一种用于抑制近视及圆锥角膜进展的方法与流程

0.3g；具体为100u：5-10ug：0.2g；
12.所述氯化钠、氯化钾和氯化钙同时使用时，所述氯化钠、氯化钾和氯化钙的质量比具体为0.8：0.02：0.01；
13.所述渗透压调节剂与所述转谷氨酰胺酶的用量比为0.8-0.9g：100u；具体为0.82g：100u或0.83g：100u；
14.所述渗透压调节剂与所述赖氨酰氧化酶的用量比为0.8-0.9g：5-10ug；具体为0.82g：5ug或0.83g：5ug。
15.所述眼用制剂的ph值为5.5-7.5；具体为7.4；
16.所述眼用制剂中还包括水、抑菌剂、ph调节剂和渗透压调节剂；
17.所述酶与所述水的用量比为0.1u-2u：0.01-0.1ug：1ml；
18.具体的，所述转谷氨酰胺酶、赖氨酰氧化酶与所述水的用量比为0.1u-2u：0.01-0.1ug：1ml；更具体为0.5u：0.01ug：1ml、2u：0.01ug：1ml、1u：0.01ug：1ml或0.25u：0.01ug：1ml；0.5u：0.1ug：1ml、2u：0.1ug：1ml、1u：0.1ug：1ml或0.25u：0.1ug：1ml；
19.所述抑菌剂具体选自硫柳汞、季铵盐类化合物和尼泊金类化合物中至少一种；所述季铵盐类化合物具体选自苯扎氯铵和苯扎溴铵中至少一种；所述尼泊金类化合物具体为羟苯乙酯；
20.所述抑菌剂在所述滴眼剂中的质量百分含量为0.001-0.1％；具体为0.05％；
21.所述ph调节剂具体选自磷酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、碳酸盐、盐酸、硼酸和磷酸中至少一种；所述磷酸盐具体选自磷酸氢二钠和磷酸二氢钾中至少一种。
22.还可包括缓冲液；具体可为pbs缓冲液。
23.所述眼用制剂为如下组成的眼用制剂a1、a2、a3或眼用制剂b：
24.所述眼用制剂a1的组成如下：
[0025][0026][0027]
抑菌剂苯扎氯铵占所述眼用制剂a1总质量的百分含量为0.05％；
[0028]
所述眼用制剂a2的组成如下：
[0029][0030]
抑菌剂苯扎氯铵占所述眼用制剂a2总质量的百分含量为0.05％。
[0031]
所述眼用制剂a3的组成如下：
[0032][0033]
抑菌剂苯扎氯铵占所述眼用制剂a3总质量的百分含量为0.05％。
[0034]
所述眼用制剂为如下组成的眼用制剂b：
[0035][0036][0037]
抑菌剂苯扎氯铵占所述眼用制剂b总质量的百分含量为0.05％。
[0038]
另外，上述本发明提供的眼用制剂在制备治疗近视的产品中的应用及以所述眼用
制剂为有效成分的治疗近视的产品或所述眼用制剂联合所述眼用制剂在制备治疗近视的产品中的应用或以所述滴眼剂联合所述眼用制剂为有效成分的治疗近视的产品，以及所述眼用制剂在制备矫正角膜屈光度的产品中的应用及以所述眼用制剂为有效成分的矫正角膜屈光度的产品或所述眼用制剂联合所述眼用制剂在制备矫正角膜屈光度的产品中的应用及以所述眼用制剂联合所述眼用制剂为有效成分的矫正角膜屈光度的产品也属于本发明的保护范围。
[0039]
具体的，所述产品的形态为液态或固态；
[0040]
所述产品具体为滴眼剂或眼用凝胶。
[0041]
所述眼用制剂的给药方式为：正常室温下药物在限定范围内持续停留眼表25-30min，必要时需要去除角膜上皮组织。
[0042]
本发明通过程序性改变角膜组织的微观构造，间接形成角膜的生物力学性质的梯度差，继而改变角膜曲率实现降低角膜屈光力的目的。从使用形式看，本发明从既往的手术治疗方式改变为用药治疗方式；从治疗机制看，本发明从既往的减法手术改变为加法治疗；从治疗目标看，本发明和既往的治疗方式均指向同一目标，即改变角膜的屈光力从而矫治近视。因此，在实现近视治疗这一目的上，本发明无论是形式还是内容，均具有突破性。
具体实施方式
[0043]
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。下述实施例中所用玻璃酸钠(cas9067-32-7)购自圣克鲁斯生物技术公司(santa cruz biotechnology,inc)，产品编号sc-204004；所用海藻酸钠(cas9005-38-3)购自圣克鲁斯生物技术公司(santa cruz biotechnology,inc)，产品编号sc-278679。所用转谷氨酰胺酶活性定义如下：采用fork和cole(1965)报道的分光hydroxamale分析法测量。最终反应物包含0.1m tris-hcl缓冲液，ph 6.0，30mm cbz-l-glutaminylglycine，0.1m hydroxylamine。于37℃与酶溶液反应10min后，添加氯化铁/三氯醋酸试剂(0.7％,w/v)中止酶反应。离心(8000r/min,15min)去除沉淀后，所形成的红色于525nm测量其吸光度。用l-glutaminic acid/r-monohydroxamic acid作标准曲线。1单位转谷氨酰胺酶活力(u)定义为1min产生1μm hydroxamic acid所需要的酶量)。所用微生物型转谷氨酰胺酶2(mtgase-2)购自zedira公司(zedira gmbh,darmstadt,germany)，产品编号为t001。所用组织型转谷氨酰胺酶2(ttgase-2)购自同一公司，产品编号为t002。所用赖氨酰氧化酶为购自abcam(abcam,cambridge,ma,usa)公司的重组人lox蛋白，分子量为32kda，产品编号ab240764(100ug)。lox各亚型的催化结构域高度保守，因此对于lox的具体亚型无特别限制。所用ii型胶原酶购自worthington公司(worthington，usa)。
