抗cd24的抗体及其用途
技术领域：
：1.本技术请求于2019年6月25日提交的美国专利申请第62/866,008号的优先权，其内容通过引用整体并入本文中。2.序列表声明3.与提交本技术同时提交的、名称为82829序列表.txt的ascii文件建立于2020年6月24日，包括111,644个字节，通过引用并入本文中。
背景技术：
：：4.本发明在其一些实施例中涉及一种抗cd24的抗体及其用途。5.癌症是西方世界的主要死因之一。尽管生物医学有所进步，社会、公共机构及制药与生物技术产业为应对此疾病做出努力，但许多恶性肿瘤的死亡率仍然很高。例如，结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及胰腺癌(pancreaticcancer，pc)的年发病率高且预后差。目前的治疗方式包括化学疗法、手术、基因疗法、免疫疗法、放射疗法以及此等的组合。从历史上看，手术被认为是结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及胰腺癌(pancreaticcancer，pc)的最佳治疗方法。然而，由于远处的复发，手术后的长期生存率仅能适度地实现。不幸的是，仅有不到20％的胰腺癌(pancreaticcancer，pc)患者在其首次诊断时适合切除及潜在的治愈。对晚期的结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及胰腺癌(pancreaticcancer，pc)患者的特定疗法进行研究，但成功受到限制。评估单独及联合使用化学疗法及放射疗法的试验显示结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)或胰腺癌(pancreaticcancer，pc)的生存率仅得到中度/边际改善，且副作用相对较高。因此，对于一般癌症，特别是结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及胰腺癌(pancreaticcancer，pc)，仍然需要更有效的治疗选择。6.cd24在小鼠中亦称为热稳定抗原(heat-stableantigen，hsa)，是一种高度糖基化的磷脂酰肌醇锚定的粘蛋白样细胞表面蛋白。在生理上，cd24蛋白主要在b淋巴细胞的造血亚群、各种上皮细胞、肌肉及神经细胞上表达。其在造血过程中的细胞筛选及成熟中扮演至关重要的作用，且在胚胎期、发育的神经及胰腺细胞上表达。此外，cd24是p-选滞蛋白的潜在配体，其作为粘附分子，以增强血小板聚集。7.cd24显示在各种恶性组织中过度表达，所述恶性组织包括结肠直肠癌、b细胞淋巴瘤、神经胶质瘤、小细胞肺及非小细胞肺、肝细胞、肾细胞、鼻咽、膀胱、子宫、上皮性卵巢、乳腺、前列腺及胰腺癌[参见例如克里斯蒂安森等人(kristiansenetal.)(2004)，jmolhistol.35(3)：255-62；及魏切特等人(weichertetal.)(2005)，clincancerres11(18)：6574)。此外，发现其表达与衍生自数个器官的癌细胞株中所增加的生长速率、运动性及存活率相关[鲍曼等人(baumannetal.)(2005)，cancerres.65：10783-93；史密斯等人(smith,etal.)(2006)cancerres.66：1917-22]及更具侵袭性的癌症病程。因此，魏切特等人(2005)发现在细胞质中的cd24的表达增加与更高的肿瘤分期、分级及转移的存在相关，并得出结论，在细胞质中的cd24的过度表达是预后较差的标记。此外，cd24在血小板聚集中的作用可解释参与癌症转移及较差的预后(萨马尔，m.等人，1994；艾格纳，s.等人，1997；艾格纳，s.等人，1998)(sammar,m.,etal.,1994；aigner,s.,etal.,1997；aigner,s.,etal.,1998)。迄今为止，已产生数种针对cd24的单克隆抗体，并显示其在体外及体内抑制肿瘤(例如，结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及肝细胞癌)细胞生长[参见例如夏皮拉等人(shapiraetal.)(2011)gastroenterology，140(3)：935-46；孙等人(sunetal.)(2017)，oncotarget.8(31)：51238-51252]。[0008]其他
背景技术：
：包括国际申请公开：第wo2007/088537号、第wo2008/059491号、第wo2009/063461号、第wo2009/074988号及第wo2018/216006号。技术实现要素：[0009]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种抗体，所述抗体包括一抗原识别结构域，所述抗原识别结构域特异性地结合cd24且包括如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)及如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)，所述如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区在所述抗体的一轻链上以从n至c的顺序排列，所述如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区在所述抗体的一重链上以从n至c的顺序排列。[0010]根据本发明的一些实施例，所述轻链氨基酸序列包括如seqidno：1所示的一氨基酸序列。[0011]根据本发明的一些实施例，所述重链氨基酸序列包括如seqidno：5所示的一氨基酸序列。[0012]根据本发明的一些实施例，所述轻链氨基酸序列包括如seqidno：1所示的一氨基酸序列，及所述重链氨基酸序列包括如seqidno：5所示的一氨基酸序列。[0013]根据本发明的一些实施例，所述抗体是一人源化抗体。[0014]根据本发明的一些实施例，所述抗体是多特异性的。[0015]根据本发明的一些实施例，所述抗体是双特异性的。[0016]根据本发明的一些实施例，所述抗体包括一抗原识别结构域，所述抗原识别结构域特异性地结合一免疫细胞。[0017]根据本发明的一些实施例，所述特异性地结合所述免疫细胞的所述抗原识别结构域与cd3结合。[0018]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码所述抗体。[0019]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞表达所述抗体。[0020]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种产生一抗cd24的抗体的方法，所述方法包括步骤：[0021](a)在支持所述抗体的产生的条件下，培养所述细胞；以及[0022](b)回收所述抗体。[0023]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种在有需要的一受试者中治疗一疾病的方法，所述疾病与表达cd24的细胞相关，所述方法包括步骤：向所述受试者施予所述抗体的一治疗有效量，从而治疗在所述受试者中的所述疾病。[0024]根据本发明的一些实施例，所述方法进一步包括步骤：向所述受试者施予治疗所述疾病的一疗法。[0025]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种所述抗体的用途，所述用途是在有需要的一受试者中治疗一疾病，所述疾病与表达cd24的细胞相关。[0026]根据本发明的一些实施例，所述抗体的用途进一步包括一疗法，所述疗法用于治疗所述疾病。[0027]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种制品，所述制品包括所述抗体及用于治疗一疾病的一疗法，所述疾病与表达cd24的细胞相关。[0028]根据本发明的一些实施例，所述疾病是癌症。[0029]根据本发明的一些实施例，所述癌症是选自由以下所组成的群组：结肠直肠癌、胰腺癌、b细胞淋巴瘤、神经胶质瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、肾癌、鼻咽癌、膀胱癌、子宫癌、卵巢癌、乳腺癌及前列腺癌。[0030]根据本发明的一些实施例，所述癌症是结肠直肠癌或胰腺癌。[0031]根据本发明的一些实施例，所述疗法是选自由免疫疗法、化学疗法及放射疗法所组成的群组。[0032]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种方法，所述方法在有需要的一受试者中，针对表达cd24的一细胞激活一免疫细胞，所述方法包括步骤：向所述受试者施予所述抗体的一治疗有效量，从而针对表达所述cd24的所述细胞激活所述免疫细胞。[0033]除非另有定义，否则在本文中所使用的所有技术及/或科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文所述的方法及材料相似或等效的方法及材料可用于本发明的实施例的实施或测试，但示例性方法及/或材料在下文描述。如有冲突，以专利说明书(包括定义)为准。此外，此等材料、方法及实例仅是说明性的，并不意味着必然是限制性的。附图说明[0034]本文仅通过实例的方式参考附图描述本发明的一些实施例。现在详细地具体参考附图，强调所示的细节是示例性的且出于对本发明的实施例的说明性讨论的目的。在此点上，结合附图进行的描述对于本领域技术人员而言如何实施本发明的实施例是显而易见的。[0035]在图式中：[0036]图1是鼠免疫球蛋白swa11v基因的人源化的示意图。[0037]图2a至图2b显示鼠swa11、来自igvh-28*02及igk4-1*01、人类jh6及jk2，及人源化swa11的供体序列的重链v区(图2a，seqidno：57-61)及轻链v区(图2b，seqidno：62-66)的核苷酸及推演的氨基酸序列的比对分析。为了使其人源化而在swa11vh及v-kappa中所进行的变更标记为灰色。在从36-60.a1.85及8-30生殖细胞株的亲和力成熟期间引入时保留的swa11残基标记为绿色。互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)标记为红色。[0038]图3证明药代动力学(pharmacokinetic，pk)研究的结果。雌性balb/c小鼠(n＝13)接受单次静脉内(intravenous，i.v)注射的剂量为5mg/kg的人源化抗体(在本文中称为huns17)。在以下的时间点从眶周窦采集血样：15分钟及30分钟；1小时、6小时及24小时；3天、7天、9天、14天、19天、21天及28天，转移至采血管进行血清分离。其中一只小鼠仅注射pbs并作为阴性对照。通过基于抗原的elisa确定抗体的血清浓度。[0039]图4是显示人源化抗cd24的抗体huns17的结合强度的图表，如通过生物分子相互作用分析，比亚科雷(生物分子相互作用分析，biacore)，使用在传感器芯片的表面上所捕获的cd24抗原所测定。不同的线代表分析物的不同浓度(40nm、60nm、100nm、200nm及300nm)。[0040]图5是显示人源化huns17抗体的基于细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，adcc)的剂量反应图。在此分析中，ht-29及panc-1肿瘤细胞是用作靶细胞(targetcell，t)；及fc受体稳定的nk-92稳定细胞(nk-92/cd16a.v/v)是用作效应细胞(e)，e：t比例为10：1。使用ldh试剂盒评估裂解反应。在od492nm及od650nm处读取吸光度数据。将背景(od650nm)减去od492nm的数据进行分析，以研究ldh的释放。根据以下的公式计算细胞裂解的百分比：[0041]细胞裂解％＝100*(1-(ods样本数据-od肿瘤细胞 nk细胞)/(od最大释放-od最小释放))。[0042]图6a至图6b证明急性静脉内最大耐受剂量(maximumtolerateddose，mtd)评估的结果。图6a是证明在开放现场测试期间不同组的行进距离及移动性的图表。在组之间并未观察到差异。图6b证明临床血液学及化学的结果。所得到的所有数据皆在可接受的范围内，且无临床显着性。[0043]图7显示未武装的huns17(un-armedhuns17)在前列腺癌及胰腺癌的异种移植模型中的体内功效评价图。[0044]图8是构建的不同的人源化抗cd24及抗cd30fab片段的示意图。[0045]图9是展示通过elisa所检测的三种生成的fab衍生物的结合的图表。来自各个，使用噬菌体的十进制稀释度，1x1012至1x1010。“h”代表pcomb3x-h(cd24)l(cd30)、“l”代表pcomb3x-h(cd30)l(cd24)、“fab”代表pcomb3x-h(cd24)l(cd24)。此程序依照本哈尔等人(currentprotocolsinimmunology，2002)中的描述进行。[0046]图10是资料库设计的示意图：即设计人源化swa11的亲和力成熟：通过igblast在200个同源物中寻找互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)多样性。黄色标记代表修改后的基因座，即随机化的位置。其他则是用于设计此等资料库的不同的同源物中的保留基因座。[0047]图11是用于确定来自噬菌体抗体的资料库的潜在结合物的elisa的示意图。将第三个盘洗循环及第四个盘洗循环(panningcycle)后的单个菌落挑入在无菌的96孔盘(母盘)中的100μlytag培养基中，并在37℃下摇晃(150rpm)培养过夜。随后，将各个孔中的10μl转移至第二个96孔盘(救援盘)中，并将获救的噬菌体用于elisa。elisa盘中的各孔以100μl抗原蛋白在4℃下以5μg/ml的pbs浓度涂布过夜。通过辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，hrp)偶联的兔抗m13抗体检测fab表现的噬菌体的结合。利用3％脱脂牛奶阻断elisa盘。由于亲和性筛选通常会导致非特异性噬菌体与特定噬菌体一起被分离，因此总是平行测试与无关的抗原(bsa)的结合。母盘用作通过噬菌体elisa所鉴定的阳性单克隆的克隆的来源，以用于进一步的操作。[0048]图12a至图12b是哺乳动物的pcdna4/to及pcdna4-cmv-igl-cmv-igh表达载体的示意图。表示的是pcdna4/to骨架质粒(图12a)及pcdna4-cmv-igl-cmv-igh(图12b)的图谱。pcdna4-cmv-igl-cmv-igh用于生成整个igg人源化cd24mab的可诱导的表达及分泌系统。[0049]图13a至图13c证明成熟抗体与cd24的结合，如通过基于抗原的elisa(图13a)、全细胞elisa(图13b)及荧光激活流式细胞术(fluorescenceactivatedflowcytometry，facs)分析(图13c)所确定。ht29及hct116细胞是大肠癌细胞株；ht29细胞表达cd24，而hct116细胞仅表达非常低水平的cd24，且作为阴性对照。[0050]图14证明成熟的抗体抑制乳腺癌细胞的增殖，如通过显微镜观察的定性及通过酶促mtt分析的定量所证实。bt549及bt468是三阴性乳腺癌细胞株。[0051]图15a至图15d证明成熟抗体的特异性、结合强度、稳定性及adcc活性。图15a显示数个成熟的克隆相较于人源化衍生的huns17抗体的biacor结果。图15b显示成熟的抗体的体外稳定性测试的结果。简而言之，将经纯化的mab在pbs中稀释至最终浓度为1μg/ml。之后将抗体在37℃下进行培养，且在各个时间点，如图表所示，从测试项目中取出样本并保存在4℃中。最后，通过基于抗原的elisa分析抗体的活性。图15c证明成熟的抗体的adcc活性，如通过对ht29肿瘤细胞株的e/t优化分析所检测。将靶细胞与10μg/mlns17在37℃/5％培养箱中预培养30分钟。添加pbmc，以在3种不同的e/t比率下启动adcc效应。在37℃/5％co2培养箱中培养6小时后，收集用于检测释放的ldh的细胞上清液，以计算靶细胞裂解百分比。贺癌平(herceptin)介导的mcf-7细胞的adcc裂解用作阳性对照。图15d通过全细胞elisa证明成熟的抗体ns17识别及特异性地结合cd24的能力。使用cd24阳性细胞(ht29，crc；colo257及panc-1，胰腺；sh-sy5y，神经母细胞瘤)及cd24阴性细胞(hct116，crc)。[0052]图16a至图16b证明资料库设计。图16a是基于在第一次成熟过程中分离的结合物的序列的资料库的设计的示意图，以寻找额外的及可能更好的结合物。数字(紫色及绿色)表示所使用引子的长度。红色数字表示引子的数量。如图16b所示，设计的资料库包括cdr1及cdr2突变。[0053]图17证明人源化成熟的ns17抗cd24的抗体(seqidno：1及5)的vl序列及vh序列，如通过卡巴特等人的方法所检测。互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)(seqidnos：2、3、4、6、7及8)以黄色突出显示。[0054]图18显示cd24在正常的人体组织中的表达模式，使用fda批准的正常的人体器官组织微阵列。基于fda指南，包括32种正常的人体器官，其中各个器官取自3位正常的人体。使用抗cd24的抗体检测cd24表达。绝大多数的正常组织并未显示cd24的表达。嗜铬细胞瘤(phechromocytoma)样本已用作阳性对照。[0055]图19证明cd24在大多数人类恶性肿瘤中高度表达。数种肿瘤微阵列(tumormicroarray，tma)已被使用于研究在各种人类恶性肿瘤中的cd24表达模式。[0056]图20证明通过成熟的mab所识别的lap表位是非常独特的。使用uniprot(www.uniprot.org)进行大型同源性比较分析。观察250位具有不同的主体性百分比的人选。然而，在其中皆不存在lap表位。显示cd24序列(seqidno：70-74)的数个实例，且此表位并未出现在其中的任何一者中。[0057]图21证明ns17抗体在携带结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)异种移植物的裸mediatedcytotoxicity，adcc)、补体依赖性细胞毒性(complementdependentcytotoxicity，cdc)及抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependentcellularphagocytosis，adcp)，且在体外及体内抑制肿瘤生长。此外，本发明人已制备一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包括ns17的vh链及vl链以及抗cd3的抗体的vh链及vl链。[0067]此等结果使所述抗体成为治疗cd24相关疾病，例如癌症的重要临床工具。[0068]因此，根据本发明的一第一方面，提供一种抗体，所述抗体包括一抗原识别结构域，所述抗原识别结构域特异性地结合cd24且包括如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)及如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)，所述如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区在所述抗体的一轻链上以从n至c的顺序排列，所述如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区在所述抗体的一重链上以从n至c的顺序排列。[0069]如本文中所使用，术语“cd24”是指由cd24基因(基因id：100133941)编码的磷脂酰肌醇锚定的粘蛋白样细胞表面蛋白(phosphatidylinositol-anchoredmucin-likecell-surfaceprotein)。根据具体实施例，cd24是指人类cd24，例如在genbank登录号：np_037362中提供。[0070]在本发明中所使用的术语“抗体”包括完整分子及其功能片段(能够结合一抗原的一表位)。[0071]如本文中所使用，术语“表位”是指在一抗原上与一抗体的互补位结合的任何抗原决定区。表位决定区通常由具有化学活性的分子表面积团所组成，所述分子表面积团例如氨基酸或碳水化合物侧链，且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。[0072]用于实施本发明的一些实施例的合适的抗体片段包括免疫球蛋白轻链(在本文中称为“轻链”)的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)、免疫球蛋白重链(在本文中称为“重链”)的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)、轻链的可变区、重链的可变区、轻链、重链、fd片段及基本上包括轻链及重链二者的完整可变区的抗体片段，例如fv、单链fvfv(singlechainfv，scfv)、二硫键稳定的fv(disulfide-stabilizedfv，dsfv)、fab、一个fab’及f(ab’)2。[0073]如本文中所使用，术语“互补决定区”或“cdr(complementarity-determiningregion)”可互换使用，指在重链及轻链多肽的可变区内所发现的抗原结合区。通常，抗体在各个vh(cdrh1或hi；cdrh2或h2；及cdrh3或h3)中包含三个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)，且在各个vl(cdrl1或l1；cdrl2或l2；及cdrl3或l3)中包含三个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)。[0074]特定抗体中构成可变区或互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)的氨基酸残基的身份可使用本领域熟知的方法确定，及包括如卡巴特等人所界定的序列可变性等方法。(参见，例如，卡巴特等人，1992，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版，公共卫生局，nih，华盛顿d.c.)，乔提亚等人所界定的结构环区域的位置。(参见，例如，乔提亚等人，nature342：877-883，1989)，卡巴特及乔提亚之间使用oxfordmolecular’sabm抗体建模软件(现为参见马丁等人，1989，proc.natlacadsciusa.86：9268；及全球资讯网www.bioinf-org.uk/abs)，可获得由接触定义所界定的复杂晶体结构(参见麦卡勒姆等人，j.mol.biol.262：732-745，1996)及“构象定义”(参见，例如，马卡贝等人，journalofbiologicalchemistry，283：1156-1166，2008)。[0075]如本文中所使用，“可变区(variableregion)”及“互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)”可指通过本领域已知的任何方法所定义的可变区及互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)。[0076]根据具体实施例，在抗体中构成互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)、可变区、轻链及/或重链的氨基酸残基的身份通过卡巴特等人的方法确定(参见，例如，卡巴特等人，1992，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版，公共卫生局，nih，华盛顿d.c.)。[0077]在本文中所公开的抗体包括如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)及如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)，所述如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区在所述抗体的一轻链上以从n至c的顺序排列，所述如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区在所述抗体的一重链上以从n至c的顺序排列。[0078]根据具体实施例，轻链的可变区(vl)包括一的氨基酸序列，所述的氨基酸序列与seqidno：1具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。[0079]可使用任何蛋白质或核酸序列比对演算法，例如blast、clustalw及muscle确定序列同一性或同源性。[0080]根据具体实施例，轻链的可变区(vl)是如seqidno：1所示。[0081]因此，根据具体实施例，轻链氨基酸序列包括如seqidno：1所示的氨基酸序列。[0082]根据具体实施例，重链的可变区(vh)包括一的氨基酸序列，所述的氨基酸序列与seqidno：5具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。[0083]根据具体实施例，重链的可变区(vh)是如seqidno：5所示。[0084]因此，根据具体实施例，重链氨基酸序列包括如seqidno：5所示的氨基酸序列。[0085]根据一具体实施例，轻链氨基酸序列包括如seqidno：1所示的氨基酸序列，重链氨基酸序列包括如seqidno：5所示的氨基酸序列。[0086]包括轻链及重链二者的完整或基本上完整的可变区的功能性抗体片段定义如下：[0087](i)fv，定义为由轻链的可变区(vl)及重链的可变区(vh)所组成的基因工程片段，表示为两条链；[0088](ii)单链fv(“scfv”)，包括轻链的可变区及重链的可变区的基因工程单链分子，通过合适的多肽连接子连接为基因融合的单链分子。[0089](iii)二硫键稳定的fv(“disulfide-stabilizedfv，dsfv”)，一种基因工程抗体，包括通过基因工程二硫键所连接的轻链的可变区及重链的可变区。[0090](iv)fab，一抗体分子的一片段，包括一抗体分子的单价抗原结合部分，可通过利用木瓜蛋白酶处理整个抗体，以产生完整的轻链及重链的fd片段而获得，所述fd片段由其可变结构域及其ch1结构域所组成；[0091](v)fab’，一抗体分子的一片段，包括一抗体分子的单价抗原结合部分，可通过用胃蛋白酶处理整个抗体，之后进行还原而获得(各个抗体分子获得两个fab’片段)；[0092](vi)f(ab’)2，一抗体分子的一片段，包括一抗体分子的单价抗原结合部分，可通过用胃蛋白酶处理整个抗体而获得(即，通过两个二硫键而结合在一起的fab’片段的二聚体)；及[0093](vii)单结构域抗体或纳米抗体是由对抗原表现出足够亲和力的单一vh结构或vl结构域所组成。[0094]根据具体实施例，抗体重链恒定区是选自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd及ige。[0095]根据具体实施例，所述抗体是igg抗体。[0096]根据一具体实施例，所述抗体同型是igg1或igg4。[0097]根据一具体实施例，所述抗体是igg1，例如igg1κ。[0098]根据一具体实施例，所述抗体是igg2，例如igg2a、igg2b，例如igg2aκ或igg2bκ。[0099]抗体类型的选择将取决于抗体旨在引发的免疫效应功能。[0100]根据具体实施例，所述抗体包括一fc结构域。[0101]制备多克隆抗体及单克隆抗体及其片段的方法是本领域众所周知的(参见例如，哈洛及蓝，抗体：实验室手册，冷泉港实验室，纽约，1988，通过引用并入本文中)。[0102]根据本发明的一些实施例的抗体片段可通过抗体的蛋白水解或通过在大肠杆菌或哺乳动物细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞培养物或其他蛋白质表达系统)中表达编码所述片段的dna而制备。抗体片段可通过常规的方法通过胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化整个抗体而获得。例如，可通过利用胃蛋白酶对抗体进行酶促切割来产生抗体片段，以提供表示为f(ab’)2的5s片段。此片段可使用硫醇还原剂及任选地由二硫键断裂所产生的巯基的阻断基团而进一步切割，以产生3.5sfab’单价片段。或者，使用胃蛋白酶的酶促切割直接地产生两个单价fab’片段及一个fc片段。例如，戈登堡，美国专利第4,036,945号及第4,331,647号，以及其中所包含的参考文献描述此等方法，此等专利在此通过引用整体并入。另参见波特，r.r.[biochem.j.73：119-126(1959)]。亦可使用其他切割抗体的方法，例如分离重链，以形成单价轻-重链片段，进一步切割片段，或其他的酶促、化学或遗传技术，只要片段与被完整抗体识别的抗原结合即可。[0103]fv片段包括vh链及vl链的结合。如英巴等人所述，此结合可能是非共价的。[proc.nat’lacad.sci.usa69：2659-62(19720]。或者，可变链可通过分子间的二硫键进行连接或通过化学物质，例如戊二醛进行交联。优选地，fv片段包括通过肽连接子进行连接的vh链及vl链。此等单链抗原结合蛋白(single-chainantigenbindingprotein，sfv)是通过构建一结构基因而制备，所述结构基因包括编码vh结构域及vl结构域的dna序列，此等dna序列通过寡核苷酸进行连接。将结构基因插入一表达载体，随后将其引入诸如e.coli.的宿主细胞。重组宿主细胞合成一单个多肽链，所述单个多肽链具有桥接两个v结构域的连接子肽。制备sfv的方法描述于例如[斐洛及菲尔布勒，method2：97-105(1991)；柏德等人，science242：423-426(1988)；裴克等人，bio/technology11：1271-77(1993)；及美国专利第4,946,778号，其通过引用整体并入本文中。[0104]抗体片段的另一种形式是编码单一互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)的肽。互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)肽(“最小识别单位”)可通过构建编码感兴趣的抗体的cdr的基因来获得。例如，通过使用聚合酶链式反应，从抗体产生的细胞的rna来合成可变区，以制备此等基因。例如，参见拉里克及弗赖[methods，2：106-10(1991)]。[0105]所述抗体可为单特异性的(能够识别一个表位或蛋白质)、双特异性的(能够结合两个表位或蛋白质)或多特异性的(能够识别多个表位或蛋白质)。[0106]根据具体实施例，所述抗体是单特异性的。[0107]根据具体实施例，所述抗体是多特异性的，例如双特异性、三特异性、四特异性。[0108]根据本发明的一些实施例，所述抗体是双特异性的。[0109]双特异性抗体是人工杂合抗体，所述人工的杂合抗体具有两个不同的重链/轻链对，以及两个不同的识别(即结合)位点，能够特异性地结合至少两个不同的表位。不同的表位可在同一分子内或在不同的分子上，使得双特异性抗体可特异性识别及结合在单个cd24多肽以及两个不同的cd24多肽上的两个不同的表位。或者，双特异性抗体具有对cd24具有亲和力的第一识别部分及对不同于cd24的多肽，例如，但不限于由免疫细胞表达的多肽具有亲和力的第二识别部分。[0110]因此，根据具体实施例，多特异性抗体包括特异性地结合cd24的抗原识别结构域及特异性地结合免疫细胞的抗原识别结构域。[0111]免疫细胞的非限制性实例包括t细胞、nk细胞、nkt细胞、b细胞、巨噬细胞、树突细胞(dendriticcell，dc)及粒细胞。[0112]根据具体实施例，所述免疫细胞是t细胞。[0113]通过免疫细胞特异性表达的多肽的非限制性实例包括cd2、cd3、cd4、cd8、cd19、cd22、cd56、cd14、cd33、cd28、b7、cd64、cd32、cd16、pd1、cd68、cd11b。[0114]根据具体实施例，通过免疫细胞表达的多肽是cd3。[0115]因此，根据具体实施例，多特异性(例如双特异性)抗体包括如本文中所公开的特异性地结合cd24的抗原识别结构域及特异性地与cd3结合的抗原识别结构域。[0116]许多抗cd3的抗体是本领域已知的。此种抗cd3的抗体的非限制性实例包括okt3、dil2k、tr66、ucht1、人源化uhct1、f6a。[0117]根据具体实施例，特异性地与cd3结合的抗原识别结构域包括如seqidno：36、37及39所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)及如seqidno：44、46及48所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)，所述如seqidno：36、37及39所示的多个互补决定区在所述抗体的一轻链上以从n至c的顺序排列，所述如seqidno：44、46及48所示的多个互补决定区在所述抗体的一重链上以从n至c的顺序排列。[0118]根据具体实施例，特异性地与cd3结合的抗原识别结构域的vl是如seqidno：34所示。[0119]根据具体实施例，特异性地与cd3结合的抗原识别结构域的vh是如seqidno：42所示。[0120]根据一具体实施例，双特异性抗体包括seqidno：29或31。[0121]根据一具体实施例，双特异性抗体是如seqidno：29或31所示。