0149]
表3 sflt-1试剂盒检测sflt-1的线性相关性
[0150][0151]
3、重复性
[0152]
要求：变异系数(cv)应不大于10％，检测结果如表4。
[0153]
表4 sflt-1试剂盒检测sflt-1的重复性
[0154][0155]
二、plgf试剂盒的主要分析性能
[0156]
1、最低检测限
[0157]
要求：最低检测应不大于1.0pg/ml，检测结果如表5。
[0158]
表5 plgf试剂盒检测plgf的最低检测限
[0159][0160]
2、线性
[0161]
要求：在[0，1000]ng/ml的测量范围内，试剂盒的相关系数r应≥0.9900，检测结果如表6。
[0162]
表6 plgf试剂盒检测plgf的线性相关性
[0163][0164]
3、重复性
[0165]
要求：变异系数(cv)应不大于10％，检测结果如表7。
[0166]
表7 plgf试剂盒检测plgf的重复性
[0167][0168]
三、sflt-1、plgf试剂盒的临床检测数据
[0169]
检测方法：
[0170]
采用本专利的sflt-1、plgf两种试剂盒分别检测先兆子痫组以及正常妊娠组血清中sflt-1、plgf两种血清标志物的含量，计算sflt-1/plgf，对比两组之间的数据差异，并进行数据分析和比对，从而得出sflt-1/plgf比值，以验证其对于预测先兆子痫发病率的特异性和敏感性，检测结果如表8-9。
[0171]
表8正常妊娠组(a组)血清sflt-1、plgf水平及两者比值
[0172]
[0173][0174]
表9先兆子痫组(b组)血清sflt-1、plgf水平及两者比值
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结果分析：正常妊娠组血清sflt-1水平明显低于先兆子痫组，正常妊娠组血清plgf水平明显高于先兆子痫组，先兆子痫组sflt-1/plgf明显高于正常妊娠组，相关研究证明sflt-1/plgf＞85即可判断为先兆子痫。单独检测sflt-1敏感性为79.2％，特异性为73.6；plgf敏感性为74.3％，特异性为77.2％；sflt-1/plgf敏感性85.8％，特异性88.6％，由此得出两者比值检测先兆子痫的敏感性和特异性大于单个指标单独检测。
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先兆子痫通常根据高血压、蛋白尿和水肿三联征进行诊断。鉴于水肿是正常妊娠的常见表现，近期的诊断标准中已不将其作为标准之一。先兆子痫和子痫的治疗应以预防为主，当通过常规方法检查，发现有先兆子痫症状来急诊检查时一般已经错过预防时期，须入院治疗的阶段了，一旦子痫发作都应立即采取紧急抢救措施。
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对先兆子痫，尤其是早在妊娠第20到34周出现的早期发作型先兆子痫，早期的、可信赖的诊断对于这种疾病的临床控制是非常关键的。特别地，早期发作先兆子痫，由于其严重的副作用以及通常与之相关的不利结果，对于临床医师而言是很棘手的。此外，对于先兆子痫早期的、可信赖的诊断以及预测对于计划预防和治疗性介入研究都是非常关键的。
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最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。