一种没食子鞣质类成分的一测多评质量控制方法与流程

1.本发明涉及药材或饮片或者中药制剂的成分检测技术领域，具体涉及一种没食子鞣质类成分的一测多评质量控制方法及其应用。


背景技术：

2.没食子鞣质(gallotannins)是没食子药材中的主要化学成分，其含量高达50～70％。没食子鞣质是存在于植物体内的一类结构比较复杂的水溶性多元酚类化合物，其中没食子酸是没食子鞣质的水解单体。大量研究结果表明没食子鞣质在抑菌、抗氧化、降血糖、抗肿瘤、抗病毒、抗炎及镇痛等方面具有良好的效果。众多中药民族药含有没食子鞣质类成分，如五倍子、大黄、老鹳草、白芍、覆盆子、地稔、余甘子、石榴皮、石榴花、西青果、诃子、毛诃子、沙棘叶、叶下珠、地榆、金樱子等。由于鞣质的结构复杂且不稳定，分离纯化较为困难，其单体化合物难以获得，极大的制约了质量评价和质量控制方法的建立。目前，对于没食子鞣质类成分的定量分析方法，主要以没食子酸作为质量控制的指标。
3.没食子(gall of q.infectoria oliv.)为没食子蜂科昆虫没食子蜂(cynips gallae-tinctoriae oliv.)的幼虫寄生于壳斗科植物没食子树(quercus infectoria oliv.)幼枝上形成的干燥虫瘿，主产于土耳其、叙利亚、希腊、伊朗及印度等地，尤以小亚细亚和阿勒颇产量大、质量优。没食子作为我国维吾尔医传统特色药，具有生干生寒，燥湿收敛，固齿止痛，清热消炎，祛腐愈伤，凉血止血，止泻止痢等作用，临床上主要用于治疗牙齿酸软、牙龈出血、口舌生疮、溃疡性结肠炎、湿性白带过多、子宫出血和泻痢不止等。
4.没食子的单味制剂——西帕依固龈液，是没食子经加工制成的漱口液，具有健齿固龈，清血止痛的作用，主要用于牙周疾病引起的牙齿酸软，咀嚼无力，松动移位，牙龈出血以及口舌生疮，咽喉肿痛，口臭烟臭等。其次，含没食子药材的维吾尔药复方制剂有玛木然止泻胶囊、肛宁巴瓦斯尔软膏、阿哪尔妇洁液、清涩比黑马尔江散、复方班鲁提散、健阴栓和孜衣尔胶囊等。
[0005]“一测多评”(quantitative analysis of multi-components by single-marker，qams)中药质量评价模式是一种基于待测成分间的相对校正因子(relative correction factors，rcfs)，仅使用一种对照品，便可实现对多个指标成分进行同步测定的定量分析方法。该法不仅弥补了多指标定量分析中一些对照品制备困难、价格昂贵、难以批量供应、甚者无市售产品等缺陷，而且可以低成本、高效率的实现中药多指标性成分的同步测定，全面而又客观的反映中药的内在质量。qams法自2006年提出以来，已成为行业内认可度高、应用广泛的中药质量控制模式，《中国药典》中多个中药品种的【含量测定】项中纳入了该法。
[0006]
本发明以没食子药材及其制剂为例，建立没食子酸(gallic acid，ga)、1-没食子酸酰葡萄糖(1-galloylglucose,1-gg)、没食子酸甲酯(methylgallate，mg)、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖(1,2,3,6-tetragalloylglucose，tegg)和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-pentagalloylglucose，pgg)5种没食子鞣质类成分的同步测定方法(例如“一测多
评”法)，可用于没食子药材及其成方制剂的质量检测、质量评价或质量控制。
[0007]
目前，尚未见文献报道对上述没食子药材及其制剂的五种化学成分进行分析研究的方法。


技术实现要素：

[0008]
本发明的主要目的是提供一种灵敏度、稳定性、重复性和准确度优良的没食子鞣质类成分的分析方法，以解决现有技术中的常见的没食子药材或饮片及其制剂的一些对照品制备困难、价格昂贵或者难以批量供应，以及对于没食子鞣质类成分的定量分析方法主要以没食子酸这一单一成分作为质量控制指标从而无法客观全面反映没食子药材或饮片及其制剂的内在质量的问题。
[0009]
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种没食子鞣质类成分的分析方法，该方法包括如下步骤：
[0010]
1)对照品溶液的制备：制备没食子酸、1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的对照品溶液；
[0011]
2)供试品溶液的制备：取适量的药材或饮片或者包含药材或饮片的制剂置于容器中，加入溶剂称定重量后冷浸、超声或者回流提取，提取后再次加入溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，得到供试品溶液；
[0012]
3)将该对照品溶液分别稀释后与该供试品溶液注入高效液相色谱仪，进行色谱条件检测，该色谱条件为：采用c
18
色谱柱，以甲醇或乙腈为流动相a、酸水溶液为流动相b，梯度洗脱程序为：0～30min，3％～10％a；30～70min，10％～15％a；70～120min，15％～30％a；流速为0.6～1.5ml/min；柱温为30～40℃；检测波长为250～300nm；进样体积为3～10μl；以及
[0013]
4)根据检测结果，获得该药材或饮片或该制剂的成分信息，或者成分信息和含量信息。
[0014]
进一步地，该方法进一步包括：利用没食子酸或没食子酸甲酯为内参物分别计算目标化合物的相对保留值、相对校正因子和/或含量，其中该目标化合物选自以下中的一种或多种：没食子酸、1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖。
[0015]
进一步地，该药材或饮片为没食子。
[0016]
进一步地，该包含药材或饮片的制剂为包含没食子的单一或复方制剂。
[0017]
进一步地，该包含药材或饮片的制剂为西帕依固龈液。
[0018]
进一步地，该回流提取为水浴回流提取。
[0019]
进一步地，该水浴回流提取的时间为3至5小时。
[0020]
进一步地，该水浴回流提取的时间为约4小时。
[0021]
进一步地，该溶剂为甲醇和/或乙醇的水溶液。
[0022]
进一步地，该溶剂的浓度为30％～50％。
[0023]
进一步地，该溶剂的浓度为约40％。
[0024]
进一步地，该滤过进一步包括通过0.45μm微孔滤膜进行滤过。
[0025]
进一步地，该c
18
色谱柱为c
18 ods色谱柱。
[0026]
进一步地，该c
18
色谱柱为phenomenex c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm、shimaduz vp-ods c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm、kromasil c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm、或agilent c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm。
[0027]
进一步地，该c
18
色谱柱为phenomenex c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm。
[0028]
进一步地，该酸水溶液为0.1％～0.3％的酸水溶液。
[0029]
进一步地，该酸水溶液为0.1％～0.3％的磷酸水溶液。
[0030]
进一步地，该酸水溶液为约0.2％的磷酸水溶液。
