一种检测盐酸舒托必利中1，2-二氯乙烷溶剂残留的方法与流程

1.本发明涉及药物分析领域，更具体地，涉及一种检测盐酸舒托必利中1，2-二氯乙烷溶剂残留的方法。


背景技术：

2.1,2-二氯乙烷是一种工业上广泛使用的有机溶剂，它在室温下无色有类似氯仿气体的液体，有毒，具有慢性致癌作用，对人体健康有重大影响，也是中药检测指标之一。人用药品注册技术要求国际协调会(ich)允许的残留限度仅为0.0005％。大部分原料药的合成路线中尽量避免使用此类溶剂，但是仍有部分原料药的合成过程中要使用1,2-二氯乙烷作为反应溶剂。
3.盐酸舒托必利，具有中枢抗多巴胺作用。作用于多巴胺d2受体，为多巴胺受体阻断剂。其镇定作用较舒比利强，对躁狂、幻觉、妄想及精神运动性兴奋有抑制作用。本品与氯丙嗪、氟哌啶醇及锂相比具有作用速度快、强、毒副作用小，故在控制急性精神兴奋状态方面有特点。但是在盐酸舒托必利合成过程中会加入1,2-二氯乙烷作为溶剂，根据药典残留溶剂要求，其限度为5ppm，因此有必要检测盐酸舒托必利中1,2-二氯乙烷的含量，目前现有技术多采用火焰离子化检测器，响应度低。
4.如文献：顶空毛细管气相色谱法测定酚磺乙胺中乙醇及1,2-二氯乙烷残留量(易必新等，中国药师,2013,16(12):1824-1827)中提供了一种酚磺乙胺中1,2-二氯乙烷的分析方法，但该方法的1,2-二氯乙烷的定量限浓度为0.105μg/ml，灵敏度低。且目前还没有对盐酸舒托必利中1,2-二氯乙烷的检测技术的相关报道，因此，建立一种专属性、灵敏的分析方法，用于测量盐酸舒托必利中1,2-二氯乙烷含量，有效控制盐酸舒托必利的质量是本领域技术人员急需解决的问题。


技术实现要素：

5.本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种检测盐酸舒托必利中1，2-二氯乙烷溶剂残留的方法。本发明方法适用性强、灵敏度高，可以准确分析盐酸舒托必利中1,2-二氯乙烷的含量，提供一种高效的盐酸舒托必利药物质量控制方法，以确保盐酸舒托必利药品的安全性。
6.为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
7.本发明首先提供了一种检测盐酸舒托必利中1，2-二氯乙烷溶剂残留的方法，通过气相色谱法对盐酸舒托必利进行分析，获得色谱图以确定1,2-二氯乙烷的含量；具体包括如下步骤：
8.(1)制备空白溶液、对照溶液和供试品溶液；
9.(2)将空白溶液、对照溶液和供试品溶液采用顶空进样器进行前处理，加热至气-液平衡后，取顶空瓶上方气体注入气相色谱仪中，通过气相色谱法对盐酸舒托必利进行分析，获得色谱图以确定1，2-二氯乙烷的含量。
10.盐酸舒托必利的质量控制和检测本身就是本领域的技术难题，且本领域公知，针对同一种药物质控方法中的些微设计变化都带来检测结果的大不相同；此外，对于不同的药物及制剂，其中的化学成分千差万别，且药物成分略有不同会导致1，2-二氯乙烷的检测所面临的杂质成分大不相同，从而影响其检测的准确性，因此，不同药物或制剂中1，2-二氯乙烷的检测方法并无参考价值。本发明通过了大量的实验，对气相色谱条件进行摸索最终确定了适于盐酸舒托必利中1，2-二氯乙烷溶剂残留检测的较佳条件。
11.具体的，步骤(2)为将空白溶液、对照溶液和供试品溶液采用顶空进样器进行前处理，加热至气-液平衡后，用取样针分别吸取空白溶液、对照溶液和供试品溶液顶空瓶上方气体1.0ml，注入气相色谱仪中，进行程序升温，程序升温结束后，样品进入检测器进行测定并记录相应色谱图。
12.优选地，所述空白溶液的制备为：取等体积的二甲基亚砜(dmso)与纯化水混匀，即得空白溶液。
13.更优选地，所述空白溶液的制备为：取等体积的dmso与纯化水至顶空瓶中，密封，混匀，即得空白溶液。
