可吸收紫外线的凝胶微粒及制备方法和凝胶及防晒产品与流程

1.本技术涉及化妆品及护肤品技术领域，具体涉及可吸收紫外线的凝胶微粒及制备方法和凝胶及防晒产品。


背景技术：

2.紫外线是阳光中波长为10～400nm的光线。紫外线对促进在皮肤上合成维生素d和对骨组织的生成、保护均起到有益作用。但紫外线过量照射可导致皮肤中产生活性氧自由基，促使皮肤衰老。特别是uva，波长相比于uvb和uvc要高，其能量虽低，但穿透能力很强，可穿过大气层到达地球表面，而且可穿透皮肤的真皮层，对皮肤造成的伤害最大，且是可累积和不可逆转的。当皮肤受到紫外线过度照射后，表皮细胞首先受到伤害，例如活化酪胺酸酶、加速色素合成、破坏皮肤的保湿功能，皮肤变得干燥；真皮层中的弹力纤维、胶原蛋白和透明质酸受损，皮肤变得松弛、失去弹性、出现皱纹、提早衰老。此外，紫外线的强烈照射还会造成肌肤发炎、灼伤；严重时，则会变成色素性的皮肤癌等。近年来，由于臭氧层被破坏,地面受到紫外线辐射的强度增加，已经严重到影响人类的健康。防止紫外线过度照射成为人们广泛的需要。
3.目前，人们对于具有防晒功效的化妆品和护肤品的需求越来越大，具有防晒功能的物质也不断被开发。《化妆品安全技术规范》公布了27种可以使用的防晒剂，根据防晒机理的不同分为物理防晒剂和化学防晒剂。物理防晒剂的主要成分是：氧化锌、二氧化钛等，这些防晒剂涂抹到脸上后，通过反射、散射紫外线的方式阻隔紫外线到达皮肤。物理防晒剂的优点在于光稳定性强、防护范围广，物理防晒用的粒子不会渗入皮肤，对皮肤造成的负担比较小、不会刺激皮肤、安全性强，适合容易过敏的人。但是，基于物理防晒剂的产品一般质地较厚重，涂抹后容易泛白，而且防护能力相对较弱。
4.相比之下，化学防晒剂通过特定的光敏感基团吸收紫外线，在被阳光照射时，化学防晒剂的分子空间结构会发生变化，吸收阳光中紫外线的能量，转化为热量，其对某一波长范围的紫外线防护能力强，质地轻薄，产品透明感好。但是由于化学防晒剂分子有一定的溶解性，可通过化妆品中溶解媒介扩散至皮肤表面，易渗透入皮肤，特别是降解后的小分子，更容易被皮肤吸收。因此，长期使用化学防晒剂不但有损伤皮肤的风险，还可能产生依赖。


技术实现要素：

5.本技术提供一种可吸收紫外线的凝胶微粒及制备方法和凝胶及防晒产品，凝胶能够在不影响防晒剂吸收紫外线的同时，阻隔化学防晒剂与皮肤的直接接触，降低其对皮肤的刺激和不良影响。
6.根据本技术的一个方面，可吸收紫外线的凝胶微粒，包括：胶束、化学防晒剂分子、亲水性高分子；其中，胶束包裹一种或多种化学防晒剂分子，胶束与亲水性高分子交联构成凝胶网络。
7.根据本技术的一些实施例，胶束包括两亲性高分子；优选地，两亲性高分子为功能
修饰的天然亲水性高分子和/或合成两亲性高分子；更优选地，两亲性高分子选自f127、聚乙二醇-聚(乳酸-羟基乙酸)、聚乙二醇-聚己内酯、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-聚丁二烯、侧链疏水修饰的天然亲水性高分子。
8.根据本技术的一些实施例，亲水性高分子包括功能修饰的亲水性高分子；优选地，亲水性高分子为天然亲水性高分子和/或亲水性合成高分子；更优选地，天然亲水性高分子选自海藻糖、壳聚糖、萄聚糖、γ-聚谷氨酸、硫酸软骨素、明胶、透明质酸；更优选地，亲水性合成高分子选自聚乙二醇、聚丙烯酸、聚乙烯醇。
9.根据本技术的一些实施例，两亲性高分子与亲水性高分子分别修饰有以下功能化官能团对中的一种或多种，以形成共价键连接：碳碳双键-巯基、巯基-巯基、醛基-氨基、醛基-肼基、碳碳三键-叠氮、碳碳三键-巯基、双烯-亲双烯、以及nhs酯-羧基。
10.根据本技术的一些实施例，两亲性高分子与亲水性高分子中的功能化官能团的比例为0.5-1:1。
11.根据本技术的一些实施例，亲水性高分子的分子量为5000-300万，优选为4万-240万，优选为4万-40万。
12.根据本技术的一些实施例，所述化学防晒剂分子选自苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮-4、对氨基苯甲酸、4-甲基苄亚基樟脑、paba乙基己酯、丁基甲氧基二苯酰基甲烷、奥克立林、水杨酸乙基己酯、亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚、对甲氧基肉桂酸异戌酯、胡莫柳酯、乙基己基三嗪酮、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪、苯酮-3、甲氧基肉桂酸乙基己酯、对苯二亚甲基二樟脑磺酸中的一种或多种。
13.根据本技术的一些实施例，所述凝胶微粒的粒径为100nm-100um，优选为1-50um。
