一种脂联素检测试剂盒及其制备方法与流程

1.本发明涉及体外诊断试剂领域，尤其涉及一种脂联素检测试剂盒及其制备方法。


背景技术：

2.脂联素(adpn)，是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽和蛋白，能在血浆中稳定存在，约占血浆蛋白的0.01％。最早脂联素是在人体皮下脂肪组织、血浆和鼠科动物的脂肪细胞中被发现。
3.随着对脂联素的研究发现，脂联素是一种胰岛素增敏激素(an insulin-sensitizing hormone)，能改善胰岛素抗性(insulin resistance)和动脉硬化；脂联素水平能预示ii型糖尿病和冠心病的发展，并在临床试验表现出与肥胖、糖尿病、胰岛素抵抗、动脉粥样和炎症都有一定相关性。因此，检测血中脂联素水平对这些疾病的诊断和预后均有重要意义。
4.目前，测定脂联素的方法主要使用化学发光免疫分析法(clia)、酶联免疫吸附法(elisa)和胶乳增强免疫比浊法。其中，化学发光法灵敏度较高，但需要专门的仪器，价格昂贵；酶联免疫法操作过程极为繁琐和复杂，检测时间长，重复性较差。胶乳增强免疫比浊法是利用一定粒径胶乳颗粒的表面交联单克隆或多克隆抗与抗原结合后，来检测抗原的浓度；现有的胶乳增强免疫比浊法的灵敏度高，但抗干扰性差，低值区重复性差，且制备工艺复杂，耗费人力物力。
5.因此，现有技术有待进一步改进。


技术实现要素：

6.针对上述问题，本发明提供了一种新的抗干扰能力强、重复性好的脂联素检测试剂盒，并提供了该试剂盒的制备方法。
7.为解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：
8.第一方面，本发明提供一种脂联素检测试剂盒，其包括r1试剂和r2试剂；其中：
9.r1试剂包括以下成分：缓冲液、电解质、促融剂、表面活性剂和防腐剂；
10.r2试剂包括以下成分：抗脂联素单抗包被胶乳颗粒、缓冲液、保护剂、稳定剂、防腐剂和表面活性剂；
11.其中，表面活性剂选自tetronic 1307、蓖麻油聚氧乙烯醚、tween-20、曲拉通-100和brij-35中的一种或几种。
12.优选地，r1试剂包括以下浓度的各成分：
13.缓冲液0.02-0.1m/l；
14.电解质20-40g/l；
15.促融剂30-80g/l；
16.表面活性剂0.2-10g/l；
17.防腐剂0.8-1.2g/l。
18.r2试剂包括以下浓度的各成分：
19.抗脂联素单抗包被胶乳颗粒60-100mg/l；
20.缓冲液0.01-0.05m/l；
21.保护剂5-30g/l；
22.稳定剂5-20g/l；
23.防腐剂0.8-1.2g/l；
24.表面活性剂0.2-10g/l。
25.优选地，所述脂联素检测试剂盒中，所述表面活性剂包括tetronic 1307和蓖麻油聚氧乙烯醚。
26.在r1中添加上述表面活性剂后，增强了试剂对特殊样本如脂浊类、溶血类样本的抗干扰能力，减小非特异性吸附的干扰；也避免样本测试过程中的假阴性和假阳性的出现，从而提升样本测试的准确性。tetronic 1307和蓖麻油聚氧乙烯醚均为良好的增溶剂，能分散溶解油脂，可减少基质干扰和非特异性吸附，且二者均不破坏蛋白结构；尤其是蓖麻油聚氧乙烯醚，它的hlb值在13-14之间，具有有很好的去油污能力；此外，tetronic 1307属于两性离子抗静电能力超强，可避免静电吸附导致的假阳性。
27.在r2中加入tetronic 1307和蓖麻油聚氧乙烯醚这两种表面活性剂，具有多种作用：一方面，可使胶乳试剂分散更均匀，增强胶乳试剂的重复性；另一方面，蓖麻油聚氧乙烯醚有优良的乳化能力，不仅能在蛋白表面形成水化膜，起到保护蛋白和增加蛋白稳定性的作用，还能形成表面张力，增强液体的稳定性。
28.优选地，所述脂联素检测试剂盒中，所述保护剂选自海藻糖、蔗糖中的一种或两种。
29.优选地，所述脂联素检测试剂盒中，稳定剂选自酪蛋白和牛血清蛋白中的一种或几种。
30.可选地，所述脂联素检测试剂盒中，所述缓冲液为tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、hepes缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种。
31.可选地，所述电解质为氯化钠、氯化钾、氯化钙中的一种或几种。