14.优选地，所述对照溶液的制备为：取1,2-二氯乙烷加dmso稀释得1,2-二氯乙烷浓度为1.25mg/ml的第一对照储备液；取第一对照储备液加dmso稀释2500倍，即得第二对照储备液；取第二对照储备液加入等体积纯化水，混匀，即得对照溶液。
15.具体的，所述对照溶液的制备为：取1,2-二氯乙烷至容量瓶中加dmso稀释，混匀，即得1,2-二氯乙烷浓度为1.25mg/ml的第一对照储备液；取第一对照储备液至容量瓶中，用dmso稀释100倍，混匀，即得第二对照储备液；取第二对照储备液至容量瓶中，用dmso稀释25倍，混匀，即得第三对照储备液；取第三对照储备液至顶空瓶中，再加入等体积纯化水，密封，即得对照溶液。
16.优选地，所述供试品溶液的制备为：取供试品加入dmso溶解后，再加入与dmso等体积的纯化水，混匀，即得供试品溶液；所述供试品与dmso的用量比为100mg：1ml。
17.更优选地，所述供试品溶液的制备为：称取供试品于顶空瓶中，加入dmso溶解后加入与dmso等体积的纯化水，密封，混匀，即得供试品溶液。
18.优选地，所述气相色谱条件为：
19.顶空进样器条件：顶空进样瓶温60～65℃，保温时间25～30min，加压时间1.8～2.2min，取样针温度70～75℃，进样时间0.2～0.3min，循环时间27～30min，传输线温度80～85℃；
20.进样口温度170～175℃，进样量为1.0～1.2ml，分流比为1:1～2:1；
21.载气为氮气，流速为0.45～0.50ml/min；
22.程序升温：初始温度58～60℃，维持2～3min后，以9～11℃/min的速率升温至115～120℃后，再以28～30℃/min升温至210～220℃，并维持5～6min；
23.检测器：μecd检测器；
24.检测器温度为250～265℃，尾吹25～30ml/min，采样频率20～50hz；
25.所述色谱柱为db-624色谱柱，型号为30m
×
0.32mm
×
1.8μm。
26.更优选地，所述顶空进样器条件：顶空进样瓶温60℃，保温时间30min，加压时间2min，取样针温度70℃，进样时间0.2min，循环时间27min，传输线温度80℃，拔针时间0.4～
0.5min，平衡压力12～15psi。本发明控制顶空进样瓶温在该条件下，是综合考虑测试时间及准确度，顶空进样瓶温越高、蒸汽压越高、顶空气体的浓度越高，分析灵敏度就越高，但是过高的温度会导致某些组分的分解、氧化，还可能导致顶空气体的压力过高使系统漏气。
27.更优选地，所述顶空进样器条件：拔针时间0.4min，平衡压力15psi。
28.优选地，所述进样口温度170℃，分流比为1:1。本发明控制进样量和分流比在该条件下，是综合考虑对样品保留时间和峰面积以及相邻较近的峰的影响。若进样量过大，会造成分离效能下降，峰变形拖尾，不利于定量。
29.更优选地，所述进样量为1.0ml。
30.优选地，所述载气流速为0.50ml/min。本发明控制载气流速在该条件下，是考虑对样品测定峰面积的影响。若载气流速过大会导致峰面积较小，降低灵敏度。
31.优选地，所述程序升温：初始温度60℃，维持2min后，以10℃/min的速率升温至120℃后，再以30℃/min升温至220℃，并维持5min。本发明控制程序升温在该条件下，是综合考虑对物质的分离、分析结果的影响。初始温度要足够低，以使混合物中低沸点组分达到分离，但是温度太低会使柱效降低，分析时间加长；升温速率要兼顾分离度和分析速度，升温太快不利于分离，太慢会导致分析时间边长。
32.优选地，所述检测器温度为250℃，尾吹25ml/min，采样频率20～50hz。本发明控制尾吹在该条件下，是综合考虑分析方法对峰型以及灵敏度的影响，尾吹过小会使峰拖尾严重，而流量太大会降低灵敏度。