[0122]制备双特异性抗体的方法是本领域已知的，且例如在宋思服赖及拉赫曼(1990)clin.exp.immunol.79：315-321；科斯特尔尼等人(1992)j.immunol.148：1547-1553，美国专利第4,474,893号、第5,959,084号及第7,235,641号、第7,183,076号，美国公开第20080219980号及国际公开第wo2010/115589号、第wo2013150043号及第wo2012118903号，全部并入本文中；以及包括例如化学交联(布伦南等人，science229,81(1985)；拉索等人，j.bioi.chern.272，27623(1997))、二硫键交换、杂交-杂交瘤(quadromas)，通过转录及转以制备包含双特异性抗体的单个多肽链，或通过转录及转译以制备多条多肽链，所述多条多肽链可共价地结合，以制备双特异性抗体。所考虑的双特异性抗体亦可完全通过化学合成来制备。[0123]应当理解，对于人类治疗或诊断，优选地使用人源化抗体。[0124]根据具体实施例，所述抗体是人源化抗体。非人类(例如，鼠)抗体的人源化形式是免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如fv、fab、fab’、f(ab’).sub.2或抗体的其他抗原结合子序列)的嵌合分子，其中包含衍生自非人类免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人类免疫球蛋白(受体抗体)，其中形成受体互补决定区(complementarydeterminingregion，cdr)的残基被来自非人类物种(供体抗体)，例如小鼠、大鼠或兔的具有所需的特异性、亲和力及能力的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)的残基取代。在一些情况下，人类免疫球蛋白的fv架构(fvframework)残基被相应的非人类的残基取代。人源化抗体亦可包括既不在受体抗体中且亦不在输入的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)或架构序列中所发现的残基。一般而言，人源化抗体将包括基本上所有的至少一者，通常是两个可变结构域，其中所有或基本上所有的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)区对应于非人类免疫球蛋白的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)区及所有或基本上所有的fr区是人类免疫球蛋白共有序列的彼等。人源化抗体亦优选地包括免疫球蛋白恒定区(immunoglobulinconstantregion，fc)的至少一部分，通常是人类免疫球蛋白的恒定区[琼斯等人，nature，321：522-525(1986)；里赫曼等人，nature，332：323-329(1988)；及普雷斯塔，curr.op.struct.biol.biol.，2：593-596(1992)]。[0125]用于人源化非人类抗体的方法是本领域众所周知的。通常，人源化抗体具有一或多个从非人类的来源引入的氨基酸残基。此等非人类氨基酸残基通常被称为输入残基，其通常取自一输入可变结构域。人源化基本上可依照温特及同事的方法进行[琼斯等人，nature，321：522-525(1986)；里赫曼等人，nature332：323-327(1988)；维尔霍伊恩等人，science，239：1534-1536(1988)]，通过利用啮齿动物的互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)或互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)序列代替人类抗体的相应序列。因此，此种人源化抗体是嵌合抗体(美国专利第4,816,567号)，其中基本上少于一完整的人类可变结构域已被来自非人物种的相应序列取代。在实施中，人源化抗体通常是人类抗体，其中一些互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)残基及可能的一些fr残基被啮齿动物的抗体中的相似位点的残基取代。dependentcelltoxicity，adcc)。[0137]根据本发明的一些实施例，所述治疗部分能够引发补体依赖性细胞毒性(complement-dependentcytotoxicity，cdc)。[0138]根据本发明的一些实施例，所述治疗部分能够引发抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependentcellularphagocytosis，adcp)。[0139]或者或额外地，所述抗体可为双特异性抗体，如上文进一步描述，其中所述治疗部分是免疫细胞接合剂，例如抗cd3的抗体、抗cd16或抗免疫检查点分子(例如抗pd-1)。[0140]因此，根据本发明的一方面，提供一种在有需要的一受试者中对表达cd24的细胞激活免疫细胞的方法，所术方法包括向所术受试者施予一治疗有效量的抗体，从而激活免疫细胞朝向表达cd24的细胞。[0141]或者或额外地，根据具体实施例，所述治疗部分是表达抗体的免疫细胞。可用于本发明的具体实施例的免疫细胞的非限制性实例包括t细胞、nk细胞、nkt细胞、b细胞、巨噬细胞、树突细胞(dendriticcell，dc)及粒细胞。[0142]根据具体实施例，所述免疫细胞是t细胞。[0143]因此，根据具体实施例，所术抗体是一嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)的一部分，且所述治疗部分是使用所述试剂进行转导的t细胞。[0144]嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)是人工构建的杂合蛋白或多肽，包含与t细胞信号传导或t细胞激活结构域相连接的抗体的抗原结合结构域(例如，单链可变片段(singlechainvariablefragment，scfv))。产生嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)及利用嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)转导t细胞的方法在本领域中是已知的，且例如公开于在达维拉等人，oncoimmunology2012年12月1日；1(9)：1577-1583；王及rivièrecancergenether.2015年3月；22(2)：85-94)；毛斯等人，blood.2014年4月24日；123(17)：2625-35；波特dl，thenewenglandjournalofmedicine.2011，365(8)：725-733；杰克逊hj，natrevclinoncol.2016；13(6)：370-383；及格洛伯森-莱莫等人，molther.2014；22(5)：1029-1038。[0145]可选地或额外地，所述抗体可连接至一异源治疗部分(接合方法在下文中描述)。所述治疗部分可为，例如，细胞毒性部分、毒性部分[例如，假单胞菌外毒素(genbank登录号：aab25018及s53109)；pe38kdel；白喉毒素(genbank登录号：e00489及e00489)；蓖麻毒素a毒素(genbank登录号：225988及a23903)]、细胞因子部分[例如，白细胞介素2(genbank登录号：caa00227及a02159)、白细胞介素10(genbank登录号：p22301及m57627)]、药物、化学品、蛋白质及/或放射性同位素。[0146]根据具体实施例，所述治疗部分是选自由以下所组成的群组：毒素、药物、化学品、蛋白质及放射性同位素。[0147]根据具体实施例，抗体与一可检测部分结合。[0148]可用于本发明的一些实施例的可检测部分的实例包括但不限于放射性同位素、磷光化学品、化学发光化学品、荧光化学品、酶、荧光多肽、放射性同位素(例如[125]碘)及表位标签。可检测部分可为一结合对的构件及一标记，所述结合对可经由其与所述结合对的额外构件的相互作用来识别，且所述标记是直接可视化的。在一实例中，所述结合对的构件是一抗原，所述抗原是由一相应的标记抗体鉴定。在一实例中，所述标记是荧光蛋白或产生比色反应的酶。[0149]合适的荧光团的实例包括，但不限于藻红蛋白(phycoerythrin，pe)、异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，fitc)、cy-铬(cy-chrome)、罗丹明、绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，gfp)、蓝色荧光蛋白(bluefluorescentprotein，bfp)、德克萨斯红(texasred)、pe-cy5等。有关荧光团的选择、将荧光团连接至各种类型分子的方法的其他指导，请参见理查德p.豪格兰，“分子探针：荧光探针及研究化学品的手册1992-1994”，第5版，分子探针公司(molecularprobes，inc.)(1994)；癌免疫素公司(oncoimmunininc.)的美国专利第6,037,137号；赫曼森，“生物共轭技术”，纽约学术出版社(1995)；凯m.等人，1995.biochemistry34：293；斯塔布斯等人，1996.biochemistry35：937；加卡姆斯基d.等人，“通过荧光共振能量转移评估受体化学计量”，“受体：一种实用的方法”，第2版，斯坦福c.及霍顿r.(版本)，牛津大学出版社，英国(2001)；targesome公司的美国专利第6,350,466号]。当与荧光可检测部分接合时，可用于检测抗体的荧光检测方法包括例如荧光激活流式细胞术(fluorescenceactivatedflowcytometry，facs)、免疫荧光共聚焦显微镜、荧光原位杂交(fluorescencein-situhybridization，fish)，以及荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer，fret)。[0150]许多类型的酶可连接至所述抗体上[例如辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，hrp)、β-半乳糖苷酶，以及碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ap)]，且可使用elisa(例如，在溶液中)、酶联免疫组织化学分析(例如，在一固定的组织中)、酶联化学发光分析(例如，在电泳分离的蛋白质混合物中)或本领域已知的其他方法[参见例如，哈特哈泰mi.及德赛m.，1999.jimmunoassay20：151-83；威世登gb.，1994，methodsmolbiol.32：433-40；石川e.等人，1983.jimmunoassay4：209-327；欧莱里希m.，1980.jclinchemclinbiochem.18：197-208；舒尔ah.及范维门bk.，1980.jimmunoassay，1：229-49)。[0151]示例性的可识别部分包括，但不限于绿色荧光蛋白、碱性磷酸酶、过氧化物酶、组氨酸标签、生物素、橙色荧光蛋白及链霉亲和素(strepavidin)。[0152]可检测部分的进一步实例包括可通过正电子发射断层扫描(positronemissiontomography，pet)及磁共振成像(magneticresonanceimaging，mri)检测的彼等，所有此等皆为本领域技术人员所熟知的。[0153]根据一些实施例，所述治疗部分或可检测部分通过将编码本文中所公开的抗体的多核苷酸与编码所述治疗部分或可检测部分的核酸序列转译地融合而进行接合。[0154]另外或可选地，治疗部分或可检测部分可使用本领域技术人员已知的任何接合方法进行化学接合(偶联)至抗体，包括例如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯(3-(2-pyridyldithio)propionicacidn-hydroxysuccinimideester)(亦称为n-丁二酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)(n-succinimidyl3-(2-pyridyldithio)propionate，“sdpd”)(西格玛，目录编号：p-3415；参见例如康巴等人，1985，methodsofenzymology112：207-224)、戊二醛接合过程(参见例如gt赫曼森1996，“在生物偶联技术中，抗体修饰及偶联，academicpress，圣地亚哥)或碳二亚胺接合过程[参见例如，j.march，高级有机化学：反应的机理及结构，pp.349-50&372-74(第3版)，1985；b.尼斯等人，1978，angewchem.，int.ed.engl.17：522；a.哈斯纳等人，1978，tetrahedronlett.4475；ep博登等人，1986，j.org.chem.50：2394及l.j.马蒂亚斯1979，synthesis561]。[0155]例如，可使用本领域广泛实施的标准化学合成技术，将治疗部分或可检测部分连接至本发明的一些实施例的抗体[参见例如http：//worldwideweb.chemistry.org/portal/chemistry)]，例如使用任何合适的化学键，直接或间接，如经由一肽键(当功能部分是多肽时)，或经由共价键结至一中间连接子元件，例如一连接子肽或其他的化学键部分，例如一有机聚合物。嵌合肽可通过在肽的羧基(carboxy，c)或氨基(amino，n)末端进行连接，或经由键结至内部化学基团，例如直链、支链或环状侧链、内部碳或氮原子等进行连接。抗体的荧光标记的描述是详细提供于美国专利第3,940,475号、第4,289,747号，及第4,376,110号中。[0156]抗体亦可附着至包括治疗部分或可检测部分(例如细胞毒性剂)的颗粒上。将抗体与一包封颗粒共价结合的方法是本领域已知的，且例如公开于美国专利第5,171,578号、第5,204,096号，及第5,258,499号中。[0157]根据一具体实施例，所述抗体是使用重组dna技术所产生的。[0158]因此，根据本发明的一方面，提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码所述抗体。此种多核苷酸将包括编码互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)的核酸序列。[0159]如本文中所使用，术语“多核苷酸”是指以rna序列、互补多核苷酸序列(complementarypolynucleotidesequence，cdna)、基因组多核苷酸序列及/或复合多核苷酸序列的形式进行分离及提供的一单链核酸序列或双链核酸序列(例如，上述的组合)。[0160]此种核酸序列的非限制性实例在seqidno：49、53、30或32中提供。[0161]本文中亦考虑包括编码所述抗体的多核苷酸的宿主细胞。因此，根据本发明的一方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞表达所述抗体。[0162]通常选择此种细胞，以高度表达重组蛋白(例如，细菌、植物或真核细胞，例如cho、hek-293细胞)，但亦可为免疫细胞(例如，巨噬细胞、树突细胞、t细胞、b细胞或nk细胞)，例如当抗体的互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)被植入嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)中时，嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)被转导至被使用于采用的细胞疗法的所述细胞中。[0163]为了在细胞中表达任何公开的抗体，优选地将编码所述抗体的多核苷酸序列连接至适合细胞表达的一核酸构建体中，并引入宿主细胞中。此种核酸构建体包括一启动子序列，所述启动子序列用于引导在细胞中的多核苷酸序列，以持续型或诱导型方式进行转录。[0164]本发明的一些实施例的核酸构建体(在本文中亦称为“表达载体”)包括附加序列，所述附加序列使此载体适合于复制及嵌入(例如穿梭载体)。此外，典型的克隆载体亦可含有一转录起始序列及转译起始序列、转录终止子及转译终止子，以及多聚腺苷酸化信号。举例而言，此种构建体通常包括5’ltr、trna结合位点、包装信号、第二链dna合成的起点，以及3’ltr或其部分。[0165]真核启动子通常包含两种类型的识别序列，即tata盒及上游启动子元件。位于转录起始位点的上游25至30个碱基对的tata盒被认为参与引导rna聚合酶，以开始rna的合成。其他的上游启动子元件决定转录起始的速率。[0166]增强子元件可从连接的同源启动子或异源启动子刺激高达1,000倍的转录。当增强子置放于转录起始位点的下游或上游时，增强子是活跃的。许多衍生自病毒的增强子元件具有一广泛的宿主范围，且在多种组织中具有活性。例如，sv40早期基因增强子适用于多种细胞类型。适用于本发明的一些实施例的其他的增强子/启动子组合包括衍生自多瘤病毒、人类巨细胞病毒(cytomegalovirus，cmv)或鼠巨细胞病毒(cytomegalovirus，cmv)、来自各种逆转录病毒，例如鼠白血病病毒、鼠肉瘤病毒或劳斯肉瘤病毒(roussarcomavirus)及hiv的长末端重复序列(longtermrepeat)的彼等。参见，增强子及真核表达，冷泉港出版社，冷泉港，n.y.1983，其通过引用并入本文中。[0167]在表达载体的构建体中，启动子优选地与异源转录起始位点的距离与其在其自然环境中与转录起始位点的距离大致相同。然而，如本领域已知的，可提供此距离的一些变化而不损失启动子的功能。[0168]亦可将多腺苷酸化序列添加至表达载体中，以提高mrna转译的效率。准确及有效的多聚腺苷酸化需要两个不同的序列元件：位于多聚腺苷酸化位点的下游的富含gu或u的序列，以及位于上游11至30个核苷酸的高度保留的六个核苷酸的序列aauaaa。适用于本发明的一些实施例的终止及多聚腺苷酸化信号包括衍生自sv40的彼等。[0169]除了已经描述的元件之外，本发明的一些实施例的表达载体通常可包含其他的特定化元件，所述其他的特定化元件旨在增加克隆核酸的表达水平或协助识别携带重组dna的细胞。例如，许多的动物病毒含有促进病毒基因组在允许的细胞类型中进行染色体外复制的dna序列。只要通过在质粒上所携带的基因或宿主细胞的基因组提供适当的因子，则带有此等病毒复制子的质粒即会被游离复制。[0170]载体可包括或不包括一真核复制子。倘若存在一真核复制子，则可使用适当的选择标记在真核细胞中扩增载体。倘若载体不包括一真核复制子，则不可能进行游离扩增。相反的，重组dna嵌入至工程细胞的基因组中，其中所述启动子引导所需核酸的表达。[0171]应当理解，在表达载体中所包含的各个元件可以多种配置进行排列。例如，增强子元件、启动子等，甚至编码多肽的多核苷酸序列可以“头对尾”构型排列，可作为一反向互补物存在，或以一互补构型存在，作为一反平行链。尽管表达载体的非编码元件更可能出现此种不同的构型，但亦可设想在表达载体中编码序列的替代构型。[0172]哺乳动物表达载体的实例包括，但不限于pcdna3、pcdna3.1( /-)、pgl3、pzeosv2( /-)、psectag2、pdisplay、pef/myc/cyto、pcmv/myc/cyto、pcr3.1、psinrep5、dh26s、dhbb、pnmt1、pnmt41、可从invitrogen取得的pnmt81、可从promega取得的pci、可从strategene取得的pmbac、ppbac、pbk-rsv及pbk-cmv，及可从clontech取得的ptres，以及其衍生物。[0173]亦可使用含有来自诸如逆转录病毒的真核病毒的调节元件的表达载体。sv40载体包括psvt7及pmt2。源自于牛乳头状瘤病毒的载体包括pbv-1mtha，源自于epsteinbar病毒的载体包括phebo及p2o5。其他的示例性载体包括pmsg、pav009/a 、pmto10/a 、pmamneo-5、杆状病毒pdsve，以及允许在以下的启动子的引导下表达蛋白质的载体：sv-40早期启动子、sv-40晚期启动子、金属硫蛋白启动子、鼠乳腺肿瘤病毒启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、多角体启动子或其他显示对在真核细胞中表达有效的启动子。[0174]可使用多种方法将本发明一些实施例的表达载体引入细胞。此种方法一般描述于sambrook等人，分子克隆：实验室手册，冷泉港实验室，纽约(1989，1992)，奥苏贝尔等人，分子生物学中的当前步骤准则，约翰威利及宋斯，巴尔的摩，md.(1989)，张等人，体细胞基因治疗，crc出版社，annarbor，mich.(1995)，维格等人，基因靶向，crc出版社，annarbormich.(1995)，载体：分子克隆载体及其用途的概论，巴特沃思，bostonmass.(1988)，以及吉尔博等人[biotechniques4(6)：504-512，1986]，及包括例如稳定转染或瞬间转染、脂转染、电穿孔及重组病毒载体的感染。此外，参见美国专利第5,464,764号及第5,487,992号用于正负筛选方法。[0175]根据本发明的另一方面或替代方面，提供一种产生抗cd24抗体的方法，所述方法包括步骤：[0176](a)在支持所述抗体的产生的条件下，培养表达所述抗体的宿主细胞；及[0177](b)回收所述抗体。[0178]此种条件可为例如合适的温度(例如，37℃)、大气(例如，空气加5％co2)、ph、光、介质、补充剂等。[0179]根据一具体实施例，从培养物中分离(纯化)所述抗体。[0180]根据具体实施例，经分离的抗体基本上是不含污染的细胞成分，例如碳水化合物、脂质或其他杂质。[0181]用于分离及纯化抗体的方法是本领域熟知的，参见例如色谱，第5版，a部分：基础及技术，赫夫特曼，e.(版本)，爱思唯尔科学出版公司，纽约,(1992)；生物科学中的高级色谱及电迁移方法，戴尔，z.(版本)，爱思唯尔科学bv，阿姆斯特丹，thenetherlands,(1998)；今日的色谱，普尔，c.f.及普尔，s.k.，爱思唯尔科学出版公司，纽约,(1991)；范围，蛋白质纯化：原理与实施(1982)；桑布鲁克，j.等人(版本)，分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989；或分子生物学中的当前步骤准则，奥苏贝尔，f.m.等人。(版本)，约翰威利&宋斯，公司，纽约。[0182]根据具体实施例，在制备物中的总蛋白质的至少80％、至少90％、至少95％或至少99％是感兴趣的抗体。[0183]根据具体实施例，将分离的抗体纯化至药学上可接受的纯度。[0184]评估纯度的方法在本领域中是众所周知的，包括针对特定污染物的sec-hplc、肽图谱分析、sds凝胶分析及elisa。[0185]本文中所公开的抗体可用于多种临床应用。由于其对cd24的亲和力，其可用于治疗与cd24相关的医学病症，例如癌症。[0186]因此，根据本发明的一方面，提供一种在有需要的一受试者中治疗与表达cd24的细胞相关的疾病的方法，所述方法包括步骤：向所述受试者施予一治疗有效量的抗体，从而治疗在所述受试者中的所述疾病。[0187]根据本发明的另外的或替代的方面，提供了用于在有需要的受试者中治疗与表达cd24的细胞相关的疾病的抗体。[0188]如本文中所使用，术语“受试者”包括哺乳动物，优选地为患有所述病理的任何年龄或性别的人类。优选地，所述术语包括具有发展所述病理的风险的个体。[0189]如本文中所使用，短语“与表达cd24的细胞相关的疾病”是指表达cd24的细胞驱动所述疾病的发作及/或进展。[0190]根据具体实施例，与所述疾病相关的细胞过度表达cd24。[0191]根据具体实施例，相较于在健康细胞上的cd24水平，cd24在细胞上的表达为至少2％、至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更高，如通过例如流式细胞仪所检测。[0192]此类疾病的非限制性实例包括癌症、炎性肠病(例如uc及克罗恩疾病(crohn))、肾脏疾病[例如急性肾小管坏死(acutetubularnecrosis，atn)]、心血管疾病(例如心肌梗塞)、嗜酸性食管炎(eosinophilicesophagitis，eoe)、肺部疾病(例如哮喘)。[0193]可通过本发明的一些实施例治疗的癌症可为任何实体或非实体肿瘤、癌症转移及/或癌前病变。[0194]癌症的实例包括但不限于，恶性肿瘤、母细胞瘤、肉瘤及淋巴瘤。此种癌症的更具体实例包括，但不限于，胃肠道的肿瘤(结肠恶性肿瘤、直肠恶性肿瘤、结肠直肠恶性肿瘤、结肠直肠癌、结肠直肠腺瘤、遗传性非息肉病第1型(hereditarynonpolyposis)、遗传性非息肉病(hereditarynonpolyposis)第2型、遗传性非息肉病(hereditarynonpolyposis)第3型，遗传性非息肉病(hereditarynonpolyposis)第6型；结肠直肠癌、遗传性非息肉病(hereditarynonpolyposis)第7型、小肠恶性肿瘤及/或大肠恶性肿瘤、食道恶性肿瘤、食道癌的胼胝症、胃恶性肿瘤、胰腺恶性肿瘤、胰腺内分泌肿瘤)、子宫内膜恶性肿瘤、突起性皮肤纤维肉瘤(dermatofibrosarcomaprotuberans)、胆囊恶性肿瘤、胆道肿瘤、前列腺癌、前列腺腺细胞癌、肾癌(例如，威尔姆氏肿瘤(wilms’tumor)第2型或第1型)、肝癌(例如，肝母细胞瘤、肝细胞恶性肿瘤、肝细胞癌)、膀胱癌、胚胎性横纹肌肉瘤(embryonalrhabdomyosarcoma)、生殖细胞肿瘤、滋养层细胞肿瘤(trophoblastictumor)、睾丸生殖细胞肿瘤(testiculargermcellstumor)、卵巢未成熟畸胎瘤(immatureteratomaofovary)、子宫肿瘤、上皮卵巢肿瘤、荐椎与尾骨肿瘤(sacrococcygealtumor)、绒毛膜癌、胎盘部位滋养层细胞肿瘤(placentalsitetrophoblastictumor)、成人上皮肿瘤(epithelialadulttumor)、卵巢恶性肿瘤、浆液性卵巢癌、卵巢性索肿瘤(ovariansexcordtumor)、宫颈恶性肿瘤、子宫颈癌、小细胞肺恶性肿瘤及非小细胞肺恶性肿瘤、鼻咽恶性肿瘤、乳腺恶性肿瘤(例如，管状乳腺癌(ductalbreastcancer)、浸润性管内乳腺癌(invasiveintraductalbreastcancer)，偶发性的；乳腺癌、乳腺癌易感性(susceptibilitytobreastcancer)、第4型乳腺癌、乳腺癌-1、乳腺癌-3；乳腺卵巢癌)、鳞状细胞恶性肿瘤(squamouscellcarcinoma)(例如，头部及颈部)、神经源性肿瘤(neurogenictumor)、星形细胞瘤(astrocytoma)、神经节母细胞瘤(ganglioblastoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、淋巴瘤(例如，霍奇金病(hodgkin'sdisease)、非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin'slymphoma)、b细胞、布凯特(burkitt)、皮肤t细胞(cutaneoustcell)、组织细胞(histiocytic)、淋巴母细胞癌(lymphoblastic)、t细胞癌、胸腺癌)、神经胶质瘤(gliomas)、腺癌(adenocarcinoma)、肾上腺肿瘤(adrenaltumor)、遗传性肾上腺皮质癌(hereditaryadrenocorticalcarcinoma)、脑恶性肿瘤(brainmalignancy)(肿瘤)、各种其他的恶性肿瘤(例如，支气管大细胞癌(bronchogeniclargecell)、导管癌(ductal)、欧利希氏腹水癌(ehrlich-lettreascites)、表皮样癌(epidermoid)、大细胞癌(largecell)、路易斯氏肺(lewislung)癌、髓质(medullary)、粘液表皮样(mucoepidermoid)、燕麦状细胞(oatcell)、小细胞、梭形细胞(spindlecell)、脊髓细胞(spinocellular)、移行细胞(transitionalcell)、未分化(undifferentiated)、癌肉瘤(carcinosarcoma)、绒毛膜癌(choriocarcinoma)、囊腺癌(cystadenocarcinoma))、室管膜母细胞瘤(ependimoblastoma)、上皮瘤(epithelioma)、红白血病(erythroleukemia)(例如佛氏白血病(friend)、淋巴母细胞(lymphoblast))、纤维肉瘤(fibrosarcoma)、巨细胞瘤(giantcelltumor)、胶质瘤(glialtumor)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)(例如，多形性、星形细胞瘤)、胶质瘤(gliomahepatoma)、胶质瘤肝细胞瘤(gliomahepatoma)、异种杂交瘤(heterohybridoma)、异种骨髓瘤(heteromyeloma)、组织细胞瘤(histiocytoma)、杂交瘤(hybridoma)(例如，b细胞)、肾瘤(hypernephroma)、胰岛素瘤(insulinoma)、胰岛瘤(islettumor)、角膜瘤(keratoma)、平滑肌母细胞瘤(leiomyoblastoma)、(leiomyosarcoma)平滑肌肉瘤、白血病(leukemia)(例如，急性淋巴(acutelymphatic)、急性淋巴细胞(acutelymphoblastic)、急性淋巴细胞前b细胞(acutelymphoblasticpre-bcell)、急性淋巴细胞t细胞白血病(acutelymphoblastictcellleukemia)、急性-巨核细胞(acute-megakaryoblastic)、单核细胞(monocytic)、急性髓性(acutemyelogenous)、急性髓性(acutemyeloid)、急性髓性嗜酸性粒细胞增多症(acutemyeloidwitheosinophilia)、b细胞，嗜碱性(basophilic)、慢性髓性(chronicmyeloid)、慢性(chronic)、b细胞，嗜酸性(eosinophilic)，佛氏(friend)、粒细胞(granulocytic)或髓细胞(myelocytic)、毛细胞(hairycell)、淋巴细胞(lymphocytic)、巨核细胞(megakaryoblastic)、单核细胞(monocytic)、单核巨噬细胞(monocytic-macrophage)、成髓细胞(myeloblastic)、髓细胞(myeloid)、髓单核细胞(myelomonocytic)、浆细胞(plasmacell)、前-b细胞(pre-bcell)、早幼粒细胞(promyelocytic)、亚急性(subacute)、t细胞、淋巴肿瘤(lymphoidneoplasm)、易患髓系恶性肿瘤(predispositiontomyeloidmalignancy)、急性非淋巴细胞白血病(acutenonlymphocyticleukemia))、淋巴肉瘤(lymphosarcoma)、黑色素瘤(melanoma)、乳腺肿瘤(mammarytumor)、肥大细胞瘤(mastocytoma)、髓母细胞瘤(medulloblastoma)、间皮瘤(mesothelioma)、转移性肿瘤(metastatictumor)、单核细胞肿瘤(monocytetumor)、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)、骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome)、骨髓瘤(myeloma)、肾母细胞瘤(nephroblastoma)、神经组织神经胶质瘤(nervoustissueglialtumor)、神经组织神经元肿瘤(nervoustissueneuronaltumor)、神经瘤(neurinoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、少突胶质细胞瘤(oligodendroglioma)、骨软骨瘤(osteochondroma)、骨髓瘤(osteomyeloma)、骨肉瘤(osteosarcoma)(例如，尤文氏(ewing’s))、乳头状瘤(papilloma)、移行细胞(transitionalcell)、嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)、垂体瘤(pituitarytumor)(侵袭性)、浆细胞瘤(plasmacytoma)、视网膜母细胞瘤(retinoblastoma)、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、肉瘤(sarcoma)(例如，尤文氏(ewing’s)、组织细胞(histiocyticcell)、詹森(jensen)、成骨细胞(osteogenic)、网状细胞(reticulumcell))、神经鞘瘤(schwannoma)、皮下肿瘤(subcutaneoustumor)、畸胎癌(teratocarcinoma)(例如，多能性(pluripotent)、畸胎瘤(teratoma)、睾丸肿瘤(testiculartumor)、胸腺瘤(thymoma)及毛状上皮瘤(trichoepithelioma)、胃癌、纤维肉瘤(fibrosarcoma)、多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme)；多发性肾小球瘤(multipleglomustumors)、李-弗劳美尼综合征(li-fraumenisyndrome)、脂肪肉瘤(liposarcoma)、林奇氏症癌症家族综合征ii(lynchcancerfamilysyndromeii)、男性生殖细胞瘤(malegermcelltumor)、肥大细胞白血病(mastcellleukemia)、甲状腺髓样瘤(medullarythyroid)、多发性脑膜瘤(multiplemeningioma)、内分泌肿瘤粘液肉瘤(endocrineneoplasiamyxosarcoma)、副神经节瘤(paraganglioma)、家族性非嗜铬细胞瘤(familialnonchromaffin)、毛母细胞瘤(pilomatricoma)、乳头状(papillary)、家族性(familial)及偶发性(sporadic)、横纹肌瘤易感性综合征(rhabdoidpredispositionsynd)、家族性(familial)、横纹肌样肿瘤(rhabdoidtumors)、软组织肉瘤(softtissuesarcoma)及透克氏症综合征伴胶质母细胞瘤(turcotsyndromewithglioblastoma)。