[0031]
进一步地，各个色谱峰分离度r大于1.5，拖尾因子t为0.95～1.05。
[0032]
进一步地，该梯度洗脱程序为：0～20min，3％～8％a；20～30min，8％～10％a；30～70min，10％～15％a；70～100min，15％～18％a；100～120min，18％～30％a。
[0033]
进一步地，该流速为0.8～1.2ml/min。
[0034]
进一步地，该流速为约1.0ml/min。
[0035]
进一步地，该柱温为32～37℃。
[0036]
进一步地，该柱温为约35℃。
[0037]
进一步地，该检测波长为260～290nm。
[0038]
进一步地，该检测波长为约275nm。
[0039]
进一步地，该进样体积为5～10μl。
[0040]
进一步地，该进样体积为约5μl。
[0041]
进一步地，当以没食子酸为内参物时，目标化合物为1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖。
[0042]
进一步地，当以没食子酸为内参物时，采用相对保留值对该目标化合物进行色谱峰的定位，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对保留值分别为0.78
±
5％、3.04
±
5％、8.13
±
5％和/或10.4
±
5％。
[0043]
进一步地，当以没食子酸为内参物时，采用相对保留值对该目标化合物进行色谱峰的定位，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对保留值分别为约0.78、约3.04、约8.13和约10.4。
[0044]
进一步地，当以没食子酸为内参物时，采用相对校正因子来计算该目标化合物的含量，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对校正因子分别为1.75
±
5％、0.95
±
5％、1.12
±
5％和/或1.25
±
5％。
[0045]
进一步地，当以没食子酸为内参物时，采用相对校正因子来计算该目标化合物的含量，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对校正因子分别为约1.75、约0.95、约1.12和/或约1.25。
[0046]
进一步地，当以没食子酸的峰面积为对照时，分别乘以对应的相对校正因子，计算1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的含量。
[0047]
进一步地，当以没食子酸甲酯为内参物时，目标化合物为没食子酸、1-没食子酸酰葡萄糖、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖。
pentagalloylglucose，pgg)。
具体实施方式
[0059]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0060]
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式或实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。
[0061]
在本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
[0062]
在本发明中，温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。上述情况同样适用于梯度洗脱程序、流速、检测波长和进样体积中的各参数。
[0063]
在本发明中，除非另有说明或者上下文中有明显的冲突，所使用的冠词“一”、“一个(种)”和“所述”旨在包括“至少一个”或“一个或多个”。因此，本发明所使用的这些冠词是指一个或多于一个(即至少一个)宾语的冠词。
[0064]
正如背景技术部分所描述的，尚未见文献报道对没食子药材及其制剂的五种化学成分进行分析研究的方法。为了解决上述问题，本发明提供了一种没食子鞣质类成分的分析方法，该方法包括如下步骤：
[0065]
1)对照品溶液的制备：制备没食子酸、1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的对照品溶液；
[0066]
2)供试品溶液的制备：取适量的药材或饮片或者包含药材或饮片的制剂置于容器中，加入溶剂称定重量后冷浸、超声或者回流提取，提取后再次加入溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，得到供试品溶液；
[0067]
3)将该对照品溶液分别稀释后与该供试品溶液注入高效液相色谱仪，进行色谱条件检测，该色谱条件为：采用c
18
色谱柱，以甲醇或乙腈为流动相a、酸水溶液为流动相b，梯度洗脱程序为：0～30min，3％～10％a；30～70min，10％～15％a；70～120min，15％～30％a；流速为0.6～1.5ml/min(例如可以为0.6ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min、1.4ml/min或1.5ml/min)；柱温为30～40℃(例如可以为30℃、33℃、35℃、38℃或40℃)；检测波长为250～300nm(例如可以为250nm、254nm、260nm、270nm、275nm、280nm、290nm或300nm)；进样体积为3～10μl(例如可以为3μl、5μl、7μl或10μl)；以及
[0068]
4)根据检测结果，获得该药材或饮片或该制剂的成分信息，或者成分信息和含量信息。
[0069]
在本发明中，对组分复杂的药材或饮片或者包含药材或饮片的制剂进行多成分的
成分和含量分析，工作量和检验成本均较大。本发明提供的分析方法，可以采用同一色谱条件同时测定5个成分，大大节省了检测时间及实验成本。
[0070]
在一种优选的实施方式中，该方法进一步包括：利用没食子酸或没食子酸甲酯为内参物分别计算目标化合物的相对保留值、相对校正因子和/或含量，其中该目标化合物选自以下中的一种或多种：没食子酸、1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖。
[0071]
在一种优选的实施方式中，该药材或饮片为没食子。
[0072]
在本发明中，该药材或饮片进一步包括含有没食子酸、1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖五种成分能够适用于上述分离条件的其它药材或饮片。
[0073]
在一种优选的实施方式中，该包含药材或饮片的制剂为包含没食子的单一或复方制剂。
[0074]
在一种优选的实施方式中，该包含药材或饮片的制剂为西帕依固龈液。
[0075]
在一种优选的实施方式中，该回流提取为水浴回流提取。
[0076]
在一种优选的实施方式中，该水浴回流提取的时间为3至5小时。
[0077]
在一种优选的实施方式中，该水浴回流提取的时间为约4小时。
[0078]
在本发明中，关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的
±
5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约”4小时的时间是指从3.8小时至4.2小时的时间，但也明确地包括刚好4小时的时间。
[0079]
在一种优选的实施方式中，该溶剂为甲醇和/或乙醇的水溶液。
