一种黄瓜组培苗根腐主枝扦插育苗方法与流程

1.本发明涉及一种黄瓜组培苗根腐主枝扦插育苗方法，属于植物栽培技术领域。


背景技术：

2.黄瓜口感脆嫩、味香浓郁、营养丰富、产量高、美容抗氧化、经济价值高，是我国重要的蔬菜之一。黄瓜栽培种植已有配套的高效栽培技术，但是连年种植土壤的土传染病虫害及连坐障碍层出不穷，黄瓜根腐死棵严重。
3.分子育种可以加速育种速度，转基因是分子育种的重要手段。对黄瓜转基因而言，黄瓜苗再生体系的建立是转基因过程中的重点步骤，而再生体系的最终步骤是幼苗的生根和炼苗，在这个过程中成活率低，另外黄瓜组培苗生根和炼苗移栽大约需要30天，周期长，提高组培苗的成活率是关键，尤其是提高成苗后的成活率，可以节省时间。由于组培苗节间短，植株矮小，也没有侧蔓，所以只能用主枝多段扦插，进而提高育苗成功率，降低育苗成本，保留优良品质黄瓜种质。
4.发现在利用扦插繁殖上，专利申请：“微型黄瓜侧枝扦插方法”(申请号：201210217030.9)发明了利用侧枝扦插黄瓜的方法，但该方法对扦插的方法没有明确的描述，成活率80％；“利用黄瓜侧芽扦插繁殖克隆苗的方法与流程”(申请号：cn202010063744.3)发明了利用黄瓜侧枝扦插繁殖克隆苗的方法，但该方法要求枝条切取位置在茎节处，成活率达98％以上，但是该方法限制了枝条切取的数量，不适合组培苗大量繁殖的需求，并且对实验室的设施要求较高。刘峻蓉和钱春桃在“黄瓜侧蔓扦插技术及其枯萎病抗性鉴定”中指出，abt生根粉和萘乙酸溶液均能促进黄瓜插穗生根，低浓度1ml/l的abt生根粉溶液处理效果较好，但是植株切取长度10cm，包含2-3个茎节，但是该方法限制了枝条切取的数量，不适宜组培苗的使用。
5.在提高黄瓜组培苗成活率的方法上，专利申请：“一种基于黄瓜花药培养提高脱毒率和炼苗成活率的方法”(申请号：cn201810182069.9)和“一种提高黄瓜远缘杂交组培苗驯化成活率的方法”(申请号：cn201310409718.1)，均在不定芽的诱导、再生芽的伸长、生根培养和驯化移栽过程中利用特殊培养基培养幼苗，发现组培苗成活率提高，但没有明确的成活比率，两者均在成苗的过程中提高组培率，与本发明提高成活率的途径完全不同。
6.另外，还有少量文献也报道了黄瓜侧枝扦插的方法和提高组培苗成活率的方法，但是试剂处理复杂、操作步骤繁琐、环境控制精准，不适合在生产上推广应用。