14.根据本技术的另一方面，提供一种可吸收紫外线的凝胶微粒的制备方法，包括：
15.将两亲性高分子和亲水性高分子分别进行功能化修饰；
16.使功能化修饰的两亲性高分子包裹化学防晒剂分子，得到包裹有防晒剂分子的胶束；
17.使亲水性高分子与胶束交联得到凝胶网络。
18.根据本技术的一些实施例，功能化修饰的亲水性高分子与胶束在磷酸盐缓冲液中交联。根据本技术的一些实施例，功能化修饰的亲水性高分子在磷酸盐缓冲液中的质量浓度为5％-40％，优选为10％-25％。
19.根据本技术的另一方面，提供一种可吸收紫外线的凝胶，包含上述的凝胶微粒。上述凝胶在制备防晒产品中的应用。
20.本技术提供的凝胶微粒可用于制备防晒产品，所述防晒产品包括喷雾剂、水剂、乳剂或霜剂等。一种防晒产品，包含上述凝胶微粒。
21.根据本技术的实施例，凝胶含有胶束交联结构，胶束内腔为疏水环境，可一定程度上固定有机防晒剂分子。胶束与亲水性高分子交联形成凝胶微粒，可进一步限制有机防晒剂的渗透。采用本技术的凝胶制备的防晒产品，一方面能够有效阻止有机防晒剂与皮肤接触；另一方面，亲水性高分子保水能力强，可中和防晒剂受到紫外光照后产生的热量，同时可清除自由基，保护皮肤。
附图说明
22.为了更清楚地说明本技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本技术的一些实施例。
23.图1示出根据本技术示例实施例的凝胶微粒的结构示意图。
24.图2示出根据本技术实施例制备的凝胶微粒的显微镜下形态图。
具体实施方式
25.下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
26.特别需要指出的是，针对本发明所做出的类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
27.本发明如未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用原料药或辅料，以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
28.根据本技术的技术构思，提供一种可吸收紫外线的凝胶微粒。凝胶微粒含有胶束，胶束内腔为疏水环境，可一定程度上固定有机防晒剂分子，同时胶束与亲水高分子交联构成稳定的网状结构。胶束与亲水性高分子交联形成的凝胶微粒，可进一步限制有机化学防晒剂的渗透。采用本技术的凝胶制备的防晒产品，一方面能够有效阻止防晒剂与皮肤接触；另一方面，亲水性高分子保水能力强，可中和防晒剂受到紫外光照后产生的热量，同时可清除自由基，保护皮肤。
29.下面对本技术进行详细说明。
30.化学防晒剂
31.本技术中使用的化学防晒剂没有限制，可以包括但不限于以下防晒剂分子中的一种或多种：苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮-4、对氨基苯甲酸、4-甲基苄亚基樟脑、paba乙基己酯、丁基甲氧基二苯酰基甲烷、奥克立林、水杨酸乙基己酯、亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚、对甲氧基肉桂酸异戌酯、胡莫柳酯、乙基己基三嗪酮、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪、苯酮-3、甲氧基肉桂酸乙基己酯、对苯二亚甲基二樟脑磺酸。
32.水杨酸乙基己酯作为常用紫外线吸收剂，防晒剂，用于防止紫外线对皮肤晒黑、晒伤并对光敏性皮炎有治疗作用。
33.包裹防晒剂分子的胶束
34.根据本技术示例性实施例，本技术中的胶束包括两亲性高分子。
35.例如，两亲性高分子包括但不限于f127、聚乙二醇-聚(乳酸-羟基乙酸)、聚乙二醇-聚己内酯、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-聚丁二烯、或侧链疏水修饰的天然亲水性高分子。
36.多个两亲性高分子的疏水端可形成疏水空腔，包裹防晒剂分子。
37.例如，pluronic f127是一种两亲性高分子材料，具体地为peo-ppo-peo两性三嵌
段聚合物。在水溶液中它们能自动形成类似双分子层结构，使疏水端埋藏在里侧。eo嵌段的亲水性强于po嵌段,所以在水中形成以po为内核、eo为壳层的胶束，即可形成疏水腔包裹住化学防晒剂，并在水性环境下自发组装成胶束。胶束的亲水端一侧可与例如侧链功能化的透明质酸等亲水高分子连接构成凝胶网络。
38.亲水性高分子
39.本技术中使用的亲水性高分子可包括天然亲水性高分子或亲水性合成高分子。例如，天然亲水性高分子可为但不限于透明质酸、海藻糖、壳聚糖、萄聚糖、γ-聚谷氨酸、硫酸软骨素、明胶；亲水性合成高分子可为但不限于聚乙二醇、聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚乙交丙交酯。
