一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂及制备方法与流程

1.本发明属于医用制剂制备技术领域，具体涉及一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂，还涉及上述乳清蛋白喷雾剂的制备方法。


背景技术：

2.皮肤浅表损伤是一种最为常见的外伤性疾病，可能由多种因素引起，包括机械损伤、热损伤、光学损伤、生物损伤多种情形；由各种原因导致的皮肤浅表损伤，常伤及表皮甚至累及真皮。皮肤发生损伤后，机体自身分泌特异性的再生因子来重建受损的组织结构；促进细胞的增殖。依赖身体本身及其免疫系统和特异表达因子来修复皮肤损伤，重建皮肤屏障常依赖于个体的修复能力，但是个体修复能力，随年龄、营养、护理知识水平以及偶发因素影响较多，得不到良好修复的伤口常会转化称为慢性伤口，迁延反复不愈合，对患者的生活和身心造成巨大影响。
3.临床治疗上常通过在创面外部外加活性的蛋白类成分，促进伤口的修复。相对于传统的化学药物，蛋白类药物具有生物活性高，特异性强、毒副作用小的特点。通过使用富含生长因子的创口护理制剂，促进伤口愈合。其中包含生长因子，对上皮细胞具有趋化作用，能够促进上皮细胞的运动能力，通过施加活性蛋白，为细胞的迁移提供方向性，使表皮细胞有效地从创缘向创面中心方向性地迁移。在迁移信号的作用下，细胞产生整体向前移动的动力。通过黏附接触解离，使细胞不断向前移动从创缘不断向创面中心迁移，最终完成创面的再上皮化，进而封闭创面。通过刺激创面上皮细胞、成纤维细胞的增殖和活性；促进细胞外基质(ecm)的形成，细胞因子作用于许多类型的细胞，直接或间接增加间质蛋白的合成与分泌促进胶原基质的粘附。增加胶原纤维和纤维连接蛋白的合成，从而引起ecm合成和沉积增加，刺激结缔组织形成。
4.乳清蛋白因富含表皮生长因子(egf)、转化生长因子-a(tgf-a)和类胰岛素生长因子-1(igf-1)等多种活性成分在加速皮肤伤口愈合的新型治疗剂具有很高的应用价值和潜力。有丰富的文献研究表明，乳清蛋白可以促进皮肤伤口愈合。例如wang(2010)等人证明乳清肽能够通过抗氧化和降低炎症反应等促进大鼠产后伤口的愈合；ebaid等人证明骆驼奶多肽通过协调氧化还原状态和免疫反应促进糖尿病大鼠的伤口愈合。
5.对于创面愈合而言，由于蛋白类活性高，越来越多的活性蛋白被用于皮肤创面愈合的产品当中。然而作为一类蛋白物质，在产品中稳定性较差，存在易被蛋白酶水解，体内半衰期短，生物利用度低等缺点。由此带来的问题是使得原本具有高效活性的修复蛋白无法充分发挥其应有的效果。此外，对于一些非开放性浅表创伤，由于皮肤屏障的存在，限制了体内外物质的交流，产品中的活性蛋白无法顺利透过皮肤屏障被吸收，也就难以充分发挥其促进机体修复、伤口愈合活性的功能。为了增加透皮吸收，提高使用时活性的有效含量，需要增加投料量，由此会带来成本的上升。
6.中国专利(申请号：201310030618.8，公开号cn103110935b)公开了皮肤局部水解胶原蛋白脂质体及其制备方法，其提供了一种水解胶原蛋白脂质体溶液。采用磷脂、神经酞
胺、胆固醇制备水解胶原蛋白脂质体，促进水解胶原蛋白的透过皮肤角质层进入皮肤，并提高水解胶原蛋白在皮肤中的滞留量，能更有效地促进皮肤损伤的恢复。中国专利(申请号：200610053301.6，公开号cn100482212c)提供了一种包裹大分子药物的纳米型脂质体的制备方法，采用卵磷脂、cacl2和大分子药物通过超声波振荡和静置制成。现有包裹体多使用卵磷脂作为外壳，卵磷脂制作的包裹体具有较高的生物相容性，但双层膜的流动性差，较为坚硬，柔性较弱，皮肤屏障透过性较低，同时熔点高，制造工艺复杂，成本较高。因此，开发一款稳定的能够有效透过皮肤屏障的富含蛋白修复活性成分的修复制剂，既能够保留蛋白的生物活性，也可以增强其稳定性。对于浅表性创面全修复，促进伤口愈合的十分必要。


技术实现要素：