[0195]癌前病变在本领域是充分表征及已知的(例如参见伯曼jj.及汉森de.，2003.对癌前病变进行分类：元数据方法.bmcmedinformdecismak.3：8)。癌前病变的实例包括但不限于后天性小癌前病变(acquiredsmallprecancer)、后天性核异型性大病变(acquiredlargelesionswithnuclearatypia)、伴随发展为癌症的遗传性增生综合征的前体病变(precursorlesionsoccurringwithinheritedhyperplasticsyndrome)、后天性弥漫性增生及弥漫性化生(acquireddiffusehyperplasiasanddiffusemetaplasias)。小癌前病变(smallprecancer)的非限制性实例包括子宫颈的高级鳞状上皮内病变(highgradesquamousintraepitheliallesionofuterinecervix，hgsil)、肛门上皮内瘤变(analintraepithelialneoplasia，ain)、声带的上皮变异(dysplasiaofvocalcord)、(结肠的)异常隐窝(aberrantcrypt)、前列腺上皮内瘤变(prostaticintraepithelialneoplasia，pin)。[0196]具有核异型性的后天性大病变(acquiredlargelesionswithnuclearatypia)的非限制性实例包括管状腺瘤(tubularadenoma)、血管免疫母细胞性淋巴结病伴异常蛋白血症(angioimmunoblasticlymphadenopathywithdysproteinemia，aild)、非典型脑膜瘤(atypicalmeningioma)、胃息肉(gastricpolyp)、大斑块状副银屑病(largeplaqueparapsoriasis)、骨髓增生异常(myelodysplasia)、原位乳头状移行细胞癌(papillarytransitionalcellcarcinomain-situ)、具有过多原始细胞的难治性贫血(refractoryanemiawithexcessblasts)，以及施耐德乳头状瘤(schneiderianpapilloma)。伴随遗传性增生综合征发展为癌症的前驱病变的非限制性实例包括非典型痣综合征(atypicalmolesyndrome)、c细胞腺瘤病(ccelladenomatosis)及mea。后天性弥漫性增生(acquireddiffusehyperplasias)及弥漫性化生(diffusemetaplasias)的非限制性实例包括骨柏哲德氏病(paget’sdiseaseofbone)及溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis)。[0197]根据具体实施例，所述癌症是选自由以下所组成的群组：结肠直肠癌、胰腺癌、b细胞淋巴瘤、神经胶质瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、肾癌、鼻咽癌、膀胱癌、子宫癌、卵巢癌、乳腺癌及摄护腺癌。[0198]根据具体实施例，所述癌症是结肠直肠癌或胰腺癌。[0199]本发明的一些实施例的抗体可被施用于一生物体本身，或在药物组合物中与合适的载体或赋形剂混合。[0200]如本文中所使用，“药物组合物”是指本文中所述的一或多种活性成分与其他的化学成分，例如生理上合适的载体及赋形剂的制剂。药物组合物的目的是协助将一化合物施用于一生物体。[0201]本文中的术语“活性成分”是指产生生物学效应的抗cd24抗体。[0202]在下文中，可以互换使用的短语“生理学上可接受的载体”及“药学上可接受的载体”是指不会对生物体造成显着刺激，且不会消除所施用化合物的生物活性及性质的载体或稀释剂。此等短语下包括一佐剂。[0203]本文中的术语“赋形剂”是指一惰性物质，所述惰性物质被添加至一药物组合物中，以进一步协助一活性成分给药的。赋形剂的实例但不限于包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖及淀粉的类型、纤维素衍生物、明胶、植物油及聚乙二醇。[0204]可在“雷明顿制药科学”，麦克出版公司，伊斯顿，pa，最新版中找到用于药物配制及给药的技术，其通过引用并入本文中。[0205]例如，合适的给药途径可包括口服、直肠、经粘膜，尤其是经鼻、肠或肠胃外给药，包括肌肉内、皮下及髓内注射，以及鞘内、直接心室内、心脏内，例如进入右心室腔或左心室腔，进入冠状动脉、静脉内、腹腔内、鼻内或眼内注射。[0206]将药物输送至中枢神经系统(centralnervoussystem，cns)的常规方法包括：神经外科策略(例如，脑内注射或脑室内输注)；试剂的分子操作(例如，产生嵌合融合蛋白，所述嵌合融合蛋白包括针对一内皮细胞表面分子具有亲和力的转运肽与本身不能穿过bbb的试剂的组合)，以尝试利用bbb的内源性运输途径中的一者；旨在增加药剂的脂溶性的药理学策略(例如，将水溶性药剂与脂质或胆固醇载体结合)；以及通过高渗破坏(由甘露醇溶液注入颈动脉或使用诸如血管紧张素肽的生物活性剂所引起)对bbb完整性的暂时破坏。然而，此等策略中的各个策略皆具有局限性，例如与侵入性外科手术相关的固有风险、通过在内源性转运系统中固有的限制所施加的尺寸限制、与系统性施用的由载体基序所组成的嵌合分子相关的潜在不良的生物学副作用，所述载体基序可为在中枢神经系统之外活跃的载体基序，以及在bbb被破坏的大脑区域内可能存在脑损伤的风险，这使其成为一种次优的递送方法。[0207]或者，可以局部而非全身性方式施用药物组合物，例如，经由将药物组合物直接注射至患者的组织区域中。[0208]术语“组织”是指一有机体的一部分，所述有机体的一部分是由设计用于执行一项功能或多项功能的细胞所组成。实例包括，但不限于脑组织、视网膜、皮肤组织、肝组织、胰腺组织、骨、软骨、结缔组织、血液组织、肌肉组织、心脏组织、脑组织、血管组织、肾组织、肺组织、性腺组织、造血组织。[0209]本发明的一些实施例的药物组合物可通过本领域公知的方法制造，例如，通过常规的混合、溶解、制粒、糖衣锭制造、研磨、乳化、包封、包埋或冻干的方法。[0210]根据本发明的一些实施例所使用的药物组合物因此可使用一或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制，所述生理学上可接受的载体包括赋形剂及助剂，其有助于将活性成分加工成可药用的制剂。适当的制剂取决于所选择的给药途径。[0211]对于注射剂，药物组合物的活性成分可被配制在水溶液中，优选地在生理相容的缓冲液中，例如汉克溶液(hank’ssolution)、林格溶液(ringer’ssolution)或生理盐缓冲液。对于经粘膜给药，在制剂中使用适合待渗透的屏障的渗透剂。此种渗透剂在本领域中通常是已知的。[0212]对于口服给药，可通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体组合，以容易地配制药物组合物。此种载体使药物组合物能够被配制成片剂、丸剂、糖衣锭、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，以供一患者口服摄取。可使用固体赋形剂制备口服药用制剂，任选地研磨所得的混合物，及倘若需要，在添加合适的助剂之后，加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣锭芯。合适的赋形剂尤其是填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶(gumtragacanth)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、碳甲基纤维素钠；及/或生理上可接受的聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone，pvp)。倘若需要，可添加崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮(cross-linkedpolyvinylpyrrolidone)、琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。[0213]糖衣锭芯配有合适的涂层。为此目的，可使用浓缩的糖溶液，其可任选地含有阿拉伯胶(gumarabic)、滑石、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、卡波姆凝胶(carbopolgel)、聚乙二醇、二氧化钛、纤维漆溶液(lacquersolution)及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可被添加至片剂或糖衣锭包衣中，以用于识别或表征活性化合物剂量的不同组合。[0214]可以口服进行服用的药物组合物包括由明胶所制成的推入式胶囊(push-fitcapsule)以及由明胶及增塑剂所制成的软密封胶囊，所述增塑剂例如甘油或山梨糖醇。所述推入式胶囊可包含活性成分，所述活性成分与诸如乳糖的填充剂、诸如淀粉的粘合剂、诸如滑石或硬脂酸镁的润滑剂，以及任选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性成分可被溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡，或液体聚乙二醇。此外，可添加稳定剂。用于口服给药的所有制剂的剂量应适合所选择的给药途径。[0215]对于口腔给药，组合物可采用以常规的方式所配制的片剂或锭剂的形式。[0216]对于通过鼻吸入给药，根据本发明的一些实施例使用的活性成分方便地以气溶胶喷雾剂的形式从加压包装或喷雾器中递送，并使用一合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷(dichlorodifluoromethane)、三氯氟甲烷(trichlorofluoromethane)、二氯四氟乙烷(dichloro-tetrafluoroethane)或二氧化碳。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀门以输送计量的量来确定。可配制用于分配器的例如明胶的胶囊及药筒，其包含化合物及合适的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。[0217]本文所述的药物组合物可被配制用于肠胃外给药，例如，通过推注(bolusinjection)或连续输注。注射用制剂可以单位剂型存在，例如，在安瓿或多剂量容器中，任选地添加防腐剂。所述组合物可为在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，且可包含配方剂，例如悬浮剂、稳定剂及/或分散剂。[0218]用于肠胃外给药的药物组合物包括水溶性形式的活性制剂的水溶液。此外，活性成分的悬浮液可被制备成合适的油性或水基注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括诸如芝麻油的脂肪油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯(ethyloleate)、甘油三酸酯或脂质体。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液的粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠(sodiumcarboxymethylcellulose)、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，所述悬浮液亦可包含合适的稳定剂或增加活性成分的溶解度的试剂，以允许制备高度浓缩的溶液。[0219]或者，所述活性成分可为粉末形式，用于在使用前与一合适的载体进行组合，所述合适的载体例如无菌、无热原水基溶液(pyrogen-freewaterbasedsolution)。[0220]本发明的一些实施例的药物组合物亦可使用例如常规的栓剂基质而配制在直肠组合物例如栓剂或保留灌肠剂中。所述栓剂基质例如可可脂或其他的甘油酯[0221]适用于本发明的一些实施例的上下文中的药物组合物包括的组合物，其中包含以有效实现预期目的的量的活性成分。更具体地，一治疗有效量是指一活性成分的量，所述活性成分的量有效的预防、减轻或改善疾病(例如癌症)的症状或延长待被治疗的受试者的存活率。[0222]一治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本文中所提供的详细公开的内容。[0223]对于本发明的方法中所使用的任何制剂、治疗有效量或剂量可以最初从体外及细胞培养分析中进行估计。例如，可在动物模型中配制剂量，以达到所需的浓度或效价。此种信息可用于更准确地确定人体的有用剂量。[0224]本文所述的活性成分的毒性及治疗功效可通过体外、细胞培养物或实验动物中的标准药学步骤进行确定。从此等体外及细胞培养分析以及动物研究中所获得的数据可用于制定用于人类的一系列的剂量。所述剂量可根据所使用的剂型及所使用的给药途径而变化。个别的医生可根据患者的状况选择确切的配方、给药途径及剂量。(参见例如，芬格尔等人，1975，“治疗学的药理学基础”，第1章，p.1)。[0225]可单独地调整剂量及间隔，以提供足以诱导或抑制生物效应的活性成分的水平(最小有效浓度，minimaleffectiveconcentration，mec)。各个制剂的最小有效浓度(mec)有所不同，但可从体外数据进行估算。达到最小有效浓度(mec)所需的剂量将取决于个体特征及给药途径。检测分析可用于确定血浆浓度。[0226]取决于待治疗病症的严重性及反应性，给药可为单次给药或多次给药，治疗过程持续数天至数周，或直至实现治愈或实现疾病状态的减轻为止。[0227]当然，待施用的组合物的量将取决于被治疗的受试者、疾病的严重程度、施用的方式、开药医生的判断等。[0228]倘若需要，本发明的一些实施例的组合物可存在于包装或分配装置中，例如fda批准的试剂盒，所述试剂盒可包含一或多种含有活性成分的单位剂型。例如，所述包装可包括金属或塑料箔，例如泡罩包装。所述包装或分配装置可附有给药说明。所述包装或分配器亦可通过与容器相关联的通知，以由规范药品的制造、使用或销售的政府机构所规定的形式来提供，所述通知反映经由所述机构对组合物或人类或兽医给药的形式的批准。例如，此种通知可能是美国食品及药物管理局所批准的处方药标签或一批准的产品插页。如上文进一步所详述，亦可制备包含配制在一相容的药物载体中的本发明制剂的组合物，将其置放在一合适的容器中，并标记用于治疗指定病症。[0229]根据具体实施例，抗体可与其他已建立或实验性治疗方案组合施用于一受试者，以治疗与表达cd24的细胞相关的疾病(例如癌症)，包括但不限于镇痛剂、化疗剂、放疗剂、光疗及光动力疗法、细胞毒性疗法(调节)、激素疗法、免疫疗法、细胞疗法及本领域众所周知的其他治疗方案(例如，手术)。[0230]根据具体实施例，所述疗法选自由免疫疗法、化学疗法及放射疗法所组成的群组。[0231]因此，根据具体实施例，所述方法亦包括向所述受试者施予治疗所述疾病的疗法。[0232]根据本发明的一方面，提供一种制品，所述制品包括一包装材料，所述包装材料包装本文中所公开的抗体；以及提供一种疗法，所述疗法用于治疗与表达cd24的细胞相关的疾病。[0233]根据具体实施例，所述制品被确定用于治疗与表达cd24的细胞相关的疾病(例如癌症)。[0234]根据具体实施例，所述抗体及所述疗法被包装在单独的容器中。[0235]根据具体实施例，所述抗体及所述疗法被包装在一共同制剂中。[0236]可与本发明的具体实施例一起使用的抗癌剂的非限制性实例包括，但不限于，抗癌药阿西维辛(acivicin)；阿柔比星(aclarubicin)；盐酸阿考达唑(acodazolehydrochloride)；克罗宁(acronine)；阿霉素(adriamycin)；阿多唑啉(adozelesin)；阿德白介素(aldesleukin)；阿曲他明(altretamine)；安布霉素(ambomycin)；醋酸阿米坦酮(ametantroneacetate)；氨基谷氨酰胺(aminoglutethimide)；安吖啶(amsacrine)；阿那曲唑(anastrozole)；蒽霉素(anthramycin)；天冬酰胺酶(asparaginase)；阿斯珀林(asperlin)；阿扎胞苷(azacitidine)；阿泽替帕(azetepa)；阿唑霉素(azotomycin)；巴马司他(batimastat)；苯并德巴(benzodepa)；比卡鲁胺(bicalutamide)；盐酸比生群(bisantrenehydrochloride)；双萘芬二甲磺酸盐(bisnafidedimesylate)；比泽列辛(bizelesin)；硫酸博来霉素(bleomycinsulfate)；布雷奎那钠(brequinarsodium)；溴匹明(bropirimine)；白消安(busulfan)；放线菌素(cactinomycin)；月桂酮(calusterone)；卡拉酰胺(caracemide)；卡贝默(carbetimer)；卡铂(carboplatin)；卡莫司汀(carmustine)；盐酸卡比星(carubicinhydrochloride)；卡泽莱辛(carzelesin)；头孢呋辛(cedefingol)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；环霉素(cirolemycin)；顺铂(cisplatin)；克拉屈滨(cladribine)；角鲨烷醇甲磺酸盐(crisnatolmesylate)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；阿糖胞苷(cytarabine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；放线菌素(dactinomycin)；盐酸柔红霉素(daunorubicinhydrochloride)；地西他滨(decitabine)；右奥马铂(dexormaplatin)；地扎鸟嘌呤(dezaguanine)；地扎鸟嘌呤甲磺酸盐(dezaguaninemesylate)；二嗪酮(diaziquone)；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；盐酸多柔比星(doxorubicinhydrochloride)；屈洛昔芬(droloxifene)；屈洛昔芬柠檬酸盐(droloxifenecitrate)；丙酸屈莫司他酮(dromostanolonepropionate)；度唑霉素(duazomycin)；依达曲沙(edatrexate)；盐酸依氟鸟氨酸(eflornithinehydrochloride)；依沙芦星(elsamitrucin)；恩洛铂(enloplatin)；恩普氨酯(enpromate)；依匹哌啶(epipropidine)；盐酸表柔比星(epirubicinhydrochloride)；厄布洛唑(erbulozole)；盐酸埃索比星(esorubicinhydrochloride)；雌莫司汀(estramustine)；雌莫司汀磷酸钠(estramustinephosphatesodium)；依他硝唑(etanidazole)；依托泊苷(etoposide)；磷酸依托泊苷(etoposidephosphate)；依托托林(etoprine)；盐酸法曲唑(fadrozolehydrochloride)；法扎拉滨(fazarabine)；芬维a胺(fenretinide)；氟尿苷(floxuridine)；磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；氟西他滨(flurocitabine)；磷喹酮(fosquidone)；磷霉素钠(fostriecinsodium)；吉西他滨(gemcitabine)；盐酸吉西他滨(gemcitabinehydrochloride)；羟基脲(hydroxyurea)；盐酸伊达比星(idarubicinhydrochloride)；异环磷酰胺(ifosfamide)；伊莫磷辛(ilmofosine)；干扰素α-2a(interferonalfa-2a)；干扰素alfa-2b(interferonalfa-2b)；干扰素α-n1(interferonalfa-n1)；干扰素α-n3(interferonalfa-n3)；干扰素β-ia(interferonbeta-ia)；干扰素γ-ib(interferongamma-ib)；异丙铂(iproplatin)；盐酸伊立替康(irinotecanhydrochloride)；兰瑞肽醋酸盐(lanreotideacetate)；来曲唑(letrozole)；醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)；盐酸利阿唑(liarozolehydrochloride)；洛美曲索钠(lometrexolsodium)；洛莫司汀(lomustine)；盐酸氯索蒽醌(losoxantronehydrochloride)；马索普罗考(masoprocol)；美登素(maytansine)；盐酸甲氯乙胺(mechlorethaminehydrochloride)；醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)；醋酸美仑孕酮(melengestrolacetate)；马法兰(melphalan)；梅诺加里尔(menogaril)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；甲氨蝶呤钠(methotrexatesodium)；氯苯氨啶(metoprine)；美妥替哌(meturedepa)；米替度胺(mitindomide)；米托卡星(mitocarcin)；米托罗米(mitocromin)；米托洁林(mitogillin)；米托马星(mitomalcin)；丝裂霉素(mitomycin)；米托司培(mitosper)；米托坦(mitotane)；盐酸米托蒽醌(mitoxantronehydrochloride)；霉酚酸(mycophenolicacid)；诺考达唑(nocodazole)；诺加霉素(nogalamycin)；奥玛铂(ormaplatin)；奥昔兰(oxisuran)；紫杉醇(paclitaxel)；培门冬酶(pegaspargase)；佩利霉素(peliomycin)；喷他莫司汀(pentamustine)；硫酸哌洛霉素(peplomycinsulfate)；培磷酰胺(perfosfamide)；匹泊布罗曼(pipobroman)；哌泊舒凡(piposulfan)；盐酸吡罗蒽醌(piroxantronehydrochloride)；普利霉素(plicamycin)；普洛美坦(plomestane)；卟菲尔钠(porfimersodium)；波非霉素(porfiromycin)；泼尼莫司汀(prednimustine)；盐酸丙卡巴肼(procarbazinehydrochloride)；嘌呤霉素(puromycin)；盐酸嘌呤霉素(puromycinhydrochloride)；吡唑啉(pyrazofurin)；利波腺苷(riboprine)；罗格莱胺(rogletimide)；沙芬醇(safingol)；沙芬酚盐酸盐(safingolhydrochloride)；西莫司汀(semustine)；辛曲嗪(simtrazene)；司帕膦酸钠(sparfosatesodium)；司帕霉素(sparsomycin)；螺锗盐酸(spirogermaniumhydrochloride)；螺莫司汀(spiromustine)；螺铂(spiroplatin)；链黑菌素(streptonigrin)；链脲佐菌素(streptozocin)；磺氯苯脲(sulofenur)；泰利霉素(talisomycin)；紫杉醇(taxol)；特可加兰钠(tecogalansodium)；替加氟(tegafur)；盐酸泰洛蒽醌(teloxantronehydrochloride)；替莫泊芬(temoporfin)；替尼泊苷(teniposide)；特罗昔隆(teroxirone)；睾酮内脂(testolactone)；硝咪硫鸟嘌呤(thiamiprine)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；噻替帕(thiotepa)；噻唑呋喃(tiazofuirin)；替拉扎明(tirapazamine)；盐酸托泊替康(topotecanhydrochloride)；柠檬酸托瑞米芬(toremifenecitrate)；醋酸曲霉酮(trestoloneacetate)；磷酸三西立宾(triciribinephosphate)；曲美沙(trimetrexate)；曲美沙葡糖醛酸(trimetrexateglucuronate)；曲普瑞林(triptorelin)；盐酸妥布唑(tubulozolehydrochloride)；尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；乌瑞德帕(uredepa)；伐普肽(vapreotide)；维替泊芬(verteporfin)；长春碱硫酸盐(vinblastinesulfate)；长春新碱硫酸盐(vincristinesulfate)；文克斯汀(vindesine)；硫酸长春地辛(vindesinesulfate)；硫酸长春吡啶(vinepidinesulfate)；甘氨酸硫酸盐(vinglycinatesulfate)；硫酸长春新碱(vinleurosinesulfate)；酒石酸长春瑞滨(vinorelbinetartrate)；长春花碱硫酸盐(vinrosidinesulfate)；硫酸文唑烷(vinzolidinesulfate)；伏罗唑(vorozole)；泽尼铂(zeniplatin)；迭氮胸腺(zinostatin)；盐酸佐鲁比星(zorubicinhydrochloride)。额外的抗肿瘤剂包括在第52章，抗肿瘤剂(保罗卡拉布雷西及布鲁斯a.查布纳)，以及古德曼及吉尔曼的“治疗学的药理学基础”，第八版，1990，麦格劳-希尔公司(卫生专业部)中所公开的彼等。[0237]根据具体实施例，抗癌剂包含抗体。[0238]此类抗体的非限制性实例包括利妥昔单抗(rituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、依度可洛单抗(edrecolomab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、伊布单抗(ibritumomab)、帕尼单抗(panitumumab)、贝利木单抗(belimumab)、贝利木单抗(belimumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、博纳吐单抗(blinatumomab)、布洛妥韦单抗(blontuvetmab)、布伦妥昔单抗维多丁(brentuximabvedotin)、卡妥昔单抗(catumaxomab)、西妥尤单抗(cixutumumab)、达珠单抗(daclizumab)、阿达木单抗(adalimumab)、贝洛妥昔单抗(bezlotoxumab)、西妥珠单抗博加妥(citatuzumabbogatox)、达雷妥尤单抗(daratumumab)、地妥昔单抗(dinutuximab)、埃洛珠单抗(elotuzumab)、厄妥昔单抗(ertumaxomab)、依他珠单抗(etaracizumab)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)、吉伦妥昔单抗(girentuximab)、耐妥尤单抗(necitumumab)、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、西妥昔单抗(siltuximab)、托西莫单抗(tositumomab)、纳武利尤单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、杜瓦鲁单抗(durvalumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)及伊匹单抗(ipilimumab)。[0239]如本文中所使用，术语“约”是指±10％[0240]术语“包括(comprises)”、“包括(comprises)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“具有”及其共轭词意指“包括但不限于”。[0241]术语“由…所组成”是指“包括并限于”。[0242]术语“基本上由…所组成”是指组合物、方法或结构可包括额外的成分、步骤及/或部分，但前提是额外的成分、步骤及/或部分不会实质性地改变请求保护的基本及新颖的特征组合物、方法或结构。[0243]除非上下文另有明确规定，如本文中所使用，单数形式“一(a)”、“一(an)”及“所述”包括复数引用。例如，术语“一化合物”或“至少一化合物”可包括多个化合物，包括其混合物。[0244]在整个本技术中，本发明的各种实施例可以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅是为了方便及简洁，不应理解作为对本发明范围的不灵活限制。因此，范围的描述应该被认为已经具体公开所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，对诸如1至6的范围的描述应该被认为具有具体公开的子范围，例如自1至3、自1至4、自1至5、自2至4、自2至6、自3至6等，以及所述范围内的单个数字，例如1、2、3、4、5及6。无论范围的宽度如何，其皆适用。[0245]无论何时在本文中指出数值范围，其意在包括在所指出的范围内的任何引用的数字(分数或整数)。短语“在”第一指示数字与第二指示数字“之间的范围(ranging)/范围(ranges)”及“范围(ranging)/范围(ranges)从”第一指示数字“至”第二指示数字在本文中可互换使用，且意在包括第一指示数字及第二指示数字，以及其之间的所有小数及整数。[0246]如本文中所使用，术语“方法”是指用于完成一给定工作的方式、手段、技术及步骤，包括但不限于通过化学、药理学、生物、生物化学及医学领域的从业人员已知或容易地从已知的方式、手段、技术及步骤所发展的彼等方式、手段、技术及步骤。[0247]如本文中所使用，术语“治疗”包括消除、实质上抑制、减缓或逆转病状的进展，实质上改善病症(病理学，例如癌症)的临床或美学症状或实质上防止病症(病理学，例如癌症)的临床或美学症状的出现。本领域技术人员将理解可使用各种方法及分析来评估病理学的发展，且相似地，可使用各种方法及分析来评估病理学(例如癌症)的减少、缓解或消退。[0248]根据具体实施例，治疗可经由肿瘤的体积的减少、肿瘤细胞的数量的减少、转移的数量的减少、预期寿命的增加，或与癌症状况相关的各种生理症状的改善来评估。[0249]当提及特定的序列表时，此种资料应理解为亦包括基本上对应于其互补序列的序列，包括微小序列变异、碱基缺失或碱基添加，所述微小序列变异、碱基缺失或碱基添加由例如定序错误、克隆错误或导致碱基取代的其他改变所导致，条件是此类变异的频率小于50个核苷酸中的1个，或者，小于100个核苷酸中的1个，或者，小于200个核苷酸中的1个，或者，小于500个核苷酸中的1个，或者，小于1000个核苷酸中的1个，或者，小于5000个核苷酸中的1个，或者，小于10000个核苷酸中的1个。[0250]应当理解，为了清楚起见，在单独实施例的上下文中描述的本发明的某些特征亦可在单一实施例中组合地提供。相反地，为了简洁起见，在单一实施例的上下文中描述的本发明的各种特征亦可单独地提供或以任何合适的子组合或适合于本发明的任何其他描述的实施例来提供。在各个实施例的上下文中所描述的某些特征不应被认为是彼等实施例的基本特征，除非实施例在无彼等元件的情况下是无效的。[0251]如上文所描述及在以下权利要求部分中请求保护的本发明的各种实施例及方面在以下的实例中找到实验上的支持。[0252]实例[0253]现在参考以下的实例，其与以上描述一起以非限制性方式说明本发明的一些实施例。[0254]通常，本文中所使用的命名法及本发明所使用的实验室方法包括分子的、生化的、微生物的及重组的dna技术。此等技术在文献中得到详尽的解释。参见，例如，“分子克隆：实验室手册”桑布鲁克等人，(1989)；“分子生物学中的当前方法”第i至iii卷；奥苏贝尔，r.m.