33.更优选地，所述采样频率20hz。
34.相对于现有技术，本发明实现了如下有益效果：
35.1.本技术分析方法对供试品进行顶空进样前处理，采用μecd检测器检测，准确测定盐酸舒托必利中1,2-二氯乙烷溶剂的含量，基于本发明，可以建立1,2-二氯乙烷的含量有效质量检测和控制方法，更好的提升盐酸舒托必利产品质量。
36.2.本技术通过选用μecd检测器进行检测，选定合适的程序升温参数，检测适用性强、灵敏度高，定量限限度为0.50ppm，符合药典要求，具有较好的实用性。
附图说明
37.图1为空白溶液气相色谱图；
38.图2为实施例1对照溶液第一针气相色谱图；
39.图3为实施例1对照溶液第二针气相色谱图；
40.图4为实施例1对照溶液第三针气相色谱图；
41.图5为实施例1对照溶液第四针气相色谱图；
42.图6为实施例1对照溶液第五针气相色谱图；
43.图7为实施例1对照溶液第六针气相色谱图；
44.图8为灵敏度溶液气相色谱图；
45.图9为定量限溶液第一针气相色谱图；
46.图10为定量限溶液第二针气相色谱图；
47.图11为定量限溶液第三针气相色谱图；
48.图12为供试品溶液第一针气相色谱图；
49.图13为供试品溶液第二针气相色谱图；
50.图14为实施例3对照溶液第一针气相色谱图；
51.图15为实施例3对照溶液第二针气相色谱图；
52.图16为供试品加标溶液第一针气相色谱图；
53.图17为供试品加标溶液第二针气相色谱图；
54.图18为甲醇峰归属溶液气相色谱图；
55.图19为乙醇峰归属溶液气相色谱图；
56.图20为二氯甲烷峰归属溶液气相色谱图；
57.图21为乙酸乙酯峰归属溶液气相色谱图；
58.图22为n,n-二甲基吡咯烷酮峰归属溶液气相色谱图；
59.图23为n,n-二甲基甲酰胺峰归属溶液气相色谱图；
60.图24为甲苯峰归属溶液气相色谱图。
具体实施方式
61.下面结合具体实施例对本发明做出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
62.以下各实施例中涉及的仪器及试剂包括：气相色谱仪agilent 7890a-g3440a；电子分析天平梅特勒-xa502du(十万分之一)；甲醇(色谱纯，科鲁德试剂)；乙酸乙酯(色谱纯，阿拉丁试剂上海有限公司)；乙醇(色谱纯，德国默克公司)；二氯甲烷(色谱纯，上海星可高纯溶剂有限公司)；n,n-二甲基甲酰胺(色谱纯，科鲁德试剂)；甲苯(分析纯，西陇科学股份有限公司)；甲基吡咯烷酮(色谱纯，阿拉丁试剂上海有限公司)；二甲基亚砜(色谱纯，德国默克公司)；1,2-二氯乙烷(色谱纯，麦克林试剂)，水为纯化水。
63.供试品盐酸舒托必利(批号：s503a-rd201902101r1)，购自广东东阳光药业有限公司。
64.实施例1系统适用性试验
65.一种检测盐酸舒托必利中1，2-二氯乙烷溶剂残留的方法系统适用性试验，包括如下步骤：
66.s1.空白溶液的制备：分别精密移取1ml dmso与1ml纯化水至20ml顶空瓶中，密封，混匀制得空白溶液；
67.s2.第一对照储备液的制备：取1,2-二氯乙烷125mg，至100ml容量瓶中，用dmso稀释至刻度，混匀，得到1,2-二氯乙烷浓度为1.25mg/ml的第一对照储备液；
68.s3.第二对照储备液的制备：精密移取1ml上述第一对照储备液至100ml容量瓶中，用dmso稀释至刻度，混匀，即得；
69.s4.第三对照储备液的制备：精密移取2ml上述第二对照储备液至50ml容量瓶中，用dmso稀释至刻度，混匀即得；
70.s5.对照溶液的制备：精密移取1ml上述第三对照储备液至20ml顶空瓶中，再精密加入1ml的纯化水，密封，即得；