7.本发明的目的是提供一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂，解决了现有技术中蛋白的生物活性稳定性差、穿透能力弱的问题。
8.本发明所采用的技术方案是，一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂，按照质量百分比由以下组份组成：乳清蛋白包裹体1.0％-10.0％、戊二醇2.0％-3.0％、透明质酸0.05％-0.5％、甘草酸二钾0.1％-0.5％、四氢甲基嘧啶羧酸0.2％-2.0％、羟基积雪草苷0.05％-1％，余量为纯化水，以上组分的质量百分比之和为100％。
9.本发明的特点还在于，
10.乳清蛋白包裹体为纳米包裹体，纳米包裹体包括乳清蛋白、多元醇、表面活性剂、ph缓冲剂成分、脂质成分及水。
11.纳米包裹体按照质量浓度百分比由以下组份组成：乳清蛋白的质量百分浓度为10.0％-20.0％，脂质成分的质量百分浓度为10.0％-20.0％，多元醇的质量百分浓度为2.0％-5.0％，表面活性剂的质量百分浓度为5.0％-10.0％，ph缓冲剂的质量百分浓度为0.1％-1.0％，余量为水，以上组分的质量浓度百分比之和为100％。
12.多元醇为甘油、丙二醇、聚乙二醇400、双丙甘醇中的一种或多种；表面活性剂为peg-50氢化蓖麻油；ph缓冲剂成分为柠檬酸三钠；脂质成分为鲸蜡醇乙基己酸酯和山梨坦油酸酯。
13.鲸蜡醇乙基己酸酯、山梨坦油酸酯的质量比为1：3。
14.本发明所采用的另一技术方案是，一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
15.步骤1，将乳清蛋白、ph缓冲剂、多元醇与部分水混合，搅拌形成水相体系；将脂质成分在40～60℃水浴中搅拌，形成油相体系；在40～60℃的条件下，将水相体系加入到油相体系中，在20000-35000psi下高压均质3～5次，在40～60℃的条件下保温，得到w/o包裹体；将水及表面活性剂混合均匀，在40～60℃的条件下保温，得到二次乳化水相体系；将w/o包裹体注入二次乳化水相体系中，在15000-20000psi下高压均质1～2次，得到乳清蛋白包裹体；
16.步骤2，将甘草酸二钾、四氢甲基嘧啶羧酸、羟基积雪草苷及水在70～80℃的恒温水浴中搅拌溶解，之后加入均匀分散的戊二醇和透明质酸，在70～80℃的条件下搅拌30min，降温至40～50℃，加入乳清蛋白包裹体，搅拌20min，得到乳清蛋白喷雾剂。
17.本发明的另一目的是提供上述乳清蛋白喷雾剂的制备方法。
18.本发明的有益效果是：通过制备稳定且有效透过皮肤屏障的富含蛋白修复活性成分的修复制剂，克服了现有修复活性蛋白产品，易被蛋白酶水解，体内半衰期短，生物利用度低等缺点。既能够保留蛋白的生物活性，也可以增强其稳定性。通过外加皮肤外用剂，促进修复功能生物，有效提高自身机体修复力，对皮肤浅表性创面的修复效果显著。
具体实施方式
19.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
20.本发明一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂，按照质量百分比由以下组份组成：乳清蛋白包裹体1.0％-10.0％、戊二醇2.0％-3.0％、透明质酸0.05％-0.5％、甘草酸二钾0.1％-0.5％、四氢甲基嘧啶羧酸0.2％-2.0％、羟基积雪草苷0.05％-1％，余量为纯化水，以上组分的质量百分比之和为100％。
21.添加的戊二醇能够促进皮肤保湿，同时发挥广谱抗菌活性，它对革兰氏阳性菌、阴性菌，酵母菌，霉菌有良好的抑制作用，起到抑菌防腐的作用。
22.添加的透明质酸钠通过其高分子结构，相互交织成网状，在皮肤表面形成一层透气的薄膜，阻隔外来细菌、灰尘的侵入，保护皮肤免受侵害；改善皮肤细胞的生存环境，降低神经系统兴奋性，减少疼痛；同时封闭伤口，阻止水分逸散，起到很强的封闭湿化作用，增加伤口湿润程度，为伤口愈合创造湿性愈合环境。
