绿萝花提取工艺及其应用的制作方法

1.本发明涉及绿萝花提取技术领域。更具体地说，本发明涉及一种绿萝花提取工艺及其应用。


背景技术：

2.绿萝花是一种藏药，产于西藏寒冷地带，性微寒，生长期只有40多天，西藏特有珍贵草本植物，只有西藏能生长，每年的10月底是绿萝花的采摘季节。绿萝花含有多种功效，除了用作药方里的药材，增加药剂的药效，治疗疾病以外，还经常用作茶汤里的伴侣。
3.通常通过煎煮、浸泡等方式获取绿萝花的药用成分，利用率较低，影响绿萝花药用活性成分的发挥。
4.虽然现有技术(如公告号为cn 105310918 b，发明名称为一种绿萝花提取物及其应用)记载有通过乙醇超声提取绿萝花的方法，但绿萝花的活性成分在有机溶剂中的溶解效果不同，通过现有技术的乙醇提取影响绿萝花的提取效果。


技术实现要素：

5.本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
6.本发明提供一种绿萝花提取工艺，其通过将醇提后的滤渣经热水水体，促进香豆素类等成分溶出，能有效提高绿萝花活性成分的提取效果，使香豆素类等成分经热水水提再醇提的效果好，获得较好的降血压效果。
7.为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种绿萝花提取工艺，其将绿萝花制成粉末，采用浓度为70～85％的乙醇溶液，按料液比为1:10～15g/ml，提取1-2.5小时，醇提液过滤，得第一滤液备用，滤渣用热水水提，水提取液过滤，得第二滤液，第二滤液与浓度为90-95％的乙醇按体积比为1：10-15混合均匀，静置后过滤收集醇沉溶液，醇沉溶液与第一滤液合并，蒸馏得到提取物。本技术中涉及的乙醇浓度百分数通常指体积分数。
8.优选的是，所述热水的温度为70-100℃，所述滤渣水提次数为2次，首次水提的滤渣与水的质量比为1：5，二次水提的滤渣与水的质量比为1：10，每次水提时间为1-2小时。
9.优选的是，静置时间为5-10小时。
10.优选的是，第一滤液经醇提次数为2次，首次醇提时间为1.5小时，二次醇提时间为1小时。
11.优选的是，绿萝花粉末由如下方法制备而成：将清洗干净的绿萝花，在避光环境下，进行真空冷冻干燥，干燥后在真空环境下粉碎得到绿萝花粉末。
12.优选的是，真空冷冻干燥的冷冻时间为1.5h，冷冻温度为-20℃，升华干燥时间为2h，升华干燥温度为45℃，真空度为-0.01mpa，粉碎粒径能过35目筛。
13.优选的是，绿萝花粉末在进行醇提前，还包括如下步骤：将绿萝花粉末置于非金属密闭容器中，通入负氢离子气体至密闭容器中，密闭容器中的氢离子气体浓度为6
×
105个/cm3，压力为0.1mpa，并使密闭容器内的非金属搅拌棒旋转1-2小时。
14.优选的是，在醇沉溶液与第一滤液合并蒸馏时，向溶液内循环通入负氢离子气体，负氢离子气体浓度为6
×
105个/cm3，负氢离子气体从蒸馏瓶底部通入，在蒸馏瓶底部的气管上均匀分布有多个出气孔，用于负氢离子气体从出气孔流入溶液中，使负氢离子气体混合在溶液中，然后冒出的气体从蒸馏瓶顶部抽出，形成循环。
15.本发明还提供了上述工艺提取绿萝花提取物的应用，其用于制备降血压药物中的应用。
16.本发明至少包括以下有益效果：
17.第一、本发明通过将醇提后的滤渣经热水水提，促进香豆素类等成分溶出，能有效提高绿萝花活性成分的提取效果，使香豆素类等成分经热水水提再醇提的效果好，获得较好的降血压效果。
18.第二、本发明在避光环境下进行真空冷冻干燥，减少绿萝花中的香豆素类、黄酮类等成分的氧化和挥发，有利于提高提取物的提取效果和活性。
19.第四、本发明通过在进行醇提前将绿萝花粉末与负氢离子气体混合，还原在粉碎过程中部分被氧化的香豆素类、黄酮类化合物，提高提取物的提取效果和活性。