，编辑(1994)奥苏贝尔等人，“当前分子生物学方法”，约翰威利及宋斯，巴尔的摩，马里兰州(1989)；珀巴尔，“分子克隆的实用指南”，约翰威利及宋斯，纽约(1988)；沃森等人，“重组的dna”，scientificamericanbooks，纽约；比伦等人(编辑)“基因组分析：实验室手册系列”，第1至4卷，冷泉港实验室出版社，纽约(1998)；美国专利第4,666,828号；第4,683,202号；第4,801,531号；第5,192,659号及第5,272,057号中所揭示的方法。；“细胞生物学：实验室手册”，第i至iii卷，希莉丝，j.e.，编辑(1994)；“动物细胞的培养-基本技术手册”，法莱徐尼、威利-利斯，n.y.(1994)，第三版；“当前免疫学方法”第i至iii卷，科利根j.e.编辑(1994)；斯蒂茨等人(编辑)，“基础及临床免疫学”(第8版)，阿普尔顿&朗格，诺沃克，ct(1994)；米雪儿及志木(编辑)，“细胞免疫学中的选定方法”，w.h.弗里曼及公司，纽约(1980)；可用的免疫分析在专利及科学文献中被广泛地描述，参见，例如，美国专利第3,791,932号；第3,839,153号；第3,850,752号；第3,850,578号；第3,853,987号；第3,867,517号；第3,879,262号；第3,901,654号；第3,935,074号；第3,984,533号；第3,996,345号；第4,034,074号；第4,098,876号；第4,879,219号；第5,011,771号及第5,281,521号；“寡核苷酸合成”给特，m.j.，编辑(1984)；“核酸杂交”，哈姆斯，b.d.，及希金斯s.j.，编辑(1985)；“转录及转译”，哈姆斯，b.d.，及希金斯sj，编辑(1984)；“动物细胞培养”，法来斯尼，r.i.，编辑(1986)；“固定的细胞及酶”irl出版社，(1986)；“分子克隆实用指南”珀巴尔，b.，(1984)及“酶学的方法”第1至317卷，学术出版社；“pcr方法：方法及应用的指南”，学术出版社，圣地亚哥，ca(1990)；马沙克等人，“蛋白质纯化及表征的策略-实验室课程手册”cshl出版社(1996)；所有此等皆通过引用并入本文中，如同在本文中完全阐述一样。在本文中提供其他一般参考文献。相信其中的方法在本领域中是众所周知的，且是为了方便读者而提供的。其中包含的所有信息通过引用并入本文中。[0255]实例1[0256]基因工程人源化抗cd24单克隆的抗体[0257]本发明人已经构建人源化抗cd24鼠swa11mab的几种衍生物(下文表1)。随后，通过基因工程开发数种抗体，从大的(完整的igg)至小的(scfv及fab)，包括非武装(武装)及接合的衍生物(图1)。[0258]采用生物资讯的方法来选择应作为框架供体的最佳人类可变域。一般来说，人性化是基于使用具有最大相似性的人类序列。然而，亦考虑其他的标准，例如所选的人类序列支持鼠抗体互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)环的规范结构的能力。[0259]首先，使用igblast，将由抗cd24swa11杂交瘤细胞所制备的细胞的rna所合成的vh及vkrt-pcr产物的序列与小鼠免疫球蛋白种系基因序列的数据库进行比对。发现swa11vh是衍生自vh36-60a1.85种系基因(genbank登录号：aj851868)，而swa11vk是衍生自8至30种系基因(genbank登录号：aj235948)。[0260]接下来，为了选择应作为框架供体的合适的人类可变结构域，使用igbalst将vh36-60a1.85及8至30的氨基酸序列与包含在genbank数据库中的人类抗体序列的整个库独立地比对。与人类免疫球蛋白基因的比较显示swa11vh基因与推断的人类vhiv家族种系v基因28*02(genbank登录号：m83133)的氨基酸序列具有高度的同一性。swa11vh与igvh-28*02的比对如图2a所示。swa11vk基因与推断的人类igk4-1*01氨基酸序列(genbank：登录号af017732)显示出高度的序列同一性。swa11vk与推断的人类igk4氨基酸序列的比对如图2b所示。[0261]随后，在dna水平上引入在swa11与28*02及1*01之间所发现的替换。此外，为了克隆至表达载体中，合成添加适当限制性位点的vh及vk基因。[0262]表1：构建的人源化抗cd24的抗体衍生物的描述。[0263][0264][0265]在下一步中，进行设计的人源化抗cd24的抗体的大规模的生产，所述人源化抗cd24的抗体在本文中称为huns17，以评估其在体外及体内的稳定性及活性。[0266]稳定性药代动力学研究显示所述抗体是稳定的(下文的图3及表2)。具体而言，人源化抗体的t1/2为5.2天，平均停留时间为9.2天，tmax为60分钟。[0267]所产生的抗体特异性地结合cd24及抑制细胞增殖的能力通过数种生物分析及各种细胞株，特别是人类结肠直肠癌及胰腺癌细胞株进行测试。结果证明经纯化的人源化抗体是功能性的，且对cd24具有高度的结合强度及选择性。具体而言，使用biacore分析(魏茨曼科学研究所)分析抗cd24衍生物的结合强度(例如亲和力)(图4)。将鼠亲本抗体与嵌合抗体及人源化抗体形式进行比较。亦比较多个ab的不同克隆及批次。在此等评估中，cd24抗原被捕获在传感器芯片的表面上，且不同的抗体是分析物。结果表明在人源化抗体与鼠抗体之间的差异是由于kd常数造成的。人源化抗体的解离速度较鼠抗体的解离速度快。然而，通过在芯片上捕获抗体来重复分析，而cd24抗原是流动的分析物。在此种情况下，人源化ab的kd为1.7x10-7(而鼠为3.27x10-8，嵌合mab为1.5x10-7)。[0268]此外，抗cd24人源化mab通过抗体依赖性细胞毒性(antibody-dependentcellularcytotoxicity，adcc)诱导细胞死亡(图5)。[0269]此外，使用人源化抗体进行急性静脉内最大耐受剂量(maximumtolerateddose，mtd)研究，以发现最高耐受剂量而不引起明显毒性，并评估动物的人源化抗体的近似浓度范围(下文的表3及图6a至图6b)。并未记录死亡率，亦未观察到显着的临床症状，例如嗜睡、体温过低、血管舒张或血管收缩、神经肌肉效应。此外，在全血细胞计数或病理检查中亦未发现差异。[0270]随后，在胰腺癌及前列腺癌的异种移植模型中评估体内抗cd24abs的治疗效果及功效。如图7所示，结果表明人源化抗体抑制肿瘤的发展及生长。[0271]总之，在人源化过程中的基因操作不会损害抗体的功能特性。[0272]表2：药代动力学(pk)研究结果[0273][0274]表3：急性静脉最大耐受剂量(mtd)评估的研究设计。[0275][0276][0277]实例2[0278]人源化抗cd24的单克隆抗体的体外噬菌体显示亲和力成熟[0279]为了了解重链及轻链中的何者对抗cd24的抗体的结合袋(bindingpocket)的贡献更大，使用噬菌体表现技术。为此，如下文所述，构建三个编码抗cd24及/或抗cd30的fab片段的质粒。第一个构建体包含人源化抗cd24人源化抗体的重链及轻链；第二个构建体包含抗cd30抗体的重链及人源化抗cd24抗体的轻链；第三个含有人源化抗cd24ab的重链及抗cd30ab的轻链(图8)。[0280]pcomb3x-h(cd24)l(cd24)质粒的构建：使用引子humswa11-fd-ncoi-for及humswa11-fd-stop-bspei-for(参见下文的表4)，从pcdna4-pcmv-teto2-igl-pcmv-teto2-igh(见上文的表1)扩增人源化vh结构域，且作为ncoi/bspei片段引入pcomb3x载体中，所得的载体命名为pcomb3x-h(cd24)。使用引子humswa11-l-sfii-for及humswa11-l-stop-xbai-rev(参见表4)，从pcdna4-pcmv-teto2-igl-pcmv-teto2-igh(见上文的表1)扩增人源化vl结构域下文)，且作为sfii/xbai片段引入pcomb3x-h(cd24)中间载体中，所得的载体命名为pcomb3x-h(cd24)l(cd24)(seqidno：15)。[0281]pcomb3x-h(cd30)l(cd24)质粒的构建：pcomb3x-h(cd30)l(cd24)质粒是通过ncoi及bspei分解pcomb3x-h(cd24)l(cd24)及pcomb3x-h(cd30)l(cd30)(海姆等人，mab，2009；莉拉等人，抗体，2018)的质粒，并将第二个切割产物克隆至第一个中；所得的载体命名为pcomb3x-h(cd30)l(cd24)(seqidno：16)。[0282]pcomb3x-h(cd24)l(cd30)质粒的构建：pcomb3x-h(cd24)l(cd30)质粒是通过sfii及xbai分解pcomb3x-h(cd24)l(cd24)及pcomb3x-h(cd30)l(cd30)的质粒，并将第二个切割产物克隆至第一个中；所得的载体命名为pcomb3x-h(cd24)l(cd30)(seqidno：17)。[0283]表4：引子的列表[0284][0285]随后，通过将各个fab与m13噬菌体的piii蛋白进行融合，将各个fab片段表现在噬菌体的表面上，各个融合蛋白显示为一单一拷贝。丝状噬菌体通过性线毛感染f 大肠杆菌(e.coli)。所述步骤是依照本哈尔等人(当前的免疫学规程，2002)中的描述进行。简而言之，在ytag培养基(补充有1％葡萄糖及100μg/ml氨苄青霉素的2yt培养基)中制备大肠杆菌(e.coli)tg-1细胞的指数培养物。通过向培养物中加入109个pfu的辅助噬菌体(m13ko7)来感染细胞，以拯救噬菌粒。第二天，将噬菌粒进行浓缩，并通过利用peg/nacl沉淀以除去任何可溶性抗体。随后，回收获救的噬菌体，并通过活计数以确定噬菌体的效价，及通过od检测进行确认。通过基于抗原的elisa(噬菌体elisa)检验三种fab衍生物与cd24的结合(图9)。[0286]如所预期，使用包含两个抗cd24链的pcomb3x-h(cd24)l(cd24)得到最高信号。然而，比较使用pcomb3x-h(cd30)l(cd24)及pcomb3x-h(cd24)l(cd30)所获得的信号表明抗cd24ab的重链对结合袋的贡献更大。此结果表明通过轻链的突变提高抗cd24结合强度的机会更高。[0287]因此，在下一步中，对人源化抗cd24轻链进行亲和力成熟步骤。[0288]为此，使用igblast进行序列分析，以发现轻链互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)多样性。进行生物资讯分析，并将所产生的abs与其他的100个成熟的mabs进行比较，以发现互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)环中发生变化的特定残基，即互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)多样性。对100个同源物进行搜寻。由于资料库的尺寸有限，仅在一或两个同源物中改变的氨基酸位点被忽略。设计三个库，各个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)中的一个(图10)。因此，计算各个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)的多样性(下文的表5)。[0289]表5：各个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)的多样性[0290][0291][0292]将设计的资料库送至(lifetechnologies)进行合成。值得注意的是，在第一个库中，cdr1及cdr2一起被修饰，而cdr3保持不变，而在第二个库中，仅cdr3被改变。利用sfii及bsiwi(neb，newenglandbiolabs)分解经扩增的资料库，并连接至pcomb3x-h(cd24)l(cd24)载体中。将连接反应转殖至大肠杆菌(e.coli)菌株tg1中，并通过稀释系列以检测转殖率。根据制造商(neb)的说明，使用带有t4dna连接酶的连接步骤进行连接。对于转殖，将100μl的胜任细胞悬液与50-100ngdna(连接的或质粒)进行混合，置于冷冻的13ml的聚丙烯管中，并在冰上培养30分钟。将细胞-质粒混合物在42℃的水浴中进行热休克1分钟，之后放回冰上2分钟。随后，在冰上进行热休克及冷却，将900μl的soc或lb培养基添加至含有胜任细胞及dna的试管中，并在37℃下以250rpm的转速培养60分钟。将大肠杆菌(e.coli)细胞接种至添加适当抗生素的lb琼脂平板上，并在37℃下培养过夜，以形成转殖细胞的菌落。[0293]转殖体的总数为1.45x107cfu。收获来自转殖盘的总细胞用于质粒的制备。[0294]亲和力成熟以两个步骤进行：互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)步行(两步骤选择)及噬菌体表现技术(在antibodyengineering，第38章，第540至545页，2001中描述)。[0295]对各个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)资料库进行了盘洗循环，发现良好的潜在结合物。[0296]接下来，组合各个资料库的输出，以建立最终的组合资料库，如下所示：[0297](1)各个dna资料库利用psti及noti(neb)进行分解，且随后进行连接。[0298](2)连接产物通过乙醇沉淀进行纯化，所得的载体通过电穿孔引入xl-1电胜任细胞(自制胜任细胞)中。[0299]此产生约106个单独的克隆，此等克隆准备好利用辅助噬菌体(m13ko7)进行拯救，以建立用于亲和力选择的最终噬菌体抗体的资料库。[0300]随后，使用严格的压力选择条件(下文的表6)进行4个盘洗循环：[0301]表6：压力选择条件[0302][0303]在第三次及第四次盘洗循环之后，进行噬菌体elisa，以评估抗原结合及特异性的潜在结合物。简而言之，在无菌96孔盘(主盘)中挑选单个菌落，并在37℃下生长过夜。之后，将各个孔中的10μl转移至第二个96孔盘(救援盘)中，并使用elisa评估拯救的噬菌体的cd24的结合(图11)。由于亲和性选择通常导致非特异性噬菌体与特定噬菌体一起被分离，因此平行测试与无关的抗原(bsa)的结合。母盘用作通过噬菌体elisa所鉴定的阳性单克隆的克隆的来源，用于进一步操作。[0304]选择的阳性克隆通过噬菌体elisa及可溶性fabelisa再次验证。[0305]来自选定的已验证的克隆的dna被分离，且被送至进行定序，以确定新的抗cd24的抗体成熟衍生物的dna序列。[0306]在下一步中，本发明人构建用于诱导型表达及分泌系统的抗cd24人源化成熟mab表达载体(图12a至图12b)。为此，从pmaz-igh(huswa11)(seqidno：11)(上文的表1)扩增人源化igh(vh及ch1至ch3区)，并作为pmli/bsiwi片段引入pcdna4/to载体中。所得的中间载体被命名为pcdna4-hu-igh。从pmaz-igl(huswa11)(seqidno：12)(上文的表1)中扩增人源化igl(区域；vk及ck)，并将其引入利用aflii及acc65i酶(neb)所分解的作为aflii/bsrgi片段的pcdna4-hu-igh中间载体中。所得到的载体命名为pcdna4-tor-cmv-igl-sv40-igh。接下来，为了利用pcmv-teto2替换sv40启动子，从pcdna4-tor-cmv-igl-sv40-igh扩增pcmv-teto2。将扩增产物引入与draiii/pmli片段相同的载体中。所得到的载体命名为pcdna4-pcmv-teto2-igl-pcmv-teto2-igh(seqidno：28)。将经过成熟步骤的可变区序列送至优化过程(idt)，以在哺乳动物细胞中表达。被认为最佳密码子有助于实现更快的转译速率及高准确度。由于此等因素，预计转译选择在高度表达的基因中更强。所得到的合成片段利用ecorv blpi(neb)分解，并连接至利用相同酶切割的pcdna4-pcmv-teto2-igl-pcmv-teto2-igh质粒中。通过在特拉维夫大学的定序单元中进行定序，以验证所得到的质粒的序列。[0307]随后，评估所述的新系统表达及分泌成熟抗cd24衍生物的能力以及所得的mab识别及特异性地结合cd24抗原的能力。为此，通过蛋白质a琼脂糖(amershambiosciences)色谱法纯化含有上清液的抗体。简而言之，将培养上清液利用20倍加载缓冲液以1：20进行稀释，并以0.5ml/min的流速加载至蛋白质a柱上。用加载缓冲液彻底清洗柱子。结合的抗体利用0.1m柠檬酸(ph3.0)进行洗脱，并利用1mtris/hcl(ph9.0)进行中和。合并含有蛋白质的级分，利用2lpbs进行透析(4℃下，16小时)，进行无菌过滤，并储存在-20℃中。[0308]图13a至图13c显示通过基于抗原的elisa、全细胞elisa及facs分析所筛选出的具有代表性的潜在的候选者。对不同类型的肿瘤细胞进行细胞生长比较生长抑制分析(cellgrowthcomparativegrowthinhibitionanalysis)，其中包括表达cd24的三阴性乳腺癌、结肠直肠癌、膀胱、胰腺及神经母细胞瘤细胞株。图14显示具有代表性的结果。[0309]随后，使用磷酸钙方法，将293t-rex细胞与哺乳动物pcdna4-teto2-cmv-igl-teto2-cmv-igh及pegfp表达载体进行共转染。简而言之，将106个细胞接种至6孔盘中，转染48小时后，在生长培养基中含有1.2mg/mlg418的10cm盘中进行有限的稀释。通过荧光显微镜鉴定及检测表达gfp的稳定转染细胞，并进一步分析人源化ab的表达及分泌。检测在含有选择标记的培养基上生长的克隆的上清液的igg分泌：首先，通过荧光显微镜，根据绿色荧光强度来筛选稳定的克隆。选择表达最高水平的gfp蛋白的克隆，以用于进一步评估其分泌此等抗体的能力以及abs识别及特异性地结合cd24抗原的能力。[0310]对于各种成熟的抗体，选择最佳的克隆，以用于表达及分泌。总共选择八种潜在的成熟抗体。所有此等皆在293t-rex细胞中进行大规模的生产，并通过蛋白质a柱进行纯化。从各个克隆中的经纯化的ab的特征在于其特异性识别及结合cd24抗原的能力、结合强度、稳定性及其诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，adcc)及补体依赖性细胞毒性(complementdependentcytotoxicity，cdc)的能力以及药代动力学特性(下文图15a至图15d及表7)。[0311]此外，基于在第一次成熟过程中所分离的结合物的序列设计一额外的资料库，以便寻找额外的及可能的更好的结合物。为此目的，将亲本人源化抗体的序列与八种成熟的衍生物进行排列。随后，使用multalin软件进行多序列比对，以寻找定义为“热点”的位置(数据未显示)。接下来，设计包含此等基因座中的所有变化，但导致结合能力丧失的丢弃变化的一附加的资料库(图16a)。[0312]考虑到此等因素，设计由cdr1及cdr2突变所组成的一资料库。所述资料库的尺寸为4096，如图16b所示。简而言之，在使用引子对3 2及1 4(上文的表4)的两个pcr反应中，使用噬菌粒pcomb-humanizedab的dna作为模板，以改变vlcdr1序列。在使用引子1 2(上文的表4)的第二个pcr反应中。将pcr产物进行组合及组装。所述组装的片段用作一模板，所述模板使用引子对1 6(上文的表4)进行后续的pcr反应，并将噬菌粒pcomb-humanizedab的dna用作一模板，所述模板在pcr反应中使用取代vlcdr2序列的引子对2 5(上文的表4)。以同样的方式，使用引子1 2通过pcr以将pcr产物进行组合及组装(上文的表4)。[0313]所得到的资料库利用sfii bsiwi限制酶进行分解，并连接至利用相同酶切割的pcomb-humanizedab质粒中。之后通过乙醇沉淀进行纯化所述连接产物，并转殖至xl-1电胜任细胞中。[0314]随后，评估所得到的资料库的潜在结合物。挑选来自连接盘的单个菌落，并用于elisa。结果显示新资料库并不包含更好的结合物(数据未显示)。[0315]基于上文所呈现的结果，由于其结合亲和力、选择性及稳定性，选择在本文中称为ns17的单一纯化的人源化成熟抗cd24的抗体，以用于进一步分析。ns17抗体的vh及vl序列如图17所示。[0316]表7：相较于huns17，成熟的抗体ns17的药代动力学(pharmacokinetic，pk)研究的结果[0317][0318]*药代动力学(pharmacokineticpk)研究在scid小鼠中进行如下；scid雌性接受单次静脉注射5mg/kgns17(n＝12)。在以下时间点的pk终末时间点的情况下，从眶周窦采集血样：15及30分钟；60、75及90分钟、8及24小时；3、7、10、14、18、21、28天，并移至血清分离管中。各组的三只小鼠在各个时间点进行眶周采血，每只小鼠采集150μl的血液。通过elisa进行收集的血清中的mab的存在的评估及检测。[0319]实例3[0320]亲和力成熟的人源化抗cd24单克隆的抗体的抗肿瘤活性[0321]使用fda批准的正常的人体器官组织微阵列来表征在健康人体组织中的cd24的表达模式。根据fda指南纳入32种健康的人体器官，其中各个器官取自3位健康的人体。使用抗cd24抗体(接近swa11)检测在此等组织中的cd24的表达。如图18所示，绝大部分的健康组织并不表达cd24。然而，在发育中的大脑(posa2)及食道组织的特定层中检测到cd24的表达。[0322]相反的，包括胃肠道腺癌、膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌、rcc、胶质母细胞瘤、hcc、nsclc、卵巢癌、黑色素瘤在内的各种人类癌组织的数个肿瘤微阵列表明cd24在大部分的人类恶性肿瘤中高度地表达(图19)。[0323]swa11mab的结合表位及亲和力成熟的人源化ns17mab是非常独特的。使用uniprot(www.uniprot.org)进行大型同源性比较分析。观察250位具有不同身份百分比的人选。然而，在其当中皆不存在lap表位。图20给出一些实例。[0324]随后，在结肠直肠癌小鼠模型中测试在cho细胞中所产生的人源化成熟的ns17抗cd24的抗体对体内肿瘤生长的影响。雄性6至8周的无胸腺裸鼠被饲养在无菌笼中，并在无菌条件下进行处理。小鼠随意喂食。为了测试mab(在cho中产生)的治疗潜力，收获指数生长的ht29细胞，并以每注射0.1mlpbs5×106个细胞的最终浓度重新悬浮。在小鼠的背部的一部位皮下注射所述细胞。当可触及肿瘤(～0.3至0.5cm3)时，将小鼠随机分为三组并开始治疗。两种浓度(10及25mg/kg)的mab或pbs经由腹膜内注射给药，注射之间的间隔为3天。将小鼠称重，从治疗启始，利用卡尺检测肿瘤体积，并仔细地绘制结果。肿瘤体积计算为4/3π·a·b2。在实验结束时，移除肿瘤，并使用swa11鼠抗体进行蛋白质印迹分析。如图21所示，ns17以剂量依赖性方式抑制肿瘤生长。此外，肿瘤细胞中的cd24的表达水平的下调(由于内化作用)证实抗体确实到达肿瘤。[0325]使用两种衍生自患者的异种移植物(patient-derivedxenograft，pdx)模型进一步证实人源化成熟的ns17抗cd24的抗体的功效。在第一个实验中(图22a)，骨髓及肿瘤组织样本是取自头部及颈部，keytruda耐药的男性患者。将第3代的肿瘤移植至ngs小鼠上，此等小鼠利用供体干细胞(bm-cd34hsc)进行辐照及人源化。此研究表明，当经由静脉注射以1mg/kg的剂量给药时，相较于对照组，人源化成熟的ns17抗cd24的抗体减少肿瘤体积(》50％)(图22a)。[0326]利用championoncology实施第二个实验方案(图22c)。此次，供体在乙状结肠中患有原发性低分化结直肠腺癌(图22b)。此种低分化肿瘤表达高水平的cd24，因此被选为额外的pdx研究的供体(图22b)。从脐带血中分离出cd34 人类免疫细胞，并用于对利用175cgy全身照射亚致死辐射的雌性nog小鼠进行人源化。在人源化期的三个月中经由临床观察进行监控动物。在cd34 植入后第9周及第12周取出约150μl的外周血，以使用mcd45/hucd45/hucd3/hucd19标记评估人源化。使用购自biolegend的偶联抗体进行facs分析(championoncologyltd)，以检测此等标记。随后，来自供体的肿瘤细胞被皮下植入。一旦在移植后12周确认人源化，将来自供体的肿瘤细胞皮下植入小鼠体内。当足够的储备动物达到1.0至1.5cm3时，收获肿瘤，以重新植入研究前的动物中。研究前动物是将收获自非人源化饲养动物的肿瘤片段单侧地植入人源化小鼠的左侧。每只动物皆从一特定的传代批次中植入，并记录。在植入后7至10天开始记录各个实验的研究前肿瘤体积。当肿瘤达到80至200mm3的平均肿瘤体积时，根据肿瘤体积将动物匹配至治疗组或对照组中，并在第0天开始给药。[0327]在用人源化成熟ns17抗cd24的抗体以10mg/kg的剂量经由腹膜内注射进行治疗后，实现对肿瘤生长的显着抑制(图22c)。[0328]实例4[0329]亲和力成熟的人源化抗cd24单克隆的抗体的经吞噬作用介导的活性[0330]材料及方法：[0331]细胞培养：在37℃/5％co2下，将靶细胞(人类淋巴瘤细胞hl-60(ccl-240tm))保持在相应的完全生长培养基中，并定期传代培养。根据制造商的说明，在37℃/5％co2下，将人类淋巴瘤nalm6细胞(crl-3273tm)维持在rpmi1640完全生长培养基中。[0332]人类单核细胞衍生的巨噬细胞的制备：使用lymphopreptm(axis-shieldpocas，cat#as1114547)通过密度梯度离心法分离pbmc。随后，根据制造商的说明，使用人类泛单核细胞分离试剂盒(panmonocyteisolationkit)(miltenyibiotec，cat#130-096-537)纯化单核细胞。为了制备单核细胞衍生的巨噬细胞(monocytesderivedmacrophage，mdm)，将单核细胞以5x105个细胞/毫升的浓度接种在细胞培养基中，并通过巨噬细胞集落刺激因子(macrophagecolony-stimulatingfactor，m-csf)分化为单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)。通过流式细胞术验证在单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)上的特异性标记cd11b、cd14、cd45、cd64、cd163及cd206。[0333]用于检测cd24的流式细胞术：在胰蛋白酶作用之后，大约5.5x104个细胞在荧光激活的细胞分选缓冲液中进行洗涤。随后，在4℃下添加20μg/ml的抗cd24的抗体60分钟，随后利用facs缓冲液洗涤3次。加入异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，fitc)标记的绵羊抗人类igg(fitc)抗体(20μg/ml)，在4℃下避光放置30分钟。使用流式细胞仪(bdfacscalibur，使用flowjo7.6.1的数据分析)进行结合抗体的检测及分析。[0334]吞噬作用分析：人类淋巴瘤nalm6细胞与单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)进行共培养，并利用生成的人源化成熟ns17抗cd24的抗体进行处理。u5f9-g4(抗cd47mab)及人类igg分别用作阳性对照及阴性对照。使用各个mab的6剂的5倍稀释。为了量化抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependentcellularphagocytosis，adcp)效应，使用pkh26(sigma-aldrich，mini26-1kt)对目标nalm6细胞进行染色，并使用apc-抗cd11b抗体(miltenybiotech，130-091-241)标记单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)。对于pkh26及cd11b-apc，流式细胞术分析(bdfacscalibur，随后使用flowjo7.6进行数据分析)呈阳性的细胞被认为是含有靶细胞的单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)，其中发生吞噬作用。吞噬作用的百分比计算为双阳性细胞数与所有的pkh26阳性细胞数的比例。[0335]结果：[0336]抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependentcellularphagocytosis，adcp)是许多抗体疗法的作用机制之一。其为一高度调节的过程，抗体通过将其fc结构域连接至吞噬细胞上的特定受，体并引发吞噬作用，以消除结合的靶标。为此，使用facs筛选分析生成的人源化成熟ns17抗cd24的抗体对人类单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)所介导的吞噬作用的影响，并生成剂量依赖性曲线，以详细评估adcp效力。[0337]在第一步中，通过流式细胞术验证在目标人类淋巴瘤nalm6细胞上的cd242的表达，以及在制备的单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)上的cd11b、cd14、cd45、cd64、cd163及cd206的表达(图23a至图23b)。[0338]随后，检测利用生成的ns17抗cd24处理后的nalm6细胞的adcp。如图24所示，ns17mab诱导显着的及剂量依赖性的nalm6细胞吞噬作用。[0339]实例5[0340]双特异性抗cd24抗cd3抗体的产生[0341]材料及方法：[0342]双特异性t细胞接合体(bispecifict-cellengager，bite)的构建：人源化成熟ns17的vl及vh序列以及抗cd3(okt3)的vl及vh序列针对智人(人类)进行优化。在两个臂之间添加5个氨基酸或10个氨基酸的连接子。添加两个限制性位点，5’(ecori)及3’(xhoi)序列，经过序列验证，序列(seqidno：30及32)经由5’ecori及3’xhoi克隆至pcdna3.4(氨苄青霉素)。[0343]转染：根据制造商的步骤，使用expifectaminetm转染试剂盒(gibco)，将bite转染至expi293f细胞中。在各次的转染中，将7.5×107个细胞添加至在125毫升锥形瓶中的25.5ml的expi293表达培养基中。在过程结束时，各次的转染的最终体积约为30毫升。培养条件为37℃，8％co2的空气中，在约125rpm的轨道摇晃器上进行摇动。各次转染的总量为30μg质粒dna。[0344]转染步骤：[0345]-将30μg质粒dna稀释在opti-i减少的血清培养基中，总体积为1.5ml。[0346]-将81μl的expifectamine293试剂在opti-i培养基中稀释至总体积为1.5ml。混合物在室温下培养5分钟。[0347]-培养5分钟后，将稀释的dna添加至稀释的expifectamine293试剂中，以获得3ml的总体积。[0348]-混合物在室温下培养20分钟，之后加入至含有细胞的锥形瓶中。[0349]-培养20小时之后，将150μl的expifectamine293transfectionenhancer1及1.5ml的expifectamine293transfectionenhancer2添加至各个锥形瓶中。[0350]-转染后7天收获细胞。[0351]在ni-nta柱上进行纯化：根据制造商的说明(ge医疗保健)，使用histraphp预装柱(填充有nisepharose高性能，亲和性树脂)纯化bite衍生物。结合缓冲液：20mm磷酸钠、0.5mnacl、5mm咪唑，ph7.4。洗脱缓冲液：20mm磷酸钠、0.5mnacl、500mm咪唑，ph7.4。[0352]流式细胞术分析-使用ficollhistopaque(西格玛-奥尔德里奇)的密度梯度离心法分离pbmc。在荧光激活的细胞分选缓冲液中洗涤1x106个细胞。随后，在4℃下添加30μg/mlbite(seqidno：29或seqidno：31)抗体60分钟，之后利用facs缓冲液洗涤3次。在4℃的黑暗中加入二级抗体(20μg/ml)30分钟。使用流式细胞仪(bdcantoii，使用fcs表达的数据分析)进行结合的抗体的检测及分析。[0353]结果：[0354]双特异性t细胞接合剂(bispecifict-cellengager，bites)是一类人工的双特异性单克隆的抗体，在例如肿瘤相关的抗原与cd3之间形成一结合状态，从而引导t细胞活性对抗例如癌细胞独立于mhci或共刺激分子的存在。[0355]设计并生成包括ns17的vh及vl以及抗cd3抗体的vh及vl的两个bite分子，在其两个臂之间的连接子的长度不同(图25a)。第一个(seqidno：29)具有5个氨基酸连接子，第二个(seqidno：31)具有10个氨基酸连接子。[0356]将编码两种bite的序列(分别为seqidno：30或32)克隆至pcdna3.4载体中，在expi293细胞中表达并通过亲和性柱进行纯化。通过流式细胞术验证经纯化的bite结合至cd3 cd24 pbmc的能力(图25b)。[0357]尽管已经结合其特定实施例描述本发明，但显然许多替代、修饰及变化对于本领域技术人员来说将是显而易见的。因此，旨在涵盖落入所附权利要求的精神及广泛范围内的所有此等替代、修饰及变化。[0358]本说明书中提及的所有出版物、专利及专利申请按在此通过引用整体并入本说明书中，其程度如同各个单独的出版物、专利或专利申请案被具体且单独地指示通过引用并入本文中。此外，本技术中任何参考文献的引用或标识不应被解释为承认此种参考文献可用作本发明的现有技术。就使用章节的标题而言，其不应被解释为必然限制。此外，本技术的任何优先权文件在此通过引用的方式整体并入本文中。当前第1页12当前第1页12
