一种瑞舒伐他汀中间体及其有关物质的检测方法与流程

1.本发明属于药物分析领域，涉及一种瑞舒伐他汀中间体及其有关物质的检测方法。


背景技术：

2.瑞舒伐他汀钙是阿斯利康公司开发的新一代他汀类血脂调节药，属于选择性3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmg-coa)还原酶抑制剂，已在美国、日本、欧洲、中国等多个国家和地区上市。hmg-coa还原酶抑制剂是转变3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a为甲戊酸盐—胆固醇的前体—的限速酶。瑞舒伐他汀钙的主要作用部位是肝—降低胆固醇的靶向器官。瑞舒伐他汀钙增加了肝低密度脂蛋白(ldl)细胞表面受体数目，促进ldl的吸收和分解代谢，抑制了极低密度脂蛋白(vldl)的肝合成，由此降低vldl和ldl微粒的总数。
3.瑞舒伐他汀中间体[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(n-甲基-n-甲磺酰胺基)-5-嘧啶基]三苯基溴化膦(cas：885477-83-8)是合成瑞舒伐他汀的重要中间体(在下文中将其简称为“瑞舒伐他汀中间体t”)，其结构式如式(i)所示：
[0004][0005]
瑞舒伐他汀中间体t的合成路线如下：
[0006][0007]
该合成路线中，产物瑞舒伐他汀中间体t中会含有多种有关物质，包括未反应的原料、过程中间体等等。
[0008]
现行《美国药典》与《欧洲药典》收载有瑞舒伐他汀钙原料药的质量标准，但没有记载中间体的检测方法。目前相关文献也未见有对瑞舒伐他汀中间体t及其有关物质的检测方法的具体报道。
[0009]
因此，目前缺少一种能够检测瑞舒伐他汀中间体t及其有关物质的检测方法。


技术实现要素：

[0010]
本发明的目的在于提供一种可以检测瑞舒伐他汀中间体t及其有关物质的方法，该方法可以分离以及准确定量瑞舒伐他汀中间体t及其各有关物质。
[0011]
为实现上述目的，本发明提供了一种采用高效液相色谱法检测瑞舒伐他汀中间体t及其有关物质的检测方法，其中
[0012]
所述瑞舒伐他汀中间体t的化学名为[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(n-甲基-n-甲磺酰胺基)-5-嘧啶基]三苯基溴化膦，cas：885477-83-8，具有式(i)的结构式：
[0013][0014]
所述有关物质选自杂质a、杂质b和/或杂质c；
[0015]
所述杂质a的化学名为5-(羟基甲基)-4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲磺酰)氨基]嘧啶，cas：147118-36-3，具有式(ii)的结构式：
[0016][0017]
所述杂质b的化学名为三苯基膦，cas：603-35-0，具有式(iii)的结构式：
[0018][0019]
所述杂质c的化学名为5-(溴甲基)-4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲磺酰)氨基]嘧啶，cas：799842-07-2，具有式(iv)的结构式：
[0020][0021]
取空白溶液、系统适用性溶液和供试品溶液进行高效液相色谱检测，检测条件如下：
[0022]
色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相柱；
[0023]
流动相由流动相a和流动相b组成，所述流动相a为三氟乙酸体积浓度0.08～0.12％的三氟乙酸水溶液，所述流动相b为乙腈；
[0024]
洗脱方式为梯度洗脱；
[0025]
其中，所述空白溶液为乙腈；
[0026]
所述系统适用性溶液为含有瑞舒伐他汀中间体t以及杂质a对照品、杂质b对照品和杂质c对照品的乙腈溶液；
[0027]
所述供试品溶液为待测样品的乙腈溶液，待测样品含有所述瑞舒伐他汀中间体t和/或所述有关物质。
[0028]
在一些实施方案中，上述方法中，所述系统适用性溶液可以通过将瑞舒伐他汀中间体t对照品以及杂质a对照品、杂质b对照品和杂质c对照品溶于乙腈制成。
[0029]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，待测样品中瑞舒伐他汀中间体t的含量可以为90.0％以上，例如瑞舒伐他汀中间体t的含量为90.0％、91.0％、92.0％、93.0％、94.0％、95.0％、96.0％、97.0％、98.0％、99.0％或100.0％或所列数值中的任意两者之间的含量，进一步地，瑞舒伐他汀中间体t的含量可以为99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或所列数值中的任意两者之间的含量。
[0030]
本发明中，所述梯度洗脱是指本领域中通过不断调整流动相的体积配比以使样品中的所有组分得到有效分离和检测而进行的梯度洗脱。
[0031]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述梯度洗脱中，初始梯度为流动相b占流动相的体积百分数由30％～40％变化至100％，第二梯度为流动相b占流动相的体积百分数为100％，第三梯度为流动相b占流动相的体积百分数由100％变化至30％～40％，最终梯度为流动相b占流动相的体积百分数为30％～40％；优选地，初始梯度为流动相b占流动相的体积百分数为35％变化至100％，第二梯度为流动相b占流动相的体积百分数为100％，第三梯度为流动相b占流动相的体积百分数由100％变化至35％，最终梯度为流动相b占流动相的体积百分数为35％。
[0032]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述初始梯度的洗脱时间为8～13min，优选为10min；所述第二梯度的洗脱时间为7～10min，优选为8min；所述第三梯度的洗脱时间为1～3min，优选为1min；所述最终梯度的洗脱时间为4～8min，优选为6min。
[0033]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的
体积浓度为0.1％。
[0034]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述色谱柱的填料颗粒度为3～5μm，色谱柱的长度为75～150mm，色谱柱的直径为2～5mm。