20.第五、本发明通过向合并的蒸馏溶液内循环通入负氢离子气体，既可以提高蒸馏效率，又可以还原在提取过程中部分被氧化的香豆素类、黄酮类化合物，进一步提高提取物的提取效果和活性。
21.本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
22.下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
23.下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
24.需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
25.《实施例1》
26.一种绿萝花提取工艺，其包括：
27.步骤一、将清洗干净的绿萝花，在避光环境下，置于真空冷冻干燥机中，-20℃进行真空冷冻1.5h，然后45℃升华干燥2h，全程真空度为-0.01mpa，然后粉碎过35目筛得到绿萝花粉末；
28.步骤二、将绿萝花粉末与浓度为75％的乙醇溶液，在常温常压环境下，醇提2次，首次醇提的料液比为1:12g/ml，醇提时间为1.5小时，二次醇提的料液比为1:12g/ml，醇提时间为1小时，两次醇提液过滤液合并得第一滤液和滤渣；
29.步骤三、将滤渣用温度为80℃的热水水提，水提次数为2次，首次水提的滤渣与水的质量比为1：5，二次水提的滤渣与水的质量比为1：10，每次水提时间为1小时；两次水提取液过滤液合并得第二滤液，第二滤液与浓度为95％的乙醇按体积比为1：12混合均匀，混合液静置8小时，过滤收集醇沉溶液，醇沉溶液与第一滤液合并，蒸馏得到提取物。
30.实施例1提取物对降血压效果的动物实验如下：
31.1、实验大鼠的规格和饲养要求
32.健康雄性sd大鼠，36只，spf级，体重(175
±
30)g，所有实验动物均饲养于可控环境中，室温18～24℃、湿度40％～50％，实验期间动物自由进食、饮水，昼夜节律正常。
33.2、实验方法
34.①
建立高血压大鼠模型
35.健康雄性sd大鼠30只，适应性喂养1周，于造模前用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测量各大鼠尾动脉血压，重复测量3次，取其平均值并记录。采用“两肾一夹”法制备高血压大鼠模型。造模4周后，使30只大鼠满足收缩压(sp)﹥120mmhg且造模后血压比造模前高20mmhg以上，即为实验用高血压大鼠。
36.②
实验分组及给药方式
37.取上述造模成功的高血压大鼠30只，随机分为5组，每组6只，分别为模型对照组，阳性药对照组(卡托普利组)，提取物高剂量组，提取物中剂量组，提取物低剂量组；另设6只健康雄性sd大鼠做空白对照组。经4周建模成功，待大鼠sp稳定后，于给药前再用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测定大鼠清醒状态下的尾动脉血压。提取物高中低剂量组分别为5、10、15ml/kg，灌胃给药，卡托普利组剂量为7.0mg/kg，灌胃给药，模型对照组和空白对照组大鼠每日灌胃等量生理盐水，于第5周开始，每日给药1次，连续给药4周。其中，等量生理盐水为与腹腔给药量相同；本实验中选择卡托普利的剂量7.0mg/kg为实验筛选的最佳给药剂量。
38.3、血压测定
39.于造模前、造模第4周和给药第4周，分别用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测定大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压(sp)，重复测量3次，取其平均值，得到的数据详见表1。
40.表1：大鼠血压变化情况(mmhg)
41.[0042][0043]
注：给药前后自身血压比较，
△
p《0.05，
△△