40.例如，透明质酸(ha)是由d-葡萄糖醛酸和n-乙酰氨基葡萄糖双糖单位构成的直链高分子酸性粘多糖。透明质酸广泛存在于动物组织细胞间质中，是生物体的天然组成物质，具有独特的流变学性质、润滑性、粘弹性、可塑性、抑菌性能和生物相容性，而且是目前自然界中发现的保水性最好的天然物质，在生物材料、医药和食品领域应用颇为广泛。
41.壳聚糖(cs)化学名称为聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-b-d葡萄糖，是从海洋生物提取的一种高分子活性成分，被誉为“人体第六生命要素”。由于具有安全无毒、抗菌性、强吸附力、抗氧化性、保湿性、可生物降解性等优势，壳聚糖材料被广泛运用于医药、食品、环保等领域，在创面修复、食品保鲜、污水净化等方面发挥重要作用。
42.可吸收紫外线的凝胶微粒
43.根据本技术实施例，两亲性高分子与亲水性高分子分别修饰以下功能化官能团对中的一种或多种，以形成共价键连接：碳碳双键-巯基，巯基-巯基，醛基-氨基，醛基-肼基，碳碳三键-叠氮，碳碳三键-巯基，双烯-亲双烯。
44.参见图1，根据本技术实施例的凝胶微粒包括胶束、化学防晒剂分子、亲水性高分子；胶束包裹一种或多种化学防晒剂分子，胶束与亲水性高分子交联构成凝胶网络。
45.根据一些实施例，凝胶微粒的粒径为100nm-100um，优选为1-50um；两亲性高分子与亲水性高分子中的功能化官能团的比例为0.5-1:1。
46.凝胶微粒的制备过程
47.将两亲性高分子和亲水性高分子进行功能化修饰
48.将两亲性高分子和亲水性高分子分别进行功能化修饰，功能化官能团可分别选自以下官能团对：碳碳双键-巯基、巯基-巯基、醛基-氨基、醛基-肼基、碳碳三键-叠氮、碳碳三键-巯基、双烯-亲双烯中的一种或几种。
49.制备包裹防晒剂的胶束
50.使用功能化修饰的两亲性高分子包裹化学防晒剂分子，得到包裹有防晒剂分子的胶束。例如，将功能化的两亲性高分子与防晒剂溶于乙腈或其他有机溶剂(二氯甲烷、三氯甲烷或乙醇等)，使用旋转蒸发仪除去有机溶剂，得到防晒剂与功能化的两亲性高分子的薄膜后，加入一定量的缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液)搅拌分散，得到包裹防晒剂的胶束；离心除去未被包裹的防晒剂，冻干后备用。
51.制备凝胶微粒
52.将亲水性高分子与包裹防晒剂的胶束交联得到凝胶网络。例如，将功能化修饰的亲水性高分子材料与包裹防晒剂的胶束溶解于缓冲液中，振荡混合后转移至含有乳化剂的
有机溶剂中。将所得溶液搅拌、离心收集凝胶微粒并使用去离子水透析，可得包裹防晒剂的胶束与亲水性高分子交联的凝胶微粒。
53.测定方法
54.1.胶束中功能性官能团含量测定
55.取部分干燥后的胶束，使用对应基团的定量检测方法测定单位质量胶束中功能性官能团的含量。
56.其中，巯基含量的测定依据ellman试剂法，醛基含量的测定依据盐酸羟胺法，双键含量的测定依据gb/t 601-2002和gb1676-81中碘量法，其它官能团含量的测定需要将胶束溶解后使用核磁共振进行氢谱分析。
57.2.修饰后亲水高分子中功能性官能团含量测定
58.取部分修饰后的亲水高分子材料，使用对应基团的定量检测方法测定单位质量中亲水高分子中功能性官能团的含量。
59.3.确认凝胶微粒制备是否成功
60.使用显微镜于20倍镜下观察溶液中微凝胶的形成是否成功。
61.4.凝胶微粒粒径测定
62.使用显微镜于20倍镜下拍照后，使用image j统计凝胶微粒的粒径。
63.5.凝胶紫外吸光能力检测
64.紫外分光光度计(tecan多功能荧光酶标仪)测定凝胶对紫外的吸光度。
65.6.凝胶稳定性的检测
66.将各个凝胶样品分别置于不同的温度下一段时间，取一定量凝胶溶液，经滤纸过滤后使用紫外可见分光光度计检测凝胶中包裹的防晒剂是否有渗漏。
67.7.凝胶对被紫外线照射的细胞保护能力检测
68.将凝胶与细胞共培养后，照射紫外线，通过检测照射后细胞的增殖能力，得出凝胶保护细胞的免受紫外线伤害的能力。
69.8、凝胶对人体皮肤的致敏性
70.通过斑贴实验，以产生红疹和瘙痒的严重程度判断致敏程度。
71.下面结合具体实施例对本技术做进一步说明。
72.一、凝胶微粒的制备实验
73.实施例1
74.(1)两亲性高分子f127功能化修饰
75.取1g f127置于100ml烧瓶中，在80℃真空干燥、过夜。将干燥后的f127冷却至室温，于冰浴条件下使用恒压漏斗滴加10ml二氯甲烷，待f127完全溶解后，将f127中羟基5倍摩尔数的丙烯酰氯溶于5ml二氯甲烷后缓慢滴加至烧瓶中，待温度上升至室温、持续反应48小时后，旋蒸除去大部分溶剂，使用冰乙醚沉降，真空干燥后得到双键修饰的f127(mf127)。