技术实现要素：

7.本发明克服了上述现有技术的不足，提供一种黄瓜组培苗根腐主枝扦插育苗方法，该方法将病害主枝幼苗多段扦插放入吲哚丁酸1500倍液中浸泡1小时后换清水在28-30℃室温中继续浸泡7天，克服扦插的必须在茎节处切除的缺陷，且克服土传病害、种质保存难、提高组培苗移栽成活率低等问题，具有操作简单易行、周期短、繁殖快的优势。
8.一种黄瓜组培苗根腐主枝扦插育苗方法，包括如下步骤：
9.1)育苗基质准备：育苗基质浇透水备用；
10.2)主枝的切取：用锋利的剪刀从病害的植株上剪掉根部腐烂部分后切段，切面平整，每段保留1-2个叶片；
11.3)将步骤2)切取的主枝浸泡到吲哚乙酸溶液中，浸泡0.8-1小时后，主枝放入清水水槽中，清水没过主枝基部；
12.4)将步骤3)浸泡主枝的清水水槽放入光照培养架，日夜温度为28-30℃，光暗周期为各12小时，光照强度2500-3000lux；
13.5)在利用步骤4)的处理方式处理到第七天后移栽到步骤1)准备的育苗基质中，育苗栽培，长出1片新叶后移栽温室或拱棚中，进行黄瓜常规苗期栽培管理。
14.进一步的，上述步骤1)中所述的育苗基质的厚度为10cm。
15.进一步的，上述步骤1)中所述的育苗基质购于山东天酵源生物科技有限公司生产的鲁青育苗基质。
16.进一步的，上述步骤3)中所述的吲哚乙酸溶液的配制方法：利用有效成分含量为1-1.2％的吲哚乙酸水剂稀释1500倍。
17.进一步的，上述步骤3)中所述的吲哚乙酸溶液放置于水槽中，溶液量装至水槽口，锡纸覆盖。
18.进一步的，上述步骤3)中所述的切取的主枝浸泡到吲哚乙酸溶液中指：将主枝基部浸泡于溶液中，叶片留在锡纸上面。
19.进一步的，步骤5)中所说的育苗栽培的方法指：在准备的育苗基质的底部加水，上部覆盖透明塑料罩，2天后打开塑料罩的1/3，再2天除去塑料罩，持续放置在光照培养架上，直至长出1片新叶。
20.有益效果：
21.(1)本发明是针对目前黄瓜组培苗根腐难成活的问题，提供了一种利用黄瓜主枝扦插繁殖克隆苗的方法。扦插发育时期不受限制；插穗切口随便切取，不受茎节的限制，吲哚丁酸的使用使它变为现实，侧根原基的发生处由茎节处变成了整个插穗，这保证了黄瓜扦穗快速生根。这些关键技术保证扦插的成活率在85％以上。
22.(2)通过本发明方式，将长好根系的枝条移栽于基质中，浇透水，正常苗期管理，苗子长大后与母体植株一样。每株植株可至少繁殖3株以上，大大增加组培苗的成活株数。本发明方法操作过程、方法非常简捷高效，仅利用微量的吲哚丁酸诱根，通过控制环境光温条件即可完成。
附图说明
23.图1实验组的组培苗扦插过程及植株表型。
24.图2普通苗扦插3天对照组和处理组叶片生长状况对比。
25.图3普通苗扦插3天对照组和处理组根系生长对比。
26.图4普通苗扦插7天对照组和处理组植株生长状况。
27.图5普通苗对照组和处理组定植后的生长表现。
具体实施方式
28.为了使本技术领域人员更好地理解本技术中的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步说明，所描述的实施例仅是本技术一部分实施例，而不是全部，本发明不受下述实施例的限制。
29.实施例1
30.一、组培苗处理
31.(1)育苗基质的准备：
32.育苗基质装于钵中，厚度在10cm，浇透水备用；
33.(2)主枝的切取：
34.选用华北型黄瓜种质组培苗x8，用锋利的剪刀从病害的植株上剪掉根部腐烂部分后切段，切面平整，每段保留1-2个叶片，分别分成两个组，一组对为对照组设置10株重复，一组为实验组设置40株重复。
35.(3)吲哚丁酸的配制与清水准备：
36.有效成分1.2％水剂吲哚丁酸稀释1500倍后装至15cm*15cm*15cm塑料水槽至槽口，备用；准备与吲哚丁酸溶液相同数量的清水水槽，锡纸覆盖备用；
37.(4)扦插：
38.将实验组40株切下的枝条插入步骤(3)中准备好的吲哚丁酸中，留叶片在锡纸上部，1小时后，将枝条插入事先准备好的清水水槽中，保持水槽中水分没过基部。
39.将对照组10株切下的枝条直接浸泡在清水水槽中。
40.(5)扦插后温光控制：
41.将实验组和对照组的清水水槽放入光照培养架，日夜温度为28-30℃，光周期为光暗各12h，光照强度为3000lux。
42.(6)移栽：
43.将扦插7天后的生根枝条移栽到步骤(1)准备的育苗基质中，底部倒入水，上部覆盖透明塑料罩，形成高湿环境，利于生根，2天左右，打开塑料罩1/3左右，慢慢减少湿度，2天后除去塑料罩，继续放置在光照培养架至长出1片新叶，移栽到温室或拱棚中，进行黄瓜常规苗期栽培管理。
44.(7)结果检测
45.测定幼苗的成活率。
46.二、结果分析
47.图1是实验组的组培苗扦插再移栽的过程及植株表型。从病害主枝上剪掉根部腐烂部分后切段，每段保留1-2个叶片，放入吲哚丁酸稀释液中1小时后转入清水塑料水槽，放置于光照培养架待生根后移栽。经过本技术方法处理的组培苗扦插40株，成活35株，成活率达87.5％，有效减少了因根腐病导致的植株死亡，显著增加了组培苗的成活株数。
48.实施例2
49.一、普通苗处理
50.本实施例2中选用种质材料mc9普通苗进行验证，进行主枝多段扦插育苗。设置对照组20株，实验组设置80株生物学重复，实验组和清水组的处理方式如实施例1中的操作步骤。
51.二、结果分析
52.结果发现，普通苗多段扦插80株，成活78株，成活率达到97.5％(图2-5)。由此可见，本发明的黄瓜组培苗根腐主枝多段扦插育苗方法具有操作简单、高效、稳定，周期短等优点，适合对珍贵材料进行快速扩繁，具有广阔的应用前景。