技术领域：
：1.本技术请求于2019年6月25日提交的美国专利申请第62/866,008号的优先权，其内容通过引用整体并入本文中。2.序列表声明3.与提交本技术同时提交的、名称为82829序列表.txt的ascii文件建立于2020年6月24日，包括111,644个字节，通过引用并入本文中。
背景技术：
：：4.本发明在其一些实施例中涉及一种抗cd24的抗体及其用途。5.癌症是西方世界的主要死因之一。尽管生物医学有所进步，社会、公共机构及制药与生物技术产业为应对此疾病做出努力，但许多恶性肿瘤的死亡率仍然很高。例如，结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及胰腺癌(pancreaticcancer，pc)的年发病率高且预后差。目前的治疗方式包括化学疗法、手术、基因疗法、免疫疗法、放射疗法以及此等的组合。从历史上看，手术被认为是结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及胰腺癌(pancreaticcancer，pc)的最佳治疗方法。然而，由于远处的复发，手术后的长期生存率仅能适度地实现。不幸的是，仅有不到20％的胰腺癌(pancreaticcancer，pc)患者在其首次诊断时适合切除及潜在的治愈。对晚期的结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及胰腺癌(pancreaticcancer，pc)患者的特定疗法进行研究，但成功受到限制。评估单独及联合使用化学疗法及放射疗法的试验显示结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)或胰腺癌(pancreaticcancer，pc)的生存率仅得到中度/边际改善，且副作用相对较高。因此，对于一般癌症，特别是结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及胰腺癌(pancreaticcancer，pc)，仍然需要更有效的治疗选择。6.cd24在小鼠中亦称为热稳定抗原(heat-stableantigen，hsa)，是一种高度糖基化的磷脂酰肌醇锚定的粘蛋白样细胞表面蛋白。在生理上，cd24蛋白主要在b淋巴细胞的造血亚群、各种上皮细胞、肌肉及神经细胞上表达。其在造血过程中的细胞筛选及成熟中扮演至关重要的作用，且在胚胎期、发育的神经及胰腺细胞上表达。此外，cd24是p-选滞蛋白的潜在配体，其作为粘附分子，以增强血小板聚集。7.cd24显示在各种恶性组织中过度表达，所述恶性组织包括结肠直肠癌、b细胞淋巴瘤、神经胶质瘤、小细胞肺及非小细胞肺、肝细胞、肾细胞、鼻咽、膀胱、子宫、上皮性卵巢、乳腺、前列腺及胰腺癌[参见例如克里斯蒂安森等人(kristiansenetal.)(2004)，jmolhistol.35(3)：255-62；及魏切特等人(weichertetal.)(2005)，clincancerres11(18)：6574)。此外，发现其表达与衍生自数个器官的癌细胞株中所增加的生长速率、运动性及存活率相关[鲍曼等人(baumannetal.)(2005)，cancerres.65：10783-93；史密斯等人(smith,etal.)(2006)cancerres.66：1917-22]及更具侵袭性的癌症病程。因此，魏切特等人(2005)发现在细胞质中的cd24的表达增加与更高的肿瘤分期、分级及转移的存在相关，并得出结论，在细胞质中的cd24的过度表达是预后较差的标记。此外，cd24在血小板聚集中的作用可解释参与癌症转移及较差的预后(萨马尔，m.等人，1994；艾格纳，s.等人，1997；艾格纳，s.等人，1998)(sammar,m.,etal.,1994；aigner,s.,etal.,1997；aigner,s.,etal.,1998)。迄今为止，已产生数种针对cd24的单克隆抗体，并显示其在体外及体内抑制肿瘤(例如，结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)及肝细胞癌)细胞生长[参见例如夏皮拉等人(shapiraetal.)(2011)gastroenterology，140(3)：935-46；孙等人(sunetal.)(2017)，oncotarget.8(31)：51238-51252]。[0008]其他
背景技术：
：包括国际申请公开：第wo2007/088537号、第wo2008/059491号、第wo2009/063461号、第wo2009/074988号及第wo2018/216006号。技术实现要素：[0009]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种抗体，所述抗体包括一抗原识别结构域，所述抗原识别结构域特异性地结合cd24且包括如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)及如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)，所述如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区在所述抗体的一轻链上以从n至c的顺序排列，所述如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区在所述抗体的一重链上以从n至c的顺序排列。[0010]根据本发明的一些实施例，所述轻链氨基酸序列包括如seqidno：1所示的一氨基酸序列。[0011]根据本发明的一些实施例，所述重链氨基酸序列包括如seqidno：5所示的一氨基酸序列。[0012]根据本发明的一些实施例，所述轻链氨基酸序列包括如seqidno：1所示的一氨基酸序列，及所述重链氨基酸序列包括如seqidno：5所示的一氨基酸序列。[0013]根据本发明的一些实施例，所述抗体是一人源化抗体。[0014]根据本发明的一些实施例，所述抗体是多特异性的。[0015]根据本发明的一些实施例，所述抗体是双特异性的。[0016]根据本发明的一些实施例，所述抗体包括一抗原识别结构域，所述抗原识别结构域特异性地结合一免疫细胞。[0017]根据本发明的一些实施例，所述特异性地结合所述免疫细胞的所述抗原识别结构域与cd3结合。[0018]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码所述抗体。[0019]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞表达所述抗体。[0020]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种产生一抗cd24的抗体的方法，所述方法包括步骤：[0021](a)在支持所述抗体的产生的条件下，培养所述细胞；以及[0022](b)回收所述抗体。[0023]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种在有需要的一受试者中治疗一疾病的方法，所述疾病与表达cd24的细胞相关，所述方法包括步骤：向所述受试者施予所述抗体的一治疗有效量，从而治疗在所述受试者中的所述疾病。[0024]根据本发明的一些实施例，所述方法进一步包括步骤：向所述受试者施予治疗所述疾病的一疗法。[0025]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种所述抗体的用途，所述用途是在有需要的一受试者中治疗一疾病，所述疾病与表达cd24的细胞相关。[0026]根据本发明的一些实施例，所述抗体的用途进一步包括一疗法，所述疗法用于治疗所述疾病。[0027]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种制品，所述制品包括所述抗体及用于治疗一疾病的一疗法，所述疾病与表达cd24的细胞相关。[0028]根据本发明的一些实施例，所述疾病是癌症。[0029]根据本发明的一些实施例，所述癌症是选自由以下所组成的群组：结肠直肠癌、胰腺癌、b细胞淋巴瘤、神经胶质瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、肾癌、鼻咽癌、膀胱癌、子宫癌、卵巢癌、乳腺癌及前列腺癌。[0030]根据本发明的一些实施例，所述癌症是结肠直肠癌或胰腺癌。[0031]根据本发明的一些实施例，所述疗法是选自由免疫疗法、化学疗法及放射疗法所组成的群组。[0032]根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种方法，所述方法在有需要的一受试者中，针对表达cd24的一细胞激活一免疫细胞，所述方法包括步骤：向所述受试者施予所述抗体的一治疗有效量，从而针对表达所述cd24的所述细胞激活所述免疫细胞。[0033]除非另有定义，否则在本文中所使用的所有技术及/或科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文所述的方法及材料相似或等效的方法及材料可用于本发明的实施例的实施或测试，但示例性方法及/或材料在下文描述。如有冲突，以专利说明书(包括定义)为准。此外，此等材料、方法及实例仅是说明性的，并不意味着必然是限制性的。附图说明[0034]本文仅通过实例的方式参考附图描述本发明的一些实施例。现在详细地具体参考附图，强调所示的细节是示例性的且出于对本发明的实施例的说明性讨论的目的。在此点上，结合附图进行的描述对于本领域技术人员而言如何实施本发明的实施例是显而易见的。[0035]在图式中：[0036]图1是鼠免疫球蛋白swa11v基因的人源化的示意图。[0037]图2a至图2b显示鼠swa11、来自igvh-28*02及igk4-1*01、人类jh6及jk2，及人源化swa11的供体序列的重链v区(图2a，seqidno：57-61)及轻链v区(图2b，seqidno：62-66)的核苷酸及推演的氨基酸序列的比对分析。为了使其人源化而在swa11vh及v-kappa中所进行的变更标记为灰色。在从36-60.a1.85及8-30生殖细胞株的亲和力成熟期间引入时保留的swa11残基标记为绿色。互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)标记为红色。[0038]图3证明药代动力学(pharmacokinetic，pk)研究的结果。雌性balb/c小鼠(n＝13)接受单次静脉内(intravenous，i.v)注射的剂量为5mg/kg的人源化抗体(在本文中称为huns17)。在以下的时间点从眶周窦采集血样：15分钟及30分钟；1小时、6小时及24小时；3天、7天、9天、14天、19天、21天及28天，转移至采血管进行血清分离。其中一只小鼠仅注射pbs并作为阴性对照。通过基于抗原的elisa确定抗体的血清浓度。[0039]图4是显示人源化抗cd24的抗体huns17的结合强度的图表，如通过生物分子相互作用分析，比亚科雷(生物分子相互作用分析，biacore)，使用在传感器芯片的表面上所捕获的cd24抗原所测定。不同的线代表分析物的不同浓度(40nm、60nm、100nm、200nm及300nm)。[0040]图5是显示人源化huns17抗体的基于细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，adcc)的剂量反应图。在此分析中，ht-29及panc-1肿瘤细胞是用作靶细胞(targetcell，t)；及fc受体稳定的nk-92稳定细胞(nk-92/cd16a.v/v)是用作效应细胞(e)，e：t比例为10：1。使用ldh试剂盒评估裂解反应。在od492nm及od650nm处读取吸光度数据。将背景(od650nm)减去od492nm的数据进行分析，以研究ldh的释放。根据以下的公式计算细胞裂解的百分比：[0041]细胞裂解％＝100*(1-(ods样本数据-od肿瘤细胞 nk细胞)/(od最大释放-od最小释放))。[0042]图6a至图6b证明急性静脉内最大耐受剂量(maximumtolerateddose，mtd)评估的结果。图6a是证明在开放现场测试期间不同组的行进距离及移动性的图表。在组之间并未观察到差异。图6b证明临床血液学及化学的结果。所得到的所有数据皆在可接受的范围内，且无临床显着性。[0043]图7显示未武装的huns17(un-armedhuns17)在前列腺癌及胰腺癌的异种移植模型中的体内功效评价图。[0044]图8是构建的不同的人源化抗cd24及抗cd30fab片段的示意图。[0045]图9是展示通过elisa所检测的三种生成的fab衍生物的结合的图表。来自各个，使用噬菌体的十进制稀释度，1x1012至1x1010。“h”代表pcomb3x-h(cd24)l(cd30)、“l”代表pcomb3x-h(cd30)l(cd24)、“fab”代表pcomb3x-h(cd24)l(cd24)。此程序依照本哈尔等人(currentprotocolsinimmunology，2002)中的描述进行。[0046]图10是资料库设计的示意图：即设计人源化swa11的亲和力成熟：通过igblast在200个同源物中寻找互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)多样性。黄色标记代表修改后的基因座，即随机化的位置。其他则是用于设计此等资料库的不同的同源物中的保留基因座。[0047]图11是用于确定来自噬菌体抗体的资料库的潜在结合物的elisa的示意图。将第三个盘洗循环及第四个盘洗循环(panningcycle)后的单个菌落挑入在无菌的96孔盘(母盘)中的100μlytag培养基中，并在37℃下摇晃(150rpm)培养过夜。随后，将各个孔中的10μl转移至第二个96孔盘(救援盘)中，并将获救的噬菌体用于elisa。elisa盘中的各孔以100μl抗原蛋白在4℃下以5μg/ml的pbs浓度涂布过夜。通过辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，hrp)偶联的兔抗m13抗体检测fab表现的噬菌体的结合。利用3％脱脂牛奶阻断elisa盘。由于亲和性筛选通常会导致非特异性噬菌体与特定噬菌体一起被分离，因此总是平行测试与无关的抗原(bsa)的结合。母盘用作通过噬菌体elisa所鉴定的阳性单克隆的克隆的来源，以用于进一步的操作。[0048]图12a至图12b是哺乳动物的pcdna4/to及pcdna4-cmv-igl-cmv-igh表达载体的示意图。表示的是pcdna4/to骨架质粒(图12a)及pcdna4-cmv-igl-cmv-igh(图12b)的图谱。pcdna4-cmv-igl-cmv-igh用于生成整个igg人源化cd24mab的可诱导的表达及分泌系统。[0049]图13a至图13c证明成熟抗体与cd24的结合，如通过基于抗原的elisa(图13a)、全细胞elisa(图13b)及荧光激活流式细胞术(fluorescenceactivatedflowcytometry，facs)分析(图13c)所确定。ht29及hct116细胞是大肠癌细胞株；ht29细胞表达cd24，而hct116细胞仅表达非常低水平的cd24，且作为阴性对照。[0050]图14证明成熟的抗体抑制乳腺癌细胞的增殖，如通过显微镜观察的定性及通过酶促mtt分析的定量所证实。bt549及bt468是三阴性乳腺癌细胞株。[0051]图15a至图15d证明成熟抗体的特异性、结合强度、稳定性及adcc活性。图15a显示数个成熟的克隆相较于人源化衍生的huns17抗体的biacor结果。图15b显示成熟的抗体的体外稳定性测试的结果。简而言之，将经纯化的mab在pbs中稀释至最终浓度为1μg/ml。之后将抗体在37℃下进行培养，且在各个时间点，如图表所示，从测试项目中取出样本并保存在4℃中。最后，通过基于抗原的elisa分析抗体的活性。图15c证明成熟的抗体的adcc活性，如通过对ht29肿瘤细胞株的e/t优化分析所检测。将靶细胞与10μg/mlns17在37℃/5％培养箱中预培养30分钟。添加pbmc，以在3种不同的e/t比率下启动adcc效应。在37℃/5％co2培养箱中培养6小时后，收集用于检测释放的ldh的细胞上清液，以计算靶细胞裂解百分比。贺癌平(herceptin)介导的mcf-7细胞的adcc裂解用作阳性对照。图15d通过全细胞elisa证明成熟的抗体ns17识别及特异性地结合cd24的能力。使用cd24阳性细胞(ht29，crc；colo257及panc-1，胰腺；sh-sy5y，神经母细胞瘤)及cd24阴性细胞(hct116，crc)。[0052]图16a至图16b证明资料库设计。图16a是基于在第一次成熟过程中分离的结合物的序列的资料库的设计的示意图，以寻找额外的及可能更好的结合物。数字(紫色及绿色)表示所使用引子的长度。红色数字表示引子的数量。如图16b所示，设计的资料库包括cdr1及cdr2突变。[0053]图17证明人源化成熟的ns17抗cd24的抗体(seqidno：1及5)的vl序列及vh序列，如通过卡巴特等人的方法所检测。互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)(seqidnos：2、3、4、6、7及8)以黄色突出显示。[0054]图18显示cd24在正常的人体组织中的表达模式，使用fda批准的正常的人体器官组织微阵列。基于fda指南，包括32种正常的人体器官，其中各个器官取自3位正常的人体。使用抗cd24的抗体检测cd24表达。绝大多数的正常组织并未显示cd24的表达。嗜铬细胞瘤(phechromocytoma)样本已用作阳性对照。[0055]图19证明cd24在大多数人类恶性肿瘤中高度表达。数种肿瘤微阵列(tumormicroarray，tma)已被使用于研究在各种人类恶性肿瘤中的cd24表达模式。[0056]图20证明通过成熟的mab所识别的lap表位是非常独特的。使用uniprot(www.uniprot.org)进行大型同源性比较分析。观察250位具有不同的主体性百分比的人选。然而，在其中皆不存在lap表位。显示cd24序列(seqidno：70-74)的数个实例，且此表位并未出现在其中的任何一者中。[0057]图21证明ns17抗体在携带结肠直肠癌(colorectalcancer，crc)异种移植物的裸mediatedcytotoxicity，adcc)、补体依赖性细胞毒性(complementdependentcytotoxicity，cdc)及抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependentcellularphagocytosis，adcp)，且在体外及体内抑制肿瘤生长。此外，本发明人已制备一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包括ns17的vh链及vl链以及抗cd3的抗体的vh链及vl链。[0067]此等结果使所述抗体成为治疗cd24相关疾病，例如癌症的重要临床工具。[0068]因此，根据本发明的一第一方面，提供一种抗体，所述抗体包括一抗原识别结构域，所述抗原识别结构域特异性地结合cd24且包括如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)及如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)，所述如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区在所述抗体的一轻链上以从n至c的顺序排列，所述如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区在所述抗体的一重链上以从n至c的顺序排列。[0069]如本文中所使用，术语“cd24”是指由cd24基因(基因id：100133941)编码的磷脂酰肌醇锚定的粘蛋白样细胞表面蛋白(phosphatidylinositol-anchoredmucin-likecell-surfaceprotein)。根据具体实施例，cd24是指人类cd24，例如在genbank登录号：np_037362中提供。[0070]在本发明中所使用的术语“抗体”包括完整分子及其功能片段(能够结合一抗原的一表位)。[0071]如本文中所使用，术语“表位”是指在一抗原上与一抗体的互补位结合的任何抗原决定区。表位决定区通常由具有化学活性的分子表面积团所组成，所述分子表面积团例如氨基酸或碳水化合物侧链，且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。[0072]用于实施本发明的一些实施例的合适的抗体片段包括免疫球蛋白轻链(在本文中称为“轻链”)的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)、免疫球蛋白重链(在本文中称为“重链”)的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)、轻链的可变区、重链的可变区、轻链、重链、fd片段及基本上包括轻链及重链二者的完整可变区的抗体片段，例如fv、单链fvfv(singlechainfv，scfv)、二硫键稳定的fv(disulfide-stabilizedfv，dsfv)、fab、一个fab’及f(ab’)2。[0073]如本文中所使用，术语“互补决定区”或“cdr(complementarity-determiningregion)”可互换使用，指在重链及轻链多肽的可变区内所发现的抗原结合区。通常，抗体在各个vh(cdrh1或hi；cdrh2或h2；及cdrh3或h3)中包含三个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)，且在各个vl(cdrl1或l1；cdrl2或l2；及cdrl3或l3)中包含三个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)。[0074]特定抗体中构成可变区或互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)的氨基酸残基的身份可使用本领域熟知的方法确定，及包括如卡巴特等人所界定的序列可变性等方法。(参见，例如，卡巴特等人，1992，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版，公共卫生局，nih，华盛顿d.c.)，乔提亚等人所界定的结构环区域的位置。(参见，例如，乔提亚等人，nature342：877-883，1989)，卡巴特及乔提亚之间使用oxfordmolecular’sabm抗体建模软件(现为参见马丁等人，1989，proc.natlacadsciusa.86：9268；及全球资讯网www.bioinf-org.uk/abs)，可获得由接触定义所界定的复杂晶体结构(参见麦卡勒姆等人，j.mol.biol.262：732-745，1996)及“构象定义”(参见，例如，马卡贝等人，journalofbiologicalchemistry，283：1156-1166，2008)。[0075]如本文中所使用，“可变区(variableregion)”及“互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)”可指通过本领域已知的任何方法所定义的可变区及互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)。[0076]根据具体实施例，在抗体中构成互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)、可变区、轻链及/或重链的氨基酸残基的身份通过卡巴特等人的方法确定(参见，例如，卡巴特等人，1992，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版，公共卫生局，nih，华盛顿d.c.)。[0077]在本文中所公开的抗体包括如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)及如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)，所述如seqidno：2、3及4所示的多个互补决定区在所述抗体的一轻链上以从n至c的顺序排列，所述如seqidno：6、7及8所示的多个互补决定区在所述抗体的一重链上以从n至c的顺序排列。[0078]根据具体实施例，轻链的可变区(vl)包括一的氨基酸序列，所述的氨基酸序列与seqidno：1具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。[0079]可使用任何蛋白质或核酸序列比对演算法，例如blast、clustalw及muscle确定序列同一性或同源性。[0080]根据具体实施例，轻链的可变区(vl)是如seqidno：1所示。[0081]因此，根据具体实施例，轻链氨基酸序列包括如seqidno：1所示的氨基酸序列。[0082]根据具体实施例，重链的可变区(vh)包括一的氨基酸序列，所述的氨基酸序列与seqidno：5具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。[0083]根据具体实施例，重链的可变区(vh)是如seqidno：5所示。[0084]因此，根据具体实施例，重链氨基酸序列包括如seqidno：5所示的氨基酸序列。[0085]根据一具体实施例，轻链氨基酸序列包括如seqidno：1所示的氨基酸序列，重链氨基酸序列包括如seqidno：5所示的氨基酸序列。[0086]包括轻链及重链二者的完整或基本上完整的可变区的功能性抗体片段定义如下：[0087](i)fv，定义为由轻链的可变区(vl)及重链的可变区(vh)所组成的基因工程片段，表示为两条链；[0088](ii)单链fv(“scfv”)，包括轻链的可变区及重链的可变区的基因工程单链分子，通过合适的多肽连接子连接为基因融合的单链分子。[0089](iii)二硫键稳定的fv(“disulfide-stabilizedfv，dsfv”)，一种基因工程抗体，包括通过基因工程二硫键所连接的轻链的可变区及重链的可变区。[0090](iv)fab，一抗体分子的一片段，包括一抗体分子的单价抗原结合部分，可通过利用木瓜蛋白酶处理整个抗体，以产生完整的轻链及重链的fd片段而获得，所述fd片段由其可变结构域及其ch1结构域所组成；[0091](v)fab’，一抗体分子的一片段，包括一抗体分子的单价抗原结合部分，可通过用胃蛋白酶处理整个抗体，之后进行还原而获得(各个抗体分子获得两个fab’片段)；[0092](vi)f(ab’)2，一抗体分子的一片段，包括一抗体分子的单价抗原结合部分，可通过用胃蛋白酶处理整个抗体而获得(即，通过两个二硫键而结合在一起的fab’片段的二聚体)；及[0093](vii)单结构域抗体或纳米抗体是由对抗原表现出足够亲和力的单一vh结构或vl结构域所组成。[0094]根据具体实施例，抗体重链恒定区是选自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd及ige。[0095]根据具体实施例，所述抗体是igg抗体。[0096]根据一具体实施例，所述抗体同型是igg1或igg4。[0097]根据一具体实施例，所述抗体是igg1，例如igg1κ。[0098]根据一具体实施例，所述抗体是igg2，例如igg2a、igg2b，例如igg2aκ或igg2bκ。[0099]抗体类型的选择将取决于抗体旨在引发的免疫效应功能。[0100]根据具体实施例，所述抗体包括一fc结构域。[0101]制备多克隆抗体及单克隆抗体及其片段的方法是本领域众所周知的(参见例如，哈洛及蓝，抗体：实验室手册，冷泉港实验室，纽约，1988，通过引用并入本文中)。[0102]根据本发明的一些实施例的抗体片段可通过抗体的蛋白水解或通过在大肠杆菌或哺乳动物细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞培养物或其他蛋白质表达系统)中表达编码所述片段的dna而制备。抗体片段可通过常规的方法通过胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化整个抗体而获得。例如，可通过利用胃蛋白酶对抗体进行酶促切割来产生抗体片段，以提供表示为f(ab’)2的5s片段。此片段可使用硫醇还原剂及任选地由二硫键断裂所产生的巯基的阻断基团而进一步切割，以产生3.5sfab’单价片段。或者，使用胃蛋白酶的酶促切割直接地产生两个单价fab’片段及一个fc片段。例如，戈登堡，美国专利第4,036,945号及第4,331,647号，以及其中所包含的参考文献描述此等方法，此等专利在此通过引用整体并入。另参见波特，r.r.[biochem.j.73：119-126(1959)]。亦可使用其他切割抗体的方法，例如分离重链，以形成单价轻-重链片段，进一步切割片段，或其他的酶促、化学或遗传技术，只要片段与被完整抗体识别的抗原结合即可。[0103]fv片段包括vh链及vl链的结合。如英巴等人所述，此结合可能是非共价的。[proc.nat’lacad.sci.usa69：2659-62(19720]。或者，可变链可通过分子间的二硫键进行连接或通过化学物质，例如戊二醛进行交联。优选地，fv片段包括通过肽连接子进行连接的vh链及vl链。此等单链抗原结合蛋白(single-chainantigenbindingprotein，sfv)是通过构建一结构基因而制备，所述结构基因包括编码vh结构域及vl结构域的dna序列，此等dna序列通过寡核苷酸进行连接。将结构基因插入一表达载体，随后将其引入诸如e.coli.的宿主细胞。重组宿主细胞合成一单个多肽链，所述单个多肽链具有桥接两个v结构域的连接子肽。制备sfv的方法描述于例如[斐洛及菲尔布勒，method2：97-105(1991)；柏德等人，science242：423-426(1988)；裴克等人，bio/technology11：1271-77(1993)；及美国专利第4,946,778号，其通过引用整体并入本文中。[0104]抗体片段的另一种形式是编码单一互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)的肽。互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)肽(“最小识别单位”)可通过构建编码感兴趣的抗体的cdr的基因来获得。例如，通过使用聚合酶链式反应，从抗体产生的细胞的rna来合成可变区，以制备此等基因。例如，参见拉里克及弗赖[methods，2：106-10(1991)]。[0105]所述抗体可为单特异性的(能够识别一个表位或蛋白质)、双特异性的(能够结合两个表位或蛋白质)或多特异性的(能够识别多个表位或蛋白质)。[0106]根据具体实施例，所述抗体是单特异性的。[0107]根据具体实施例，所述抗体是多特异性的，例如双特异性、三特异性、四特异性。[0108]根据本发明的一些实施例，所述抗体是双特异性的。[0109]双特异性抗体是人工杂合抗体，所述人工的杂合抗体具有两个不同的重链/轻链对，以及两个不同的识别(即结合)位点，能够特异性地结合至少两个不同的表位。不同的表位可在同一分子内或在不同的分子上，使得双特异性抗体可特异性识别及结合在单个cd24多肽以及两个不同的cd24多肽上的两个不同的表位。或者，双特异性抗体具有对cd24具有亲和力的第一识别部分及对不同于cd24的多肽，例如，但不限于由免疫细胞表达的多肽具有亲和力的第二识别部分。[0110]因此，根据具体实施例，多特异性抗体包括特异性地结合cd24的抗原识别结构域及特异性地结合免疫细胞的抗原识别结构域。[0111]免疫细胞的非限制性实例包括t细胞、nk细胞、nkt细胞、b细胞、巨噬细胞、树突细胞(dendriticcell，dc)及粒细胞。[0112]根据具体实施例，所述免疫细胞是t细胞。[0113]通过免疫细胞特异性表达的多肽的非限制性实例包括cd2、cd3、cd4、cd8、cd19、cd22、cd56、cd14、cd33、cd28、b7、cd64、cd32、cd16、pd1、cd68、cd11b。[0114]根据具体实施例，通过免疫细胞表达的多肽是cd3。[0115]因此，根据具体实施例，多特异性(例如双特异性)抗体包括如本文中所公开的特异性地结合cd24的抗原识别结构域及特异性地与cd3结合的抗原识别结构域。[0116]许多抗cd3的抗体是本领域已知的。此种抗cd3的抗体的非限制性实例包括okt3、dil2k、tr66、ucht1、人源化uhct1、f6a。[0117]根据具体实施例，特异性地与cd3结合的抗原识别结构域包括如seqidno：36、37及39所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)及如seqidno：44、46及48所示的多个互补决定区(complementaritydeterminingregions，cdrs)，所述如seqidno：36、37及39所示的多个互补决定区在所述抗体的一轻链上以从n至c的顺序排列，所述如seqidno：44、46及48所示的多个互补决定区在所述抗体的一重链上以从n至c的顺序排列。[0118]根据具体实施例，特异性地与cd3结合的抗原识别结构域的vl是如seqidno：34所示。[0119]根据具体实施例，特异性地与cd3结合的抗原识别结构域的vh是如seqidno：42所示。[0120]根据一具体实施例，双特异性抗体包括seqidno：29或31。[0121]根据一具体实施例，双特异性抗体是如seqidno：29或31所示。