76.(2)包裹防晒剂胶束的制备
77.取100mg mf127与20mg水杨酸乙基己酯溶于15ml无水乙醇中，通过45℃旋蒸1.5小时除去无水乙醇，得到mf127和水杨酸乙基己酯薄膜。向烧瓶中加入40ml去离子水，于40℃搅拌1小时得到包裹水杨酸乙基己酯的胶束。未被包裹的水杨酸乙基己酯通过离心被分离。将胶束冷冻干燥后备用。
78.(3)亲水性高分子功能化修饰
79.取1g透明质酸钠(分子量为40万)溶于10ml去离子水中，加入透明质酸中羧基等当量的巯基乙胺和活化剂edc/nhs，避光通氮气反应24小时，将反应液转移至透析袋中避光透析3天，冻干后得到巯基修饰的透明质酸钠ha-sh。
80.(4)凝胶微粒的制备
81.称取0.15g司班80(乳化剂)溶于15ml甲苯溶液中。称取0.5g ha-sh溶解于2ml0.1mol/l ph为7.4的磷酸盐缓冲液中，称取胶束(双键总量与ha-sh中巯基含量为1:1)，震荡混合均匀。然后将混合液移入至甲苯溶液中，以1000rpm搅拌6小时后，离心收集凝胶。使用透析袋透析3天，得到包裹防晒剂的胶束交联透明质酸的凝胶微粒。
82.使用显微镜观察并拍照，在image j中统计所得凝胶微粒的平均粒径为2.71微米。
83.实施例2
84.步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于所用透明质酸钠的分子量为4万。所得凝胶微粒的平均粒径为2.68微米。
85.实施例3
86.步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于所用透明质酸钠的分子量为80万。所得凝胶微粒的平均粒径为4.27微米。
87.实施例4
88.步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于所用透明质酸钠的分子量为240万。所得凝胶微粒的平均粒径为9.12微米。
89.实施例5
90.步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于所用透明质酸钠的分子量为300万。所得凝胶微粒的平均粒径为13.59微米。
91.实施例6
92.步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于所用ha-sh为0.1g，即质量浓度为5％。所得凝胶微粒的平均粒径为19.42微米。
93.实施例7
94.步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于所用ha-sh为0.8g，即质量浓度为40％。所得凝胶微粒的平均粒径为3.83微米。
95.实施例8
96.步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于所用胶束总量按照双键与ha-sh中巯基含量比为0.5:1称取。所得凝胶微粒的平均粒径为7.33微米。
97.实施例9
98.步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于所用胶束总量按照双键与ha-sh中巯基含量比为0.8:1称取。所得凝胶微粒的平均粒径为4.17微米。
99.实施例10
100.(1)两亲性高分子f127功能化修饰
101.取1g f127置于100ml的烧瓶中，在80℃真空干燥、过夜。将干燥后的f127冷却至室温，于冰浴条件下使用恒压漏斗滴加10ml二氯甲烷，待f127完全溶解后，将f127中羟基5倍摩尔数的丙烯酰氯溶于5ml二氯甲烷后缓慢滴加至烧瓶中，待温度上升至室温、持续反应48
小时后，旋蒸除去大部分溶剂，使用冰乙醚沉降，真空干燥后得到双键修饰的f127(mf127)。
102.(2)包裹防晒剂胶束的制备
103.取100mg mf127与20mg水杨酸乙基己酯溶于15ml无水乙醇中，通过45℃旋蒸1.5小时除去无水乙醇，得到mf127和水杨酸乙基己酯薄膜。向烧瓶中加入40ml去离子水，于40℃搅拌1小时得到包裹水杨酸乙基己酯的胶束。将未被包裹的水杨酸乙基己酯通过离心分离。胶束冷冻干燥后备用。
104.(3)亲水性高分子功能化修饰
105.取1g羧甲基壳聚糖(分子量为55万)溶于10ml去离子水中，加入壳聚糖氨基等当量的巯基乙酸和活化剂edc/nhs，避光通氮气反应24小时，将反应液转移至透析袋中避光透析3天，冻干后得到巯基修饰的羧甲基壳聚糖cmc-sh。
106.(4)凝胶微粒的制备