p《0.01；与模型对照组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0044]
表1的数据体现了提取物能有效降低高血压大鼠的血压。建模成功的高血压大鼠的血压都达到高血压指标。经给药4周后，提取物高、中、低剂量组和卡托普利组均产生明显的降压作用，与模型对照组比较有显著性差异(p《0.01)，给药前后自身血压相比较，实施例1提取物高、中、低剂量组(5ml/kg、10ml/kg、15ml/kg)均有显著降低血压的作用。表1数据明显说明提取物应用在治疗高血压的药物中具有较好的降血压作用。
[0045]
《实施例2》
[0046]
一种绿萝花提取工艺，其包括：
[0047]
步骤一、将清洗干净的绿萝花，在避光环境下，置于真空冷冻干燥机中，-20℃进行真空冷冻1.5h，然后45℃升华干燥2h，全程真空度为-0.01mpa，然后粉碎过35目筛得到绿萝花粉末；
[0048]
步骤二、将绿萝花粉末与浓度为70％的乙醇溶液，在常温常压环境下，醇提2次，首次醇提的料液比为1:10g/ml，醇提时间为1.5小时，二次醇提的料液比为1:10g/ml，醇提时间为1小时，两次醇提液过滤液合并得第一滤液和滤渣；
[0049]
步骤三、将滤渣用温度为70℃的热水水提，水提次数为2次，首次水提的滤渣与水的质量比为1：5，二次水提的滤渣与水的质量比为1：10，每次水提时间为1小时；两次水提取液过滤液合并得第二滤液，第二滤液与浓度为90％的乙醇按体积比为1：10混合均匀，混合液静置5小时，过滤收集醇沉溶液，醇沉溶液与第一滤液合并，蒸馏得到提取物。
[0050]
《实施例3》
[0051]
一种绿萝花提取工艺，其包括：
[0052]
步骤一、将清洗干净的绿萝花，在避光环境下，置于真空冷冻干燥机中，-20℃进行真空冷冻1.5h，然后45℃升华干燥2h，全程真空度为-0.01mpa，然后粉碎过35目筛得到绿萝花粉末；
[0053]
步骤二、将绿萝花粉末与浓度为85％的乙醇溶液，在常温常压环境下，醇提2次，首次醇提的料液比为1:15g/ml，醇提时间为1.5小时，二次醇提的料液比为1:15g/ml，醇提时间为1小时，两次醇提液过滤液合并得第一滤液和滤渣；
[0054]
步骤三、将滤渣用温度为100℃的热水水提，水提次数为2次，首次水提的滤渣与水的质量比为1：5，二次水提的滤渣与水的质量比为1：10，每次水提时间为1小时；两次水提取液过滤液合并得第二滤液，第二滤液与浓度为95％的乙醇按体积比为1：15混合均匀，混合液静置10小时，过滤收集醇沉溶液，醇沉溶液与第一滤液合并，蒸馏得到提取物。
[0055]
《实施例4》
[0056]
一种绿萝花提取工艺，其包括：
[0057]
步骤一、将清洗干净的绿萝花，在避光环境下，置于真空冷冻干燥机中，-20℃进行真空冷冻1.5h，然后45℃升华干燥2h，全程真空度为-0.01mpa，然后粉碎过35目筛得到绿萝花粉末；
[0058]
步骤二、将绿萝花粉末置于非金属密闭容器中，通入负氢离子气体至密闭容器中，密闭容器中的氢离子气体浓度为6
×
105个/cm3，压力为0.1mpa，并使密闭容器内的非金属搅拌棒旋转1小时，得到处理后的绿萝花粉末与浓度为75％的乙醇溶液，在常温常压环境下，醇提2次，首次醇提的料液比为1:12g/ml，醇提时间为1.5小时，二次醇提的料液比为1:12g/ml，醇提时间为1小时，两次醇提液过滤液合并得第一滤液和滤渣；
[0059]
步骤三、将滤渣用温度为80℃的热水水提，水提次数为2次，首次水提的滤渣与水的质量比为1：5，二次水提的滤渣与水的质量比为1：10，每次水提时间为1小时；两次水提取液过滤液合并得第二滤液，第二滤液与浓度为95％的乙醇按体积比为1：12混合均匀，混合液静置8小时，过滤收集醇沉溶液，醇沉溶液与第一滤液合并，蒸馏得到提取物。
[0060]
实施例4提取物对降血压效果的动物实验如下：
[0061]
1、实验大鼠的规格和饲养要求