[0122]制备双特异性抗体的方法是本领域已知的，且例如在宋思服赖及拉赫曼(1990)clin.exp.immunol.79：315-321；科斯特尔尼等人(1992)j.immunol.148：1547-1553，美国专利第4,474,893号、第5,959,084号及第7,235,641号、第7,183,076号，美国公开第20080219980号及国际公开第wo2010/115589号、第wo2013150043号及第wo2012118903号，全部并入本文中；以及包括例如化学交联(布伦南等人，science229,81(1985)；拉索等人，j.bioi.chern.272，27623(1997))、二硫键交换、杂交-杂交瘤(quadromas)，通过转录及转以制备包含双特异性抗体的单个多肽链，或通过转录及转译以制备多条多肽链，所述多条多肽链可共价地结合，以制备双特异性抗体。所考虑的双特异性抗体亦可完全通过化学合成来制备。[0123]应当理解，对于人类治疗或诊断，优选地使用人源化抗体。[0124]根据具体实施例，所述抗体是人源化抗体。非人类(例如，鼠)抗体的人源化形式是免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如fv、fab、fab’、f(ab’).sub.2或抗体的其他抗原结合子序列)的嵌合分子，其中包含衍生自非人类免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人类免疫球蛋白(受体抗体)，其中形成受体互补决定区(complementarydeterminingregion，cdr)的残基被来自非人类物种(供体抗体)，例如小鼠、大鼠或兔的具有所需的特异性、亲和力及能力的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)的残基取代。在一些情况下，人类免疫球蛋白的fv架构(fvframework)残基被相应的非人类的残基取代。人源化抗体亦可包括既不在受体抗体中且亦不在输入的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)或架构序列中所发现的残基。一般而言，人源化抗体将包括基本上所有的至少一者，通常是两个可变结构域，其中所有或基本上所有的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)区对应于非人类免疫球蛋白的互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)区及所有或基本上所有的fr区是人类免疫球蛋白共有序列的彼等。人源化抗体亦优选地包括免疫球蛋白恒定区(immunoglobulinconstantregion，fc)的至少一部分，通常是人类免疫球蛋白的恒定区[琼斯等人，nature，321：522-525(1986)；里赫曼等人，nature，332：323-329(1988)；及普雷斯塔，curr.op.struct.biol.biol.，2：593-596(1992)]。[0125]用于人源化非人类抗体的方法是本领域众所周知的。通常，人源化抗体具有一或多个从非人类的来源引入的氨基酸残基。此等非人类氨基酸残基通常被称为输入残基，其通常取自一输入可变结构域。人源化基本上可依照温特及同事的方法进行[琼斯等人，nature，321：522-525(1986)；里赫曼等人，nature332：323-327(1988)；维尔霍伊恩等人，science，239：1534-1536(1988)]，通过利用啮齿动物的互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)或互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)序列代替人类抗体的相应序列。因此，此种人源化抗体是嵌合抗体(美国专利第4,816,567号)，其中基本上少于一完整的人类可变结构域已被来自非人物种的相应序列取代。在实施中，人源化抗体通常是人类抗体，其中一些互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)残基及可能的一些fr残基被啮齿动物的抗体中的相似位点的残基取代。dependentcelltoxicity，adcc)。[0137]根据本发明的一些实施例，所述治疗部分能够引发补体依赖性细胞毒性(complement-dependentcytotoxicity，cdc)。[0138]根据本发明的一些实施例，所述治疗部分能够引发抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependentcellularphagocytosis，adcp)。[0139]或者或额外地，所述抗体可为双特异性抗体，如上文进一步描述，其中所述治疗部分是免疫细胞接合剂，例如抗cd3的抗体、抗cd16或抗免疫检查点分子(例如抗pd-1)。[0140]因此，根据本发明的一方面，提供一种在有需要的一受试者中对表达cd24的细胞激活免疫细胞的方法，所术方法包括向所术受试者施予一治疗有效量的抗体，从而激活免疫细胞朝向表达cd24的细胞。[0141]或者或额外地，根据具体实施例，所述治疗部分是表达抗体的免疫细胞。可用于本发明的具体实施例的免疫细胞的非限制性实例包括t细胞、nk细胞、nkt细胞、b细胞、巨噬细胞、树突细胞(dendriticcell，dc)及粒细胞。[0142]根据具体实施例，所述免疫细胞是t细胞。[0143]因此，根据具体实施例，所术抗体是一嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)的一部分，且所述治疗部分是使用所述试剂进行转导的t细胞。[0144]嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)是人工构建的杂合蛋白或多肽，包含与t细胞信号传导或t细胞激活结构域相连接的抗体的抗原结合结构域(例如，单链可变片段(singlechainvariablefragment，scfv))。产生嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)及利用嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)转导t细胞的方法在本领域中是已知的，且例如公开于在达维拉等人，oncoimmunology2012年12月1日；1(9)：1577-1583；王及rivièrecancergenether.2015年3月；22(2)：85-94)；毛斯等人，blood.2014年4月24日；123(17)：2625-35；波特dl，thenewenglandjournalofmedicine.2011，365(8)：725-733；杰克逊hj，natrevclinoncol.2016；13(6)：370-383；及格洛伯森-莱莫等人，molther.2014；22(5)：1029-1038。[0145]可选地或额外地，所述抗体可连接至一异源治疗部分(接合方法在下文中描述)。所述治疗部分可为，例如，细胞毒性部分、毒性部分[例如，假单胞菌外毒素(genbank登录号：aab25018及s53109)；pe38kdel；白喉毒素(genbank登录号：e00489及e00489)；蓖麻毒素a毒素(genbank登录号：225988及a23903)]、细胞因子部分[例如，白细胞介素2(genbank登录号：caa00227及a02159)、白细胞介素10(genbank登录号：p22301及m57627)]、药物、化学品、蛋白质及/或放射性同位素。[0146]根据具体实施例，所述治疗部分是选自由以下所组成的群组：毒素、药物、化学品、蛋白质及放射性同位素。[0147]根据具体实施例，抗体与一可检测部分结合。[0148]可用于本发明的一些实施例的可检测部分的实例包括但不限于放射性同位素、磷光化学品、化学发光化学品、荧光化学品、酶、荧光多肽、放射性同位素(例如[125]碘)及表位标签。可检测部分可为一结合对的构件及一标记，所述结合对可经由其与所述结合对的额外构件的相互作用来识别，且所述标记是直接可视化的。在一实例中，所述结合对的构件是一抗原，所述抗原是由一相应的标记抗体鉴定。在一实例中，所述标记是荧光蛋白或产生比色反应的酶。[0149]合适的荧光团的实例包括，但不限于藻红蛋白(phycoerythrin，pe)、异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，fitc)、cy-铬(cy-chrome)、罗丹明、绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，gfp)、蓝色荧光蛋白(bluefluorescentprotein，bfp)、德克萨斯红(texasred)、pe-cy5等。有关荧光团的选择、将荧光团连接至各种类型分子的方法的其他指导，请参见理查德p.豪格兰，“分子探针：荧光探针及研究化学品的手册1992-1994”，第5版，分子探针公司(molecularprobes，inc.)(1994)；癌免疫素公司(oncoimmunininc.)的美国专利第6,037,137号；赫曼森，“生物共轭技术”，纽约学术出版社(1995)；凯m.等人，1995.biochemistry34：293；斯塔布斯等人，1996.biochemistry35：937；加卡姆斯基d.等人，“通过荧光共振能量转移评估受体化学计量”，“受体：一种实用的方法”，第2版，斯坦福c.及霍顿r.(版本)，牛津大学出版社，英国(2001)；targesome公司的美国专利第6,350,466号]。当与荧光可检测部分接合时，可用于检测抗体的荧光检测方法包括例如荧光激活流式细胞术(fluorescenceactivatedflowcytometry，facs)、免疫荧光共聚焦显微镜、荧光原位杂交(fluorescencein-situhybridization，fish)，以及荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer，fret)。[0150]许多类型的酶可连接至所述抗体上[例如辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，hrp)、β-半乳糖苷酶，以及碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ap)]，且可使用elisa(例如，在溶液中)、酶联免疫组织化学分析(例如，在一固定的组织中)、酶联化学发光分析(例如，在电泳分离的蛋白质混合物中)或本领域已知的其他方法[参见例如，哈特哈泰mi.及德赛m.，1999.jimmunoassay20：151-83；威世登gb.，1994，methodsmolbiol.32：433-40；石川e.等人，1983.jimmunoassay4：209-327；欧莱里希m.，1980.jclinchemclinbiochem.18：197-208；舒尔ah.及范维门bk.，1980.jimmunoassay，1：229-49)。[0151]示例性的可识别部分包括，但不限于绿色荧光蛋白、碱性磷酸酶、过氧化物酶、组氨酸标签、生物素、橙色荧光蛋白及链霉亲和素(strepavidin)。[0152]可检测部分的进一步实例包括可通过正电子发射断层扫描(positronemissiontomography，pet)及磁共振成像(magneticresonanceimaging，mri)检测的彼等，所有此等皆为本领域技术人员所熟知的。[0153]根据一些实施例，所述治疗部分或可检测部分通过将编码本文中所公开的抗体的多核苷酸与编码所述治疗部分或可检测部分的核酸序列转译地融合而进行接合。[0154]另外或可选地，治疗部分或可检测部分可使用本领域技术人员已知的任何接合方法进行化学接合(偶联)至抗体，包括例如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯(3-(2-pyridyldithio)propionicacidn-hydroxysuccinimideester)(亦称为n-丁二酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)(n-succinimidyl3-(2-pyridyldithio)propionate，“sdpd”)(西格玛，目录编号：p-3415；参见例如康巴等人，1985，methodsofenzymology112：207-224)、戊二醛接合过程(参见例如gt赫曼森1996，“在生物偶联技术中，抗体修饰及偶联，academicpress，圣地亚哥)或碳二亚胺接合过程[参见例如，j.march，高级有机化学：反应的机理及结构，pp.349-50&372-74(第3版)，1985；b.尼斯等人，1978，angewchem.，int.ed.engl.17：522；a.哈斯纳等人，1978，tetrahedronlett.4475；ep博登等人，1986，j.org.chem.50：2394及l.j.马蒂亚斯1979，synthesis561]。[0155]例如，可使用本领域广泛实施的标准化学合成技术，将治疗部分或可检测部分连接至本发明的一些实施例的抗体[参见例如http：//worldwideweb.chemistry.org/portal/chemistry)]，例如使用任何合适的化学键，直接或间接，如经由一肽键(当功能部分是多肽时)，或经由共价键结至一中间连接子元件，例如一连接子肽或其他的化学键部分，例如一有机聚合物。嵌合肽可通过在肽的羧基(carboxy，c)或氨基(amino，n)末端进行连接，或经由键结至内部化学基团，例如直链、支链或环状侧链、内部碳或氮原子等进行连接。抗体的荧光标记的描述是详细提供于美国专利第3,940,475号、第4,289,747号，及第4,376,110号中。[0156]抗体亦可附着至包括治疗部分或可检测部分(例如细胞毒性剂)的颗粒上。将抗体与一包封颗粒共价结合的方法是本领域已知的，且例如公开于美国专利第5,171,578号、第5,204,096号，及第5,258,499号中。[0157]根据一具体实施例，所述抗体是使用重组dna技术所产生的。[0158]因此，根据本发明的一方面，提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码所述抗体。此种多核苷酸将包括编码互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)的核酸序列。[0159]如本文中所使用，术语“多核苷酸”是指以rna序列、互补多核苷酸序列(complementarypolynucleotidesequence，cdna)、基因组多核苷酸序列及/或复合多核苷酸序列的形式进行分离及提供的一单链核酸序列或双链核酸序列(例如，上述的组合)。[0160]此种核酸序列的非限制性实例在seqidno：49、53、30或32中提供。[0161]本文中亦考虑包括编码所述抗体的多核苷酸的宿主细胞。因此，根据本发明的一方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞表达所述抗体。[0162]通常选择此种细胞，以高度表达重组蛋白(例如，细菌、植物或真核细胞，例如cho、hek-293细胞)，但亦可为免疫细胞(例如，巨噬细胞、树突细胞、t细胞、b细胞或nk细胞)，例如当抗体的互补决定区(complementaritydeterminingregion，cdr)被植入嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)中时，嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)被转导至被使用于采用的细胞疗法的所述细胞中。[0163]为了在细胞中表达任何公开的抗体，优选地将编码所述抗体的多核苷酸序列连接至适合细胞表达的一核酸构建体中，并引入宿主细胞中。此种核酸构建体包括一启动子序列，所述启动子序列用于引导在细胞中的多核苷酸序列，以持续型或诱导型方式进行转录。[0164]本发明的一些实施例的核酸构建体(在本文中亦称为“表达载体”)包括附加序列，所述附加序列使此载体适合于复制及嵌入(例如穿梭载体)。此外，典型的克隆载体亦可含有一转录起始序列及转译起始序列、转录终止子及转译终止子，以及多聚腺苷酸化信号。举例而言，此种构建体通常包括5’ltr、trna结合位点、包装信号、第二链dna合成的起点，以及3’ltr或其部分。[0165]真核启动子通常包含两种类型的识别序列，即tata盒及上游启动子元件。位于转录起始位点的上游25至30个碱基对的tata盒被认为参与引导rna聚合酶，以开始rna的合成。其他的上游启动子元件决定转录起始的速率。[0166]增强子元件可从连接的同源启动子或异源启动子刺激高达1,000倍的转录。当增强子置放于转录起始位点的下游或上游时，增强子是活跃的。许多衍生自病毒的增强子元件具有一广泛的宿主范围，且在多种组织中具有活性。例如，sv40早期基因增强子适用于多种细胞类型。适用于本发明的一些实施例的其他的增强子/启动子组合包括衍生自多瘤病毒、人类巨细胞病毒(cytomegalovirus，cmv)或鼠巨细胞病毒(cytomegalovirus，cmv)、来自各种逆转录病毒，例如鼠白血病病毒、鼠肉瘤病毒或劳斯肉瘤病毒(roussarcomavirus)及hiv的长末端重复序列(longtermrepeat)的彼等。参见，增强子及真核表达，冷泉港出版社，冷泉港，n.y.1983，其通过引用并入本文中。[0167]在表达载体的构建体中，启动子优选地与异源转录起始位点的距离与其在其自然环境中与转录起始位点的距离大致相同。然而，如本领域已知的，可提供此距离的一些变化而不损失启动子的功能。[0168]亦可将多腺苷酸化序列添加至表达载体中，以提高mrna转译的效率。准确及有效的多聚腺苷酸化需要两个不同的序列元件：位于多聚腺苷酸化位点的下游的富含gu或u的序列，以及位于上游11至30个核苷酸的高度保留的六个核苷酸的序列aauaaa。适用于本发明的一些实施例的终止及多聚腺苷酸化信号包括衍生自sv40的彼等。[0169]除了已经描述的元件之外，本发明的一些实施例的表达载体通常可包含其他的特定化元件，所述其他的特定化元件旨在增加克隆核酸的表达水平或协助识别携带重组dna的细胞。例如，许多的动物病毒含有促进病毒基因组在允许的细胞类型中进行染色体外复制的dna序列。只要通过在质粒上所携带的基因或宿主细胞的基因组提供适当的因子，则带有此等病毒复制子的质粒即会被游离复制。[0170]载体可包括或不包括一真核复制子。倘若存在一真核复制子，则可使用适当的选择标记在真核细胞中扩增载体。倘若载体不包括一真核复制子，则不可能进行游离扩增。相反的，重组dna嵌入至工程细胞的基因组中，其中所述启动子引导所需核酸的表达。[0171]应当理解，在表达载体中所包含的各个元件可以多种配置进行排列。例如，增强子元件、启动子等，甚至编码多肽的多核苷酸序列可以“头对尾”构型排列，可作为一反向互补物存在，或以一互补构型存在，作为一反平行链。尽管表达载体的非编码元件更可能出现此种不同的构型，但亦可设想在表达载体中编码序列的替代构型。[0172]哺乳动物表达载体的实例包括，但不限于pcdna3、pcdna3.1( /-)、pgl3、pzeosv2( /-)、psectag2、pdisplay、pef/myc/cyto、pcmv/myc/cyto、pcr3.1、psinrep5、dh26s、dhbb、pnmt1、pnmt41、可从invitrogen取得的pnmt81、可从promega取得的pci、可从strategene取得的pmbac、ppbac、pbk-rsv及pbk-cmv，及可从clontech取得的ptres，以及其衍生物。[0173]亦可使用含有来自诸如逆转录病毒的真核病毒的调节元件的表达载体。sv40载体包括psvt7及pmt2。源自于牛乳头状瘤病毒的载体包括pbv-1mtha，源自于epsteinbar病毒的载体包括phebo及p2o5。其他的示例性载体包括pmsg、pav009/a 、pmto10/a 、pmamneo-5、杆状病毒pdsve，以及允许在以下的启动子的引导下表达蛋白质的载体：sv-40早期启动子、sv-40晚期启动子、金属硫蛋白启动子、鼠乳腺肿瘤病毒启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、多角体启动子或其他显示对在真核细胞中表达有效的启动子。[0174]可使用多种方法将本发明一些实施例的表达载体引入细胞。此种方法一般描述于sambrook等人，分子克隆：实验室手册，冷泉港实验室，纽约(1989，1992)，奥苏贝尔等人，分子生物学中的当前步骤准则，约翰威利及宋斯，巴尔的摩，md.(1989)，张等人，体细胞基因治疗，crc出版社，annarbor，mich.(1995)，维格等人，基因靶向，crc出版社，annarbormich.(1995)，载体：分子克隆载体及其用途的概论，巴特沃思，bostonmass.(1988)，以及吉尔博等人[biotechniques4(6)：504-512，1986]，及包括例如稳定转染或瞬间转染、脂转染、电穿孔及重组病毒载体的感染。此外，参见美国专利第5,464,764号及第5,487,992号用于正负筛选方法。[0175]根据本发明的另一方面或替代方面，提供一种产生抗cd24抗体的方法，所述方法包括步骤：[0176](a)在支持所述抗体的产生的条件下，培养表达所述抗体的宿主细胞；及[0177](b)回收所述抗体。[0178]此种条件可为例如合适的温度(例如，37℃)、大气(例如，空气加5％co2)、ph、光、介质、补充剂等。[0179]根据一具体实施例，从培养物中分离(纯化)所述抗体。[0180]根据具体实施例，经分离的抗体基本上是不含污染的细胞成分，例如碳水化合物、脂质或其他杂质。[0181]用于分离及纯化抗体的方法是本领域熟知的，参见例如色谱，第5版，a部分：基础及技术，赫夫特曼，e.(版本)，爱思唯尔科学出版公司，纽约,(1992)；生物科学中的高级色谱及电迁移方法，戴尔，z.(版本)，爱思唯尔科学bv，阿姆斯特丹，thenetherlands,(1998)；今日的色谱，普尔，c.f.及普尔，s.k.，爱思唯尔科学出版公司，纽约,(1991)；范围，蛋白质纯化：原理与实施(1982)；桑布鲁克，j.等人(版本)，分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989；或分子生物学中的当前步骤准则，奥苏贝尔，f.m.等人。(版本)，约翰威利&宋斯，公司，纽约。[0182]根据具体实施例，在制备物中的总蛋白质的至少80％、至少90％、至少95％或至少99％是感兴趣的抗体。[0183]根据具体实施例，将分离的抗体纯化至药学上可接受的纯度。[0184]评估纯度的方法在本领域中是众所周知的，包括针对特定污染物的sec-hplc、肽图谱分析、sds凝胶分析及elisa。[0185]本文中所公开的抗体可用于多种临床应用。由于其对cd24的亲和力，其可用于治疗与cd24相关的医学病症，例如癌症。[0186]因此，根据本发明的一方面，提供一种在有需要的一受试者中治疗与表达cd24的细胞相关的疾病的方法，所述方法包括步骤：向所述受试者施予一治疗有效量的抗体，从而治疗在所述受试者中的所述疾病。[0187]根据本发明的另外的或替代的方面，提供了用于在有需要的受试者中治疗与表达cd24的细胞相关的疾病的抗体。[0188]如本文中所使用，术语“受试者”包括哺乳动物，优选地为患有所述病理的任何年龄或性别的人类。优选地，所述术语包括具有发展所述病理的风险的个体。[0189]如本文中所使用，短语“与表达cd24的细胞相关的疾病”是指表达cd24的细胞驱动所述疾病的发作及/或进展。[0190]根据具体实施例，与所述疾病相关的细胞过度表达cd24。[0191]根据具体实施例，相较于在健康细胞上的cd24水平，cd24在细胞上的表达为至少2％、至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更高，如通过例如流式细胞仪所检测。[0192]此类疾病的非限制性实例包括癌症、炎性肠病(例如uc及克罗恩疾病(crohn))、肾脏疾病[例如急性肾小管坏死(acutetubularnecrosis，atn)]、心血管疾病(例如心肌梗塞)、嗜酸性食管炎(eosinophilicesophagitis，eoe)、肺部疾病(例如哮喘)。[0193]可通过本发明的一些实施例治疗的癌症可为任何实体或非实体肿瘤、癌症转移及/或癌前病变。[0194]癌症的实例包括但不限于，恶性肿瘤、母细胞瘤、肉瘤及淋巴瘤。此种癌症的更具体实例包括，但不限于，胃肠道的肿瘤(结肠恶性肿瘤、直肠恶性肿瘤、结肠直肠恶性肿瘤、结肠直肠癌、结肠直肠腺瘤、遗传性非息肉病第1型(hereditarynonpolyposis)、遗传性非息肉病(hereditarynonpolyposis)第2型、遗传性非息肉病(hereditarynonpolyposis)第3型，遗传性非息肉病(hereditarynonpolyposis)第6型；结肠直肠癌、遗传性非息肉病(hereditarynonpolyposis)第7型、小肠恶性肿瘤及/或大肠恶性肿瘤、食道恶性肿瘤、食道癌的胼胝症、胃恶性肿瘤、胰腺恶性肿瘤、胰腺内分泌肿瘤)、子宫内膜恶性肿瘤、突起性皮肤纤维肉瘤(dermatofibrosarcomaprotuberans)、胆囊恶性肿瘤、胆道肿瘤、前列腺癌、前列腺腺细胞癌、肾癌(例如，威尔姆氏肿瘤(wilms’tumor)第2型或第1型)、肝癌(例如，肝母细胞瘤、肝细胞恶性肿瘤、肝细胞癌)、膀胱癌、胚胎性横纹肌肉瘤(embryonalrhabdomyosarcoma)、生殖细胞肿瘤、滋养层细胞肿瘤(trophoblastictumor)、睾丸生殖细胞肿瘤(testiculargermcellstumor)、卵巢未成熟畸胎瘤(immatureteratomaofovary)、子宫肿瘤、上皮卵巢肿瘤、荐椎与尾骨肿瘤(sacrococcygealtumor)、绒毛膜癌、胎盘部位滋养层细胞肿瘤(placentalsitetrophoblastictumor)、成人上皮肿瘤(epithelialadulttumor)、卵巢恶性肿瘤、浆液性卵巢癌、卵巢性索肿瘤(ovariansexcordtumor)、宫颈恶性肿瘤、子宫颈癌、小细胞肺恶性肿瘤及非小细胞肺恶性肿瘤、鼻咽恶性肿瘤、乳腺恶性肿瘤(例如，管状乳腺癌(ductalbreastcancer)、浸润性管内乳腺癌(invasiveintraductalbreastcancer)，偶发性的；乳腺癌、乳腺癌易感性(susceptibilitytobreastcancer)、第4型乳腺癌、乳腺癌-1、乳腺癌-3；乳腺卵巢癌)、鳞状细胞恶性肿瘤(squamouscellcarcinoma)(例如，头部及颈部)、神经源性肿瘤(neurogenictumor)、星形细胞瘤(astrocytoma)、神经节母细胞瘤(ganglioblastoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、淋巴瘤(例如，霍奇金病(hodgkin'sdisease)、非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin'slymphoma)、b细胞、布凯特(burkitt)、皮肤t细胞(cutaneoustcell)、组织细胞(histiocytic)、淋巴母细胞癌(lymphoblastic)、t细胞癌、胸腺癌)、神经胶质瘤(gliomas)、腺癌(adenocarcinoma)、肾上腺肿瘤(adrenaltumor)、遗传性肾上腺皮质癌(hereditaryadrenocorticalcarcinoma)、脑恶性肿瘤(brainmalignancy)(肿瘤)、各种其他的恶性肿瘤(例如，支气管大细胞癌(bronchogeniclargecell)、导管癌(ductal)、欧利希氏腹水癌(ehrlich-lettreascites)、表皮样癌(epidermoid)、大细胞癌(largecell)、路易斯氏肺(lewislung)癌、髓质(medullary)、粘液表皮样(mucoepidermoid)、燕麦状细胞(oatcell)、小细胞、梭形细胞(spindlecell)、脊髓细胞(spinocellular)、移行细胞(transitionalcell)、未分化(undifferentiated)、癌肉瘤(carcinosarcoma)、绒毛膜癌(choriocarcinoma)、囊腺癌(cystadenocarcinoma))、室管膜母细胞瘤(ependimoblastoma)、上皮瘤(epithelioma)、红白血病(erythroleukemia)(例如佛氏白血病(friend)、淋巴母细胞(lymphoblast))、纤维肉瘤(fibrosarcoma)、巨细胞瘤(giantcelltumor)、胶质瘤(glialtumor)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)(例如，多形性、星形细胞瘤)、胶质瘤(gliomahepatoma)、胶质瘤肝细胞瘤(gliomahepatoma)、异种杂交瘤(heterohybridoma)、异种骨髓瘤(heteromyeloma)、组织细胞瘤(histiocytoma)、杂交瘤(hybridoma)(例如，b细胞)、肾瘤(hypernephroma)、胰岛素瘤(insulinoma)、胰岛瘤(islettumor)、角膜瘤(keratoma)、平滑肌母细胞瘤(leiomyoblastoma)、(leiomyosarcoma)平滑肌肉瘤、白血病(leukemia)(例如，急性淋巴(acutelymphatic)、急性淋巴细胞(acutelymphoblastic)、急性淋巴细胞前b细胞(acutelymphoblasticpre-bcell)、急性淋巴细胞t细胞白血病(acutelymphoblastictcellleukemia)、急性-巨核细胞(acute-megakaryoblastic)、单核细胞(monocytic)、急性髓性(acutemyelogenous)、急性髓性(acutemyeloid)、急性髓性嗜酸性粒细胞增多症(acutemyeloidwitheosinophilia)、b细胞，嗜碱性(basophilic)、慢性髓性(chronicmyeloid)、慢性(chronic)、b细胞，嗜酸性(eosinophilic)，佛氏(friend)、粒细胞(granulocytic)或髓细胞(myelocytic)、毛细胞(hairycell)、淋巴细胞(lymphocytic)、巨核细胞(megakaryoblastic)、单核细胞(monocytic)、单核巨噬细胞(monocytic-macrophage)、成髓细胞(myeloblastic)、髓细胞(myeloid)、髓单核细胞(myelomonocytic)、浆细胞(plasmacell)、前-b细胞(pre-bcell)、早幼粒细胞(promyelocytic)、亚急性(subacute)、t细胞、淋巴肿瘤(lymphoidneoplasm)、易患髓系恶性肿瘤(predispositiontomyeloidmalignancy)、急性非淋巴细胞白血病(acutenonlymphocyticleukemia))、淋巴肉瘤(lymphosarcoma)、黑色素瘤(melanoma)、乳腺肿瘤(mammarytumor)、肥大细胞瘤(mastocytoma)、髓母细胞瘤(medulloblastoma)、间皮瘤(mesothelioma)、转移性肿瘤(metastatictumor)、单核细胞肿瘤(monocytetumor)、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)、骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome)、骨髓瘤(myeloma)、肾母细胞瘤(nephroblastoma)、神经组织神经胶质瘤(nervoustissueglialtumor)、神经组织神经元肿瘤(nervoustissueneuronaltumor)、神经瘤(neurinoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、少突胶质细胞瘤(oligodendroglioma)、骨软骨瘤(osteochondroma)、骨髓瘤(osteomyeloma)、骨肉瘤(osteosarcoma)(例如，尤文氏(ewing’s))、乳头状瘤(papilloma)、移行细胞(transitionalcell)、嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)、垂体瘤(pituitarytumor)(侵袭性)、浆细胞瘤(plasmacytoma)、视网膜母细胞瘤(retinoblastoma)、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、肉瘤(sarcoma)(例如，尤文氏(ewing’s)、组织细胞(histiocyticcell)、詹森(jensen)、成骨细胞(osteogenic)、网状细胞(reticulumcell))、神经鞘瘤(schwannoma)、皮下肿瘤(subcutaneoustumor)、畸胎癌(teratocarcinoma)(例如，多能性(pluripotent)、畸胎瘤(teratoma)、睾丸肿瘤(testiculartumor)、胸腺瘤(thymoma)及毛状上皮瘤(trichoepithelioma)、胃癌、纤维肉瘤(fibrosarcoma)、多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme)；多发性肾小球瘤(multipleglomustumors)、李-弗劳美尼综合征(li-fraumenisyndrome)、脂肪肉瘤(liposarcoma)、林奇氏症癌症家族综合征ii(lynchcancerfamilysyndromeii)、男性生殖细胞瘤(malegermcelltumor)、肥大细胞白血病(mastcellleukemia)、甲状腺髓样瘤(medullarythyroid)、多发性脑膜瘤(multiplemeningioma)、内分泌肿瘤粘液肉瘤(endocrineneoplasiamyxosarcoma)、副神经节瘤(paraganglioma)、家族性非嗜铬细胞瘤(familialnonchromaffin)、毛母细胞瘤(pilomatricoma)、乳头状(papillary)、家族性(familial)及偶发性(sporadic)、横纹肌瘤易感性综合征(rhabdoidpredispositionsynd)、家族性(familial)、横纹肌样肿瘤(rhabdoidtumors)、软组织肉瘤(softtissuesarcoma)及透克氏症综合征伴胶质母细胞瘤(turcotsyndromewithglioblastoma)。