107.称取0.15g司班80(乳化剂)溶于15ml甲苯溶液中。称取0.5g cs-sh溶解于2ml磷酸盐缓冲液中，称取胶束(双键总量与cmc-sh中巯基含量为1:1)，震荡混合均匀。然后将混合液加入至甲苯溶液中，以1000rpm搅拌6小时后，离心收集凝胶。使用透析袋透析3天，得到包裹防晒剂的胶束交联羧甲基壳聚糖的凝胶微粒。
108.所得凝胶微粒的平均粒径为34.5微米。
109.实施例11
110.(1)两亲性高分子peg-pcl功能化修饰
111.取1g聚乙二醇-b-聚己内酯(peg-pcl)于100ml烧瓶中，在60℃真空干燥过夜。将干燥后的peg-pcl冷却至室温，于冰浴条件下，使用恒压漏斗滴加10ml dmso，待peg-pcl完全溶解后，将peg-pcl中羟基5倍摩尔数的丙烯酰氯溶于5ml dmso后缓慢滴加至烧瓶中，待温度上升至室温、持续反应48小时后，停止反应，使用透析袋透析3天后，冷冻干燥得到双键修饰的peg-pcl(mpeg-pcl)。
112.(2)包裹防晒剂胶束的制备
113.取100mg mpeg-pcl与20mg水杨酸乙基己酯溶于15ml乙腈中，通过37℃旋蒸1.5小时除去乙腈，得到mpeg-pcl和水杨酸乙基己酯薄膜。向烧瓶中加入40ml去离子水，于40℃搅拌1小时得到包裹水杨酸乙基己酯的胶束。未被包裹的水杨酸乙基己酯通过离心分离。胶束冷冻干燥后备用。
114.(3)亲水性高分子功能化修饰
115.取1g透明质酸钠(分子量为40万)溶于10ml去离子水中，加入透明质酸中羧基等当量的巯基乙胺和活化剂edc/nhs，避光通氮气反应24小时，将反应液转移至透析袋中避光透析3天，冻干后得到巯基修饰的透明质酸钠(ha-sh)。
116.(4)凝胶微粒的制备
117.称取0.15g司班80(乳化剂)溶于15ml甲苯溶液中。称取0.5g ha-sh溶解于2ml磷酸盐缓冲液中，称取胶束(双键总量与ha-sh中巯基含量为1:1)，震荡混合均匀。然后将混合液加入至甲苯溶液中，以1000rpm搅拌6小时后，离心收集凝胶。使用透析袋透析3天，得到包裹防晒剂的胶束交联透明质酸的凝胶微粒。所得凝胶微粒的平均粒径为4.29微米。
118.实施例12
119.(1)两亲性高分子f127功能化修饰
120.取1g f127于100ml烧瓶中，在80℃真空干燥过夜。将干燥后的f127冷却至室温，使用恒压漏斗滴加10ml二氯甲烷，待f127完全溶解后，将f127中羟基的5倍摩尔数的巯基乙酸溶于5ml二氯甲烷后，再使用等摩尔数的n’n-羰基二咪唑活化后(n’n-羰基二咪唑与巯基乙酸中的羧基反应形成高活性的中间体，中间体可与f127中的羟基高效反应)将其缓慢滴加至烧瓶中，持续反应48小时后，旋蒸除去大部分溶剂，使用冰乙醚沉降，真空干燥后得到巯基修饰的f127(f127-sh)。
121.(2)包裹防晒剂胶束的制备
122.取100mg f127-sh与20mg水杨酸乙基己酯溶于15ml无水乙醇中，通过45℃旋蒸1.5小时除去无水乙醇，得到mf127和水杨酸乙基己酯薄膜。向烧瓶中加入40ml去离子水，于40℃搅拌1小时得到包裹水杨酸乙基己酯的胶束。未被包裹的水杨酸乙基己酯通过离心分离。将胶束冷冻干燥后备用。
123.(3)亲水性高分子功能化修饰
124.取1g透明质酸钠(分子量为40万)溶于10ml去离子水中，加入透明质酸中羧基等当量的巯基乙胺和活化剂edc/nhs，避光通氮气反应24小时，将反应液转移至透析袋中避光透析3天，冻干后得到巯基修饰的透明质酸钠ha-sh。
125.(4)凝胶微粒的制备
126.称取0.15g司班80(乳化剂)溶于15ml甲苯溶液中。称取0.5g ha-sh溶解于2ml磷酸盐缓冲液中，称取胶束(胶束巯基总量与ha-sh中巯基含量为1:1)，震荡混合均匀。然后将混合液加入至甲苯溶液中，以1000rpm搅拌6小时后，离心收集凝胶。使用透析袋透析3天，得到包裹防晒剂的胶束交联透明质酸的凝胶微粒。
127.所得凝胶微粒的平均粒径为3.27微米。
128.实施例13
129.(1)两亲性高分子f127功能化修饰
130.取1g f127置于100ml烧瓶中，在80℃真空干燥、过夜。将干燥后的f127冷却至室温，于冰浴条件下，使用恒压漏斗滴加10ml二氯甲烷，待f127完全溶解后，将f127中羟基5倍摩尔数的丙烯酰氯溶于5ml二氯甲烷后缓慢滴加至烧瓶中，待温度上升至室温、持续反应48小时后，旋蒸除去大部分溶剂，使用冰乙醚沉降，真空干燥后得到双键修饰的f127(mf127)。
131.(2)包裹防晒剂胶束的制备
132.取100mg mf127与20mg水杨酸乙基己酯溶于15ml无水乙醇中，通过45℃旋蒸1.5小时除去无水乙醇，得到mf127和水杨酸乙基己酯薄膜。向烧瓶中加入40ml去离子水，于40℃搅拌1小时得到包裹水杨酸乙基己酯的胶束。未被包裹的水杨酸乙基己酯通过离心分离。将胶束冷冻干燥后备用。