[0035]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述色谱柱可以来自市售品牌，例如agilent eclipse plus c18。
[0036]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述高效液相色谱法可采用本领域的常规高效液相色谱仪，例如agilent 1260液相色谱仪。
[0037]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述色谱柱的柱温为20～35℃，优选为30℃。
[0038]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述流动相的流速为0.3～0.8ml/min，优选为0.5ml/min。
[0039]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述高效液相色谱法的进样量可参考本领域hplc检测分析的常规进样量，优选1～10μl，例如5μl。
[0040]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述高效液相色谱法的检测器为紫外吸收检测器。
[0041]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述高效液相色谱法的检测波长为240～250nm，优选为244nm。
[0042]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述高效液相色谱法的进样盘温度为4～8℃，优选为4℃。
[0043]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述系统适用性溶液中瑞舒伐他汀中间体t对照品的浓度为1～2mg/ml，优选1mg/ml，杂质a对照品、杂质b对照品和杂质c对照品的浓度分别为0.25～2μg/ml，优选1μg/ml。
[0044]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述供试品溶液的浓度为1～2mg/ml，优选1mg/ml，如果所述供试品溶液含有所述有关物质，则其中杂质a、杂质b或杂质c的浓度分别为0～3μg/ml时可准确定量。
[0045]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，所述瑞舒伐他汀中间体t的主峰与所述有关物质的峰的分离度均大于2.0，瑞舒伐他汀中间体t和所述有关物质的峰的理论塔板数均大于10000。
[0046]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，杂质定量方法为杂质外标法。
[0047]
在一些实施方案中，上述任一所述的方法中，进一步可以用杂质a对照品、杂质b对照品和杂质c对照品的定位溶液进行定位，定位溶液的浓度可以为1mg/ml。
[0048]
与现有技术相比，本发明的积极效果在于：
[0049]
本发明的分离检测方法能实现瑞舒伐他汀中间体t及其有关物质的各色谱峰之间的有效分离，准确定性及定量，从而为瑞舒伐他汀中间体t的质量追踪和质量控制提供了简单、快速、可靠的方法。
[0050]
专属性试验，结果显示出峰顺序依次为瑞舒伐他汀中间体t、杂质a、杂质c、杂质b，各色谱峰的峰型良好，理论塔板数大于10000及分离度均大于2.0，说明本法专属性强。
[0051]
检测限与定量限试验，结果显示本法定量限(loq)杂质a浓度为0.2585μg/ml，杂质b浓度为0.25425μg/ml，杂质c浓度为0.25975μg/ml，均相当于供试品溶液浓度的0.025％，
说明本法的灵敏度非常高。
[0052]
线性和范围试验，结果显示各杂质所在的范围内线性关系良好。
[0053]
回收率试验，结果显示各杂质的平均回收率均在90％-110％以内，rsd均在5％以内，本法准确度良好。
附图说明
[0054]
图1为空白溶液的液相色谱图。
[0055]
图2为系统适用性溶液的液相色谱图。
[0056]
图3为供试品溶液的液相色谱图。
[0057]
图4为杂质a的液相色谱图。
[0058]
图5为杂质b的液相色谱图。
[0059]
图6为杂质c的液相色谱图。
具体实施方式
[0060]
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。本发明中，如无特别注明，任意溶剂的比例均指体积比。
[0061]
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0062]
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。在不违背本领域常识的基础上，本发明所述检测方法的各条件可任意组合，它们均包含在本发明范围内，其中包括但不限于各实施例。
[0063]
瑞舒伐他汀中间体t对照品购自江西埃菲姆科技有限公司，纯度为99.60％。
[0064]
瑞舒伐他汀中间体t待检样品购自浙江海翔药业股份有限公司，纯度为99.30％。
[0065]
杂质a对照品购自上海迈瑞尔化学技术有限公司，纯度为96.04％。
[0066]
杂质b对照品购自上海迈瑞尔化学技术有限公司，纯度为99.75％。
[0067]
杂质c对照品购自上海迈瑞尔化学技术有限公司，纯度为99.04％。
[0068]
色谱柱采用固定相为碳十八烷基硅烷键合硅胶的反相柱，agilent eclipse plus c18，4.6
×
150mm，3.5μm。
[0069]
高效液相色谱仪采用agilent 1260液相色谱仪，检测器为紫外检测器，进样盘温度为4℃。
[0070]
实施例1
[0071]
溶液配制：
[0072]
1、杂质a/杂质c对照品储备溶液(100μg/ml)：精密称取10mg杂质a对照品和10mg杂质c对照品置于100ml容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，摇匀。
[0073]
2、杂质b对照品储备溶液(100μg/ml)：精密称取10mg杂质b对照品置于100ml容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，摇匀。
[0074]
3、系统适用性溶液：精密称取100mg瑞舒伐他汀中间体t对照品至100ml容量瓶中，用乙腈溶解，各移取1ml杂质a/杂质c对照品储备溶液、杂质b对照品储备溶液至该容量瓶中，加乙腈定容至刻度，摇匀。(临用新制)