32.可选地，所述促融剂为peg6000、peg8000、peg12000中的一种或几种。
33.可选地，所述防腐剂为叠氮钠、proclin300中的一种或几种。
34.优选地，所述脂联素检测试剂盒中，r1试剂包括以下浓度的各组分：柠檬酸缓冲液0.02-0.1m/l；氯化钠20-40g/l；peg6000 30-80g/l；tetronic 13070.1-5g/l；蓖麻油聚氧乙烯醚0.1-5g/l；防腐剂0.8-1.2g/l；
35.r2试剂包括以下浓度的各组分：抗脂联素单抗包被胶乳颗粒：60-100mg/l；hepes缓冲液0.01-0.1m/l；海藻糖5-30g/l；牛血清蛋白5-20g/l；tetronic1307 0.1-5g/l；蓖麻油聚氧乙烯醚0.1-5g/l；防腐剂0.8-1.2g/l。
36.可选地，r1试剂的ph值为6.0-7.4，r2试剂的ph值为7.0-7.8。优选地，r1试剂的ph值为7.0，r2试剂的ph值为7.4。
37.在此基础上，优选地，r1试剂的防腐剂采用0.8-1.2g/l的叠氮钠，r2试剂中的防腐剂采用0.8-1.2g/l的proclin300。
38.第二方面，本发明提供一种上述脂联素检测试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：
39.r1试剂的配制：按照试剂r1的组分含量，将缓冲液、电解质、促融剂、表面活性剂、防腐剂等依次分别溶于纯水中，搅拌均匀，调ph至6.0-7.4，搅拌均匀后置于35-40℃烘箱孵育一晚即得r1试剂；
40.试剂r2的配制：向抗脂联素单抗包被胶乳颗粒中边搅拌边分别加入缓冲液、稳定剂和表面活性剂，最后加入防腐剂和保护剂，在35-40℃摇床稳定一夜后即得r2试剂。
41.优选地，所述抗脂联素单抗包被胶乳颗粒的制备方法为：取粒径100-300nm的胶乳微球于mes缓冲液中，于35-40℃摇床，100-300r/min，摇匀3-10min；之后加入现配的edc和nhs溶液，置于35-40℃摇床，100-300r/min，活化胶乳10-20min；在搅拌的情况下，加入缓冲液和抗体，置于35-40摇床，100-300r/min，偶联1-5h；所述抗体为抗脂联素单抗。
42.优选地，在添加缓冲液、稳定剂和表面活性剂时，要在添加完前一种物质并于35-40℃摇床孵育20-40min后再加入后一种物质。
43.优选地，所述抗脂联素单抗包被胶乳颗粒的制备方法为：所述抗脂联素单抗包被胶乳颗粒的制备方法为：取粒径为100-300nm的胶乳微球于mes缓冲液中，于35-40℃摇床，100-300r/min，摇匀3-10min；之后加入现配的edc和nhs溶液，置于35-40℃摇床，100-300r/min，活化胶乳10-20min；在搅拌的情况下，加入缓冲液和抗体，置于35-40℃摇床，100-300r/min，偶联1-5h。
44.进一步优选的条件为：取粒径100-300nm的胶乳微球于hepes缓冲液中，置于37℃摇床，200r/min，活化胶乳15min；在搅拌的情况下，加入缓冲液和抗体，置于37℃摇床，200r/min，偶联3h。
45.优选地，hepes缓冲液的浓度为0.01m-0.1m。
46.优选地，所述脂联素检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：
47.试剂r1的配制：按照试剂r1的组分含量，将缓冲液、电解质、促融剂、表面活性剂、防腐剂等依次分别溶于纯水中，搅拌均匀，调ph至6.0-7.4，搅拌均匀后置于37℃烘箱孵育一晚即得试剂r1。
48.试剂r2的配制：取粒径为100-300nm的胶乳微球于0.01m-0.1m mes缓冲液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀5min；之后加入现配的edc和nhs溶液，置于37℃摇床，200r/min，活化胶乳15min；在搅拌的情况下，加入hepes缓冲液和抗体，置于37℃摇床，200r/min，偶联3h后从摇床中取出，置于搅拌器上，分别加入hepes缓冲液、bsa和表面活性剂，上述物质均在加完一种物质于37℃摇床孵育30min后再加入另一种物质，最后加入防腐剂和保护剂，在37℃摇床稳定一夜后即得试剂r2。
49.第三方面，本发明还提供一种用于脂联素检测试剂盒的表面活性剂，其包括tetronic 1307和蓖麻油聚氧乙烯醚。