133.(3)亲水性高分子功能化修饰
134.取1g海藻酸钠(分子量为48万)溶于10ml去离子水中，加入海藻酸钠中羧基等当量的巯基乙胺和活化剂edc/nhs，避光通氮气反应24小时，将反应液转移至透析袋中避光透析3天，冻干后得到巯基修饰的海藻酸钠alg-sh。
135.(4)凝胶微粒的制备
136.称取0.15g司班80(乳化剂)溶于15ml甲苯溶液中。称取0.5g alg-sh溶解于2ml磷酸盐缓冲液中，称取胶束(双键总量与alg-sh中巯基含量为1:1)，震荡混合均匀。然后将混
合液加入至甲苯溶液中，以1000rpm搅拌6小时后，离心收集凝胶。使用透析袋透析3天，得到包裹防晒剂的胶束交联海藻酸的凝胶微粒。
137.所得凝胶微粒的平均粒径为2.36微米。
138.实施例14
139.(1)两亲性高分子peg-pla功能化修饰
140.取1g聚乙二醇-b-聚乳酸(peg-pla)于100ml烧瓶中，在60℃真空干燥过夜。将干燥后的peg-pla冷却至室温，于冰浴条件下，使用恒压漏斗滴加10ml dmso，待peg-pla完全溶解后，将peg-pla中羟基5倍摩尔数的丙烯酰氯溶于5ml dmso后缓慢滴加至烧瓶中，待温度上升至室温、持续反应48小时后，停止反应，使用透析袋透析3天后，冷冻干燥得到双键修饰的peg-pla(mpeg-pla)。
141.(2)包裹防晒剂胶束的制备
142.取100mg mpeg-pla与20mg水杨酸乙基己酯溶于15ml乙腈中，通过37℃旋蒸1.5小时除去乙腈，得到mpeg-pla和水杨酸乙基己酯薄膜。向烧瓶中加入40ml去离子水，于40℃搅拌1小时得到包裹水杨酸乙基己酯的胶束。未被包裹的水杨酸乙基己酯通过离心分离。胶束冷冻干燥后备用。
143.(3)亲水性高分子功能化修饰
144.取1g透明质酸钠(分子量为40万)溶于10ml去离子水中，加入透明质酸中羧基等当量的巯基乙胺和活化剂edc/nhs，避光通氮气反应24小时，将反应液转移至透析袋中避光透析3天，冻干后得到巯基修饰的透明质酸钠(ha-sh)。
145.(4)凝胶微粒的制备
146.称取0.15g司班80(乳化剂)溶于15ml甲苯溶液中。称取0.5gha-sh溶解于2ml磷酸盐缓冲液中，称取胶束(双键总量与ha-sh中巯基含量为1:1)，震荡混合均匀。然后将混合液加入至甲苯溶液中，以1000rpm搅拌6小时后，离心收集凝胶。使用透析袋透析3天，得到包裹防晒剂的胶束交联透明质酸的凝胶微粒。
147.所得凝胶微粒的平均粒径为5.41微米。
148.实施例15
149.(1)两亲性高分子f127功能化修饰
150.取1g f127置于100ml烧瓶中，在80℃真空干燥、过夜。将干燥后的f127冷却至室温，使用恒压漏斗滴加10ml四氢呋喃，待f127完全溶解后，将f127中羟基3倍摩尔数的对羧基苯甲醛、3倍摩尔数的n,n-二环己基碳酸二亚胺、1倍摩尔数的4-二甲基胺吡啶溶于5ml四氢呋喃后缓慢滴加至烧瓶中，持续反应48小时后，旋蒸除去大部分溶剂，使用冰乙醚沉降，真空干燥后得到醛基修饰的f127(f127-cho)。
151.(2)包裹防晒剂胶束的制备
152.取100mg f127-cho与20mg水杨酸乙基己酯溶于15ml无水乙醇中，通过45℃旋蒸1.5小时除去无水乙醇，得到f127-cho和水杨酸乙基己酯薄膜。向烧瓶中加入40ml去离子水，于40℃搅拌1小时得到包裹水杨酸乙基己酯的胶束。未被包裹的水杨酸乙基己酯通过离心分离。将胶束冷冻干燥后备用。
153.(3)凝胶微粒的制备
154.称取0.15g司班80(乳化剂)溶于15ml甲苯溶液中。称取0.5g羧甲基壳聚糖(分子量
为38万)溶解于2ml磷酸盐缓冲液中，称取胶束(醛基总量与羧甲基壳聚糖中氨基含量为1:1)，震荡混合均匀。然后将混合液加入至甲苯溶液中，以1000rpm搅拌6小时后，离心收集凝胶。使用透析袋透析3天，得到包裹防晒剂的胶束交联羧甲基壳聚糖的凝胶微粒。
155.所得凝胶微粒的平均粒径为5.41微米。
156.实施例16
157.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用有机防晒剂为对苯二亚甲基二樟脑磺酸。
158.所得凝胶微粒的平均粒径为2.89微米。
159.实施例17
160.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用有机防晒剂为水杨酸乙基己酯和对苯二亚甲基二樟脑磺酸。
161.所得凝胶微粒的平均粒径为2.77微米。
162.实施例18