[0075]
4、供试品溶液(1mg/ml)：精密称取瑞舒伐他汀中间体t待检样品20mg至20ml容量
瓶中，用乙腈溶解定容，摇匀。(临用新制)
[0076]
5、空白溶液：乙腈。
[0077]
6、杂质a的定位溶液(1mg/ml)：精密称取10mg杂质a对照品置于10ml容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，摇匀。
[0078]
7、杂质b的定位溶液(1mg/ml)：精密称取10mg杂质b对照品置于10ml容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，摇匀。
[0079]
8、杂质c的定位溶液(1mg/ml)：精密称取10mg杂质c对照品置于10ml容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，摇匀。
[0080]
色谱条件：以0.1％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表1进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.5ml/min；检测波长为244nm。
[0081]
表1
[0082][0083]
测定方法：
[0084]
精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定获得的空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液的液相色谱图分别如图1～图3所示。
[0085]
精密吸取杂质a的定位溶液、杂质b的定位溶液和杂质c的定位溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定获得的杂质a、杂质b和杂质c的液相色谱图分别如图4～图6所示，用于方法开发时确定图谱中杂质a、杂质b和杂质c的出峰位置。
[0086]
系统适用性溶液的具体数据如表2所示。
[0087]
表2
[0088]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t9.892/16902杂质a10.6283.39109483杂质c13.75225.03205464杂质b15.11811.03228703
[0089]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0090]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0091]
实施例2
[0092]
溶液配制：同实施例1溶液配制的1-5。
[0093]
色谱条件：以0.1％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表3进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.5ml/min；检测波长为244nm。
[0094]
表3
[0095][0096]
测定方法：精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0097]
系统适用性溶液的具体数据如表4所示。
[0098]
表4
[0099]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t9.542/15133杂质a10.2813.2580027杂质c13.58924.59193481杂质b15.02111.44223422
[0100]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0101]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0102]
实施例3
[0103]
溶液配制：同实施例1溶液配制的1-5。
[0104]
色谱条件：以0.1％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表5进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.5ml/min；检测波长为244nm。
[0105]
表5
[0106][0107]
测定方法：精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0108]
系统适用性溶液的具体数据如表6所示。
[0109]
表6
[0110]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t10.330/20811
杂质a11.0733.55109770杂质c13.9622.81218745杂质b15.25710.39222236
[0111]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0112]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0113]
实施例4
[0114]
溶液配制：同实施例1溶液配制的1-5。
[0115]
色谱条件：以0.1％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表7进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.5ml/min；检测波长为244nm。
[0116]
表7
[0117][0118]
测定方法：精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0119]
系统适用性溶液的具体数据如表8所示。
[0120]
表8
[0121]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t9.045/18800杂质a9.7803.7797683杂质c12.30521.05183460杂质b13.5109.86172855
[0122]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0123]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0124]