50.可选地，tetronic 1307的使用浓度为0.1-5g/l，蓖麻油聚氧乙烯醚的使用浓度为0.1-5g/l。
51.本发明具有以下有益效果：
52.1、本发明采用新的表面活性剂组合与试剂盒中的其他成分配合，不仅增强了r1试剂对特殊样本如脂浊类和溶血类样本的抗干扰能力，减小非特异性吸附的干扰，避免样本测试过程中的假阴性和假阳性的出现，从而提升样本测试的准确性；还增强了胶乳试剂的重复性和稳定性。
53.2、该试剂盒完全避免了酶联免疫吸附和化学发光法的缺点，既可以快速的大批量的检测，又能进行单一样本的检测。相对于现有胶乳增强免疫比浊法制备的工艺复杂，耗费人力物力，本发明提供的脂联素检测试剂盒的制备工艺简单，无需离心和超声分散等步骤，节省时间的同时还有效降低了试剂的批间差。
附图说明
54.图1本发明实施例1的校准曲线；
55.图2本发明实施例1的线性范围。
具体实施方式
56.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本发明中，若非特指，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
57.实施例1
58.本实施例提供一种抗干扰强、重复性好的脂联素检测试剂盒，其制备方法包括以下步骤：
59.(1)试剂r1的配制：
60.称取100ml柠檬酸缓冲液，置于搅拌器上，按顺序依次加入3.0g nacl、5g peg6000、0.2g tetronic 1307、0.1g蓖麻油聚氧乙烯醚、0.1g nan3。一种物质完全溶解后再加入另一种物质，待完全溶解后调节ph至7.0，置37℃摇床孵育一晚后即为试剂r1。
61.配置完成后，试剂r1各成分的浓度分别为：柠檬酸缓冲液50mm/l；氯化钠30g/l；peg6000 50g/l；tetronic 1307 2g/l；蓖麻油聚氧乙烯醚1g/l；nan3 1g/l。
62.(2)试剂r2的配制：
63.①
抗脂联素单抗包被胶乳颗粒的制备：
64.取粒径为200nm的胶乳微球80ul于130ul的0.02m ph6.0的mes缓冲液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀2min。之后加入现配的edc和nhs溶液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀15min以活化胶乳；edc和nhs的浓度为0.10m，添加比例为1:1；之后，在搅拌的情况下，加入3ml hepes缓冲液(0.02m ph7.4)和抗体溶液(单抗1和单抗2混合，其中单抗为鼠抗人adp抗体)，抗体添加总量为30mg/l。置于37℃摇床，200r/min，偶联3h。
65.②
将上一步的混合物从摇床中取出，置于搅拌器上，分别加入1ml的hepes缓冲液、500ul 10％的bsa，5ul tetronic 1307、5ul蓖麻油聚氧乙烯醚。上述物质均在加完一种物质于37℃摇床孵育30min后再加入另一种物质，最后加入的5ul proclin300以及0.1g海藻糖，在37℃摇床孵育一夜后即得试剂r2。
66.制备完成后，试剂r2各成分的浓度分别为：抗脂联素单抗包被胶乳颗粒80mg/l、hepes缓冲液25mm/l、bsa 10g/l、tetronic 1307 1g/l、蓖麻油聚氧乙烯醚1g/l、proclin300 1g/l、海藻糖20g/l。
67.实施例2
68.本实施例提供一种抗干扰强、重复性好的脂联素检测试剂盒，包括r1试剂和r2试剂，其制备方法，包括以下步骤：
69.(1)试剂r1的配制：
70.称取100ml柠檬酸缓冲液，置于搅拌器上，按顺序依次加入3.0g nacl、5g peg6000、0.2g tetronic 1307、0.1g nan3。一种物质完全溶解后再加入另一种物质，待完全溶解后调节ph至7.0，置37℃摇床孵育一晚后即为试剂r1。
71.配置完成后，试剂r1各成分的浓度分别为：柠檬酸缓冲液50mm/l；氯化钠30g/l；peg6000 50g/l；tetronic 1307 2g/l；nan
3 1g/l。
72.(2)试剂r2的配制：
73.①
抗脂联素单抗包被胶乳颗粒的制备：