163.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用有机防晒剂为亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚。
164.所得凝胶微粒的平均粒径为2.63微米。
165.对比例1
166.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用透明质酸钠的分子量为1000。由于透明质酸钠分子量太小，无法制备得到交联的凝胶微粒。
167.对比例2
168.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用透明质酸钠的分子量为350万。由于透明质酸钠分子量太大，在与胶束混合时难以形成均匀的胶束混合溶液，长时间的混合过程使得胶束与透明质酸钠在未转移至乳液中即形成交联结构，即无法在乳液滴中形成凝胶微粒。
169.对比例3
170.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用ha-sh为0.06g，即质量浓度为3％。由于ha-sh及胶束浓度太低，无法制备得到交联的凝胶。
171.对比例4
172.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用ha-sh为1g，即质量浓度为50％。
173.由于透明质酸钠的浓度太高，难以溶解搅拌，无法与胶束混合均匀进行下一步操作。
174.对比例5
175.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用胶束总量按照双键与ha-sh中巯基含量之比为0.3:1称取。
176.由于可用于交联的胶束中的双键量太少，无法限制凝胶的溶胀，所得凝胶尺寸太大。
177.对比例6
178.步骤与实施例1基本相同，不同之处在于所用胶束总量按照双键与ha-sh中巯基含量之比为1.5:1称取。
179.胶束用量过多，导致透明质酸钠分子无法限制住胶束的运动，凝胶网络不稳定，易溶胀瓦解。
180.以下列表为不同条件下制备的凝胶。
181.表1：用不同分子量的透明质酸钠(ha-sh)
182.透明质酸分子量样品能否形成稳定的凝胶1000对比例1否4万实施例2能40万实施例1能80万实施例3能240万实施例4能300万实施例5能350万对比例2否
183.当所用透明质酸钠分子量为4万、8万、40万、240万时，可以形成稳定的凝胶。
184.表2：不同质量浓度的透明质酸钠(ha-sh)
185.ha-sh质量浓度样品能否形成稳定的凝胶3％对比例3否5％实施例6能25％实施例1能40％实施例7能50％对比例4否
186.当所用ha-sh为0.1g、0.5g、0.8g，即质量浓度为5％、25％、40％时，可以形成稳定的凝胶。
187.表3：胶束双键与ha-sh中巯基不同比例
[0188][0189][0190]
当所用胶束总量按照双键与ha-sh中巯基含量为0.5:1、0.8:1、1:1时，可以形成稳定的凝胶。
[0191]
表4：不同亲水性高分子
[0192]
不同亲水性高分子形成凝胶网络样品能否形成稳定的凝胶透明质酸实施例1能壳聚糖实施例10能海藻酸钠实施例13能
[0193]
使用不同的亲水性高分子形成凝胶网络都可以形成稳定的凝胶。
[0194]
表5：不同两亲性高分子
[0195]
两亲性高分子样品能否形成稳定的凝胶f127实施例1能peg-pcl实施例11能peg-pla实施例14能
[0196]
使用不同的两亲性高分子形成胶束都可以形成稳定的凝胶。
[0197]
表6：不同的修饰方式
[0198]
官能团对样品能否形成稳定的凝胶mf127实施例1能f127-sh实施例12能f127-cho实施例15能
[0199]
使用不同的官能团进行交联都可以形成稳定的凝胶。
[0200]
二、凝胶样品紫外线吸收率测定
[0201]
试验例1：样品吸光度测定
[0202]
设置下列对照组：
[0203]
阴性对照：未包裹防晒剂的胶束与透明质酸形成的凝胶。
[0204]
称取10mg所得透明质酸钠凝胶于离心管中，加入1ml去离子水，混合均匀后测定紫外吸光度，结果如下表7。
[0205]
表7：样品吸光度测定结果
[0206]
样品吸光度不含防晒剂的凝胶(阴性对照)0.029实施例10.978**实施例20.958**实施例30.954**实施例40.949**实施例50.970**实施例60.947**实施例70.958**实施例80.571**实施例90.762**实施例100.973**实施例110.929**实施例120.911**
[0207]
与阴性对照组比较：*p《0.05,**p《0.01
[0208]