实施例5
[0125]
溶液配制：同实施例1溶液配制的1-5。
[0126]
色谱条件：以0.1％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表9进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.5ml/min；检测波长为244nm。
[0127]
表9
[0128][0129]
测定方法：精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0130]
系统适用性溶液的具体数据如表10所示。
[0131]
表10
[0132]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t11.035/16137杂质a11.8163.15102981杂质c15.81328.56228477杂质b17.52813.14293454
[0133]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0134]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0135]
实施例6
[0136]
溶液配制：同实施例1溶液配制的1-5。
[0137]
色谱条件：以0.08％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表1进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.5ml/min；检测波长为244nm。
[0138]
测定方法：精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0139]
系统适用性溶液的具体数据如表11所示。
[0140]
表11
[0141]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t9.784/15932杂质a10.6283.92122368杂质c13.74925.81209250杂质b15.12411.14229404
[0142]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0143]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0144]
实施例7
[0145]
溶液配制：同实施例1溶液配制的1-5。
[0146]
色谱条件：以0.12％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表1进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.5ml/min；检测波长为244nm。
[0147]
测定方法：精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0148]
系统适用性溶液的具体数据如表12所示。
[0149]
表12
[0150]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t9.925/20020杂质a10.6323.56132278杂质c13.74926.26207637杂质b15.11811.11233041
[0151]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0152]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0153]
实施例8
[0154]
溶液配制：同实施例1溶液配制的1-5。
[0155]
色谱条件：以0.1％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表1进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.3ml/min；检测波长为244nm。
[0156]
测定方法：精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0157]
系统适用性溶液的具体数据如表13所示。
[0158]
表13
[0159]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t13.532/22585杂质a14.7214.52127248杂质c17.88819.69208834杂质b19.76010.09135282
[0160]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0161]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0162]
实施例9
[0163]
溶液配制：同实施例1溶液配制的1-5。
[0164]
色谱条件：以0.1％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表1进行梯度洗脱，柱温30℃，流速为0.8ml/min；检测波长为244nm。
[0165]
测定方法：精密吸取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0166]
系统适用性溶液的具体数据如表14所示。
[0167]
表14
[0168]
峰编号保留时间(min)分离度理论塔板数瑞舒伐他汀中间体t7.582/14769杂质a8.0442.4972528杂质c11.07325.62192860杂质b12.38913.01240628
[0169]
结论：瑞舒伐他汀中间体t主峰与各杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000。
[0170]
供试品溶液中，瑞舒伐他汀中间体t主峰与杂质a峰、杂质b峰的分离度均大于2.0，理论塔板数均大于10000，杂质c未检出。
[0171]
综上所述，各实施例中，杂质a、杂质b、杂质c和瑞舒伐他汀中间体t的峰型良好，分离度好，理论塔板数良好，达到了瑞舒伐他汀中间体t及其有关物质的分析要求。本发明的方法专属性强、结果准确、稳定性好、操作简便。