[0080]
在一种优选的实施方式中，该溶剂的浓度为30％～50％。
[0081]
在一种优选的实施方式中，该溶剂的浓度为约40％。
[0082]
在本发明中，关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的
±
5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约”40％的浓度是指从38％的浓度至42％的浓度，但也明确地包括刚好40％的浓度。
[0083]
在一种优选的实施方式中，该滤过进一步包括通过0.45μm微孔滤膜进行滤过。
[0084]
在一种优选的实施方式中，该c
18
色谱柱为c
18 ods色谱柱。
[0085]
在一种优选的实施方式中，该c
18
色谱柱为phenomenex c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm、shimaduz vp-ods c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm、kromasil c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm、或agilent c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm。
[0086]
在一种优选的实施方式中，该c
18
色谱柱为phenomenex c
18
色谱柱，4.6
×
250mm，5μm。
[0087]
在一种优选的实施方式中，该酸水溶液为0.1％～0.3％的酸水溶液。
[0088]
在一种优选的实施方式中，该酸水溶液为0.1％～0.3％的磷酸水溶液。
[0089]
在一种优选的实施方式中，该酸水溶液为约0.2％的磷酸水溶液。
[0090]
在本发明中，关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的
±
5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约”0.2％的浓度是指从0.19％的浓度至0.21％的浓度，但也明确地包括刚好0.2％的浓度。
[0091]
在一种优选的实施方式中，各个色谱峰分离度r大于1.5，拖尾因子t为0.95～
1.05。
[0092]
为了进一步提高色谱峰的分离效果，在一种优选的实施方式中，该梯度洗脱程序为：0～20min，3％～8％a；20～30min，8％～10％a；30～70min，10％～15％a；70～100min，15％～18％a；100～120min，18％～30％a。
[0093]
在一种优选的实施方式中，该流速为0.8～1.2ml/min。
[0094]
在一种优选的实施方式中，该流速为约1.0ml/min。
[0095]
在本发明中，关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的
±
5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约”1.0ml/min的流速是指从0.95ml/min的流速至1.05ml/min的流速，但也明确地包括刚好1.0ml/min的流速。
[0096]
在一种优选的实施方式中，该柱温为32～37℃。
[0097]
在一种优选的实施方式中，该柱温为约35℃。
[0098]
在本发明中，关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的
±
5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约”35℃的温度是指从33.2℃的温度至36.8℃的温度，但也明确地包括刚好35℃的温度。
[0099]
在一种优选的实施方式中，该检测波长为260～290nm。
[0100]
在一种优选的实施方式中，该检测波长为约275nm。
[0101]
在本发明中，关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的
±
5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约”275nm的波长是指从261nm的波长至289nm的波长，但也明确地包括刚好275nm的波长。
[0102]
在一种优选的实施方式中，该进样体积为5～10μl。
[0103]
在一种优选的实施方式中，该进样体积为约5μl。
[0104]
在本发明中，关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的
±
5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约”5μl的体积是指从4.8μl的体积至5.2μl的体积，但也明确地包括刚好5μl的体积。
[0105]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸为内参物时，目标化合物为1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖。
[0106]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸为内参物时，采用相对保留值对该目标化合物进行色谱峰的定位，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对保留值分别为0.78
±
5％、3.04
±
5％、8.13
±
5％和/或10.4
±
5％。
[0107]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸为内参物时，采用相对保留值对该目标化合物进行色谱峰的定位，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对保留值分别为约0.78、约3.04、约8.13和约10.4。
[0108]
在本发明中，当以没食子酸对照品的色谱峰作为参照峰时，计算1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对保留值，其相对保留值在上述规定值的
±
5％范围之内，即实现色谱峰的定位。如色谱峰定位产生较大偏差(＞5.0％)，可根据典型样品图进行比对，必要时可参考待测色谱峰的在线
紫外吸收光谱和质谱信息辅助定位。
[0109]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸为内参物时，采用相对校正因子来计算该目标化合物的含量，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对校正因子分别为1.75
±
5％、0.95
±
5％、1.12
±
5％和/或1.25
±
5％。
[0110]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸为内参物时，采用相对校正因子来计算该目标化合物的含量，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对校正因子分别为约1.75、约0.95、约1.12和/或约1.25。