[0062]
健康雄性sd大鼠，24只，spf级，体重(175
±
30)g，所有实验动物均饲养于可控环境中，室温18～24℃、湿度40％～50％，实验期间动物自由进食、饮水，昼夜节律正常。
[0063]
2、实验方法
[0064]
①
建立高血压大鼠模型
[0065]
健康雄性sd大鼠24只，适应性喂养1周，于造模前用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测量各大鼠尾动脉血压，重复测量3次，取其平均值并记录。采用“两肾一夹”法制备高血压大鼠模型。造模4周后，使24只大鼠满足收缩压(sp)﹥120mmhg且造模后血压比造模前高20mmhg以上，即为实验用高血压大鼠。
[0066]
②
实验分组及给药方式
[0067]
取上述造模成功的高血压大鼠24只，随机分为4组，每组6只，分别为模型对照组，提取物高剂量组，提取物中剂量组，提取物低剂量组。经4周建模成功，待大鼠sp稳定后，于给药前再用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测定大鼠清醒状态下的尾动脉血压。提取物高中低剂量组分别为5、10、15ml/kg，灌胃给药，模型对照组大鼠每日灌胃等量生理盐水，于第5周开始，每日给药1次，连续给药4周。其中，等量生理盐水为与腹腔给药量相同。
[0068]
3、血压测定
[0069]
于造模前、造模第4周和给药第4周，分别用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测定
大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压(sp)，重复测量3次，取其平均值，得到的数据详见表2。
[0070]
表2：大鼠血压变化情况(mmhg)
[0071][0072][0073]
注：给药前后自身血压比较，
△
p《0.05，
△△
p《0.01；与模型对照组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0074]
表2的数据体现了提取物能有效降低高血压大鼠的血压。将建模成功的高血压大鼠经给药4周后，提取物高、中、低剂量组均产生明显的降压作用，与模型对照组比较有显著性差异(p《0.01)，给药前后自身血压相比较，实施例4提取物高、中、低剂量组(5ml/kg、10ml/kg、15ml/kg)均有显著降低血压的作用。本发明在醇提前将绿萝花粉末与负氢离子气体混合，还原在粉碎过程中部分被氧化的香豆素类、黄酮类等化合物，提高提取物的提取效果和活性，动物实验中的降血压效果显著提到。
[0075]
《实施例5》
[0076]
一种绿萝花提取工艺，其包括：
[0077]
步骤一、将清洗干净的绿萝花，在避光环境下，置于真空冷冻干燥机中，-20℃进行真空冷冻1.5h，然后45℃升华干燥2h，全程真空度为-0.01mpa，然后粉碎过35目筛得到绿萝花粉末；
[0078]
步骤二、将绿萝花粉末置于非金属密闭容器中，通入负氢离子气体至密闭容器中，密闭容器中的氢离子气体浓度为6
×
105个/cm3，压力为0.1mpa，并使密闭容器内的非金属搅拌棒旋转1小时，得到处理后的绿萝花粉末与浓度为75％的乙醇溶液，在常温常压环境下，醇提2次，首次醇提的料液比为1:12g/ml，醇提时间为1.5小时，二次醇提的料液比为1:12g/ml，醇提时间为1小时，两次醇提液过滤液合并得第一滤液和滤渣；
[0079]
步骤三、将滤渣用温度为80℃的热水水提，水提次数为2次，首次水提的滤渣与水的质量比为1：5，二次水提的滤渣与水的质量比为1：10，每次水提时间为1小时；两次水提取液过滤液合并得第二滤液，第二滤液与浓度为95％的乙醇按体积比为1：12混合均匀，混合
液静置8小时，过滤收集醇沉溶液，醇沉溶液与第一滤液合并，置于蒸馏瓶内，然后向溶液内循环通入负氢离子气体，负氢离子气体浓度为6