结果分析：所有实施例实验结果均与对照组具有显著性差异，实施例8和9中所用胶束总量按照双键与ha-sh中巯基含量为0.5:1和0.8:1的紫外吸光度较其它实施例低，原因是所用胶束总量按照双键与ha-sh中巯基含量的比例低，造成负载的防晒剂分子少，导致
吸收紫外线的能力弱。
[0209]
试验例2：防护紫外线损害细胞实验
[0210]
将所得透明质酸钠凝胶使用75％酒精浸泡24小时后，使用无菌pbs置换出酒精后待用。
[0211]
取处于对数生长期的hacat细胞一皿，0.25％胰酶(含0.02％edta)消化2分钟后，使用dmem培养基调节细胞密度为5
×
104个/ml，接种于96孔细胞培养板，每孔100μl细胞悬液，于二氧化碳细胞培养箱在37℃、5％co2条件下常规培养过夜。
[0212]
常规培养过夜后，弃去培养基，每孔分别加入100μl不同浓度样品溶液，对照组加入等量的无血清培养基，于二氧化碳细胞培养箱中孵育24h。试验分组如下表8。
[0213]
表8：试验分组
[0214][0215]
(3)照射：采用7.2j/cm
2 uva加126mj/cm
2 uvb对各照射组的hacat细胞进行联合照射，照射时间为0.5h。
[0216]
照射后，弃去原有培养基或样品溶液，换为无血清培养基培养过夜，然后每孔加入15μl mtt，于细胞培养箱中继续孵育4h。弃去培养液，每孔加入100μl dmso，避光震荡10min，于490nm波长处用酶标仪检测吸光度并计算细胞相对增殖率。结果如下表9。
[0217]
表9：细胞相对增殖率试验结果
[0218]
[0219][0220]
与阳性对照组比较：*p《0.05,**p《0.01
[0221]
实施例1-15中所包裹的水杨酸乙基己酯的紫外吸收波段为uvb波段，因此，在实施uva uvb照射后，细胞增殖率均明显低于正常培养组，但与阳性对照组比，除实施例7、实施例8外，其它实施例均具有极显著差异。实施例16中包裹的对苯二亚甲基二樟脑磺酸的紫外吸收波段为uva波段，因此细胞增殖率也明显低于正常培养组，但相比于阳性对照组，仍具有极显著性差异。实施例17中包裹了两种波段的防晒剂，实施例18中包裹的亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚的紫外吸收波段涵盖了uva和uvb，因此实施例17、18中细胞相对增殖率明显高于其它实施例，且接近于正常培养组。
[0222]
试验例3：凝胶稳定性试验
[0223]
耐热试验：将各个实施例中的样品分别加入到两个洗净干燥的药用塑料瓶中，一瓶放入预先调节好温度为48
±
1℃的恒温培养箱内，经过48小时后取出，恢复至室温后，与另一瓶进行目测比较。判定标准：
[0224]
恢复至室温后，不会出现变色、变稀的现象。
[0225]
将凝胶加入到细胞培养液中等待一定时间，取细胞上清检测不出紫外吸光度。
[0226]
耐冷试验:将样品加入到两个洗净干燥的药用塑料瓶中，一瓶放入预先调节好温度为-18
±
1℃的冰箱内，经过48小时后取出，恢复至室温后，与另一瓶进行目测比较。判定
标准：恢复至室温后，与试验前没有明显的性状差异。
[0227]
同样，将凝胶加入到细胞培养液中等待一定时间，取细胞上清如检测不出紫外吸光度，可证明防晒剂无渗透现象。
[0228]
表10：稳定性试验结果
[0229][0230][0231]
结果分析：所有实施例中的凝胶样品均可在48℃和-18℃条件下，保持结构稳定。
[0232]
试验例4：过敏试验
[0233]
每个斑贴器设有若干个斑贴格，分别添加待测实施例样品，每种待测样品进行10个平行实验。然后，将此斑贴贴于化学防晒剂敏感的男女试验志愿者前臂屈侧，贴敷24小时。之后，将斑贴器从志愿者前臂取下，放置30分钟后，观察判定各实施例样品对志愿者皮肤造成的过敏反应程度。
[0234]
过敏程度评价标准：
[0235]
( )极强阳性反应(融合性疱疹反应)：明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹、反应超出受试区；
[0236]
( )强阳性反应(疱疹反应)：红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹：反应可超出受试区；
[0237]
( )弱阳性反应(红斑反应)：红斑、浸润、水肿、可有丘疹；
[0238]
(
±
)可疑反应，仅有微弱红斑；
[0239]
(-)阴性反应。
[0240]
实验结果：各实施例配制的凝胶样品诱导过敏炎症的影响如表11所示
[0241][0242]
结果分析：所有实施例中的凝胶样品均对受试者无刺激，不产生过敏症状。
[0243]
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。