23.添加的四氢甲基嘧啶羧酸发挥渗透保护作用，协助乳清蛋白包裹体的扩散及其作用，促进其功效的长时间发挥，保持活性；同时维持与体液等渗的特征，不引起创口刺激，提供良好使用感受，保护生物活性大分子的结构避免外界环境对其的破坏。
24.添加的甘草酸二钾、羟基积雪草苷发挥抗炎作用，抑制炎症，促进皮肤修护，避免炎症的加重和不适感受的增强。
25.乳清蛋白包裹体为纳米包裹体，纳米包裹体包括乳清蛋白、多元醇、表面活性剂、ph缓冲剂成分、脂质成分及水；
26.乳清蛋白的质量百分浓度为10.0％-20.0％，脂质成分的质量百分浓度为10.0％-20.0％，多元醇的质量百分浓度为2.0％-5.0％，表面活性剂的质量百分浓度为5.0％-10.0％，ph缓冲剂的质量百分浓度为0.1％-1.0％，余量为水，以上组分的质量浓度百分比之和为100％。
27.多元醇为甘油、丙二醇、聚乙二醇400、双丙甘醇中的一种或多种；表面活性剂为peg-50氢化蓖麻油；ph缓冲剂成分为柠檬酸三钠；脂质成分为鲸蜡醇乙基己酸酯和山梨坦油酸酯，鲸蜡醇乙基己酸酯、山梨坦油酸酯的质量比为1：3；
28.纳米包裹体添加的多元醇起到提高乳清蛋白的稳定性的作用。多元醇在低浓度下迫使更多的水分子围绕在蛋白质周围，因而提高了其稳定性。ph缓冲成分起到促进蛋白质溶解并保持生物活性的作用，使用ph缓冲剂使最终包裹体的ph维持在6.0-7.0范围内。脂质成分为山梨坦油酸酯、鲸蜡醇乙基己酸酯，通过超高压均质，形成w/o的纳米包裹外壳，降低蛋白质与蛋白多肽酶接触的可能性。通过peg-50氢化蓖麻油复乳化，形成双层包裹体，peg包裹后能提高热稳定性，延长体内半衰期。
29.本发明一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
30.步骤1，制备乳清蛋白包裹体，具体为：
31.步骤1.1，按质量浓度百分比称取：乳清蛋白的质量百分浓度为10.0％-20.0％，脂质成分的质量百分浓度为10.0％-20.0％，多元醇的质量百分浓度为2.0％-5.0％，表面活性剂的质量百分浓度为5.0％-10.0％，ph缓冲剂的质量百分浓度为0.1％-1.0％，余量为水，以上组分的质量浓度百分比之和为100％；
32.步骤1.2，将乳清蛋白、ph缓冲剂、多元醇与水混合，搅拌溶解，形成水相体系，所用水含量为10.0％-20.0％；
33.步骤1.3，将脂质成分在40～60℃恒温水浴中搅拌溶解，形成油相体系；
34.步骤1.4，在40～60℃的条件下，将水相体系加入到油相体系中，在20000-35000psi下高压均质3～5次，之后在40～60℃的条件下保温，得到w/o包裹体；
35.步骤1.5，将称取剩余的水及表面活性剂混合均匀，在40～60℃的条件下保温，得到二次乳化水相体系；
36.步骤1.6，将w/o包裹体注入二次乳化水相体系中，在15000-20000psi下高压均质1～2次，得到乳清蛋白包裹体；
37.步骤2，制备乳清蛋白喷雾剂，具体为：
38.步骤2.1，按照质量百分比称取：乳清蛋白包裹体1.0％-10.0％、戊二醇2.0％-3.0％、透明质酸0.05％-0.5％、甘草酸二钾0.1％-0.5％、四氢甲基嘧啶羧酸0.2％-2.0％、羟基积雪草苷0.05％-1％，余量为纯化水，以上组分的质量百分比之和为100％；
39.步骤2.2，将甘草酸二钾、四氢甲基嘧啶羧酸、羟基积雪草苷及水在70～80℃的恒温水浴中搅拌溶解，之后加入均匀分散的戊二醇和透明质酸，在70～80℃的条件下搅拌30min，搅拌速率为250rpm～500rpm；
40.步骤2.3，经步骤2.2后，降温至40～50℃，加入乳清蛋白包裹体，搅拌20min，搅拌速率为250rpm～300rpm，得到乳清蛋白喷雾剂。
41.实施例1
42.本发明一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
43.步骤1，制备乳清蛋白包裹体，具体为：