74.取粒径为200nm的胶乳微球80ul于130ul 0.02m ph6.0的mes缓冲液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀2min。之后加入现配的edc和nhs溶液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀15min以活化胶乳；edc和nhs的浓度为0.10m，添加比例为1:1。之后在搅拌的情况下，加入3ml hepes缓冲液(0.02m ph7.4)和抗体溶液(单抗1和2混合)，抗体添加总量为30mg/l。置于37℃摇床，200r/min，偶联3h。
75.②
将上一步的混合物从摇床中取出，置于搅拌器上，分别加入1ml的hepes缓冲液、500ul 10％的bsa，5ul tetronic 1307、5ul蓖麻油聚氧乙烯醚。上述物质均在加完一种物质于37℃摇床孵育30min后再加入另一种物质，最后加入的5ul proclin300以及0.1g海藻糖，在37℃摇床孵育一夜后即得试剂r2。
76.制备完成后，试剂r2各成分的浓度分别为：抗脂联素单抗包被胶乳颗粒80mg/l、hepes缓冲液25mm/l、bsa 10g/l、tetronic 1307 1g/l、蓖麻油聚氧乙烯醚1g/l、proclin300 1g/l、海藻糖20g/l。
77.实施例3
78.本实施例提供一种脂联素检测试剂盒，包括r1试剂和r2试剂，其制备方法，包括以下步骤：
79.(1)试剂r1的配制：
80.称取100ml柠檬酸缓冲液，置于搅拌器上，按顺序依次加入3.0g nacl、5g peg6000、0.1g蓖麻油聚氧乙烯醚、0.1g nan3。一种物质完全溶解后再加入另一种物质，待完全溶解后调节ph至7.0，置37℃摇床孵育一晚后即为试剂r1。
81.配置完成后，试剂r1各成分的浓度分别为：柠檬酸缓冲液50mm/l；氯化钠30g/l；peg6000 50g/l；蓖麻油聚氧乙烯醚1g/l；nan
3 1g/l。
82.(2)试剂r2的配制：
83.①
抗脂联素单抗包被胶乳颗粒的制备：
84.取粒径为200nm的胶乳微球80ul于130ul 0.02m ph6.0的mes缓冲液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀2min。之后加入现配的edc和nhs溶液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀15min以活化胶乳；edc和nhs的浓度为0.10m，添加比例为1:1。之后在搅拌的情况下，加入3ml hepes缓冲液(0.02m ph7.4)和抗体溶液(单抗1和2混合)，抗体添加总量为30mg/l。置于37℃摇床，200r/min，偶联3h。
85.②
将上一步的混合物从摇床中取出，置于搅拌器上，分别加入1ml的hepes缓冲液、
500ul 10％的bsa，5ul tetronic 1307、5ul蓖麻油聚氧乙烯醚。上述物质均在加完一种物质于37℃摇床孵育30min后再加入另一种物质，最后加入的5ul proclin300以及0.1g海藻糖，在37℃摇床孵育一夜后即得试剂r2。
86.制备完成后，试剂r2各成分的浓度分别为：抗脂联素单抗包被胶乳颗粒80mg/l、hepes缓冲液25mm/l、bsa 10g/l、tetronic 1307 1g/l、蓖麻油聚氧乙烯醚1g/l、proclin300 1g/l、海藻糖20g/l。
87.实施例4
88.本实施例提供一种抗干扰强、重复性好的脂联素检测试剂盒，包括r1试剂和r2试剂，其制备方法，包括以下步骤：
89.(1)试剂r1的配制：
90.称取100ml柠檬酸缓冲液，置于搅拌器上，按顺序依次加入3.0g nacl、5g peg6000、0.5g吐温-20、0.1g nan3。一种物质完全溶解后再加入另一种物质，待完全溶解后调节ph至7.0，置37℃摇床孵育一晚后即为试剂r1。
91.配置完成后，试剂r1各成分的浓度分别为：柠檬酸缓冲液50mm/l；氯化钠30g/l；peg6000 50g/l；吐温-20 5g/l；nan
3 1g/l。
92.(2)试剂r2的配制：
93.①
抗脂联素单抗包被胶乳颗粒的制备：