[0111]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸的峰面积为对照时，分别乘以对应的相对校正因子，计算1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸甲酯、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的含量。
[0112]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸甲酯为内参物时，目标化合物为没食子酸、1-没食子酸酰葡萄糖、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖。
[0113]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸甲酯为内参物时，采用相对保留值对该目标化合物进行色谱峰的定位，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对保留值分别为0.25
±
5％、0.32
±
5％、2.67
±
5％和/或3.42
±
5％。
[0114]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸甲酯为内参物时，采用相对保留值对该目标化合物进行色谱峰的定位，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对保留值分别为约0.25、约0.32、约2.67和/或约3.42。
[0115]
在本发明中，当以没食子酸甲酯对照品的色谱峰作为参照峰时，计算1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对保留值，其相对保留值在上述规定值的
±
5％范围之内，即实现色谱峰的定位。如色谱峰定位产生较大偏差(＞5.0％)，可根据典型样品图进行比对，必要时可参考待测色谱峰的在线紫外吸收光谱和质谱信息辅助定位。
[0116]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸甲酯为内参物时，采用相对校正因子来计算该目标化合物的含量，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对校正因子分别为1.84
±
5％、1.05
±
5％、1.18
±
5％和/或1.32
±
5％。
[0117]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸甲酯为内参物时，采用相对校正因子来计算该目标化合物的含量，1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对校正因子分别为约1.84、约1.05、约1.18和/或约1.32。
[0118]
在一种优选的实施方式中，当以没食子酸甲酯的峰面积为对照时，分别乘以对应的相对校正因子，计算1-没食子酸酰葡萄糖、没食子酸、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖和/或1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的含量。
[0119]
根据本发明的另一个方面，提供了一种根据上述方法在药材或饮片或者包含药材或饮片的制剂的质量检测、质量评价或质量控制中的用途。
[0120]
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本技术所要求保护的范围。
[0121]
实施例
[0122]
1材料
[0123]
lc-2030c 3d型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；lc-20a型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；waters alliance e2695高效液相色谱仪，包括e2695溶剂管理系统，2998二极管阵列检测器，empower2色谱工作站(美国waters公司)；fw-10型高速万能粉碎机(北京市永光明医疗仪器有限公司)；sk8210hp型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；sqp practum224-1cn型万分之一电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；sqp quintix35-1cn型十万分之一电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；dzkw-s-6型电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器有限公司)。ca-1111型冷却水循环装置(上海爱朗仪器有限公司)。
[0124]
phenomenex c
18
色谱柱(4.6
×
250mm，5μm)，shimaduz vp-ods c
18
色谱柱(4.6
×
250mm，5μm)，kromasil c
18
色谱柱(4.6
×
250mm，5μm)，agilent c
18
色谱柱(4.6
×
250mm，5μm)。
[0125]
对照品没食子酸(gallic acid，ga，批号110831-201906，)购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用，纯度≥98％；1-没食子酸酰葡萄糖(1-galloylglucose,1-gg，批号29-azc-7-4)购自加拿大toronto research chemicals(trc)公司，纯度≥98％；没食子酸甲酯(methylgallate，mg，批号chb 180115)，1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖(1,2,3,6-tetragalloylglucose，tegg，批号chb201224)和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-pentagalloylglucose，pgg，批号chb190125)购自成都克洛玛生物科技有限公司，纯度≥98％。
[0126]
收集没食子样品合计9批次，其中2批次购自江西仁益药业有限公司(批号19071806和20101604)，2批次购自新疆仁誉中药饮片有限公司(批号19123002和20091803)，2批次购自新疆维草集药材有限公司(批号18090302和19122005)，3批次收集自新疆和田地区农家(批号17091101,18060701和19091601)，经新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所闫明研究员鉴定为没食子蜂科昆虫没食子蜂(cynipsgallae-tinctoriae oliv.)的幼虫寄生于壳斗科植物没食子树(quercus infectoria oliv.)幼枝上所产生的虫瘿。西帕依固龈液3批次(批号：20210901、20210902和20210903)为实验室自制，其制法参照《中华人民共和国卫生部药品标准-维吾尔药分册》(中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准-维吾尔药分册[m].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1998：123.)