44.步骤1.1，按质量浓度百分比称取：乳清蛋白的质量百分浓度为10.0％，鲸蜡醇乙基己酸酯的质量百分浓度为2.5％、山梨坦油酸酯的质量百分浓度为7.5％，甘油的质量百分浓度为2.0％，表面活性剂的质量百分浓度为5.0％，柠檬酸三钠的质量百分浓度为0.5％，余量为水，以上组分的质量浓度百分比之和为100％；
45.步骤1.2，将乳清蛋白、柠檬酸三钠、甘油与水混合，搅拌溶解，形成水相体系，所用水含量为20.0％；
46.步骤1.3，将鲸蜡醇乙基己酸酯、山梨坦油酸酯在40℃恒温水浴中搅拌溶解，形成油相体系；
47.步骤1.4，在40℃的条件下，将水相体系加入到油相体系中，在35000psi下高压均质3次，之后在40℃的条件下保温，得到w/o包裹体；
48.步骤1.5，将称取剩余的水及peg-50氢化蓖麻油混合均匀，在40℃的的条件下保温，得到二次乳化水相体系；
49.步骤1.6，将w/o包裹体注入二次乳化水相体系中，在15000psi下高压均质2次，得到乳清蛋白包裹体；
50.步骤2，制备乳清蛋白喷雾剂，具体为：
51.步骤2.1，按照质量百分比称取：乳清蛋白包裹体10.0％、戊二醇3.0％、透明质酸0.05％、甘草酸二钾0.5％、四氢甲基嘧啶羧酸2.0％、羟基积雪草苷0.05％，余量为纯化水，以上组分的质量百分比之和为100％；
52.步骤2.2，将甘草酸二钾、四氢甲基嘧啶羧酸、羟基积雪草苷及水在80℃的恒温水浴中搅拌溶解，之后加入均匀分散的戊二醇和透明质酸，在80℃的条件下搅拌30min，搅拌速率为500rpm；
53.步骤2.3，经步骤2.2后，降温至40℃，加入乳清蛋白包裹体，搅拌20min，搅拌速率为250rpm，得到乳清蛋白喷雾剂。
54.实施例2
55.本发明一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
56.步骤1，制备乳清蛋白包裹体，具体为：
57.步骤1.1，按质量浓度百分比称取：乳清蛋白的质量百分浓度为20.0％，鲸蜡醇乙基己酸酯的质量百分浓度为5％，山梨坦油酸酯丙的质量百分浓度为15％，丙二醇的质量百分浓度为5.0％，peg-50氢化蓖麻油的质量百分浓度为10.0％，柠檬酸三钠的质量百分浓度为0.5％，余量为水，以上组分的质量浓度百分比之和为100％；
58.步骤1.2，将乳清蛋白、柠檬酸三钠、丙二醇与水混合，搅拌溶解，，形成水相体系，所用水含量为10.0％；
59.步骤1.3，将鲸蜡醇乙基己酸酯、山梨坦油酸酯在60℃恒温水浴中搅拌溶解，形成油相体系；
60.步骤1.4，在60℃的条件下，将水相体系加入到油相体系中，在20000psi下高压均质5次，之后在60℃的条件下保温，得到w/o包裹体；
61.步骤1.5，将称取剩余的水及peg-50氢化蓖麻油混合均匀，在60℃的的条件下保温，得到二次乳化水相体系；
62.步骤1.6，将w/o包裹体注入二次乳化水相体系中，在20000psi下高压均质1次，得到乳清蛋白包裹体；
63.步骤2，制备乳清蛋白喷雾剂，具体为：
64.步骤2.1，按照质量百分比称取：乳清蛋白包裹体1.0％、戊二醇2.0％、透明质酸0.5％、甘草酸二钾0.1％、四氢甲基嘧啶羧酸0.2％、羟基积雪草苷1％，余量为纯化水，以上组分的质量百分比之和为100％；
65.步骤2.2，将甘草酸二钾、四氢甲基嘧啶羧酸、羟基积雪草苷及水在70℃的恒温水浴中搅拌溶解，之后加入均匀分散的戊二醇和透明质酸，在70℃的条件下搅拌30min，搅拌速率为250rpm；
66.步骤2.3，经步骤2.2后，降温至50℃，加入乳清蛋白包裹体，搅拌20min，搅拌速率为300rpm，得到乳清蛋白喷雾剂。
67.实施例3
68.本发明一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
69.步骤1，制备乳清蛋白包裹体，具体为：