94.取粒径为200nm的胶乳微球80ul于130ul 0.02m ph6.0的mes缓冲液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀2min。之后加入现配的edc和nhs溶液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀15min以活化胶乳；edc和nhs的浓度为0.10m，添加比例为1:1。之后在搅拌的情况下，加入3ml hepes缓冲液(0.02m ph7.4)和抗体溶液(单抗1和2混合)，抗体添加总量为30mg/l。置于37℃摇床，200r/min，偶联3h。
95.②
将上一步的混合物从摇床中取出，置于搅拌器上，分别加入1ml的hepes缓冲液、500ul 10％的bsa，5ul tetronic 1307、5ul蓖麻油聚氧乙烯醚。上述物质均在加完一种物质于37℃摇床孵育30min后再加入另一种物质，最后加入的5ul proclin300以及0.1g海藻糖，在37℃摇床孵育一夜后即得试剂r2。
96.制备完成后，试剂r2各成分的浓度分别为：抗脂联素单抗包被胶乳颗粒80mg/l、hepes缓冲液25mm/l、bsa 10g/l、tetronic 1307 1g/l、蓖麻油聚氧乙烯醚1g/l、proclin300 1g/l、海藻糖20g/l。
97.实施例5
98.本实施例提供一种脂联素检测试剂盒，包括r1试剂和r2试剂，其制备方法，包括以下步骤：
99.(1)试剂r1的配制：
100.称取100ml柠檬酸缓冲液，置于搅拌器上，按顺序依次加入3.0g nacl、5g peg6000、0.2g tetronic 1307、0.1g蓖麻油聚氧乙烯醚、0.1g nan3。一种物质完全溶解后再加入另一种物质，待完全溶解后调节ph至7.0，置37℃摇床孵育一晚后即为试剂r1。
101.配置完成后，试剂r1各成分的浓度分别为：柠檬酸缓冲液50mm/l；氯化钠30g/l；peg6000 50g/l；tetronic 1307 2g/l；蓖麻油聚氧乙烯醚1g/l；nan
3 1g/l。
102.(2)试剂r2的配制：
103.①
抗脂联素单抗包被胶乳颗粒的制备：
104.取粒径为200nm的胶乳微球80ul于130ul 0.02m ph6.0的mes缓冲液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀2min。之后加入现配的edc和nhs溶液中，置于37℃摇床，200r/min，摇匀15min以活化胶乳；edc和nhs的浓度为0.10m，添加比例为1:1。之后在搅拌的情况下，加入3ml hepes缓冲液(0.02m ph7.4)和抗体溶液(单抗1和2混合)，抗体添加总量为30mg/l。置于37℃摇床，200r/min，偶联3h。
105.②
将上一步的混合物从摇床中取出，置于搅拌器上，分别加入1ml的hepes缓冲液、500ul 10％的bsa，10ul曲拉通-100。上述物质均在加完一种物质于37℃摇床孵育30min后再加入另一种物质，最后加入的5ul proclin300以及0.1g海藻糖，在37℃摇床孵育一夜后即得试剂r2。
106.制备完成后，试剂r2各成分的浓度分别为：抗脂联素单抗包被胶乳颗粒80mg/l、hepes缓冲液25mm/l、bsa 10g/l、曲拉通-100 2g/l、proclin3001g/l、海藻糖20g/l。
107.实施例6脂联素检测试剂盒的应用
108.本实施例的一种上述脂联素检测试剂盒的检测方法：
109.1、生化分析仪检测
110.以日立7180操作为例：测定波长为700nm，分别取不同浓度的校准品溶液(3ul)，加入脂联素r1试剂(160ul)，混匀，37℃孵育5分钟后，加入脂联素r2试剂(40ul)，混匀，37℃孵育30秒后，读取各管吸光度值a1，反应4.5分钟后，读取各管吸光度值a2，计算吸光度差值
△
a＝a2-a1，每管重复测定2次，以各校准管2次测得的吸光度差值
△
a的平均值为纵坐标，对应的校准品浓度为横坐标，绘制“浓度-吸光度差值”校准曲线。取待测血清或血浆样本，同法测定样本的吸光度差值，代入校准曲线，即可计算出待测样本中脂联素adpn的含量。如果血清或血浆中脂联素的浓度超出校准曲线范围，需对样本进行稀释后再检测以保证检测结果的准确性。本试剂盒不仅适用于日立7180，还适用于其它品牌和型号的半自动、全自动生化分析仪，具体参数可根据仪器进行调整。
111.实施例7试剂盒的质量评价
112.(1)标准曲线的制定
113.a、实验方法