[0127]
2方法与结果
[0128]
2.1供试品溶液的制备
[0129]
取没食子药材或饮片粉末(过四号筛)约0.40g或西帕依固龈液8.0ml，精密称定或量取，置具塞锥形瓶中，精密加入40％甲醇50ml，称定重量，水浴回流4h，放冷，再称定重量，用40％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，至10ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
[0130]
2.2混合对照品溶液的制备
[0131]
分别精密称取1-gg、ga、mg、tegg和pgg 4.00，5.20，5.30，5.76，5.76mg，置10ml量瓶中，加40％甲醇溶解稀释至刻度，配制成质量浓度分别为0.400，0.520，0.530，0.576，0.576g
·
l-1
的混合对照品溶液1#。取1#混合对照品溶液依次逐级稀释6次，每次稀释2倍，得混合对照品溶液2#～7#。
[0132]
2.3hplc色谱条件
[0133]
phenomenex c
18
色谱柱(4.6
×
250mm，5μm)；流动相：乙腈(a)-0.2％磷酸水溶液(b)梯度洗脱，0～20min，3％～8％a；20～30min，8％～10％a，30～70min，10％～15％a；70～100min，15％～18％a，100～120min，18％～30％a；流速1.0ml
·
min-1
；柱温35℃；检测波长275nm；进样体积：5μl。当前色谱条件下，各色谱峰分离度r＞1.5，拖尾因子t：0.95～1.05，表明分离效果良好。混合对照品和没食子药材的hplc图见图1，混合对照品和西帕依固龈液的hplc图见图2。
[0134]
2.4方法学考察
[0135]
2.4.1线性范围及检测限、定量限
[0136]
分别精密吸取2.2项下7个浓度的混合对照品溶液5μl，进样分析，测定1-gg、ga、mg、tegg和pgg的峰面积。以质量浓度x(mg
·
l-1
)对峰面积y进行线性回归处理(过原点)，得到各成分的回归方程、相关系数(r)以及线性范围；同时，对混合对照品7#进行逐级稀释，进样分析，测定峰面积，各成分以信噪比(s/n)＝3时的质量浓度为检测限，s/n＝10时的质量浓度为定量限，结果见表1。5种没食子鞣质类成分在较宽的质量浓度范围(64倍)内，具有良好的线性关系，且具有较好的灵敏度。
[0137]
表1五种成分的回归方程、线性范围和检测限、定量限
[0138][0139]
2.4.2精密度
[0140]
取混合对照品溶液4#，连续进样6次，测定峰面积，计算rsd。1-gg、ga、mg、tegg和pgg峰面积的rsd(n＝6)分别为0.06％，0.05％，0.06％，0.34％和0.39％。上述结果表明，仪器的精密度良好。
[0141]
2.4.3稳定性
[0142]
对照品溶液的稳定性取混合对照品溶液4#，分别于制备后的0，4，12，24，36，48h进样分析，测定峰面积，计算rsd。1-gg、ga、mg、tegg和pgg峰面积的rsd(n＝6)分别为0.06％，0.22％，0.09％，0.90％和0.36％。表明对照品溶液在48h内的稳定性良好。
[0143]
供试品溶液的稳定性按2.2项下方法制备没食子的供试品溶液，分别于制备后0，5，12，21，36和48h进样分析，测定峰面积，计算rsd。1-gg、ga、mg、tegg和pgg峰面积的rsd(n
＝6)分别为0.45％，0.26％，0.42％，0.70％和0.78％。表明供试品溶液在48h内的稳定性良好。
[0144]
2.4.4重复性
[0145]
取同一批次(样品批号：19091601)没食子粉末约0.40g，精密称定，平行6份，按2.1项下方法制备供试品溶液，进样分析，测定峰面积，计算含量及rsd。1-gg、ga、mg、tegg和pgg的含量分别为1.97％，4.43％，16.9％，23.6％和8.13％,其rsd分别为1.8％，2.1％，1.7％，2.1％和1.9％，表明该方法的重复性良好。
[0146]
2.4.5加样回收率
[0147]
取已知含量的没食子粉末(样品批号：19091601)约0.40g，精密称定，平行6份，按2.1项下方法制备供试品溶液。计算供试品溶液中5种成分的质量浓度，配制约相同质量浓度的混合对照品溶液，精密量取上述供试品溶液和混合对照品溶液，按1:1混合均匀，进样分析，测定并计算各成分的加样回收率以及rsd，结果见表2。1-gg、ga、mg、tegg和pgg的平均回收率分别为98.69％，103.0％，100.3％，99.91％和103.4％；rsd(n＝6)分别为3.51％，2.01％，1.54％，1.77％和1.82％，表明该方法的准确度良好。
[0148]
表2五种成分加样回收率考察结果(n＝6)
[0149]
[0150][0151]
2.5相对校正因子的建立(以ga为内参物)
[0152]
2.5.1相对校正因子的计算
[0153]
按2.2项下方法制备1～7#混合对照品溶液，按照2.3项下色谱条件，测定1-gg、ga、mg、tegg和pgg的峰面积，以质量浓度x(mg
·
l-1
)对峰面积y进行线性回归(过原点)，得各成分的回归方程、斜率和相关系数(r)。采用斜率法，以ga为内参物(s)，按公式f
s/x
＝ks/k
x
计算1-gg、mg、tegg和pgg的相对校正因子(relative correction factor,rcf)，式中f
s/x
为成分x相对于内参物s的rcf，ks为内参物s的标准曲线斜率，k
x
为成分x的标准曲线斜率，结果见表3。5种成分回归方程(过原点)的相关系数r≧0.9997，表明线性关系良好，可采用外标一点法计算各成分的含量，因此采用斜率法计算各成分的rcf具有可行性。
[0154]
表3以ga为内参物，采用斜率法计算的相对校正因子结果
[0155][0156]
2.5.2相对校正因子的重复性