71.s6.灵敏度溶液(30％对照溶液)的制备：精密移取3ml第三对照储备液至10ml容量
瓶中，用dmso稀释至刻度，混匀，移取上述溶液1ml至20ml顶空瓶中，再精密加入1ml纯化水，密封，混匀，即得；
72.s7.气相色谱的测定方法：将上述空白溶液、对照溶液和灵敏度溶液在顶空瓶中加热，至气-液平衡后，取空白溶液进样1针，灵敏度溶液进样1针，对照溶液6份各进样1针，进行程序升温，程序升温结束后，样品进入检测器进行测定并记录色谱图。报告灵敏度溶液中1,2-二氯乙烷的信噪比；对照溶液第一针中1,2-二氯乙烷与最近相邻峰之间的分离度，对照溶液6份各进样1针的1,2-二氯乙烷的峰面积、峰面积均值及其rsd值。结果如图1～8和表1所示：
73.所述气相色谱条件为：顶空进样瓶温60℃，保温时间30min，加压时间2min，取样针温度70℃，进样时间0.2min，循环时间27min，传输线温度80℃，拔针时间0.4min，平衡压力15psi。db-624色谱柱，型号为30m
×
0.32mm
×
1.8μm，进样口温度170℃，进样量为1ml，分流比为1:1，载气为氮气，流速为0.50ml/min，初始温度60℃，维持2min后，以10℃/min的速率升温至120℃后以30℃/min升温至220℃，并维持5min，检测器温度为250℃，尾吹25ml/min，采样频率20hz。
74.表1系统适用性结果
[0075][0076]
注：rs-1-rs-6代表对照溶液1-6针，rsd代表相对标准偏差即精密度，s/n代表信噪比。
[0077]
由图1～8和表1可以看出空白溶液对1,2-二氯乙烷的测定无背景干扰，灵敏度溶液中1,2-二氯乙烷的信噪比为113.6(≥10)，对照溶液第一针中1,2-二氯乙烷与最近相邻峰的分离度为16.47(≥1.5)，6份对照溶液各进1针的1,2-二氯乙烷的峰面积的rsd为1.84％(≤10.0％)，系统适用性均符合检测要求。
[0078]
实施例2定量限试验
[0079]
一种检测盐酸舒托必利中1，2-二氯乙烷溶剂残留的方法定量限试验，包括如下步骤：
[0080]
s1.空白溶液的制备：分别精密移取1ml dmso与1ml纯化水至20ml顶空瓶中，密封，摇匀制得空白溶液。
[0081]
s2.第一对照储备液的制备：取1,2-二氯乙烷125mg，至100ml容量瓶中，用dmso稀
释至刻度，摇匀，得到1,2-二氯乙烷浓度为1.25mg/ml的第一对照储备液；
[0082]
s3.第二对照储备液的制备：精密移取1ml上述第一对照储备液至100ml容量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，即得；
[0083]
s4.第三对照储备液的制备：精密移取2ml上述第二对照储备液至50ml容量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，即得；
[0084]
s5.定量限溶液的制备：移取1ml第三对照储备液于10ml容量瓶中，加入dmso至刻度，摇匀，移取1ml该溶液和1ml超纯水于20ml顶空瓶中，密封，配制3份。
[0085]
s6.气相色谱的测定方法：将上述空白溶液、定量限溶液在顶空瓶中加热，至气-液平衡后，取空白溶液进样1针，取定量限溶液连续进样3针，进行程序升温，程序升温结束后，样品进入检测器进行测定并记录色谱图。报告定量限溶液中1,2-二氯乙烷的峰面积、峰面积的rsd、信噪比(s/n)；计算1,2-二氯乙烷的定量限的浓度及该浓度相当于供试品溶液浓度的百分比。结果如图9～11和表2所示：
[0086]
所述气相色谱条件同实施例1中的条件。
[0087]
表2定量限结果
[0088][0089]
