柱前衍生-HPLC检测发酵液中卡那霉素含量的方法与流程

技术特征：
1.一种柱前衍生-hplc检测发酵液中卡那霉素含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：a、制备卡那霉素对照品溶液和卡那霉素样品溶液；b、制备衍生溶液：将卡那霉素对照品溶液和卡那霉素样品溶液分别与衍生试剂溶液混合，摇匀后室温静置反应0.5-1h；然后将反应液加水稀释5倍，微孔滤膜过滤，分别得到卡那霉素对照品衍生溶液和卡那霉素样品衍生溶液，待测；c、采用hplc进行检测：将卡那霉素对照品衍生溶液和卡那霉素样品衍生溶液分别注入hplc，记录峰面积，采用外标法计算样品中卡那霉素的含量。同时，用卡那霉素的校正因子近似计算卡那霉素b的含量。2.根据权利要求1所述的一种柱前衍生-hplc检测发酵液中卡那霉素含量的方法，其特征在于：所述卡那霉素样品溶液为卡那霉素发酵液。3.根据权利要求1所述的一种柱前衍生-hplc检测发酵液中卡那霉素含量的方法，其特征在于：所述卡那霉素对照品溶液的浓度为0.4-2.0mg/ml；所述卡那霉素样品溶液的制备方法为：取均匀的卡那霉素发酵液样品，以3000-8000r/min离心10-40min，取上清液用纯化水稀释5-25倍，得到卡那霉素样品溶液。4.根据权利要求1所述的一种柱前衍生-hplc检测发酵液中卡那霉素含量的方法，其特征在于：所述衍生溶液的制备过程为，取卡那霉素对照品溶液和卡那霉素样品溶液各1ml，分别加入到10ml具塞比色管中，再等量加入衍生试剂溶液，摇匀后室温静置反应0.5-1h。将反应液加水稀释5倍，微孔滤膜过滤，即得到卡那霉素对照品衍生溶液和卡那霉素样品衍生溶液。5.根据权利要求4所述的一种柱前衍生-hplc检测发酵液中卡那霉素含量的方法，其特征在于：所述衍生试剂溶液为异硫氰酸苯酯、三乙胺、乙腈的混合溶液，其中异硫氰酸苯酯的浓度为0.5％，三乙胺的浓度为2％-8％。6.根据权利要求1所述的一种柱前衍生-hplc检测发酵液中卡那霉素含量的方法，其特征在于：所述色谱条件如下：流动相a：80％乙腈；流动相b：0.1mol/l乙酸钠溶液(用冰醋酸调节ph至6.5)-乙腈(93:7)；色谱柱：4.6*250mm c
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；进样量：10-50μl；柱温：30-40℃；流速：0.9-1.1ml/min；波长：254nm；梯度洗脱程序为：时间(分)流动相a％流动相b％0010014208024277324.05100031.31000
31.350100350100

技术总结
本发明提供了一种柱前衍生-HPLC检测发酵液中卡那霉素含量的方法，包括以下步骤：制备卡那霉素对照品溶液和样品溶液、制备衍生溶液、采用HPLC法进行检测、记录峰面积，采用外标法计算样品中卡那霉素的含量。本方法样品预处理步骤较为简单，衍生试剂用量较小，衍生条件温和，操作过程简便易控；通过优化色谱条件，更适于卡那霉素与发酵培养基成分完全分离，适用于对发酵液中卡那霉素含量及有关组分进行同时监测，从而为发酵过程调控提供指导。从而为发酵过程调控提供指导。从而为发酵过程调控提供指导。


技术研发人员：杜精精 张慧
受保护的技术使用者：河北圣雪大成制药有限责任公司
技术研发日：2021.11.25
技术公布日：2022/3/25