70.步骤1.1，按质量浓度百分比称取：乳清蛋白的质量百分浓度为15％，鲸蜡醇乙基己酸酯的质量百分浓度为5％，山梨坦油酸酯的质量百分浓度为15％，聚乙二醇400的质量百分浓度为4.0％，peg-50氢化蓖麻油的质量百分浓度为8％，柠檬酸三钠的质量百分浓度为0.1％，余量为水，以上组分的质量浓度百分比之和为100％；
71.步骤1.2，将乳清蛋白、peg-50氢化蓖麻油、聚乙二醇400与水混合，搅拌溶解，形成水相体系，所用水含量为15％；
72.步骤1.3，将鲸蜡醇乙基己酸酯和山梨坦油酸酯在50℃恒温水浴中搅拌溶解，形成油相体系；
73.步骤1.4，在40～60℃的条件下，将水相体系加入到油相体系中，在30000psi下高压均质4次，之后在50℃的条件下保温，得到w/o包裹体；
74.步骤1.5，将称取剩余的水及表面活性剂混合均匀，在50℃的的条件下保温，得到二次乳化水相体系；
75.步骤1.6，将w/o包裹体注入二次乳化水相体系中，在15000psi下高压均质2次，得到乳清蛋白包裹体；
76.步骤2，制备乳清蛋白喷雾剂，具体为：
77.步骤2.1，按照质量百分比称取：乳清蛋白包裹体5％、戊二醇2.5％、透明质酸0.1％、甘草酸二钾0.2％、四氢甲基嘧啶羧酸1.0％、羟基积雪草苷0.3％，余量为纯化水，以上组分的质量百分比之和为100％；
78.步骤2.2，将甘草酸二钾、四氢甲基嘧啶羧酸、羟基积雪草苷及水在75℃的恒温水浴中搅拌溶解，之后加入均匀分散的戊二醇和透明质酸，在75℃的条件下搅拌30min，搅拌速率为350rpm；
79.步骤2.3，经步骤2.2后，降温至40℃，加入乳清蛋白包裹体，搅拌20min，搅拌速率为250rpm，得到乳清蛋白喷雾剂。
80.实施例4
81.本发明一种用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
82.步骤1，制备乳清蛋白包裹体，具体为：
83.步骤1.1，按质量浓度百分比称取：乳清蛋白的质量百分浓度为15％，鲸蜡醇乙基己酸酯的质量百分浓度为3.75％，山梨坦油酸酯的质量百分浓度为11.25％，双丙甘醇的质量百分浓度为5.0％，peg-50氢化蓖麻油的质量百分浓度为10.0％，柠檬酸三钠的质量百分浓度为0.5％，余量为水，以上组分的质量浓度百分比之和为100％；
84.步骤1.2，将乳清蛋白、柠檬酸三钠、双丙甘醇与水混合，搅拌溶解，，形成水相体系，所用水含量为15％；
85.步骤1.3，将鲸蜡醇乙基己酸酯和山梨坦油酸酯在50℃恒温水浴中搅拌溶解，形成油相体系；
86.步骤1.4，在50℃的条件下，将水相体系加入到油相体系中，在20000psi下高压均
质4次，之后在50℃的条件下保温，得到w/o包裹体；
87.步骤1.5，将称取剩余的水及表面活性剂混合均匀，在50℃的的条件下保温，得到二次乳化水相体系；
88.步骤1.6，将w/o包裹体注入二次乳化水相体系中，在15000psi下高压均质1次，得到乳清蛋白包裹体；
89.步骤2，制备乳清蛋白喷雾剂，具体为：
90.步骤2.1，按照质量百分比称取：乳清蛋白包裹体8％、戊二醇2.5％、透明质酸0.2％、甘草酸二钾0.3％、四氢甲基嘧啶羧酸1.5％、羟基积雪草苷0.8％，余量为纯化水，以上组分的质量百分比之和为100％；
91.步骤2.2，将甘草酸二钾、四氢甲基嘧啶羧酸、羟基积雪草苷及水在80℃的恒温水浴中搅拌溶解，之后加入均匀分散的戊二醇和透明质酸，在80℃的条件下搅拌30min，搅拌速率为400rpm；
92.步骤2.3，经步骤2.2后，降温至40℃，加入乳清蛋白包裹体，搅拌20min，搅拌速率为250rpm，得到乳清蛋白喷雾剂。
93.将本发明的乳清蛋白喷雾剂涂抹于前述皮肤浅表性创面，从而验证本发明组合物的用于(修复)浅表性创面的修复效果。采用市售修复喷雾类同类产品作为对照品。采用实施例4的产品进行验证。
94.1、兔子造创修复测试
95.通过用将材料注涂抹兔子皮肤，并通过肉眼大体观察、组织学观察来评价其安全性，采用胶原染色法来评价其有效性。通过和对照品对比评价的安全性、有效性。
96.1.1造模及制备方法