注：rsd代表相对标准偏差即精密度，s/n代表信噪比。
[0090]
由图9～11和表2可以看出，定量限溶液连续进样3次，1,2-二氯乙烷峰信噪比最小值为41.5(≥10)，符合要求；定量限溶液连续进样3次1,2-二氯乙烷峰面积的rsd值为3.61％(≤10.0％)；1,2-二氯乙烷定量限溶液浓度水平为0.025μg/ml，限度为0.50ppm，方法定量限满足检测要求。
[0091]
实施例3专属性试验
[0092]
一种检测盐酸舒托必利中1，2-二氯乙烷溶剂残留的方法专属性试验，包括如下步骤：
[0093]
s1.空白溶液的制备：分别精密移取1ml dmso与1ml纯化水至20ml顶空瓶中，密封，摇匀制得空白溶液。
[0094]
s2.第一对照储备液的制备：取1,2-二氯乙烷125mg，至100ml容量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，得到1,2-二氯乙烷浓度为1.25mg/ml的第一对照储备液；
[0095]
s3.第二对照储备液的制备：精密移取1ml上述第一对照储备液至100ml容量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，即得；
[0096]
s4.第三对照储备液的制备：精密移取2ml上述第二对照储备液至50ml容量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，即得；
[0097]
s4.对照溶液的制备：精密移取1ml第三对照储备液至20ml顶空瓶中，再精密加入1ml纯化水，密封，即得。
[0098]
s5.供试品溶液的制备：取供试品100mg，精密称定于20ml顶空瓶中，加入1mldmso溶解后加入1ml超纯水，密封，摇匀，即得；
[0099]
s6.100％供试品加标溶液的制备：取供试品100mg精密称定于20ml顶空瓶中，加入1ml第三对照储备液溶解后加入1ml超纯水，密封，摇匀，配制1份100％供试品加标溶液；
[0100]
s7.峰归属溶液的配制：分别移取1mldmso和1ml超纯水于至11个顶空瓶中，然后依次加入适量甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲苯、n,n-二甲基甲酰胺(dmf)和n,n-二甲基吡咯烷酮(nmp)，密封，摇匀，即得。
[0101]
s8.气相色谱的测定方法：将上述空白溶液、供试品溶液、对照溶液、100％供试品加标溶液和峰归属溶液在顶空瓶中加热，至气-液平衡后，空白溶液、供试品溶液、对照溶液、100％供试品加标溶液各进样2针，各个峰归属溶液各进样1针，进行程序升温，程序升温结束后，样品进入检测器进行测定并记录相应色谱图。报告空白溶液、供试品溶液、对照溶液、供试品加标溶液中1,2-二氯乙烷的保留时间、峰面积及与邻近峰的分离度，各个峰归属溶液中各待测溶剂的保留时间。结果如图1、图12～图24和表3所示：
[0102]
所述气相色谱条件同实施例1中的条件。
[0103]
表3专属性结果
[0104][0105]
注：n/a代表未出1,2-二氯乙烷峰。
[0106]
由图1、图12～图24和表3可以看出空白溶液和供试品溶液中1,2-二氯乙烷无干扰；供试品溶液、对照溶液、供试品加标溶液中1,2-二氯乙烷与相邻色谱峰的分离度最小值为13.93(≥1.5)，满足药典要求；供试品溶液或供试品加标溶液中1,2-二氯乙烷的保留时间与对照溶液一致；与供试品溶液相比，供试品加标溶液中1,2-二氯乙烷的峰面积有增加；说明方法专属性良好，适用于1,2-二氯乙烷残留检测。
[0107]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。