[0157]
按2.2项下方法制备1～7#混合对照品溶液，平行5份，按照2.5.1项下方法，分别计算1-gg、mg、tegg和pgg的rcf、均值及rsd，结果见表4。f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
的均值分别为1.73，0.95，1.12和1.28，rsd分别为1.65％，0.65％，1.27％和1.28％，表明相对校正因子的重复性良好。
[0158]
表4相对校正因子(以ga为内参物)重复性考察结果(n＝5)
[0159][0160]
2.5.3相对校正因子的耐用性考察
[0161]
2.5.3.1不同hplc仪对相对校正因子的影响
[0162]
按照2.5.1项下方法，采用phenomenex c
18
色谱柱，分别在shimadzu lc-3030c 3d、lc-20a和wates e2695等3台hplc仪上，对f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
进行测定，结果见表5。f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
在3台hplc仪器上的均值分别为1.75，0.95，1.13和1.29，rsd分别为3.02％，0.59％，2.26％和1.90％，表明相对校正因子在不同hplc仪器上的耐用性良好。
[0163]
表5不同hplc仪对相对校正因子(以ga为内参物)的影响(n＝3)
[0164][0165][0166]
2.5.3.2不同色谱柱对相对校正因子的影响
[0167]
按照2.5.1项下方法，采用shimadzu lc-3030c 3d hplc仪以及phenomenex c
18
，
shimaduz vp-ods c
18
，agilent c
18
和kromasil c
18
等4种色谱柱，分别对f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
进行测定，结果见表6。f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
在4种色谱柱上的均值分别为1.74，0.95，
[0168]
1.09和1.20，rsd分别为1.10％，0.23％，3.97％和4.98％，均＜5.00％，表明相对校正因子对不同色谱柱的耐用性较好。
[0169]
表6不同色谱柱对相对校正因子(以ga为内参物)的影响(n＝4)
[0170][0171]
2.5.3.3不同流速对相对校正因子的影响
[0172]
按照2.5.1项下方法，采用shimadzu lc-3030c 3d hplc仪和shimaduz vp-ods c
18
色谱柱，分别在不同流速(0.9，1.0，1.1ml
·
min-1
)条件下对f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
进行测定，结果见表7。f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
在不同流速条件下的均值分别为1.73，0.95，1.11和1.23，rsd分别为0.15％，0.16％，0.77％和2.14％，表明相对校正因子对不同流速的耐用性良好。
[0173]
表7不同流速对相对校正因子(以ga为内参物)的影响(n＝3)
[0174][0175]
2.5.3.4不同柱温对相对校正因子的影响
[0176]
按照2.5.1项下方法，采用shimadzu lc-3030c 3d hplc仪和shimaduz vp-ods c
18
色谱柱，分别在不同柱温(33，35，37℃)条件下对f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
进行测定，结果见表8。f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
在不同柱温条件下的均值分别为1.73，0.95，1.10和1.21，rsd分别为0.22％，0.18％，0.28％和0.88％，表明相对校正因子对不同柱温的耐用性良好。
[0177]
表8不同柱温对相对校正因子(以ga为内参物)的影响(n＝3)
[0178][0179]
2.5.4相对校正因子的重现性
[0180]
分别由不同试验人员于不同工作日期在3个不同实验室的hplc仪上，对f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
进行测定，结果见表9。在不同场景下测定的f
ga/1-gg
，f
ga/mg
，f
ga/tegg
和f
ga/pgg
的均值分别为1.75，0.95，1.12和1.25，rsd分别为3.04％，1.00％，4.44％和4.71％，表明相对校正因子的重现性良好，并且最终确定rcfs为：f
ga/1-gg
＝1.75，f
ga/mg
＝0.95，f
ga/tegg
＝1.12和f
ga/pgg
＝1.25。
[0181]
表9相对校正因子(以ga为内参物)的重现性考察结果(n＝3)
[0182][0183]
2.6相对校正因子的建立(以mg为内参物)
[0184]
2.6.1相对校正因子的计算
[0185]
按2.2项下方法制备1～7#混合对照品溶液，按照2.3项下色谱条件，测定1-gg、ga、mg、tegg和pgg的峰面积，以质量浓度x(mg
·
l-1
)对峰面积y进行线性回归(过原点)，得各成分的回归方程、斜率和相关系数(r)。采用斜率法，以mg为内参物(s)，按公式f
s/x
＝ks/k
x
计算1-gg、ga、tegg和pgg的相对校正因子(relative correction factor,rcf)，式中f
s/x
为成分x相对于内参物s的rcf，ks为内参物s的标准曲线斜率，k
x