97.兔子背部去毛并消毒。选择背部4块2cm*2cm大小区域进行造创，在选定区域内涂抹试验品0.3-0.4ml，涂抹后使用0.5mm的传统微针，方式垂直交叉4个方向处理，每个方向滚动5次，重复处理4遍，以皮肤轻微红肿微出血为宜。
98.造创处理完成后，对选定区域(4cm2)中两部分分别涂抹试验组、对照组，一部分作为空白对照区域；涂抹区域尽可能彼此分隔，不互相干扰。观察涂抹处皮肤的外观变化及副反应等。
99.涂抹量及周期：每天早晚各一次，每次0.4ml，涂抹14天。
100.1.2安全性评价
101.1.2.1大体观察：定期观察涂抹位置的外观变化、副反应及伤口愈合情况，包括红斑、肿胀等副反应以及伤口尺寸、红肿消退情况，主要为红斑和肿胀，依据皮肤刺激反应进行评分并拍照记录。
102.实验结果使用传统微针(0.5mm)进行造模时，动物备皮区域出现微发红现象，部分区域出现微出血现象，统计结果见下表1，具体观察记录见表2：
103.表1造创后大体观察结果
[0104] 观察造创后3天空白区见微出血；试验组、对照见微发红造创后7天空白区见微出血；试验组、对照见微发红造创后14天均见微发红现象
[0105]
表2症状观察记录表
[0106][0107]
1.2.2组织学检测：于第3天、第7天、第14天时处死3只，检查样品残留情况，取出注射点周围皮内组织，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片(5μm)，he染色，光学显微镜观察照相。
[0108]
实验结果，he染色观察发现炎细胞偶见，试验品、对照品均无无刺激性，对照品相对刺激性稍高；具体结果见表3：
[0109]
表3 he染色病理分类及分级统计
[0110][0111]
有效性评价
[0112]
于第3天、第7天、第14天时处死动物，取出材料及周围皮内组织，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，采用苦味酸天狼猩红染色法进行染色观察，苦味酸天狼猩红染色法切片厚度6um，常规脱蜡入水，置于0.1％苦味酸天狼猩红染液染色1小时，双蒸水冲洗3遍；mayer苏木素复染15分钟，双蒸水冲洗3遍；脱水、透明、封片后置于偏振光显微镜下观察、拍照。观察皮肤组织的损伤、修复程度。
[0113]
天狼星红染色结果如表4所示，各组胶原纤维含量：试验品》对照品》空白对照品。修复结果上看，试验品、对照组均具有修复损伤的作用，说明实施例能明显改善模型皮肤损
伤情况情况，对浅表性创面或周围皮肤的护理有帮助作用，和同类产具有相当的功效。
[0114]
表4狼星红染色胶原纤维分级统计
[0115][0116]
2、人体滚针创口修复试验
[0117]
利用visia图像分析仪来分析受试者在进行滚针治疗后，使用该皮肤外用剂护理系统前后的红区炎症、外观及创口愈合情况。
[0118]
验证方案：选取10名进行微针水光等医美治疗后的患者，治疗后连续使用1周，每天4次，每半边脸0.5ml(4喷)，其中左侧为试验组，右侧为对照组；
[0119]
使用visia皮肤检测仪(美国canfield公司)对治疗前后的患者进行拍照，通过红区数值对皮肤的炎症进行评分，判定。同时医生诊疗判断在第五天，进行检查，在脸部的左侧上观察到比第2天更显著的上皮形成、更少的结皮和减少的肿胀。如表5所示，用对比组合物治疗的脸部右侧表现出更少的上皮形成、更多留存的结皮以及更缓慢的愈合。
[0120]
此外，主观报告相比于右侧，在其脸部的左侧上感觉到的刺激、不舒适、干燥和瘙痒更少。
[0121]
表5 visia皮肤检测仪红区检测数值
[0122][0123]
如上表试验组“红区”改善率占70％；对照组“红区”改善率占40％；“红区”改善率试验组比对照组显著。
[0124]
本发明的用于修复浅表性创面的乳清蛋白喷雾剂的蛋白稳定性好，具有优良的生物相容性，保湿性能。对人体无毒性、无刺激性、无致敏，安全性高；易于透皮吸收；与纳米包裹前相比，纳米包裹后吸收比率更高，皮肤浅表性创面的修复效果显著。