[0195]癌前病变在本领域是充分表征及已知的(例如参见伯曼jj.及汉森de.，2003.对癌前病变进行分类：元数据方法.bmcmedinformdecismak.3：8)。癌前病变的实例包括但不限于后天性小癌前病变(acquiredsmallprecancer)、后天性核异型性大病变(acquiredlargelesionswithnuclearatypia)、伴随发展为癌症的遗传性增生综合征的前体病变(precursorlesionsoccurringwithinheritedhyperplasticsyndrome)、后天性弥漫性增生及弥漫性化生(acquireddiffusehyperplasiasanddiffusemetaplasias)。小癌前病变(smallprecancer)的非限制性实例包括子宫颈的高级鳞状上皮内病变(highgradesquamousintraepitheliallesionofuterinecervix，hgsil)、肛门上皮内瘤变(analintraepithelialneoplasia，ain)、声带的上皮变异(dysplasiaofvocalcord)、(结肠的)异常隐窝(aberrantcrypt)、前列腺上皮内瘤变(prostaticintraepithelialneoplasia，pin)。[0196]具有核异型性的后天性大病变(acquiredlargelesionswithnuclearatypia)的非限制性实例包括管状腺瘤(tubularadenoma)、血管免疫母细胞性淋巴结病伴异常蛋白血症(angioimmunoblasticlymphadenopathywithdysproteinemia，aild)、非典型脑膜瘤(atypicalmeningioma)、胃息肉(gastricpolyp)、大斑块状副银屑病(largeplaqueparapsoriasis)、骨髓增生异常(myelodysplasia)、原位乳头状移行细胞癌(papillarytransitionalcellcarcinomain-situ)、具有过多原始细胞的难治性贫血(refractoryanemiawithexcessblasts)，以及施耐德乳头状瘤(schneiderianpapilloma)。伴随遗传性增生综合征发展为癌症的前驱病变的非限制性实例包括非典型痣综合征(atypicalmolesyndrome)、c细胞腺瘤病(ccelladenomatosis)及mea。后天性弥漫性增生(acquireddiffusehyperplasias)及弥漫性化生(diffusemetaplasias)的非限制性实例包括骨柏哲德氏病(paget’sdiseaseofbone)及溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis)。[0197]根据具体实施例，所述癌症是选自由以下所组成的群组：结肠直肠癌、胰腺癌、b细胞淋巴瘤、神经胶质瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、肾癌、鼻咽癌、膀胱癌、子宫癌、卵巢癌、乳腺癌及摄护腺癌。[0198]根据具体实施例，所述癌症是结肠直肠癌或胰腺癌。[0199]本发明的一些实施例的抗体可被施用于一生物体本身，或在药物组合物中与合适的载体或赋形剂混合。[0200]如本文中所使用，“药物组合物”是指本文中所述的一或多种活性成分与其他的化学成分，例如生理上合适的载体及赋形剂的制剂。药物组合物的目的是协助将一化合物施用于一生物体。[0201]本文中的术语“活性成分”是指产生生物学效应的抗cd24抗体。[0202]在下文中，可以互换使用的短语“生理学上可接受的载体”及“药学上可接受的载体”是指不会对生物体造成显着刺激，且不会消除所施用化合物的生物活性及性质的载体或稀释剂。此等短语下包括一佐剂。[0203]本文中的术语“赋形剂”是指一惰性物质，所述惰性物质被添加至一药物组合物中，以进一步协助一活性成分给药的。赋形剂的实例但不限于包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖及淀粉的类型、纤维素衍生物、明胶、植物油及聚乙二醇。[0204]可在“雷明顿制药科学”，麦克出版公司，伊斯顿，pa，最新版中找到用于药物配制及给药的技术，其通过引用并入本文中。[0205]例如，合适的给药途径可包括口服、直肠、经粘膜，尤其是经鼻、肠或肠胃外给药，包括肌肉内、皮下及髓内注射，以及鞘内、直接心室内、心脏内，例如进入右心室腔或左心室腔，进入冠状动脉、静脉内、腹腔内、鼻内或眼内注射。[0206]将药物输送至中枢神经系统(centralnervoussystem，cns)的常规方法包括：神经外科策略(例如，脑内注射或脑室内输注)；试剂的分子操作(例如，产生嵌合融合蛋白，所述嵌合融合蛋白包括针对一内皮细胞表面分子具有亲和力的转运肽与本身不能穿过bbb的试剂的组合)，以尝试利用bbb的内源性运输途径中的一者；旨在增加药剂的脂溶性的药理学策略(例如，将水溶性药剂与脂质或胆固醇载体结合)；以及通过高渗破坏(由甘露醇溶液注入颈动脉或使用诸如血管紧张素肽的生物活性剂所引起)对bbb完整性的暂时破坏。然而，此等策略中的各个策略皆具有局限性，例如与侵入性外科手术相关的固有风险、通过在内源性转运系统中固有的限制所施加的尺寸限制、与系统性施用的由载体基序所组成的嵌合分子相关的潜在不良的生物学副作用，所述载体基序可为在中枢神经系统之外活跃的载体基序，以及在bbb被破坏的大脑区域内可能存在脑损伤的风险，这使其成为一种次优的递送方法。[0207]或者，可以局部而非全身性方式施用药物组合物，例如，经由将药物组合物直接注射至患者的组织区域中。[0208]术语“组织”是指一有机体的一部分，所述有机体的一部分是由设计用于执行一项功能或多项功能的细胞所组成。实例包括，但不限于脑组织、视网膜、皮肤组织、肝组织、胰腺组织、骨、软骨、结缔组织、血液组织、肌肉组织、心脏组织、脑组织、血管组织、肾组织、肺组织、性腺组织、造血组织。[0209]本发明的一些实施例的药物组合物可通过本领域公知的方法制造，例如，通过常规的混合、溶解、制粒、糖衣锭制造、研磨、乳化、包封、包埋或冻干的方法。[0210]根据本发明的一些实施例所使用的药物组合物因此可使用一或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制，所述生理学上可接受的载体包括赋形剂及助剂，其有助于将活性成分加工成可药用的制剂。适当的制剂取决于所选择的给药途径。[0211]对于注射剂，药物组合物的活性成分可被配制在水溶液中，优选地在生理相容的缓冲液中，例如汉克溶液(hank’ssolution)、林格溶液(ringer’ssolution)或生理盐缓冲液。对于经粘膜给药，在制剂中使用适合待渗透的屏障的渗透剂。此种渗透剂在本领域中通常是已知的。[0212]对于口服给药，可通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体组合，以容易地配制药物组合物。此种载体使药物组合物能够被配制成片剂、丸剂、糖衣锭、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，以供一患者口服摄取。可使用固体赋形剂制备口服药用制剂，任选地研磨所得的混合物，及倘若需要，在添加合适的助剂之后，加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣锭芯。合适的赋形剂尤其是填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶(gumtragacanth)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、碳甲基纤维素钠；及/或生理上可接受的聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone，pvp)。倘若需要，可添加崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮(cross-linkedpolyvinylpyrrolidone)、琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。[0213]糖衣锭芯配有合适的涂层。为此目的，可使用浓缩的糖溶液，其可任选地含有阿拉伯胶(gumarabic)、滑石、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、卡波姆凝胶(carbopolgel)、聚乙二醇、二氧化钛、纤维漆溶液(lacquersolution)及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可被添加至片剂或糖衣锭包衣中，以用于识别或表征活性化合物剂量的不同组合。[0214]可以口服进行服用的药物组合物包括由明胶所制成的推入式胶囊(push-fitcapsule)以及由明胶及增塑剂所制成的软密封胶囊，所述增塑剂例如甘油或山梨糖醇。所述推入式胶囊可包含活性成分，所述活性成分与诸如乳糖的填充剂、诸如淀粉的粘合剂、诸如滑石或硬脂酸镁的润滑剂，以及任选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性成分可被溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡，或液体聚乙二醇。此外，可添加稳定剂。用于口服给药的所有制剂的剂量应适合所选择的给药途径。[0215]对于口腔给药，组合物可采用以常规的方式所配制的片剂或锭剂的形式。[0216]对于通过鼻吸入给药，根据本发明的一些实施例使用的活性成分方便地以气溶胶喷雾剂的形式从加压包装或喷雾器中递送，并使用一合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷(dichlorodifluoromethane)、三氯氟甲烷(trichlorofluoromethane)、二氯四氟乙烷(dichloro-tetrafluoroethane)或二氧化碳。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀门以输送计量的量来确定。可配制用于分配器的例如明胶的胶囊及药筒，其包含化合物及合适的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。[0217]本文所述的药物组合物可被配制用于肠胃外给药，例如，通过推注(bolusinjection)或连续输注。注射用制剂可以单位剂型存在，例如，在安瓿或多剂量容器中，任选地添加防腐剂。所述组合物可为在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，且可包含配方剂，例如悬浮剂、稳定剂及/或分散剂。[0218]用于肠胃外给药的药物组合物包括水溶性形式的活性制剂的水溶液。此外，活性成分的悬浮液可被制备成合适的油性或水基注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括诸如芝麻油的脂肪油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯(ethyloleate)、甘油三酸酯或脂质体。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液的粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠(sodiumcarboxymethylcellulose)、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，所述悬浮液亦可包含合适的稳定剂或增加活性成分的溶解度的试剂，以允许制备高度浓缩的溶液。[0219]或者，所述活性成分可为粉末形式，用于在使用前与一合适的载体进行组合，所述合适的载体例如无菌、无热原水基溶液(pyrogen-freewaterbasedsolution)。[0220]本发明的一些实施例的药物组合物亦可使用例如常规的栓剂基质而配制在直肠组合物例如栓剂或保留灌肠剂中。所述栓剂基质例如可可脂或其他的甘油酯[0221]适用于本发明的一些实施例的上下文中的药物组合物包括的组合物，其中包含以有效实现预期目的的量的活性成分。更具体地，一治疗有效量是指一活性成分的量，所述活性成分的量有效的预防、减轻或改善疾病(例如癌症)的症状或延长待被治疗的受试者的存活率。[0222]一治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本文中所提供的详细公开的内容。[0223]对于本发明的方法中所使用的任何制剂、治疗有效量或剂量可以最初从体外及细胞培养分析中进行估计。例如，可在动物模型中配制剂量，以达到所需的浓度或效价。此种信息可用于更准确地确定人体的有用剂量。[0224]本文所述的活性成分的毒性及治疗功效可通过体外、细胞培养物或实验动物中的标准药学步骤进行确定。从此等体外及细胞培养分析以及动物研究中所获得的数据可用于制定用于人类的一系列的剂量。所述剂量可根据所使用的剂型及所使用的给药途径而变化。个别的医生可根据患者的状况选择确切的配方、给药途径及剂量。(参见例如，芬格尔等人，1975，“治疗学的药理学基础”，第1章，p.1)。[0225]可单独地调整剂量及间隔，以提供足以诱导或抑制生物效应的活性成分的水平(最小有效浓度，minimaleffectiveconcentration，mec)。各个制剂的最小有效浓度(mec)有所不同，但可从体外数据进行估算。达到最小有效浓度(mec)所需的剂量将取决于个体特征及给药途径。检测分析可用于确定血浆浓度。[0226]取决于待治疗病症的严重性及反应性，给药可为单次给药或多次给药，治疗过程持续数天至数周，或直至实现治愈或实现疾病状态的减轻为止。[0227]当然，待施用的组合物的量将取决于被治疗的受试者、疾病的严重程度、施用的方式、开药医生的判断等。[0228]倘若需要，本发明的一些实施例的组合物可存在于包装或分配装置中，例如fda批准的试剂盒，所述试剂盒可包含一或多种含有活性成分的单位剂型。例如，所述包装可包括金属或塑料箔，例如泡罩包装。所述包装或分配装置可附有给药说明。所述包装或分配器亦可通过与容器相关联的通知，以由规范药品的制造、使用或销售的政府机构所规定的形式来提供，所述通知反映经由所述机构对组合物或人类或兽医给药的形式的批准。例如，此种通知可能是美国食品及药物管理局所批准的处方药标签或一批准的产品插页。如上文进一步所详述，亦可制备包含配制在一相容的药物载体中的本发明制剂的组合物，将其置放在一合适的容器中，并标记用于治疗指定病症。[0229]根据具体实施例，抗体可与其他已建立或实验性治疗方案组合施用于一受试者，以治疗与表达cd24的细胞相关的疾病(例如癌症)，包括但不限于镇痛剂、化疗剂、放疗剂、光疗及光动力疗法、细胞毒性疗法(调节)、激素疗法、免疫疗法、细胞疗法及本领域众所周知的其他治疗方案(例如，手术)。[0230]根据具体实施例，所述疗法选自由免疫疗法、化学疗法及放射疗法所组成的群组。[0231]因此，根据具体实施例，所述方法亦包括向所述受试者施予治疗所述疾病的疗法。[0232]根据本发明的一方面，提供一种制品，所述制品包括一包装材料，所述包装材料包装本文中所公开的抗体；以及提供一种疗法，所述疗法用于治疗与表达cd24的细胞相关的疾病。[0233]根据具体实施例，所述制品被确定用于治疗与表达cd24的细胞相关的疾病(例如癌症)。[0234]根据具体实施例，所述抗体及所述疗法被包装在单独的容器中。[0235]根据具体实施例，所述抗体及所述疗法被包装在一共同制剂中。[0236]可与本发明的具体实施例一起使用的抗癌剂的非限制性实例包括，但不限于，抗癌药阿西维辛(acivicin)；阿柔比星(aclarubicin)；盐酸阿考达唑(acodazolehydrochloride)；克罗宁(acronine)；阿霉素(adriamycin)；阿多唑啉(adozelesin)；阿德白介素(aldesleukin)；阿曲他明(altretamine)；安布霉素(ambomycin)；醋酸阿米坦酮(ametantroneacetate)；氨基谷氨酰胺(aminoglutethimide)；安吖啶(amsacrine)；阿那曲唑(anastrozole)；蒽霉素(anthramycin)；天冬酰胺酶(asparaginase)；阿斯珀林(asperlin)；阿扎胞苷(azacitidine)；阿泽替帕(azetepa)；阿唑霉素(azotomycin)；巴马司他(batimastat)；苯并德巴(benzodepa)；比卡鲁胺(bicalutamide)；盐酸比生群(bisantrenehydrochloride)；双萘芬二甲磺酸盐(bisnafidedimesylate)；比泽列辛(bizelesin)；硫酸博来霉素(bleomycinsulfate)；布雷奎那钠(brequinarsodium)；溴匹明(bropirimine)；白消安(busulfan)；放线菌素(cactinomycin)；月桂酮(calusterone)；卡拉酰胺(caracemide)；卡贝默(carbetimer)；卡铂(carboplatin)；卡莫司汀(carmustine)；盐酸卡比星(carubicinhydrochloride)；卡泽莱辛(carzelesin)；头孢呋辛(cedefingol)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；环霉素(cirolemycin)；顺铂(cisplatin)；克拉屈滨(cladribine)；角鲨烷醇甲磺酸盐(crisnatolmesylate)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；阿糖胞苷(cytarabine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；放线菌素(dactinomycin)；盐酸柔红霉素(daunorubicinhydrochloride)；地西他滨(decitabine)；右奥马铂(dexormaplatin)；地扎鸟嘌呤(dezaguanine)；地扎鸟嘌呤甲磺酸盐(dezaguaninemesylate)；二嗪酮(diaziquone)；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；盐酸多柔比星(doxorubicinhydrochloride)；屈洛昔芬(droloxifene)；屈洛昔芬柠檬酸盐(droloxifenecitrate)；丙酸屈莫司他酮(dromostanolonepropionate)；度唑霉素(duazomycin)；依达曲沙(edatrexate)；盐酸依氟鸟氨酸(eflornithinehydrochloride)；依沙芦星(elsamitrucin)；恩洛铂(enloplatin)；恩普氨酯(enpromate)；依匹哌啶(epipropidine)；盐酸表柔比星(epirubicinhydrochloride)；厄布洛唑(erbulozole)；盐酸埃索比星(esorubicinhydrochloride)；雌莫司汀(estramustine)；雌莫司汀磷酸钠(estramustinephosphatesodium)；依他硝唑(etanidazole)；依托泊苷(etoposide)；磷酸依托泊苷(etoposidephosphate)；依托托林(etoprine)；盐酸法曲唑(fadrozolehydrochloride)；法扎拉滨(fazarabine)；芬维a胺(fenretinide)；氟尿苷(floxuridine)；磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；氟西他滨(flurocitabine)；磷喹酮(fosquidone)；磷霉素钠(fostriecinsodium)；吉西他滨(gemcitabine)；盐酸吉西他滨(gemcitabinehydrochloride)；羟基脲(hydroxyurea)；盐酸伊达比星(idarubicinhydrochloride)；异环磷酰胺(ifosfamide)；伊莫磷辛(ilmofosine)；干扰素α-2a(interferonalfa-2a)；干扰素alfa-2b(interferonalfa-2b)；干扰素α-n1(interferonalfa-n1)；干扰素α-n3(interferonalfa-n3)；干扰素β-ia(interferonbeta-ia)；干扰素γ-ib(interferongamma-ib)；异丙铂(iproplatin)；盐酸伊立替康(irinotecanhydrochloride)；兰瑞肽醋酸盐(lanreotideacetate)；来曲唑(letrozole)；醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)；盐酸利阿唑(liarozolehydrochloride)；洛美曲索钠(lometrexolsodium)；洛莫司汀(lomustine)；盐酸氯索蒽醌(losoxantronehydrochloride)；马索普罗考(masoprocol)；美登素(maytansine)；盐酸甲氯乙胺(mechlorethaminehydrochloride)；醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)；醋酸美仑孕酮(melengestrolacetate)；马法兰(melphalan)；梅诺加里尔(menogaril)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；甲氨蝶呤钠(methotrexatesodium)；氯苯氨啶(metoprine)；美妥替哌(meturedepa)；米替度胺(mitindomide)；米托卡星(mitocarcin)；米托罗米(mitocromin)；米托洁林(mitogillin)；米托马星(mitomalcin)；丝裂霉素(mitomycin)；米托司培(mitosper)；米托坦(mitotane)；盐酸米托蒽醌(mitoxantronehydrochloride)；霉酚酸(mycophenolicacid)；诺考达唑(nocodazole)；诺加霉素(nogalamycin)；奥玛铂(ormaplatin)；奥昔兰(oxisuran)；紫杉醇(paclitaxel)；培门冬酶(pegaspargase)；佩利霉素(peliomycin)；喷他莫司汀(pentamustine)；硫酸哌洛霉素(peplomycinsulfate)；培磷酰胺(perfosfamide)；匹泊布罗曼(pipobroman)；哌泊舒凡(piposulfan)；盐酸吡罗蒽醌(piroxantronehydrochloride)；普利霉素(plicamycin)；普洛美坦(plomestane)；卟菲尔钠(porfimersodium)；波非霉素(porfiromycin)；泼尼莫司汀(prednimustine)；盐酸丙卡巴肼(procarbazinehydrochloride)；嘌呤霉素(puromycin)；盐酸嘌呤霉素(puromycinhydrochloride)；吡唑啉(pyrazofurin)；利波腺苷(riboprine)；罗格莱胺(rogletimide)；沙芬醇(safingol)；沙芬酚盐酸盐(safingolhydrochloride)；西莫司汀(semustine)；辛曲嗪(simtrazene)；司帕膦酸钠(sparfosatesodium)；司帕霉素(sparsomycin)；螺锗盐酸(spirogermaniumhydrochloride)；螺莫司汀(spiromustine)；螺铂(spiroplatin)；链黑菌素(streptonigrin)；链脲佐菌素(streptozocin)；磺氯苯脲(sulofenur)；泰利霉素(talisomycin)；紫杉醇(taxol)；特可加兰钠(tecogalansodium)；替加氟(tegafur)；盐酸泰洛蒽醌(teloxantronehydrochloride)；替莫泊芬(temoporfin)；替尼泊苷(teniposide)；特罗昔隆(teroxirone)；睾酮内脂(testolactone)；硝咪硫鸟嘌呤(thiamiprine)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；噻替帕(thiotepa)；噻唑呋喃(tiazofuirin)；替拉扎明(tirapazamine)；盐酸托泊替康(topotecanhydrochloride)；柠檬酸托瑞米芬(toremifenecitrate)；醋酸曲霉酮(trestoloneacetate)；磷酸三西立宾(triciribinephosphate)；曲美沙(trimetrexate)；曲美沙葡糖醛酸(trimetrexateglucuronate)；曲普瑞林(triptorelin)；盐酸妥布唑(tubulozolehydrochloride)；尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；乌瑞德帕(uredepa)；伐普肽(vapreotide)；维替泊芬(verteporfin)；长春碱硫酸盐(vinblastinesulfate)；长春新碱硫酸盐(vincristinesulfate)；文克斯汀(vindesine)；硫酸长春地辛(vindesinesulfate)；硫酸长春吡啶(vinepidinesulfate)；甘氨酸硫酸盐(vinglycinatesulfate)；硫酸长春新碱(vinleurosinesulfate)；酒石酸长春瑞滨(vinorelbinetartrate)；长春花碱硫酸盐(vinrosidinesulfate)；硫酸文唑烷(vinzolidinesulfate)；伏罗唑(vorozole)；泽尼铂(zeniplatin)；迭氮胸腺(zinostatin)；盐酸佐鲁比星(zorubicinhydrochloride)。额外的抗肿瘤剂包括在第52章，抗肿瘤剂(保罗卡拉布雷西及布鲁斯a.查布纳)，以及古德曼及吉尔曼的“治疗学的药理学基础”，第八版，1990，麦格劳-希尔公司(卫生专业部)中所公开的彼等。[0237]根据具体实施例，抗癌剂包含抗体。[0238]此类抗体的非限制性实例包括利妥昔单抗(rituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、依度可洛单抗(edrecolomab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、伊布单抗(ibritumomab)、帕尼单抗(panitumumab)、贝利木单抗(belimumab)、贝利木单抗(belimumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、博纳吐单抗(blinatumomab)、布洛妥韦单抗(blontuvetmab)、布伦妥昔单抗维多丁(brentuximabvedotin)、卡妥昔单抗(catumaxomab)、西妥尤单抗(cixutumumab)、达珠单抗(daclizumab)、阿达木单抗(adalimumab)、贝洛妥昔单抗(bezlotoxumab)、西妥珠单抗博加妥(citatuzumabbogatox)、达雷妥尤单抗(daratumumab)、地妥昔单抗(dinutuximab)、埃洛珠单抗(elotuzumab)、厄妥昔单抗(ertumaxomab)、依他珠单抗(etaracizumab)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)、吉伦妥昔单抗(girentuximab)、耐妥尤单抗(necitumumab)、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、西妥昔单抗(siltuximab)、托西莫单抗(tositumomab)、纳武利尤单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、杜瓦鲁单抗(durvalumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)及伊匹单抗(ipilimumab)。[0239]如本文中所使用，术语“约”是指±10％[0240]术语“包括(comprises)”、“包括(comprises)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“具有”及其共轭词意指“包括但不限于”。[0241]术语“由…所组成”是指“包括并限于”。[0242]术语“基本上由…所组成”是指组合物、方法或结构可包括额外的成分、步骤及/或部分，但前提是额外的成分、步骤及/或部分不会实质性地改变请求保护的基本及新颖的特征组合物、方法或结构。[0243]除非上下文另有明确规定，如本文中所使用，单数形式“一(a)”、“一(an)”及“所述”包括复数引用。例如，术语“一化合物”或“至少一化合物”可包括多个化合物，包括其混合物。[0244]在整个本技术中，本发明的各种实施例可以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅是为了方便及简洁，不应理解作为对本发明范围的不灵活限制。因此，范围的描述应该被认为已经具体公开所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，对诸如1至6的范围的描述应该被认为具有具体公开的子范围，例如自1至3、自1至4、自1至5、自2至4、自2至6、自3至6等，以及所述范围内的单个数字，例如1、2、3、4、5及6。无论范围的宽度如何，其皆适用。[0245]无论何时在本文中指出数值范围，其意在包括在所指出的范围内的任何引用的数字(分数或整数)。短语“在”第一指示数字与第二指示数字“之间的范围(ranging)/范围(ranges)”及“范围(ranging)/范围(ranges)从”第一指示数字“至”第二指示数字在本文中可互换使用，且意在包括第一指示数字及第二指示数字，以及其之间的所有小数及整数。[0246]如本文中所使用，术语“方法”是指用于完成一给定工作的方式、手段、技术及步骤，包括但不限于通过化学、药理学、生物、生物化学及医学领域的从业人员已知或容易地从已知的方式、手段、技术及步骤所发展的彼等方式、手段、技术及步骤。[0247]如本文中所使用，术语“治疗”包括消除、实质上抑制、减缓或逆转病状的进展，实质上改善病症(病理学，例如癌症)的临床或美学症状或实质上防止病症(病理学，例如癌症)的临床或美学症状的出现。本领域技术人员将理解可使用各种方法及分析来评估病理学的发展，且相似地，可使用各种方法及分析来评估病理学(例如癌症)的减少、缓解或消退。[0248]根据具体实施例，治疗可经由肿瘤的体积的减少、肿瘤细胞的数量的减少、转移的数量的减少、预期寿命的增加，或与癌症状况相关的各种生理症状的改善来评估。[0249]当提及特定的序列表时，此种资料应理解为亦包括基本上对应于其互补序列的序列，包括微小序列变异、碱基缺失或碱基添加，所述微小序列变异、碱基缺失或碱基添加由例如定序错误、克隆错误或导致碱基取代的其他改变所导致，条件是此类变异的频率小于50个核苷酸中的1个，或者，小于100个核苷酸中的1个，或者，小于200个核苷酸中的1个，或者，小于500个核苷酸中的1个，或者，小于1000个核苷酸中的1个，或者，小于5000个核苷酸中的1个，或者，小于10000个核苷酸中的1个。[0250]应当理解，为了清楚起见，在单独实施例的上下文中描述的本发明的某些特征亦可在单一实施例中组合地提供。相反地，为了简洁起见，在单一实施例的上下文中描述的本发明的各种特征亦可单独地提供或以任何合适的子组合或适合于本发明的任何其他描述的实施例来提供。在各个实施例的上下文中所描述的某些特征不应被认为是彼等实施例的基本特征，除非实施例在无彼等元件的情况下是无效的。[0251]如上文所描述及在以下权利要求部分中请求保护的本发明的各种实施例及方面在以下的实例中找到实验上的支持。[0252]实例[0253]现在参考以下的实例，其与以上描述一起以非限制性方式说明本发明的一些实施例。[0254]通常，本文中所使用的命名法及本发明所使用的实验室方法包括分子的、生化的、微生物的及重组的dna技术。此等技术在文献中得到详尽的解释。参见，例如，“分子克隆：实验室手册”桑布鲁克等人，(1989)；“分子生物学中的当前方法”第i至iii卷；奥苏贝尔，r.m.