为成分x的标准曲线斜率，结果见表10。5种成分回归方程(过原点)的相关系数r≧0.9997，表明线性关系良好，可采用外标一点法计算各成分的含量，因此采用斜率法计算各成分的rcf具有可行性。
[0186]
表10以mg为内参物，采用斜率法计算的相对校正因子结果
[0187][0188]
2.6.2相对校正因子的重复性
[0189]
按2.2项下方法制备1～7#混合对照品溶液，平行5份，按照2.6.1项下方法，分别计算1-gg、ga、tegg和pgg的rcf、均值及rsd，结果见表11。f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
的均值分别为1.81，1.05，1.18和1.34，rsd分别为1.62％，0.67％，1.69％和1.75％，表明相对校正因子的重复性良好。
[0190]
表11相对校正因子(以mg为内参物)重复性考察结果(n＝5)
[0191][0192]
2.6.3相对校正因子的耐用性考察
[0193]
2.6.3.1不同hplc仪对相对校正因子的影响
[0194]
按照2.6.1项下方法，采用phenomenex c
18
色谱柱，分别在shimadzu lc-3030c 3d、lc-20a和wates e2695等3台hplc仪上，对f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
进行测定，结果见表12。f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
在3台hplc仪器上的均值分别为1.85，1.05，1.19和1.36，rsd分别为3.63％，0.63％，2.79％和2.51％，表明相对校正因子在不同hplc仪器上的耐用性良好。
[0195]
表12不同hplc仪对相对校正因子(以mg为内参物)的影响(n＝3)
[0196][0197]
2.6.3.2不同色谱柱对相对校正因子的影响
[0198]
按照2.6.1项下方法，采用shimadzu lc-3030c 3d hplc仪以及phenomenex c
18
，shimaduz vp-ods c
18
，agilent c
18
和kromasil c
18
等4种色谱柱，分别对f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
进行测定，结果见表13。f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
在4种色谱柱上的均值分别为1.82，1.05，
[0199]
1.14和1.26，rsd分别为1.31％，0.23％，4.11％和5.16％，表明相对校正因子对不同色谱柱的耐用性较好。
[0200]
表13不同色谱柱对相对校正因子(以mg为内参物)的影响(n＝4)
[0201][0202]
2.6.3.3不同流速对相对校正因子的影响
[0203]
按照2.6.1项下方法，采用shimadzu lc-3030c 3d hplc仪和shimaduz vp-ods c
18
色谱柱，分别在不同流速(0.9，1.0，1.1ml
·
min-1
)条件下对f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
进行测定，结果见表14。f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
在不同流速条件下的均值分别为1.82，1.05，1.16和1.29，rsd分别为0.05％，0.15％，0.87％和2.17％，表明相对校正因子对不同流速的耐用性良好。
[0204]
表14不同流速对相对校正因子(以mg为内参物)的影响(n＝3)
[0205][0206]
2.6.3.4不同柱温对相对校正因子的影响
[0207]
按照2.6.1项下方法，采用shimadzu lc-3030c 3d hplc仪和shimaduz vp-ods c
18
色谱柱，分别在不同柱温(33，35，37℃)条件下对f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
进行测定，结果见表15。f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
在不同柱温条件下的均值分别为1.82，1.05，1.15和1.27，rsd分别为0.05％，0.22％，0.10％和1.02％，表明相对校正因子对不同柱温的耐用性良好。
[0208]
表15不同柱温对相对校正因子(以mg为内参物)的影响(n＝3)
[0209][0210]
2.6.4相对校正因子的重现性
[0211]
分别由不同试验人员于不同工作日期在3个不同实验室的hplc仪上，对f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和f
mg/pgg
进行测定，结果见表16。在不同场景下测定的f
mg/1-gg
，f
mg/ga
，f
mg/tegg
和fmg/pgg
的均值分别为1.75，0.95，1.12和1.25，rsd分别为3.04％，1.00％，4.44％和4.71％，表明相对校正因子的重现性良好，并且最终确定rcfs为：f
mg/1-gg
＝1.84，f
mg/ga
＝1.05，f
mg/tegg
＝1.18和f
mg/pgg
＝1.32。
[0212]
表16相对校正因子(以mg为内参物)的重现性考察结果(n＝3)
[0213][0214][0215]
2.7色谱峰的定位
[0216]
采用phenomenex c
18
色谱柱，分别在shimadzu lc-3030c 3d、lc-20a和wates e2695等3台hplc仪上，测定5种成分的保留时间tr。以ga为内参物(s)，按公式r
x/s
＝t
rx
/t
rs
计算1-gg、mg、tegg和pgg的相对保留值(relative retention values,rrv)，式中r