×
105个/cm3，负氢离子气体从蒸馏瓶底部通入，在蒸馏瓶底部的气管上均匀分布有多个出气孔，用于负氢离子气体从出气孔流入溶液中，使负氢离子气体混合在溶液中，然后冒出的气体从蒸馏瓶顶部抽出，形成循环的负氢离子气体，蒸馏得到提取物。
[0080]
实施例5提取物对降血压效果的动物实验如下：
[0081]
1、实验大鼠的规格和饲养要求
[0082]
健康雄性sd大鼠，24只，spf级，体重(175
±
30)g，所有实验动物均饲养于可控环境中，室温18～24℃、湿度40％～50％，实验期间动物自由进食、饮水，昼夜节律正常。
[0083]
2、实验方法
[0084]
①
建立高血压大鼠模型
[0085]
健康雄性sd大鼠24只，适应性喂养1周，于造模前用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测量各大鼠尾动脉血压，重复测量3次，取其平均值并记录。采用“两肾一夹”法制备高血压大鼠模型。造模4周后，使24只大鼠满足收缩压(sp)﹥120mmhg且造模后血压比造模前高20mmhg以上，即为实验用高血压大鼠。
[0086]
②
实验分组及给药方式
[0087]
取上述造模成功的高血压大鼠24只，随机分为4组，每组6只，分别为模型对照组，提取物高剂量组，提取物中剂量组，提取物低剂量组。经4周建模成功，待大鼠sp稳定后，于给药前再用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测定大鼠清醒状态下的尾动脉血压。提取物高中低剂量组分别为5、10、15ml/kg，灌胃给药，模型对照组大鼠每日灌胃等量生理盐水，于第5周开始，每日给药1次，连续给药4周。其中，等量生理盐水为与腹腔给药量相同。
[0088]
3、血压测定
[0089]
于造模前、造模第4周和给药第4周，分别用alc
–
nibp无创血压测定分析系统测定大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压(sp)，重复测量3次，取其平均值，得到的数据详见表3。
[0090]
表3：大鼠血压变化情况(mmhg)
[0091][0092]
注：给药前后自身血压比较，
△
p《0.05，
△△
p《0.01；与模型对照组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0093]
表3的数据体现了提取物能有效降低高血压大鼠的血压。将建模成功的高血压大鼠经给药4周后，提取物高、中、低剂量组均产生明显的降压作用，与模型对照组比较有显著性差异(p《0.01)，给药前后自身血压相比较，实施例5提取物高、中、低剂量组(5ml/kg、10ml/kg、15ml/kg)均有显著降低血压的作用。本发明在醇提前将绿萝花粉末与负氢离子气体混合，以及蒸馏时在溶液内循环通入负氢离子气体混合，能够进一步提高提取物的提取效果和活性，动物实验中的降血压效果进一步显著提到。
[0094]
采用硅胶柱色谱、sephadex lh-20和重结晶等分离手段，计算实施例1、4、5提取绿萝花中结香苷c和结香素的提取率，提取率＝提取物固定量中结香苷c或结香素的重量/提取物的固定量
×
100％，取提取物的固定量为100g，计算结果如下表4所示。
[0095]
表4：
[0096]
类别结香苷c提取率(％)结香素提取率(％)实施例16.397.52实施例49.848.73实施例511.9710.44
[0097]
由表4的数据明显发现，在醇提前将绿萝花粉末与负氢离子气体混合，以及蒸馏时在溶液内循环通入负氢离子气体混合，能够进一步提高提取物的提取效果。
[0098]
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改。