，编辑(1994)奥苏贝尔等人，“当前分子生物学方法”，约翰威利及宋斯，巴尔的摩，马里兰州(1989)；珀巴尔，“分子克隆的实用指南”，约翰威利及宋斯，纽约(1988)；沃森等人，“重组的dna”，scientificamericanbooks，纽约；比伦等人(编辑)“基因组分析：实验室手册系列”，第1至4卷，冷泉港实验室出版社，纽约(1998)；美国专利第4,666,828号；第4,683,202号；第4,801,531号；第5,192,659号及第5,272,057号中所揭示的方法。；“细胞生物学：实验室手册”，第i至iii卷，希莉丝，j.e.，编辑(1994)；“动物细胞的培养-基本技术手册”，法莱徐尼、威利-利斯，n.y.(1994)，第三版；“当前免疫学方法”第i至iii卷，科利根j.e.编辑(1994)；斯蒂茨等人(编辑)，“基础及临床免疫学”(第8版)，阿普尔顿&朗格，诺沃克，ct(1994)；米雪儿及志木(编辑)，“细胞免疫学中的选定方法”，w.h.弗里曼及公司，纽约(1980)；可用的免疫分析在专利及科学文献中被广泛地描述，参见，例如，美国专利第3,791,932号；第3,839,153号；第3,850,752号；第3,850,578号；第3,853,987号；第3,867,517号；第3,879,262号；第3,901,654号；第3,935,074号；第3,984,533号；第3,996,345号；第4,034,074号；第4,098,876号；第4,879,219号；第5,011,771号及第5,281,521号；“寡核苷酸合成”给特，m.j.，编辑(1984)；“核酸杂交”，哈姆斯，b.d.，及希金斯s.j.，编辑(1985)；“转录及转译”，哈姆斯，b.d.，及希金斯sj，编辑(1984)；“动物细胞培养”，法来斯尼，r.i.，编辑(1986)；“固定的细胞及酶”irl出版社，(1986)；“分子克隆实用指南”珀巴尔，b.，(1984)及“酶学的方法”第1至317卷，学术出版社；“pcr方法：方法及应用的指南”，学术出版社，圣地亚哥，ca(1990)；马沙克等人，“蛋白质纯化及表征的策略-实验室课程手册”cshl出版社(1996)；所有此等皆通过引用并入本文中，如同在本文中完全阐述一样。在本文中提供其他一般参考文献。相信其中的方法在本领域中是众所周知的，且是为了方便读者而提供的。其中包含的所有信息通过引用并入本文中。[0255]实例1[0256]基因工程人源化抗cd24单克隆的抗体[0257]本发明人已经构建人源化抗cd24鼠swa11mab的几种衍生物(下文表1)。随后，通过基因工程开发数种抗体，从大的(完整的igg)至小的(scfv及fab)，包括非武装(武装)及接合的衍生物(图1)。[0258]采用生物资讯的方法来选择应作为框架供体的最佳人类可变域。一般来说，人性化是基于使用具有最大相似性的人类序列。然而，亦考虑其他的标准，例如所选的人类序列支持鼠抗体互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)环的规范结构的能力。[0259]首先，使用igblast，将由抗cd24swa11杂交瘤细胞所制备的细胞的rna所合成的vh及vkrt-pcr产物的序列与小鼠免疫球蛋白种系基因序列的数据库进行比对。发现swa11vh是衍生自vh36-60a1.85种系基因(genbank登录号：aj851868)，而swa11vk是衍生自8至30种系基因(genbank登录号：aj235948)。[0260]接下来，为了选择应作为框架供体的合适的人类可变结构域，使用igbalst将vh36-60a1.85及8至30的氨基酸序列与包含在genbank数据库中的人类抗体序列的整个库独立地比对。与人类免疫球蛋白基因的比较显示swa11vh基因与推断的人类vhiv家族种系v基因28*02(genbank登录号：m83133)的氨基酸序列具有高度的同一性。swa11vh与igvh-28*02的比对如图2a所示。swa11vk基因与推断的人类igk4-1*01氨基酸序列(genbank：登录号af017732)显示出高度的序列同一性。swa11vk与推断的人类igk4氨基酸序列的比对如图2b所示。[0261]随后，在dna水平上引入在swa11与28*02及1*01之间所发现的替换。此外，为了克隆至表达载体中，合成添加适当限制性位点的vh及vk基因。[0262]表1：构建的人源化抗cd24的抗体衍生物的描述。[0263][0264][0265]在下一步中，进行设计的人源化抗cd24的抗体的大规模的生产，所述人源化抗cd24的抗体在本文中称为huns17，以评估其在体外及体内的稳定性及活性。[0266]稳定性药代动力学研究显示所述抗体是稳定的(下文的图3及表2)。具体而言，人源化抗体的t1/2为5.2天，平均停留时间为9.2天，tmax为60分钟。[0267]所产生的抗体特异性地结合cd24及抑制细胞增殖的能力通过数种生物分析及各种细胞株，特别是人类结肠直肠癌及胰腺癌细胞株进行测试。结果证明经纯化的人源化抗体是功能性的，且对cd24具有高度的结合强度及选择性。具体而言，使用biacore分析(魏茨曼科学研究所)分析抗cd24衍生物的结合强度(例如亲和力)(图4)。将鼠亲本抗体与嵌合抗体及人源化抗体形式进行比较。亦比较多个ab的不同克隆及批次。在此等评估中，cd24抗原被捕获在传感器芯片的表面上，且不同的抗体是分析物。结果表明在人源化抗体与鼠抗体之间的差异是由于kd常数造成的。人源化抗体的解离速度较鼠抗体的解离速度快。然而，通过在芯片上捕获抗体来重复分析，而cd24抗原是流动的分析物。在此种情况下，人源化ab的kd为1.7x10-7(而鼠为3.27x10-8，嵌合mab为1.5x10-7)。[0268]此外，抗cd24人源化mab通过抗体依赖性细胞毒性(antibody-dependentcellularcytotoxicity，adcc)诱导细胞死亡(图5)。[0269]此外，使用人源化抗体进行急性静脉内最大耐受剂量(maximumtolerateddose，mtd)研究，以发现最高耐受剂量而不引起明显毒性，并评估动物的人源化抗体的近似浓度范围(下文的表3及图6a至图6b)。并未记录死亡率，亦未观察到显着的临床症状，例如嗜睡、体温过低、血管舒张或血管收缩、神经肌肉效应。此外，在全血细胞计数或病理检查中亦未发现差异。[0270]随后，在胰腺癌及前列腺癌的异种移植模型中评估体内抗cd24abs的治疗效果及功效。如图7所示，结果表明人源化抗体抑制肿瘤的发展及生长。[0271]总之，在人源化过程中的基因操作不会损害抗体的功能特性。[0272]表2：药代动力学(pk)研究结果[0273][0274]表3：急性静脉最大耐受剂量(mtd)评估的研究设计。[0275][0276][0277]实例2[0278]人源化抗cd24的单克隆抗体的体外噬菌体显示亲和力成熟[0279]为了了解重链及轻链中的何者对抗cd24的抗体的结合袋(bindingpocket)的贡献更大，使用噬菌体表现技术。为此，如下文所述，构建三个编码抗cd24及/或抗cd30的fab片段的质粒。第一个构建体包含人源化抗cd24人源化抗体的重链及轻链；第二个构建体包含抗cd30抗体的重链及人源化抗cd24抗体的轻链；第三个含有人源化抗cd24ab的重链及抗cd30ab的轻链(图8)。[0280]pcomb3x-h(cd24)l(cd24)质粒的构建：使用引子humswa11-fd-ncoi-for及humswa11-fd-stop-bspei-for(参见下文的表4)，从pcdna4-pcmv-teto2-igl-pcmv-teto2-igh(见上文的表1)扩增人源化vh结构域，且作为ncoi/bspei片段引入pcomb3x载体中，所得的载体命名为pcomb3x-h(cd24)。使用引子humswa11-l-sfii-for及humswa11-l-stop-xbai-rev(参见表4)，从pcdna4-pcmv-teto2-igl-pcmv-teto2-igh(见上文的表1)扩增人源化vl结构域下文)，且作为sfii/xbai片段引入pcomb3x-h(cd24)中间载体中，所得的载体命名为pcomb3x-h(cd24)l(cd24)(seqidno：15)。[0281]pcomb3x-h(cd30)l(cd24)质粒的构建：pcomb3x-h(cd30)l(cd24)质粒是通过ncoi及bspei分解pcomb3x-h(cd24)l(cd24)及pcomb3x-h(cd30)l(cd30)(海姆等人，mab，2009；莉拉等人，抗体，2018)的质粒，并将第二个切割产物克隆至第一个中；所得的载体命名为pcomb3x-h(cd30)l(cd24)(seqidno：16)。[0282]pcomb3x-h(cd24)l(cd30)质粒的构建：pcomb3x-h(cd24)l(cd30)质粒是通过sfii及xbai分解pcomb3x-h(cd24)l(cd24)及pcomb3x-h(cd30)l(cd30)的质粒，并将第二个切割产物克隆至第一个中；所得的载体命名为pcomb3x-h(cd24)l(cd30)(seqidno：17)。[0283]表4：引子的列表[0284][0285]随后，通过将各个fab与m13噬菌体的piii蛋白进行融合，将各个fab片段表现在噬菌体的表面上，各个融合蛋白显示为一单一拷贝。丝状噬菌体通过性线毛感染f 大肠杆菌(e.coli)。所述步骤是依照本哈尔等人(当前的免疫学规程，2002)中的描述进行。简而言之，在ytag培养基(补充有1％葡萄糖及100μg/ml氨苄青霉素的2yt培养基)中制备大肠杆菌(e.coli)tg-1细胞的指数培养物。通过向培养物中加入109个pfu的辅助噬菌体(m13ko7)来感染细胞，以拯救噬菌粒。第二天，将噬菌粒进行浓缩，并通过利用peg/nacl沉淀以除去任何可溶性抗体。随后，回收获救的噬菌体，并通过活计数以确定噬菌体的效价，及通过od检测进行确认。通过基于抗原的elisa(噬菌体elisa)检验三种fab衍生物与cd24的结合(图9)。[0286]如所预期，使用包含两个抗cd24链的pcomb3x-h(cd24)l(cd24)得到最高信号。然而，比较使用pcomb3x-h(cd30)l(cd24)及pcomb3x-h(cd24)l(cd30)所获得的信号表明抗cd24ab的重链对结合袋的贡献更大。此结果表明通过轻链的突变提高抗cd24结合强度的机会更高。[0287]因此，在下一步中，对人源化抗cd24轻链进行亲和力成熟步骤。[0288]为此，使用igblast进行序列分析，以发现轻链互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)多样性。进行生物资讯分析，并将所产生的abs与其他的100个成熟的mabs进行比较，以发现互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)环中发生变化的特定残基，即互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)多样性。对100个同源物进行搜寻。由于资料库的尺寸有限，仅在一或两个同源物中改变的氨基酸位点被忽略。设计三个库，各个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)中的一个(图10)。因此，计算各个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)的多样性(下文的表5)。[0289]表5：各个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)的多样性[0290][0291][0292]将设计的资料库送至(lifetechnologies)进行合成。值得注意的是，在第一个库中，cdr1及cdr2一起被修饰，而cdr3保持不变，而在第二个库中，仅cdr3被改变。利用sfii及bsiwi(neb，newenglandbiolabs)分解经扩增的资料库，并连接至pcomb3x-h(cd24)l(cd24)载体中。将连接反应转殖至大肠杆菌(e.coli)菌株tg1中，并通过稀释系列以检测转殖率。根据制造商(neb)的说明，使用带有t4dna连接酶的连接步骤进行连接。对于转殖，将100μl的胜任细胞悬液与50-100ngdna(连接的或质粒)进行混合，置于冷冻的13ml的聚丙烯管中，并在冰上培养30分钟。将细胞-质粒混合物在42℃的水浴中进行热休克1分钟，之后放回冰上2分钟。随后，在冰上进行热休克及冷却，将900μl的soc或lb培养基添加至含有胜任细胞及dna的试管中，并在37℃下以250rpm的转速培养60分钟。将大肠杆菌(e.coli)细胞接种至添加适当抗生素的lb琼脂平板上，并在37℃下培养过夜，以形成转殖细胞的菌落。[0293]转殖体的总数为1.45x107cfu。收获来自转殖盘的总细胞用于质粒的制备。[0294]亲和力成熟以两个步骤进行：互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)步行(两步骤选择)及噬菌体表现技术(在antibodyengineering，第38章，第540至545页，2001中描述)。[0295]对各个互补决定区(complementarity-determiningregion，cdr)资料库进行了盘洗循环，发现良好的潜在结合物。[0296]接下来，组合各个资料库的输出，以建立最终的组合资料库，如下所示：[0297](1)各个dna资料库利用psti及noti(neb)进行分解，且随后进行连接。[0298](2)连接产物通过乙醇沉淀进行纯化，所得的载体通过电穿孔引入xl-1电胜任细胞(自制胜任细胞)中。[0299]此产生约106个单独的克隆，此等克隆准备好利用辅助噬菌体(m13ko7)进行拯救，以建立用于亲和力选择的最终噬菌体抗体的资料库。[0300]随后，使用严格的压力选择条件(下文的表6)进行4个盘洗循环：[0301]表6：压力选择条件[0302][0303]在第三次及第四次盘洗循环之后，进行噬菌体elisa，以评估抗原结合及特异性的潜在结合物。简而言之，在无菌96孔盘(主盘)中挑选单个菌落，并在37℃下生长过夜。之后，将各个孔中的10μl转移至第二个96孔盘(救援盘)中，并使用elisa评估拯救的噬菌体的cd24的结合(图11)。由于亲和性选择通常导致非特异性噬菌体与特定噬菌体一起被分离，因此平行测试与无关的抗原(bsa)的结合。母盘用作通过噬菌体elisa所鉴定的阳性单克隆的克隆的来源，用于进一步操作。[0304]选择的阳性克隆通过噬菌体elisa及可溶性fabelisa再次验证。[0305]来自选定的已验证的克隆的dna被分离，且被送至进行定序，以确定新的抗cd24的抗体成熟衍生物的dna序列。[0306]在下一步中，本发明人构建用于诱导型表达及分泌系统的抗cd24人源化成熟mab表达载体(图12a至图12b)。为此，从pmaz-igh(huswa11)(seqidno：11)(上文的表1)扩增人源化igh(vh及ch1至ch3区)，并作为pmli/bsiwi片段引入pcdna4/to载体中。所得的中间载体被命名为pcdna4-hu-igh。从pmaz-igl(huswa11)(seqidno：12)(上文的表1)中扩增人源化igl(区域；vk及ck)，并将其引入利用aflii及acc65i酶(neb)所分解的作为aflii/bsrgi片段的pcdna4-hu-igh中间载体中。所得到的载体命名为pcdna4-tor-cmv-igl-sv40-igh。接下来，为了利用pcmv-teto2替换sv40启动子，从pcdna4-tor-cmv-igl-sv40-igh扩增pcmv-teto2。将扩增产物引入与draiii/pmli片段相同的载体中。所得到的载体命名为pcdna4-pcmv-teto2-igl-pcmv-teto2-igh(seqidno：28)。将经过成熟步骤的可变区序列送至优化过程(idt)，以在哺乳动物细胞中表达。被认为最佳密码子有助于实现更快的转译速率及高准确度。由于此等因素，预计转译选择在高度表达的基因中更强。所得到的合成片段利用ecorv blpi(neb)分解，并连接至利用相同酶切割的pcdna4-pcmv-teto2-igl-pcmv-teto2-igh质粒中。通过在特拉维夫大学的定序单元中进行定序，以验证所得到的质粒的序列。[0307]随后，评估所述的新系统表达及分泌成熟抗cd24衍生物的能力以及所得的mab识别及特异性地结合cd24抗原的能力。为此，通过蛋白质a琼脂糖(amershambiosciences)色谱法纯化含有上清液的抗体。简而言之，将培养上清液利用20倍加载缓冲液以1：20进行稀释，并以0.5ml/min的流速加载至蛋白质a柱上。用加载缓冲液彻底清洗柱子。结合的抗体利用0.1m柠檬酸(ph3.0)进行洗脱，并利用1mtris/hcl(ph9.0)进行中和。合并含有蛋白质的级分，利用2lpbs进行透析(4℃下，16小时)，进行无菌过滤，并储存在-20℃中。[0308]图13a至图13c显示通过基于抗原的elisa、全细胞elisa及facs分析所筛选出的具有代表性的潜在的候选者。对不同类型的肿瘤细胞进行细胞生长比较生长抑制分析(cellgrowthcomparativegrowthinhibitionanalysis)，其中包括表达cd24的三阴性乳腺癌、结肠直肠癌、膀胱、胰腺及神经母细胞瘤细胞株。图14显示具有代表性的结果。[0309]随后，使用磷酸钙方法，将293t-rex细胞与哺乳动物pcdna4-teto2-cmv-igl-teto2-cmv-igh及pegfp表达载体进行共转染。简而言之，将106个细胞接种至6孔盘中，转染48小时后，在生长培养基中含有1.2mg/mlg418的10cm盘中进行有限的稀释。通过荧光显微镜鉴定及检测表达gfp的稳定转染细胞，并进一步分析人源化ab的表达及分泌。检测在含有选择标记的培养基上生长的克隆的上清液的igg分泌：首先，通过荧光显微镜，根据绿色荧光强度来筛选稳定的克隆。选择表达最高水平的gfp蛋白的克隆，以用于进一步评估其分泌此等抗体的能力以及abs识别及特异性地结合cd24抗原的能力。[0310]对于各种成熟的抗体，选择最佳的克隆，以用于表达及分泌。总共选择八种潜在的成熟抗体。所有此等皆在293t-rex细胞中进行大规模的生产，并通过蛋白质a柱进行纯化。从各个克隆中的经纯化的ab的特征在于其特异性识别及结合cd24抗原的能力、结合强度、稳定性及其诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，adcc)及补体依赖性细胞毒性(complementdependentcytotoxicity，cdc)的能力以及药代动力学特性(下文图15a至图15d及表7)。[0311]此外，基于在第一次成熟过程中所分离的结合物的序列设计一额外的资料库，以便寻找额外的及可能的更好的结合物。为此目的，将亲本人源化抗体的序列与八种成熟的衍生物进行排列。随后，使用multalin软件进行多序列比对，以寻找定义为“热点”的位置(数据未显示)。接下来，设计包含此等基因座中的所有变化，但导致结合能力丧失的丢弃变化的一附加的资料库(图16a)。[0312]考虑到此等因素，设计由cdr1及cdr2突变所组成的一资料库。所述资料库的尺寸为4096，如图16b所示。简而言之，在使用引子对3 2及1 4(上文的表4)的两个pcr反应中，使用噬菌粒pcomb-humanizedab的dna作为模板，以改变vlcdr1序列。在使用引子1 2(上文的表4)的第二个pcr反应中。将pcr产物进行组合及组装。所述组装的片段用作一模板，所述模板使用引子对1 6(上文的表4)进行后续的pcr反应，并将噬菌粒pcomb-humanizedab的dna用作一模板，所述模板在pcr反应中使用取代vlcdr2序列的引子对2 5(上文的表4)。以同样的方式，使用引子1 2通过pcr以将pcr产物进行组合及组装(上文的表4)。[0313]所得到的资料库利用sfii bsiwi限制酶进行分解，并连接至利用相同酶切割的pcomb-humanizedab质粒中。之后通过乙醇沉淀进行纯化所述连接产物，并转殖至xl-1电胜任细胞中。[0314]随后，评估所得到的资料库的潜在结合物。挑选来自连接盘的单个菌落，并用于elisa。结果显示新资料库并不包含更好的结合物(数据未显示)。[0315]基于上文所呈现的结果，由于其结合亲和力、选择性及稳定性，选择在本文中称为ns17的单一纯化的人源化成熟抗cd24的抗体，以用于进一步分析。ns17抗体的vh及vl序列如图17所示。[0316]表7：相较于huns17，成熟的抗体ns17的药代动力学(pharmacokinetic，pk)研究的结果[0317][0318]*药代动力学(pharmacokineticpk)研究在scid小鼠中进行如下；scid雌性接受单次静脉注射5mg/kgns17(n＝12)。在以下时间点的pk终末时间点的情况下，从眶周窦采集血样：15及30分钟；60、75及90分钟、8及24小时；3、7、10、14、18、21、28天，并移至血清分离管中。各组的三只小鼠在各个时间点进行眶周采血，每只小鼠采集150μl的血液。通过elisa进行收集的血清中的mab的存在的评估及检测。[0319]实例3[0320]亲和力成熟的人源化抗cd24单克隆的抗体的抗肿瘤活性[0321]使用fda批准的正常的人体器官组织微阵列来表征在健康人体组织中的cd24的表达模式。根据fda指南纳入32种健康的人体器官，其中各个器官取自3位健康的人体。使用抗cd24抗体(接近swa11)检测在此等组织中的cd24的表达。如图18所示，绝大部分的健康组织并不表达cd24。然而，在发育中的大脑(posa2)及食道组织的特定层中检测到cd24的表达。[0322]相反的，包括胃肠道腺癌、膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌、rcc、胶质母细胞瘤、hcc、nsclc、卵巢癌、黑色素瘤在内的各种人类癌组织的数个肿瘤微阵列表明cd24在大部分的人类恶性肿瘤中高度地表达(图19)。[0323]swa11mab的结合表位及亲和力成熟的人源化ns17mab是非常独特的。使用uniprot(www.uniprot.org)进行大型同源性比较分析。观察250位具有不同身份百分比的人选。然而，在其当中皆不存在lap表位。图20给出一些实例。[0324]随后，在结肠直肠癌小鼠模型中测试在cho细胞中所产生的人源化成熟的ns17抗cd24的抗体对体内肿瘤生长的影响。雄性6至8周的无胸腺裸鼠被饲养在无菌笼中，并在无菌条件下进行处理。小鼠随意喂食。为了测试mab(在cho中产生)的治疗潜力，收获指数生长的ht29细胞，并以每注射0.1mlpbs5×106个细胞的最终浓度重新悬浮。在小鼠的背部的一部位皮下注射所述细胞。当可触及肿瘤(～0.3至0.5cm3)时，将小鼠随机分为三组并开始治疗。两种浓度(10及25mg/kg)的mab或pbs经由腹膜内注射给药，注射之间的间隔为3天。将小鼠称重，从治疗启始，利用卡尺检测肿瘤体积，并仔细地绘制结果。肿瘤体积计算为4/3π·a·b2。在实验结束时，移除肿瘤，并使用swa11鼠抗体进行蛋白质印迹分析。如图21所示，ns17以剂量依赖性方式抑制肿瘤生长。此外，肿瘤细胞中的cd24的表达水平的下调(由于内化作用)证实抗体确实到达肿瘤。[0325]使用两种衍生自患者的异种移植物(patient-derivedxenograft，pdx)模型进一步证实人源化成熟的ns17抗cd24的抗体的功效。在第一个实验中(图22a)，骨髓及肿瘤组织样本是取自头部及颈部，keytruda耐药的男性患者。将第3代的肿瘤移植至ngs小鼠上，此等小鼠利用供体干细胞(bm-cd34hsc)进行辐照及人源化。此研究表明，当经由静脉注射以1mg/kg的剂量给药时，相较于对照组，人源化成熟的ns17抗cd24的抗体减少肿瘤体积(》50％)(图22a)。[0326]利用championoncology实施第二个实验方案(图22c)。此次，供体在乙状结肠中患有原发性低分化结直肠腺癌(图22b)。此种低分化肿瘤表达高水平的cd24，因此被选为额外的pdx研究的供体(图22b)。从脐带血中分离出cd34 人类免疫细胞，并用于对利用175cgy全身照射亚致死辐射的雌性nog小鼠进行人源化。在人源化期的三个月中经由临床观察进行监控动物。在cd34 植入后第9周及第12周取出约150μl的外周血，以使用mcd45/hucd45/hucd3/hucd19标记评估人源化。使用购自biolegend的偶联抗体进行facs分析(championoncologyltd)，以检测此等标记。随后，来自供体的肿瘤细胞被皮下植入。一旦在移植后12周确认人源化，将来自供体的肿瘤细胞皮下植入小鼠体内。当足够的储备动物达到1.0至1.5cm3时，收获肿瘤，以重新植入研究前的动物中。研究前动物是将收获自非人源化饲养动物的肿瘤片段单侧地植入人源化小鼠的左侧。每只动物皆从一特定的传代批次中植入，并记录。在植入后7至10天开始记录各个实验的研究前肿瘤体积。当肿瘤达到80至200mm3的平均肿瘤体积时，根据肿瘤体积将动物匹配至治疗组或对照组中，并在第0天开始给药。[0327]在用人源化成熟ns17抗cd24的抗体以10mg/kg的剂量经由腹膜内注射进行治疗后，实现对肿瘤生长的显着抑制(图22c)。[0328]实例4[0329]亲和力成熟的人源化抗cd24单克隆的抗体的经吞噬作用介导的活性[0330]材料及方法：[0331]细胞培养：在37℃/5％co2下，将靶细胞(人类淋巴瘤细胞hl-60(ccl-240tm))保持在相应的完全生长培养基中，并定期传代培养。根据制造商的说明，在37℃/5％co2下，将人类淋巴瘤nalm6细胞(crl-3273tm)维持在rpmi1640完全生长培养基中。[0332]人类单核细胞衍生的巨噬细胞的制备：使用lymphopreptm(axis-shieldpocas，cat#as1114547)通过密度梯度离心法分离pbmc。随后，根据制造商的说明，使用人类泛单核细胞分离试剂盒(panmonocyteisolationkit)(miltenyibiotec，cat#130-096-537)纯化单核细胞。为了制备单核细胞衍生的巨噬细胞(monocytesderivedmacrophage，mdm)，将单核细胞以5x105个细胞/毫升的浓度接种在细胞培养基中，并通过巨噬细胞集落刺激因子(macrophagecolony-stimulatingfactor，m-csf)分化为单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)。通过流式细胞术验证在单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)上的特异性标记cd11b、cd14、cd45、cd64、cd163及cd206。[0333]用于检测cd24的流式细胞术：在胰蛋白酶作用之后，大约5.5x104个细胞在荧光激活的细胞分选缓冲液中进行洗涤。随后，在4℃下添加20μg/ml的抗cd24的抗体60分钟，随后利用facs缓冲液洗涤3次。加入异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，fitc)标记的绵羊抗人类igg(fitc)抗体(20μg/ml)，在4℃下避光放置30分钟。使用流式细胞仪(bdfacscalibur，使用flowjo7.6.1的数据分析)进行结合抗体的检测及分析。[0334]吞噬作用分析：人类淋巴瘤nalm6细胞与单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)进行共培养，并利用生成的人源化成熟ns17抗cd24的抗体进行处理。u5f9-g4(抗cd47mab)及人类igg分别用作阳性对照及阴性对照。使用各个mab的6剂的5倍稀释。为了量化抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependentcellularphagocytosis，adcp)效应，使用pkh26(sigma-aldrich，mini26-1kt)对目标nalm6细胞进行染色，并使用apc-抗cd11b抗体(miltenybiotech，130-091-241)标记单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)。对于pkh26及cd11b-apc，流式细胞术分析(bdfacscalibur，随后使用flowjo7.6进行数据分析)呈阳性的细胞被认为是含有靶细胞的单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)，其中发生吞噬作用。吞噬作用的百分比计算为双阳性细胞数与所有的pkh26阳性细胞数的比例。[0335]结果：[0336]抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependentcellularphagocytosis，adcp)是许多抗体疗法的作用机制之一。其为一高度调节的过程，抗体通过将其fc结构域连接至吞噬细胞上的特定受，体并引发吞噬作用，以消除结合的靶标。为此，使用facs筛选分析生成的人源化成熟ns17抗cd24的抗体对人类单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)所介导的吞噬作用的影响，并生成剂量依赖性曲线，以详细评估adcp效力。[0337]在第一步中，通过流式细胞术验证在目标人类淋巴瘤nalm6细胞上的cd242的表达，以及在制备的单核细胞衍生的巨噬细胞(monocyte-derivedmacrophage，mdm)上的cd11b、cd14、cd45、cd64、cd163及cd206的表达(图23a至图23b)。[0338]随后，检测利用生成的ns17抗cd24处理后的nalm6细胞的adcp。如图24所示，ns17mab诱导显着的及剂量依赖性的nalm6细胞吞噬作用。[0339]实例5[0340]双特异性抗cd24抗cd3抗体的产生[0341]材料及方法：[0342]双特异性t细胞接合体(bispecifict-cellengager，bite)的构建：人源化成熟ns17的vl及vh序列以及抗cd3(okt3)的vl及vh序列针对智人(人类)进行优化。在两个臂之间添加5个氨基酸或10个氨基酸的连接子。添加两个限制性位点，5’(ecori)及3’(xhoi)序列，经过序列验证，序列(seqidno：30及32)经由5’ecori及3’xhoi克隆至pcdna3.4(氨苄青霉素)。[0343]转染：根据制造商的步骤，使用expifectaminetm转染试剂盒(gibco)，将bite转染至expi293f细胞中。在各次的转染中，将7.5×107个细胞添加至在125毫升锥形瓶中的25.5ml的expi293表达培养基中。在过程结束时，各次的转染的最终体积约为30毫升。培养条件为37℃，8％co2的空气中，在约125rpm的轨道摇晃器上进行摇动。各次转染的总量为30μg质粒dna。[0344]转染步骤：[0345]-将30μg质粒dna稀释在opti-i减少的血清培养基中，总体积为1.5ml。[0346]-将81μl的expifectamine293试剂在opti-i培养基中稀释至总体积为1.5ml。混合物在室温下培养5分钟。[0347]-培养5分钟后，将稀释的dna添加至稀释的expifectamine293试剂中，以获得3ml的总体积。[0348]-混合物在室温下培养20分钟，之后加入至含有细胞的锥形瓶中。[0349]-培养20小时之后，将150μl的expifectamine293transfectionenhancer1及1.5ml的expifectamine293transfectionenhancer2添加至各个锥形瓶中。[0350]-转染后7天收获细胞。[0351]在ni-nta柱上进行纯化：根据制造商的说明(ge医疗保健)，使用histraphp预装柱(填充有nisepharose高性能，亲和性树脂)纯化bite衍生物。结合缓冲液：20mm磷酸钠、0.5mnacl、5mm咪唑，ph7.4。洗脱缓冲液：20mm磷酸钠、0.5mnacl、500mm咪唑，ph7.4。[0352]流式细胞术分析-使用ficollhistopaque(西格玛-奥尔德里奇)的密度梯度离心法分离pbmc。在荧光激活的细胞分选缓冲液中洗涤1x106个细胞。随后，在4℃下添加30μg/mlbite(seqidno：29或seqidno：31)抗体60分钟，之后利用facs缓冲液洗涤3次。在4℃的黑暗中加入二级抗体(20μg/ml)30分钟。使用流式细胞仪(bdcantoii，使用fcs表达的数据分析)进行结合的抗体的检测及分析。[0353]结果：[0354]双特异性t细胞接合剂(bispecifict-cellengager，bites)是一类人工的双特异性单克隆的抗体，在例如肿瘤相关的抗原与cd3之间形成一结合状态，从而引导t细胞活性对抗例如癌细胞独立于mhci或共刺激分子的存在。[0355]设计并生成包括ns17的vh及vl以及抗cd3抗体的vh及vl的两个bite分子，在其两个臂之间的连接子的长度不同(图25a)。第一个(seqidno：29)具有5个氨基酸连接子，第二个(seqidno：31)具有10个氨基酸连接子。[0356]将编码两种bite的序列(分别为seqidno：30或32)克隆至pcdna3.4载体中，在expi293细胞中表达并通过亲和性柱进行纯化。通过流式细胞术验证经纯化的bite结合至cd3 cd24 pbmc的能力(图25b)。[0357]尽管已经结合其特定实施例描述本发明，但显然许多替代、修饰及变化对于本领域技术人员来说将是显而易见的。因此，旨在涵盖落入所附权利要求的精神及广泛范围内的所有此等替代、修饰及变化。[0358]本说明书中提及的所有出版物、专利及专利申请按在此通过引用整体并入本说明书中，其程度如同各个单独的出版物、专利或专利申请案被具体且单独地指示通过引用并入本文中。此外，本技术中任何参考文献的引用或标识不应被解释为承认此种参考文献可用作本发明的现有技术。就使用章节的标题而言，其不应被解释为必然限制。此外，本技术的任何优先权文件在此通过引用的方式整体并入本文中。当前第1页12当前第1页12
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