x/s
为成分x相对于内参物s的rrv，t
rx
为成分x的保留时间，t
rs
为内参物s的保留时间。r
1-gg/ga
，r
mg/ga
，r
tegg/ga
和r
pgg/ga
在3台hplc仪上的均值分别为0.78，3.04，8.13和10.4，rsd分别为0.34％，2.06％，2.02％和1.74％，表明采用rrv在不同hplc仪上对色谱峰进行定位是可行的。
[0217]
采用shimadzu lc-3030c 3d hplc仪以及phenomenex c
18
、shimaduz vp-ods c
18
和kromasil c
18
等3种色谱柱，分别对r
1-gg/ga
，r
mg/ga
，r
tegg/ga
和r
pgg/ga
进行测定。r
1-gg/ga
，r
mg/ga
，r
tegg/ga
和r
pgg/ga
在3种色谱柱上的均值分别为0.79，3.15，8.34和10.7，rsd分别为1.29％，5.79％，4.35％和4.54％，其中5.00％＜r
mg/ga
＜6.00％。对于不同色谱柱，相对保留值的误差稍大。
[0218]
当以ga为内参物时，最终确定1-gg、mg、tegg和pgg的相对保留值分别为0.78、3.04、8.13和10.4。供试品溶液中1-gg、mg、tegg和pgg的相对保留值在上述规定值的
±
5％范围之内，即实现色谱峰的定位。如色谱峰定位产生较大偏差(＞5.0％)，可根据典型样品图(图1和图2)进行比对，必要时可参考待测色谱峰的在线紫外吸收光谱和质谱信息辅助定位。
[0219]
根据上述相同方法，以mg为内参物，计算1-gg、ga、tegg和pgg的相对保留值，最终确定1-gg、ga、tegg和pgg的相对保留值为0.25、0.32、2.67和3.42。供试品溶液中1-gg、ga、tegg和pgg的相对保留值在上述规定值的
±
5％范围之内，即实现色谱峰的定位。如色谱峰定位产生较大偏差(＞5.0％)，可根据典型样品图(图1和图2)进行比对，必要时可参考待测色谱峰的在线紫外吸收光谱和质谱信息辅助定位。
[0220]
2.8样品含量测定及qams法的验证
[0221]
分别采用外标法(external standard method，esm)和qams法对9批次没食子药材和3批西帕依固龈液中1-gg、ga、mg、tegg和pgg的含量进行测定，qams法测定时按公式cx＝(a
x
/as)
×cs
×fs/x
进行计算，其中cx表示供试品溶液中待测成分x的质量浓度，a
x
表示待测成分的峰面积，as表示内参物的对照品溶液的峰面积，cs表示内参物的对照品溶液的质量浓
度，f
s/x
表示待测成分x的相对校正因子。
[0222]
分别以外标法和以ga为内参物的qams法计算没食子药材和西帕依固龈液中上述5种成分的含量，并比较二者之间的相对偏差(re)，结果见表17、18和表19、20。结果表明，2种方法所得结果无显著性差异，相对偏差均＜5.0％，表明以ga为内参物的qams法用于没食子和西帕依固龈液中5种没食子鞣质类成分的含量测定具有良好的准确性。
[0223]
表17esm法和qams(以ga为内参物)比较没食子药材中没食子鞣质类成分(1-gg和mg)的含量(％，n＝2)
[0224][0225]
表18esm法和qams(以ga为内参物)比较没食子药材中没食子鞣质类成分(tegg和pgg)的含量(％，n＝2)
[0226][0227]
表19esm法和qams(以ga为内参物)比较西帕依固龈液中没食子鞣质类成分(1-gg和mg)的含量(mg
·
ml-1
，n＝2)
[0228][0229]
表20esm法和qams(以ga为内参物)比较西帕依固龈液中没食子鞣质类成分(tegg和pgg)的含量(mg
·
ml-1
，n＝2)
[0230][0231]
注：“—”表示未达到定量限，“/”表示无法计算。
[0232]
分别以外标法和以mg为内参物的qams法计算没食子药材和西帕依固龈液中5种成分的含量，并比较二者之间的相对偏差(re)，结果见表21、22和表23、24。结果表明，2种方法所得结果无显著性差异，相对偏差均＜5.0％，表明以mg为内参物的qams法用于没食子和西帕依固龈液中5种没食子鞣质类成分的含量测定具有良好的准确性。
[0233]
表21esm法和qams法(以mg为内参物)比较没食子药材中没食子鞣质类成分(1-gg和mg)的含量(％，n＝2)
[0234][0235]
表22esm法和qams法(以mg为内参物)比较没食子药材中没食子鞣质类成分(tegg和pgg)的含量(％，n＝2)
[0236][0237][0238]
表23esm法和qams法(以mg为内参物)比较西帕依固龈液中没食子鞣质类成分(1-gg和mg)的含量(mg
·
ml-1
，n＝2)
[0239][0240]
表24esm法和qams法(以mg为内参物)比较西帕依固龈液中没食子鞣质类成分(tegg和pgg)的含量(mg
·
ml-1
，n＝2)
[0241][0242]
注：“—”表示未达到定量限，“/”表示无法计算。
[0243]
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的技术手段等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本技术要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
[0244]
以上对本发明实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本发明的思想，基于本发明的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本发明保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。