114.用蒸馏水倍比稀释高值校准品(42mg/l)，浓度分别为：0mg/l，5.25mg/l，10.5mg/l，21mg/l，42mg/l。按照实施例6中的方法测定本发明脂联素校准品的标准曲线。实验对象为实施例1制备的脂联素检测试剂盒。
115.b、实验结果及分析
116.如图1所示为本发明的实施例1的试剂盒的定标曲线。
117.(2)线性范围
118.a、实验方法
119.用接近线性范围上限的高浓度校准品(42mg/l)和接近线性范围下限的低浓度校准品品或蒸馏水，混合成至少5个稀释浓度(x)。分别测试试剂盒，每个稀释浓度测试2次，分别求出检测结果的均值(y)。以稀释浓度(x)为自变量，以检测结果均值(y)为因变量求出线性回归方程。实验对象为实施例1制备的脂联素检测试剂盒。
120.b、实验结果及分析
121.如图2所示，本发明的试剂盒线性较好，回归方程为：y＝0.9721x-0.0523,r2＝0.9997。
122.(3)分析灵敏度
123.a、实验方法
124.用实施例1制备的试剂盒测试已知浓度在10.5mg/l的校准品，记录在试剂盒规定参数下产生的吸光度变化值的绝对值，重复测试3次，取平均值并换算为10mg/l的吸光度变化值。
125.b、实验结果及分析
126.测试结果分别为0.2504，0.2481，0.2492，换算为10mg/l的吸光度变化值为0.2373，这说明该试剂盒具有较高的灵敏度。
127.(4)重复性的检测
128.a、实验方法
129.用伊谱诺康公司测值为5.91mg/l的脂联素样本作为低值样本，按所述生化分析仪检测方法进行测定，各浓度分别重复测定10次，分别计算测定均值和标准差(s)，以计算变异系数对实施例1和5的试剂盒进行重复性考察。
130.由于试剂盒的重复性主要与r2试剂相关，因此该实验主要将实施例1和实施例5制备的试剂盒进行重复性考察。
131.b、实验结果及分析
132.表1脂联素检测试剂盒的重复性测试结果
133.[0134][0135]
如表1的结果所示，实施例5中使用曲拉通-100作为表面活性剂后，试剂盒对低值样本的重复性不佳，达到7.13％，而实施例1加入新的表面活性剂组(tetronic 1307和蓖麻油聚氧乙烯醚)后，试剂盒对低值样本的重复性明显改善，其变异系数低至2.02％。
[0136]
(5)抗干扰实验
[0137]
a、实验方法
[0138]
取浓度为5.91mg/l的脂联素样本，分别加入相同体积的不同浓度的干扰物质，使加入后的甘油三脂干扰物质的浓度分别为2.5g/l、5.0g/l、8.0g/l、胆红素的终浓度为400mg/l和血红蛋白的终浓度为10g/l，分别用实施例1-5制备的试剂盒对每个制备样本重复测定3次，取平均值，与加入相同体积蒸馏水的样本比较，观察加入干扰物质与加入蒸馏水后adpn测定值的相对偏差。
[0139]
b、实验结果及分析
[0140]
表2抗干扰实验结果
[0141][0142]
注：相对偏差不超过
±
10％为基本达标。
[0143]
从表2的实验结果可知，抗干扰能力由强到弱排序为：实施例1＞实施例2＞实施例3＞实施例5＞实施例4；其中，对于甘油三脂，实施例1-3的抗干扰能力基本达标；对于胆红素和血红蛋白干扰来说，实施例1-5的抗干扰能力基本达标。其中实施例1的试剂盒的抗干扰能力最优，加入不同浓度的干扰物质测定值与加入同体积蒸馏水后测定值相对偏差不超过4％。因此，当检测样本中存在一定浓度的干扰物质如甘油三酯，胆红素和血红蛋白，其对本发明试剂盒的测定结果无影响，本发明的抗干扰能力强。
[0144]
(5)稳定性
[0145]
a、实验方法
[0146]
将本发明试剂盒置于37℃水浴中，分别在存放前(即未破坏时)、存放3天、5天、7天后对校准品进行定标并测试分装样本进行分析。
[0147]
b、实验结果及分析
[0148][0149][0150]
从上表的结果可知，在37℃存放7天后，实施例1的试剂盒依然保持有99％以上的反应活性，这说明通过向试剂中添加tetronic 1307和蓖麻油聚氧乙烯醚能显著提高该脂联素检测试剂盒在常温条件下的稳定性，增加了本发明试剂盒用于临床诊断的实用性。
[0151]
可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及本发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。