[0044]
实施例1
[0045]
按照本领域已知的制备方法，按照如下组成制备组合滴眼液，滴眼液分a液和b液。依据治疗目标不同，a液分为a1\a2\a3三种不同规格：
[0046]
所述滴眼剂a1的组成如下：
[0047][0048]
抑菌剂苯扎氯铵占所述滴眼剂a1总质量的百分含量为0.05％；
[0049]
ph
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
7.4
[0050]
所述滴眼剂a2的组成如下：
[0051][0052][0053]
抑菌剂苯扎氯铵占所述眼用制剂a2总质量的百分含量为0.05％；
[0054]
ph
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
7.4
[0055]
所述滴眼剂a3的组成如下：
[0056]
[0057]
抑菌剂苯扎氯铵占所述眼用制剂a3总质量的百分含量为0.05％；
[0058]
ph
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
7.4
[0059]
所述滴眼剂b的组成如下：
[0060][0061]
抑菌剂苯扎氯铵占所述眼用制剂b总质量的百分含量为0.05％；
[0062]
ph
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
7.4
[0063]
实施例2：角膜屈光度改变效果观察1
[0064]
受试样品：实施例1制备的滴眼液a1
[0065]
对照样品：平衡盐溶液(nacl 7.2g/l、na2hpo4 1.48g/l、kh2po4 0.43g/l、ph 7.2-7.4，等渗)
[0066]
实验动物：新西兰大白兔5只，3月龄
[0067]
实验方法：对新西兰大白兔的角膜中央范围给药，使用药物是实施例1中的试剂a1，使用附带的给药控制装置控制给药范围为角膜中心直径约4mm，给药时间为30min。后持续观察角膜的毒性反应及屈光度变化。
[0068]
实验结果：饲养8周后，与对照组进行比较。对照组平均屈光度48.51
±
1.42d，实验组47.57
±
1.93d兔角膜平均屈光度降低约0.93
±
1.13d。
[0069]
实施例3：角膜屈光度改变效果观察2
[0070]
受试样品：实施例1制备的滴眼液a2
[0071]
对照样品：平衡盐溶液(nacl 7.2g/l、na2hpo4 1.48g/l、kh2po4 0.43g/l、ph 7.2-7.4，等渗)
[0072]
实验动物：新西兰大白兔5只，3月龄
[0073]
实验方法：对新西兰大白兔的角膜中央范围给药，使用药物是实施例1中的试剂a 2，使用附带的给药控制装置控制给药范围为角膜中心直径约4mm，给药时间为30min。后持续观察角膜的毒性反应及屈光度变化。
[0074]
实验结果：饲养8周后，与对照组进行比较。对照组平均屈光度48.73
±
2.01d，实验组47.95
±
2.24d兔角膜平均屈光度降低约0.77
±
1.66d。
[0075]
实施例4：角膜屈光度改变效果观察3
[0076]
受试样品：实施例1制备的滴眼液a 3
[0077]
对照样品：平衡盐溶液(nacl 7.2g/l、na2hpo4 1.48g/l、kh2po4 0.43g/l、ph 7.2-7.4，等渗)
[0078]
实验动物：新西兰大白兔5只，3月龄
[0079]
实验方法：对新西兰大白兔的角膜中央范围给药，用药为前述配方a3，使用附带的给药控制装置控制给药范围为角膜中心直径约4mm，给药时间为30min。后持续观察角膜的毒性反应及屈光度变化。
[0080]
实验结果：饲养8周后，与对照组进行比较。对照组平均屈光度48.52
±
1.71d，实验组47.11
±
1.47d兔角膜平均屈光度降低约1.40
±
2.37d。
[0081]
实施例5：角膜屈光度改变效果观察3
[0082]
受试样品：实施例1制备的滴眼液a1 b
[0083]
对照样品：平衡盐溶液(nacl 7.2g/l、na2hpo4 1.48g/l、kh2po4 0.43g/l、ph 7.2-7.4，等渗)
[0084]
实验动物：新西兰大白兔5只，3月龄
[0085]
实验方法：对新西兰大白兔的角膜中央范围给药，用药为前述配方药剂a1，使用附带的给药控制装置控制给药范围为角膜中心直径约4mm，同时使用前述配方药剂b，使用范围为控制装置外围2mm环形区，给药时间为30min。后持续观察角膜的毒性反应及屈光度变化。
[0086]
实验结果：饲养8周后，与对照组进行比较。对照组平均屈光度48.3
±
3.89d，实验组44.03
±
2.24d兔角膜平均屈光度降低约4.33
±
4.06d。